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快速水平电泳系统

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快速水平电泳系统相关的论坛

  • 关于水平电泳.......

    求教,关于用水平电泳仪,跑基因电泳,能否用排枪一次加样.......听说国内有这种梭子...有谁知道啊,谢谢啦。。。

  • DNA的快速电泳

    SuperBuffer(100X)简介主要用途DNA的快速电泳,取代传统的TAE和TBE。产品介绍SuperBuffer是一种革命性的超快高分辨核酸电泳液,由于其产热低,故可以以高达20-25V/cm的电压电泳,并且分辨率比传统电泳液更高。该产品能彻底替代TAE、TBE等传统DNA电泳液。主要特点1:快速工作电压可高达20-25v/cm,比TAE和TBE的5-8V/cm(见分子克隆手册)高2-4倍,电泳时间只有使用TAE或TBE时的1/4。分辨率要求不高的定性检测(如PCR检测和酶切检测)可以在十分钟内完成。2:高分辨快速电泳防止了DNA的扩散,用0.5%的胶得到的电泳分辨率与用2-3%的胶(TAE或TBE电泳)得到的相当(效果图见www.tiandz.com网站相关内容)。3.不影响后续的杂交,回收和连接等反应。4.节约成本,0.5-1%的胶适合于分离大小在100bp-50kb之间的DNA,不需要高浓度胶。本产品能反复使用数次。5.销售价格与市售国产TBE更便宜,产品有粉剂、预配液两种规格供客户选择。物理特性无色液体,4度或常温保存二:SuperBuffer(100X)的使用SuperBuffer(100X)必须在使用前用水稀释100倍,其后的使用方法跟TAE或TBE的使用完全一样。如果使用高电压则有以下建议。1.琼脂糖胶浓度分离从100bp到50kb的DNA片段均可使用0.5-1%的胶并能得到较高的分辩率。使用SuperBuffer电泳时由于可以高压电泳,胶浓度似乎越低电泳效果越好,也许是因为电泳速度越快,小片段DNA的弥散现象越轻,速度对小片段DNA弥散的影响超过了胶浓度对它的影响,故不必靠高浓度的胶来提高分辨率。使用高浓度的胶反而会使电泳时间加长,得不偿失。2.EB染色如果使用20-25V/cm电压,最好不要把EB加入上样液中,否则EB很容易在高压下与DNA分离。建议在倒胶前将EB直接加入琼脂糖中, EB的最佳终浓度为0.4 -0.5μg /ml。原理上SuperBuffer与EB以外的其它核酸染料(如SYBR Green)兼容,但天泽基因暂时没有进行相关实验,有待用户自己实验验证。3.样品的离子强度SuperBuffer比TAE和TBE对样品离子强度更敏感。如果待测样品(如酶切产物,PCR产物)的离子强度与DNA分子量对照(如DNA ladder)的离子强度不同,则离子强度低的泳动稍快,估算得到的DNA分子大小可能稍有误差。如果需要准确估计,建议电泳使分子量标准和待测样品的盐浓度一样(在分子量标准中加酶切或PCR缓冲液)。4:电泳液用量与电压的关系 如果电泳槽的容量在100-200ml左右的(迷你型电泳,电极距离10cm左右),可以使用200-250V电压进行电泳。电压如果超过20V/cm,则电泳时间不宜超过三十分钟 (在此电泳条件下,电泳三十分钟足够将0.1-5kb的DNA分开)。如果电泳槽的容量为600ml或更大,22.5V/cm(按正负两极距离)电泳一小时以上一般没有任何问题。5:SuperBuffer的重复使用SuperBuffer缓冲液最多可重复使用4-5次左右(如果电泳槽的容量为600ml的话);重复使用前最好将其搅拌混匀并放置片刻,以恢复其缓冲能力。随着重复使用次数增加,相同电压下DNA电泳速度会稍微加快,但分辨率变化不大。6:电流电压降低现象若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限,如果有上限设置,需将其调高使之与电泳电压匹配。如果原因不明,请与仪器生产厂家联系。部分电泳仪器做最高使用电压为200V。7:与RNA变性胶, 碱变性胶,脉冲电泳和PAGE的兼容性天泽基因没有进行相关兼容性实验。

  • DNA的快速电泳

    SuperBuffer(100X)简介主要用途DNA的快速电泳,取代传统的TAE和TBE。产品介绍SuperBuffer是一种革命性的超快高分辨核酸电泳液,由于其产热低,故可以以高达20-25V/cm的电压电泳,并且分辨率比传统电泳液更高。该产品能彻底替代TAE、TBE等传统DNA电泳液。主要特点1:快速工作电压可高达20-25v/cm,比TAE和TBE的5-8V/cm(见分子克隆手册)高2-4倍,电泳时间只有使用TAE或TBE时的1/4。分辨率要求不高的定性检测(如PCR检测和酶切检测)可以在十分钟内完成。2:高分辨快速电泳防止了DNA的扩散,用0.5%的胶得到的电泳分辨率与用2-3%的胶(TAE或TBE电泳)得到的相当(效果图见www.tiandz.com网站相关内容)。3.不影响后续的杂交,回收和连接等反应。4.节约成本,0.5-1%的胶适合于分离大小在100bp-50kb之间的DNA,不需要高浓度胶。本产品能反复使用数次。5.销售价格与市售国产TBE更便宜,产品有粉剂、预配液两种规格供客户选择。物理特性无色液体,4度或常温保存二:SuperBuffer(100X)的使用SuperBuffer(100X)必须在使用前用水稀释100倍,其后的使用方法跟TAE或TBE的使用完全一样。如果使用高电压则有以下建议。1.琼脂糖胶浓度分离从100bp到50kb的DNA片段均可使用0.5-1%的胶并能得到较高的分辩率。使用SuperBuffer电泳时由于可以高压电泳,胶浓度似乎越低电泳效果越好,也许是因为电泳速度越快,小片段DNA的弥散现象越轻,速度对小片段DNA弥散的影响超过了胶浓度对它的影响,故不必靠高浓度的胶来提高分辨率。使用高浓度的胶反而会使电泳时间加长,得不偿失。2.EB染色如果使用20-25V/cm电压,最好不要把EB加入上样液中,否则EB很容易在高压下与DNA分离。建议在倒胶前将EB直接加入琼脂糖中, EB的最佳终浓度为0.4 -0.5μg /ml。原理上SuperBuffer与EB以外的其它核酸染料(如SYBR Green)兼容,但天泽基因暂时没有进行相关实验,有待用户自己实验验证。3.样品的离子强度SuperBuffer比TAE和TBE对样品离子强度更敏感。如果待测样品(如酶切产物,PCR产物)的离子强度与DNA分子量对照(如DNA ladder)的离子强度不同,则离子强度低的泳动稍快,估算得到的DNA分子大小可能稍有误差。如果需要准确估计,建议电泳使分子量标准和待测样品的盐浓度一样(在分子量标准中加酶切或PCR缓冲液)。4:电泳液用量与电压的关系 如果电泳槽的容量在100-200ml左右的(迷你型电泳,电极距离10cm左右),可以使用200-250V电压进行电泳。电压如果超过20V/cm,则电泳时间不宜超过三十分钟 (在此电泳条件下,电泳三十分钟足够将0.1-5kb的DNA分开)。如果电泳槽的容量为600ml或更大,22.5V/cm(按正负两极距离)电泳一小时以上一般没有任何问题。5:SuperBuffer的重复使用SuperBuffer缓冲液最多可重复使用4-5次左右(如果电泳槽的容量为600ml的话);重复使用前最好将其搅拌混匀并放置片刻,以恢复其缓冲能力。随着重复使用次数增加,相同电压下DNA电泳速度会稍微加快,但分辨率变化不大。6:电流电压降低现象若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限,如果有上限设置,需将其调高使之与电泳电压匹配。如果原因不明,请与仪器生产厂家联系。部分电泳仪器做最高使用电压为200V。7:与RNA变性胶, 碱变性胶,脉冲电泳和PAGE的兼容性天泽基因没有进行相关兼容性实验。

  • DNA的快速电泳

    SuperBuffer(100X)简介主要用途DNA的快速电泳,取代传统的TAE和TBE。产品介绍SuperBuffer是一种革命性的超快高分辨核酸电泳液,由于其产热低,故可以以高达20-25V/cm的电压电泳,并且分辨率比传统电泳液更高。该产品能彻底替代TAE、TBE等传统DNA电泳液。主要特点1:快速工作电压可高达20-25v/cm,比TAE和TBE的5-8V/cm(见分子克隆手册)高2-4倍,电泳时间只有使用TAE或TBE时的1/4。分辨率要求不高的定性检测(如PCR检测和酶切检测)可以在十分钟内完成。2:高分辨快速电泳防止了DNA的扩散,用0.5%的胶得到的电泳分辨率与用2-3%的胶(TAE或TBE电泳)得到的相当(效果图见www.tiandz.com网站相关内容)。3.不影响后续的杂交,回收和连接等反应。4.节约成本,0.5-1%的胶适合于分离大小在100bp-50kb之间的DNA,不需要高浓度胶。本产品能反复使用数次。5.销售价格与市售国产TBE更便宜,产品有粉剂、预配液两种规格供客户选择。物理特性无色液体,4度或常温保存二:SuperBuffer(100X)的使用SuperBuffer(100X)必须在使用前用水稀释100倍,其后的使用方法跟TAE或TBE的使用完全一样。如果使用高电压则有以下建议。1.琼脂糖胶浓度分离从100bp到50kb的DNA片段均可使用0.5-1%的胶并能得到较高的分辩率。使用SuperBuffer电泳时由于可以高压电泳,胶浓度似乎越低电泳效果越好,也许是因为电泳速度越快,小片段DNA的弥散现象越轻,速度对小片段DNA弥散的影响超过了胶浓度对它的影响,故不必靠高浓度的胶来提高分辨率。使用高浓度的胶反而会使电泳时间加长,得不偿失。2.EB染色如果使用20-25V/cm电压,最好不要把EB加入上样液中,否则EB很容易在高压下与DNA分离。建议在倒胶前将EB直接加入琼脂糖中, EB的最佳终浓度为0.4 -0.5μg /ml。原理上SuperBuffer与EB以外的其它核酸染料(如SYBR Green)兼容,但天泽基因暂时没有进行相关实验,有待用户自己实验验证。3.样品的离子强度SuperBuffer比TAE和TBE对样品离子强度更敏感。如果待测样品(如酶切产物,PCR产物)的离子强度与DNA分子量对照(如DNA ladder)的离子强度不同,则离子强度低的泳动稍快,估算得到的DNA分子大小可能稍有误差。如果需要准确估计,建议电泳使分子量标准和待测样品的盐浓度一样(在分子量标准中加酶切或PCR缓冲液)。4:电泳液用量与电压的关系 如果电泳槽的容量在100-200ml左右的(迷你型电泳,电极距离10cm左右),可以使用200-250V电压进行电泳。电压如果超过20V/cm,则电泳时间不宜超过三十分钟 (在此电泳条件下,电泳三十分钟足够将0.1-5kb的DNA分开)。如果电泳槽的容量为600ml或更大,22.5V/cm(按正负两极距离)电泳一小时以上一般没有任何问题。5:SuperBuffer的重复使用SuperBuffer缓冲液最多可重复使用4-5次左右(如果电泳槽的容量为600ml的话);重复使用前最好将其搅拌混匀并放置片刻,以恢复其缓冲能力。随着重复使用次数增加,相同电压下DNA电泳速度会稍微加快,但分辨率变化不大。6:电流电压降低现象若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限,如果有上限设置,需将其调高使之与电泳电压匹配。如果原因不明,请与仪器生产厂家联系。部分电泳仪器做最高使用电压为200V。7:与RNA变性胶, 碱变性胶,脉冲电泳和PAGE的兼容性天泽基因没有进行相关兼容性实验。

  • 【求助】谁知道水平电泳槽呢

    水平电泳槽中UV 盘,胶模盘 ( 可用来制胶 ),电梳都是做什么用的。是SCIE-plas HU13型号。借宝地发个贴,tutm你知道吗?有没个什么的说明书呢?急用。

  • DNA的快速电泳

    SuperBuffer(100X)简介主要用途DNA的快速电泳,取代传统的TAE和TBE。产品介绍SuperBuffer是一种革命性的超快高分辨核酸电泳液,由于其产热低,故可以以高达20-25V/cm的电压电泳,并且分辨率比传统电泳液更高。该产品能彻底替代TAE、TBE等传统DNA电泳液。主要特点1:快速工作电压可高达20-25v/cm,比TAE和TBE的5-8V/cm(见分子克隆手册)高2-4倍,电泳时间只有使用TAE或TBE时的1/4。分辨率要求不高的定性检测(如PCR检测和酶切检测)可以在十分钟内完成。2:高分辨快速电泳防止了DNA的扩散,用0.5%的胶得到的电泳分辨率与用2-3%的胶(TAE或TBE电泳)得到的相当(效果图见www.tiandz.com网站相关内容)。3.不影响后续的杂交,回收和连接等反应。4.节约成本,0.5-1%的胶适合于分离大小在100bp-50kb之间的DNA,不需要高浓度胶。本产品能反复使用数次。5.销售价格与市售国产TBE更便宜,产品有粉剂、预配液两种规格供客户选择。物理特性无色液体,4度或常温保存二:SuperBuffer(100X)的使用SuperBuffer(100X)必须在使用前用水稀释100倍,其后的使用方法跟TAE或TBE的使用完全一样。如果使用高电压则有以下建议。1.琼脂糖胶浓度分离从100bp到50kb的DNA片段均可使用0.5-1%的胶并能得到较高的分辩率。使用SuperBuffer电泳时由于可以高压电泳,胶浓度似乎越低电泳效果越好,也许是因为电泳速度越快,小片段DNA的弥散现象越轻,速度对小片段DNA弥散的影响超过了胶浓度对它的影响,故不必靠高浓度的胶来提高分辨率。使用高浓度的胶反而会使电泳时间加长,得不偿失。2.EB染色如果使用20-25V/cm电压,最好不要把EB加入上样液中,否则EB很容易在高压下与DNA分离。建议在倒胶前将EB直接加入琼脂糖中, EB的最佳终浓度为0.4 -0.5μg /ml。原理上SuperBuffer与EB以外的其它核酸染料(如SYBR Green)兼容,但天泽基因暂时没有进行相关实验,有待用户自己实验验证。3.样品的离子强度SuperBuffer比TAE和TBE对样品离子强度更敏感。如果待测样品(如酶切产物,PCR产物)的离子强度与DNA分子量对照(如DNA ladder)的离子强度不同,则离子强度低的泳动稍快,估算得到的DNA分子大小可能稍有误差。如果需要准确估计,建议电泳使分子量标准和待测样品的盐浓度一样(在分子量标准中加酶切或PCR缓冲液)。4:电泳液用量与电压的关系 如果电泳槽的容量在100-200ml左右的(迷你型电泳,电极距离10cm左右),可以使用200-250V电压进行电泳。电压如果超过20V/cm,则电泳时间不宜超过三十分钟 (在此电泳条件下,电泳三十分钟足够将0.1-5kb的DNA分开)。如果电泳槽的容量为600ml或更大,22.5V/cm(按正负两极距离)电泳一小时以上一般没有任何问题。5:SuperBuffer的重复使用SuperBuffer缓冲液最多可重复使用4-5次左右(如果电泳槽的容量为600ml的话);重复使用前最好将其搅拌混匀并放置片刻,以恢复其缓冲能力。随着重复使用次数增加,相同电压下DNA电泳速度会稍微加快,但分辨率变化不大。6:电流电压降低现象若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限,如果有上限设置,需将其调高使之与电泳电压匹配。如果原因不明,请与仪器生产厂家联系。部分电泳仪器做最高使用电压为200V。7:与RNA变性胶, 碱变性胶,脉冲电泳和PAGE的兼容性天泽基因没有进行相关兼容性实验。

  • 水平凝胶电泳仪特色及参数说明

    [b]凝胶水平电泳仪[/b]和[b]进口水平电泳仪[/b]非常经济的低缓冲量,非常适合超大规模样品检测或高分辨率分离实验的[b]水平电泳仪,[url=http://www.f-lab.cn/electrophoresis/me-10.html]水平凝胶电泳仪[/url][/b][url=http://www.f-lab.cn/electrophoresis/me-10.html]FP-ME-10-20[/url]专业为克隆或PCR实验而设计,适合大规模的凝胶电泳实验和超高分辨率的分离,也适合样品转移到膜层上进行进一步分析。[b]水平凝胶电泳仪[/b]特色具有三种凝胶盘尺寸:200x200mm,200x250mm和200x100mm兼容多通道[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]的凝胶卡可一次性使用40个样品,单个凝胶可加载440个样品电泳液冲洗消耗少兼容多道[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]单个铸造电泳槽安全可靠方便样品加载电泳指示功能凝胶灌胶无需夹具,弹簧[b]水平凝胶电泳仪参数[/b]体积:W395xL230xH90mm凝胶卡尺寸: W200xL200mm, W200xL100mm 最大样品:200@W200xL200mm, 450@W200xL100mm 缓冲液容积:1200ml建造:注塑铸造,耐用防漏电极:99.99%铂金电极,可更换而抗腐蚀更多凝胶电泳仪请浏览官网:[url]http://www.f-lab.cn/electrophoresis.html[/url]

  • 琼脂糖预制胶高压快速电泳试剂盒使用方法

    琼脂糖预制胶高压快速电泳试剂盒使用方法

    [font=宋体][size=10.5000pt]琼脂糖预制胶电泳试剂盒是一种非常适合核酸[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]PCR[font=宋体]实验、酶切反应实验等的一种可以直接进行核酸凝胶电泳实验的试剂盒,电泳实验效率大大提高,可以节约大量时间。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]此款琼脂糖电泳试剂盒跟其它琼脂糖试剂盒有区别,因此使用方法也有一些区别,不需要再四处采购琼脂糖、核酸染料、电泳液和[/font]loading buffer[font=宋体]等试剂;而且琼脂糖预制胶是经过核酸染料预染的,既不用进行繁琐的制胶,也不用电泳液染色或后染色,即开即用;再加上配备的高压快速电泳液,电泳速度远远快与传统的[/font][font=Calibri]TAE[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]TBE[/font][font=宋体]电泳液。[/font][/size][/font][img=,519,396]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007101051212160_1649_3880864_3.jpg!w519x396.jpg[/img][font=宋体][size=10.5000pt]使用方法:[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]1. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]在低温条件下高压快速电泳有时会有结晶析出,请[/font]65[font=宋体]℃水浴加热溶解,用去离子水稀释[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]倍,用作电泳液,倒入电泳槽中。本产品配置的电泳液可重复使用两三次,如果大电泳槽次数更多。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]2. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]取出琼脂糖凝胶,剪刀剪开,标签面即孔突出面朝上,公测端为负极,放入高压快速电泳液中,没过胶面[/font]1mm[font=宋体],如有孔内有气泡,设法除去。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]3. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]在[/font]DNA[font=宋体]样品中加入[/font][font=Calibri]1μl[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]× [/font][font=Calibri]loading buffer[/font][font=宋体]混匀,用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]将混合液缓慢加入凝胶加样孔,同时加入[/font][font=Calibri]Marker[/font][font=宋体]。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]4. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]开启电源,红色为正极,黑色为负极,注意[/font]DNA[font=宋体]样品有负极向正极电泳移动。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]5. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]根据迁移距离及指示剂迁移的位置,判断是否终止电泳。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]6. [/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]电泳完毕,关电源,将凝胶放在成像仪中观察电泳条带及其位置,并与[/font]Marker[font=宋体]比较被扩增产物的大小。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]以上是德晟琼脂糖预制胶电泳试剂盒的具体使用方法以及在高压快速电泳时需要注意的一些小细节,虽然与其他试剂盒相比也一些差异,但是在核酸[/font]PCR[font=宋体]或者酶切反应等对分辨率要求不高的实验中,是非常适合的,而且省去了大量时间和金钱成本。[/font][/size][/font]

  • 【资料】电泳知识介绍(三)电泳槽

    电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分,其系统的迅猛发展主要也是体现在电泳槽上。根据电泳的原理,凝胶都是放在两个缓冲腔之间,电场通过凝胶连接两个缓冲腔。缓冲液和凝胶之问的接触可以是直接的液体接触,也可以间接通过凝胶条或滤纸条。管状凝胶电泳和垂直板状电泳大多采取直接液体接触方式。这种方式可以有效地使用电场,但在装置设计上有一些困难,如液体泄漏,电安全和操作麻烦等问题。水平板状电泳槽大多通过间接方式,用滤纸桥搭接以及最近使用缓冲液制作的凝胶条和滤纸条搭接,即半干技术,后种方式使装置简化,操作也大大方便。

  • 毛细管电泳分析系统

    1990年瑞士Ciba-Geigy公司的Manz和Widmer首次提出微全分析系统(Miniaturized total chemical analysis system,a-TAS)的概念和设计,把微全分析系统的主要构型定位为一般厚度不超过5 mm,面积为数平方厘米至十几平方厘米的平板芯片(包括微阵列生物芯片和微流控分析芯片)。1994年始,美国橡树岭国家实验室Ramsey等在Manz的工作基础上发表了一系列论文,微流控分析芯片获得了重要发展。微流控分析系统是将常规CE的原理和技术与流动注射进样技术相结合,借助微机电加工技术的手段,在平方厘米级大小的芯片上刻蚀出矩形或梯形管道和具有其它功能的单元,通过不同的管道网路、反应器、检测单元等的设计和布局,实现样品的采集、预处理、反应、分离和检测,是一种多功能化的快速、高效、高灵敏度和低消耗的微型装置;是一个跨学科的新领域,其核心是将所有化学分析过程中的各种功能及步骤微型化,包括:泵、阀、流动通道、混合反应器、相分离和试样分离、检测器、电子控制及转换点等。 微流控分析系统可大大提高分析速度和极大地降低分析费用,微流控CE分析系统通常也被称为集成毛细管电泳(Integrated capillaryelectrophoresis,ICE)。微流控分析系统开创了分析科学历史的新篇章,使分析科学进入了一个微型化、集成化和自动化的崭新世界。

  • 电泳槽细菌测试

    电泳槽细菌测试流程如下。所用仪器:小冰箱、培养盘、温度控制在30摄氏度的细菌培养盘、无菌棉棒、可以长期保存的标签、可以自由处置的含90%的无菌水瓶。操作流程:1、打开稀释瓶倒入10ml电泳漆。2、塞上瓶塞并且轻摇瓶身,充分摇匀。3、将培养盘移出冰箱,并根据标签进行区分。4、将棉棒伸入稀释过的样品,滴三滴在琼脂上,进行测试。5、保持温度和湿度的稳定性。6、两天后定期做检查,7天后丢弃样品。根据以上实验,电泳漆的主槽要每周进行一次细菌含量的检测,当主槽进行过两次细菌测试时,对包括洗涤系统在内的整个系统进行UF或RO预处理;将主槽内使用的加仑数再加上软管中的加仑数(折合为主槽的10%),来计算增加的杀菌剂的数量。 先后用1.5%的Kathon EDC及硝酸银处理细菌。用在电泳槽以及洗涤槽内的杀虫剂必须是与存在的细菌是相配的。 在24小时内保持细菌的水平。

  • 涂魔师快速解决电泳漆膜厚度非接触精准测量的技术分析

    涂魔师快速解决电泳漆膜厚度非接触精准测量的技术分析

    电泳涂装已成熟应用于汽车整车及零部件的制造生产中,十分适合涂装汽车车身、量大或结构复杂的工件。[align=center] [img=,263,188]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171356411123_4098_928_3.png!w263x188.jpg[/img] [/align][align=center]图1:轿车车身进行阴极电泳涂装工艺[/align]据世界腐蚀组织(WCO)初步估计,通过使用有效的腐蚀防护技术,能减少1万亿美元的资金损失。而电泳涂装工艺是保障工件的腐蚀防护质量的重要因素。[align=center] [img=,257,193]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171356512807_1740_928_3.png!w257x193.jpg[/img][img=,258,193]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171401363560_5603_928_3.png!w258x193.jpg[/img][/align][align=center]图2 汽车车身出现腐蚀现象[/align]电泳漆膜厚度直接影响电泳涂装质量,从而影响防腐蚀、防冲击、附着力等性能。举个例子,若涂层厚度过薄,无法有效阻断所有的紫外线,最终出现腐蚀现象;若涂层厚度过厚,涂层失去弹性并在压力下形成裂纹,最终也会出现腐蚀现象。示意图如下图3所示。[align=center][img=,417,305]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171401511579_6357_928_3.png!w417x305.jpg[/img][/align][align=center]图3 涂层厚度对涂装质量的影响[/align]因此,最佳解决方案是在涂装工艺中将漆膜厚度有效控制在最小的允许容差范围内(允许容差范围=合格范围上限值-合格范围下限值)。[url=http://www.tumoshi.com/flex]瑞士涂魔师ATO非接触膜厚分析设备[/url]利用基材与涂层之间的储热特性,非接触无损精准测量金属基材上电泳漆涂层厚度。[size=19px][color=#ff0000]在涂层未烘干的湿膜状态下即可实时测出干膜厚度[/color][/size],为精确控制漆膜厚度提供可靠的数据支撑。在工件进入烘炉前就能快速监测真实膜厚,及时发现问题并调整设备参数使膜厚达到合格范围,大大缩短了工艺时间和降低返工率。[align=center] [img=,243,162]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171403000556_1946_928_3.png!w243x162.jpg[/img] [img=,250,162]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171403247711_1478_928_3.png!w250x162.jpg[/img][/align]通常,测量设备的精度要求是允许容差范围的1/40。但传统干膜测厚仪,精确度只有1~2个微米,这1~2微米的40倍就是40~80微米,在微米级的允许容差内,这明显是达不到电泳涂装要求的。[align=center][size=18px][size=19px]涂魔师Flex VS 传统电磁感应测厚仪[/size][/size][/align][size=19px]A、重复性对比测试[/size][size=19px]视频1 :[/size]使用电磁感应测厚仪测量金属基材上厚度为6.5微米的阴极电泳漆膜;该样品是从大型金属板上剪下来的,并且漆膜厚度在0.2微米内波动;点击查看视频[align=center][url=http://1253484012.vod2.myqcloud.com/2e4ea7bdvodgzp1253484012/3cbb13255285890805044111586/JHXIrFfcHVcA.mp4][font=宋体][size=13px][color=#2e3033]视频[/color][/size][/font][font=Arial, sans-serif][size=13px][color=#2e3033]1[/color][/size][/font][font=宋体][size=13px][color=#2e3033]:电磁感应膜厚仪测量金属板上阴极电泳漆膜厚度[/color][/size][/font][font=Arial, sans-serif][size=13px][color=#2e3033]([/color][/size][/font][font=宋体][size=13px][color=#2e3033]重复性测试[/color][/size][/font][font=Arial, sans-serif][size=13px][color=#2e3033])[/color][/size][/font][/url][/align]由测试结果可见:1、电磁感应测厚仪的标准偏差为0.7微米,因此该方法只适用于允许容差范围在30微米及以上的应用。2、使用显微镜观察经过接触测厚的样品,可以发现样品表面出现因探头接触而造成的涂层损坏现象。[size=19px]视频2:[/size]使用涂魔师Flex非接触膜厚分析仪对相同样品的同一个测试点进行重复性测试,测试距离约10cm;点击查看视频[align=center][font=宋体][size=13px][color=#2e3033][url=http://1253484012.vod2.myqcloud.com/2e4ea7bdvodgzp1253484012/3ad664f35285890805044078966/eHaIkLEqcQkA.mp4]视频2:涂魔师Flex测量金属板上阴极电泳漆膜厚度(重复性测试)[/url][/color][/size][/font][/align]由上述测试可知:涂魔师 Flex的标准偏差为0.07微米,证明涂魔师满足允许容差范围约为3微米的电泳涂装行业测量要求。[size=19px]B、探究测量工件边缘是否对测厚设备精度存在影响[/size][size=19px]视频3:[/size]使用电磁感应测厚仪依次对样品中心区域和4个边角进行膜厚测量。点击查看视频[align=center][font=宋体][size=13px][color=#2e3033][url=http://1253484012.vod2.myqcloud.com/2e4ea7bdvodgzp1253484012/3cbb899a5285890805044112034/xGWqyCB9I3sA.mp4]视频3:磁感应膜厚仪测量金属板上阴极电泳漆膜厚度(验证边缘效应影响)[/url][/color][/size][/font][/align]由视频3可见:样品边角比中心区域的膜厚测量值要大。这是因为电磁感应测厚仪的探头在边缘位置的磁力线分布与离边缘更远距离位置不一样。通常,后者的测量值会与前者的测量值偏离10-20%。当测量点接近边缘、或者基材的曲率半径发生变化时,接触式测厚探头必须重新校准。[size=19px][/size][size=19px]视频4:[/size]使用涂魔师 Flex依次对样品中心区域和4个边角进行膜厚测量。点击查看视频[align=center][url=http://1253484012.vod2.myqcloud.com/2e4ea7bdvodgzp1253484012/3cbb92815285890805044112266/b1FEOAy68VgA.mp4]视频4:涂魔师Flex测量金属板上阴极电泳漆膜厚度(验证边缘效应测试)[/url][/align]从上述视频可知:使用涂魔师Flex测量样品中心区域和边缘区域的膜厚数据差异很小。因此,涂魔师非接触测厚技术对于不规则形状的工件和边缘膜厚也能精准测量。[align=center][size=18px][size=19px]与传统金属接触式测厚仪相比,涂魔师非接触膜厚分析仪具有以下优势:[/size][/size][/align]1、 在湿膜状态下实时快速精确测出干膜厚度,精度高达0.5微米2、 高精度测量曲面、弯角、边缘部位,不受工件表面形状限制,如弹簧、螺钉等。3、 高精度,精度比干膜测厚仪更好;4、 一键快速测试,允许产品摇晃倾斜,测量距离和角度无严格限制;5、 多种基材材质(玻璃、碳纤维、MDF、橡胶、金属等)和涂层类型(粉末涂料、水性涂料、含金属涂层、润滑油、粘胶剂等)都适用,并且无需更换测量探头,一机通用;6、 提供手持式Flex和在线式Inline等多款机型,满足在生产线上不间断连续测厚,数据实时存档与反馈,有助于提高工件涂装质量;目前已有众多欧美知名涂装厂家成功引入涂魔师非接触测厚技术进行工艺及产线的优化升级,并对改造结果十分满意。[align=center][size=19px][size=18px]案例分析:D?rken MKS(德尔肯)公司[/size][/size][/align][align=right]---德国知名防腐蚀涂层系统(达克罗涂层)制造商[/align][align=center][size=19px][img=,172,172]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171406503479_2438_928_3.png!w172x172.jpg[/img][/size][/align][size=19px]遇到的难题:[/size]涂层涂装后,只能等到涂层烘干后才能测量涂层厚度,导致在客户现场调试设备需要花费几天时间,工作效率过低;[align=center][img=,231,231]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/11/202011171406591617_4879_928_3.png!w231x231.jpg[/img][/align][size=19px]解决方案:[/size]使用涂魔师非接触测厚设备,在涂层烘干前立即测量涂层湿膜实时精确得出干膜厚度,及时调整涂装系统参数,大大缩短在客户现场涂装系统的调试时间。[size=19px]客户评价:[/size]“我们使用涂魔师来测量固化前的锌片涂层防腐蚀系统(达克罗涂层),节省我们大量的时间成本。该设备具有快速测量、测量精度高和重复性好等优点,成为高效调整工艺参数和监测工艺质量的关键工具。” 综上所述,涂魔师ATO非接触膜厚分析技术十分适合应用于测量阴极电泳漆膜厚度,为生产厂家提供可靠详细的膜厚测量数据,快速判断是原料还是喷涂设备出现问题,从而控制漆膜在较小允许容差范围内,提高涂装工艺稳定性,有效减少产品质量缺陷。

  • 【转】毛细管电泳原理及分析策略

    【转】毛细管电泳原理及分析策略

    毛细管电泳原理及分析策略一、毛细管电泳的基本原理电泳是指电解质中带电粒子在电场力作用下,以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小,表面积和体积的比值大,易于散热,因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生,这是与传统电泳技术的根本区别。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205142034_366964_2019107_3.jpgHPCE实际上包含电泳、色谱及其相互交叉的内容,是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进展,它使得分离分析科学从微升级水平进入到纳升级水平,并使得细胞的分析,乃至单分子的分析成为可能。尤其是对样品珍贵,取样极少的生物大分子,毛细管电泳具有绝对的优势。其突出特点是:(1)所需样品量少;(2)分析速度快,分离效率高,分辨率高,灵敏度高;(3)分离模式多,开发分析方法容易;(4)溶剂用量少,经济、环保;(5)应用范围极广。毛细管电泳技术可用于分离分析多种组分,如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析,以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等,还可用于碱性药物分子及其代谢产物、无机及有机离子/有机酸、手性化合物、单细胞分析、药物与细胞的相互作用和病毒的分析。毛细管电泳依分离模式不同,可分为:毛细管区带电泳(CZE)、毛细管胶束电动色谱(MECC/MCKC)、毛细管凝胶电泳(CGE)、毛细管等电聚焦(cIEF)、亲和毛细管电泳(ACE)、毛细管电色谱(CEC)。下面以最常用的毛细管区带电泳(CZE)为例,探讨毛细管电泳原理及分析策略。

  • 毛细管电泳-微流控系统检测尿样中的尿酸和其它成分

    尿样检测是医学最常检测的项目之一,传统方法需要样品量大、时间长、消耗试剂多、成本高。 微流控电泳平台可以很好的监控尿酸的含量、同时分离开来自样品本身或外在的干扰物质如: - 肾上腺素、 - L-DOPA(左旋多巴)、 - 抗坏血酸维生素C、 - 醋氨酚(对乙酰氨基酚,退热净(一种替代阿司匹林的解热镇痛药);扑热息痛)、 - 黄嘌呤、 - 茶碱、 - 咖啡因等 电化学方法可以直接检测尿酸和相关物质,摆脱了传统的方法对温度敏感、测试成本高、还需要相关试剂(酶)等依赖。 微流控系统提供了快速、经济、高通量的尿酸分析方法

  • 【原创大赛】毛细管电泳温控系统的改造方法

    【原创大赛】毛细管电泳温控系统的改造方法

    毛细管电泳温控系统的改造方法温度控制是所有仪器非常重要的一个环节,老仪器,或者国产仪器大多没有温度控制系统,到了炎炎夏日,许多实验就做不成了。这让我们十分苦恼又十分为难!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311201731_478420_2428063_3.jpg以毛细管电泳为例,该仪器本身没有柱温箱,需要通过冷冻液局部致冷,贝克曼的MDQ可以实现温控功能。但是国产仪器构造相对简单,就需要想办法冷却毛细管了。以前看过一部电视剧,叫做《我的团长我的团》,里面谈到了一种机枪叫做马克沁机枪,是水冷的机枪。后面查阅资料,才知道机枪也有风冷机枪。后面我和同学聊天,说起摩托车致冷,他说也有两种方式,即风冷和水冷。但是,风冷的效果没有水冷的效果好!我们的毛细管处在大气环境中,可以将其理解为风冷。可不可以设计一种毛细管,使其也具有水冷效果呢?于是按照这个思路和想法,我进行了如下的设计和实验。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/11/201311201728_478419_2428063_3.jpg毛细管水冷原理图首先到当地药店或者诊所购买一根输液管,在输液管上开两个小孔,将毛细管的绝大部分通过两个小孔插入输液管内部,然后用胶水将开孔处密封,保证水路不漏液。随后取一大桶,里面装满自来水,与输液管的两端构成虹吸系统。必要的时候,为了降低水的温度,里面可以加入冰块,进行致冷。根据书本知识,水的比热容最大,降温效果最好。当然如果有超级恒温水浴槽。理论上就可以实现恒温了,不过降低温度的成本可能会有点高啊!本人在不改变仪器结构和原理的条件下,进行了DIY,完完全全服从毛细管电泳分离的基本原理,通过水冷的方式有效的降低了毛细管体系的温度,使毛细管电泳的体系稳定,测试的结果稳定性更好!不过改造过程还是有风险的,一旦密封座的不好,就会漏液。

  • 毛细管电泳仪器系统

    毛细管电泳仪器系统

    毛细管电泳系统的基本结构包括进样系统、两个缓冲液槽、高压电源、检测器、控制系统和数据处理系统,如图1所示。[align=center][img=,220,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/12/202212291520503108_4240_3237657_3.jpg!w220x174.jpg[/img][/align][align=center]图1 毛细管电泳仪器简图[/align][align=center]1-温度控制系统;2-高压电源;3-高压电极槽;4-毛细管;5-检测器;6-低压电极槽;7-铂丝电极;8-记录/数据处理[/align]检测器由于毛细管内径的限制,检测信号是CE系统最突出的问题。紫外可见法(UV)是CE常用的检测方法,但是受到仪器、单波长等因素的限制。目前应用最广泛的是二极管阵列(PDA)检测器。常规的检测器还有灵敏度很高的激光光热(LIP)和荧光(FL)检测器。近些年,在实际应用中还产生了激光诱导荧光(LIF)、有良好选择性的安培(EC)、通用性很好的电导(CD)助以及可以获得结构信息的质谱(MS)等多种检测器。迄今为止,除了电感耦合等离子体(ICP)和红外(IR)技术没有和CE联用,其他的检测方法均和CE联用并且大部分实现商品化。使用CE时应该根据所分析物质的特点,选择相应分离模式和检测器,以扬长避短,得到最佳分析效果。

  • 求:凝胶电泳成像系统的camera卡的驱动

    美国Alpha Innotech 的凝胶电泳成像系统的camera卡的驱动,使用的是Chemilmager TM IS 4400软件,仪器上写的是 Multilmage Light cabinet ,需要的驱动是仪器上那个卡的驱动,叫着 ITI Image capture device,请使用相同仪器的兄弟姐妹们给我发过来一个吧,愁死了,仪器没法用了

  • 【资料】-芯片毛细管电泳

    [b]芯片毛细管电泳[/b][i]陈相,方禹之[/i] 摘 要:芯片毛细管电泳( ICEC) 是一种新型的微全分析系统 (μ-TAS),具有被分析的样品用量少、分析速度快、灵敏度高、体积小易携带、成本低等优点。文中介绍了芯片毛细管电泳的材料、结构、进样方式、检测手段、主要应用等方面的研究进展,并展望了其发展前景。 关键词:芯片毛细管电泳( ICEC) 芯片 进展  微型全化学分析系统“μ-TAS”自20世纪90年代初兴起以来,就以微型、快速、高效和高通量等特点而成为目前分析化学领域的研究热点之一,Harrison 和 Manz等开展了早期芯片毛细管电泳的开拓性研究工作,而毛细管电泳具有体积小,分离效率高,分析用样品少,分析速度快,分析过程易自动化等特点,所谓芯片毛细管电泳技术就是将样品处理、进样、分离、检测均集成在一块几平方厘米的芯片上的一项微型实验室技术,又称集成毛细管电 泳 芯 片 ( Integrated Capillary Electrophoresis Chips,ICE 芯片) 。这项技术可望发展成微全分析系统和芯片实验室的主流技术。它的研究和广泛应用,将使疾病诊断和治疗、环境监测、新药研究开发、食品安全检测等许多领域产生革命性的变化,已成为当今化学、生命科学、微机械、物理、计算机、微电子技术等领域的重要研究课题之一。到目前为止,芯片毛细管电泳已经用于糖类化合物的分离检测、氨基酸对映体的拆分、蛋白质、多肽分析、神经递质类物质的分离检测、寡核苷酸的分离、DNA 测序和 DNA 限制性片段分离等分离分析研究。1  毛细管电泳芯片的材料和结构 毛细管电泳芯片的基体材料有玻璃片、硅片、塑料、陶瓷和硅橡胶等几种,玻璃是目前使用最多的芯片材料,这是因为它的成功应用主要与其所具有的良好的光学性质、散热性和绝缘性以及已研究透彻的表面性质,在过去40年这些材料的微加工方法在微电子领域得到了成熟发展。ICE 芯片技术是在半导体的微制造技术基础上发展起来的。以玻璃为基片的毛细管电泳芯片制造过程,一般经过沉积、光刻、刻蚀和键合四步工艺。虽然采用干法刻蚀可以在玻璃上获得高深宽比的微管道,但管道的表面比较粗糙,从而降低了电泳的分离效率。所以一般采用湿法刻蚀的方法在玻璃上制作光滑的微管通道。用塑料材料来做基体材料价格便宜,有良好的绝缘性,可施加高电场实现快速分离,成形容易,批量生产成本低,易获得高深宽比的微结构,且电渗流与溶液的 p H 基本无关,具有广阔的应用前景。硅橡胶中最常用的是聚二甲基硅氧烷(PDMS),它有如下优点:价格便宜、可大规模生产,制备容易、耗时短、容易封装。而且耐用性好可重复使用,具有良好的生物适应性和气体通透性,良好的绝缘性和热学稳定性,良好的柔韧性、化学惰性和光学特性等优点。这些优点使它成为近年来新兴的理想微流体芯片材料。[color=red]最后有全文的下载[/color]

  • 求:凝胶电泳成像系统的camera卡的驱动

    美国Alpha Innotech 的凝胶电泳成像系统的camera卡的驱动,使用的是Chemilmager TM IS 4400软件,仪器上写的是 Multilmage Light cabinet ,需要的驱动是仪器上那个卡的驱动,叫着 ITI Image capture device,请使用相同仪器的兄弟姐妹们给我发过来一个吧,愁死了,仪器没法用了

  • 电泳仪分类

    根据电泳仪原理、电泳仪功能、电泳仪的使用方法、电泳仪的用途不同可以为:琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维薄膜电泳、高效毛细管电泳、琼脂糖电泳、SDS-PAGE凝胶电泳、蛋白质电泳、血清蛋白电泳、dna电泳、血红蛋白电泳、蛋白质双向电泳、免疫电泳、等电聚焦电泳、单细胞凝胶电泳、蛋白质凝胶电泳、质粒电泳、对流免疫电泳、变性电泳等。电泳仪分类:1、毛细管电泳仪:其主要部件有0~30kV可调稳压稳流电源,内径小于100μm(常用50~75μm)、长度一般为30~100cm的弹性石英毛细管、电极槽、检测器和进样装置。检测器有紫外/可见分光检测器、激光诱导荧光检测器和电化学检测器,前者最为常用。进样方法有电动法(电迁移)、压力法(正压力、负压力)和虹吸法。成套仪器还配有自动冲洗、自动进样、温度控制、数据采集和处理等部件。 2、常规电泳仪:其组成部件为可调稳压稳流电源,垂直电泳槽,水平电泳槽,电极连接线,支持体【非凝胶性支持体区带电泳(支持体有:①淀粉②纤维素粉③玻璃粉,硅胶等) ;凝胶支持体区带电泳支持体有:①淀粉液②聚丙烯酰胺凝胶③琼脂(糖)凝胶】;陶瓷板,抽水泵,输水管,冰水曹等部件组成。3、其他电泳仪:Tiselius或微量电泳、显微电泳、等电点聚焦电泳技术、等速电泳技术、密度梯度电泳等。是一种非支持体的电泳仪也称为自由电泳法的发展并不迅速,因为其电泳仪构造复杂、体积庞大,操作要求严格,价格昂贵等很少使用。毛细管电泳仪、凝胶电泳仪、垂直电泳仪、微电泳仪、高压电泳仪、水平电泳仪、高效毛细管电泳仪、双向电泳仪、bio rad 电泳仪、脉冲场电泳仪、伯乐电泳仪、北京六一电泳仪上海巴玖均可提供!

  • DNA电泳凝胶成像系统条带很宽,都有哪些因素

    平板电泳,1×TBE琼脂糖1.2%,有总DNA、50V,也有PCR产物、150V,都是等胶凉了以后先点样再放进电泳槽的。VL Photo-print 215 SD成像系统。出的条带都不是很干净的一条线,有点带点“凹”字形,有的就成了“口”字形了(接近点样孔的大小)。帮忙分析下都可能会有哪些因素http://edu.emuch.net/attachment/f6/46/1554936_1329815398_172.jpg总DNAhttp://edu.emuch.net/attachment/ca/e9/1554936_1329815491_811.jpghttp://edu.emuch.net/attachment/a9/d1/1554936_1329815498_911.jpg口字形

  • 对电泳胶上的斑点做定量,用凝胶成像分析系统好,还是用薄层扫描仪好?

    我在做一个课题,将糖类用琼脂糖凝胶电泳分离后,染色,再定量。现在的问题是到底用凝胶成像系统准确些,还是用薄层扫描仪效果好些?看国外的文献,用的是一种叫做“光密度计”的设备,国内难以找到。我的老板曾去相关实验室访问,他说对方用的是薄层扫描仪。我在想是否凝胶成像系统会更好些。不知各位高人有无好的建议给我?

  • 【资料】电泳技术

    电泳技术发展简史 1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。 1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。 1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进,创造了Tiselius电泳仪,建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法,并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的,由于Tiselius在电泳技术方面作出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。 1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法,对氨基酸的分离进行过研究。 从本世纪50年代起,特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后,开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。 1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质,创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳,极大地提高了电泳技术的分辨率,开创了近代电泳的新时代。30多年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍,分辨率最高的分析鉴定技术,是检验生化物质的最高纯度:即“电泳纯”(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法,至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段,即“Last Check”。 由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术,是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展,己受到人们的充分重视。4.2 电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质,操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶,但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 电泳装置主要包括两个部分:电源和电泳槽。电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种,常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板,玻璃板两边由塑料条隔开,在玻璃平板中间制备电泳凝胶,凝胶的大小通常是12cm ? 14 cm,厚度为1mm~2 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。

  • 免疫沉淀反应(三)——对流免疫电泳实验

    对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果,故可用于快速诊断,敏感性比双向扩散技术高10-15倍。血清蛋白在pH8.6条件下带负电荷,所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷,而且它的分子量又较大(为r球蛋白)。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大,也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所谓电渗作用是指在电场中溶液对于一个固定固体的相对移动。琼脂是一种酸性物质,在碱性缓冲液中进行电泳,它带有负电荷,而与琼脂相接触的水溶液就带正电荷,这样的液体便向负极移动。抗体分子就是随着带正电荷的液体向负极移动的。而一般的蛋白质(如血清抗原)也受电渗作用的影响,使泳动速度减慢,但它的电泳迁移率远远大于电渗作用。这样抗原体就达到了定向对流,在两者相遇且比例合适时便形成肉眼可见的沉淀线。一、材料1. 诊断血清:免抗人免疫血清2. 待检血清:人血清3. 阴性对照血清4. pH8.6、离子强度0.05 M 巴比妥缓冲液配方:巴比妥1.84 g,巴比妥钠10.3 g,加蒸馏水1000 ml,调pH至8.6。5. 缓冲琼脂板:将纯化的琼脂用pH8.6离子强度0.025的巴比妥缓冲液(用0.05 M 的巴比妥缓冲液稀释一倍即可)配成1.5%的琼脂,加入0.01~0.02%流柳汞防腐,保存冰箱内备用。6. 电泳仪7. 其他:生理盐水、打孔器、微量进样器二、方法1. 琼脂板的制备根据需要可选用大玻板(6 cm×9 cm)和(小玻片)两种。大玻板约需琼脂10 ml,小玻片约需3.5 ml,凝固后按图打孔,方法同琼脂扩散实验。2. 加样:左侧孔内加患者血清(原血清及10倍稀释血清各占一孔),右侧内加抗血清,每片应有阳性对照。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084632_small.jpg3. 电泳用国产普通电泳仪。其内加0.05 m pH8.6的巴比妥缓冲液,加至电泳槽高度的三分之二处,注意两槽内液面尽量水平。将加好样品的玻板置于电泳槽上,抗原端接负极,抗体端接正极,用2~4层滤纸浸湿作盐桥,滤纸与琼脂板联接处为0.5 cm。以板宽度计算电流,以板的长度计算电压。要求电流量为2~3 mA/cm,即大板为20 mA,小板为10 mA。电压为4~6 V/cm。通电45分钟—2小时后观察结果。4. 结果观察在黑色背景上方,用散射光多个角度观察,在对孔之间有白色沉淀线即为阳性对照应出现明显的白色沉淀线。如果抗原,两极微沉淀条纹不清晰,于37℃保温数小时可增强沉淀条纹的清晰度。5. 影响结果的因素(1)抗原抗体的比例:抗原抗体比例适应时容易出现沉淀带,反之不易发生。当抗体浓度恒定时,被检血清含甲胎蛋白浓度高时,作10倍、20倍或更高倍数稀释可以提高阳性率。随稀释度的增加,抗原抗体的比例发生变化,沉淀线由靠近抗血清孔向逐步移向两孔中间,并可出现不典型的沉淀线如弧形、八字须形、斜线形,这些也是阳性,应予注意。(2)组电泳缓冲液其电泳结果以巴比妥钠—盐酸缓冲液灵敏度最高。巴比妥—巴比妥钠次之,Tris缓冲液更差。(3)电压与电流时电泳时间需要长些:电压电流增大时,电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形,电流过大抗原抗体蛋白易变性,干扰实验结果。一般选择5 ml/cm,电泳时间改为1.5小时。

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