色谱梯度洗脱方法

[color=#444444]请教一个HPLC的梯度洗脱问题：缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液，pH=4.90。[/color][color=#444444]原来的方法[/color][color=#444444]0 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]10 min 36% 甲醇 64% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]15 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]原来可以检测出五种物质，出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min[/color][color=#444444]但是现在我只想检测两种物质（2.67 和5.46两个峰），虽然可以直接跑完这个梯度，但是比较费时间，希望调整后可以节省点分析时间。另外峰谱图后半部分基线漂移比较严重，所以想着调整本方法～[/color][color=#444444]请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢？有一个不明白的问题是怎么调整有机相比例可以避免后面不需要的几种物质残留在色谱柱中？[/color]

大家好！在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中，为了尽快把各成分都洗脱出来，我们会使用梯度洗脱的方式进行洗脱。然而，为了抑制基线受到梯度影响而漂移，也为了追求好的信噪比，我们会加一定抑制电流于抑制器。不过，抑制电流的大小选择是个技术活。太大，会损坏抑制器，仪器也会自动停止 报错。太小，就起不到很好的作用。尤其在梯度差距很大时，这种影响特别明显。大家在日常使用中，有什么好的方法来设置抑制电流呢？我用的ADES 600抑制器

主题：液相色谱进阶讲座之梯度洗脱简介：通过实例详细介绍“梯度洗脱”的意义、应用领域、操作方法以及优化，相信能够使广大网友的液相色谱技术有一些崭新的提高讲座办法：在讲座时间内，由主讲人上传资料；讲座时间结束，网友可以参与讨论提问等；讲座内容长期保存，网友可在任何时间进行浏览或下载讲座时间：2010-7-8,14:30~16:00主讲人：Godblesschina欢迎各位朋友届时参与！

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的梯度洗脱和等度洗脱都是用在什么操作中呢？梯度洗脱有什么优势呢？

在液相色谱分析中梯度洗脱与等度洗脱差异？

能得出梯度曲线是否证明液相色谱仪能做梯度洗脱！！我很想知道！！请知道的朋友尽快和我联系！！谢谢！！

请问各位大侠，梯度洗脱的作用是什么？怎样建立梯度洗脱的方法？对于一个目标物适合用梯度洗脱的方法吗？

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。 梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。 两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。 在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视： ①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。 ②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。 ③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。 ④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

各位使用液相色谱的同行，你们做试验时一般用得到梯度洗脱吗？如有用到，都用什么方法确定梯度洗脱的模式？

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

各位老师好：我在做一个混合样的分离，用的是waters的紫外液相色谱，利用三段的梯度洗脱进行分离，每一个梯度的变化都很大，是阶梯状的洗脱。现在我在做定量分析，打算利用一个内标物进行内标（因为我走的时间较长，如果每次都打外标不现实）。积分这块遇上了麻烦：我的内标物是在第一个基线出的，三段梯度上都有我要的物质，我该如何积分？我这种肯定是需要手动积分，每段上我都需要重新设置阈值与峰宽进行积分，也就是我会有三个积分方法，那么问题就来了，我的内标物需要用哪种方法积分，是利用第一段的方法积出来内标物的面积，然后每段上的物质进行比对，还是利用每段上的方法重新积一个对应的内标峰进行比对。还有一个问题是，我每次进样，方法需要重新设置吗？我的谱图基本如图，内标物出峰在10min（图中未显示）。请教各位老师，如何才能减小误差。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/12/202012040008067914_2001_5086198_3.png[/img]

HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

我想请问各位前辈，用离子色谱梯度洗脱方式需不需要更改RFC的设置，我觉得在方法里面改没有效果啊！求助求助！！！

请教各位大峡梯度洗脱是怎么回事，最近想买一台液相色谱，实验室本来只有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]，所以对液相不太了解．如果想买一台液相色谱，能做梯度洗脱，对设备有什么要求，是不是一定需要两台泵．

主题：液相色谱进阶讲座之梯度洗脱简介：通过实例详细介绍“梯度洗脱”的意义、应用领域、操作方法以及优化，相信能够使广大网友的液相色谱技术有一些崭新的提高欢迎参与交流和讨论

[color=#444444]同样的色谱条件，同样的洗脱梯度，做同一个物质时，原来25-30min之间没有大包，现在出现大包，洗脱流动相，A，B均为不同比例的盐和乙腈，前25分钟完全由A相转换为B相，25-26min完全由B相转换为A相，此时出现大包。以前也是这个梯度，但是没有大包，求大家帮忙分析一下原因。[/color]

戴安的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]要靠自动淋洗液发生器才能进行梯度洗脱（除了ICS-3000,太贵了），万通的能不能直接靠泵进行梯度洗脱？

分析型的hplc分析待纯化物质，A0.1%甲酸水，B甲醇。我先用甲醇从5%到95%跑30min，然后根据目标组分的出峰时间算出其对应的甲醇洗脱浓度。然后根据waters梯度转化器，将梯度方法换算转移到制备色谱上。按理说，在制备色谱上当甲醇浓度达到分析色谱上算得的那个浓度时该物质会被洗脱下来，但结果却是那个物质并不是在这个对应的甲醇浓度下洗脱下来，这是为什么呢。

高效液相色谱梯度洗脱时应该注意的问题?

安捷伦1260液相色谱从哪设梯度洗脱

依利特P200II高效液相色谱仪可以做梯度洗脱吗?

[b][font=宋体][back=white]解答：[/back][/font][/b][font=宋体][back=white]在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：[/back][/font][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围后就不会互溶。例如：乙腈和[/font]1 mol/L[font=宋体]的醋酸铵（[/font]pH=5.16[font=宋体]）做梯度洗脱，乙腈含量超过[/font]70%[font=宋体]时就会出现不溶。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头上后会被强的溶剂洗脱出来，用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止溶剂混合时产生气泡。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）混合溶剂的黏度常随其组成而变化，因此在梯度洗脱时常会出现压力变化，例如纯水或甲醇的黏度都比较小，但是当二者以相近的比例混合时黏度会增大很多（甲醇[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]水体积比为[/font]1[font=宋体]：[/font]1[font=宋体]时压力最大），因此要防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力。[/font][font=宋体]（[/font]4[font=宋体]）每次梯度洗脱程序运行完之后必须对色谱柱进行彻底平衡，使其恢复到初始的状态，需让[/font]10~30[font=宋体]倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相和初始流动相达到完全平衡，平衡不好会影响下一针样品的分离度和保留时间。[/font][font=宋体]（[/font]5[font=宋体]）注意梯度洗脱用水的有机物残留。往往在等度洗脱时用的水，在梯度洗脱时发生问题（鬼峰）。这是因为在梯度过程中，水占的比例很高时的流动相洗脱能力很低，此时水中的有机物残留就被色谱柱吸附并浓缩，等到强溶剂占高比例时，浓缩的有机物被高洗脱能力的流动相洗脱而流出色谱柱，并成为一个色谱峰，从而干扰分析。[/font][font=宋体]（[/font]6[font=宋体]）梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

我是使用液相色谱的菜鸟，现在遇到了一点点问题，请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定，一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=75：25，在10分钟左右出峰，流速1ml/min；另一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=5:95，在6分钟左右出峰，流速0.5ml/min，如果我想同时测定，可以用梯度洗脱吗？如果可以的话，流动相比例过程中的变化改怎么设置，请各位大神赐教，谢谢。

[color=#444444]请教一个HPLC的梯度洗脱问题：缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液，pH=4.90。[/color][color=#444444]原来的方法[/color][color=#444444]0 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]10 min 36% 甲醇 64% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]15 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]原来可以检测出五种物质，出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min[/color][color=#444444]但是现在我只想检测两种物质（2.67 和5.46两个峰）～[/color][color=#444444]请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢？[/color]

我是使用液相色谱的菜鸟，现在遇到了一点点问题，请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定，一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=75：25，在10分钟左右出峰，流速1ml/min；另一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=5:95，在6分钟左右出峰，流速0.5ml/min，如果我想同时测定，可以用梯度洗脱吗？如果可以的话，流动相比例过程中的变化改怎么设置，请各位大神赐教，谢谢。

最近在看一本色谱书，里面有一句话不是很明白是关于梯度洗脱的书中这样说到：在梯度洗脱中，弱保留组分在弱流动相中首先离开柱，而强保留组分在强流动相中最后离开柱。这句话具体的应该怎么理解啊？

有什么办法能让单泵液相色谱进行梯度洗脱?大家讨论下[em52] 我想到一个办法,不知道行不行但是现在还没想好[em53]

本人最近要用高效液相色谱分离多种有机酸，但是查看各种文献都没有看到洗脱梯度，只知道要用到水相的比例很高。望各位前辈指教下一般分离物质时，洗脱梯度是怎么确定的，也可以以有机酸为例说明下。

[color=#444444]请问0.02M磷酸二氢钾和甲醇这样比例和时间梯度洗脱可以吗[/color][color=#444444]时间 0.02M磷酸二氢钾 甲醇[/color][color=#444444]0 99 1[/color][color=#444444]15 0 100[/color][color=#444444]15.1 99 1[/color][color=#444444]经过0.1分钟从纯甲醇变为0.02M磷酸盐溶液可以吗？ 柱子为SB-C8色谱柱[/color]