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液相色谱-质谱-质谱联用法测定猕猴血浆中阿德福韦赵丽艳,陈笑艳,张勇,杨汉煜,钟大放(沈阳药科大学药物代谢与药代动力学实验室,辽宁沈阳)摘要:目的建立测定猕猴血浆中阿德福韦的液相色谱,质谱,质谱联用法。方法取血浆样品0.25ml 经甲醇沉淀蛋白后,以甲醇,水,甲酸(20:80:1)为流动相,用DiamonsilC18柱分离,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以选择离子反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z274-m/z162(阿德福韦)和m/z288-m/z276。结果阿德福韦线性范围为0.02-4.00mg/l,最低定量限为20ug/L,日内、日间精密度RSD小于5.8%,准确度(RE)在+-4.5%范围内。在临床前药代动力学研究中,应用此法测试了3只猕猴p0 给予阿德福韦地匹福酯后血浆中阿德福韦的浓度。结论 该法操作简便,准确,适用于临床前药代动力学研究。关键词:阿德福韦;阿德福韦地匹福酯;液相色谱,质谱,质谱联用法;血浆药物浓度http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207241326_379369_2355529_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207241327_379370_2355529_3.jpg
[align=center]国产临床质谱研发新进展[/align]质谱是一种测量离子质荷比(m/z)的分析方法,最早是1906年由英国著名物理学家汤普森发明。我们可以把质谱仪想象成一杆特殊的天平,称量的是离子的质量。自1906年至今,在这100多年的发展历史中,质谱技术不断进步发展,具有快速、高分辨率、高灵敏度、高特异性等优点,出现了很多不同工作原理的质谱仪,如低分辨、高分辨、飞行时间、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/yp][color=#3333ff]ICPMS[/color][/url]等。从80 年dai开始,质谱发展成工业产品,最早应用于化学分析,生命科学科研和制药业。国内有很多质谱仪研发厂商已经具备一定的能力,集医疗器械研发、生产、销售及第三方医学检测服务一体化的高新技术企业在蓬勃发芽。很多公司围绕基因组学和代谢组学开展科学研究,搭建了国内先进的基因检测平台、质谱检测平台及质量控制平台等。精确诊断是精准医疗的重要前提,作为生物样本内小分子分析的金标准方法,质谱技术是精准诊断实现过程中不可或缺的工具,也是临床检验技术重要的发展方向。近年来,精准医疗在逐步获得国际医疗机构认可和重视的同时,质谱技术在临床检测中的需求也越来越大,目前国内越来越多的第三方及医院相继建立了质谱分析平台,质谱技术也因其自身高灵敏度、高特异性、高技术型等特点一度成为了临床检验能力的一种标志。质谱技术作为一种多功能的新型检测技术,硬件已是完全工业产品化,虽然其功能非常强大,但方法学和质量管理体系是检测结果及应用的关键。对于同一台仪器,如果样品处理方法不同,达到的检测的准确性和灵敏度会有很大的差异。这对传统的医院或检验实验室或检验人员来说都是一种新的挑战,但同时也是一种新的发展机遇。在中国临床质谱应用发展过程中,主要存在几个难点:仪器属于大型仪器,投资高,医院没有经费购买仪器;对人员技术要求高,业界缺乏相关的专业应用技术人才; 没有相关质谱检测的收费标准;没有标准化的IVD方法学;没有成熟的质量管理体系。借着参加新旧动能转换-中美精准医疗高峰论坛的机会,我近距离欣赏了一下国产最前沿的超高效液相色谱串联质谱。最新研发的超高效液相色谱串联质谱仪采用超高效液相色谱串联质谱技术([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS),将超高效液相色谱的高分离度、高效率与质谱的高灵敏度、高选择性完美结合,最终通过同位素内标及外标实现精准定量。下图是国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908132019314940_5072_3255306_3.jpg!w690x517.jpg[/img]国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]在临床应用主要有临床代谢病、维生素、激素、脂肪酸、氨基酸、胆汁酸、治疗药物等70余项检测项目。其检测原理是三重四级杆。检测原理见下图。[align=center][img=,690,284]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908132020476280_5571_3255306_3.jpg!w690x284.jpg[/img][/align]其开发的高效液相色谱串联质谱仪由两部分组成,第一部分是超高效液相色谱仪,其系统耐压可达14000 psi,是目前最先进的HPLC系统之一,配备多通道流路,更佳的分离效果、更广的应用范围、更快的分析速度,为分析工作者节省人工和时间,提高质谱利用效率。其主要有4大优势:1、更好的分离能力:新型高效二元高压混合系统耐压更高、系统体积更小。确保最优的性能,满足苛刻的分离要求。2、更高的分析效率:高耐压能力结合大容量自动进样器,实现高通量临床检验。3、更广的适用范围:极宽流速范围结合大容量柱温箱,适合各种色谱柱和分析方法。4、更强的人机交互:自动化设计,系统操作方便,使工作充满乐趣。下图是超高效液相色谱的细节图:[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908132021050254_4222_3255306_3.jpg!w690x920.jpg[/img]第二部分是三重四级杆质谱仪,它是新一代三重四级杆质谱仪的代表之一,基于离子源、离子传输组件、质量分析器的多维创新,可针对基质中极低浓度的化合物进行定量分析。其主要有四大优势:1、超凡灵敏度:轻松完成超痕量物质测定;2、卓越的耐用性和稳健性:应对生物分析基质复杂、样品量大的挑战;3、极佳的易用性:无需质谱经验,即可获得可靠结果;4、更高的检测效率:维护简单,停机时间少,分析速度快。下图是国产质谱仪及离子源部分。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908132026119211_7857_3255306_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908132026180640_784_3255306_3.jpg!w690x920.jpg[/img]做工精美,小巧是我对国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]连用仪的第一印象,通过更深入的了解,这款质谱仪的核心技术主要应用了真空锁定装置,使日常的离子传输毛细管清洗与维护不用泄真空,大大提高仪器的使用效率。其主动离子管控技术,使所有电场部件得到精密设计,协同优化,信号响应得到最大化处理,消除了污染,获得了突破性的性能提升。其更多核心技术见下图。[img=,690,588]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908132028055670_8776_3255306_3.jpg!w690x588.jpg[/img]
[align=center][font=宋体][size=14.0pt]临床质谱应用主要挑战及发展探索[/size][/font][/align][font=宋体][size=12.0pt]近年来,各种检验新理论和新技术不断涌现,极大地推动了临床检验学科的发展。液相色谱串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS)技术集液相色谱对复杂样本的高分离性能和质谱的高敏感性、高特异性于一体。临床质谱应用愈来愈广,但发展过程面临诸多挑战:初始投资高、仪器操作复杂、缺乏自动化和法规不确定等。而在临床质谱应用发展探索中,需要使方法验证规范化、质量管理系统化、样品处理自动化和行业发展专业化等。现在临床质谱的应用已涉及维生素D、药物中毒检测、内分泌(激素)检测、新生儿筛查遗传病、小分子标志物、蛋白与多肽、微生物及体内微量元素等。[/size][/font][font=宋体][size=12.0pt]我国质谱临床检测可望达百亿规模。2017年全球临床质谱市场份额为49.8亿美元,未来(2017-2025年)CAGR预计以7.3%增长。中国未来五年临床质谱将以7.6%的速度增长,形成一个超百亿规模的临床质谱检测市场。[/size][/font][font=宋体][size=12.0pt]质谱技术具有诸多优点:特异性好,克服免疫分析对小分子化合物的检测缺陷,检测结果更可靠;操作简便,比HPLC和GC-MS的容易使用,通量更大,是免疫分析法的主要互补方法;成本效益高,与其他技术相比,单个样本的测试成本更低;灵活性高,建立和验证新方法比较容易;高灵敏度;多通道检测能力;更接近参考方法。[/size][/font][font=宋体][size=12.0pt]质谱技术使用通用试剂,批量检测时成本较低,受第三方检测公司青睐;质谱的直接检测原理,特异性高,抗干扰(可见即可信);质谱具有即刻、多通道检测能力,通量主要限于样品前处理;检测底限可达ng甚至pg水平,适合微量甚至痕量物质分析,避免使用放射性检测技术。[/size][/font][font=宋体][size=12.0pt]但质谱同样也有缺点,如缺少配套试剂,操作复杂,检测人员需要专门培训,对环境有特殊要求,方法需要开发和验证等。在发展探索过程中,方法验证规范化,质量管理系统化,样品处理自动化,行业发展专业化尤为重要,分析工作者及实验室管理人员应密切关注政策变化和行业动向,紧随行业发展方向。[/size][/font][font=宋体][size=12.0pt]今天的分享到此结束,感谢仪器信息网提供原创大赛平台让大家互相学习![/size][/font]