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色谱保护柱能当析柱

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  • 色谱柱预保护柱

    色谱柱预保护柱

    [align=center][size=21px]色谱柱预保护柱[/size][/align][size=16px] [/size][size=16px] 色谱柱预保护柱,也叫预处理柱,多数人或[/size][size=16px]厂家叫预柱[/size][size=16px]。它的[/size][size=16px]主要[/size][size=16px]作用从名字上也能看出来,是为了保护色谱柱,防止色谱柱堵塞、污染。[/size][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211090959285296_4906_2369266_3.png[/img][/align][size=16px] 预柱有[/size][size=16px]的核心部件就是一片或两片滤片,器过滤作用;有的是一头[/size][size=16px]一[/size][size=16px]滤片,中间填有一定量的填料。[/size][size=16px]预柱和[/size][size=16px]色谱柱配套使用,所以预柱中的填料和配套色谱柱中的一致或类似(填料如果差别大会影响色谱分离效果,甚至影响基线噪声、基线漂移、色谱峰型等)。[/size][size=16px] 预柱使用[/size][size=16px]和维护和色谱柱类似,[/size][size=16px]也是实验前先用甲醇润洗,再走流动相;实验后先[/size][size=16px]用[/size][size=16px]10%[/size][size=16px]甲醇水溶液清洗,再用[/size][size=16px]100%[/size][size=16px]甲醇清洗。[/size][size=16px] 一般实验不用预柱,因为用预柱,一是实验成本会增加,二是用预柱(带填料)[/size][size=16px]时[/size][size=16px],色谱分离有一点像二维色谱,这种情况色谱基线噪声、漂移和色谱分离、色谱峰型有时候会出问题(有时效果不如不加[/size][size=16px]预柱好[/size][size=16px],尤其是受到一定程度污染后)。它虽然是耗材,是为了保护色谱柱,需要定期更换,但经常出问题或更换也是一件既头疼又麻烦的事。[/size][size=16px]预柱使用[/size][size=16px]场景一般有两种,一是样品比较脏,比较容易堵塞或污染色谱柱,这样用它这种便宜件,可以保护色谱柱降低实验成本。二是色谱柱较昂贵,比如有的色谱柱好几万块钱,污染了坏了损失比较大,用预柱,[/size][size=16px]预柱坏了[/size][size=16px]扔了也没多少钱。[/size][size=16px] 预柱一般[/size][size=16px]三五百块钱一只,出问题大多也是滤片堵塞[/size][size=16px](色谱现象压力高,或持续升高,或压力高且不稳定等)[/size][size=16px]、填料污染[/size][size=16px](色谱现象是基线不稳定,基线波动大有漂移,峰型差,保留时间差异大,峰高峰面积差异大等一种或几种)[/size][size=16px],也可以维修,方法和修色谱柱一样,[/size][size=16px]堵塞了清洗或换滤片,填料污染了换填料,[/size][size=16px]但这种件[/size][size=16px]长度体积[/size][size=16px]较小较[/size][size=16px]漂移,维修效果也不是太好,出问题了还是建议直接更换。[/size][size=16px]预柱更换[/size][size=16px]也方便,有的是一体的,整个换掉;有的是分体的,需拆开柱体,将里边[/size][size=16px]的柱芯换掉[/size][size=16px]就行。[/size][size=16px]预柱一般[/size][size=16px]也是有方向的,换时注意方向。[/size][size=16px] 预柱在[/size][size=16px]保护色谱柱方面能起到显著的作用,选用时看情况,综合实验费用实验效果等因数[/size][size=16px],择而用之[/size][size=16px]。[/size]

  • 色谱柱与保护柱式如何连接的?

    [align=center]色谱柱与保护柱式如何连接的?[/align]今天我要做山梨酸的测量审核,早些日子买了kromasil的色谱柱和保护柱,今天就派上用场了!色谱柱和保护柱如何连接啊?这个是摆在我面前的一个大问题。在配件盒里,我找到一个陀螺式的peek连接,但是在peek连接处有一根小黑管,我以为这根小黑管没任何用处,打算扔掉,本着认真的态度,我给经销商打了电话,很快对方给了我回复。对方给我的答复是,[b]这根小黑管叫脉管,如果没有这根脉管,保护柱和色谱柱两头的死体积就非常大了。不同品牌的色谱柱和保护柱不能混用,很大程度上就是因为这根脉管的长度不一样。[/b]然后我开始装保护柱,保护柱没有正反之分,但是套管的一头有螺丝,一头没有螺丝,到底那头向外?后来我仔细分析了一下,螺口应该朝外,这样便于拧紧。第一次使用保护柱,虽然闹出了不少笑话,却也学到不少东西。另外保护柱套管一定要拧紧,这样可以避免漏液!至于PEEK管,只要拧好就行,塑料有张力,松紧合适效果最好!今天实验紧张,图随后再附!

  • 什么是色谱柱的保护柱,有什么作用

    [font=arial, helvetica, sans-serif]色谱柱保护柱采购联系:www.hplcs.cn色谱柱的保护柱,也叫前柱或者预柱,是放置在主要分离柱之前的一段小柱子。它的主要作用是防止主色谱柱被样品中的杂质污染和损坏,从而延长主柱的使用寿命,并保证分离结果的准确性。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]具体来说,保护柱的作用包括:[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]1.防止样品中的杂质进入主色谱柱,降低主色谱柱表面的污染程度。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]2.保护主色谱柱不受样品热稳定性不良、pH值变化、盐度变化等因素影响,延长主柱的使用寿命。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]3.可以固定一些离子,如Na+、Ag+、Cu2+、Fe3+等,为有机反应提供催化作用,提高分离效果。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]总之,保护柱在色谱分析中是非常重要的辅助工具,它可以提高分离准确性,延长主色谱柱使用寿命,提高方法的可靠性。欢迎咨询恒谱生网站客服购买。[/font][img=空柱管柱筛板5]https://www.hplcs.cn/uploads/4ec892851.jpg[/img]

  • 用在线过滤器和保护柱维护色谱柱

    用在线过滤器和保护柱维护色谱柱 http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09503.gif使用在线过滤器和保护柱维护色谱柱能够有效避免微粒和杂质在色谱柱头的聚集,增加色谱柱寿命,在进样阀和色谱柱之间依次安装在线过滤器和保护柱的效果最好.用在线过滤器维护色谱柱: http://www.101718.com/blog/wp-content/uploads/2011/09/zaixianguolvqi-300x251.jpg进样阀和色谱柱之间的在线过滤器能够有效阻止来自流动相,泵密封圈和样品的微粒.在线过滤器筛板的孔径小于色谱柱入口筛板孔径时效果最好.在线过滤器常用孔径为0.5m,系统压力升高时需要更换在线过滤器.用保护柱维护色谱柱: http://www.101718.com/blog/wp-content/uploads/2011/09/baohuzhu-300x264.jpg保护柱实际上通常是比较短的分析柱,通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质达保护色谱柱的目的.保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质.为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱的改变,最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱(如C18分析柱用C18保护柱).保护柱不要选用保留太强的填料,以免使保留整体增加.为了降低保护柱对分离的贡献,可以用比分析柱填料保留弱的填料填充,如用150C18分析柱时,可以选用比表面积较小的300大孔C18填充保护柱.分离明显变差或反压明显升高时需要更换保护柱.用在线过滤器和保护柱维护色谱柱的相同之处:1)两者都有卡套;2)两者所接的位置相同,都是接在色谱柱前面,紧挨着色谱柱;3)两者都有筛板,防止固体颗粒物质到达色谱柱,堵塞色谱柱筛板;用在线过滤器和保护柱维护色谱柱的不同之处:1)在线过滤器只有一个筛板,它的功能比较单一。只能防止固体颗粒物质到达色谱柱。但是它有一些很显著的优点是:i)可以与所有的不同厂家的柱子一起使用;ii)一次性购买长时间使用、甚至永久性使用;2)保护柱的卡套中放置的是保护柱芯,柱芯内含有填料。这些填料的存在可以拦截样品中的一些强保留、强酸性和强碱性物质,防止它们对色谱柱内填料的污染和损坏。因此使用保护柱,可以对色谱柱进行全方位的保护,是保护色谱柱最佳的方式。保护柱的使用有一个缺点就是,填料类型相匹配的要求比较高,通常柱芯的填料需要和色谱柱内的填料相同,如果不同,有可能对分析造成干扰。需要注意的是,保护柱只能对样品中含有的少量的污染物起防护作用,对流动相中pH的超标等并不能够起到很好的保护作用,因为流动相的用量太大了,保护柱不能完全阻止污染物到达色谱柱,超过了它的保护限度。

  • 【共享】色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

    通常,一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好,但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多,而有些因素是操作者很难控制的,如果被分析的样品(如分析生物样品),怎么净化样品也是“脏”的,好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后,在多数情况下总能够人为地减少柱上故障,达到延长柱寿命的目的。 1.加流路过滤器和保护柱 流路过滤器紧靠进样阀后面,位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中,挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差,样品量少过滤更困难,因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱,放在流路过滤器和分析柱之间,或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积,用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当,对分离无影响,好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长,内径2~3mm,用较大粒度的填粒(15~20μm)干法填装,会使分析柱的效能有所降低。 2.避免高压冲击 一般色谱柱都能经得起高压,但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击,主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快,柱切换操作等。等面已讨论过,转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高,在阀的柱侧压力降低(变化超过20%)。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常,手动进样阀的变化不大,自动进样阀比较慢,可能造成压力冲击,可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快,可分步操作。如用3ml/min流速,先从1mL/min到2mL/min,然后再3ml/min,每个间隔应大于20s。 柱切换技术的应用也很广泛,切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化,会很快使柱报废。 3.分离条件 多数色谱柱有很宽的试验条件范围,但具体应用又受到限制,主要是pH值、柱温和流动相的选择。 硅胶为基质的键合相要求pH在2.5~7之间,极端pH的流动相能“溶解”硅胶,使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相,可加预柱(饱和柱)。预柱装在泵和进样阀之间,用分析柱相同的填料填装,或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高,用价格低的一般硅胶疏松地填装,按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡,保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器,以防止硅胶微粒引起的麻烦。 以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后,会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。在4℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,会使N值降低50%。 有些流动相中的溶剂不能用于某些柱,如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面,有些柱与某些溶剂(如四氢呋喃)一旦达到平衡,不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料,可以参见有关资料。 水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中,同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。 4.净化样品 用溶剂溶解的样品,多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来,不会造成危害。 有些样品可能含有微粒物质,样品中的某种组分(如蛋白质)在柱头上沉积下来,组分在固定相上保留很强,溶剂带走柱填料,等等,这些都会造成柱效能下降或柱寿命的影响,有必要采取措施防止柱变坏。 如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色,进样前必须要过滤。虽然流路上装有过滤器和保护柱,但不能代替样品的前处理,样品中过多的微粒会使过滤器和保护柱超载,很快阻塞,或者微粒进入分析柱,所以在进样前必须过滤样品。 若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞,应先试验一下,看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小,表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件,包括换样品溶剂和流动相;或处理样品去掉不溶物质。应尽量用小体积的样品。 有些样品能很强地吸附在柱填料上,这样会降低塔板数,改变样品的保留时间、峰形,并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外,还要加保护柱,定期清洗色谱柱。有时因为疏忽,用对柱有害的溶剂溶解样品,比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品,这样的样品只要进50~100μL到硅胶基质柱中,硅胶就很快溶解而使柱报废。在这种情况下,应立即中和样品,或除去原溶剂中的有害成分。 5.用强溶剂定期冲洗柱 每次工作结束,用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲反相柱,冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。 柱头的烧结不锈钢滤片,要求平整,死体积小,孔径适当(2~5μm)。过滤片选择不好会改变色谱峰形,增加阻力或起不到阻挡污染物的作用(填料很快变色)。 此外,对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点:1、 接头要配套,用同一厂商的组接件;2 、接头之间、柱压帽螺母与密封卡磁之间无微粒(填料),否则收紧时容易咬死;3 、密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动,所以拆开柱头再上紧时要小心,不能使卡套移动,原来柱端的不锈钢滤片和垫片的厚度和强度也不能改变(改变这些附件的性能就促使卡套移动);4 、接头等组接件不要拧得过紧,适当上紧后接上泵试验,分步拧紧,直到不漏为止。还有非常重要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。

  • 液相色谱保护柱

    保护柱的作用在高效液相分析检测样品的过程中,色谱柱会受到来自于样品及色谱系统的污染,从而导致色谱柱耐用性差、寿命缩短。来自于色谱系统的污染主要指:1、HPLC仪器系统中部件磨损而产生的固体颗粒2、以及流动相系统过滤不完全残留的固体颗粒来自于样品的污染主要指:1、未完全溶解的样品或者已完全溶解的样品进入色谱系统中。2、由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异,导致沉淀析出污染系统。特别是对于中药、天然产物、合成中间体及生物药品的检测,因基质的复杂性,色谱柱受污染的情况会更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等,从而带来检测成本高,测试结果不准确等各种影响。保护柱是液相色谱分析中重要的色谱耗材,使用保护柱可大大降低分析柱受污染的程度,延长分析柱使用寿命。保护柱位于进样器与分析柱之间, 作用主要两方面:  1. 截留不溶性颗粒  2. 吸附样品基质中的杂质

  • 【原创】色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

    通常,一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好,但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多,而有些因素是操作者很难控制的,如果被分析的样品(如分析生物样品),怎么净化样品也是“脏”的,好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后,在多数情况下总能够人为地减少柱上故障,达到延长柱寿命的目的。 1.加流路过滤器和保护柱 流路过滤器紧靠进样阀后面,位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中,挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差,样品量少过滤更困难,因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱,放在流路过滤器和分析柱之间,或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积,用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当,对分离无影响,好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长,内径2~3mm,用较大粒度的填粒(15~20μm)干法填装,会使分析柱的效能有所降低。 2.避免高压冲击 一般色谱柱都能经得起高压,但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击,主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快,柱切换操作等。等面已讨论过,转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高,在阀的柱侧压力降低(变化超过20%)。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常,手动进样阀的变化不大,自动进样阀比较慢,可能造成压力冲击,可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快,可分步操作。如用3ml/min流速,先从1mL/min到2mL/min,然后再3ml/min,每个间隔应大于20s。 柱切换技术的应用也很广泛,切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化,会很快使柱报废。 3.分离条件 多数色谱柱有很宽的试验条件范围,但具体应用又受到限制,主要是pH值、柱温和流动相的选择。 硅胶为基质的键合相要求pH在2.5~7之间,极端pH的流动相能“溶解”硅胶,使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相,可加预柱(饱和柱)。预柱装在泵和进样阀之间,用分析柱相同的填料填装,或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高,用价格低的一般硅胶疏松地填装,按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡,保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器,以防止硅胶微粒引起的麻烦。 以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后,会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。在4℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,会使N值降低50%。 有些流动相中的溶剂不能用于某些柱,如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面,有些柱与某些溶剂(如四氢呋喃)一旦达到平衡,不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料,可以参见有关资料。 水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中,同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。 4.净化样品 用溶剂溶解的样品,多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来,不会造成危害。 有些样品可能含有微粒物质,样品中的某种组分(如蛋白质)在柱头上沉积下来,组分在固定相上保留很强,溶剂带走柱填料,等等,这些都会造成柱效能下降或柱寿命的影响,有必要采取措施防止柱变坏。 如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色,进样前必须要过滤。虽然流路上装有过滤器和保护柱,但不能代替样品的前处理,样品中过多的微粒会使过滤器和保护柱超载,很快阻塞,或者微粒进入分析柱,所以在进样前必须过滤样品。 若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞,应先试验一下,看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小,表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件,包括换样品溶剂和流动相;或处理样品去掉不溶物质。应尽量用小体积的样品。 有些样品能很强地吸附在柱填料上,这样会降低塔板数,改变样品的保留时间、峰形,并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外,还要加保护柱,定期清洗色谱柱。有时因为疏忽,用对柱有害的溶剂溶解样品,比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品,这样的样品只要进50~100μL到硅胶基质柱中,硅胶就很快溶解而使柱报废。在这种情况下,应立即中和样品,或除去原溶剂中的有害成分。 5.用强溶剂定期冲洗柱 每次工作结束,用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲反相柱,冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。 柱头的烧结不锈钢滤片,要求平整,死体积小,孔径适当(2~5μm)。过滤片选择不好会改变色谱峰形,增加阻力或起不到阻挡污染物的作用(填料很快变色)。 此外,对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点:1、 接头要配套,用同一厂商的组接件;2 、接头之间、柱压帽螺母与密封卡磁之间无微粒(填料),否则收紧时容易咬死;3 、密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动,所以拆开柱头再上紧时要小心,不能使卡套移动,原来柱端的不锈钢滤片和垫片的厚度和强度也不能改变(改变这些附件的性能就促使卡套移动);4 、接头等组接件不要拧得过紧,适当上紧后接上泵试验,分步拧紧,直到不漏为止。还有非常重要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。

  • 【讨论】色谱柱保护柱

    问下大家在色谱柱的使用时,都有保护柱么?保护柱对于增长色谱柱的使用寿命究竟能起多大的作用?保护柱的选择应注意哪些事项呢?大家都讨论一下

  • 详解:色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

    详解:色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

    [align=center][color=black]色谱柱预防性保护与柱寿命的延长[/color][/align][align=left][color=black] 通常,一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好,但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和基它问题的因素很多,而有些因素是操作者很难控制的,如果被分析的样品(如分析生物样品),怎么净化样品也是“脏”的,对于色谱的柱影响是非常大的。然而采取下列措施后,在多数情况下总能够大为地减少柱上故障,达到延长柱寿命的目的。图1给出了进样达近13000次的色谱柱分离图。[/color][/align][align=center][img=,405,453]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807271743239236_8463_2384346_3.png!w405x453.jpg[/img][img=,401,450]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807271743307537_2458_2384346_3.png!w401x450.jpg[/img][/align][align=center][color=black]图 1 进样达近 12749 次进样谱图[/color][/align][align=center][color=black](a)第78次进样谱图;(b)第12749次进样谱图[/color][/align][color=black] 1.[/color][color=black]加流路过论器和保护柱[/color][color=black]流路过滤器素靠进样阀后面,位于分析柱前。0.5μm烧结不钥钢片夹在死体积很小的套子中.挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过论既费事又带来误差.样品量少过论更困难,因此流路上装过涟器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱,放在流路过论器和分析柱之问.或者代替流路过滤器:保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这种垃圾最终降低柱效能.保护柱是消耗品.分析50-100个比较脏的样品之后就要调换新的.保护柱应该是小体积.用分析柱的同种填料填装.保护柱使用得当.对分离无影响.好像未装保护住一样。有些厂商的商品将保护柱和流路过涟器连在一个单元内.使用起来非常方便。自己填装保护柱都是用短柱、不超过3cm长.内径2-3mm,用较大料度的填粒(15-20μm)干法填装,会使分析柱的效能有所降低。[/color][color=black] 2[/color][color=black].避免高压冲击[/color][color=black] 一般色谱柱都能经得起高压,但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击.主耍是因样品阀的缓慢转动、泵起动快、往切换操作等:前面已讨论过.转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时一切断。在阀的泵侧压力升高.在阀的柱侧压力降低(变化超过20%)。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常。手动进样阀的变化不大.自动进样阀比较慢.可能造成压力冲击.可用氮气代替空气驱动进样阀。因氮压缩系数小。另外泵起动不应过快.可分步操作。如用3mL/min流速,先从13mL/min到23mL/min,然后再倒33mL/min,每个间隔应大于20s。[/color][color=black]柱切换技术的应用也很广泛,切换过程中在色谱柱的入口处压力在军到很大数字之间变化.会很快使柱报废。[/color][color=black] 3[/color][color=black].分离条件[/color][color=black] 多数色谱柱有很宽的试脸条件范圈,但其体应用又受到限制,主要是pH值、柱温和流动相的选择。[/color][color=black]硅胶为基质的键合相要求pH在2.5-7之间,极瑞pH的流动相能“溶解”硅胶,使键合相流失。结果非碱性组分的保留不断减少,碱性组分的保留增加,引起碱性组分峰变宽.如果一定要用高或低pH的流动相,可加预柱(饱和柱)。预柱装在泵和进样阀之间,用分析柱相同的填料填装,或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相,减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高,用价格低的一般硅胶疏松地填装,按期检查硅胶的溶解悄况。用预柱也有不利的影响,即新流动相难以平衡,保留时问不稳定或稳定慢,使用了预柱一定要加流路过论器.以防止硅胶徽粒引起的麻烦。[/color][color=black]以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过动60℃后,会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒技引起柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。在40℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,会使N值降低50%。[/color][color=black]有些流动相中的溶剂不能用于某些柱,如小颗料的聚笨乙烯填料不能用于非水的排阻色谱,另一方面,有些柱与某些溶剂(如四氢呋喃)一旦达到平衡,不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料,可以参见有关资料。[/color][color=black]水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱.色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了 50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中.同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。[/color][color=black]4[/color][color=black].净化样品[/color][align=left][color=black]用溶剂溶解的样品,多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来,不会造成危害。有些样品可能含有橄粒物质,样品中的某种组分(如蛋白质)在柱头上沉积下来,组分在固定相上保留很强,溶剂带走柱填料,等等,这些都会造成柱效能下降或对往寿命的影响;有必要采取措施防止柱变坏。[/color][/align][align=left][color=black] 如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色,进样前必须要过滤。虽然流路上装有过涟器和保护柱,但不能代替样品的前处理,样品中过多的微粒会使过泌器和保护柱超载,很快阻塞,或者微粒进入分析柱,所以在进样前必须过滤样品。[/color][/align][align=left][color=black] 若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞,应先试验一下,看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小,表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件,包括换样品溶剂和流动相.或处理样品去掉不溶物质。应尽 t 用小体积的样品。[/color][/align][align=left][color=black] 有些样品能很强地吸附在柱填料上,这样会降低塔板数,改变样品的保留时间、峰形,并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外,还要加保护柱,定期清洗色谱柱。有时因为疏忽,用对柱有吝的溶剂溶解样品,比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品,这样的样品只要进50-100μL到硅胶基质柱中,硅胶就很快溶解而使柱报废.在这种情况下,应立即中和样品,或除去原溶剂中的有害成分。[/color][/align][align=left][color=black] 5[/color][color=black].用强溶剂定期冲洗柱[/color][/align][align=left][color=black] 每次工作结束.用强溶剂冲洗柱是良好的习惯,可用甲醇、乙腈冲反相柱,冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。[/color][/align][align=left][color=black] 柱头的烧结不锈钢论片,要求平整, 死体积小,孔径适当(2-5μm)。过建片选择不好会改变色谱峰形.增加阻力或起不到阻挡污染物的作用(填料很快变色)。[/color][/align][align=left][color=black] 此外,对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点: ① 接头耍配套,用同一厂商的组接件; ② 接头之间、柱压帽螺母与密封卡套之间无微粒(填料),否则收紧时容易咬死;③ 密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动,所以拆开柱头再上紧时要小心,不能使卡套移动.原来柱端的不锈钢论片和垫片的厚度和强度也不能改变(改变这些附件的性能就促使卡套移动。); ④ 接头等组接件不耍拧得过紧.适当上紧后接上泵试验,分步拧紧,直到不润为止,还有非常里要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。[/color][/align]

  • 液相色谱为什么要使用保护柱

    [align=center][b]液相色谱为什么要使用保护柱[/b][/align]一般情况下,大多数色谱柱峰形变差的原因都是色谱柱收到了污染,而保护柱,顾名思义就是保护色谱柱的,使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命,使其可以大于一万次进样,虽然保护柱的使用会增大柱压,延长分析时间,但是保护柱应当被认为是延长色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲。保护柱的填料应该与分析色谱柱保持一致。良好的、优质的保护柱还可以起到改善分析色谱柱的分离效率。我们实验室进行了尝试,所以购买了液相色谱保护柱!

  • 【原创】色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

    通常,一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好,但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多,而有些因素是操作者很难控制的,如果被分析的样品(如分析生物样品),怎么净化样品也是“脏”的,好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后,在多数情况下总能够人为地减少柱上故障,达到延长柱寿命的目的。 1.加流路过滤器和保护柱 流路过滤器紧靠进样阀后面,位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中,挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差,样品量少过滤更困难,因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱,放在流路过滤器和分析柱之间,或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积,用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当,对分离无影响,好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长,内径2~3mm,用较大粒度的填粒(15~20μm)干法填装,会使分析柱的效能有所降低。 2.避免高压冲击 一般色谱柱都能经得起高压,但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击,主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快,柱切换操作等。等面已讨论过,转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高,在阀的柱侧压力降低(变化超过20%)。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常,手动进样阀的变化不大,自动进样阀比较慢,可能造成压力冲击,可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快,可分步操作。如用3ml/min流速,先从1mL/min到2mL/min,然后再3ml/min,每个间隔应大于20s。 柱切换技术的应用也很广泛,切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化,会很快使柱报废。 3.分离条件 多数色谱柱有很宽的试验条件范围,但具体应用又受到限制,主要是pH值、柱温和流动相的选择。 硅胶为基质的键合相要求pH在2.5~7之间,极端pH的流动相能“溶解”硅胶,使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相,可加预柱(饱和柱)。预柱装在泵和进样阀之间,用分析柱相同的填料填装,或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高,用价格低的一般硅胶疏松地填装,按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡,保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器,以防止硅胶微粒引起的麻烦。 以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后,会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。在4℃以上使用3μm柱,70℃以上使用5μm柱,会使N值降低50%。 有些流动相中的溶剂不能用于某些柱,如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面,有些柱与某些溶剂(如四氢呋喃)一旦达到平衡,不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料,可以参见有关资料。 水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中,同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。

  • 【金秋计划】+保护柱和在线过滤器都可以起到保护色谱柱的作用,二者有什么区别?

    [font=NotoSans-Light]在线过滤器内的滤芯是具有一定孔径的筛板,死体积更小,只能过滤掉一些大于筛板孔径的杂质。清洗的时候,只要取下筛板超声即可。[/font][font=NotoSans-Light][/font] [font=NotoSans-Light]保护柱的卡套中放置的是保护柱芯,柱芯内有填料,相较于在线过滤器,死体积更大。保护柱芯不仅能过滤固体杂质,还能吸附一些强极性、强酸性或者强碱性的物质,防止色谱柱内填料的污染,可以对色谱柱进行全方位的保护。[/font][font=NotoSans-Light][/font]

  • 请问色谱柱的保护柱和在线过滤器有什么异同吗?

    请问色谱柱的保护柱和在线过滤器有什么异同吗?提起液相色谱的保护柱和在线过滤器,很多人会很困惑,它们长得好像呀,是不是一种东西吗?有什么区别呢?[b]1、保护柱[/b]液相色谱的保护柱,顾名思义是用来过滤样品和流动相中的杂质,保护色谱柱,延长色谱柱的使用寿命的。它的安装位置通常在进样器之后,色谱柱前端。保护柱在选择时分为两种:一种是[b]独立式卡套保护柱[/b]。卡套内放有柱芯,柱芯内含有填料,柱芯可以更换,而柱芯是根据色谱柱的类型来选择的。目前[b]Kromasil的保护柱采用的就是这种模式。[/b]另一种是一体化卡套保护柱。这是一种特殊的色谱分析柱构造,色谱柱前端是一体化的,可以直接打开保护柱卡套。这种保护柱带来的死体积较小,但是分析柱选择时的成本较普通分析柱更高。值得注意的是,保护柱的柱芯除了需要根据色谱柱的类型进行选择,在[b]第一次使用时是没有方向的,但初次使用后就有了方向[/b],不能再调换方向使用。这个问题也困惑过我![b]2、在线过滤器[/b]而在线过滤器是用来过滤流动相中的杂质和固体颗粒,用来保护液相系统的。它通常被安装在[b]泵后端,自动进样器的前端[/b]。虽然也是卡套式,但是它的过滤芯只是一个筛板,和色谱柱的类型无关。在实际使用时,由于[b]在线过滤器的安装位置和过滤芯只是一块筛板[/b],它仅仅只能用来过滤流动相中的杂质。而保护柱因为具有和分析柱一样的填料,所以它不仅可以过滤流动相和样品中的杂质,更可以拦截样品中的一些强保留、强酸性和强碱性物质,防止它们对色谱柱内填料的污染和损坏。另外,由于保护柱和在线过滤器的安装都是为了降低仪器的维护成本。所以当系统出现[b]压力变高、杂质峰、色谱峰拖尾、或者色谱柱的分离效果[/b]等问题时,建议直接更换保护柱或者在线过滤器的筛板。本文来源于公众号《色谱学堂》,作者对部分内容进行了部分修改

  • 迪马资料:如何保护色谱柱

    G使用保护柱和在线过滤器G经常用强溶剂冲洗色谱柱G对脏样品进行预处理,最大限度减少强保留组分和颗粒G按照色谱柱生产商的温度上限指标之下操作色谱柱G在压力上限之下10%使用色谱柱G按标注方向操作色谱柱G询问色谱柱生产商确定色谱柱是否可以反冲

  • 色谱柱的保护柱芯怎么换?

    [font=arial, helvetica, sans-serif]恒谱生色谱柱网站: www.hplcs.cn 色谱柱的保护柱芯怎么换[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  更换色谱柱的保护柱芯大致步骤如下:[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  1. 准备工具和耗材:新的保护柱芯、保护柱焊接器、双面胶带、色谱柱安装工具。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  2. 将色谱柱从系统中取出,拆下保护柱上的金属连接件。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  3. 用保护柱焊接器将固定在色谱柱上的旧保护柱芯剪断。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  4. 将新保护柱芯的两端分别用焊接器连接到金属连接件上。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  5. 在保护柱芯的柱底处涂抹胶带,确保保护柱与色谱柱的紧密连接,防止产生泄漏。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  6. 重新将保护柱安装在色谱柱上,使用专用安装工具将保护柱拧紧。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  7. 接通色谱仪系统,进行测试并校验。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  [/font][font=arial, helvetica, sans-serif]  需要注意的是,更换保护柱芯的操作需要十分谨慎,必须保证换芯后的保护柱与色谱柱的连接紧密,且不会产生泄漏。操作前应仔细查看设备说明书,或者请专业技术人员进行操作。[/font][img=空柱管柱筛板5]https://www.hplcs.cn/uploads/4ec892851.jpg[/img]

  • 【原创】高效液相色谱柱保护柱使用中需注意的问题

    最近使用我单位新近半年多的两台Agilent1200色谱仪,都出现了出峰时间比以前延后并出现严重拖尾的情况,经一晚上十个小时的洗柱子,情况并未改观,把色谱柱换到我单位另一台Agilent1100上运行,一切正常,比较两台仪器的区别,一台有保护柱,一台没有,把Agilent1200上的保护柱卸下超声清洗后重新装上,情况大为好转,但还有拖尾现象存在,卸下保护柱,一切正常,峰形十分完美,所以,如果色谱图上出现峰形不好的情况,找不出其他原因,如果使用了保护柱,卸下再试,一般都能解决问题。 所以,如果严格按要求配制流动相,该过膜的过膜,该超声的超声,用后认真清洗管路,可以不用保护柱,如果想使用,也要经常清洗保护柱的内的柱芯。

  • 【干货】三个保护步骤教你如何延长色谱柱寿命

    【干货】三个保护步骤教你如何延长色谱柱寿命

    [align=center][b][i][color=#39a5ef]让你的柱子永远不坏?[/color][/i][/b][/align][align=center][b][i][color=#39a5ef]没那么夸张,但是可以使柱子不那么快就坏。[/color][/i][/b][/align] 有时候你会发现好像你用了大部分的实验室经费在不停的买液相色谱柱。为什么色谱厂家不能把柱子的寿命延长一些呢?实际上,在合理的维护下,柱子可以成为液相分析花费里面很小的一部分。举一个例子,一根典型的反相柱子的花销在3405-4087元之间, 如果它能进样500-1000次,那么每一次进样的花费是3.4-6.8块钱。 尽管费用会随着实验室和特定方法不同而变化,完成一次常规的进样分析,340块钱的总费用是合理的,这也可由做委托检测业务的第三方实验室对类似分析的定价所确认。 因此,我们上面谈到色谱柱的花费在总分析成本中只占1-2%,我们想方设法使柱子的寿命延长一倍,即使单根柱子的成本还是很高,实际上这样做并不能在整个分析成本上降低很多。我自己个人的感觉是如果你用一根柱子进了500针,那这样就已经很划算了。 什么是合理的期望值? 首先,先看一下其他几个色谱学家的经验。 Ron Majors,在他的“色谱柱观察”专栏的某期连载文章中,已经包含了针对色谱各个方面的用户调查结果。他有关色谱柱寿命的大部分专栏文章是在2012年发表的,将作为我们目前讨论的基础。图1是基于Ron Majors 2011年用户调查数据的饼型图。可以看到有回应的调查对象中接近四分之三的进样寿命在500针以上,而且有近二分之一达到了至少 1000次的进样寿命。这个结果对我来说是非常吃惊的,因为它包含了对所有类型的色谱柱的寿命调查,不仅仅是现代液相中的最吃苦耐劳的用得最多的主力色谱柱,4.6×150mm,5μm反相柱,相对于其它种类色谱柱,它甚至有点刀枪不入的味道。[align=center][img=,640,356]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712011335_01_3232762_3.jpg!w640x356.jpg[/img][/align][align=center][color=#888888]图1 分析柱的典型进样次数。数据基于2011 年调查[/color][/align] 为了看清随着时间变化情况改变的情形,我做了一个1997年到2011年四个调查结果的比较图,见图2。可以看到有几个明显的趋势。第一,我注意到灰柱,灰柱代表的是在柱子损坏之前进样小于1000次的百分比,从1997年的76%跌倒了2011年的53%;同时有明显对比的是代表能进样1000以上的黄柱高度增加很快。在上面我有提到我把进样500次作为柱子使用寿命的一个平衡点,我们可以发现在柱子坏之前进样次数达不到500次的用户的数量明显下降,从1997年的接近一半到2011的四分之一。[align=center][img=,640,356]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/12/201712011335_01_3232762_3.jpg!w640x356.jpg[/img][/align][align=center][color=#888888]图2 在LC柱子损坏之前进样次数的比较[/color][/align] 最后我们可看到,有着可怕经历的用户的数量,即那些只能做到100或者更少的进样次数的用户,比例基本上没有改变,徘徊在10%附近。找出这种改变的原因只能是出于推测,但是我很乐意做此推断。我不认为柱子寿命有明显的提升是因为柱子工艺的改进。不可否认,在某个时期,柱子塌陷,或者是柱床中有空腔形成的情况非常普遍,但是在1997年开展调查的时间段,装柱工艺就已经非常成熟了,由于装柱工艺导致柱子损坏的情况很少见。我认为柱子寿命延长的主要原因是用户受到更好的培训,从而对样品前处理和柱子的物理保护更好了。柱子的保护方法就是我想在下文着重说明的。我同时也推断,进样次数很稳定的小于100,与其说是柱子本身的原因,还不如说是实验室操作存在问题,或者说是某些应用方法本身就是“柱子终结者”。 不要未处理样品就进样 在我的LC课堂中,我经常开玩笑的说,延长柱子寿命的最好方法是不要打开色谱柱的盒子。一旦你开始进样,就开始了柱子走向灭亡的道路。[b]样品有两个主要方面可以影响色谱柱—化学性质和物理性质。我们把样品中不要的化学污染物和微型颗粒清除的越好,柱子的寿命就越长。[/b] 使用SPE(Solide-Phase extraction),液液萃取和其他技术来除去化学污染物是LCGC中“Sample Prep Perspectives”专栏常有这样的文章,我就不在这里多说了。一言以蔽之,越多的样品前处理,越少的化学污染物进入色谱柱,柱子寿命就越长。你还得平衡一下样品前处理费用和它带来的好处。比如,你买了柱芯和试剂,并加上你投入时间的费用,你在每个样品上SPE的花费会很容易超过34块钱,这是可以承受500次进样量的反相柱在每个样品分析上分摊成本的5倍多,这差不多需要将色谱柱进样次数从500次延长至2500次才扯平了。 另一方面,如果没有做过任何处理的血浆样品直接进样了,柱子可能就只能进样10次左右。你也要考虑到当更多的样品处理步骤加入的时候的数据质量。我知道,在我们的实验室中,这些措施可以让我们在低浓度的时候收集到有用的数据并得到一致的结果,而不是比较少的前处理步骤可能得到的结果。不论你做没做其他前处理步骤,几乎所有的样品都会从样品过滤,离心或者两者中得到好处。样品经过一个一次性的过滤膜过滤来移除可能堵住柱子进口筛板的细颗粒物。滤膜的孔径不能大于柱子进口筛板的孔径。[b] 大部分3μm填料颗粒的柱子用2μm孔径的筛板,3μm填料粒径的柱子则一般用0.5μm的筛板,填料粒径3-μm的柱子,比如UHPLC,一般用0.2μm的进口筛板。最常用的样品过滤膜是0.45μm孔径的,这个对除了亚2μm之外的其它柱子都已经足够,亚2μm柱子,则需用0.2μm的滤膜。[/b]滤膜可作为预装在一次性注射器中的柱芯,也作为96孔板的过滤板。即使这些过滤装置一般是有效的,但我不是非常强烈的推荐使用。至少有4点使我不同意过滤样品。[quote][color=#999999][b]第一,样品过滤成本比较昂贵,上一次我比较过价格,一次性购买1000份,每份的价格都要高于3.4元,这个与柱子在每次分析中的分摊费用几乎一样。第二,用0.5μm滤膜过滤很慢,而0.2μm滤膜则更慢。第三,如果你在一个监管严格的环境中工作,每一个样品的处理步骤都必须一样,这就是说,如果你过滤了一个样品,那么其他剩余的样品也都要过滤,无论实际上需不需要。最后,如果你要验证你的LC方法,就需要验证所有的过滤步骤。在过滤的过程中,样品会有损失——如果50μL样品经过滤膜,得到的样品就少于50μL。[/b][/color][/quote] 你得证明样品不是选择性的损失,特别是在高浓度或者低浓度的时候。因此,我们可以看到,样品过滤是需要花很多功夫和金钱的。但是你要是不怕麻烦和不要求成本,样品过滤是在大部分的情况下都是能提高柱子的寿命的。[b] 样品过滤的一个替代方法(或者是补充)是在进样之前离心。这是一个简单又相对便宜的方法。只要把样品放进离心管,Eppendorf 离心管或者一个96孔的离心板,再放到小型台式离心机里,调整转速到其最大速度,旋转5-10min。[/b] 这会使会引起筛板堵塞的颗粒沉积到样品瓶的底部,然后把样品转移到进样瓶或板中继续进行分析。这种技术我们在实验室中对需要沉淀蛋白质的样品中已经使用了很多年,而且极少出现颗粒物质相关的问题。 我曾经见过这样的例子,[b]用0.2μm的滤膜过滤之后的样品,UHPLC进样,这种样品还是有一点浑浊并且引起了柱子堵塞,但是这个些微浑浊的样品离心至澄清之后,柱子堵塞的情况就会减少很多。[/b] 使用在线过滤器 我非常认同一个在线的过滤器是LC或者UHPLC中使用成本最低的附加装置,可以提供最大的投资回报。这种过滤器是一个非常简单的改装管配件,其中包含了一个特定孔径的筛板,安装在自动进样器和柱子(保护柱,如果用到的话)之间。现在最普遍的装置是一个直径接近37.5px,长度62.5px不锈钢配件,其中包含一个0.5或者0.2μm孔径的可替换的筛板。另外一种装置是包含相同孔径大小筛板的PEEK手紧配件。这种PEEK过滤器整体是一次性的,但是因为它比不锈钢过滤器中的一次性使用的筛板要贵,使用成本会比较昂贵。这种在线过滤器孔径会选择比柱子筛板孔径小一点,因此它会在柱子堵塞之前先被堵塞。当系统压力开始增加的时候,你就知道在线过滤器中筛板已经开始堵了,需要在完全堵住之前替换掉。[b] 在线过滤器可以起到单独的样品过滤器一样的功能,但在样品前处理时,不需要额外的人力工作。如果你样品离心了,偶尔有一些颗粒没有过滤掉,也会被下游的在线过滤器拦截住。 在线过滤器的另一优点是它能够很便捷的更换——如果你动手能力强,在5min内你可以关掉泵、替换筛板、打开系统并继续实验。[/b]你可能想要重新进一针系统适应性样品来检查一下系统有没有出问题,使用在线过滤器不需要大量的调节和校准,而这些在更换保护柱时都需要重新做过。[b]在线过滤器的最后一个好处是可以过滤掉泵密封件和进样阀因磨损产生的颗粒物。[/b]我强烈建议在每一个LC系统中都安装一个在线过滤器,即使你已经在使用保护柱了。保护柱 保护柱(也叫做预柱)是一种很短的装在分析柱上游的色谱柱。这种柱子长度一般为10-20mm,包含与分析柱一样的填料,使用不大于分析柱筛板孔径的入口筛板和出口筛板。[b] 保护柱有双重功能,第一,入口筛板拦截可能堵塞分析柱的颗粒物,第二,填料与分析柱相同,它可以捕抓住那些可能会强烈或者不可逆附着在分析柱填料上的物质。总所周知,保护柱会延长分析柱的寿命,然而,保护柱有几个潜在的问题。[/b][quote][color=#888888][b]第一,他们比较贵——价格高出分析柱的40%甚至更多,考虑到增加的成本时,你柱子的寿命是否有足够的延长?[/b][/color][color=#888888][b] [/b][/color][color=#888888][b]第二,保护柱到底能持续多长时间?你得知道更换柱子的时间,在保护柱上的化学污染物积累太多之前,就要想办法避免污染物进入到分析柱中。因此,需要对进样次数计数或者做一个系统适应性实验来决定什么时候更换保护柱。[/b][/color][color=#888888][b] [/b][/color][color=#888888][b]第三,你要判断怎么来清洗保护柱。为了防止把污染物冲洗到分析柱中,保护柱和分析柱需要分开来清洗吗?[/b][/color][color=#888888][b] [/b][/color][color=#888888][b]最后,你可能期望将一个20mm长的保护柱加装到150mm长的分析柱上,使柱效提高10%,但是这种情况很少出现。原因是接入一根保护柱后,系统管路中会增加两个柱头连接件和一段管路,而且保护柱没有分析柱装柱那么容易安装,以上两个方面都会降低系统性能。结果就是如果你运气好的话,你会得到一样的理论塔板数,但常见的情况是柱效会稍有降低。[/b][/color][/quote] 要不要用保护柱的选择权在你。[b]保护柱确实能延长分析柱的寿命,但是我个人认为在大多数情况下,这并不值得。 如果你选择使用保护柱,我还是推荐在自动进样器和保护柱之间连接使用一个在线过滤器。[/b]过滤器的钱只有保护柱的零头,它还能延长保护柱的使用寿命,就像它能延长分析柱寿命一样。总结 尽管你不能让你的分析柱寿命无限延长,但还是能用一些非常简单的方法来延长色谱柱这个系统中比较昂贵部件的寿命。首先,按照要求对样品进行前处理。样品前处理的最后一步必须是过滤或者离心。其次,使用在线过滤器来保护保护柱和分析柱,免于被样品中或者系统其它部分产生的颗粒物堵塞。再次,如果保护柱对你的应用有意义的话,则使用保护柱来保护分析柱。最后,在每批样品分析之后,使用强溶剂来冲洗柱子,除去在柱子上的任何强保留物质。 此文章主要是针对柱子污染问题,但色谱柱寿命也取决于检测品种的方法耐用性,如果是难度很大的项目, 譬如化学药品有多个有关物质测定,或中药的指纹谱图,往往方法耐用性 (robustness)较差,柱子寿命也会受到影响。[b]挑选不同选择性的色谱柱来改善分离度是提高方法耐用性的最佳选择。[/b]

  • 液相色谱保护柱的问题

    [color=#444444]新买的液相色谱,用了差不多一个月,峰开始出现拖尾,而且越来越严重,经分析是保护柱有问题(拆下保护柱后峰形变好),我换上装机配的新的保护柱,峰形变好了,但是才一天,峰形就开始变差出现双肩,拆下保护柱后峰形又变好了;现在我都弄懵了,不敢再接新的保护柱,怕又马上变坏了,我用的流动相都没有问题,之前都用过,我仔细分析最近一段时间的峰形,发现差不多一星期前做甲醛之后峰形就变得很差(按照一个商标,用的是2.4-二硝基苯肼溶液衍生化,然后过滤上机的,2.4-二硝基苯肼出了一个很大很大的峰,之后出了一个甲醛衍生物的峰,从这次之后的检测就开始出现拖尾的---我现在都用甲醇,水洗了很多次了,两个保护柱也超声了很多次,还是不行---求指点[/color]

  • 保护柱,检测池怎么清洗

    1、保护柱清洗能用水吗,需要拆卸清洗吗?2,、清洗检测池是不是把保护柱和色谱柱拆下来好一些,不拆的话流量最大能多大,拆下的话能不能直接水洗?

  • 色谱柱,保护柱之间的连接件用什么好?

    有个问题了,色谱柱、保护柱之间的连接件,由于经常需要更换,用什么连接件比较好我现在用的是2个PEEK接头和 PEEK管 连接色谱柱、保护柱的我发现用2个PEEK接头和 PEEK管 连接色谱柱、保护柱后,峰形 拖尾严重了,塔板数也低了

  • 【原创大赛】保护柱对液相分析的重要性

    【原创大赛】保护柱对液相分析的重要性

    保护柱对液相分析的重要性 在液相色谱分析中,样品的前处理程度对分析过程中色谱柱的安定性起着至关重要的作用,当前处理方法和分析方法固定之后,色谱柱的安定性可以通过保护柱来进行提升。本文旨在向您展示保护柱在液相分析中的重要性,以及如何选择适合您的保护柱。 当我们向一些液相色谱工作者询问在日常分析工作中为何不配备使用保护柱时,大家的反馈主要集中在以下几个方面:1、接入保护柱之后系统压力升高了;2、分析时间增加了;3、影响了分析的重现性;4、保护柱与分析柱接口不匹配;5、更换分析柱的成本可以承受。 那么,耽误5分钟,相信看完下文之后,会对保护柱有一个全新的认识。 首先,提出问题:不使用保护柱到底会有些什么样的影响呢? 下面是一组您可能想象不到的照片,它们包含了抗生素、化药、中药、食品和化妆品这五种常见的样品种类,也包含了质谱柱、分析柱和制备柱这三种不同规格的色谱柱类型,它们都是发生在您同行身边的真实案例!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412031341_525731_2222981_3.jpg 审视事实可得到答案:没有保护柱的危害,不容忽视! 一目了然的填料变色、杂质析出导致柱头堵塞和塌陷,这些都能直接的通过色谱图来感知到色谱柱的损坏,具体来说就是谱图中色谱峰型的扩散和分叉(如下图所示)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412031343_525732_2222981_3.jpg 但是,还有许多隐性的不良影响您无法直观的感受到!包括: 1、色谱柱的使用寿命提前终结了,可事实上远远还没有达到它的正常使用期限; 2、系统压力升高了,很快就超出了您所使用仪器的压力上限; 3、反向使用色谱柱,如果不小心导致检测池污染了,那事情可就难办了; 4、更换分析柱,接着就可能面临分析柱批次间差异带来的各种影响; 5、还有备用的色谱柱吗?新购买色谱柱要多少天呢?又要累积多少天的工作量呢? 6、费用,又得花费几千块了; 7、…… 使用保护柱就能很好的避免上面这些问题吗? 答案是肯定的,正确选择和使用保护柱能很好的避免这些不良的影响。 因为保护柱内填充了与色谱柱相同的填料,可以作为色谱柱有效的前延,所以在色谱柱内可能发生的各种色谱行为(包括杂质蓄积、堵塞等),都将会在保护柱内发生。 当保护柱无法正常工作时,只需替换保护柱就能使您的分析系统再次正常运作。 如何正确的选择和使用保护柱呢? 只要了解了下面几点,正确的选择和使用保护柱不再是难事。 1、保护柱不同于在线过滤器,其核心是填料,选择有填料的保护柱才能真正起到保护色谱柱的效果; 2、选择与色谱柱相同或者相近物性值的填料不会对分析产生本质的影响; 3、色谱柱是耗材,保护柱更是耗材,不要等到完全无法使用之后才更换; 4、保护柱与色谱柱的连接也需要考虑样品扩散的问题,配管顶部长度(如下图中V)的可调节性是保护柱能否通用和样品是否会扩散的关键。 5、10mm或20mm长度的保护柱相对150mm或250mm的分析柱来说,不会给分析效率带来负担; 6、保护柱所带来的压力升高,与色谱柱堵塞的压力升高比起来微不足道; 7、分析中的主体永远都是分析柱,更换保护柱对分析重现性的影响远小于更换分析柱。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412031351_525734_2222981_3.jpg

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