最近在考虑用ESI源测大分子蛋白的分子量的问题，总结起来有如下：1 用ESI源的质谱（比如常用的ESI-Q-TOF）测大分子完整蛋白（比如：BSA，分子量约64KDa）的分子量有哪些难点？对比测多肽来说有哪些不同的地方（参数设置，以某种质谱为例，毕竟不同的公司离子源的设计不一样）。2 现在用Q-TOF测完整蛋白分子量的比较多（AB,Waters的机器都有人做过），但用离子阱，或者离子阱串联的其它质量分析器很难（有文献报到，但是不多），为什么？大分子很难被离子阱囚禁？还是说大分子在离子阱内聚焦的时候容易被碰碎？大家畅所欲言哈，也欢迎各位兄弟关于这个主题（ESI源测大分子蛋白）提出自己的问题或者见解。
测试目的：通过样品前处理将样品中的大分子量杂质富集，然后做GCMS进行外标法定量现在不知道如何富集样品中的大分子量杂质，我的样品极性都很弱，样品结构是饱和环己烷接烷基 或者饱和环己烷接苯环类的；样品的分子量200~500；样品中有痕量大分子量杂质，分子量500~2000，大分子量杂质可能是样品的寡聚物 或者是塑料制品的寡聚物。现在需要寻找样品前处理方法，将样品中痕量大分子量杂质富集起来。目前已知行业内是将25克样品进行前处理，前处理后做GCMS进行定量，但是不知道前处理方式。看到药典中有用凝胶色谱富集药品中寡聚物或高分子，但是我的分子量相差这么低，大分子量杂质的极性也是很弱的。请大神们多多指教。
测试目的：通过样品前处理将样品中的大分子量杂质富集，然后做GCMS进行外标法定量现在不知道如何富集样品中的大分子量杂质，我的样品极性都很弱，样品结构是饱和环己烷接烷基 或者饱和环己烷接苯环类的；样品的分子量200~500；样品中有痕量大分子量杂质，分子量500~2000，大分子量杂质可能是样品的寡聚物 或者是塑料制品的寡聚物。现在需要寻找样品前处理方法，将样品中痕量大分子量杂质富集起来。目前已知行业内是将25克样品进行前处理，前处理后做GCMS进行定量，但是不知道前处理方式。看到药典中有用凝胶色谱富集药品中寡聚物或高分子，但是我的分子量相差这么低，大分子量杂质的极性也是很弱的。请大神们多多指教。以前注册使用账号忘记了，新注册的账号，积分很少，还请大神笑纳。
以前做的都是小分析化药，想问一下，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]方法建立和大分子样品生物样品提取时，和普通化药有啥区别（用的是岛津-AB4500/5500）大分子分子量大小有要求吗，是不是多大的分子都可以检测。我们的质谱质量轴超过2000Da时容易有偏差，请大神赐教、、、
我的样品是昆虫的血淋巴液，我现在要用液相色谱对处理前后的虫子体内多肽的变化进行初期定性分析。我只要尽量分子量在10KD以内的多肽。看了好多书和文献，都没有明确写出如何做可以去除制定分子量大小以上的蛋白。刚刚在本版的色谱分析样品处理一帖中的PDF文件中发现有说胸腺肽的。但也是一堆步骤之后，就直接说去除了分子量2万以上的大分子蛋白，实在是没明白那一步决定了去除的是2万以上的。新手，什么都不太懂，向各位真心请教了顺便再问一下，固相萃取也就是去除一下杂质吧？凝胶柱可以得到想要的分子量范围的样品么？除了凝胶柱，还有什么方法么？还有一点，透析袋，只能是截留住大分子物质吧，出来的小分子物质是难以回收的吧？因为我要是实际是小分子的多肽，通常是1--10KD以内。
极性小，大分子不易气化的物质，应该用什么质谱测试。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]没法离子化，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]没法气化[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909181107065459_6459_2084221_3.png[/img]
我的样品中最大分子量在1500以下，最小分子量在200左右，现用2根WATERS STYRAGEL HR0.5 (分子量范围0-1000)和1根WATERS STYRAGEL HR1 (分子量范围100-5000) 柱子串联做，四氢呋喃溶样，感觉峰与峰之间还是分得不大好，请问这样低分子量的样品还能用什么厂家的凝胶色谱柱分离比较好？
[color=#444444]我想用液相分开两个大分子的聚合物，分子量都在40000左右，不同之处是其中一个加了四个小分子，试了十来根普通的柱子，没有效果，请各位大侠指教分离聚合物的色谱柱有哪些？很急， 谢谢！[/color]
[align=center][b]电喷雾质谱（ESI-HRMS）在生物大分子检测中的应用[/b][/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]GLP 耿建瑞[/align][align=center] [/align]电喷雾离子源（ESI）的工作原理如图1.7所示，雾化器的喷针加有高电压，液态分析物质低速通过喷针时，在高压电场的作用下，形成泰勒锥，当泰勒锥表面张力小于静电斥力时，形成雾状液滴，含同种电荷的的液滴在高压电场的作用下向毛细管移动，高温氮气干燥气反向吹动，使液滴不断挥发，直至产生脱溶剂，分析物以气态离子进入毛细管。[align=center][img=,660,288]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709081539_01_2904018_3.png[/img] [/align][align=center]图1. 电喷雾离子源（ESI）原理示意图[/align]ESI是一种“软电离技术”，在样品离子化的过程中，没有热汽化的过程，没有离子碎片的产生，能够保持样品丰度完整性；可以准确测出分子质量（mw），从而直观的区分出混合物中的不同组分；另外，ESI可以产生多电荷峰，而质谱测定的是质荷比，大大拓宽了仪器可检测的分子量范围，非常适合大分子化合物以及非共价复合物的分析。ESI也可用于核酸以及核酸与配体的相互作用的分析，与蛋白质的检测不同的是核酸的检测一般采用负离子模式。因为蛋白质含有较多的含氮碱基，在酸性及中性溶液中很容易质子化，而核酸含有磷酸基团，在溶液中容易失去质子，所以核酸的检测一般采用负离子模式。ESI离子源可以产生多电荷离子峰，使得质荷比大大降低，从而扩展了质谱的检测范围，可以检测蛋白质、核酸等大分子。但是同一化合物会产生多种电荷的质谱峰，不同的离子峰必须归属到能够产生该多电荷离子峰的离子，这是一个很复杂的过程。对于低分辨率的质谱，当质谱产生的多电荷质谱峰电荷较少时，每个质谱峰所带的电荷数可通同一离子的带不同电荷的离子峰的比值来确定。但是对于更复杂的样品如蛋白质、DNA等，由于其所含成分多，碎片离子也多多，生成的多电荷质谱情况很复杂——峰数目多，且会有峰折叠，掩盖等情况，其电荷数数和质量数的的确定就很困难。对于复杂样品的检测，提高质谱的分辨率则非常重要，对于一簇多电荷离子峰，我们可以通过相邻两个同位素峰的间距很容易的得到该离子峰所带电荷数，从而很计算出生成该多电荷峰的离子的分子量。但是生物样品成分复杂，即使一次小小的实验也可能会产生成千上万的质谱数据。这就需要对这些多点和质谱数据进行解卷积，对于质谱来说，“解卷积（Deconvolution）”是指利用电荷只能是整数的特点，将同一分子量的不同质荷比的峰按一定的算法组合到一起。科学家们开发出各种各样的算法及软件用于质谱数据的自动解卷积。但是各个仪器公司的解卷积软件价格昂贵，很多实验室，虽然可以利用ESI-HRMS可以得到大量的质谱数据，但是苦于无法解卷积，导致实验数据无法进行分析。在此，介绍由Horn等人提出一种基于高分辨数据的解卷积算法THRASH[sup][[/sup][url=#_ENREF_65][sup]65[/sup][/url][sup]][/sup]。THRASH的基本原理如图1.8：1，使用者设定质荷比m/z范围，质谱峰可能带电荷数目，信噪比阈值等信息。2，程序自动将高于指定信噪比阈值的质谱峰挑出。3，按照自相关算法[sup][[/sup][url=#_ENREF_66][sup]66[/sup][/url][sup]][/sup]计算出质谱峰的电荷数，并计算出平均分子质量。用第2步得到的平均分子质量结合Mercury算法 得出质谱峰簇的理论轮廓图[sup][[/sup][url=#_ENREF_67][sup]67[/sup][/url][sup]][/sup]，4，将理论轮廓图与质谱中实际轮廓图对比，得到一个匹配分数（fit score），5，将高于fit score的质谱峰删掉，低于fit score的质谱峰重复第3步骤。[align=center][img=,655,494]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709081539_02_2904018_3.png[/img] [/align][align=center]图2高分辨质谱数据解卷积原理[/align]Navdeep等人基于THRASH开发的开源软件Decon2LS，对质谱数据进行解卷积可以生成电荷数（charge）、单一同位素峰（monoisotopic mass）、同位素最高丰度离子峰（most abundant isotope intensity）、平均分子量（average mass）以及对应的质谱丰度（abundance）等信息，为ESI-HRMS研究蛋白质、DNA及其与小分子化合物的相互作用的分析提供了详细的数据。
向大家请教个问题，做生物大分子如菌种代谢物（分子量约2万到3万）的核磁共振结构解析，是不是需要至少500MHz的磁场，做的过程中及解谱与化学上的核磁有些什么差异？多谢高手指点。
大分子的有机酸可以进质谱吗？对柱子和质谱有没有损害？
[b][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【序号】：3【作者】： 何扬芳【题名】：应用质谱技术提升传统中药的质量控制和生物大分子药物的结构表征能力[/back][/color][/font][/b][align=left][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【期刊】：吉林大学 博士论文[/back][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【年、卷、期、起止页码】：2020[/back][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【全文链接】：[/back][/color][/font][url=https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C447WN1SO36whLpCgh0R0Z-iVBgRpfJBcb4JAybTo8M4ljH5Ce6ATfKqWkZZyuKToFWj_RADn7Nr0YNPrffgey8c&uniplatform=NZKPT]应用质谱技术提升传统中药的质量控制和生物大分子药物的结构表征能力 - 中国知网 (cnki.net)[/url][/align][align=left] [/align]
在gcms能出锋 , 现在已知香料香精最大分子量多少gc不出锋的香料香精多吗 ？
想测水溶液中的小分子有机物，但是溶液里面还含有大分子量（估计10W）的水溶性多糖。所以不知道能不能直接往C18柱中进样？如果不行，那么怎么分离？我用乙醇把多糖沉淀不出来，可以用萃取的方法吗？是不是萃取完后要把溶剂蒸发了，再把小分子有机物溶到流动相里面测？具体如何进行萃取操作？本人第一次做色谱，很多都不懂，请指教。
怎样纯化大分子蛋白 26kd不需要量很大。可以打质谱就行。
生物大分子材料，主要是指：蛋白质类、多糖类、组织细胞、血液及其替代品等大分子量、大尺寸/大体积样品。蛋白质集聚体的研究，以及其它生物大分子材料的分离与分析，是非对称流动场AF4MT的重要应用领域。postnova公司的中温型流动场AF4MT，主要应用之一就是生物大分子材料，特别是利用其优异的半导体制冷的柱箱对场流分离通道盒进行低于室温、高于0摄氏度的精确控温，实现蛋白质样品的高效分离，取得了很好的应用效果。再结合多角激光散射检测器、静态/动态激光粒度仪和生物质谱仪等在线定性检测技术，可以获得生物大分子材料的大量构型信息。也可结合馏分收集器，将样品组分收集下来，再进行其它分析检测，如：MALDI-TOF、NMR、AMF等等。附件的文件，介绍了AF4MT 对蛋白质混合物的分离并结合光散射检测器对其进行分析。近年，postnova公司又推出了中空纤维流动场 Hollow Fiber Flow FFF，简称HF5，这项技术主要针对生物大分子材料，分离通道是一次性使用的，具有很好的分离效果。
roesy和noesy分别适合测试多大分子量的样品？
我们的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]源是ESI源，它的应用范围很广，能测定小分子的化合物，也能测定蛋白质等大分子化合物，与三重四级杆链接，能不能测大分子化合物呀，我们的仪器是安捷伦的6460，这台设备的扫描范围是5到3000，是不是就没法测定大分子化合物?
SymmetryPrep C18 可分析哪些物质？对大分子量的物质有效吗？
请问这类核磁一般要扫描测试多长时间呢？听说通常解出一个生物大分子的结构所需要时间是2个多月？这部分的时间大部分都花在解谱上么？
请问做生物大分子，如多肽和蛋白，一般浓度为多少比较合适？是否需要用H2O/D2O=90%:10%做溶剂？D2O不会把活泼H交换掉么？是否需要做与生理条件类似的缓冲溶液？二维COSY/TOCSY/NOESY或ROESY谱图怎么压水峰？一般做NOESY的时候混和时间取多少比较合适？
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=154964]生物大分子的共振光散射光谱[/url]
核酸大分子药物在国外最近几年有了巨大的发展，而国内也在热起来，有兴趣在大分子药物分析的朋友可以下载看看
目前，高分子碳水化合物正被广泛应用于食品，啤酒，制药等行业，如香菇多糖，羧甲基纤维素，透明质酸，半乳甘露聚糖等，但对于不同分子量的碳水化合物来说，它们的作用都是不同的，因此对于准确测定高分子碳水化合物的分子量就显的尤为重要。 目前，绝大数公司，高校和科研院所都使用凝胶渗透色谱（GPC）法来测定高分子物质分子量，这种方法相对于光散射法来说具有操作简单，经济快速等优点，因此在各行业得到广泛的使用。对于GPC法来说，在测定待测样品时，需要选择标准品来做标准曲线，因此对于准确测定高分子碳水化合物的分子量来说，标准品的正确选择就显得尤为重要。Pullulan和Dextran是两种从微生物中提取的多糖，主要被用于分子量的测定，但是通过研究我们发现这两种多糖在水溶液中的构象为一个球状线团，他们的MH系数α为0.5左右，而上面我们提到的香菇多糖，羧甲基纤维素，透明质酸，半乳甘露聚糖等高分子物质在水溶液中的结构为扩展性构象，因此当我们用Pullulan和Dextran这两种具有线团构象的标准品来测定这些具有扩展性链结构的大分子物质分子量时，是不是可以准确测定它们的分子量呢？为了进行对比研究，我们选择了另一种分子量测定标准品燕麦β葡聚糖（PS-OBG，来源于百特纯大分子有限公司），该标准品是从燕麦细胞壁中提取的，结构单元为葡萄糖，与Pullulan和Dextran相同，但它是由β-1，4和β-1，3键连接而成的线性结构，在水溶液中呈现扩展性构象，MH系数α为0.71.实验材料：待测样品：香菇多糖（PLE），羧甲基纤维素(CMC)，半乳甘露聚糖(GG)葡聚糖标准品套盒：Shodex P-82，百特纯通用分子量套盒（PS-OBG-GMw）[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812160948_124375_1672347_3.jpg[/img]实验方法：GPC法和光散射(LLS)法实验结果：图一：P-82和PS-OBG-Mw的GPC图谱，水溶液中构象，MH系数对比图[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/12/200812160949_124377_1672347_3.jpg[/img]表一：三种不同物质分子量的测定结果SamplesMw1Mw2Mw3PLE707k1160k790kGG122k331k112kCMC130k354k148kMw1 : 用PS-OBG-GMw 套盒测定值Mw2： 用Pullulan-82 套盒测定值Mw3 : 用光散射测定值从表一中我们可以发现用P-82来测定这些具有扩展性链结构的大分子物质时，会导致明显的过高测定，之所以会出现这样的情况，是因为对于同样分子量的标准品来说，球形线团结构在GPC柱子中流出时间要比扩展性结构的流出时间长，而用PS-OBG-Mw来测定的话，测定值则非常接近光散射测定值，因此在对于大多数植物及真菌类多糖和具有扩展性链结构的大分子物质来说，用PS-OBG来测定是非常适合的。
大家都用什么类型的色谱柱来分离分析蛋白质、多肽等生物大分子物质？国内越来越多的人在该领域进行研究，我也希望在生物大分子物质分离纯化方面能够与大家进行交流，请各位多多指教。 我公司代理销售专门用于分离生物大分子的高质量的离子交换柱与体积排阻柱，如有需要资料，请留下联系方式或与我联系。赛分销售与技术中心，0755-26031977 谭先生，sepax@126.com。 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=9650]Sepax Proteomix离子交换色谱柱[/url][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/images/upfile/2005115103055.pdf]Sepax Nanofilm SEC 体积排阻色谱柱[/url]
生物大分子分离【分享】[~144928~]
[color=#444444]如题，加标样品中，m/z=178的菲和蒽，菲出峰较好，蒽的峰完全丢失；苊和d10-苊也完全没有峰，后面大分子量的252、276、278峰也全部丢失。已知不是仪器的问题，因为标准样品出峰情况正常。而将混合标准样品直接加入到200ml二氯甲烷中再旋转蒸发至5ml左右，直接氮吹定容（没有吹干）后进样分析，却出现上述丢峰现象。问了很多人，都不知道咋回事，[/color]
将来能否将（三维）核磁的谱图信息直接高效的转化为生物大分子的三维结构？
请教大分子化合物首选什么柱子？
Sepax Nanofilm SEC创新系列的尺寸排阻色谱柱的填料是以刚性的高纯度球型硅胶为基质，利用独特的表面修饰技术在表面通过共价化学键合亲水性基团而成。 Sepax Nanofilm SEC系列色谱柱的填料具有高性能尺寸排阻色谱所必需的性能，即低吸附性与均匀的孔径分布，批与批之间具有非常好的重现性，其pH适用范围为2-8.5，适用于分离蛋白质和多肽类生物大分子样品以及天然与合成高分子物质。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=19457]Sepax Nanofilm SEC凝胶过滤色谱柱(排阻色谱）[/url]
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