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[color=#c00000][i]同济大学附属东方医院再生医学研究所何志颖研究员表示:项目研究从2018年开始,2021年4月Pre-IND,2024年1月18日IND获批!历时6年艰辛。[b]这是东方医院首个干细胞成药临床试验项目,希望能造福于心衰患者![/b][/i][/color]据报道1月18日,天士力公告其一款创新干细胞药物获得国家药监局批准进入临床试验,主治慢性心力衰竭。公告称,公司收到国家药监局核准签发关于[b]人脐带间充质干细胞注射液(B2278注射液)[/b]项目的《药物临床试验批准通知书》,同意开展伴冠状动脉旁路移植术指征的慢性缺血性心肌病导致的慢性心力衰竭的临床试验。[b]人脐带间充质干细胞注射液[b](B2278注射液)[/b]由上海市东方医院(同济大学附属东方医院)研发,2022年8月天士力与东方医院签署《技术转让(合作)合同》受让相关技术及成果,并在全球范围内,优先在中国开展药品注册申报及后续临床试验开发。[/b]临床前研究证明,B2278注射液可通过旁分泌作用调控心肌组织微环境,对于缺血性心肌病中的心肌细胞组织损伤有明显抑制作用,增加动物心功能,促进血管再生,减少心肌凋亡。心力衰竭是由于心脏结构和/或功能异常导致心室充盈和/或射血能力受损的一组临床综合征,是大部分心血管疾病发展的最终阶段,随着年龄增长,心衰患病率和发病率均明显增加。目前对于心力衰竭的治疗主要包括药物治疗、血运重建、细胞和基因治疗,其中冠状动脉旁路移植术(CABG)是常用的血运重建治疗方式,《2022年中国心血管外科手术和体外循环数据白皮书》显示,2022年CABG占心外科手术总量21.1%。上述治疗手段可以在一定程度上延缓心力衰竭的进展,但不能使死亡心肌再生。伴随CABG手术的心肌局部注射干细胞有望通过刺激心脏细胞的增殖和分化、抑制心肌细胞损伤及免疫调节等作用,修复心肌细胞使心肌收缩增强从而对心力衰竭发挥治疗作用。目前国际上获批的干细胞品种已达十余种,但是尚无治疗心衰的干细胞产品上市。[来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]
[size=16px] [/size] [size=16px][font=宋体]阿霉素([/font][font=&]DOX[/font][font=宋体])是一种有效的抗癌剂,但其临床应用受到剂量依赖性心脏毒性的限制,部分原因是心肌细胞铁死亡。原苏木素[/font][font=&]A[/font][font=宋体]([/font][font=&]PrA[i][/i][/font][font=宋体])是从传统中药苏木中提取的活性成分,具有多种药理特性,包括抗氧化、抗炎和抗凋亡活性。作者之前的研究表明[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]可以通过[/font][font=&]NF-[/font][font=宋体]κ[/font][font=&]B[/font][font=宋体]和[/font][font=&]Akt/mTOR[/font][font=宋体]对心脏移植和自身免疫性心肌炎发挥免疫抑制作用,但[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]在[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的心肌病([/font][font=&]DIC[/font][font=宋体])中的作用及其与铁死亡的关系仍不清楚。[/font][font=&][/font][font=&][/font] [font=宋体][/font][b][font=&]PrA[/font][font=宋体]通过减少[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的铁死亡和维持线粒体稳态来减轻心肌损伤和功能障碍。此外,[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]和[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]是[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]的直接靶点。机制上,[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]与[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]和[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]直接结合,最终抑制[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]磷酸化和随后的磷脂过氧化,同时还阻止[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]自噬降解和随后的[/font][font=&]Fe2+[/font][font=宋体]释放,从而抑制心肌细胞铁死亡。鉴于铁死亡在缺血[/font][font=&]-[/font][font=宋体]再灌注([/font][font=&]IR[/font][font=宋体])损伤发病机制中的关键作用,研究进一步确认[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]可以通过抑制铁死亡对[/font][font=&]IR[/font][font=宋体]引起的心脏损伤产生保护作用。[/font][/b][font=&][/font][/size] [align=center][size=16px] [/size][/align][size=16px][b][font=&]1、[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]减轻[/font][font=&]DOX [/font][font=宋体]引起的心肌损伤和心脏功能障碍[/font][font=&][/font][/b][font=宋体]为了研究[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]在[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的心脏毒性中的作用,作者通过[/font][b][font=宋体]建立[/font][font=&]DIC[/font][font=宋体]小鼠模型[/font][/b][font=宋体]发现,[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]治疗显著提高了[/font][font=&] DOX[/font][font=宋体]处理的小鼠的存活率,部分恢复心脏功能,表明对[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的心脏功能障碍具有保护作用。心肌损伤生物标志物和心脏组织病理学变化评估同样表明[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]可减轻[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的心脏损伤并预防心脏功能障碍, [/font][b][font=&]2[/font][font=宋体]、[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]抑制[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的心脏铁死亡[/font][font=&][/font][/b][font=宋体]为了阐明[/font][font=&] PrA[/font][font=宋体]对[/font][font=&]DIC[/font][font=宋体]保护作用的分子机制,[/font][b][font=宋体]作者对三组小鼠(对照组、[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]组和[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]联合[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]治疗组)心脏进行[/font][font=&]RNA[/font][font=宋体]测序[/font][/b][font=宋体],发现[/font][font=&]DOX [/font][font=宋体]条件组中铁死亡途径的富集程度最高,而[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]治疗显著降低了[/font][font=&] DOX [/font][font=宋体]诱导的铁死亡。[/font][font=&]GSEA[/font][font=宋体]也证实[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]上调铁死亡,[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]下调铁死亡,这表明[/font][font=&] PrA [/font][font=宋体]可能通过抑制铁死亡来预防[/font][font=&] DIC[/font][font=宋体]。接着作者通过[/font][font=&][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]和免疫印迹检测铁死亡标志物,以及通过检测铁死亡的关键特征如铁过载、脂质过氧化和细胞内[/font][font=&]ROS[/font][font=宋体]积累,脂质过氧化产物丙二醛水平,证实了[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]治疗可消除[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的结果,负向调节[/font][font=&]DIC[/font][font=宋体]小鼠的心脏铁死亡[/font] [font=宋体][/font][font=&][/font][b][font=&]3[/font][font=宋体]、[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]减轻[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的心肌细胞铁死亡并维持线粒体功能[/font][font=&][/font][/b][font=宋体]接着作者研究了[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]在体外对大鼠[/font][font=&]H9c2[/font][font=宋体]细胞铁死亡的细胞保护机制,发现[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]有效降低了[/font][font=&] DOX [/font][font=宋体]处理的心肌细胞对体外铁死亡的敏感性。线粒体依赖性铁积累和脂质过氧化是[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的铁死亡的关键因素,作者发现[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]治疗改善小鼠心脏组织中[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]介导的异常特征,如心肌细胞线粒体中[/font][font=&]Fe 2+[/font][font=宋体]和脂质过氧化物含量增加,线粒体收缩和线粒体膜密度增加等。这些结果证明了[/font][font=&] PrA [/font][font=宋体]对[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的线粒体依赖性铁死亡的保护作用[/font][b][font=&]4[/font][font=宋体]、[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]和[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]被确定为[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]的直接结合靶点[/font][font=&][/font][font=宋体]为了确定[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]抑制[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]介导的心肌细胞铁死亡的直接靶点[/font][/b][font=宋体],作者采用人类蛋白质组芯片的方法进行靶蛋白的筛选,[/font][font=&]KEGG [/font][font=宋体]分析表明铁死亡相关通路在[/font][font=&] PrA [/font][font=宋体]结合蛋白组中富集。考虑到[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]在[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]介导的铁死亡中的重要作用,选择评分较高的参与铁死亡途径的前两种蛋白质([/font][font=&]ACSL4 [/font][font=宋体]和[/font][font=&] FTH1[/font][font=宋体])进行进一步分析。[/font][font=&]Pulldown+WB[/font][font=宋体]证实了[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]与[/font][font=&]ACSL4 [/font][font=宋体]和[/font][font=&] FTH1[/font][font=宋体]的结合,分子对接预测了结合模式和结合位点,[/font][font=&]CETSA[/font][font=宋体]发现[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]与[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]和[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]发生物理相互作用,而[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]的[/font][font=&]Ile567/Pro445[/font][font=宋体]和[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]的[/font][font=&]Gln84/Arg23[/font][font=宋体]突变后,[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]与[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]或[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]的互作明显降低。总之,[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]直接与[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]和[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]结合[/font] [font=宋体][/font][font=&][/font][b][font=&]5[/font][font=宋体]、[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]阻止[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]磷酸化和活化来抑制[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的铁死亡[/font][font=&][/font][/b][font=&]ACSL4 [/font][font=宋体]是一种负责代谢多不饱和脂肪酸([/font][font=&]PUFA[/font][font=宋体])代谢的同工酶,其[/font][font=&]Thr328 [/font][font=宋体]磷酸化对于[/font][font=&] ACSL4 [/font][font=宋体]酶促活化以增强铁死亡敏感性至关重要。[/font][b][font=宋体]作者考虑到[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]直接与[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]结合并抑制[/font][font=&]DOX [/font][font=宋体]诱导的铁死亡,作者研究了[/font][font=&] PrA [/font][font=宋体]是否通过干扰[/font][font=&] ACSL4 [/font][font=宋体]的酶促活化来防止[/font][font=&]DOX [/font][font=宋体]诱导的铁死亡[/font][/b][font=宋体],结果证实[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]与[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]的结合会干扰[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]的[/font][font=&]Thr328[/font][font=宋体]磷酸化及其蛋白质表达。此外,[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]与[/font][font=&]ACSL4 [/font][font=宋体]结合会抑制[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的[/font][font=&]ACSL4[/font][font=宋体]磷酸化和酶活性,进一步破坏下游[/font][font=&] PUFA [/font][font=宋体]代谢和脂质过氧化,进而抑制心肌细胞铁死亡[/font] [font=宋体][/font][font=&][/font][b][font=&]6[/font][font=宋体]、[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]减少溶酶体中[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]的自噬降解来预防[/font][font=&] DOX [/font][font=宋体]介导的铁死亡[/font][font=&][/font][/b][font=宋体]据报道,关键的铁蛋白亚基[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]可通过与货物受体[/font][font=&]NCOA4[/font][font=宋体]结合并将含铁的铁蛋白复合物转移到自噬溶酶体进行自噬降解来介导铁蛋白吞噬,从而导致游离[/font][font=&]Fe2+[/font][font=宋体]的释放并增加细胞对铁死亡的敏感性。[/font][b][font=宋体]作者发现[/font][font=&]PrA[/font][font=宋体]可以直接与[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]结合,并恢复[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]诱导的[/font][font=&]H9c2[/font][font=宋体]细胞中[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]蛋白水平和细胞内[/font][font=&] Fe 2+[/font][font=宋体]生成的改变,因此,推测推测[/font][font=&] PrA[/font][font=宋体]可能破坏[/font][font=&]DOX[/font][font=宋体]介导的[/font][font=&]NCOA4-FTH1[/font][font=宋体]互作,随后通过与[/font][font=&]FTH1[/font][font=宋体]结合来干扰铁蛋白吞噬。[/font][/b][font=宋体]免疫共沉淀等试验证实[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]和[/font][font=&] FTH1 [/font][font=宋体]的结合抑制了[/font][font=&] DOX [/font][font=宋体]引发的[/font][font=&] NCOA4-FTH1 [/font][font=宋体]内部相互作用和[/font][font=&] FTH1 [/font][font=宋体]蛋白自噬降解,从而改善了[/font][font=&] DOX [/font][font=宋体]诱导的心肌细胞铁死亡 [/font][b][font=&]7[/font][font=宋体]、[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]介导的铁死亡抑制可减轻缺血[/font][font=&]-[/font][font=宋体]再灌注引起的心脏损伤和功能障碍[/font][font=&][/font][/b][font=宋体]最近的研究表明铁死亡与心肌[/font][font=&] I/R [/font][font=宋体]之间存在很强的相关性,[/font][b][font=宋体]这表明铁死亡干预可能在增强再灌注后心脏功能方面具有治疗益处。因此,作者测试了[/font][font=&] PrA [/font][font=宋体]治疗是否对心肌[/font][font=&]I/R [/font][font=宋体]损伤有治疗作用。[/font][/b][font=宋体]通过建立心肌[/font][font=&] I/R [/font][font=宋体]小鼠模型,发现[/font][font=&]PrA [/font][font=宋体]具有抗铁死亡和保护心肌[/font][font=&] I/R [/font][font=宋体]损伤的活性[/font][/size]
用途: 流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。 流式细胞仪主要由四部分组成。它们是:流动室和液流系统;激光源和光学系统;光电管和检测系统;计算机和分析系统 参数测量原理荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即不经荧光染色细胞内部的荧光分子经光照射后所发出的荧光;②特征荧光,即由细胞经染色结合上的荧光染料受光照而发出的荧光,其荧光强度较弱,波长也与照射激光不同。自发荧光信号为噪声信号,在多数情况下会干扰对特异荧光信号的分辨和测量。在免疫细胞化学等测量中,对于结合水平不高的荧光抗体来说,如何提高信噪比是个关键。一般说来,细胞成分中能够产生的自发荧光的分子(例核黄素、细胞色素等)的含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞比例越高,自发荧光越强;细胞样品中所含亮细胞的比例越高,自发荧光越强。 减少自发荧光干扰、提高信噪比的主要措施是:①尽量选用较亮的荧光染料;②选用适宜的激光和滤片光学系统;③采用电子补偿电路,将自发荧光的本底贡献予以补偿。仪器的操作和使用 ①打开电源,对系统进行预热; ②打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统; ③在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统; ④利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度最强,并要求变异系数为最小; ⑤选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程; ⑥样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统; ⑦因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理; ⑧将所需结果打印出来。热销细胞网是采用Accuri 型2号流式细胞仪,指示符®软件和工作站电脑供应在对市场价格领先的系统的一小部分的功能齐全的流式细胞仪的所有功能。在C6系统包括蓝色和红色激光,四色探测器和正向和侧向散射检测器加上软件,非常直观,你通常将和内收到您的Accuri小时运行的系统。