色谱填料填装方法

[align=center][b]色谱柱是如何填装的？[/b][/align]目前大多数实验室是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装，需要有较高的技巧和熟练的技能。因此，有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。在有关色谱基本理论的讨论中可以得知，发生在色谱柱中总的谱带展宽效应与流动相的线速度、粒径以及溶质在流动相中的扩散系数、溶质在固定相中的扩散系数等密切相关。对于给定粒径的填料来说，能否填充成均匀而紧密的柱床，是得到高性能柱子的关键，而采用粒径细且分布均匀的优质填料，则是得到高性能柱子的最基本保证。[b]高压匀浆法装填[/b]将填料悬浮在适宜的匀浆液中制成匀浆，在其尚未沉降之前，很快以高压泵将其以很高 的流速压进柱中，便可制备出填充均匀的柱子。这是常见的分析和制备色谱柱的装填方法。常用的“标准”HPLC柱为φ4.6mm×250mm，其内腔体积约为4.2mL，约需3.5g填料。[img=,311,546]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/12/201812131515258469_1462_2428063_3.png!w311x546.jpg[/img][b]有关分析色谱柱的思考我认为自己装填色谱柱是有风险的，商品化色谱柱的装填是熟练技术工人千锤百炼的结果有自己独特和专用的装填设备，塞板的选择和放置都是非常精确地。如果装填技术不过关，在高压作用下，填料透过塞板，进入检测器是非常危险的，还有可能损坏检测器。所以尽可能的选择商品化的色谱柱本身是有质量保证的！本文部分节选于化工信息网微信，经作者整理加工而成[/b]

[font=arial, helvetica, sans-serif]色谱柱、色谱填料[font=&]采购请前往恒谱生网站：https://www.hplcs.cn/[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305301133553667_4598_5503226_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/font] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱的五大填装方法[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　1.高压匀浆法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　2.湿法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　3.干法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　4.等密度法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　5.高粘度法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　目前大多数实验室是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱、特别是高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱的填装，需要有较高的技巧和熟练的技能。因此，有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　但是只要掌握了一些基本的规律和方法，任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　在有关色谱基本理论的讨论中可以得知，发生在色谱柱中总的谱带展宽效应与流动相的线速度、粒径以及溶质在流动相中的扩散系数、溶质在固定相中的扩散系数等密切相关。对于给定粒径的填料来说，能否填充成均匀而紧密的柱床，是得到高性能柱子的关键，而采用粒径细且分布均匀的优质填料，则是得到高性能柱子的最基本保证。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　高压匀浆法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　将填料悬浮在适宜的匀浆液中制成匀浆，在其尚未沉降之前，很快以高压泵将其以很高 的流速压进柱中，便可制备出填充均匀的柱子。这是常见的分析和制备色谱柱的装填方法。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　高压匀浆法的设备，如图所示。[/font][img=1]https://www.hplcs.cn/uploads/1.jpeg[/img][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　装柱机的核心是气动放大泵，通常多设计放大率为100，即低、高压柱塞直径比为10:1，面积比为100:1的气动放大系统。若低压端输入1MPa压强的压缩空气（通常可用压缩空气钢瓶供给），则相同的压力会传递至高压端柱塞上，而高压柱塞面积仅为低压端的1/100，因而其输出压强亦提高至100MPa。由于气动放大泵很容易获得高压、高流速的输液，故很适于柱子的填充之需。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　在装柱之前，先确定所用的柱型，以确定选用多大的匀浆罐体积。例如，常用的“标准”HPLC柱为φ4.6mm×250mm，其内腔体积约为4.2mL，约需3.5g填料。一般情况下，为保证填充的成功，需适当过量15%-20%为宜。如使用4g填料充填它，选择固 – 液比约为1:10，则匀浆罐体积以4mL为宜。若罐过大，则可在匀浆罐内装入一个以惰性材料（如聚四氟乙烯或不锈钢）制的衬套将其调整至所需体积。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　将选用的柱子仔细以乙醇或丙酮清洗干净，并以干净的热风吹干。如柱管内壁污染较重，也可以用表面活性剂及去离子水依次清洗，并以长竹签或塑料棒扎上棉纱或纱布往复抽擦，以除去污垢。但应注意不要伤及内壁表面的光洁度，尤其不能造成轴向的划痕。将清洁的柱管的一端装配上带滤板的柱头，另一端则连接至匀浆罐上。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　配制勾浆液是高压匀浆法的重要一环，不同的填料应采用不同的匀浆液。不同的文献和实验室所报道的勾浆液的种类和比例有所不同。例如，填充硅胶正相柱，可以使用1:1 的氯仿/甲醇；对于C18反相填料，可以使用适宜比例的正己烷4氯仿混合溶剂。若有四溴乙烷等高密度溶剂，也可以以2:1的高密度溶剂与40%的二氧六环和40%的四氯化碳配成匀浆液。一些实验室中，常以%*! 的四氯化碳1 二氧六环配成匀浆液，也可以填充出性能很好的柱子。称取所需重量的填料，将其置小烧杯中，按其重量的10 倍量（一般也可以按体积计，即10mL的匀浆液中加入1g 重的填料）加入匀浆液。摇动或搅拌均匀后，将其移至超声波浴中，以中强的超声波令填料粒子均匀而稳定地悬浮起来。最后，再以强超声短时间强化一下。超声处理的时间不宜过长，一般应不超过2-3min，过长则可能造成颗粒的破碎。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　将准备好的勾浆液立即倒入匀浆罐中，装满后，将匀浆罐盖好、旋紧，再以针筒抽取一定量的匀浆液，从盖子上的连接孔中插入匀浆罐内部并加注匀浆液至从连接孔中溢出为止。这一操作的目的是排除匀浆罐中的空气泡，空气泡的存在会妨碍向系统中迅速地施加压力。抽出注射针并将罐与气动放大泵的出液管路相连。确认连接正确且牢固后，即可开启放大泵的截门，令贮存于气动放大泵内的顶替液（正相时可以使用氯仿，反相时可使用甲醇）高速压入罐内。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　以常见的5μm多孔硅胶填料为例，填装压力为50MPa左右（细孔硅胶可至70MPa）。这里使用的是瞬间升压的方式，也有文献报道使用程序加压。加压时，匀浆液中的填料滞留于柱尾的滤板上而匀浆液则被排除于柱外。开始时，排出的匀浆液因含部分气体，释压后会逸出而使液体浑浊。待全部匀浆液被排出后，因顶替液黏度较少而流速亦稍加大，且排出液有明显的外观上的变化。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　此时，可以稍稍降低填充压力，例如，降至约35MPa，并维持30-40min，然后，在约30min, 内逐步将压力降至常压。降至常压后，宜静置一段时间，例如30min,，以让柱床内的压力平衡。否则，过早拆卸下已填充的柱子时，会因柱子内部的残余压力而将柱头上的填料挤出往外。拆下已填装好的柱子并装配上带有筛板（滤网）的柱头（注意：一定要将沾在柱头锥套上的填料除净，否则会影响到柱子的密封性），做好标记，即已完成柱子的填装。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　在上述填装程序中应该注意的问题是：[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢，造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时，轻则填装失败，材料损失，重则造成人身伤害事故，一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外，最好还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置，以防万一。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　②通常，先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此，当使用时宜以相反的方向为宜，即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口，而填装时的出口端则作为流动相的入口。③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min, 后，再改用流动相平衡。④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录，以备存查和比较。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　实验和理论研究均指出，以上述下流式匀浆法难以填装成长柱子，其原因是，随着已填充柱床的增高，对流体的阻力亦逐渐增加，使在一定压力下通过柱床的流速降低，亦即柱床的增长速度变慢，在这一过程中，填料颗粒的沉降亦在进行，导致所填充柱床的紧密性和均匀性降低。为保证达到一定柱效，一次填充的单柱长度不宜过大。有文献指出，使用6mm内径的柱子，5μm粒径填料，适宜的单柱柱长为10-15cm。但是近年来，φ4.6×250mm的预装柱已被认为是标准柱型，在这样的柱子上，多能获得≥80000片/m理论塔板的柱效。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　为制取更长的柱子，可以使用上行法（图12-2-10）。曾有报道，使用3μm 填料，以上行法可以制备长达1m 的柱子，且其柱效与短柱子相类似。上行法中使用的匀浆液浓度比下行法要小一些，速度也慢一些，因此所填充的柱床相对较均匀。近年来，由于微柱色谱和毛细管电色谱的发展，需要填微色谱柱乃至毛细管色谱柱，而上行法则可以用作为微柱的填充方法之一。[/font][img=2]https://www.hplcs.cn/uploads/2.jpeg[/img][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　湿法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　对于高效柱、特别是现在流行的以3-10μm细柱径填料填装的高效分析柱，则必须使用湿法，即匀浆法装柱。因为，随着粒径的缩小，因静电作用和表面能的加大，粒子间倾向于聚集和“粘结”，若以干法填装，它们会粘附在连接管及柱壁上，也会因强烈的静电作用彼此排斥，因而难以填装出均匀而紧密的柱床。这样，必须改以湿法装填，即将填料悬浮于适宜的液体中消除上述不良作用。但是，在固 – 液系统中仍然存在因重力而引起的沉降现象。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]粒子沉降的速度V为[/font][img=3]https://www.hplcs.cn/uploads/3.jpeg[/img][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　式中，g为重力加速度（cm/s2 ），d为粒子直径（cm），ρ为粒子密度（g/cm3），ρo为液体密度（g/cm3），η为液体的黏度（mPas）。从上述公式可知，粒子在液体中的沉降速度，与粒径直径的平方以及液 – 固密度之差成正比，而与液体黏度成反比。据此，湿法填装可以依阻止沉降的思路分成三种：一条思路是设法寻找与硅胶密度相近的溶液，以使（ρ-ρ0）减小而降低沉降速度。第二种方法是增加液体的黏度以阻止粒子的下沉。第三种方法是综合利用前两种方法，尽力减小沉降并尽快地在发生较显著的沉降之前完成装柱操作。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　干法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　对于粒径较大的填料（多用于制备色谱），如粒径≥20μm的填料，可以用干法装填，其基本方法与填装[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]柱类似。但需注意的一点是，在干法填装制备[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱时，不要过分剧烈地振动和敲打。振动和敲打会使填料因自身粒径的不均匀性而产生柱子整体上的不均一性，即较大的填料粒子靠近柱壁，而较细粒径者则倾向集中于柱中心。这种柱内颗粒分布的不均匀性，会导致柱效的降低。比较好的方法是采用小量多次的方法向柱内加入填料，例如每次加入相当于3-5mm柱床的填料，装一点即在实验台或桌面上垂直地轻轻磕几十下，续加一些填料后，重复上述操作，直至填装完成。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　等密度法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　在HPLC发展的早期，常采用“等密度法”来填装高效柱。多孔硅胶的骨架密度较高。例如，LiChrospher 100的表观密度约为2.3g/cm3，LiChrospher 500 为2.46g/cm3，LiChrospher 1000 为2.49g/cm3。不同牌号的硅胶因制法不同（例如，含有超细孔和封闭孔者表观密度小）而有差异，但多在2.2g/cm3以上。因此，需以高密度溶剂配制密度与硅胶骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶剂为碘代和溴代烷类（表12-2-3），再与适当比例的其他溶剂相配，配制出具有密度适宜的液体，使填料能呈“失重”状态悬浮于匀浆液中，以从容地用高压泵将其压入空色谱柱中，制出填装均匀的高效色谱柱。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　在配制上述等密度悬浮液时，除密度外，还要考虑填料的表面状况与化学性质。如填装反相柱，应选用极性较弱的溶剂，而填充正相柱，如以硅胶为填料时，则应选择极性较强的溶剂，以防止颗粒板结并保证有良好的润湿性，以使填料颗粒均匀地分散在匀浆液中。但是，碘代或溴代烷价格昂贵且多数有较大的毒性，因此，这种方法目前已经很少使用。不过，当填料粒径较大，且又难以干法填装时，等密度法将能发挥出特殊的作用。[/font][img=4]https://www.hplcs.cn/uploads/4.jpeg[/img][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　表12-2-3 常用于湿法填充的溶剂[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　高粘度法装填[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　高粘度法，即使用黏度较高的匀浆液体系以阻止颗粒的沉降。可以采用乙二醇、聚乙二醇、甘油以及石蜡油等高黏度液体调配匀浆液。但是，高黏度导致流体阻力加大，必将延长装柱时间且需使用更高的装柱压力，在实用上很不方便。因此，高黏度法已很少被采用。[/font]

色谱柱采购请前往恒谱生网站：https://www.hplcs.cn/ [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305291406214905_2223_5503226_3.jpg!w690x690.jpg[/img] 柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响。填料主要的物理性能包括如下：颗粒度、孔径、孔体积、键合相化学、含碳量及烷基化处理。　　　　（1）颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小。实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值。如粒径“5μm”并不是柱中填料所有的颗粒直径都是5μm，实际上有一个颗粒分布度。这种分布度对柱反压及柱效有重要作用。一般来说，平均颗粒度越小，颗粒分布度越小，色谱柱效越高，反压亦越高。目前C18柱填料粒径在4～10μm之间。　　　　（2）孔径是指填料颗粒间的孔间隙。一般所说的孔径是指填料的平均孔径。球形填料装柱后平均孔径分布比较窄，柱床结构均匀，柱效高，重现性好；无定形填料平均孔径分布较宽，柱床结构不均匀，流动相线性速度不均匀，谱带扩宽。平均孔径的大小对分离大分子化合物有较大的影响，在分离含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应，或产生吸附效应从而影响定量的回收率及准确度。　　　　因而在用反相色谱分离诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30 nm)的反相柱填料。孔体积作为硅胶多孔性的参数，在分离分析较大分子化合物时可作参考，选用较大孔体积的反相柱填料。　　　　（3）化学键合相填料在高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法中占有极重要的地位。它可以键合极性较大的有机基团，采用极性较小的溶剂作流动相。亦可键合极性较小的有机基团，选用极性较大的溶剂作流动相。　　　　C18色谱柱是以硅烷化键合型(Si-O-Si-C)存在的，这类键合反应目前应用最为普遍。如以十八烷基三氯硅烷与全多孔型硅胶M-Porasil-C18反应生成烷基化学键合相，商品名为M-Bondapak-C18。　　　　（4）碳含量即填料中的含碳量。传统的测量技术是将填料加热到碳氢键断裂，然后通过测定损失的重量或形成的二氧化碳来计算碳含量。可以通过增加碳键的长度或增加键合密度来增加碳含量。　　　　碳含量增加，柱子的保留值增加。键合相的色谱行为与键合密度有关，也与硅胶的密度及填料的表面积有关，填料的密度越高，填柱所需的硅胶量越多，柱子的含碳量也越高。如果用2种不同密度相同碳含量的填料填充柱子，其保留行为将明显不同。因此，单独以碳含量来预测色谱行为是不够的。　　　　（5）C18硅烷化试剂是一个大于2 nm大分子，因此会与已键合在相邻的硅醇基上的C18硅烷化试剂产生严重的立体位阻。其结果导致在硅胶表面有大量的残留硅醇基没有与硅烷化试剂反应，这些极性的硅醇基在一定色谱条件下会与碱性化合物相互作用引起峰形拖尾，从而可影响定量分析结果。　　　　这些问题在一定程度上可以通过烷基化处理加以克服。烷基化处理是在键合相上完成的独立反应，以减少在硅胶表面的硅醇基。烷基化处理采用小分子(如三甲硅烷)的试剂，其空间位阻远小于C18基团。大多数固定相仅有30%可覆盖的键合位置。据报道，通过某些极活跃的化学试剂及特殊的反应条件，最高的覆盖量可达50%。　　　　很好地了解硅胶键合相的物理特性将有助于在高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的反应中选择合适的色谱柱。表面上看C18柱虽然化学官能团相同，而实际上不同品牌的C18柱性能可能有很大差别，从而产生不同的分离结果。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/05/202305291406214905_2223_5503226_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

[align=center]【仪器故事】填充柱填装制备经验分享[/align]我三十多年前使用过填充柱，也装填过填充柱。后来毛细管的普及就再没有用过了。但发现现在填充柱仍有网友使用，也有人提问有关填充柱的填充的问题。趁此机会和大家分享一下原来填装制备填充柱的过程和经验。[img=,660,565]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809142100294553_3286_1615838_3.jpg!w660x565.jpg[/img][align=center]图1. 填充色谱柱图片（来自网络）[/align]*****************************************************1. 填充色谱柱的准备目前填充柱主要有两种：不锈钢柱和玻璃柱。一般是内径2-5mm，长0.5-10m的不锈钢或玻璃管。其它材料已经很少用了。不锈钢柱坚固耐用。玻璃柱的惰性好，但易碎。1.1. 新填充色谱柱清洗正规商品柱通常是经过清洗密封的干净柱子，不会漏气，不需要清洗处理，可以拿来直接填充固定相。有些厂家或自己选用不锈钢管或玻璃管的柱子需要清洗一下。不锈钢柱子：先观察一下柱子有无破损，裂开。先用10%NaOH清洗，用自来水冲洗，最后用纯水、丙酮冲洗，烘干备用。玻璃柱子：同样先观察一下柱子有无破损，裂开。用铬酸洗液浸泡清洗，自来水洗冲，再用纯水、丙酮冲洗，烘干后备用。1.2. 使用过的填充色谱柱的清洗慢慢敲击倒出里面的固定相填料，用空气吹一下。先用溶解固定液的有机溶剂浸泡清洗，随后可以参照新柱的清洗方法。2. 固定液涂渍对于多空高分子多孔微珠，吸附性，多孔硅胶等，例如，GDX-x，Porapak, 分子筛等，无固定液，直接填充就行。对于担体（载体）上面涂渍固定液的固定相制备如下。2.1 估计所需要填充固定相的体积用量（担体用量）例如2m x 2mm ID的填充柱，担体用量为V(ml)=（ID/2）*(ID/2)*π*L*1.05=0.1*.0.1*3.14*200*1.05=6.6ml注：V----担体体积或填充量（ml），ID----柱内径(cm)，ID/2----半径，π----圆周率，柱长（cm）,1.05----增加5%的保险担体余量。固定液的涂渍（静态涂渍法）例如，用上述柱子制备10%邻苯二酸二壬酯（DNP）固定液的Chromosorb W担体的固定相：用量筒量取6.6ml的预先干燥好的Chromosorb W担体，在天平上面称量的（例如10g，这里是举例，数字便于计算，实际操作以实际称量为准）。然后在100ml烧杯中，称取10%*10g=1gDNP，加入8-10ml（比6.6ml要大，保证能够高于所用担体上面）丙酮（溶剂参考固定液的说明书）溶解，将10 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]hromosorb W HP载体慢慢倾入，使载体完全浸没。将烧杯置于通风柜中，自然干燥或在红外灯下干燥，并不断搅拌至溶剂挥发干，然后移至80℃烘箱中干燥4h,备用(烘箱温度取决于固定液的性质，例如OV-101固定液在110度烘烤)。以上是静态涂渍办法，另外还有真空涂渍法（略）。3. 填充色谱柱的填充 一般采用真空泵抽气法。在填充柱的出口（接检测器一端）塞一些玻璃棉，用合适内径的软管（套紧柱子出口和真空泵）接到真空泵上，注意不要漏气。用一小漏斗接色谱柱的（进）口（接汽化室一端），开启真空泵，分次把制备好的色谱固定相填充物从漏斗填入柱内，同时不断轻敲柱壁，使其填充得均匀紧密。直至填料无法进入，头上留一点空隙塞上玻璃棉即可。标记好柱子的进口和出口。[img=,690,388]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/09/201809142101104657_6608_1615838_3.jpg!w690x388.jpg[/img][align=center]图2. 色谱柱填装示意图[/align]**************************************************4. 填充色谱柱的老化：将色谱柱进口与进样口相连，出口端先不接检测器，以10-15mL/min流量通入载气(N2)。在高于柱子实际使用的最高温度10-20度，但必须低于柱子固定相的最高使用温度10-20度的条件下老化12-24 小时。然后连接检测器观察基线是否平直。5. 色谱柱的保存做好标记，例如，固定液信息，载体，固定相配比，日期，用途等。密封色谱柱的两端。

以前修复保护柱都是把其它色谱柱的中可用的填料放入小玻璃瓶，然后再加入甲醇拌浆，再用小药勺装填入保护柱芯中，费时费力，还要多次装填，一个简易的新方法是：将保护柱芯清洗干净，将要填料取用的色谱柱接入液相泵，拆除出口端的筛板使填料裸 露，以甲醇为流动相，0.2流速使填料流出，弃去前部可能被污染的部分，将保护柱芯一端封好，另一端开口直接用手对齐色谱柱出口压紧使填料直接流入保护柱芯中，直到手压不住且有填料从接口处挤出，停止泵，侧向移动并取下保护柱芯（利用柱端将填料刮平），使甲醇稍挥发，再用小药勺取少量填料压中保护柱芯的中心部，使填料略高于柱体，装好筛板，装回保护柱套，使用2.0流速，冲洗保护柱15分钟即可。下面是以60%甲醇为流动相（标准检定方法是用100%甲醇，这里用这个流动相主要是想看一下高柱压及在高柱压下保护柱是否会漏液），随便配了一个也不知道什么浓度的萘的60%甲醇溶液（前面有杂质峰是因为甲醇是回收的，不是检测就随便了，大家可以随便见笑http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gif）。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/11/201611051717_615870_0_3.jpg还拆了几根色谱柱的柱套，大家看看不同厂家的结构有什么不同http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/11/201611051727_615871_0_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/11/201611051728_615872_0_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/11/201611051728_615873_0_3.jpg

动态轴向压缩柱：简称DAC（Dynamic Axial Compression），可自行装柱、维持柱压、自行卸柱，兼有色谱柱和装柱机的功能，其原理是通过活塞的上下运动来装柱、维持柱压和卸柱，活塞周边配备了特殊设计的密封圈能容许活塞上下自由滑动，同时又能保持较高的密封压。活塞运动和压力维持靠的是稳定均匀的液压。图示如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171309_566404_2307604_3.jpg下面介绍一下DAC-50mm和DAC-150mm的填装工艺（经过N次测试得出）DAC-50填装工艺：1、用乙醇超声清洗上部活塞筛板和下端筛板，用乙醇等溶剂冲洗DAC柱管，也可用活塞辅助擦除。2、清洗并安装柱底，务必卡好并锁紧链条。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171312_566405_2307604_3.jpg3、安装好活塞http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171314_566407_2307604_3.jpg4、检测柱内是否漏气（液体）：从柱子上方加入300mL乙醇，向下压柱活塞，打开上端管路，排除柱管上方所有空气后（恰能排出液体），关闭气源开关，堵住上端管路，再次打开气源开关，向下给以压力，调节调压阀，使油压表最终压力达到150bar（填料为10μm，为高机械耐压填料，可达到150bar），并锁住调压阀，10min后观察，若能保持压力降低在3bar以内，则认为该柱体的密封性较好，可排出乙醇。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171316_566409_2307604_3.jpg5、填料处理：首先要清洗填料，将1L乙醇加入到350g的填料（10μm，C18）中，用棒子搅匀，得到填料匀浆，在进行抽滤，待除去乙醇后，取出填料，摊开放置于通风厨中，该溶剂乙醇可重复使用。然后匀浆填料，将干燥后的350g填料与800mL乙醇混合，搅拌，超声，直至匀浆均匀。将匀浆液用漏斗导入柱管。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171317_566411_2307604_3.jpg6、压缩活塞：匀浆液导入柱管后，向下压活塞，并打开上端活塞处的管路，待柱管上端空气排尽后，关闭气压阀，并堵住上端管路，打开柱底下端管路，继续向下施压，使匀浆液中乙醇得以排出。7、试验测试：做个杂质制备的实验测试，杂质A和杂质B均为制备目标物。DAC-50制备上样2.0g样品结果如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171319_566412_2307604_3.png（DAC-50制备图谱）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171320_566413_2307604_3.png（分析图谱）画外音:这次制备放大至DAC-50的结果，分离及柱效稍差，原因可能为DAC装填地柱效差，或者样品上样量过高。DAC-150动态轴向压缩柱填装：具体工艺与DAC-50类似，只是填料装填量为3kg。将洗好并干燥后的3kg填料与5L乙醇混合，搅拌，超声，直至匀浆均匀，进行填装。下图为装好后的DAC-150连上输液泵及紫外检测器，正在测试的图片：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171322_566414_2307604_3.jpg试验测试：依然是上面那个杂质制备的测试，这次上样量可是20g哦。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171323_566415_2307604_3.png（DAC-150制备图谱）填装结果，DAC-150的柱效明显要比DAC-50高，这与填装过程各步骤的控制有关。最后附上一张DAC-150柱床的照片：(肿么样,很惊讶吧,3公斤的填料出来就变这样了)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/09/201509171324_566416_2307604_3.jpg总结：1、选择填料的粒径要比上筛板和下筛板的孔径大3μm以上，防止填料流失。2、筛板一定要清洗干净，不然会非常影响柱效的。3、在填料耐压范围内，装填压力（油压表示数）越高，装柱柱效越高。一般填料粒径越小，机械强度越高，耐压越高。4、根据填料粒径的不同（或者密度不同），选择不同的匀浆用溶剂，一般粒径越大的填料需要的匀浆溶剂粘度越高。5、仪器在使用过程一定要保持水平、平稳状态，防止柱床受压不均匀。根据需要选择装填柱长长度，一般100-250mm长，柱长太长会导致柱床不稳定。