质谱条件优化方法

液相色谱-串联质谱条件测定水果中的多农药残留方法优化本法建立了水果多种农药残留量的快速、简便、准确的测定方法，通过对样品前处理方法、仪器检测方法的考察优化，建立液相色谱-串联质谱检测方法。其中以日本制定的“肯定列表”中的“一律标准”最为严格，限量为 0.01mg/kg，而我国的残留限量标准还不够完善，很多农药还没有制定限量标准，其方法的测定低限（定量限）能达到 0.01mg/kg的要求。1、液相色谱条件考察：在方法建立过程中对液相色谱条件进行了考察，主要考察了色谱柱、流动相等。在色谱柱选择时，比较了BEH C18、 HSS T3、 Zorbax Eclipse Plus C18等色谱柱，发现HSS T3色谱柱对甲胺磷、乙酰甲胺磷等大极性农药的色谱保留效果较好，所以选择HSS T3色谱柱进行下一步的研究。在流动相考察时，发现在流动相中加入0.1%的甲酸可以改善多菌灵、噻菌灵等农药的分离，而且加入甲酸可以在电喷雾正离子（ ESI+）模式电离时提供H+，提高电离效果，所以选择在流动相中加入0.1%的甲酸，比较了在水相和有机相中均加入0.1%的甲酸、仅在水相中加入0.1%的甲酸两种情况，发现色谱分离及质谱电离无显著差别，为简化操作和便于使用，选择仅在水相中加入0.1%的甲酸。流动相的有机相选择时考察了甲醇、甲醇-乙腈（ 1+1， V/V）、乙腈三种情况，发现采用乙腈时色谱柱的柱压较低，色谱分离也较好，但毒死蜱、辛硫磷、特丁硫磷、敌敌畏等常用有机磷农药的质谱响应值低、重现性差，而选用甲醇时可以显著提高这些化合物的质谱响应及重现性，综合考虑后选择甲醇为流动相的有机相。由于此次分析的多农药的化学性质差别较大，从高极性到低极性均有分布，所以色谱分离时需要采用梯度洗脱模式，通过实验考察，最终确的液相色谱条件如下:a）色谱柱： HSS T3柱，长100 mm，内径2.1 mm，粒径1.8 μm，或相当者； b) 流动相：甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱，参见表 1。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/09/202009211516176216_1219_2166779_3.png!w607x264.jpgc) 柱温： 35 ºC

论坛里技术性帖子较少，近期打算写一系列的帖子，关于TSQ[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]的标准操作，大家喜欢的话，我会继续的。今天先谈谈TSQ质谱仪化合物条件优化标准操作规程。注：转载请注明来源及作者，谢谢！一、优化待测化合物ESI质谱条件1 样品导入方式的建立1.1 选择适当长度的Peek管将两端通过接头分别与液相系统和切换阀2号口相连。1.2 选择适当长度Teflon管将一端通过接头与切换阀1号口相连，并将另一端置于废液瓶中。1.3 选择适当长度的Peek管将一端通过接头与切换阀3号口相连，另一端通过三通分别与离子源和样品转移毛细管相连。1.4 将200 uL左右样品溶液吸入250 uL进样注射器中。1.5 将进样注射器通过一个接头和一个二通与样品转移毛细管另一端相连。1.6 按住注射泵黑色释放钮将注射泵手柄升高。1.7 将进样注射器小心置于支架上并将注射泵手柄下移至进样注射器活塞柄顶端。2. 质谱条件优化步骤2.1 在Tune Master界面点击On/Standby激活质谱仪。2.2 选择离子极性模式（正离子或负离子），如需进行正负离子切换，将将Spray Voltage调至0后操作。2.3 进入Compound Optimization Workspace。2.4 在Define Scan窗口选择Q1MS扫描模式和Full Scan扫描类型。2.5 在Optimize Compound Dependent Devices窗口设置下列参数： Spray Voltage设为3500 V Sheath Gas Pressure设为30 arb Aux Gas Pressure设为10 arbCapillary Temperature设为350℃Source CID设为0 V2.6 激活注射泵以5 uL/min流速将进样注射器中的样品溶液导入质谱仪。2.7 激活液相色谱泵选择适当流速将流动相导入质谱仪，观察到待测化合物的准分子离子峰峰强度在10的6次方左右，否则增大进样流速或选用浓度更高的待测化合物溶液（样品浓度一般建议1-10ug/mL,建议用甲醇或乙腈溶解）。2.8 在Compound Optimization界面显示Single Sample窗口，选择MS Only优化模式和Syringe Pump Infusion入口类型选项。2.9 优化Tube Lens Offset、Spray Voltage、Sheath Gas Pressure、Aux Gas Pressure和Source CID获得待测化合物稳定的准分子离子峰。2.10记录并保存准分子离子质谱图。2.11选择MS+MS/MS优化模式设置Parent Mass、Charge State和Num Product对子离子进行优化，优化前完成下列设置： 将Source CID设为0 V 将Collision Pressure设为1.5 mTorr将Quad MS/MS Bias设为-1.0 V2.12接受Collision Energy优化结果，并将Source CID设为优化值（由2.9得到）。2.13记录并保存子离子全扫描质谱图。2.14保存Tune Method文件。3. 注意事项3.1 待测化合物溶液浓度为1-10ug/mL3.2 改变流动相比例和流速后应重新进行对Sheath Gas Pressure和Aux Gas Pressure进行优化3.3 手动优化Capillary Temperature3.4 点击Start开始自动优化程序，优化结束时点击Accept接受优化结果，或者点击Undo后再点击Accept保持优化前的仪器配置3.5 仪器常用参数设置见下表。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/05/200605240732_18885_1237095_3.jpg[/img]

安捷伦1290-QQQ6430上优化涕灭威母离子 208 ：1.做Scan时找不到母离子，这时候我们需要把毛细管电压正模式和负模式都降到1000去，这样做全扫找到了母离子。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603051303_586080_2779413_3.png这两个值改为10002.锁定母离子后就去找子离子这时候需要增加响应，所以把毛细管电压调回4000 35003.找子离子，裂解电压默认值一般是135，但因为涕灭威比较容易碎裂，所以我们裂解电压设置为 20 30 50 60 就可以了，这模式中可以添加四个扫描范围。4.顺利找到涕灭威的两个子离子 116.1 89.1 ，满足四分要求。5.接着优化它的裂解电压 碰撞能量 加速电压。结果 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/03/201603051310_586082_2779413_3.png裂解电压和能量都和其它物质差别大，116.1的碰撞能量竟然是0的时候响应最高。1290-QQQ6490的优化情况这个优化流程和上面一样，但是6490的参数比较多 通过优化具体参数如下：干燥器温度150 流速18L/min 鞘气温度350 鞘气流速12L/min 毛细管电压+3500 , -2000喷嘴电压+ 500. -1000 分子漏斗 +高端70 低端40 ，- 高端90低端60 这里的分子漏斗电压只适合做涕灭威一个时得到响应更高 检测浓度0.1ng/mL完全无压力。如果需要同时和其它物质一起检测 分子漏斗只要改回 +高端150 低端60 ，即可。但是EMV+电压需要加200最后优化结果 母离子 208.2 子离子89.1 115.8 碰撞能量分别是10和0，裂解电压都为380（仪器不可调），加速电压为5总结下:6430毛细管电压可以影响响应，但是太高时可能找不到母离子，原因分析物质容易碎裂，需要降低电压才能找到母离子。6490设计和6430不一样，有分子漏斗需要优化，对于易碎裂的物质需要把电压降低。而且碰撞能量是0，优化时，需要注意。如你们喜欢，可以加入我们的小团队。 名为：shooter 团队里面有大学的教授（帅气的老外教授（我们的最终决策人）），各个地方的检验人员，和对液相感兴趣的年轻朋友。我们团队现在的进程是讨论液相色谱的条件，通过我们来把一些在液相上分析时间长的旧方法改为快速高效的方法（必须要成为实例）。 希望你们的加入，具体方法在论坛留言给我，我会尽快回复你们。 我们需要的你是能和我们融合为一个Team！

安普SPE方法开发及条件优化课程今天在广州开课，有没有版友参加呀[img=,595,714]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711090902_01_2946960_3.jpg!w595x714.jpg[/img]

药典方法红花含量测定使用两种方法分别测定羟基红花黄色素A和山奈素两种成分含量色谱条件如下：[img=,477,96]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/12/202012101605485344_5670_2204446_3.png!w477x96.jpg[/img]如果用一种流动相同时测定两个组分，可分别采集403nm,367nm两个通道信号。色谱条件如何优化？

[align=left][font='times new roman'][size=16px]三重串联四极杆[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url] /质谱联用测定蔬菜和茶叶中 49 种农药残留[/size][/font][size=16px]的方法优化[/size][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]以前样品经提取、净化后，用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]进行定性定量分析。或者用GC-FPD检测器测定有机磷，GC-NPD检测器测定氨基甲酸酯和有机磷，用GC-ECD检测器测定有机氯和拟除虫菊酯。一般需分组，如无[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]，对检出峰重叠的农药要求双柱定性。GC和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GC-MS[/color][/url]检出限一般为几个到几十个μg/kg。[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]三重串联四极杆QQQ :第一质量分析器（Q1、四极杆1）选择某一质核比的离子进入碰撞池（Q2、六极杆2），被选择的离子在池里与碰撞气体（氮气）碰撞，经过碰撞诱导解离（CID）产生的子离子（碎片）由第二个质量分析器（Q3、四极杆3）进行扫描分析。[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]单四极杆质谱中，离子监测模式（SIM）只监测保留时间范围内的少数几个离子，和全扫描模式有相同的杂质干扰，GC-QQQ可以大幅度降低甚至消解影响SIM方法准确度和检测限的基质干扰， MRM的检测是基于次级“碎片离子”，由第一个四极杆Q1产生的分析物的母离子在Q2经六级杆碰撞解离而产生，与SIM比有同样的选择性，但能保证至少有一个是由母离子特有而非干扰物产生的，基线漂移明显减少。在Q1的质谱过滤过程中，样品中所有低质荷比的离子都被过滤掉，产生的唯一“碎片离子”在“零噪声”中进行检测，得到“干净”的色谱图，对复杂的基体样品也能很好的定量。使得MRM检测限更低。图[/size][/font][size=16px]1[/size][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][size=16px]2[/size][font='times new roman'][size=16px]为蔬菜和茶叶色谱图。茶叶提取物是最复杂基体样品之一，然而GC/MS/MS的提取离子流图却很“干净”，对复杂的基体样品也能很好的定量。[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310310826220157_7469_4033901_3.png[/img][/align][font='times new roman'][size=12px]图[/size][/font][size=12px]1[/size][font='times new roman'][size=12px] 含有10ppb β-六六六的蔬菜加标样品GC/MS/MS提取离子流图和MRM transition离子图[/size][/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310310826222061_4447_4033901_3.png[/img][font='times new roman'][size=12px]图[/size][/font][size=12px]2[/size][font='times new roman'][size=12px] 含有10ppb杀螟硫磷绿茶样品GC/MS/MS提取离子流图和MRM transition离子图[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]质谱条件的优化 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为获得最佳的质谱条件保证农药定性、定量的准确性，对分析物的母离子、子离子以及碰撞能量等一系列质谱参数进行优化。[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]首先进行全扫描，得到母离子和保留时间。取适宜浓度的标液在扫描范围50D~600D进行。母离子选择应选高的质量数（定性）、高的丰度（灵敏度）。第二步做产物离子扫描（production scan）选择子离子和碰撞能量(collision energy)。分时间段，5~40 V范围内，以5V为跨度，对已选母离子进行碰撞能量的优化，子离子必须有足够的丰度，可以用于痕量分析，灵敏度好，选择性要高，不要选择会被干扰的子离子，根据欧盟法规，至少需要一个母离子和两个子离子以满足4点鉴定法。见图[/size][/font][size=16px]3[/size][font='times new roman'][size=16px]~[/size][/font][size=16px]5[/size][font='times new roman'][size=16px]。第三步多反应监测MRM的运用。[/size][/font][/align][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][font='times new roman'][size=12px]图[/size][/font][size=12px]3[/size][font='times new roman'][size=12px] [/size][/font][font='times new roman'][size=12px]母离子在不同的碰撞能量（5~20V）下的碎片[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]图[/size][/font][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][font='times new roman'][size=12px]图[/size][/font][size=12px]4[/size][font='times new roman'][size=12px] 母离子在不同的碰撞能量（5~40V）下的碎片离子叠加质谱图[/size][/font][align=center][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=center][font='times new roman'][size=12px]图[/size][/font][size=12px]5[/size][font='times new roman'][size=12px] 农药混合标准MRM28min~29.2min色谱放大图（亚胺硫磷）[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]通过对柱温（程序升温）、载气流速、进样口以及质谱参数等条件的优化，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蔬菜和茶叶中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]氨基甲酸酯、有机磷以及有机氯和拟除虫菊酯4大类49种农药分离效果、峰形、耗用时间的综合情况最好，总时间为37.867 min，能获得理想的最低检出限，可以满足实际测试的要求。总离子流图（TIC）见图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][/align][align=left][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=left][font='times new roman'][size=12px]图[/size][/font][font='times new roman'][size=12px]6 [/size][/font][font='times new roman'][size=12px] [/size][/font][font='times new roman'][size=12px]农药混合标准（10μg/kg）的GC/MS/MS总离子流图[/size][/font][/align]