质谱蛋白检测方法

引起过敏的物质称为过敏原,一般为蛋白质类物质。 随着食物过敏患者的增多,以及可能导致过敏性休克甚至死亡等严重后果,已建立了一系列针对过敏原的法规及检测方法,包括核酸法(PCR)和酶联免疫法(ELISA)等。 新兴的质谱法(MS)灵敏度高、假阳性概率低,并具有方法开发快速、运行成本低等优势。葡萄酒酿造过程中需要加入澄清剂去除沉淀物质,使酒液获得长期稳定性。 酪蛋白是常用的澄清剂之一。 酪蛋白是一种来源于牛乳的过敏原,残留在葡萄酒中会对过敏人群产生危害。 但是葡萄酒,特别是红葡萄酒含有大量单宁等鞣质,单宁与蛋白质之间存在多点疏水键和氢键的作用,有很强的蛋白结合能力。 单宁常用作酶抑制剂使酶失活。 单宁极大地抑制了葡萄酒蛋白的提取与酶解,传统蛋白提取方法(超滤、透析、有机溶剂沉淀等)用于葡萄酒时回收率只有 20% ~30%。 因此,关于葡萄酒过敏原质谱分析的报道很少,研究对象也集中在单宁含量很低的白葡萄酒,对于含有大量单宁的红葡萄酒的前处理和质谱分析仍无成熟的策略。已报道的方法如十二烷基硫酸钾(KDS)法、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)法等,提取后蛋白仍需要电泳去除单宁和两性电解质,工作量大,分析通量低,蛋白质的回收率很低。交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)是 PVP 交联后形成的颗粒(约 110 μ m),具有很强的吸附能力。PVPP 竞争性地与单宁结合,释放蛋白,可以有效去除单宁等多酚类物质。本研究利用 PVPP 建立了快速、高效的红葡萄酒蛋白提取与酶解方法,使前处理时间缩短到 2 h 之内,回收率达到 80% 以上。 将本方法与三重四极杆液相色谱鄄串联质谱联用(LC-MS/ MS)结合,分析了红酒中 3 种亚型的酪蛋白,检出限达到 10 μ g/ L,比目前报道的方法提高了至少一个数量级。

随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能.本文利用全新 Q-OT-qIT 三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化. 50 min 有效梯度, 单次实验分别从1 μ g和50 ngHeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和 2877 个非冗余蛋白, 而目前的文献报道至少需要 2~3 h. 同时, 本文考察了 Q-OT-qIT 碎裂模式、检测方法、最大注入时间和自动增益控制等参数对蛋白质组快速分析的影响, 证明了不同采集方法间的互补性, 阐述了不同扫描参数对鉴定结果的影响. 此外, 还讨论了Q-OT-qIT 的并列运行原理和扫描组合模式, 为不同实验目的和样本类型的蛋白质组快速分析奠定了基础.

奶粉中乳铁蛋白的检测方法

本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法，得到各种蛋白的肽谱，比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时的差异，同时借助质谱，评价蛋白酶解产物- 多肽在酸性或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。

本文采用胰蛋白酶酶解蛋白的方法，得到各种蛋白的肽谱，比较几款不同的反相色谱柱在分离蛋白酶解片断时的差异，同时借助质谱，评价蛋白酶解产物- 多肽在酸性或者碱性流动相条件下表现出分离性能的差异。

本实验使用Thermo ScientificTM Q Exactiv HF 超高分质谱仪测试了超高场Orbitrap在DIA分析方面的性能。实验使用1小时梯度，分析仅500ng上样量的Hela细胞总蛋白裂解液，重复三针。结果显示，三针DIA分别定量到27558、27604、27483种肽段和4067、4080、4073种蛋白。谱图库中95%的蛋白都获得了可靠的DIA解析(Q0.01)，灵敏度极高；峰面积CV值20%的肽段占90.3%，重现性极佳。

免疫球蛋白G，即抗体，是免疫系统用来识别和中和病原菌和病毒等异物的Y型大蛋白，在生物学上十分重要。Protein G可以结合哺乳动物IgG，与其蛋白结构上的Fc片段进行特异性识别。因此可以选用月旭Welchrom? Protein G Tanrose 4FF(5mL，00081-12012)来分离纯化牛初乳粉中的IgG蛋白、Welchrom? BC-10重力柱(8.3mL，00051-32022)提高纯度，并采用月旭Xtimate? SEC-300（7.8*300mm，5um）进行色谱检测分析实验结果。

本文展示了应用MALDImini-1 紧凑型基质辅助激光解吸电离数字离子阱质谱（MALDI-DIT）对低浓度牛血清白蛋白（BSA）（上样量100 fmol）进行分子量检测的案例，表明MALDImini-1检测蛋白质分子量的灵敏度较高，结果准确，可以满足m/z 650-70000以内蛋白质分子量检测的要求。

糖蛋白在细胞内部，细胞膜和细胞外均有发现，大部分蛋白质是糖蛋白。对糖蛋白的检测和分析发现，糖蛋白中糖组分的结构和功能具有多样性。糖蛋白中的糖通常是不同种类的，而且是由一些可控数量的单糖组成。糖基化的多样性与细胞周期，细胞分化和发展的状态有关。

乳铁蛋白是一种具有多种生理活性的天然蛋白质，参与调节免疫功能、抗微生物、调节铁吸收、促进肠道细胞增殖分化等多种生理过程。近日，《GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》的发布，规定了食品中乳铁蛋白的提取与检测方法，纳谱分析紧随国标要求，推出了适用于样品前处理的SelectCore Heparin肝素亲和柱和适用于液相色谱分析的ChromCore 300Ǻ C4-T色谱柱，本文依照国标方法进行验证，结果均符合国标要求，为食品中乳铁蛋白的检测提供有效地整体解决方案。适用范围本方法适用于巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料、调制乳粉及乳基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白含量的测定。

本方法快速省时、灵敏度高、样品用量少、操作简单，目前已广泛用于分析检测血浆蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎儿甲种球蛋白、体液、脊髓液、脱氢酶、多肽、核酸及其他生物大分子，为心血管病，肝硬化及某些癌症鉴别诊断提供了可靠的依据，因而已成为医学和临床检验的常规技术。

关于皮肤的发光，最被人们熟知的是由于使用某些含有荧光剂的化妆品而造成的荧光，其实我们的真皮层中的一些物质，本身就可以发出荧光。为什么正常皮肤会发出荧光呢？这是因为胶原蛋白的存在，胶原蛋白是皮肤组织中的结构性蛋白，其数量和健康关系到外表皱纹的生成与皮肤的老化现象，由于胶原蛋白具有自体荧光，根据胶原蛋白的种类或交联状态的不同，真皮层荧光光谱或强度会发生变化[1]，因此可以根据皮肤的荧光光谱来检验胶原蛋白含量及结构，此检测法更具实时性与非侵入性，目前，市面上一些胶原蛋白产品也用这种方法来判断产品对于改变皮肤状态的功效。

大豆分离蛋白是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的种类之一，一般用低温脱溶大豆粕为原料生产，是一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量一般在90%以上，氨基酸种类约有20 种，并含有人体必需氨基酸，不含胆固醇，广泛的应用于食品加工行业。　　为评价大豆分离蛋白的质量，本文介绍大豆分离蛋白中蛋白水解氨基酸的检测方法。

甘露糖是重组人血白蛋白中的杂质，含量很低。本文建立了HPAEC-PAD法测定重组人血白蛋白中甘露糖含量的方法。CarboPac PA20色谱柱可实现甘露糖与其他单糖的分离，安培检测器利用氧化-还原反应原理对甘露糖进行检测，具有灵敏度高、准确性好的特点。

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本次实验基于优化的样品前处理、纳升液相系统与Orbitrap高分辨质谱，建立了迄今为止最高灵敏度的质谱HCPs检测方法，并利用内标蛋白进行准确的相对定量。由于我们没有查到NIS抗体标准品ELISA定量结果，所以未进行进一步对比质谱与ELISA的一致性。接下来将利用此方法对商品化的抗体药物进行HCPs的定性和相对定量，以及考察方法的重现性。

静态光散射与尺寸排阻色谱的联用，在单克隆抗体（mAbs）的纯度检验或下游纯化的快速检测方面来说是一项重要手段。光散射也是在荧光检测之外蛋白多聚体的最敏感检测方法之一。

甘露糖是重组人血白蛋白中的杂质，含量很低。本文建立了HPAEC-PAD法测定重组人血白蛋白中甘露糖含量的方法。CarboPac PA20色谱柱可实现甘露糖与其他单糖的分离，安培检测器利用氧化-还原反应原理对甘露糖进行检测，具有灵敏度高、准确性好的特点。

20 - 40%)。串联质谱多反应监测 (MRM/SRM)定量方法，一直以来就是定量的黄金标准，在小分子定量上早已成熟使用，随着液相色谱和串联质谱技术的提高，越来越多的生蛋白（肽段）定量的意义及出现 MRM 质谱技术平台的缘由化实验室开始大量采用串联质谱技术为基础的蛋白（肽段）定量流程。MRM 肽段定量方法的优点很多，它利用蛋白专属的肽段序列完成定量分析，一次运行可同时分析几十到几百种的蛋白，具备高通量的定量分析能力。特别是 2012 年，方法论领域的权威期刊《Nature Methods》将基于三重四极杆质谱 (QQQ) 平台的 MRM/SRM 定量思路的靶向蛋白质组学 (Targeted proteomics) 技术列为当年的年度方法，确立了目标蛋白定量分析的权威策略。近年来该杂志陆续发表了多篇论文，对 QQQ-MRM/SRM 思路成功应用于目标蛋白定量分析进行了持续报道。随着质谱灵敏度的大幅提高，以大流速常规液相色谱 (LC) 取代纳流液相色谱 (Nano-LC) 所组成的 MRM 肽段定量方法，代表着蛋白定量分析的最高技术标准，极大地促进生物化学及各种新应用快速向前发展，广泛应用在蛋白质组学、生物制药等研究领域，并迅速朝着诸如食品、环境、临床等更宽的应用范围发展。

本文详细向您介绍如何使用日立荧光分光光度计F-7100分析检测皮肤中的胶原蛋白含量。通过测量不同生物样品（包括：三文鱼皮，男性皮肤和女性皮肤），利用三维立体的激发发射光谱，可以清晰辨别出各生物样品种类，并检测其中的胶原蛋白含量。F-7100拥有全球最快扫描、驱动速度和最高灵敏度，三维光谱分析更加方便、快捷，提供追踪监控化学反应过程。超高信噪比的优异功能，可以检测出低至1*10-12mol/L的荧光素，同时，更有利于痕量样品的测量。实验中，搭配主机使用的光纤附件使得样品种类与形状更具灵活性，将光源能量导出并无损伤直接检测肌肤变成可能。

人葡萄球菌蛋白A(SPA)检测试剂盒人葡萄球菌蛋白A(SPA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人葡萄球菌蛋白A(SPA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人葡萄球菌蛋白A(SPA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人葡萄球菌蛋白A(SPA)抗原、生物素化的人葡萄球菌蛋白A(SPA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人葡萄球菌蛋白A(SPA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人广谱细胞角蛋白(P-CK)检测试剂盒人广谱细胞角蛋白(P-CK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人广谱细胞角蛋白(P-CK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人广谱细胞角蛋白(P-CK)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人广谱细胞角蛋白(P-CK)抗原、生物素化的人广谱细胞角蛋白(P-CK)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人广谱细胞角蛋白(P-CK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

岛津基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测疫苗各亚基存在分布与比例，直接得到了样品单电荷离子、二电荷离子的分子量信息，结果与理论一致。分析速度快、仪器维护方便、性能卓越，是蛋白类疫苗亚基分析的有力工具。

乳铁蛋白的检测需要用到C4色谱柱，美正生物始终致力于为食品检测实验室的老师们提供完整的解决方案，我们于2024年5月上线了Robussil C4色谱柱，为乳铁蛋白的高效液相检测又提供了一大助力。

人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗原、生物素化的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体(AGA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)抗原、生物素化的人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

CEM 提出并研发了以特殊氨基酸作为蛋白质表征的iTAGTM的标签技术，iTAGTM的标签技术的核心，是基于用特殊氨基酸作为蛋白质的表征的原理。 iTAGTM的标签技术，直接检测真蛋白质含量，而非总氮含量传统的蛋白测定方法，通过iTAGTM标签技术实现了对真蛋白含量的测定，避免了非蛋白氮添 加物、残留物对于测试结果的影响。使得蛋白测定结果更为科学可信。例如三聚氰胺、尿素、皮革水解蛋白等非法添加物不会造成测定结果虚高。 iTAGTM标签技术是直接测量法，用氨基酸表征蛋白质，根据氨基酸含量反推蛋白质含量，与传统方法有本质的区别。目前凯氏定氮法和杜马斯燃烧定氮法都无法排除非蛋白氮的干扰，无法直接测定真实蛋白质 含量。iTAGTM标签技术彻底超越了用无机氮或单质氮表征蛋白质含量，即凯式定氮法所出现的问题。

人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)检测试剂盒人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)抗原、生物素化的人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗原、生物素化的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度