液相色谱梯度洗脱法

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现 pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了 pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了 Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦 1260 Infinity生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现 pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了 pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了 Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦 1260 Infinity生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

本文建立了常规紫外检测器下同时测定水体中痕量百菌清的在线固相萃取-高效液相色谱方法，首先通过自动进样器将大体积样品直接注入到在线固相萃取柱上，利用双梯度液相色谱仪的左泵按照设定的清洗溶剂程序将溶剂输入到固相萃取柱上清洗掉杂质，同时待分析物被富集在固相萃取柱上，待清洗过程完成后通过阀切换将在线固相萃取柱切换至分析流路，利用双梯度液相的右按照设定的分析色谱条件将待分析物从固相萃取柱上洗脱至分析柱上进行分离和分析。

本文建立了常规紫外检测器下测定水体中毒死蜱的在线固相萃取-高效液相色谱方法。本方法的原理如图2，首先通过自动进样器将大体积样品直接注入到在线固相萃取柱上，利用双梯度液相色谱仪的左泵按照设定的清洗溶剂程序将溶剂输入到固相萃取柱上清洗掉杂质，同时待分析物被富集在固相萃取柱上，待清洗过程完成后通过阀切换将在线固相萃取柱切换至分析流路，利用双梯度液相的右泵按照设定的分析色谱条件将待分析物从固相萃取柱上洗脱至分析柱上进行分离和分析。

本文建立了常规紫外检测器下同时测定水体中痕量甲萘威的在线固相萃取-高效液相色谱方法，首先通过自动进样器将大体积样品直接注入到在线固相萃取柱上，利用双梯度液相色谱仪的左泵按照设定的清洗溶剂程序将溶剂输入到固相萃取柱上清洗掉杂质，同时待分析物被富集在固相萃取柱上，待清洗过程完成后通过阀切换将在线固相萃取柱切换至分析流路，利用双梯度液相的右按照设定的分析色谱条件将待分析物从固相萃取柱上洗脱至分析柱上进行分离和分析。

本文建立了常规紫外检测器下同时测定水体中痕量甲萘威和百菌清的在线固相萃取-高效液相色谱方法，首先通过自动进样器将大体积样品直接注入到在线固相萃取柱上，利用双梯度液相色谱仪的左泵按照设定的清洗溶剂程序将溶剂输入到固相萃取柱上清洗掉杂质，同时待分析物被富集在固相萃取柱上，待清洗过程完成后通过阀切换将在线固相萃取柱切换至分析流路，利用双梯度液相的右按照设定的分析色谱条件将待分析物从固相萃取柱上洗脱至分析柱上进行分离和分析。

本实验采用岛津LC-2050C液相色谱仪结合Shim-pack GIS C18-P色谱柱对药物洗脱支架中西罗莫司含量进行测定。在本色谱系统下，西罗莫司在2~64 mg/L浓度范围内具有较好的线性关系，线性相关系数大于0.9999；对样品溶液重复进样6次，西罗莫司及其异构体色谱峰保留时间的RSD分别为0.03%和0.02%，峰面积之和RSD为0.06%，仪器精密度良好。实验结果表明，此方法简便易行，准确度好，精密度高，可用于药物洗脱支架中西罗莫司含量检测。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中五氯酚的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中五氯酚的测定。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中苯并（a）芘的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中苯并（a）芘的测定。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中呋喃丹的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前呋喃丹的测定。

甲萘威（Carbaryl）是一种氨基甲酸酯农药，由于杀虫谱广和毒性较低，在农业上应用颇广。研究表明其有一定的蓄积作用，对皮肤粘膜有损害。对斑马鱼的研究表明，甲萘威可导致心脏毒性。百菌清（Chlorothalonil）是广谱性保护性杀菌剂，对多种真菌病害具有预防作用，药效稳定，残效期长。文献报道百菌清在一定剂量下对动物的肝、肾、肺等重要脏器有影响；有致敏、致突变作用。近年来甲萘威和百菌清在农业上的大量使用，也导致环境水体中甲萘威和百菌清残留的风险增加，这也可能危害环境和导致人身风险。因此，国家标准GB/T 5479-2006规定饮用水中百菌清的含量不得高于0.01 mg/L，对甲萘威没有限值规定；美国环境保护局 《饮用水标准》2006版健康指南中建议儿童每天饮用一升水中甲萘威不得高于1 μ g/L，百菌清不得高于0.2 μ g/L；成人每天每千克甲萘威不得高于0.01 mg，百菌清不得高于0.015 mg，并且认为百菌清具有潜在致癌的作用。对于水体中甲萘威和百菌清的检测方法，文献报道有气相色谱法、液相色谱法等等，但由于常规检测器达不到痕量检测低检测限要求，一般要采用大体积液液萃取、离线固相萃取等样品前处理方法，对于液相色谱方法，还需要采用柱后衍生才能达到需要的检测限。这些方法不仅增加了操作复杂程度，降低了方法的准确度和精密度，也增加了操作人员暴露在有机试剂中的几率，增加劳动保护的难度。为解决上述难题，本文建立了常规紫外检测器下同时测定水体中痕量甲萘威和百菌清的在线固相萃取-高效液相色谱方法。本方法的原理如图2，首先通过自动进样器将大体积样品直接注入到在线固相萃取柱上，利用双梯度液相色谱仪的左泵按照设定的清洗溶剂程序将溶剂输入到固相萃取柱上清洗掉杂质，同时待分析物被富集在固相萃取柱上，待清洗过程完成后通过阀切换将在线固相萃取柱切换至分析流路，利用双梯度液相的右泵按照设定的分析色谱条件将待分析物从固相萃取柱上洗脱至分析柱上进行分离和分析。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中甲萘威的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中甲萘威的测定。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中莠去津的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中莠去津等的测定。

本文采用一种新型双梯度液相色谱结合固相萃取建立了一种简便、快速、准确测定环境水体中百菌清的液相色谱方法。该方法大大简化了国标方法和EPA测定方法的复杂性，同时在普及性极高的HPLC-UV仪器上实现了高灵敏度检测，可作为环境水体检测上述农药的常用方法。

采用柱前衍生反相高效液相色谱法分析棉籽粕中十八中氨基酸，衍生试剂为优选的某专用试剂，流动相为醋酸盐缓冲溶液、乙腈、水，二元梯度洗脱，色谱柱为AAK氨基酸专用柱，紫外检测。该方法使用LC-5500液相色谱仪，定性重复性好，定量准确。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中溴氰菊酯的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中溴氰菊酯的测定。

本文采用一种新型双梯度液相色谱结合固相萃取建立了一种简便、快速、准确测定环境水体中甲萘威的液相色谱方法。该方法大大简化了国标方法和EPA测定方法的复杂性，同时在普及性极高的HPLC-UV仪器上实现了高灵敏度检测，可作为环境水体检测上述农药的常用方法。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中微囊藻毒素-LR的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中微囊藻毒素-LR的测定。

采用柱前衍生反相高效液相色谱法分析棉籽粕中十八中氨基酸，衍生试剂为优选的某专用试剂，流动相为醋酸盐缓冲溶液、乙腈、水，二元梯度洗脱，色谱柱为AAK 氨基酸专用柱，紫外检测。该方法使用LC-5500 液相色谱仪，定性重复性好，定量准确。

建立液相色谱串联质谱法（LC-MS /MS 法）测定毛发中毒品及代谢物的方法。以甲醇和0.1%甲酸（含10mmol/L乙酸铵）为流动相，进行梯度洗脱分离，采用电喷雾正离子源模式（ESI+）、多反应监测（MRM）采集数据。仪器灵敏度满足公安部阳性样本的尝试检测要求，可为毒品检测提供依据。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中2,4,6-三氯酚的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中2,4,6-三氯酚等的测定。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中百菌清的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中百菌清的测定。

本方法采用Dionex公司独特的双梯度液相色谱仪，实现了水体中毒死蜱的在线固相萃取，完全消除标准方法中接触二氯甲烷的危险，降低试验难度，获得了精密的结果。

在本应用简报中，我们展示了利用阴离子交换色谱法，在使用四种不同的高盐洗脱缓冲液（最大浓度为 2 M）进行线性和阶梯梯度洗脱条件下，对四种蛋白质进行分离的相关信息。Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统的流路设计中未采用铁/钢质材料，因此可耐受生物分析和生物纯化应用中的严苛条件，从而保持其出色的 UHPLC 性能。使用四种盐（氯化钠 (2 M)、氯化钾 (1 M)、乙酸钠 (1 M) 和四甲基氯化铵 (1 M)）进行线性梯度洗脱时，均可获得极高的保留时间和峰面积精确度。此外，使用 2 M 氯化钠作为洗脱缓冲液时，结果表明保留时间和分离度可保持稳定达 48 小时以上。在此类条件下，采用不锈钢材质的液相色谱系统会面临一些问题，例如盐引起的腐蚀，因此需要执行特殊的、繁杂的清洗步骤。使用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统则可以完全避免此类清洗步骤，从而提高生物分析或生物纯化应用的通量和效率。

采用一种新型双梯度液相色谱结合在线固相萃取技术建立了一种简便、快速、准确测定水中9种有机化合物的方法，本方法实现了样品在线富集及除杂，避免了繁琐的样品前处理过程，大大节约了样品量及时间，且重现性好，适用于水中微囊藻毒素-LR、甲萘威、莠去津、呋喃丹、百菌清、2,4,6-三氯酚、五氯酚、溴氰菊酯和苯并（a）芘等的测定。

本文采用一种新型双梯度液相色谱结合固相萃取建立了一种简便、快速、准确测定环境水体中甲萘威和百菌清的液相色谱方法。该方法大大简化了国标方法和EPA测定方法的复杂性，同时在普及性极高的HPLC-UV仪器上实现了高灵敏度检测，可作为环境水体检测上述农药的常用方法。

我国2002年发布的第235号文件规定食物中磺胺类药物残留量不得超过100 μ g/L。磺胺类药物残留检测常用方法有液相色谱-串联质谱检测法( LC-MS )。液相色谱-荧光检测法( LC-FLD)和液相色谱-紫外检测法( LC-UV)。LC-MS 灵敏度高，但设备昂贵，成本较高 LC-FLD 需要对样品进行衍生化，前处理过程复杂繁琐 LC-UV 应用最广泛，但也存在梯度洗脱检测时间较长等问题。本公司以高效微流电动液相色谱系统（eHPLC），结合毛细管色谱柱，充分体现eHPLC 模式下亚微米色谱介质的优势和特点，可快速检测磺胺类药物残留。

方法开发的最终目标是获得优秀的液相色谱方法，得到可靠且可重现的分析结果。许多因素都会影响方法重现性，包括但不限于：流动相添加剂、pH、梯度斜 率/时间、温度、色谱柱尺寸、填料粒径和形态，以及色谱柱的再平衡是否适合。 方法稳定性还受LC系统设计的影响。系统设计通常反映为系统或模块的性能规格，它概述了获得最佳性能的条件。例如，已知对于需要使用长时间缓梯度的方法或者那些要求单位柱体积的溶剂组成变化较小的方法，使用高压二元泵可以达到最佳性能。很多应用都需要使用长时间缓梯度。常见的应用领域包括生物分子分析（尤其是肽图分析1和游离寡糖分析2）以及天然产物分析（包括传统中药分析3）。在本应用纪要中，我们通过运行通用肽图分析方法比较了三套高压二元LC系统的性能， 并且着重比较了这三套系统的保留时间重现性。理想情况下，在持续数日乃至数年的分析中（具体取决于分析目的），LC系统应始终能够确保不同进样以及不同分析之间的性能一致。此次评估将凸显ACQUITY UPLC I-Class PLUS系统与其它厂家的系统相比，在运行长时间缓梯度方法时的卓越重现性。

美国药典（USP）最新修订版的通则允许对正文中的色谱条件进行调整，以提高色谱分离质量，满足系统适应性的要求。利用 Agilent 1200 系列高分离度快速液相色谱（RRLC）系统和安捷伦方法翻译软件，能够通过调整色谱条件得到一种快速的分析方法。得到快速分离方法的途径有很多，其中之一就是在既有方法（如 USP 方法）的基础上进行调整。本文阐述了如何从 USP 方法开始，结合所允许的色谱条件调整，获得满足系统适应性要求的快速方法。USP 的普伐他汀色谱纯度检查方法中，建议采用粒径为 3.5 μm 的色谱柱，以 1 mL/min 流速进行 30 分钟的梯度洗脱。这些色谱条件可以调整为使用粒径 1.8 μm的色谱柱和 1.5 mL/min 流速，这样可以得到更快的运行速度。除了粒径和流速，为提高运行速度，还可以改变色谱柱尺寸和柱温。使用安捷伦方法翻译软件，能够快速并且有效地将分析方法转换为快速方法。这种从 USP 方法调整得到的快速方法适用于高通量的分析环境，因为新方法最接近经过验证的药典方。