当前位置: 仪器信息网 > 行业主题 > >

色谱正相柱反相柱

仪器信息网色谱正相柱反相柱专题为您提供2024年最新色谱正相柱反相柱价格报价、厂家品牌的相关信息， 包括色谱正相柱反相柱参数、型号等，不管是国产，还是进口品牌的色谱正相柱反相柱您都可以在这里找到。 除此之外，仪器信息网还免费为您整合色谱正相柱反相柱相关的耗材配件、试剂标物，还有色谱正相柱反相柱相关的最新资讯、资料，以及色谱正相柱反相柱相关的解决方案。

色谱正相柱反相柱相关的论坛

  • 正相色谱柱与反相色谱柱的区别

    正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明： 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。 2、反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

  • 正相色谱柱与反相色谱柱的区别，分享给像我这样的新手，呵呵

    正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等

  • 正相和反相色谱柱的区别

    在正相色谱中，一般采用极性键合固定相，硅胶表面键合的是极性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基(-CN)、氨基(-NH2)、二醇基(DIOL)键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等)，以调节流动相的洗脱强度。通常用于分离极性化合物。一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。组分的分配比K值，随其极性的增加而增大，但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时，极性键合相的极性越大，组分的保留值越大。该法主要用于分离异构体，极性不同的化合物，特别是用来分离不同类型的化合物。　　在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶-C18H37(简称ODS或C18)硅胶-苯基等，用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。　　正相色谱和反相色谱的区别：　　本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强 反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。　　1、正相色谱　　正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团，如(NH2，APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷(Hexane)，氯仿(Chloroform)，二氯甲烷(Methylene Chloride)等。　　2、反相色谱　　反相色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。　　常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。

  • 正相系统转反相系统时没用异丙醇冲柱 色谱柱是否受损

    如题 正相系统转反相系统时没用异丙醇充系统 只用水冲了1个多小时 不知道想什么去了 唉 可能太急躁了 后悔莫及 然后接上色谱柱 再用10甲醇冲柱 再上流动相 谱图的新出现一个小倒峰 在4到5min的地方,理论塔板数没降低 但峰变前延 拖尾因子从1.05变成0.84 这样是否判断色谱柱受损 有没有什么补救办法 正相系统流动相是正己烷异丙醇三氟乙酸 反相系统流动相是乙腈水已采取的办法 卸下色谱柱接双通，异丙醇冲系统1到2h 色谱柱HC C18用异丙醇0.5ml per min冲了2个小时 然后用95%甲醇水0.5ml per min过夜

  • 【实战宝典】正相色谱柱与反相色谱柱在填料上有什么区别？

    [b][font='Times New Roman'][font=宋体]解答[/font][/font][font=宋体]：[/font][/b][font=宋体][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]正相色谱柱与反相色谱柱本质上是填料[/font][/font][font=宋体]（[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]固定相[/font][/font][font=宋体]）[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]的不同。正相色谱柱填料极性强[/font][/font][font=宋体]，[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]正相色谱柱用的固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（[/font]NH[/font][sub][font='Times New Roman']2[/font][/sub][font='Times New Roman'][font=宋体]，[/font]APS[font=宋体]）和氰基团（[/font][font=Times New Roman]CN[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]CPS[/font][font=宋体]）的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基（[/font][font=Times New Roman]SiOH[/font][font=宋体]）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱柱使用的流动相极性相对比固定相低，如正己烷，氯仿，二氯甲烷等。[/font][/font][font='Times New Roman'] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）[/font][/font][font='Times New Roman'][font=宋体]反[/font][/font][font=宋体]相[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]色谱柱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反[/font][/font][font=宋体]相[/font][font='Times New Roman'][font=宋体]色谱柱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填料有：[/font]C[/font][sub][font='Times New Roman']18[/font][/sub][font='Times New Roman'][font=宋体]（[/font]ODS[font=宋体]）、[/font][font=Times New Roman]C[/font][/font][sub][font='Times New Roman']8[/font][/sub][font='Times New Roman'][font=宋体]（[/font]MOS[font=宋体]）、[/font][font=Times New Roman]C[/font][/font][sub][font='Times New Roman']4[/font][/sub][font='Times New Roman'][font=宋体]（[/font]Butyl[font=宋体]）、[/font][font=Times New Roman]C[/font][/font][sub][font='Times New Roman']6[/font][/sub][font='Times New Roman']H[/font][sub][font='Times New Roman']5[/font][/sub][font='Times New Roman'][font=宋体]（[/font]Phenyl[font=宋体]）等。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]领取更多《实战宝典》请进：[/font][/font][url=http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI][u][font=微软雅黑][color=#0000ff]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/color][/font][/u][/url][font=微软雅黑] [/font]

  • 正相柱和反相柱的概念

    有版友问正相柱和反相柱的问题，虽然这是个基础问题，但还有新手不是很理解。梳理了相关资料说明一下。反相和正相的概念是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法早期提出的概念，当时键合相色谱柱尚未出现，固定相被涂覆在载体表面，极易流失，为此科学家对流动相使用提出了建议：流动相极性与固定液极性应具有较大差别，以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法被称为反相色谱法，固定相极性强于流动相时的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为主流，但这一概念一直延续至今，在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义。因此，色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性，同时还取决于流动相极性。C18（硅胶键合十八烷基硅烷）、C8（硅胶键合辛基硅烷）、PH（硅胶键合苯基硅烷）等色谱柱，由于固定相极性极低，比目前已知的任何流动相的极性都要低，因而是标准的反相柱；Silica（硅胶）、NH2（硅胶键合氨丙基硅烷）具有较高的极性，主要用于分离带有极性基团的化合物，所用流动相的极性通常低于这些固定相，因而是标准的正相柱。CN（硅胶键合腈丙基）的极性适中，当流动相极性超过CN时，它属于反相柱，反之则是正相柱。

  • Kromasil AmyCoat或CelluCoat预装手性色谱柱在正相和反相操作模式下都适用吗？

    [color=#9688a7]是的，手性色谱柱能在正相、极性模式、反相条件下工作。普通预装色谱柱在正相和极性模式工作状态下（醇或乙腈，不含烷烃的移动相）能达到柱效的上限。通过100%乙醇或异丙醇作为中间平衡溶剂处理，可以将色谱柱内含的手性固定相转化为反相工作状态。当然，此时的固定相也同样能再恢复到初始的工作状态。手性色谱柱的工作模式经过转换后，通过比较反相和正相工作模式下的塔板数发现在柱效上会有一些损失。建议通常在反相模式下工作的客户，不如直接购买在反相工作模式下预装的手性色谱柱，AmyCoat RP和CelluCoat RP，以便获得最高的柱效值。[/color]

  • 有奖每日一题（7.12已完结）：何谓反相柱、正相柱？

    有奖每日一题（7.12已完结）：何谓反相柱、正相柱？

    [b]问题：[b][b][/b]何谓反相柱、正相柱？[/b]答案："反相”和“正相”的概念是液相色谱法早期提出的概念，当时键合相色谱柱尚未出现，固定相被涂覆在载体表面，极易流失，为此科学家对流动相使用给出了合理的建议：流动相极性与固定液极性应具有较大差别，以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为反相色谱法，固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为主流，但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义。 由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性，同时还取决于流动相极性。C18(硅胶键合十八烷基硅烷)、C8(硅胶键合辛基硅烷)、PH(硅胶键合苯基硅烷)等色谱柱，由于固定相极性极低，比目前已知的任何流动相的极性都要低，因而是标准的反相柱；Silica(硅胶)、NH2(硅胶键合氨丙基硅烷)具有较高的极性，主要用于分离带有极性基团的化合物，所用流动相的极性通常低于这些固定相，因而是标准的正相柱。CN(硅胶键合腈丙基)的极性适中，当流动相极性超过CN时，它属于反相柱，反之则是正相柱。[/b][align=center]=======================================================================[/align]【[b]活动内容[/b]】1、每个工作日上午10：00左右发布一个色谱问答题，版友根据题目给出自己理解的答案。2、每个工作日下午15：10公布参考答案。【[b]活动奖励[/b]】[b]幸运奖：[/b]抽奖软件，当天随机抽取3个或5个回答正确的版友ID号（最后一个ID号，截止至下午15：00），每人奖励[b][color=#ff0000]2钻石币[/color][/b]（抽奖人数≤10，抽取3个版友；抽奖人数＞10，抽取5个版友）；[b]中奖名单：lijing320323(注册ID：lijing320323）大川之子,纵横四海(注册ID：chuangu120)yifan1117（注册ID：yifan1117）吕梁山（注册ID：shih20j07）夏天的雪（注册ID：bingwang228）[img=,690,388]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707121523_01_708_3.jpg[/img][img=,690,388]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707121523_02_708_3.jpg[/img]积分奖励：[/b]所有回答正确的版友奖励[b][color=#ff0000]10个积分[/color][/b]（幸运奖获得者除外）。【[b]注意事项[/b]】同样的答案，每人只能发一次[align=left][color=#ff0000][b]PS：该贴浏览权限为“回贴仅作者和自己可见”，回复的版友仅能看到版主的题目及自己的回答内容，无法看到其他版友的回复内容。[/b][/color][/align][align=left][color=#ff0000][b] 下午3点之后解除，即可看到正确答案、获奖情况及所有版友的回复内容。[/b][/color][/align]

  • 【原创】反相高效液相色谱柱的清洗和再生（一）

    原文来自：JANUARY 2003 LC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] NORTH AMERICA VOLUME 21 NUMBER 1 19,20,22,24,26http://www.chromatographyonline.com/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（二）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（三）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/[size=4]本文原是2年前让我的研究生左莹暑假特意翻译的，只是后来忘了。一个月前，在整理电脑资料中发现了这篇文献翻译，我重新校对，修整了一些错误，但仍可能会有些翻译不对的地方，或者语句不畅，请大家指正。[/size][color=#00008B]][color=#00FFFF][size=4]反相高效液相色谱柱的清洗和再生[/size][/color][/color] 这个月的“关注色谱柱”着眼于将一根污染的柱子回到或接近初始状态的实用方法。Ron Majors 会讨论硅胶基质或其它类型的反相柱子的清洗步骤。 反相液相色谱是迄今为止高效液相色谱法（HPLC）中使用最广泛的技术[1]。它的广泛使用是因为它能应用于大部分的非极性化合物、许多可电离的及离子化合物的分析。大部分用于反相色谱的固定相是亲水性的，因此分析物是通过其与固定相之间的亲水作用的程度来进行分离的，含有亲水组成的基团也有相似的保留行为。 表一列举了最常见的键合硅胶的固定相（1）。一些比较次等的固定相比如说一些混合固定相（例如：苯基－乙基），末端封尾和不封尾类型的，一些极性固定相同样属于硅胶键合。其它一些各种各样的填料同样也被用于反相液相色谱，包括聚合物，涂布有硅和铝的聚合物，涂有氧化锆的无机－有机杂化物和石墨化的碳。各种不同的固定相都有其自身的优点和缺点。表1 HPLC固定相中的使用比例*固定相 使用比例C1839C826CN**14.5苯基12C43.7亲水作用1.8C21.2C10.8其它0.8聚合物0.5* 来源于文献1** 包括正相色谱，因为正相与反相使用无法确定比例。 反相色谱柱由于可使用多种流动相和添加剂而得到了广泛的使用。其中使用添加剂的一些技术可改变或修饰填料表面。有时，这些添加试剂本身就会污染填料表面或键合相。 由于使用了亲水性的键合固定相，硅胶表层有了其他的化学特征。残余的硅羟基存在于所有的硅胶键合相的表层。图一描述了可能存在的不同类型的硅羟基（2）。由于是弱酸的特性，这些硅羟基会同某些分析物和基体化合物相互作用，尤其是同一些碱性化合物。因为硅羟基的Pka值大约是在4.5左右。电离可能发生在中间的pH值，因此存在其同阳离子产生静电作用的可能性。比较老的A型硅胶可能含有高浓度的金属离子（通常为100ppm，或更高），这些金属离子会在硅胶表面提供更强的酸性，同样还会和金属螯合化合物（3）相互作用。残留的硅羟基会在末端不封尾的键合硅胶和短链键合的固定相上（例如C2和C4固定相）造成较多的麻烦。 色谱柱的使用者必须清楚色谱柱固定相的表面特征和可能存在的分析物—固定相表面的相互作用，所以在使用和发展反相色谱方法时必须考虑可能存在的基体相互作用。比如一些非常疏水的材料如玉米油、特别芳香类材料和蜡可以附着在反相填料表层并改变填料层的特征。含有蛋白质的生物液体会吸附在填料表层，尽管分析者尽了最大的努力来保护高效液相色谱柱以防止外来物质对其的伤害，最终是，某些分析物-基体化合物还是会对固定相产生不利的影响。 当一根色谱柱被污染之后，它的色谱性征可能已经不同于未被污染的色谱柱了。被污染的色谱柱可能会表现出反压力的问题。对于一根被污染的色谱柱则必须通过清洗和再生将它恢复到原来的操作条件。“关注色谱柱”这部分将会讨论一些实用的方法来将色谱柱恢复或接近到初始状态。由于键合的硅胶柱是最常用的，所以我要着重讨论他们。在最后，我将会论述一些其他类型的反相色谱柱的清洗程序。 反相色谱柱中污染物是怎样的形成？ 通常，样品基体里总是含有一些对分析者来说不感兴趣的化合物。盐类、脂质、含脂肪的化合物、腐殖酸、疏水性的蛋白质和其他的一些生物化合物就是在使用中能够接触到高效液相色谱柱的可能物质。这些物质可能会比所需分析的物质更强或更弱的保留能力。那些保留能力比较弱的化合物如盐类，将以死体积被洗脱出来。这些不希望发生的干扰可以通过检测器观察到，它表现为一些色谱峰、斑点、基线干扰，甚至是一些倒峰。如果样品基体组成在色谱柱中有强的保留性，且流动相组成本身就不强到足以使其洗脱出来，这些被吸附的、或是被吸收的化合物将会累积，通常是在经过多次进样之后堵塞在色谱柱的柱头。这种特征是在等度条件下观察得到的。中等保留能力的样品混合物可以被缓慢的洗脱出来，其表现为宽峰、基线干扰或基线漂移。 有时，这些吸附的样品组成达到了比较高的浓度，它们便表现为一种新的固定相。被分析物可与这些杂质作用并表现为新的分离机理。它可能会引起保留时间的变化和峰的拖尾。如果色谱柱受到了比较严重的污染，色谱柱的反压力会达到一个无法承受的高度，这将会使泵超压工作，在堵塞的位置引起柱的塌陷并产生中空。表2分析柱的柱体积柱的尺寸（mm*mm）死体积（mL）250 * 4.62.5150 * 4.6 1.5150 * 3.00.64150 * 2.10.2850 * 4.60.5030 * 4.60.3015 * 4.60.15反相高效液相色谱柱的清洗和再生（二）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（三）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/

  • 【求助】接反相柱的仪器换接正相柱

    实验室一台液相色谱仪一直接的是反相柱，最近开发新方法要用正相柱。请问各位大侠，从反相过渡到正相有什么要注意的吗？是不是要用异丙醇先洗柱子？正相柱接好后走标样结果很差，同一标样进两针结果相差很远，出峰时间、峰面积都对不上，请问有什么解决方法？最后请教大侠，正相柱使用时要注意些什么，感激不尽。

  • 【分享】反反相色谱与HILIC柱的比较 文章——两种分离模式的比较：亲水相互作用色谱HILIC 与反反相色谱ANP

    【分享】反反相色谱与HILIC柱的比较 文章——两种分离模式的比较：亲水相互作用色谱HILIC 与反反相色谱ANP

    好不容易翻译过来的，如果有错，请大家原谅。两种分离模式的比较：亲水相互作用色谱HILIC 与反反相色谱ANPJoseph Pesek，Maria T. MatyskaDepartment of Chemistry, San Jose State University, San Jose, CaliforniaPlease direct correspondence to Joseph Pesek at pesek@sjsu.eduhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121803_288425_1604317_3.jpg在文献（1）及其他很多文献中，经常可以看到两种相似的色谱分离机理的色谱柱，一种是亲水相互作用色谱（hyd rophilic interaction liquid chromatography，HILIC），另外一种是水相正相色谱（aqueous normal phase，ANP，也称反反相色谱）。但是，事实上这两种色谱柱在保留模式上是不一样的。 本文旨在对HILIC 和ANP 色谱机理做一个准确的定义并对何时使用哪种色谱柱做一个明确的指导。实验部分实验所使用的色谱柱为UDC Cholesterol（75mm×4.6mm）及Bidentate C18（BD C18，150mm×4.6 mm 或20 mm×2.0 mm）来自于MicroSolv Technology （Eatontown，New Jersey）。流动相中的乙腈来自于B&J（Muskegon，Michigan），水使用来自Milli-Q 仪器（Millipore，Bedford，Massachusetts）。甲酸购自Spectrum Chemical（Gardena，California）。HPLC为安捷伦1050 型，配有自动进样器和二极管阵列检测器（Wilmington，Delaware）。样品浓度范围为0.1-1mg/mL，进样量为1-5μL。反反相实验中的流动相含有0.1%甲酸。结果与讨论HILIC: 亲水色谱是专为保留和分离极性-离子型化合物所设计的一类色谱柱。 在反相色谱中极性-离子型化合物是在死体积附近被洗脱的，即不在反相柱上保留，所以对此类物质的分析是很困难的。在反相色谱上开发方法时，很重要的需求就是物质要在固定相上有保留，并且防止/减少硅胶表面硅羟基对化合物的吸附。为了使极性-离子型化合物能在反相柱上保留，我们经常会对化合物进行衍生（2）或使用离子对试剂（3）。在前一种方法中需要将极性-离子型化合物化学衍生为疏水性物质，而在后一种方法中则在流动相中加入带相反电荷的物质，使极性-离子型化合物变为中性物质。这两种技术不但比较繁琐和费时，特别是离子对技术会导致反相色谱不能与质谱（MS）及光散射检测联用，对实验造成很大限制。最近发展出来的硅胶制造技术可以使得固定相更适合极性化合物的保留（1）。硅羟基能在一定流动相条件下对极性化合物产生保留。另外一种方法就是对硅胶表面进行化学修饰，如图1 所示。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121805_288426_1604317_3.jpg如果R 基团具有极性，如氰基（-CN），氨基（-NH2） 或二醇（-CH(OH)-CH2-OH），这样固定相就具有保留亲水化合物的能力。使用前一种典型的HILIC 柱对极性化合物的保留性质如图2a 所示。 在低有机相比例（高水相比例）时，亲水性化合物没有保留，因为亲水化合物更倾向于留在流动相中。当流动相的非极性最够强时（足够的有机相比例），极性化合物才会有保留。但是，典型的疏水化合物在HILIC 柱子上却没有保留。因此HILIC 柱可以分析一些极性化合物的混合样，但是当样品中既有极性化合物，又有非极性化合物时，极性化合物就会因没有保留而分不开。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121806_288427_1604317_3.jpg一个用HILIC 柱子分离极性化合物的例子如图2c 所示（4）。显然这两种极性化合物在普通C18 柱上是没有保留的（Figure 2b）。如果分析对象只有极性化合物HILIC 柱子是很合适的选择，就像我们在图2b 和2c 中看到的一样。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121807_288428_1604317_3.jpgANP，反反相: 尽管HILIC 柱通常能解决极性-离子型化合物的保留问题，但是却不能满足样品中同时有亲水和疏水物质存在的分析要求。事实上，反相柱也一样不能解决亲水、疏水同时存在的情况。但是，反反相（ANP）的柱子就可以解决亲水、疏水物质同时分离的难题，使色谱工作者不至于在反相与HILIC 柱之间做二选一的选择。“水相正相色谱，反反相”反映了这种柱子具有两种分离机制，这个名字说明反反相（ANP）具有流动相中含水的性质（反相分离机理），同时也具有正相色谱的保留机理（在流动相极性更弱情况下保留增加）。HILIC 柱只提供类似于正相的效果，单没有反相色谱的功能。事实上，ANP 的保留机理与反相与HILIC 有很大差异，接下来的章节就ANP 的分离效果进行论述。ANP 1: 图3a 展示了两种物质在ANP 柱上的保留图（一个在反相上有保留，一个在正相上有保留）。在此例中，两种保留机理显示的很清楚，并且区域是两种化合物都有保留的。在这种情况下，只要改变流动相就可以在反相色谱与正相色谱间进行转换。流动相中水的比例高，疏水物质被保留，而亲水物质不保留；流动相中有机溶剂比例高，亲水物质被保留，而疏水物质不保留。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121808_288429_1604317_3.jpg图3b 显示了3 种化合物在高水相比例中的分离（反相机理）。在这个例子里，ANP 柱的分离行为就如同一根普通的反相柱。ANP 2: 图4a 显示了ANP 柱从两种物质得到的保留图的另外一种性质，在这种情况下，流动相的组成使得两类化合物都有很强的保留能力，这样极性和非极性化合物就可以同时在ANP 柱上实现分离。另外一种操作就是我们可以在分析亲水和疏水化合物时使用梯度洗脱的方法。与HILIC 柱相比（只有极性化合物在高有机相情况下保留）或者ANP1 情况（化合物的保留取决于有机相比例）ANP2 则提供了独特的分离能力，这种分离能力在商品化柱子中是很少见的。图4b 显示了在ANP2 洗脱模式下分离混合物的例子，两个化合物，一个是极性的（甲福明二甲双胍，Metformin），另外一个是非极性的（格列本脲，Glyburide）在Si-H 基础上的C18柱上的分离。在上图中流动相为50:50（乙腈：水），反相机理起主要作用，格列本脲的保留比极性化合物甲福明二甲双胍更强。中间的图是流动相比例为80:20（乙腈：水），正相机理强于反正机理，甲福明二甲双胍在格列本脲之后被洗脱（使用LCMS 确认）。当乙腈比例继续提高到85%，正相机理就会起主要作用，强极性的甲福明二甲双胍保留时间会比格列本脲长更多。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121810_288430_1604317_3.jpgANP 3: 第三种分离模式如图5 所示，分析物为两性物质，这类物质多为大分子物质，而且同时含有一个/多个疏水及亲水基团，例如一些多肽或蛋白。在这种情况下，色谱工作者可以根据混合物中分析物的性质选择使用反相还是ANP 模式来进行分离。这一非同一般的能力为实验条件提供了很大的改变空间。图5b 提供的是一个化合物在不同流动相组成比例条件下按反相和正相机理进行保留的结果。这一系列色谱图的结果和图5a 中所预示的结果是一致的。与预期一致的是，当乙腈比例增加时，保留时间由一个最小值，这个最小值就是保留机理从反相变为ANP 的临近点。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/04/201104121811_288431_1604317_3.jpg具有ANP 保留性质的色谱柱: 最近，已经有使用Si-H 表面的固定相色谱柱开始使用（MicroSolv 公司的TYPE-C Silica 柱），这种色谱柱显示出具有我们之前所论述的ANP 性质和分离能力，如图3b，4b 和5b 所示，也同时被文献（5，6）所报道。TYPE-C Silica 色谱柱固定相表面的组成与普通色谱柱的差异如图6 所示（Si-H 键的覆盖率为95%）。目前，与HILIC 柱一样，反反相的机理还不是完全清楚。TYPE-C Silica 这种Si-H 型固定相还具有其他优异性质：可以不需要从流动相中完全去除水就可以进行正

  • 【求助】反相色谱柱流动相的问题！

    1、反相色谱柱的流动相，可以是正己烷/异丙醇吗？流动相的比例组成中，异丙醇的比例可以高于正己烷吗？2、高效液相手性色谱柱的流动相，可以用异丙醇/正己烷吗？或者甲醇/正己烷吗？或者是其他的醇/正己烷吗？

  • 【求助】正相柱与反相柱

    我想问一个问题：是不是一般的样品，在不同的色谱柱上都能出峰？暂且不考虑分离效果，如果在硅胶柱上用甲醇和水作流动相，有峰出现，那么我想改用反相柱，因为硅胶柱用甲醇和水对柱子不好，那么反相柱我无法确定出的峰是否是有效成分，也没有标样，但是在硅胶柱上是只有一个主峰，我在反相柱上出了峰但我不能确定是否是主峰，反相柱的主峰能确定和硅胶柱的峰是一样的吗？

  • 【实战宝典】反相色谱系统切换成正相色谱有哪些需要注意的问题？

    [b][font=宋体]问题描述：高效液相色谱原来使用的是[/font]C[sub]18[/sub][font=宋体]色谱柱，现在由于分析需要，需要换正相纯硅胶色谱柱，流动相也要从甲醇换成异丙醇，应该怎样操作？要注意哪些问题？[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]由于反相和正相色谱系统所使用的流动相差别很大，因此液相色谱系统在从反相向正相色谱转换过程中，需要注意以下问题：[/font][font=宋体]（1）[/font][font=宋体]先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存。用双通将进样器与检测器连接。[/font][font=宋体]（2）[/font][font=宋体]将贮液瓶内装入[/font]300mL[font=宋体]的二次蒸馏水，将流速渐次提高到[/font]2.0mL/min[font=宋体]冲洗系统[/font]1.5h[font=宋体]，注意观察泵压。[/font][font=宋体]（3）[/font][font=宋体]将流速渐次降到[/font]0.0mL/min[font=宋体]，把二次蒸馏水更换为甲醇，将流速渐次提高到[/font]2.0mL/min[font=宋体]冲洗系统[/font]1h[font=宋体]。[/font][font=宋体]（4）[/font][font=宋体]用同样的方法将甲醇更换为异丙醇、四氢呋喃，各冲系统[/font]1h[font=宋体]。[/font][font=宋体]（5）[/font][font=宋体]最后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统[/font]1h[font=宋体]，同时将柱塞杆清洗系统内的[/font]10%[font=宋体]异丙醇更换为流动相，保持[/font]50~60[font=宋体]滴[/font]/[font=宋体]分钟的速度清洗柱塞杆。再将双通更换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好以后就可分析样品了。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

  • 液相色谱柱使用、保养与反相HPLC柱子的清洁和再生

    液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。一、液相色谱柱的安装： 1、液相色谱柱的结构： a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。 柱接头采用低死体积结构，柱接头是两端螺纹组件，一端是为7/16英寸外螺纹，另一端是3／16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7／16英寸外螺纹与1／4英寸柱管(Φ6.35mm)连接，中间放置压坏用于密封。3／16英寸的内螺纹与1／16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接，中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积，在安装色谱柱时，用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底，然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2．5mm长或其他固定尺寸)。 在两端柱接头内，柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网)，用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质，能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。 b、柱填料： 液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。 反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。 常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。 2，色谱柱的安装： a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。 c、 按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，再用扳手继续顺时针拧1／4-1／2圈，切记不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象，请用扳手继续顺时针拧1／4圈，直至不漏液为止。二、液相色谱柱的使用： 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理： a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。 2、流动相的配制：

  • 关于极性改性反相液相色谱柱那些事

    关于极性改性反相液相色谱柱那些事

    常规C18 色谱柱在高水相条件下长时间操作，经常会出现“柱塌陷” 现象，造成分析物的保留时间和分离度骤降。极性改性反相色谱柱由于采用独特的极性改性技术，通过引入极性基团使其表面更容易被水润湿，从而有效地避免了该现象的发生。此外，极性改性反相液相色谱柱在高有机相下表现同样出色，能在LC-MS 测试中加快去溶剂化的过程，从而有效提高LC-MS 的检测灵敏度。极性改性反相液相色谱柱的流动相适用范围可以从100% 水相到100% 有机相，使方法开发更加简单易行。极性改性反相色谱柱是以高纯硅胶为基质，采用独特的极性改性技术生产的色谱柱。这个系列的色谱柱不但保留了传统硅胶基质反相色谱柱的性能，而且又增加了一些新的特性：• 填料表面具有极性基团，适合于高水相条件下的分离• 增强了对亲水性、极性化合物的保留能力• 独特的选择性和优异的分离度• 降低了碱性化合物与残余硅羟基的相互作用，提高了色谱峰的对称性• pH 范围更宽，适合于分析酸、碱化合物迪马科技极性改性反相液相色谱柱有两个系列：一个是Spursil(思博尔)系列，包括Spursil C18 和Spursil C18-EP,二者的结构差异如下http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506021619_548446_1610895_3.jpg一个是Diamonsil Plus 系列，包括Diamonsil Plus C18-A 及 Diamonsil Plus C18-B,Diamonsil Plus C18-B的极性略大约Diamonsil Plus C18-Ahttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506021624_548450_1610895_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506021624_548451_1610895_3.jpg

  • 正相、反相和极性胶联柱使用手册

    注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。向柱内导入碱性溶剂（pH7.0）或酸性溶剂（pH2.0）会导致柱子损坏。在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。未正确地使用不能享受保修待遇。1． 简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。2． 色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。C．对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。

  • 液相色谱正相和反相系统选择

    液相新人，有个疑问请教各位老师，分析极性化合物，为什么不直接采用正相系统或者Hilic色谱柱，而要在反相系统中使用离子对试剂来增强保留？

  • 正相系统与反相系统互换注意事项

    正相系统换反相系统注意事项在液相色谱仪使用过程中，我们经常遇到液相色谱仪用户正反相色谱系统互相现象，但由于使用操作不当，常常不注意间损坏了色谱柱，同时加重了液相色谱系统的污染，导致分析工作出现麻烦，现在将置换工作的基本流程列出，供用户参考：1. 首先用正己烷(硅胶柱)将色谱系统包括正相柱平衡好(保证20分钟内基线平直,无峰出现)；2. 卸掉硅胶柱，封好保存；3. 将进样阀与检测器短路，用异丙醇冲洗色谱系统30分钟(流速1ml/min).在期间空拨进样阀三次；4.换甲醇(或已睛)冲洗系统30分钟(流速2ml/min) ，此期间空拨进样阀三次；5. 安上反相色谱柱，流速调到1ml/min,用甲醇(或已睛)冲洗系统，直到系统平衡；6.进三针标准品,检验面积 ﹑保留时间是否重复,若不重复,继续冲洗直到重复

Instrument.com.cn Copyright©1999- 2023 ，All Rights Reserved版权所有，未经书面授权，页面内容不得以任何形式进行复制