液相色谱五大系统

高效液相色谱是分析界应用最广泛的仪器之一。对于高效液相色谱的应用和维护，有许多网友已经写了大量的文章，很值得学习。然而，qignqingcao这次在准备这篇文章的时候，阅读了《系统论》，突然灵感凸显，觉得我们可以用一些理论来解释来研究我们的高效液相色谱。用理论这个工具，让我们更好地认识仪器，从而上升到一个哲学的思考。 为了写这篇文章，我首先推荐一下青青草在2004年写的一篇文章。关于液相色谱一些故障的原因的查阅和排除。http://bbs.instrument.com.cn/topic/2205295_1?order=threadid 在写那篇文章的时候，我也是一种经验性的积累，今天看看，实际上，如果当时用系统观点去看，也许会更有理论性。 言归正传，我们继续用系统论去看高效液相色谱。 我们知道，基本的高效液相色谱分为五大系统：动力传输系统（流动相，泵）；进样系统；分离系统（色谱柱）；检测系统；数据采集系统。这五大系统，如果拿出一个系统来看，都可以独立形成一个系统，而我们把这五大系统整合在一起，那么就形成了一个大的高效液相色谱大系统。系统论知识告诉我们：凡是系统在一定意义上必定是整体。而系统的整体性并不是各个元素的简单加和。各组成部分和各层次的充分协调和链接，提高系统的整体运行效果。 我们可以看，泵泵出流动相会有好多因素影响。主要包括泵流速，流动相组成，流动相是否干净，流动相组成和样品的联系等等。这些因素都有可能会影响到后续的分析。举一个简单的例子：如果我用的是反相色谱柱，流动相用的是非极性溶剂（二氯甲烷，氯仿，正己烷等）那么就会影响到后续的分析。比方说，流动相在使用前经过滤膜的过滤，那么发生柱压增高的几率就减少。 我们再以进样系统为例：如果进样中有一个小气泡，那么，这个小气泡影响分析的几率会很大。而且这个小气泡在进样者看来是一个小小的问题，但是，通过系统的放大，可能就在检测器和数据采集中会有极大的显现。 这给我们一个很大的启示：系统的整合性并不是各元素的简单加和。如果某一个系统的小小疏忽，就有可能造成整个系统的极大问题。这就是“蝴蝶效应”。所以，我们在做高效液相色谱时候，一点点的马虎，可能引起很大的问题。 系统论知识还告诉我们：一个系统和包围该系统的环境之间通常都有物质、能量和信息的交换。外界环境的变化会引起系统特性的改变；相应地引起系统内各部分相关关系和功能的变化。 我记得当年检测食品中的糖，用的是示差折光检测器。一开始做的时候，总是发现基线很不稳。根本就不能很好地分析。检查了色谱柱，泵，流动相，都没有什么问题。后来，我们发现晚上测试比白天测试，基线要好很多。后来，我们立刻明白了对于示差折光检测器，对于环境是相当敏感的。而恰好头顶有一个空调，空调的运转，引起了气流的变化。而晚上，我们把空调关闭，气流影响就小，基线就变好。后来，我们通过实验，验证了我们的假设。我们就把仪器搬到一间相对封闭的屋子中，这台高效液相色谱的基线极其的好。 又有一个例子。我们单位购买了一台HPLC，放在一个狭长的单独屋子中，但是，在使用这台仪器一段时间后，仪器的电路板烧坏了。找了工程师来，更换电路板，还是在一段时间依然烧坏。尤其在夏天更容易烧坏电路板。这是什么原因呢？我和几位工程师分析了房屋的结构。终于明白了，这个狭长的屋子一面是封闭的。而仪器恰好是放在那个封闭的面。上海的夏天空气湿度很大，空调开的冷，外部的气流进入狭长的半封闭屋子，恰好把气流堵在那个封闭面上。后来，我们购买了一台空气干燥吸收器，每天开启，没到一天，就能够收集到一大桶水。而这台HPLC仪器在添加了一台空气干燥器后，从没有发生相似的故障。 对于使用高效液相色谱，我们还可以发现，一开始用仪器的时候，仪器不是很听话。原因我觉得也是可以用系统论解释。因为HPLC作为一个系统和环境之间的物质，能量，信息交换，需要有一个适应过程。操作者也需要对仪器有一个认识。而当我们用熟悉了仪器，随便怎么用，好像仪器都不会出问题。这就是系统和环境达到了一个正向反馈。 当然，系统论还告诉我们：任何物质的运动过程都包含着无序的热运动和有序的定向运动。一切物质系统都是有序和无序的对立统一。这是系统内耗的普遍性。而我们知道，hplc在用的过程中必定会有系统的内耗问题，也就是突然仪器出现故障。那么这个故障，并不是头痛医头，脚痛医脚。好多原因我们需要用系统的观点去看到。包括大到操作环境问题，小到密封圈问题。漏液问题，气泡问题。检测器污染问题，管路堵塞问题，静电问题等等。问题的产生，需要我们去研究，解决。实际上，对于初学HPLC的朋友们，遇到各种HPLC的问题，就是自己能力提升的一次机会。如果你能够用整体的观点去排查故障，那么，你就有可能掌握如何驾驭HPLC，使得仪器为你所用。 在这个炎热的夏季，qingqingcao的面前只是一台电脑，我已经离开HPLC测试了。写下这些文字，我自己也在回忆以往的点滴。也希望我们的90后的从事HPLC分析的同志们，能够有些启示。

高效液相色谱仪的结构和原理首先需要讲的是HPLC 主要测试的是有机物质，无机物质用AAS，UV等光谱仪器，或者用离子色谱测试。高效液相色谱仪经常被我们初学者视为高级货。它确实是挺高级的。我们一些高校的实验室，也经常把高效液相色谱当作宝贝里三层外三层小心地保护着。在校的同学们很难一睹其芳容。所以，一些高校的HPLC课程，就是讲授理论，同学们最多集体像看大熊猫一样地排队到实验室看下HPLC。而老师们说，这个仪器很贵的，它是高科技呢。但是只要我们到一些制药厂，食品企业，高效液相色谱广泛地使用，一个实验员要管理3-4台HPLC呢。为了让同学们了解HPLC，qingqingcao老师准通过自己的体系，给大家讲解一下HPLC的构成。HPLC的简单维护和清洗。同学们可以通过书本，一起来熟悉这台所谓的“高级货”。但是书本很详细地讲了各个部件的原理，也许会枯燥，先听我来讲讲。HPLC的几大系统HPLC是集成化很高的仪器。它包括了泵输送流动相，六通阀的进样，色谱柱的分离，检测器的检测和记录积分设备的记录和数据计算构成的。Qingqingcao老师首先先给大家一个总的概念，然后详细阐述。1 GC和HPLC的工作原理（形象地解释）我们回忆一下，气相色谱，我们用氮气或者氦气做载气。“载”这个字，我们怎么理解，载，就是作为介质，带着样品到色谱柱中去“旅游”。有些人个子小，那么在色谱柱这个迷宫里面，跑得快，有些人个子大，容易被色谱柱中的迷宫中的绳索绊住，所以跑得慢。所以，不同性质的物质在载气的带动下，到色谱柱中旅游，快慢不同，从而到达检测器时间不同。达到分离的目的。那么HPLC呢，同样道理。这里我们把载气换成流动相（Mobile phase）。有些书也称流动相为载液。我们的HPLC是通过管路连接这各个部件按，流动相在泵的驱动下，流经色谱的全系统到达废液，我们可以把它理解成传输带。样品经过了流通阀，进入色谱系统，在流动相的带领下，进入色谱柱进行分离。被分离的样品中各个成分，进入检测器，被检测。由记录仪记录检测信号，流经废液。或者被收集。这是HPLC的整个系统工作描述。2 HPLC的各系统那么我概括HPLC是有五大系统构成：动力系统，进样系统，分离系统，检测系统，数据分析和记录系统构成。其中：动力系统：泵进样系统：六通阀和进样针，或者自动进样器分离系统：色谱柱检测系统：检测器，一般有紫外检测器，荧光检测器，示差折光检测器，MS检测器等等。记录系统：电脑工作站等连接这些设备的都是由一根根不锈钢管或者PEEK管构成。2.1 说泵：泵是HPLC的动力系统。气相色谱的动力，实际上是钢瓶中气体的压力。而液体，它只有通过泵的转动而使之流动。我们做一个类比：血液类比成流动相，心脏类比成泵。血管类比成各不锈钢管。那么，血液在心脏作为动力系统，流经着身体的各个系统。如果心脏跳得快点，那么血流量加大，那么血压升高。同样，泵流速提高，流动相流量增大，那么色谱系统压力增高；如果血管被压迫半堵了，那么同样的心跳速度，压力也会增高。同样道理，如果色谱系统被污染，那么污染物堵在色谱柱头，或者各连接口等，那么泵同样的流速，就有可能压力变大。高效液相色谱主要出问题的就是压力莫名地增大，一般认为是色谱系统被污染而堵，解决的方法就是查看各个部件，或者用过滤过的异丙醇清洗流路等。泵的原理，我们看下下面这张示意图。http://www.51sepuyi.com/uploads/140727/1-140HG61A3432.jpg由四个柱塞杆分别作抽，推运动，吸取贮液瓶中的流动相。想想，医生打针，是否也是抽，推注射器的柱塞杆呢？为什么用了四个柱塞杆呢？目的是为了保持流量的稳定。也就是说，一边抽，一边在推，这样可以减小脉冲。同时，现代的泵的出口流液出，还有一个脉冲调节器，避免由于脉冲引起流速不稳定。我们看下，还有一个purge阀。考下大家purge是什么意思呢？对了是清洗的意思。这个派什么用处的呢？我们思考下，色谱系统不能用很大的流速的，如果用很大流速，那么仪器是否就会有损害？通俗地说，压力高了，设备爆了。一般我们更换流动相和排除流动相中的气泡，需要高流速，快速地更换流动相和排除气泡。那么，我们首先是开purge阀，这样流路走的是一条进废液的路，不会进入色谱柱系统，用5-9mL/min的流速快速更换流动相和排除气泡。更换好并且气泡没有了，那么要停泵，关闭阀门，以正常流速开启泵（例如1.0ml/min）。则流动相能够进入各个色谱系统中。关于流动相，qingqingcao老师还是需要强调两点，色谱系统不能被污染，尤其是试剂中的固体颗粒是损害HPLC色谱分析的元凶。同时，流动相中的气泡，会是的压力不稳，所以，也要想方设法地排除掉。所以，对于流动相，我们必须对它进行处理。主要有两点。流动相按照要求配制好。需要进行过滤和脱气。http://www.51sepuyi.com/uploads/140727/1-140HG61G3W7.jpg过滤：对于流动相，我们使用微孔滤膜过滤。微孔滤膜有三种规格。有水系的，有机系的，有水系-有机系两用的。我们过滤水相一般使用水系滤膜。其孔径有0.45微米，0.22微米 。一般选用0.45微米孔径 。因为 0.22微米 过滤 细菌 的。有机相，比

受气相色谱板块启发，也来个国产液相色谱的汇总（排名不分先后）1、普源精电科技有北京限公司公司坚持自主创新，现已研发并生产了十五大系列、数十种产品，具体包括数字示波器、函数/任意波形发生器、数字万用表、虚拟仪器、可编程线性电源和多种数字化测试仪器。产品广泛适用于生产制造、工业控制、广播电视、网络通信、医疗 监测和科研教学等领域。公司在国内设有多个办事处；在国际市场上，产品已销往全球60多个国家和地区，并在全球50个国家注册了RIGOL商标。 产品：L-3000系列高效液相色谱系统2、安徽皖仪科技股份有限公司 安徽皖仪科技股份有限公司是一家以国际化视野、按国际化标准运营的全球分析仪器专业供应商，主导产品涵盖色谱、光谱、质谱类及医用分析器。 皖仪科技按照国际化标准组建世界级产品研发平台，构建高品质、高标准、持续创新、全球同步的产品研发体系，2012年1月份成立“博士后科研工作站”，公司坚持“完美产品”的制造理念，整合全球领先的制造资源，器件采购全球化，生产制造社会化，为客户提供国际品质的产品。皖仪科技以国际化的视野进行管理和运营，在集成产品开发（IPD）、集成供应链（ISC）、人力资源管理、财务管理和质量控制等方面进行深刻变革，建立了基于IT的管理体系，积极适应国际竞争。 产品：LC3000系统，P3100系统，P3200系统3、赛智科技 杭州赛析科技有限公司（Science.Tec Sx）是一家集科研与生产销售为一体的高新科技企业。公司依附浙江大学资源具备大批科研创新动力，公司自1996年浙江大学智达信息工程有限公司发展至今已有16年发展历程。赛析科技主打产品有SX-20A液相色谱仪、STI501液相色谱仪、LC-10T液相色谱仪、N2000色谱工作站、VI2010色谱工作站、制备液相色谱仪,GE-200液相色谱仪。公司的G500制备液相色谱仪被众多高校和生物制药公司广泛的应用于生物快速纯化分析、分离；UV501制备全波长紫外检测器具有极高的灵敏度和准确度，可作蛋白、核酸和天然物产物方面的分离与提存。 产品：LC-10Tvp高压恒流4、上海天美科学仪器有限公司上海天美的研发和生产基地位于上海市漕河泾开发区新经济园。通过 10 多年的发展，已经形成了一套完整、严格的企业管理体系，拥有专业的科研生产队伍和销售服务团队，专业从事分析仪器和生化仪器的研发、生产、销售和服务。企业通过 ISO9001 质量管理体系认证， ISO14001 环境管理体系认证，以及 ISO13485 医疗器械质量管理体系认证，产品符合欧盟 CE 标准，是上海市高新技术企业。 产品：LC2000经济型液相色谱5、上海舜宇恒平 上海舜宇恒平科学仪器有限公司，是上海市高新技术企业，上海市创新型企业，2011年度最具影响力十大国内仪器厂商。专业致力于各类科学仪器的研发、制造和销售。公司承诺向顾客提供更合适的产品，更广阔的选择空间。现已形成色谱仪器、光谱仪器、质谱仪器、天平仪器四大类共计一百多个品种的数字化、智能化产品，建立了与顾客零距离的营销网络，客户遍及海内外。 产品： LC1620，LC1620A6、北京东西分析仪器有限公司 公司的主要业务包括分析仪器及相关产品的研发、应用服务与生产销售。 经过多年的艰苦奋斗，已成功地自主开发生产出多个系列的先进分析仪器产品，申请了多项国家专利。 荣获中国“十大知名分析仪器品牌”、“分析测试协会BCEIA金奖”、“产品信得过单位” ,“煤炭部定点安全仪器生产厂”等荣誉称号。　　主要产品有:色谱仪系列、光谱仪系列、质谱仪系列等。产品形成系列化，多档次。其中包括通用与专用的气质联用仪、气相色谱仪、通用高效液相色谱仪、便携式光离子化气相色谱仪、中压与低压制备液相色谱仪 及气相/液相/离子色谱的数据处理工作站。光谱仪器有原子吸收光谱仪、原子荧光光度计、紫外仪器等。专用产品有矿井自燃火灾束管监测系统，分析煤矿地下气化站煤气的专用自动气相色谱仪，煤自燃性测定仪、分析汽油品质的专用色谱仪、矿井救灾气体化验车、监测水质的COD在线自动分析仪等。　 产品： LC-5510型高效液相色谱仪7、浙江福立分析仪器有限公司 浙江福立分析仪器有限公司系浙江省高新技术企业，中国分析仪器测试协会会员，中国分析仪器专业协会理事单位。公司座落在美丽富饶的东海之滨—温岭市经济开发区。多年来福立人本着以 “精诚为福、创新为立”的创业宗旨，不断努力进取，于1998年组成福立公司，1999年开始涉足科学仪器的整机研发、制造。并且逐步发展成初具规模的科学仪器制造企业，跻身于中国科学仪器产业的先进行列。 产品：FL2200-II高效液相色谱仪8、上海伍丰科学仪器有限公司 上海伍丰科学仪器有限公司（简称“伍丰仪器”）成立于 1998 年，是集研发设计、生产制造、销售服务为一体的高科技企业。通过十余年的努力伍丰仪器已经成为国内最主要的液相色谱生产厂家之一，同时产品线涵盖其它色谱分析仪器，以及相关周边设备、软件、配件。 产品：LC-100PLUS 系统，EX1600 梯度系统9、大连依利特分析仪器有限公司 大连依利特分析仪器有限公司创建于1993年，位于大连市七贤岭高新技术产业园区荣伸工业园内。发展至今已成为一家集高效液相色谱仪、色谱工作站、色谱柱及其配件研制为一体的高新技术企业，是国内实力最强的液相色谱类产品的研究和生产基地之一，并于2008年由辽宁省科学技术厅、辽宁省财政厅批准成立了“辽宁大连依利特分析仪器工程技术研究中心”。公司目前已通过ISO9001：2008标准质量体系认证，是国家制造计量器具生产许可单位。公司产品荣获“大连名牌产品”称号，公司商标被认定为“辽宁省著名商标”和“中国驰名商标”。 产品：P1201系统，P230系统，P230II系统

自从Waters 推出收款超高效液相色谱之后，其他各大厂商也都纷纷推出自己的产品。而沃特世科技（Waters）的 ACQUITY UPLC H-CLASS 液相色谱系统 与 安捷伦科技（Agilent）的 1290 Infinity 液相色谱是超高效液相色谱中的佼佼者。如果您是使用这两款仪器中的其中一款仪器，欢迎您来谈谈在日常使用遇到的问题以及解决的过程，仪器使用心得体会，以及在仪器应用等情况。如果您是这两家厂商技术人员，我们也欢迎您前来谈谈仪器的参数情况，仪器性能情况以及在日常使用需要注意的问题，以便让大家更好的使用该仪器；另外也欢迎您对大家的疑问前来答疑解惑。也欢迎大家就我们的讨论发表您的看法，请勿灌水或相互攻击，否则杀无赦！本次PK仅供参考，如果有什么建议欢迎与我们联系~

不同牌子液相色谱仪能否与自动进样器的搭配使用，能行得通否?如water高效液相色谱仪系统与岛津液相色谱仪的自动进样器搭配可否

液质联用仪因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。 液质联用仪用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。液质联用仪还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。

北京时间2012年4月19日，安捷伦科技公司宣布推出了5款液相色谱相关新品，分别是1290 Infinity 四元液相色谱系统、1290 Infinity 二维液相色谱解决方案、一体化 UHPLC-DAD 系统、液相色谱纯化产品组合218 和 SD1 纯化系统，以及全新的凝胶渗透色谱和体积排阻色谱软件。详情如下：　　安捷伦科技公司推出四元超高效液相色谱系统，　　将四元泵的多功能性与无可比拟的准确性和精密度完美结合　　2012 年 4 月 19 日，北京——安捷伦科技公司(纽约证交所：A)今日宣布推出 Agilent 1290 Infinity 四元液相色谱系统，这是一款具有二元系统准确性和精密度的四元超高效液相色谱系统。　　新型 Agilent 1290 Infinity 四元泵为这款全新的系统奠定了强大的基础。其最高压力为 1200 bar，还具有最为强大的智能化泵输液技术，例如主动阻尼和泵传动装置的极高分辨率，以及新型 Inlet Weaver 和新设计的 Jet Weaver 混合器所采用的安捷伦专属的微流体技术。借助这一高性能泵，1290 Infinity 四元液相色谱系统得以采用安捷伦的专属智能化系统模拟技术(ISET)。　　安捷伦副总裁兼生命科学事业部液相分析部总经理 Fred Strohmeier 说道：“这是目前市面上功能最齐全的液相色谱系统。独特的超高效液相色谱低压混合泵提供与高压混合二元泵相同的准确性和精密度，将出色的准确性、可靠性以及四元系统的高度灵活性完美结合，包括梯度、缓冲液的精确混合以及方法开发能力。”　　这套完整系统可配置安捷伦久经考验的 1290 Infinity 二极管阵列检测器，从而提供最高的紫外检测灵敏度和基线稳定性，也可采用 1200 Infinity 高动态范围二极管阵列检测器解决方案，将紫外线性范围增加 30 倍。光谱数据采集频率高达 160 Hz。其他模块包括新一代的 1290 Infinity 自动进样器和 1290 Infinity柱温箱。综上所述，这款系统为四元超高效液相色谱的性能树立了全新的标准。　　安捷伦科技公司推出具有最高色谱分离度且容易使用的　　1290 Infinity 二维液相色谱解决方案　　2012 年 4 月 19日，北京——安捷伦科技公司(纽约证交所：A)今日宣布推出 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案，可实现全二维方式以及中心切割方式的二维分离。该仪器对极为复杂的样品有出色的分离能力，例如生物药品、肽谱、植物提取物、食品基质、聚合物以及其他难以分离的混合物。　　其采用1290 Infinity二元泵及创新的二维液相色谱阀，配合专用的二维色谱软件，可在短短数分钟内完成二维液相色谱的配置和方法设置。　　通过组合两个正交的HPLC分离到一个单一的二维液相色谱分析中，色谱峰容量将成倍地增加，与常规的液相色谱相比，分离能力也随之大大增加。因此，对于需要最高分离能力的极其复杂样品而言，二维液相色谱无疑是理想的工具。　　安捷伦副总裁兼生命科学事业部液相分离业务总经理 Patrick Kaltenbach 说：“迄今为止，二维液相色谱的系统及方法设置仍然很繁琐且耗时。Agilent 1290 Infinity二维液相色谱解决方案的问世将改变这一切!现在，二维液相色谱也能变得容易操作了。但若是没有卓越的性能，比如最高的分离能力、出色的保留时间及峰面积的精度，以及类似于全新二维液相色谱阀的创新性或从动梯度(Shifted Gradient)自动设置的功能，它也不能成为安捷伦产品。”　　Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案提供高度灵活的系统配置，可采用1260或1290 Infinity中的任意一种作为第一维，而在第二维中采用1290 Infinity 二元泵。检测器的选择上也同样具有极佳的灵活性。　　安捷伦还宣布与GC Image, LLC达成协议，将共同推广GC Image的LCxLC版软件，用作全二维液相色谱数据的处理。两家公司将密切合作，致力于数据转换及分析的简化，为研究工作者的全二维液相色谱数据处理提供强大的工具。GC Image, LLC首席执行官兼创始人Stephen Reichenbach说道：“我们和安捷伦在GCxGC业务领域有多年的合作，很高兴能够再次与安捷伦就LCxLC解决方案继续展开合作。具有灵活LCxLC方法配置软件的安捷伦高性能仪器与GC Image的数据处理及信息学软件结合，可为用户提供用于复杂样品分析的全新的强有力解决方案。”　　安捷伦科技公司发布最具灵活性的液相色谱纯化产品组合　　2012 年 4 月 19 日，北京——安捷伦科技公司(纽约证交所：A)今日宣布推出新的 218 和 SD1 纯化系统，全面扩展安捷伦液相色谱纯化产品组合。　　该组合包括 971 Flash 快速纯化系统、1260 Infinity 分析型和制备型纯化系统，以及 SD2 纯化系统。产品覆盖的流速范围从微升到1.2升/分钟，使得安捷伦液相色谱纯化解决方案在业内独树一帜，并可现实最大回收率和纯度。Openlab CDS 和 LC Responder 等基于工作流程的软件将帮助药物化学家、有机化学家和工艺工程师获得最大的生产率。　　“我们都很期待全新的液相色谱纯化组合能够帮助化学家和工程师们获得更纯的产品，”安捷伦液相色谱市场经理 Helmut Schulenberg-Schell 说到。“我们针对不同的样品量开发了专用的纯化系统，并通过优化获得业界最高的回收率、纯度和生产率。”　　安捷伦 218 和 SD1 纯化系统的流速和进样量灵活，并且其紫外检测器的动态范围(高达 80AU)也独具优势，制药和化工行业的用户能用来纯化微克级到数百克级的纯品。　　系统的灵活性可满足任何样品数量或柱尺寸所需，确保获得最大的回收率和样品纯度，而且价格也相当实惠。这是首款将前瓦里安制备型液相色谱产品与 OpenLAB CDS 软件集成的系统。　　安捷伦是分析型液相色谱系统的领先供应商，为各类应用和预算提供独具特色的纯化解决方案组合，涉及各种仪器、色谱柱、行业标准品和 Openlab CDS 软件。安捷伦液相色谱纯化解决方案的优势在于：　　· 安装快速直观，基于灵活的模块化结构　　· 以最小的风险获得最大的纯度和化合物回收率　　· 仪器利用率最大化，可满足各种样品数量和浓度的需求　　安捷伦科技公司推出一体化 UHPLC-DAD 系统　　2012 年 4 月 19日，北京——安捷伦科技公司(纽约证交所：A)今日宣布推出配有二极管阵列检测器的 Agilent 1220 Infinity 液相色谱系统，这款全新的一体化系统现以超低的价格提供 UHPLC 分析性能和二极管阵列检测能力，倘若用户对模块化系统的灵活性要求不高但对质量有极高要求，该系统将是最佳选择。　　安捷伦副总裁兼生命科学事业部液相分离业务总经理 Patrick Kaltenbach 说道：“配有二极管阵列检测器的 1220 Infinity 液相色谱系统扩展了现有的一体化 UHPLC 系统产品线。该系统采用与模块化 1260 Infinity DAD 系统相同的零配件，从而获得可与之媲美的性能和质量，由于整合了专用于模块化设计系统中的一些重复部件，因而产品价格得以大幅降低。”　　配有二极管阵列检测器的新型 Agilent 1220 Infinity 液相色谱仪是一款一体式的二元梯度液相色谱系统，耐压能力达 600 bar，可支持 HPLC 和最新的 UHPLC 色谱柱技术，包括亚二微米色谱柱和表面多孔色谱柱。内置的二极管阵列检测器可提供 80 Hz 的全光谱数据采集速率，完全可以胜任于检测UHPLC应用中出现的超窄色谱峰。功能强大的安捷伦 OpenLAB CDS 软件可以对这套系统提供全面支持，此外第三方色谱数据系统通过安捷伦仪器控制体系(ICF)也可以提供全面支持。　　配有二极管阵列检测器的 1220 Infinity 液相色谱仪是一体化液相色谱系统系列产品的最新成员，其性能和功能与模块化 1260 Infinity 液相色谱系统不相上下。倘若用户追求安捷伦液相色谱系统的高性能和高质量，但对模块化系统的灵活性不做要求，那么这套系统无疑是您的最佳选择。　　除了推出配有二极管阵列检测器的 1220 Infinity 液相色谱外，“移动套装”和“步入式套装”也将同步推出。移动套装包含减震部件，可将 1220 Infinity 液相色谱系统安装到作为移动实验室的车辆内。安捷伦 Easy

第一节 概 述 高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。 二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。 根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。三、液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同；此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别，主要有以下几方面：（1）应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受到一定程度的限制，据统计只有大约20%的有机物能用气相色谱分析；而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物的70 ~ 80%。 （2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 因为： ①气相色谱的流动相载气是色谱惰性的，不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。也可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离的选择性。 ②液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可能的。 ③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。（3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。（4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。综上所述，高效液相色谱法具有高柱效、高选择性、分析速度快、灵敏度高、重复性好、应用范围广等优点。该法已成为现代分析技术的重要手段之一，目前在化学、化工、医药、生化、环保、农业等科学领域获得广泛的应用。第二节 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪由 高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统 等五大部分组成（图14-2）。 分析前，选择适当的色谱柱和流动相，开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大，用记录器记录下来就得到色谱图。色谱图是定性、定量和评价柱效高低的依据。 一、高压输液系统高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表 等组成。 1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流动相。 2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。由于液相色谱仪所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小，因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过色谱柱，就需要高压泵注入流动相。 对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流量恒定、无脉动，流量精度和重复性为0.5%左右。此外，还应耐腐蚀，密封性好。 高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。 恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流量与流动相粘度和柱渗透无关。 恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而变化，如果系统阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流量。3. 梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。 梯度洗脱装置分为两类： 一类是外梯度装置（又称低压梯度），流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。 另一类是内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室混合，再输至柱系统。 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度，来调整混合样品中各组分的k值，使所有谱带都以最佳平均k值通过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的程序升温，所不同的是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的，而不是借改变温度（温度程序）来达到。二、进样系统 进样系统包括进样口、注射器和进样阀等，它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。三、分离系统 分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2 ~ 6mm，柱长为10 ~50cm，柱形多为直形，内部充满微粒固定相。柱温一般为室温或接近室温。四、检测器 检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。 在液相色谱中，有两种类型的检测器，一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。属于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等；另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应。属于此类检测器有示差折光检测器等。第三节 高效液相色谱的固定相 和流动相一、固定相 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.0108~1.0109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。如果在二氧化硅表面键合各种官能团，可扩大应用范围，它是目前最广泛使用的一种固定相。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。1. 表面多孔型固定相 它的基体是实心玻璃球，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化硅、离子交换剂、分子筛、聚酰胺等。这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达到平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最大允许量受到限制。2. 全多孔型固定相 由直径为10nm的硅胶微粒凝聚而成。这类固定相由于颗 粒很细（5~10m），孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。二、流动相 由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲合力，并参与固定相对组分的竞争，因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选 择性。（2）溶剂与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选 用检测器波长比溶剂的紫外截止波长 要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时， 溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不 透明的，它严重干扰组分的吸收测量。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较

第八课 液相色谱仪－输液系统 输液系统高效液相色谱的输液系统包括流动相贮存器、高压泵和 梯度淋洗装置。流动相贮存器为不锈钢或玻璃制成的容器，可以贮存不同的流动相。高压泵是高效液相色谱仪最重要的部件之一。由于高效液相色谱仪所用色谱柱直径细，固定相粒度小，流动相阻力大，因此，必须借助于高压泵使流动相以较快的速度流过色谱这。高压泵需要满足以下条件：能提供150－450kg/cm2的压强；流速稳定，流量可以调节；耐腐蚀。目前所用的高压泵有机械泵和气动放大泵两种。梯度淋洗装置可以将两种或两种以上的不同极性溶剂， 按一定程序连续改变组成，以达到提高分离效果，缩短分离时间的目的。它的作用与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中的程序升温装置类似。梯度淋洗装置分为两类：一类叫外梯度装置；一类内梯度装置。外梯度装置是流动相在常压下混合，靠一台高压泵压至色谱柱；内梯度装置是先将溶剂分别增压后，再由泵按程序压入混合室，再注入色谱柱。

1月23日，安捷伦科技推出了该公司最新一代Agilent 1200系列液相色谱系统，该系列将是安捷伦科技著名的1100系列液相色谱的换代产品。作为一种常规的分析测试手段，全球有超过250，000家的用户在使用液相色谱产品，其市场规模约为二十亿美金，这也是安捷伦科技LSCA部收入的主要来源之一。 自从1995年1100系列液相色谱问世以来，安捷伦总计售出了大约60，000套液相色谱系统（如果按单个系统模块计算，则超过400，000），使得1100系列成为液相色谱市场最为成功的产品之一。最新推出的1200和现在的1100具有良好的兼容性，从而最大限度地保障了用户单位在资金和时间方面的投入不受损失。用户单位可以根据自己的需要，选择新的模块和现有的模块进行组合，也可以继续使用已有的分析方法而无需花费资金去开发新的方法以及重新培训操作人员。对于那些暂时使用非安捷伦操作软件的用户，安捷伦科技还可以专门为他们提供一种1100仿真模拟模式。 据安捷伦科技有关人士介绍，Agilent 1200是一款功能极其完善的液相色谱系统，其可选的仪器模块数量超过60个，可以灵活组合以满足液相色谱不同应用领域的需要，包括：快速分离液相（最新推出）、制备液相、标准液相、窄柱液相、毛细管液相、纳升级液相以及安捷伦科技开创性的芯片液相等。目前，芯片液相技术既可以用于小分子领域也可用于大分子领域，即可用于色谱分离，也可作为进样装置。而采用纳流喷雾离子化的HPLC-Chip/MS技术，其灵敏度较之常规的LC/MS提高了1000倍。

最近，研究二维液相色谱系统，发现岛津和湖南德米特的二维液相色谱系统，几乎独家垄断，价格比两套lc20还高。

1、未接色谱柱的高效液相色谱仪，走无水乙醇，用的波长为196nm，基线噪音约为0.4mAU，而且基线不平直，请问噪音是不是有点大了啊？可能的原因应该是什么呢？2、该系统以前走过的溶液为C24、C7、甲醇和乙醇，如果冲洗该系统的话用什么溶液较好，为什么啊？希望得到前辈们的帮助和指导，谢谢啦

自从Waters 推出收款超高效液相色谱之后，其他各大厂商也都纷纷推出自己的产品。而沃特世科技（Waters）的 ACQUITY UPLC H-CLASS 液相色谱系统 与 安捷伦科技（Agilent）的 1290 Infinity 液相色谱是超高效液相色谱中的佼佼者。如果您是使用这两款仪器中的其中一款仪器，欢迎您来谈谈在日常使用遇到的问题以及解决的过程，仪器使用心得体会，以及在仪器应用等情况。如果您是这两家厂商技术人员，我们也欢迎您前来谈谈仪器的参数情况，仪器性能情况以及在日常使用需要注意的问题，以便让大家更好的使用该仪器；另外也欢迎您对大家的疑问前来答疑解惑。也欢迎大家就我们的讨论发表您的看法，请勿灌水或相互攻击，否则杀无赦！本次PK仅供参考，如果有什么建议欢迎与我们联系~

3月9日，美国热电集团推出一款全新的高效液相色谱系统——Finnigan Surveyor Plus。该仪器号称采用了当今最高性能的光二极管阵列（PDA）检测器，其紧凑式的设计使得仪器占地面积大为减小。 从应用范围来看，Finnigan Surveyor Plus高效液相色谱系统可被广泛使用在QA/QC实验室，科研机构，药物研发以及食品和饮料工业。 该产品采用了一体式柱温箱设计，同时，热电的LightPipe专利技术保证了仪器的高灵敏度，灵敏度是传统的光二极管阵列检测器的五倍。

[font=&][size=15px][color=#2f3034]背压指的是液体在流动过程中所遇到的阻力或压力。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统中，当流动相通过色谱柱时，由于填料颗粒、柱内径、柱长以及流动相的粘度等因素，会产生一定的阻力，这种阻力就是背压。背压的大小对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统的性能和稳定性有着重要影响。如果背压过高，可能会导致色谱柱的破损、流动相的泄漏、泵的损坏等问题，从而影响实验结果的准确性和可靠性。因此，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]实验中，需要严格控制背压的大小，以确保实验的顺利进行。为了降低背压，可以采取一些措施，如选择合适的色谱柱、优化流动相的组成和粘度、调整流速等。同时，也需要定期对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统进行维护和保养，以确保其处于良好的工作状态。[/color][/size][/font]

[font=宋体][font=宋体]超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是在传统高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的基础上升级改进，使之获得更高的系统耐受压力。这样就可以适配更小填料粒径的色谱柱，因为越小粒径的色谱柱，柱效越高，反压也越高。常规的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统无法承受亚[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]微米的色谱柱带来的高反压。超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]搭配小粒径色谱柱，能够提供更高的分辨率、更快的分离速度和更高的灵敏度，是搭载质谱检测器的理想分离系统。目前超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]国产与进口品牌种类繁多，如何选择合适的设备，这里谈谈我的经验。[/font][/font][font=宋体]1、[/font][font=宋体]输液系统[/font][font=宋体]1）[/font][font=宋体]输液泵[/font][font=宋体]目前市面上主流的是凸轮往复泵和直线电机泵两种。凸轮泵因为设计上的原因需要加装阻尼器来稳定压力脉冲，系统的延迟体积要大于电机泵。流量的准确度与精密度上电机泵也要更出色。但成本上电机泵会更高一些。[/font][font=宋体]2）[/font][font=宋体]泵组合[/font][font=宋体][font=宋体]分为二元泵系统和四元泵系统，二元泵是两组输液泵分别控制有机相与水相流路，混合比例靠控制[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]泵跟[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]泵的流量，混合点位于泵后，属于高压混合，混合效果更好，不足是只能同时使用四路溶剂中的两路。四元泵系统只有一组输液泵，通过控制比例阀的开合时间，控制溶剂混合比例，混合器位于泵前段，属于低压混合，混合精度上不如二元泵系统。但四元泵可以灵活使用四路流动相中的任意[/font][font=Calibri]1-4[/font][font=宋体]种，更适合方法开发。因为四元泵系统中，有机相和水相共用一组输液泵，泵内更容易析出结晶盐损害密封组件。所以在使用四元泵时，需要特备注意缓冲盐溶液与有机相的混合比例，避免结晶盐析出。[/font][/font][font=宋体]3）[/font][font=宋体]电动放空阀，手动是真的不方便。溶剂压缩补偿技术，这也是很重要的参数，但各厂家技术的优劣难以把握。各厂商一般都会提供流量准确度与紧密度参数，但测试条件各厂家都不一样。漏液传感器、真空脱气、柱塞清洗等功能基本都是标配了。[/font][font=宋体]2、[/font][font=宋体]自动进样器[/font][font=宋体]1）[/font][font=宋体]进样器[/font][font=宋体]主要关注的就是进样误差和进样重复性，这两个厂商基本都会提供，可比性还是很高的。虽然各厂家都会提供交叉污染的测试数据，但我们用户在选择时，更应该关注进样针时流路设计还是旁路设计。旁路设计的进样方式有个天然缺陷，就是无法清洗进样口，导致交叉污染会比流路设计大。而流路针也有缺陷，因为针跟针座会在运行样品时连接到流路中，针座密封就需要做到耐高压。但是在反复进样的过程中，针座密封圈不不断磨损而漏液。[/font][font=宋体]2）[/font][font=宋体]附加功能[/font][font=宋体][font=宋体]类似于瓶位检测、顶针堵针保护等附加功能可以很好避免误操作时带来的仪器损害。温控功能主要考虑组件的耐用程度，温控的准确度和稳定性在[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]℃以内都是可接受的。[/font][/font][font=宋体]3、[/font][font=宋体]柱温箱[/font][font=宋体]主要关注温控范围、准确度、稳定性，最关键的参数是温度的稳定性，这将直接影响分析测试时保留时间的稳定性与峰面积的重现性。流动相预加热功能可以保障进入色谱柱的流动相与色谱柱的温差尽可能小，提供更好的色谱峰重现性。温控组件目前市面上性能最好的是帕尔帖元件。[/font][font=宋体]近年来国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的发展越来越好，性能上并不比进口产品差。但是由于超高效设备主要配置质谱检测器，进口质谱厂商多有配套[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]设备，加上国产质谱发展水平受限，国产超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的市场占有率并不高。希望此次分享能为大家在今后的仪器选购中提供帮助，也祝愿国产仪器越来越好。[/font]

请问常规高效液相色谱仪不接柱子（接检测器）时的系统压力是多少呀？一般说的系统压力，是泵到色谱柱那一段的压力还是泵到检测器的压力？谢谢。

[align=center][size=21px]温度对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统的影响[/size][/align][size=16px] [/size][size=16px] [/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]能进行很多微量和复杂样品分析，在分析界算是精密仪器。很多精密仪器都有一个共同点，那就是工作时受温度影响，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]也不列外，一般仪器都受温度影响较大，其中流动相、色谱泵、色谱柱、检测池、氘灯等受温度影响较大。[/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]工作温度[/size][size=16px]大多[/size][size=16px]都是1[/size][size=16px]5[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-35[/size][size=16px]℃，[/size][size=16px]当然每个厂家，每个型号的仪器也都不太一样，[/size][size=16px]2[/size][size=16px]0[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-30[/size][size=16px]℃一般仪器都能较好的工作，[/size][size=16px]但[/size][size=16px]有的[/size][size=16px]苛刻些，最佳工作温度可能是2[/size][size=16px]2[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-27[/size][size=16px]℃，或者2[/size][size=16px]0[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-25[/size][size=16px]℃等等，要求就更高一些，在这个最佳工作温度内使用，温度影响不大，超过这个温度影响相对就较大。[/size][size=16px] 流动相受温度影响。[/size][size=16px]流动相温度要和系统温度相匹配，不能过低也不能过高。温度过低，流动相中会溶解进较多空气，影响泵流速，如果色谱柱和检测器没有控温装置的，可能还[/size][size=16px]会影响色谱分离、影响基线噪声和基线漂移[/size][size=16px]等。温度过高也可能[/size][size=16px]会影响色谱分离、影响基线噪声和基线漂移[/size][size=16px]，甚至会损坏仪器。[/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵受温度影响。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵主要是指[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵泵头，泵头温度过高或过低，一是会影响流动相流速，二是会影响流动相温度，从而导致色谱问题。[/size][size=16px] 色谱柱受温度影响。色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中非常核心的部件，工作中对温度要求一般都很高，大多都是常温到4[/size][size=16px]5[/size][size=16px]℃，有的是3[/size][size=16px]0[/size][size=16px]℃到4[/size][size=16px]5[/size][size=16px]℃，有的分析要求温度稳定在一个温度，否则可能会对分离度，定性、定量检测，基线漂移等指标影响较大。[/size][size=16px] 检测池受温度影响。检测池是检测器的核心部件，它对温度也很敏感，受温度影响比较明显。直接影响就是定量不准确，基线不稳定[/size][size=16px]，有漂移，可能伴随有不规律波动等。[/size][size=16px] 氘灯受温度影响。氘灯温度不稳定，氘灯发出的光能量就不稳定，波长准确性和光路特性可能也会受影响。光能量不稳定，波长不准确，光路不正等情况对检测影响都很大，所以为了保证检测结果的准确、有效，氘灯温度或光路温度也得严格控温。[/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是精密仪器，所做的分析都[/size][size=16px]有较[/size][size=16px]高[/size][size=16px]要求[/size][size=16px]，它的各个重要、核心部件对温度要求都较高，为了保证所做的分析结果的准确、有效，控温[/size][size=16px]必不所少（有些实验室实验室温度控制的较好，最后效果也较好）。[/size]

waters液相色谱系统适应性验证是做什么？

在液相色谱仪使用过程中，我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象，但由于使用操作不当，常常不注意间损坏了色谱柱，同时加重了液相色谱系统的污染，导致分析工作出现麻烦，现在将置换工作的基本流程列出，供用户参考：1. 首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)；2. 卸掉硅胶柱，封好保存；3. 将进样阀与检测器短路，用异丙醇冲洗色谱系统10分钟(流速1ml/min).在这期间空拨进样阀三次；4. 换甲醇(或已睛)冲洗系统20分钟(流速2ml/min) ，此期间空拨进样阀三次；5. 安上反相色谱柱， 流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统，直到系统平衡；6. 进三针标准品,检验面积 ﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复。

[b]一、基本原理[/b]高效液相色谱（HPLC）法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。高效液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%，而80%则需用高效液相色谱来分析。 高效液相色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。 [b]二、高效液相色谱分析原理[/b]（1）、高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的程序升温类似，不同的是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。 （2）、高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。 开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。[b]三、工作原理[/b]储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。[b]四、HPLC的特点和优点 [/b]HPLC有以下特点： 高压——压力可达150~300 Kg/cm2。色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。 高速——流速为0.1~10.0 ml/min。 高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快——通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。 分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。[b]五、液相色谱的五大系统1、进样系统[/b]进样系统分为手动进样阀和自动进样器。[color=red]手动进样阀[/color]对于手动进样阀使用过程中需要注意每个样品进样完成后应对进样阀进行清洗，防止残留对下一个样品分析的影响。还需要注意进样方式，以20μL定量环为例，我们可以选择完全充满定量管或部分充满定量管。为了保证进样的重复性，选择完全充满定量管进样方式时，需要注入定量环体积3倍以上的样品 选择部分充满定量管进样方式时，进样体积应在定量管体积一半以下，即1-10μL。[color=red]自动进样器[/color]如果采用自动进样器进样，首先需要保证注射器里面没有气泡存在，否则影响进样量准确性 其次是样品瓶里面有足够的样品，保证进样针能够吸到样品。为了避免交叉污染需要定期对样品瓶、盖和垫进行清洗。若自动进样器长时间不使用，应该注意：腐蚀性的流动相或洗液(例如，碱性或酸性缓冲溶液)必须完全从系统中置换出来。同时，为了避免细菌的生长，应将一个样品瓶中充满甲醇，并重复几次进样操作。[b]2、输液系统[/b]输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵。对液相色谱分析来说，输液泵的流量稳定性更为重要，这是因为流速的变化会引起溶质的保留值的变化，而保留值是色谱定性的主要依据之一。因此，恒流泵的应用更广泛。输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵中又有螺旋传动注射泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵和往复式隔膜泵。HPLC使用的高压泵应满足下列条件：a 流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围（一般为1～10ml/min）；b 能抗溶剂腐蚀；c 有较高的输液压力；对一般分离，60×105Pa的压力就满足了，对高效分离，要求达到150～300×105Pa。（1）往复式柱塞泵结构和原理当柱塞推入缸体时，泵头出口（上部）的单向阀打开，同时，流动相进入的单向阀（下部）关闭，这时就输出少量的流体。反之，当柱塞向外拉时，流动相入口的单向阀打开，出口的单向阀同时关闭，一定量的流动相就由其储液器吸入缸体中。这种泵的特点是不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响，连续供给恒定体积的流动相。（2）气动放大泵结构和原理其工作原理是：压力为p1的低压气体推动大面积（SA ）活塞A，则在小面积（SB ）活塞B输出压力增大至p2的液体。压力增大的倍数取决于A和B两活塞的面积比，如果A与B的面积之比为50：1 ，则压力为5×105Pa的气体就可得到压力为250×105Pa的输出液体。这是一种恒压泵。泵头通常由两部分组成--单向阀和密封圈-柱塞杆.单向阀一般由阀体\塑料\或陶瓷阀座和红宝石球组成.在压力的作用下宝石球离开阀座,流动相流过单向阀 反之,在反向力的作用下,宝石球回到阀座上,此时流动相不再流过单向阀.显然宝石球与阀座之间的配合必须非常适合才能防止流动相的泄漏.为了保证单向阀不发生泄漏,一些单向阀中安装了两套宝石球和阀座,也有一些单向阀是将宝石球用一个合适的弹簧压在阀座上.在不同的应用领域,单向阀阀体的材料有所不同,例如考虑生物兼容性的系统,单向阀的阀体往往采用金属钛,而不用不锈钢.为了降低成本和减少维护费用,一些生产厂商还采用了可置换式的卡套式塑料单元件,当然其功能仍保持不变[color=red]输液系统即是指高压恒流泵，其作用是能提供稳定准确的流速。[/color][color=red]溶剂过滤头[/color]：吸液过滤头，或称沉子，主要作用是过滤流动相中可能存在的颗粒性杂质。长时间使用后，杂质有可能阻塞溶剂过滤头上的过滤板孔隙 或长时间使用缓冲液，过滤头表面容易产生一层膜，阻碍流动相正常通过。严重时，即使是已超声过的溶剂，泵吸液时也会有气泡在四氟输液管里产生，因此应经常对过滤头进行清洗。清洗溶剂可以选择乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系统需注意滤头的烘干处理。[color=red]单向阀[/color]：单向阀的作用是确保液体向一个方向流动，是高压恒流泵稳定输液的保证。日常使用过程中，可以通过观察压力的情况，初步判断流量是否正常。如果系统已经平衡一段时间，压力应该是稳定的。但如果压力存在波动，则表明流量不稳定 如果无压力，则表明无流量。这两种情况大多是因为单向阀里混入了气泡或杂质。混入气泡的情况，应把放空阀打开，按冲洗键将里面的气泡排出。单向阀混入杂质的情况，须对其进行清洗。清洗溶剂可以选择乙醇，安装时注意标记环的方向。[color=red]密封圈[/color]：密封圈是固定在柱塞杆上防止泵腔内的液体泄漏，是保证泵头输液正常的关键部件。但柱塞杆和柱塞密封圈长期使用会发生磨损，主要与流量、操作压力和所使用的流动相有关。当使用含盐的流动相时，由于脱水或蒸发，可能形成盐结晶，而泵运动时盐结晶会导致密封圈和柱塞杆的磨损。因此，每天实验前和实验后都需用纯水冲洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二级密封圈之间)，保持清洗管内有水以防止形成晶体，延长柱塞杆和密封圈的使用寿命。在线过滤器：为了防止由于流动相杂质微粒进入色谱系统，泵在放空阀内安装了在线过滤器，经泵出口流出的液体通过在线过滤器，经排空管流出的液体不通过在线过滤器。仪器使用一定时间后，建议用户清洗在线过滤器的烧结不锈钢过滤片。用扳手卸下压帽，将密封环和烧结不锈钢过滤片一同取出清洗，清洗后按原位装上。清洗溶剂可以选择30%稀硝酸溶液，正相系统需注意滤头的烘干处理。[b]3、分离系统[/b]分离系统包括色谱柱、保护柱以及柱温箱。[color=red]色谱柱[/color]：色谱柱是样品分离的核心。色谱柱在使用前必须仔细阅读说明书，了解色谱柱使用的pH值范围、溶剂耐受范围、压力范围和维护方法等事项。色谱柱使用完后，需及时对色谱柱进行冲洗。冲洗完成后，应该将色谱柱从仪器上拆下来，两端用厂家配的堵头密封后，保存在色谱柱盒里。[color=red]保护柱[/color]：保护柱的作用主要是防止吸附性强的杂质对色谱柱污染，从而延长色谱柱的寿命。针对不同型号的色谱柱，应选择相对应填料的保护柱。应注意柱芯也是有寿命的，应该定期进行更换。[color=red]柱温箱[/color]：色谱柱温度变化，可能会导致保留时间的变化。为了避免这个问题，建议使用柱温箱。[b]4、检测系统[/b]高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。（1）紫外检测器该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测。其特点是，使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）、灵敏度高（检测下限为10-10g/ml）、线性范围宽、对温度和流速变化不敏感、可检测梯度溶液洗脱的样品。（2）示差折光检测器凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。目前，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测下限为10-7g/ml），流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。（3）荧光检测器凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g/ml），痕量分析和梯度洗脱样品的检测均可采用。HPLC常用的检测器是紫外检测器。在日常使用过程中紫外检测器主要需要注意检测池和氘灯的使用与维护。[color=red]检测池[/color]：检测池长时间使用可能会造成污染，如果仪器的参比能量(REF ENERGY)正常，测量能量(SMPENERGY)偏低，可能为检测池污染导致，可以对检测池进行清洗。对检测池零件的进行清洗，一般先采用约1：4的硝酸溶液超声清洗，分别用纯水和甲醇溶液清洗，然后重新组装并将检测池池体推进池腔内，拧紧池板螺丝。注意组装中，池玻璃及垫片一定要放正，以免压碎池玻璃，造成检测池泄漏。[color=red]氘灯[/color]：氘灯正常使用寿命可在1500小时以上。灯的使用寿命与检测器的使用时间和开启频率有关，因此使用过程中应尽量节省不必要的开机时间，减少开关频率，以延长氘灯的使用寿命。如果准确地判断出氘灯已经不能点亮或能量太低，则需要更换新的氘灯。在购买氘灯时，应注意咨询和核对氘灯的型号与仪器型号是否匹配。更换到氘灯时，参照仪器说明书中的相关内容，特别要注意氘灯连接线的位置顺序。[b]5、数据处理系统[/b]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[b]六、色谱法的常用基本术语[/b][color=black]1[/color][color=black]、色谱图（chromatogram）：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。[/color][color=black]2[/color][color=black]、（色谱）峰（chromatographic peak）：色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。[/color][color=black]3[/color][color=black]、峰底（peak base）：峰的起点与终点之间的连接的直线。[/color][color=black]4[/color][color=black]、峰高（h ，peak height）：色谱峰最大值点到峰底的距离。[/color][color=black]5[/color][color=black]、峰宽（W ，peak width）：在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点的距离。[/color][color=black]6[/color][color=black]、半高峰宽（W h/2 ，peak withd at half height）：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离。[/color][color=black]7[/color][color=black]、峰面积（A ，peak area）：峰与峰底之间的面积。[/color][color=black]8[/color][color=black]、拖尾峰（tailing peak）：后沿较前沿平缓的不对称的峰。[/color][color=black]9[/color][color=black]、前伸峰（leading peak）：前沿较后沿平缓的不对称的峰。（又叫伸舌峰、前延峰）[/color][color=black]10[/color][color=black]、假峰（ghost peak）：除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。（又叫鬼峰）[/color][color=black]11[/color][color=black]、畸峰（distrorted peak）：形状不对称的色谱峰，前伸峰、拖尾峰都属于这类。 [/color][color=black]12[/color][color=black]、反峰（negative peak）：也称倒峰、负峰，即出峰的方向与通常的方向相反的色谱峰。[/color][color=black]13[/color][color=black]、原点（origin）：纸或薄层板上滴加试样部位的中心点。[/color][color=black]14[/color][color=black]、区带拖尾（zone tailing）：由于物理、化学等作用的影响，一种组分在展开后形成的彗星形状斑点。[/color][color=black]15[/color][color=black]、基线（base line）：在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的响应信号曲线。[/color][color=black]16[/color][color=black]、基线漂移（baseline drift）：基线随时间定向的缓慢变化。[/color][color=black]17、基线噪声（N　，baseline noise）：由于各种原因而引起的基线波动。[/color][b]七、应用领域[/b]环境：常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害重金属及其形态、除草剂、 农药、酸沉降成分。 农业：土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有机成分。 石油：烃类族组成、石油中微量成分。 化工：无机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料。 材料：液晶材料、合成高分子材料。 食品：无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃。 生物：氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然高分子化合物。 医药：人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物化学成分。

制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中，组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中，酶的分离是微克级；在植化和合成化学领域中，为了鉴别未知成份并进行结构测定，需要得到一至若干毫克的纯品；在药品和医药学测试中，需要克级的标准品和对照品；在当今的工业级提纯中，制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定，包括：生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品（分析标准）毒物学分析所需组份：高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产，活性成份，药物 制备方法的发展和扩大规模的计算　　在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别就是超量进样。其结果，超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线　　分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 　 在分析液相中，最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。　 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中，这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少，那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样　　大样品量的纯化有两种可行的方法：分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样，暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法，在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。　在浓缩法中，样品的浓度会提高，但进样体积保持不变。容量因子k’降低，同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 　　如果样品组份的溶解性很差，浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中，这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素，所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 　 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 　 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 　 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 　 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 　 需要小颗粒填料 方法的放大　浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的时候，优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 　　因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的，选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量，因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的　　判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数：产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的，因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率，但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品，但是产量和收率却是很低的。　 在色谱图2中峰有很好的分离，因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量，但是生产效率却很低。　 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开，这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。　 在实际应用中，每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。

跟大家分享一本书《高效液相色谱方法及应用》第二版，感兴趣的版友可以下载附件查阅，也欢迎补充。全书的目录如下：作 者： 于世林出 版 社： 化学工业出版社 本社特价书所属丛书： 色谱技术丛书 册 数： 条 形 码： 9787502569068 ; 978-7-5025-6906-8I S B N ： 7502569065 出版时间： 2005-6-1开 本： 小16开 页 数： 333定 价： 39 元第一章 绪论第一节 高效液相色谱法的特点一、与经典液相(柱)色谱法比较二、与气相色谱法比较三、高效液相色谱法的优点四、高效液相色谱方法发展简介第二节 高效液相色谱法的分类一、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类二、按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类第三节 高效液相色谱法的应用范围和局限性一、应用范围二、方法的局限性参考文献第二章 高效液相色谱仪简介第一节 流动相及储液罐一、储液罐二、流动相脱气第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置一、高压输液泵二、输液系统的辅助设备三、梯度洗脱装置第三节 进样装置一、停流进样装置二、六通阀进样装置三、自动进样器第四节 色谱柱一、柱材料及规格二、柱填料三、保护柱四、柱连接方式五、柱温控制第五节 检测器一、检测器的分类和响应特性二、紫外吸收检测器三、折光指数检测器四、电导检测器五、荧光检测器六、蒸发光散射检测器第六节 色谱数据处理装置一、微处理机二、色谱工作站参考文献第三章 液固色谱法和液液色谱法第一节 分离原理一、吸附系数二、分配系数第二节 固定相一、液固色谱固定相二、液液色谱固定相第三节 流动相一、表征溶剂特性的重要参数二、液固和液液色谱的流动相第四节 二元溶剂体系中液固和液液色谱的保留规律一、溶质保留值的基本方程式二、液固色谱的保留值方程式三、液液色谱的保留值方程式参考文献第四章 键合相色谱法第一节 分离原理一、正相键合相色谱法的分离原理二、反相键合相色谱法的分离原理第二节 固定相一、键合固定相的制备及分类二、键合固定相的性质三、使用键合固定相应注意的问题第三节 流动相一、溶剂的选择性分组二、在键合相色谱中选择流动相的一般原则三、改善色谱分离选择性的方法四、多元混合溶剂的多重选择性五、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律六、用线性溶剂化自由能关系（LSER）来表征反相液相色谱中溶质的保留值方程式第四节 新型高效液相色谱的固定相和流动相一、新型高效化学键合固定相二、化学键合固定相分类方法简介三、整体色谱柱四、超热水流动相第五节 离子对色谱法一、分离原理二、固定相、流动相和对（反）离子三、影响离子对色谱分离选择性的因素参考文献第五章 梯度洗脱第一节 基本原理一、等度洗脱二、梯度洗脱第二节 影响梯度洗脱的各种因素一、梯度洗脱时间(tG)对分离的影响二、强洗脱溶剂组分B浓度变化范围的影响三、梯度陡度对保留值的影响四、柱温变化对保留值的影响五、梯度洗脱程序曲线形状的影响六、影响梯度洗脱的其他变量第三节 优化梯度洗脱的方法一、建立梯度洗脱方法的一般步骤二、梯度洗脱中的实验条件第四节 梯度洗脱的图示方法一、二元溶剂梯度洗脱二、三元溶剂梯度洗脱三、四元溶剂梯度洗脱四、用极坐标和球面坐标描述梯度洗脱参考文献第六章 体积排阻色谱法第一节 分离原理一、分布系数二、体积排阻色谱法的特点第二节 固定相一、固定相的分类二、凝胶固定相的特性参数三、凝胶色谱柱的制备及谱图特点第三节 流动相一、凝胶渗透色谱的流动相二、凝胶过滤色谱的流动相第四节 凝胶渗透色谱法测定聚合物分子量分布一、聚合物分子量、分子量分布及测定的意义二、凝胶渗透色谱图的解析及数据处理参考文献第七章 高效液相色谱法的基本理论第一节 表征液相色谱柱填充性能的重要参数一、总孔率二、柱压力降三、柱渗透率第二节 高效液相色谱的速率理论一、影响色谱峰形扩展的各种因素二、范第姆特方程式的表达及图示第三节 诺克斯方程式一、描述色谱柱性能的折合参数二、诺克斯方程式第四节 色谱柱操作参数的优化一、三个柱操作参数的表达式二、HPLC中实用柱操作参数的优化三、柱操作参数优化的图示表达方法第五节 “无限直径”效应和柱外效应一、“无限直径”效应二、柱外效应第六节 超高效液相色谱一、超高效液相色谱的理论基础二、实现超高效液相色谱的必要条件三、超高效液相色谱的应用参考文献第八章 高效液相色谱分离条件的优化第一节 高效液相色谱中色谱参数的相关性一、色谱参数的分类二、色谱参数的相关性第二节 色谱分离条件优化标准的选择一、难分离物质对的峰对分离优化标准二、整体色谱图的优化标准第三节 色谱响应函数和色谱优化函数一、Morgan和Deming提出的色谱响应函数二、Watson和Carr提出的色谱响应函数三、Glajch和Kirkland提出的色谱优化函数四、Berridge提出的色谱响应函数第四节 色谱分离条件的优化方法一、单纯形法二、窗图法三、混合液设计实验法四、重叠分离度图法五、等强度洗脱和梯度洗脱的优化图示法第五节 优化HPLC分离的计算机辅助方法一、实验设计系统二、人工智能系统第六节 高效液相色谱专家系统简介一、专家系统的组成二、专家系统的使用方法参考文献第九章 微柱液相色谱法第一节 方法简介一、微型柱的分类二、微柱液相色谱法的优点和缺点第二节 基本理论一、柱外效应二、管壁效应三、稀释效应四、分离阻抗第三节 仪器装置一、输液泵系统二、进样系统三、柱系统四、检测器系统五、连接管和接头第四节 微柱的制备一、评价微柱性能的重要参数二、影响微柱分离效率的相关参数三、微柱的制备方法第五节 微柱液相色谱的新技术一、纳米液相色谱技术二、超高压液相色谱技术参考文献第十章 二维高效液相色谱法第一节 描述分离体系效能的参数一、峰容量二、信息量第二节 二维高效液相色谱的技术功能一、切割功能二、反冲洗脱功能三、痕量组分的富集功能第三节 二维高效液相色谱的流路系统一、多通路切换阀二、二维高效液相色谱的流路系统第四节 二维高效液相色谱在蛋白质组学研究中的应用参考文献第十一章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术第一节 样品的性质及柱分离模式的选择一、样品的溶解度二、样品的分子量范围三、样品的分子结构和分析特性第二节 分离操作条件的选择一、容量因子和死时间的测量二、色谱柱操作参数的选择三、样品组分保留值和容量因子的选择四、相邻组分的选择性系数和分离度的选择第三节 高效液相色谱法的实验技术一、溶剂的纯化技术二、色谱柱的装填技术三、色谱柱的平衡、保护与清洗、再生技术四、梯度洗脱技术五、色谱柱前和柱后的衍生化技术六、样品的预处理技术参考文献符号表

上海伍丰《EX1700超快速液相色谱仪工程化仪器》项目验收会成功举办 编者按：2014年2月18日，上海分析仪器产业技术创新联盟组织专家，对上海伍丰科学仪器有限公司承担的《EX1700超快速液相色谱仪工程化仪器》召开项目验收会，来自北京和上海等地的有关专家和单位代表共20余人出席参加了本次会议。 验收专家委员会组长由大连物化所、中国仪器仪表学会分析仪器分会理事长关亚风担任，专家组成员由上海交通大学药学院教授、上海通微公司董事长闫超，中国仪器仪表学会分析仪器分会副理事长、秘书长刘长宽，上海舜宇恒平科学仪器有限公司副总经理李钧，上海天美科学仪器有限公司副总经理虞雄华，中国仪器仪表学会分析仪器分会副秘书长刘文玉，上海食品研究所检测中心副主任吴轶。 验收会由来自上海市分析测试协会常务副秘书长马兰凤主持，她介绍说上海伍丰研制的EX1700超快速液相色谱仪于“十一五规划”末期，通过上海市科委的验收，国家科技部要求积极推动科学仪器开发成果的工程化和产业化，她表示，希望本次验收会的召开，上海分析仪器产业技术创新联盟能够为上海更多的企业在工程化上的进展作出指导和服务。 上海市科学委员会研发基地建设与管理处主任张露璐出席会议并致欢迎辞，他表示一直以来，上海市科委十分重视和支持科学仪器研发工作，十几年前，上海市科委就创造了良好的科研环境，凝聚了高校、科研院所和企业共同研制科学仪器。同时，他对一直支持上海科学仪器研发工作和出席本次验收会的专家组表示了感谢，他指出，上海伍丰在承担科学仪器研发专项的基础上，进一步展开了EX1700超快速液相色谱仪工程化的工作，希望专家组能够提出更多宝贵的意见，以促进该科仪项目朝更远方向发展。 会上，上海伍丰副总经理马昱围绕研制背景、研究目标和内容、研制过程和应用前景四个要点作“EX1700超快速液相色谱仪”研制总结报告。基于国内外该领域仪器技术发展的方向，产品研制的特点，再结合公司自身科研技术的优势，并依据国家相关标准，上海伍丰于2011年着手准备和启动该款仪器的的具体设计及部件设计，在解决了超高压输液技术、超高灵敏检测技术，全自动控制技术，自动进样器四个关键部件研制问题后，成果顺利通过上海市科委验收。2013年，该款仪器正式开始工程化设计，之后严格遵循产品形成过程的三个环节：产品设计定型、产品生产性定型、目标仪器工程化，最终完成了部件和和整机调试。除此之外，该款产品还获得了包括“一种液相色谱仪自动进样器精密计量泵”等6项专利。 在这基础上，上海伍丰总经理马明远又作“EX1700超快速液相色谱仪”技术报告，向专家组详细介绍了该款产品的技术关键，与普通液相色谱法相比，有以下几点根本性变化：小颗粒、高性能微粒固定相的出现，超高压输液泵的使用，超高压恒流泵、高灵敏紫外检测器、超高压自动进样器和超高速数据处理系统及工作站的研制；同时，他又例举了部分科研院所等单位的测试对比，以及前期的工程化准备。 专家组在听取了项目总结报告、技术报告、测评报告和用户报告，审阅了相关技术资料，又现场观看了仪器操作演示和工程化生产现场后，一致认为该项目研究了60MPa超高压输液技术，1.6微升流通池检测技术，重复性误差≤0.5%自动进样器控制性技术，实现了液相色谱全盘自动化，部分技术指标达到国际同类产品的指标；与常规国外液相色谱仪比较，测试比较发现，系统稳定时间缩短2/3，分析速度提高3倍以上，使用的流动相试剂减少2/3以上，达到了国内领先水平，总体上仪器技术指标满足或优于课题任务书的要求，同意通过验收。 关亚风教授最后表示，该款仪器在整个设计细节上花费了很大的功夫，经得起长期的考核测试，他提出更高要求和期望，希望上海伍丰在目前所取得的成就基础上，继续发挥优势，积极参与相关国标制定，在该领域仪器的研发和行业的进步有更大的建树，让国产仪器有更多的成长机会和空间。

液相色谱最大的故障是漏液问题 液相色谱现在在分析实验室应用的很多，对样品分析分析做出了巨大的贡献。当然由于这种仪器的固有特性（高压或超高压），在实验过程中也可能会出现很多故障问题，给实验带来很多麻烦，给操作者带来很多烦恼。 液相色谱在使用中可能会出现很多问题，其中最常见的故障那肯定是漏液问题了。由于系统长期处于高压状态，那很多部件漏液就在所难免了。再就是液相泵是在线输液，在高压状态下动态工作也是漏液的有一大因素。另外液相可能会用到酸碱盐溶液，这些溶液可能会对系统造成污染或堵塞等，这就使得系统的压力更高，造成漏液。 液相色谱溶液漏的地方有泵头处（密封圈或柱塞杆损伤所致），单向阀处，阻尼器处，混合器处，进样阀处，放空阀处，色谱柱处，检测池处，接头处等等。 漏液是液相常见的问题，不够是进口仪器还是国产仪器，只要是液相仪器就都可能会漏液，只是漏液的程度和频率问题。这个问题我们只能是竭力控制或减少缺很难彻底解决，尤其是寿命较长的老仪器，那就更难避免了。 其实漏液、漏气问题在其它分析类产品中也可能会出现，只是可能没有液相这么严重。 液相色谱漏液问题解决办法一般都是换件，比如密封圈、密封垫、柱塞杆，刃环、滤片、接头等。另外清洗、疏通管路、液路也是常见的解决办法。

8月，赛智科技隆重推出了LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统——LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，此前，公司产品已经进入清华大学、中国地质大学、南方科技大学、中国检验检疫科学研究院、中科院青岛能源所、华大基因等机构，获得了广泛认可。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561917027136.jpeg[/img]近年来，在分析测试领域，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的应用需求日益增长，赛智科技紧跟市场需求，通过自主研发和生产，推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，此举不仅满足了用户的多样化需求，更丰富了公司的产品线。这是赛智科技的一小步，却是国产高端分析仪器市场的一大步。[b]长期坚持自主研发，推出国产高端新品[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是重要的科研分析仪器，可以对复杂的混合物样品进行分离并分析样品的成分及含量，在食品安全、药物分析、生命科学研究、环境监测、临床检测、工业制造等多个领域都有广泛应用。但是，由于国内企业起步较晚，我国的高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]市场长期被Waters、安捷伦、岛津、赛默飞等跨国公司垄断，国产厂商只能做中低端市场，产品附加值较低。《第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》中明确提出，要深入实施制造强国战略，加强高端科研仪器设备研发制造。在此背景下，赛智科技坚持自主研发核心部件，积极公关技术难点，经过不懈努力，终于推出了拥有自主知识产权的国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，成为少数掌握高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]核心制造技术的国内企业。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561135690083.png[/img][b]深耕分析测试领域，树立中国制造业标杆[/b]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的研发和生产需要系统集成，比如，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）是由LC8100系列溶剂组织器、LC8200系列高压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器（或选配DAD检测器）等核心零部件组成，而LC8000四元低压自动系统则是由LC8245四元低压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器等核心部件组成，要想实现高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的整机研发，核心部件的制造和整机系统的设计都非常关键。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056712030640.png[/img]自成立以来，赛智科技长期专注于分析测试领域，公司创始人路文初先生拥有深厚的学术和科研背景，他和团队共同研发的N2000色谱工作站操作简单、性价比高，目前拥有的客户数已经突破十万，在国内市场的占有率高达80%以上。不仅如此，在过去的十多年时间里，赛智科技不断强化自研自产能力，多项技术打破了国外技术垄断，并且建立了全流程的自研产品线，在高壁垒的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]领域，逐步实现了溶剂组织器、高压输液泵、四元低压输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外-可见检测器等核心零部件的生产制造，实现了核心零部件全部国产化，树立了中国高端仪器制造业标杆。[b]掌握核心技术专利，积极开拓海内外市场[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是基础医学、药学、材料科学领域的基础科研仪器，随着中国产业升级的稳步推进，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]市场也从常规的色谱分离向高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析、二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析方向拓展，此次，赛智科技推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，未来将会成为市场主流。LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）具有卓越的梯度精度和优化的延迟体积，更加适合复杂的应用环境或与质谱等联用。凭借进样器带来的自动化进样便利和多种检测器，获得更多数据易如反掌，同时产品还具有超高性价比和良好的稳定性，且维护简单。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056203994952.png[/img]LC8000四元低压自动系统具有极佳的灵活性且高度自动化，可以轻松应对药物、环境、食品安全、石油化工、农林牧渔等各个领域的复杂需求。在Ultrachrom色谱工作站控制下，可以实现全自动分析、报告、系统冲洗和关机，大幅提高工作效率。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430571355364781.png[/img]虽然是国产高端新品，但是依托赛智科技长期自主研发积累的技术专利和制造能力，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，以卓越的梯度精度、高度自动化、超高性价比和功能强大的配套色谱软件，让所有用户都可以获得良好的产品性能，并能大幅提高工作效率，在药物分析、食品和环境中的污染物检测、生物医药等相关领域都有广泛的应用需求。赛智科技长期从事的是科学仪器的研发和生产，公司深知只有把核心技术掌握在自己手中，才能真正掌握竞争和发展的主动权。正因如此，赛智科技始终坚持自主研发与“产学研”相结合的创新方式，产品的国产化率一直处于国内行业前列地位，目前公司已打通了高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]研发、生产、销售、售后服务的发展全链条，未来该系统将会应用于国内的大专院校、科研单位、化工厂、医院、制药厂、生物科技公司、第三方检测机构等多个领域，并有望远销伊朗、印度尼西亚、印度、泰国等海外市场扩大销售份额。