红外法液体制备方法

98%，便于与纯化合物的标准进行对照。多组分试样应在测定前尽量预先用分馏、萃取、重结晶、区域熔融或色谱法进行分离提纯。(2) 试样中不应含有游离水。水本身有红外吸收，会严重干扰样品谱，而且还会侵蚀吸收池的盐窗。(3) 试样的浓度和测试厚度应选择适当，以使光谱图中的大多数吸收峰的透射比处于10%~80%范围内。包括控制浓度和压片的厚薄尺寸。2.制样方法(1) 固体样品的制备a.压片法:将1~2mg固体试样与200mg纯KBr研细混合，研磨到粒度小于2μm，在油压机上压成透明薄片，即可用于测定。b.糊状法:研细的固体粉末和石蜡油调成糊状，涂在两盐窗上，进行测试。此法可消除水峰的干扰。液体石蜡本身有红外吸收，此法不能用来研究饱和烷烃的红外吸收。(2) 液体样品的制备a. 液膜法: 对沸点较高的液体，直接滴在两块盐片之间，形成没有气泡的毛细厚度液膜，然后用夹具固定，放入仪器光路中进行测试。b. 液体吸收池法: 对于低沸点液体样品和定量分析，要用固定密封液体池。制样时液体池倾斜放置，样品从下口注入，直至液体被充满为止，用聚四氟乙烯塞子依次堵塞池的入口和出口，进行测试。(3) 气态样品的制备:气态样品一般都灌注于气体池内进行测试。(4)特殊样品的制备—薄膜法a. 熔融法: 对熔点低，在熔融时不发生分解、升华和其它化学变化的物质，用熔融法制备。可将样品直接用红外灯或电吹风加热熔融后涂制成膜。b. 热压成膜法: 对于某些聚合物可把它们放在两块具有抛光面的金属块间加热，样品熔融后立即用油压机加压，冷却后揭下薄膜夹在夹具中直接测试。c. 溶液制膜法: 将试样溶解在低沸点的易挥发溶剂中，涂在盐片上，待溶剂挥发后成膜来测定。如果溶剂和样品不溶于水，使它们在水面上成膜也是可行的。比水重的溶剂在汞表面成膜

液体制剂 第一节 概述 液体制剂是指药物分散在液体分散介质中所制成的内服或外用制剂。对于由浸出法或经灭菌法制备的液体制剂将分别在浸出制剂和注射剂或其它章节中论述。 液体制剂的分散相，可以是固体、液体或气体药物，在一定条件下分别以颗粒、液滴、胶粒、分子、离子或其混合形式存在于分散介质中。药物在这样的分散系统中，分散介质的种类、性质和药物分散粒子的大小对药物的作用、疗效和毒性等有很大影响。 (一)．特点 液体制剂与固体制剂(散剂、片剂等)相比有以下特点： (1)药物的分散度大，接触面积大，吸收快，能迅速发挥疗效。 (2)给药途径广泛，可用于内服，也可用于皮肤、粘膜和腔道给药。 (3)便于分取剂量，服用方便。 (4)减少某些药物的刺激性。一些易溶性固体药物如溴化物、碘化物、水合氯醛等口服后，因局部浓度过高，对胃肠道有刺激性，若制成液体制剂则易控制浓度而减少刺激。 但液体制剂尚存在许多需要注意和有待解决的问题，如化学稳定性差，药物之间容易发生作用而致减弱或失去原有的效能；以水为溶剂者易发生水解或霉败；非水溶剂的生理作用大、成本高，且有携带、运输、贮存不便等缺点。 (二)．质量要求 (1)溶液型液体制剂应澄明，乳浊液型或混悬液型制剂应保证其分散相粒子小而均匀，振摇时可均匀分散。 (2)浓度准确、稳定、久贮不变。 (3)分散介质最好用水，其次是乙醇、甘油和植物油等。 (4)制剂应适口、无刺激性。 (5)制剂应具有一定的防腐能力。 (6)包装容器大小适宜，便于病人服用。 二、液体制剂的分类 液体制剂尚没有较理想的分类方法，目前常用的分类方法有两种，即按分散系统分类和按给药途径及应用方法分类。 (一)按分散系统分类 分成均相(单相)与非均相 (多相)液体制剂。在均相液体制剂中，药物以分子、离子形式分散在液体分散介质中，没有相界面的存在，称为溶液(真溶液)。非均相液体 制剂中，药物是以微粒(多分子聚集体)或液滴的形式分散在液体分散介质中， 表2—1分散体系的分类 类型 分散相粒子大小 特征 举例 分子分散系 lOOnm 有界面，非均相，热力学不稳定体系，形成混悬剂或乳剂，扩散很慢或不扩散，显徽镜下可见 无眯氯霉素混悬剂，鱼肝油乳剂等 (二)按给药途径与应用方法分类 1．内服液体制剂：如合剂、芳香水剂、糖浆剂、部分溶液剂、滴剂等。 2．外用液体制剂，包括有： (1)皮肤用液体制剂如洗剂、搽剂等。 (2)五官科用液体制剂如洗耳剂、滴鼻剂、含漱剂、滴牙剂等。 (3)直肠、阴道、尿道用液体制剂如灌肠剂、灌洗剂等。 三、液体制剂常用溶剂 优良的溶剂应该化学性质稳定、不影响主药的作用和含量测定、毒性小、成本低、无臭味且具有防腐性等。 (一)极性溶剂 1．水(water) 水是最常用的极性溶剂，本身无任何药理及毒理作用，价廉易得。能与乙醇、甘油、丙二醇等极性溶剂任意混合。但水性液体制剂不稳定，易长霉，不宜久贮。配制水性液体制剂宜用蒸馏水或去离子水，因饮用水杂质较多，故不宜用作溶剂。 2．乙醇(alcohol) 乙醇是除水以外最常用的有机极性溶剂。可与水、甘油、丙二醇等任意混合。乙醇的溶解范围也很广，能溶解大部分有机物质和植物中成分，如生物碱及其盐类、甙类、挥发油、树脂、鞣质及某些有机酸和色素等。其毒性比其它有机溶剂小，20％以上的乙醇即具有防腐作用。但与水相比有成本高，本身有药理作用，易挥发及易燃烧等缺点，其制剂应密闭贮存。 3．甘油(glycerin) 甘油为粘稠性液体，味甜(为蔗糖甜度的60％)、毒性小，能与水、乙醇、丙二醇等任意混合。可内服，也可外用。甘油多作为粘膜用药的溶剂，如酚甘油、硼酸甘油、碘甘油等。在外用液体制剂中，甘油还有防止干燥(作保湿剂)、滋润皮肤、延长药物局部疗效等作用。此外，甘油有防腐性，但成本高。 4．丙二醇(propyleneglycol) 药用品是1，2—丙二醇，性质与甘油相似，但粘度较甘油小，可作为内服及肌内注射用药的溶剂，毒性及刺激性小。 5．聚乙二醇类(polyethyleneglycol，PEG) 低聚合度的聚乙二醇，如PEG300～400，为透明液体，能与水任意混合，并能溶解许多水溶性无机盐和水不溶性有机物。 6．二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO) 本品具有较大的极性，其结构为(CH3)2SO，能与水、乙醇、甘油、丙二醇等相混合，一般用其40％一60％的水溶液为溶剂。本品溶解范围很广，许多难溶于水、甘油、乙醇、丙二醇的药物，在本品中往往可以溶解，故有“万能溶剂”之称。但本品高浓度可引起皮肤灼烧感、瘙痒及发红。 (二)非极性溶剂 1．脂肪油(fattyoils) 脂肪油为常用的一类非极性溶剂，能溶解油溶性药物如激素、挥发油、游离生物碱及许多芳香族化合物等。常用的有麻油、豆油和花生油等植物油，多用于外用制剂，如洗剂、搽剂、滴鼻剂等。本品不能与水、乙醇、甘油等混合。 2．液状石蜡(1iquidparaffin) 本品为无色透明液体，是从石油矿中所得的液状烃的混合物。 3．油酸乙酯(ethyloleate) 本品为淡黄色或几乎无色易流动的油状液体，，酸值≤0.5，碘值75～85，皂化值177～188。 4．肉豆蔻酸异丙酯(isopropylmyristate) 本品常用作外用药物的溶剂，特别当药物需要与患部直接接触或渗透时更为理想。本品刺激性极低，无过敏性，可忍受性优于麻油和橄榄油。 第二节 溶解度、溶解速度及影响因素 一、溶解度及溶解速度 (一) 溶解度 药物的溶解度(solubility)是指在一定温度下(气体要求在一定压力下)，在一定量溶剂的饱和溶液中溶解的溶质量。《中国药典》1995年版二部用以下名词表示药物的溶解度： 极易溶解：指溶质1g(m1)能在溶剂不到lml中溶解。 易溶，指溶质1g(ml)能在溶剂1～不到10ml中溶解。 溶解：指溶质18(ml)能在溶剂10～不到30ml中溶解。 略溶：指溶质1g(m1)能在溶剂30～不到lOOml中溶解。 微溶；指溶质1g(m1)能在溶剂lOO～不到1000ml中溶解。 极微溶解；指溶质1g(m1)能在溶剂1000～不到10000ml中溶解。 几乎不溶或不溶：指溶质1g(m1)• 在溶剂10000ml中不能完全溶解。

98%，便于与纯化合物的标准进行对照。多组分试样应在测定前尽量预先用分馏、萃取、重结晶、区域熔融或色谱法进行分离提纯。(2) 试样中不应含有游离水。水本身有红外吸收，会严重干扰样品谱，而且还会侵蚀吸收池的盐窗。(3) 试样的浓度和测试厚度应选择适当，以使光谱图中的大多数吸收峰的透射比处于10%~80%范围内。包括控制浓度和压片的厚薄尺寸。2.制样方法(1) 固体样品的制备a.压片法:将1~2mg固体试样与200mg纯KBr研细混合，研磨到粒度小于2μm，在油压机上压成透明薄片，即可用于测定。b.糊状法:研细的固体粉末和石蜡油调成糊状，涂在两盐窗上，进行测试。此法可消除水峰的干扰。液体石蜡本身有红外吸收，此法不能用来研究饱和烷烃的红外吸收。(2) 液体样品的制备a. 液膜法: 对沸点较高的液体，直接滴在两块盐片之间，形成没有气泡的毛细厚度液膜，然后用夹具固定，放入仪器光路中进行测试。b. 液体吸收池法: 对于低沸点液体样品和定量分析，要用固定密封液体池。制样时液体池倾斜放置，样品从下口注入，直至液体被充满为止，用聚四氟乙烯塞子依次堵塞池的入口和出口，进行测试。(3) 气态样品的制备:气态样品一般都灌注于气体池内进行测试。(4)特殊样品的制备—薄膜法a. 熔融法: 对熔点低，在熔融时不发生分解、升华和其它化学变化的物质，用熔融法制备。可将样品直接用红外灯或电吹风加热熔融后涂制成膜。b. 热压成膜法: 对于某些聚合物可把它们放在两块具有抛光面的金属块间加热，样品熔融后立即用油压机加压，冷却后揭下薄膜夹在夹具中直接测试。c. 溶液制膜法: 将试样溶解在低沸点的易挥发溶剂中，涂在盐片上，待溶剂挥发后成膜来测定。如果溶剂和样品不溶于水，使它们在水面上成膜也是可行的。比水重的溶剂在汞表面成膜。

植物细胞原生质体制制备与融合2006-11-20 17:14植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。１９３７年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。１９６Ｏ年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶，成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体，开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备（１）取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强，再生与分生比例较高。常用的外植体包括：种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗２～３次，然后浸人 ７０％酒精消毒后，再放进 ３％次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次，并用无菌滤纸吸干。（２）酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液：反应液应是一种ＰＨ值在５·５～５·８的缓冲液，内合纤维素酶０．３%～３．０%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等，②酶解：除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃～30℃,2～4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标，说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应，避免脆弱的原生质体受到更多的损害。（３） 分离 在反应液中除了大量的原生质体外，尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取２００～４００目的不锈钢网或尼龙布ｊ叭ｉ过滤除渣，也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。（４） 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂，应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤２～４次。 （5） 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁，此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中，则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察，残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测，基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外，尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合（1）化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器，试剂易于得到，因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇（ＰＥＧ）纳合成钙高ｐＨ诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法（在无菌条件下进行）：按比例混合双亲原生质体-----滴加 ＰＥＧ溶液，摇匀，静置----滴加高钙高ｐＨ值溶液，摇匀，静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。（２）物理法诱导融合 １９７９年Ｓｅｎｄａ等发明了微电极法诱导细胞融合。１９８１年Ｚｉ。。ｍａｎｎ等提出了改进的平行电极法，现简介如下：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂，作用条件比较温和，而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当，亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因，要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近，有人提出以Ｘ射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤，融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移；致死量处理后合ｕ可能产生没再仅体万染色体ｗ划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法，大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型．2） 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体，发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3） 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成，可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种，某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4） 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或ＤＮＡ片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞，一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养（液体或固体），再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞：若一方细胞大，另一方细胞小，则大。小细胞融合的就是杂合细胞；若～方细胞基本无色，另一方为绿色，则自绿色结合的细胞是杂合细胞；如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征，则可作为识别杂合的标志；发现ｈ述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出，移置再牛培养基培养。（2）以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信，但实验者有时会受到仪器的限制，工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补：不同基山叨的白化突变株出aBｘAh，可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株需要提供外源激素Ｂ才能生长，则甲株与乙株融合，杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选：假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性（如抗卡那霉素），则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选：根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点，用它处理受体原生质体，只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复，等等。 （３）采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株，可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ，见８．２．２．２）和随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。（４）根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示，逐渐将眼光转向细胞融合，试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。１９３７年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。１９６Ｏ年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶，成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体，开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备（１）取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强，再生与分生比例较高。常用的外植体包括：种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗２～３次，然后浸人 ７０％酒精消毒后，再放进 ３％次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次，并用无菌滤纸吸干。（２）酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液：反应液应是一种ＰＨ值在５·５～５·８的缓冲液，内合纤维素酶０．３%～３．０%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等，②酶解：除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃～30℃,2～4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标，说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应，避免脆弱的原生质体受到更多的损害。（３） 分离 在反应液中除了大量的原生质体外，尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取２００～４００目的不锈钢网或尼龙布ｊ叭ｉ过滤除渣，也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。（４） 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂，应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤２～４次。 （5） 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁，此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中，则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察，残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测，基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外，尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合（1）化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器，试剂易于得到，因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇（ＰＥＧ）纳合成钙高ｐＨ诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法（在无菌条件下进行）：按比例混合双亲原生质体-----滴加 ＰＥＧ溶液，摇匀，静置----滴加高钙高ｐＨ值溶液，摇匀，静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。（２）物理法诱导融合 １９７９年Ｓｅｎｄａ等发明了微电极法诱导细胞融合。１９８１年Ｚｉ。。ｍａｎｎ等提出了改进的平行电极法，现简介如下：将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后，插入微电极，接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲，则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂，作用条件比较温和，而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当，亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因，要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近，有人提出以Ｘ射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤，融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移；致死量处理后合ｕ可能产生没再仅体万染色体ｗ划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法，大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型．2） 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体，发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3） 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成，可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种，某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4） 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或ＤＮＡ片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞，一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养（液体或固体），再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞：若一方细胞大，另一方细胞小，则大。小细胞融合的就是杂合细胞；若～方细胞基本无色，另一方为绿色，则自绿色结合的细胞是杂合细胞；如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征，则可作为识别杂合的标志；发现ｈ述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出，移置再牛培养基培养。（2）以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信，但实验者有时会受到仪器的限制，工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补：不同基山叨的白化突变株出aBｘAh，可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补：甲细胞株缺外源激素Ａ不能生长，乙细胞株需要提供外源激素Ｂ才能生长，则甲株与乙株融合，杂合细胞在不含激素Ａ、Ｂ的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选：假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性（如抗卡那霉素），则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选：根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点，用它处理受体原生质体，只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复，等等。 （３）采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株，可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ，见８．２．２．２）和随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。（４）根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。

目前工作中遇到这样一个液体制剂，因为主成分溶解性很差，所以制剂中加了很多磷脂和表面活性剂的成分，所以外观上油油的，最终成为油性的澄清液体，这样就给分析检测的前处理造成了很大麻烦，请问有没有能把油类成分去掉的好方法，减少对液相检测的干扰并保护柱子？ [em09508]请大家多帮忙！

那位有[医药中间体制备方法与加工技术及质量检测标准实用手册]第三篇、第四篇全部内容文件有：编委会、目 录、第一篇、第二篇、第三篇、第四篇、第五篇、第六篇、第七篇、第八篇、第九篇、第十篇、附 录。其它我都有了，就缺这两篇。

我在做季铵盐氯铝酸离子液体，三乙胺盐酸盐与无水氯化铝络合（摩尔比为1:2.5），最近做时（条件与之前的一样）发现制备的离子液体颜色比之前的要浅，而且最重要的是现在制备的离子液体中会有沉淀，我怀疑是无水氯化铝没有结合上，不知道为什么，哪位大牛帮忙解决一下呗。急需……下谢谢各位了！

Si NP材料XPS表征，液体制备成固体粉末，应该选那种干燥方式比较好呀？

液体液样的制备是将少量样品涂于两片红外透明的窗片（KBr、NaCl等）之间。窗片的互相挤压形成一个样品薄层，样品的成分决定了选择哪种窗片。对于无水的样品，窗片材料是KBr。对于含水样品, KRS-5 较为适合。固体固体样品对光谱学家提出挑战。样品的熔点为我们指出首先该考虑哪种技术。对于熔点低于72。C的样品，用适当的溶剂将样品溶解，成膜于KBr窗片上是最先考虑的。如果因为基线不好或是溶解性差而不成功，可以考虑在两片KBr窗片内熔化成膜。如果这也不行，样品可进行KBr压片。对于熔点高于72。C的样品，首选的技术是KBr压片。对于聚合物样品，成膜法是首选，接着是热熔法和压片法。

各位版友，本人使用了一台waters 2796 半制备液相， 仪器目前没有任何故障，但是在设定好的收集文件运行时， 收集器不流液滴，不收集，这是什么原因呢？仪器没有报错，程序也是一直使用的，当开始运行sequence时候收集器会在色谱进样前一直滴液，当梯度开始后收集器移动到制定的收集瓶口等待收集，但是到了收集时间的时候就没有液滴留下，之后收集器会到下一个瓶口，知道程序结束。整个过程没有报错，但是一滴液体都没有收，样品都被色谱吃掉了。。呜呜呜快来帮我 谢谢

红外光谱的样品制备第一部分液体 液样的制备是将少量样品涂于两片红外透明的窗片（KBr、NaCl等）之间。窗片的互相挤压形成一个样品薄层，样品的成分决定了选择哪种窗片。对于无水的样品，窗片材料是KBr。对于含水样品, KRS-5 较为适合。固体 固体样品对光谱学家提出挑战。样品的熔点为我们指出首先该考虑哪种技术。 对于熔点低于72。C的样品，用适当的溶剂将样品溶解，成膜于KBr窗片上是最先考虑的。如果因为基线不好或是溶解性差而不成功，可以考虑在两片KBr窗片内熔化成膜。如果这也不行，样品可进行KBr压片。 对于熔点高于72。C的样品，首选的技术是KBr压片。对于聚合物样品，成膜法是首选，接着是热熔法和压片法。 对于熔点未知的样品，结晶度的检测将会指明哪种技术将会成功。高结晶度的样品用KBr压片法较好，对于低结晶度的样品，成膜和热熔会得到更好的谱图。第二部分液体样品 液体样品的分析有多种方法。在本文中，我们主要探讨所使用的制样方法及一些有关的潜在问题。纯样品技术 分析液体样品的最常用方法就是将一滴液体夹在两片盐片中间，过程如下：将一滴样品滴于合适的盐片上，几秒钟后，将另外一块盐片合上，这样液体被夹在两块盐片之间，变成薄膜状。当然，选用的盐片要与分析的液体样品兼容。不含水的样品可采用KBr（32×5mm）盐片，含水样品则采用KRS-5盐片，这几种晶体材料的选用主要是根据它们在红外段的透光范围（优于4000－450cm-1）和稳定性。每次一个样品做好后，用带合适的溶剂的棉花清洗，然后在倒有甲醇的鹿皮或鸡皮上抛光。KBr盐片需要经常进行抛光，以维持其表面的光洁。由于KRS-5晶体有毒，所有只有当其表面被划伤或污染时才需要抛光，而且要求专业人员来完成。ATR技术 水平的单反射ATR主要是由一个ZnSe晶体的凹槽组成，尽管ZnSe晶体的截止频率为650－700CM-1，但它比其它宽频带的材料要更加耐用。 在样品分析好后，要用适当的溶剂将样品冲掉，再用棉花球擦洗干净，这种材料不需要经常抛光。潜在问题：但它最大的问题就是样品谱图的非线性，主要指峰位的位置和强度不满足Beer－Lambert法则：A = abc 这里, A =吸收值a =摩尔吸收系数 b = 光程c =浓度 Beer-Lambert定理主要是针对定量分析的，谱图检索是定量分析的一种类型，因为谱图检索是以吸收强度为基础的，透射实验一般是线性关系，可以用于定量分析；由于ATR的技术特点导致的，ATR实验一般不能用于定量分析。 最常见的导致非线性的原因是透过样品的光程不确定性。分辨率为2时，样品区红外光的聚焦点直径有6MM，如果此时样品区样品厚度薄厚不均或碰巧有气泡或，就会引起此处光程不同。这些因素将导致谱图在各个波段的吸收强度的不准确，换句话说，谱峰的强度比实际强度或者高或者低，从而降低谱图检索的质量，图1是纯3,4-二氯甲苯的红外吸收图，在808 cm-1波段处的吸收强度为0.39，而邻近870 cm-1处是0.24 (A808 cm-1/A870 cm-1 = 1.6)图2是同一个样品但是通过在晶体上做成一层薄厚不均的膜而得到的谱图，它的吸收率与上图已经有差别了，808 cm-1处的吸收率是0.76，而870 cm-1处却为0.62(A808 cm-1/A870 cm-1 = 1.2)，与图1相比，已有25％的差距，这必然会导致谱图检索结果正确率的下降。将样品聚焦点直径为6mm时得到的图与聚焦点直径为3mm时得到的图相减，用差谱的结果来进行分析：由薄厚不均导致的非线性将会使差谱减不干净，有很大的残余峰，我们可以通过定期对晶体进行抛光来降低这种误差。 经常引起液体样品谱图的非线性的另一个原因是样品的厚度。液样太浓将会导致谱图的吸收太强，而多数红外仪器的检测器的线性响应范围是0到1.2个吸收单元，大于1.2时就会引起线性问题。有时非线性会使谱图中吸收峰的头部成平头状，在我们的实验室中只接受吸收单元1.2的谱图，图3也是上面提到的样品的谱图，但样品的厚度却远远大于前者。谱图中最强的吸收单元已经超过了30个吸收单元，808 cm-1处的吸收度为1.66，870 cm-1处为0.94(A808 cm-1/A870 cm-1 = 1.76)，相比而言，产生了10％的误差，这种不同波段的吸收值的相对性的差异将会给谱图检索带来负面影响。第三部分成膜技术 涂膜技术是用在熔点低于72。C的样品和低结晶度的样品，比如象高聚物，涂膜法也可在其他方法失败后试用。涂膜的一般过程 先将样品溶于适当的溶剂中。然后将数滴溶液滴于惰性的基质上，溶液挥发后在基质上留下一层薄膜。如果惰性基质是红外透明的，可直接检测或将薄膜剥下检测。选择合适的溶液 选择溶液最主要的标准是容易挥发（除了最明显的一点，可溶解样品）。这意味着必须采用低沸点溶剂。蒸发溶剂所需的热量越少，样品所受的影响就越小。另外，溶剂越容易去除，残留的溶剂越少。以下列出的溶剂将首先考虑：氯仿(BP. 61.2° C)，丙酮(BP. 56.2° C)，三氯乙醇(BP. 151° C)，邻二氯苯(BP. 180.5° C)和水(BP. 100° C)。在选择成膜技术时这五种溶剂适用于85％的样品。 纯溶液的光谱也应准备着作为参照。将溶剂的谱图与成膜样品的谱图作比较是判断是否有溶剂残留的一个好方法。每取用一次溶剂便将其参比谱图更新一下也是一个好习惯。选择基质 一般不将薄膜从基质上取下，基质和薄膜是一起放入光谱仪的。所以需要的是对红外透明的基质。除了溶剂是水采用KRS-5晶体外，一般最常用的基质是KBr晶体。如果决定将薄膜取下，玻璃将是不错的选择。成膜 经验告诉我们最好使用少量的稀溶液（3－5滴），多次在基质上形成薄膜，这将比用浓溶液形成的厚膜和大量的溶液一次成膜要好的多.这将使薄膜中的溶剂残留最少。有时，当你成膜的是晶体样品，谱图上会显示非常严重的散射和基线倾斜。这在单层成膜时经常发生，在多层成膜时也会出现。我们认为这是因为最先沉淀的晶体成为了形成大晶体的“晶核”，正是这些大晶体造成光的散射，使基线倾斜。在我们实验室为了防止这种问题的发生，我们经常在晶体的两面都涂上一层薄膜，有时在两块晶体的两面都涂上一层薄膜，一共形成四层膜。这个能解决绝大部分的散射问题。在蒸发溶剂时，使晶体上的溶液保持流动。这将帮助您得到厚度均匀的膜。我们经常将晶体放在一小片可反复使用的纸卡上（大约2”×3”），后不停的敲击纸卡的背面，使溶液保持流动，或者用移液管末端不停的搅拌搅拌，如果去除溶剂需要加热，而晶体又是水溶性物质，比如KBr，那你应该先加热卡片，去除其中含有的水汽。如果你不这样作，晶体的底部会吸水雾化，这将使你的谱图的基线倾斜。在我们的实验室，我们使用加热灯来慢慢清除水汽，如果是在一个较为潮湿的环境中，应该一直用灯加热 以去除环境中水汽的影响。注意采取预防措施，尤其是在使用易燃溶剂时。潜在问题 在成膜技术中最严重的两个问题是薄膜厚度不均匀和溶剂残留。薄膜的厚度不均将导致谱图的非线性。而在薄膜技术中应该时刻注意溶剂残留的问题。总是将得到的谱图与溶剂谱图的主峰作比较。如果结果显示有溶剂残留，有时可通过继续加热来去除溶剂。如果你不能确定某个特征峰是溶剂还是样品产生，那样品必须用另一种方法检测或使用另一种不会产生该特征峰的溶剂。另一个可能产生的问题是，某些样品在加热和有氧气的情况下易发生氧化。这将导致在1740 cm-1上有一个C=O 的小峰。有几种方法可以防止或减小这种氧化。在惰性气氛中蒸发溶剂，比如在氮气中，这样可以减少氧气的存在。或是减少加热量来化小这个问题。可能的话，你可以使用更低沸点的溶剂，或用真空泵来抽取溶剂。

[align=center][font='times new roman'][size=34px]离子液体嵌入巯基硬脂酸功能化固定相的制备[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]咪唑离子可以为目标分析物的分离提供多种相互作用，是一种理想的亲水作用配体，适用于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分离亲水[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]性化合物。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]烯丙基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙烯基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]咪唑（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]AVI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）是一种含有两个乙烯基的咪唑类化合物，可作为嵌入极性基团，提高反相色谱固定相的分离效率。在二氧化硅表面嵌入极性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]AVI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]有两个主要优点：一方面，残留的硅烷醇会被嵌入的极性配体屏蔽，从而减少硅烷醇对分析物保留的负面影响，获得更对称的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]峰；另一方面，嵌入的极性基团可以作为亲水功能配体，同时使制备的固定相可以在富水的流动相[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]使用。此外，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]AVI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]还可以进一步与含硫醇基团的化合物反应，引入另一种疏水功能单体，从而得到具有多种保留机制的混合模式色谱固定相。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]首先制备巯丙基化硅球（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-MPS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]），随后通过自由基介导的巯基键合反应将[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]烯丙基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙烯基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]咪唑（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]AVI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）键合到[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-MPS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]表面，并与巯基乙酸十八烷基酯（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ST[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）进一步反应以提高疏水选择性，获得新型咪唑类离子液体嵌入巯基硬脂酸功能化色谱固定相（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-AVI-ST[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]），采用傅里叶变换红外光谱表征可证明其制备成功[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]混合模式色谱相较于传统的单一模式色谱法，表现出更好的分离选择性、分辨率、分离效率和负载量。本课题意在采用自由基介导的巯基键合反应合成一种新型咪唑类离子液体嵌入巯基硬脂酸功能化色谱固定相，并对其分离性能进行评价。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]首先制备巯丙基化硅球（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-MPS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]），随后通过自由基介导的巯基键合反应将[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]烯丙基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙烯基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]咪唑（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]AVI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）键合到[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-MPS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]表面，并与巯基乙酸十八烷基酯（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ST[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）进一步反应以提高疏水选择性，获得新型咪唑类离子液体嵌入巯基硬脂酸功能化色谱固定相（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-AVI-ST[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]），采用傅里叶变换红外光谱表征可证明其制备成功。[/size][/font] [align=left][font='times new roman'][size=18px]仪器与试剂[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=17px]仪器设备[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]本实验所用仪器设备如表所示：[/size][/font] [align=center][font='times new roman'][size=14px]表[/size][/font][font='times new roman'][size=14px] [/size][/font][font='times new roman'][size=14px]仪器设备[/size][/font][/align][table][tr][td][align=center][size=14px]仪器名称[/size][/align][/td][td][align=center][size=14px]生产厂家[/size][/align][/td][/tr][tr][td] [size=14px]P230II[/size][size=14px]型高压恒流泵[/size] [size=14px]UV230II[/size][size=14px]紫外[/size][size=14px]-[/size][size=14px]可见检测器[/size] [/td][td] [size=14px]大连依利特分析仪器有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]GLK[/size][size=14px]型装柱系统[/size] [/td][td] [size=14px]无锡加莱克色谱科技有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]FTIR-850[/size][size=14px]傅里叶变换红外光谱仪[/size] [/td][td] [size=14px]天津港东科技股份有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]SB-100DT[/size][size=14px]超声波清洗机[/size] [/td][td] [size=14px]宁波新芝生物科技股份有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]RCT basic[/size][size=14px]基本型数显加热磁力搅拌器[/size] [/td][td] [size=14px]德国[/size][size=14px]IKA[/size][size=14px]公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]FA2004[/size][size=14px]电子天平[/size] [/td][td] [size=14px]上海舜宇恒平科学仪器有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]DZF-2B[/size][size=14px]型真空干燥箱[/size] [/td][td] [size=14px]北京市永光明医疗仪器有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]DZF-6020[/size][size=14px]型真空干燥箱[/size] [/td][td] [size=14px]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]H2050R[/size][size=14px]大容量高速台式冷冻离心机[/size] [/td][td] [size=14px]湖南湘仪实验室仪器开发有限公司[/size] [/td][/tr][/table] [align=left][font='times new roman'][size=17px]实验试剂[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]本实验所用化学试剂如表所示：[/size][/font] [align=center][font='times new roman'][size=14px]表实验试剂[/size][/font][/align][table][tr][td] [/td][td][align=center][size=14px]试剂名称[/size][/align][/td][td][align=center][size=14px]生产厂家[/size][/align][/td][/tr][tr][td] [size=14px]球形多孔硅胶[/size] [/td][td] [size=14px]日本[/size][size=14px]DAISOGEL[/size][size=14px]公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]（[/size][size=14px]3-[/size][size=14px]巯丙基）三乙氧基硅烷（[/size][size=14px]MPS[/size][size=14px]）、[/size][size=14px]2,2-[/size][size=14px]偶氮二异丁腈（[/size][size=14px]AIBN[/size][size=14px]）、（[/size][size=14px]3-[/size][size=14px]氯苯基）硫脲、对氨基苯甲酰胺、萘、丙苯[/size] [/td][td] [size=14px]上海阿拉丁生化科技股份有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]甲苯、三氯甲烷[/size] [/td][td] [size=14px]天津市大茂化学试剂厂[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]甲醇、硫代乙酰胺、环己醇、异丙醇[/size] [/td][td] [size=14px]天津市科密欧化学试剂有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]1-[/size][size=14px]烯丙基[/size][size=14px]-3-[/size][size=14px]乙烯基咪唑溴盐（[/size][size=14px]AVI[/size][size=14px]）、巯基乙酸十八烷基酯（[/size][size=14px]ST[/size][size=14px]）、苯甲酰胺、苯、正丁基苯、乙酸铵[/size] [/td][td] [size=14px]上海麦克林生化科技股份有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]乙腈[/size] [/td][td] [size=14px]天津赛孚瑞科技有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]二乙基硫脲、亚乙基硫脲[/size] [/td][td] [size=14px]上海泰坦科技股份有限公司阿达玛斯试剂[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]蒽[/size] [/td][td] [size=14px]北京伊诺凯科技有限公司[/size] [/td][/tr][tr][td] [size=14px]色谱用超纯水[/size] [/td][td] [size=14px]法国[/size][size=14px]Millipore[/size][size=14px]公司的[/size][size=14px]Milli-Q[/size][size=14px]系统纯化制备[/size] [/td][/tr][/table] [align=left][font='times new roman'][size=18px]实验内容[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=17px]实验准备[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]干燥球形多孔硅胶[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]本实验所用球形多孔硅胶需干燥处理。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]用分析天平称取球形多孔硅胶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.0g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，置[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]105℃[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]烘箱中干燥[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]24h[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，备用。[/size][/font] [align=left][font='times new roman'][size=16px]配制乙酸铵缓冲溶液[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]在流动相中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]适当[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]加入缓冲盐[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]溶液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以提高分离效率[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和改善[/size][/font][font='times newroman'][size=16px]峰形。较高的离子强度会使[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定相表面[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]富水层增厚，从而增加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]亲水[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定相的亲水性，增强[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]亲水性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分析物的保留[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，使分离选择性、分辨率和柱效显著提高，有效缓解色谱峰拖尾现象。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]0.01mol/L[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙酸铵缓冲溶液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的制备方法：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]精密称取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.7708g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙酸铵，加超纯水定容至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1L[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，得[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.01mol/L[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乙酸铵缓冲溶液，备用。[/size][/font] [align=left][font='times new roman'][size=17px]Sil-AVI-ST[/size][/font][font='times new roman'][size=17px]色谱固定相的制备[/size][/font][/align] [font='times new roman'][size=16px]Sil-AVI-ST[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色谱固定相需经两步反应制备。[/size][/font] [font='times new roman'][size=16px]第一步为制备[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Sil-MPS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的反应：称取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2.0g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]提前干燥好的球形多孔硅胶置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]150mL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的双颈烧瓶中，加入溶剂甲苯[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]45mL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，再加入[/size][/font][font='times n

红外光谱的样品制备第一部分液体液样的制备是将少量样品涂于两片红外透明的窗片（KBr、NaCl等）之间。窗片的互相挤压形成一个样品薄层，样品的成分决定了选择哪种窗片。对于无水的样品，窗片材料是KBr。对于含水样品, KRS-5 较为适合。固体固体样品对光谱学家提出挑战。样品的熔点为我们指出首先该考虑哪种技术。对于熔点低于72。C的样品，用适当的溶剂将样品溶解，成膜于KBr窗片上是最先考虑的。如果因为基线不好或是溶解性差而不成功，可以考虑在两片KBr窗片内熔化成膜。如果这也不行，样品可进行KBr压片。对于熔点高于72。C的样品，首选的技术是KBr压片。对于聚合物样品，成膜法是首选，接着是热熔法和压片法。对于熔点未知的样品，结晶度的检测将会指明哪种技术将会成功。高结晶度的样品用KBr压片法较好，对于低结晶度的样品，成膜和热熔会得到更好的谱图。第二部分液体样品液体样品的分析有多种方法。在本文中，我们主要探讨所使用的制样方法及一些有关的潜在问题。纯样品技术分析液体样品的最常用方法就是将一滴液体夹在两片盐片中间，过程如下：将一滴样品滴于合适的盐片上，几秒钟后，将另外一块盐片合上，这样液体被夹在两块盐片之间，变成薄膜状。当然，选用的盐片要与分析的液体样品兼容。不含水的样品可采用KBr（32×5mm）盐片，含水样品则采用KRS-5盐片，这几种晶体材料的选用主要是根据它们在红外段的透光范围（优于4000－450cm-1）和稳定性。每次一个样品做好后，用带合适的溶剂的棉花清洗，然后在倒有甲醇的鹿皮或鸡皮上抛光。KBr盐片需要经常进行抛光，以维持其表面的光洁。由于KRS-5晶体有毒，所有只有当其表面被划伤或污染时才需要抛光，而且要求专业人员来完成。ATR技术水平的单反射ATR主要是由一个ZnSe晶体的凹槽组成，尽管ZnSe晶体的截止频率为650－700CM-1，但它比其它宽频带的材料要更加耐用。在样品分析好后，要用适当的溶剂将样品冲掉，再用棉花球擦洗干净，这种材料不需要经常抛光。潜在问题：但它最大的问题就是样品谱图的非线性，主要指峰位的位置和强度不满足Beer－Lambert法则A = abc 这里, A =吸收值a =摩尔吸收系数b = 光程c =浓度Beer-Lambert定理主要是针对定量分析的，谱图检索是定量分析的一种类型，因为谱图检索是以吸收强度为基础的，透射实验一般是线性关系，可以用于定量分析；由于ATR的技术特点导致的，ATR实验一般不能用于定量分析。最常见的导致非线性的原因是透过样品的光程不确定性。分辨率为2时，样品区红外光的聚焦点直径有6MM，如果此时样品区样品厚度薄厚不均或碰巧有气泡或，就会引起此处光程不同。这些因素将导致谱图在各个波段的吸收强度的不准确，换句话说，谱峰的强度比实际强度或者高或者低，从而降低谱图检索的质量，图1是纯3,4-二氯甲苯的红外吸收图，在808 cm-1波段处的吸收强度为0.39，而邻近870 cm-1处是0.24 (A808 cm-1/A870 cm-1 = 1.6)图2是同一个样品但是通过在晶体上做成一层薄厚不均的膜而得到的谱图，它的吸收率与上图已经有差别了，808 cm-1处的吸收率是0.76，而870 cm-1处却为0.62(A808 cm-1/A870 cm-1 = 1.2)，与图1相比，已有25％的差距，这必然会导致谱图检索结果正确率的下降。将样品聚焦点直径为6mm时得到的图与聚焦点直径为3mm时得到的图相减，用差谱的结果来进行分析：由薄厚不均导致的非线性将会使差谱减不干净，有很大的残余峰，我们可以通过定期对晶体进行抛光来降低这种误差。经常引起液体样品谱图的非线性的另一个原因是样品的厚度。液样太浓将会导致谱图的吸收太强，而多数红外仪器的检测器的线性响应范围是0到1.2个吸收单元，大于1.2时就会引起线性问题。有时非线性会使谱图中吸收峰的头部成平头状，在我们的实验室中只接受吸收单元1.2的谱图，图3也是上面提到的样品的谱图，但样品的厚度却远远大于前者。谱图中最强的吸收单元已经超过了30个吸收单元，808 cm-1处的吸收度为1.66，870 cm-1处为0.94(A808 cm-1/A870 cm-1 = 1.76)，相比而言，产生了10％的误差，这种不同波段的吸收值的相对性的差异将会给谱图检索带来负面影响。第三部分成膜技术涂膜技术是用在熔点低于72。C的样品和低结晶度的样品，比如象高聚物，涂膜法也可在其他方法失败后试用。涂膜的一般过程先将样品溶于适当的溶剂中。然后将数滴溶液滴于惰性的基质上，溶液挥发后在基质上留下一层薄膜。如果惰性基质是红外透明的，可直接检测或将薄膜剥下检测。选择合适的溶液 选择溶液最主要的标准是容易挥发（除了最明显的一点，可溶解样品）。这意味着必须采用低沸点溶剂。蒸发溶剂所需的热量越少，样品所受的影响就越小。另外，溶剂越容易去除，残留的溶剂越少。以下列出的溶剂将首先考虑：氯仿(BP. 61.2° C)，丙酮(BP. 56.2° C)，三氯乙醇(BP. 151° C)，邻二氯苯(BP. 180.5° C)和水(BP. 100° C)。在选择成膜技术时这五种溶剂适用于85％的样品。纯溶液的光谱也应准备着作为参照。将溶剂的谱图与成膜样品的谱图作比较是判断是否有溶剂残留的一个好方法。每取用一次溶剂便将其参比谱图更新一下也是一个好习惯。选择基质 一般不将薄膜从基质上取下，基质和薄膜是一起放入光谱仪的。所以需要的是对红外透明的基质。除了溶剂是水采用KRS-5晶体外，一般最常用的基质是KBr晶体。如果决定将薄膜取下，玻璃将是不错的选择。成膜 经验告诉我们最好使用少量的稀溶液（3－5滴），多次在基质上形成薄膜，这将比用浓溶液形成的厚膜和大量的溶液一次成膜要好的多.这将使薄膜中的溶剂残留最少。有时，当你成膜的是晶体样品，谱图上会显示非常严重的散射和基线倾斜。这在单层成膜时经常发生，在多层成膜时也会出现。我们认为这是因为最先沉淀的晶体成为了形成大晶体的“晶核”，正是这些大晶体造成光的散射，使基线倾斜。在我们实验室为了防止这种问题的发生，我们经常在晶体的两面都涂上一层薄膜，有时在两块晶体的两面都涂上一层薄膜，一共形成四层膜。这个能解决绝大部分的散射问题。在蒸发溶剂时，使晶体上的溶液保持流动。这将帮助您得到厚度均匀的膜。我们经常将晶体放在一小片可反复使用的纸卡上（大约2”×3”），后不停的敲击纸卡的背面，使溶液保持流动，或者用移液管末端不停的搅拌搅拌，如果去除溶剂需要加热，而晶体又是水溶性物质，比如KBr，那你应该先加热卡片，去除其中含有的水汽。如果你不这样作，晶体的底部会吸水雾化，这将使你的谱图的基线倾斜。在我们的实验室，我们使用加热灯来慢慢清除水汽，如果是在一个较为潮湿的环境中，应该一直用灯加热 以去除环境中水汽的影响。注意采取预防措施，尤其是在使用易燃溶剂时。潜在问题 在成膜技术中最严重的两个问题是薄膜厚度不均匀和溶剂残留。薄膜的厚度不均将导致谱图的非线性。而在薄膜技术中应该时刻注意溶剂残留的问题。总是将得到的谱图与溶剂谱图的主峰作比较。如果结果显示有溶剂残留，有时可通过继续加热来去除溶剂。如果你不能确定某个特征峰是溶剂还是样品产生，那样品必须用另一种方法检测或使用另一种不会产生该特征峰的溶剂。另一个可能产生的问题是，某些样品在加热和有氧气的情况下易发生氧化。这将导致在1740 cm-1上有一个C=O 的小峰。有几种方法可以防止或减小这种氧化。在惰性气氛中蒸发溶剂，比如在氮气中，这样可以减少氧气的存在。或是减少加热量来化小这个问题。可能的话，你可以使用更低沸点的溶剂，或用真空泵来抽取溶剂。

固体制剂做破坏试验时，加酸或碱破坏，但液体制剂的专属性破坏性试验怎么做啊

红外制样技术视频（液体池法）（转自于其他学术论坛）

[font=宋体][font=宋体]抗体是一种由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞或浆细胞产生的免疫球蛋白，它在人体免疫系统中扮演着重要的角色。抗体能够识别并结合抗原，从而启动补体级联反应或通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与效应细胞结合，引发免疫应答。抗体由轻链（[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]）和重链（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）组成，每条链都分为恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）和可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]）。可变区（[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]）负责识别和结合抗原，恒定区（[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]）则与抗体的效应功能相关。其中，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段是抗体的抗原结合片段，具有高亲和力和特异性，是抗体发挥生物学功能的重要部分。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的主要功能：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段是由两条相同的轻链和两条相同的重链组成的，每条链上的[/font][font=Calibri]V[/font][font=宋体]区负责识别并结合特定的抗原。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的这种结构使其能够与抗原进行高特异性的结合，从而实现对特定抗原的识别和中和。这种结合是抗体与抗原相互作用的基础，使得抗体能够有效地对抗外来入侵者和清除体内突变的细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]除了识别和结合抗原外，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段还能通过其构象变化来影响抗体的生物学活性。当抗体与抗原结合时，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的构象会发生变化，这可以触发抗体[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的构象变化，从而影响抗体的生物学功能。例如，当抗体与抗原结合时，[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的构象变化可能会增强其与效应细胞的亲和力，从而启动更强大的免疫应答。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在临床上，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段的应用也具有重要意义。例如，针对特定抗原的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体可以用于治疗某些自身免疫性疾病或超敏反应。通过使用[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体，可以特异性地中和或清除体内过多的自身抗体，从而达到治疗的目的。此外，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体还可以用于肿瘤的靶向治疗，通过与肿瘤相关抗原结合，引导药物精确地到达肿瘤部位，提高治疗效果并降低副作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之，抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]段在免疫应答、免疫治疗和肿瘤靶向治疗等方面都具有重要的应用价值。对其结构和功能的深入了解将有助于我们开发出更加有效的治疗策略和新型抗体药物。同时，[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的研究和应用也为我们提供了更广阔的视野，加深我们对人体免疫系统的认识和理解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段制备：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体片段可通过构建噬菌体展示抗体文库筛选获得。[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体库具有多项优势。首先，它可以快速有效地筛选出难以用杂交瘤技术获得的理想抗体。其次，和[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]抗体一样，它可以轻松制备出高亲和力的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]利用自主开发的[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]细胞瞬时转染技术，义翘神州成功完成多个[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段抗体的表达和制备项目。并且这些高质量的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段，可用于抗原[/font][font=Calibri]-Fab[/font][font=宋体]共结晶等应用。与酶解法制备抗体片段相比，利用哺乳动物细胞瞬时转染技术制备的重组[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的质量更优。如果客户要求，我们也可以在大肠杆菌表达系统进行[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体的表达。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于很多抗体[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]片段不能很好地结合蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、蛋白[/font][font=Calibri]G[/font][font=宋体]或蛋白[/font][font=Calibri]L[/font][font=宋体]亲和树脂，我们通常在抗体重链的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端添加[/font][font=Calibri]poly-histidine[/font][font=宋体]标签，以便于纯化。在设计构建载体时，可在[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]标签和[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]之间加上蛋白酶识别位点，这样抗体纯化后可通过蛋白酶切去除标签，得到无标签的[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果您之前已在义翘神州订购过[/font][font=Calibri]CRO[/font][font=宋体]服务项目，一般情况下，您不需要为抗体制备订单支付预付款。义翘神州会根据抗体制备项目的具体费用进行报价，您在收到纯化抗体和发票后付款即可。但是，对于风险性较大的抗体制备项目，例如，制备恒定区有修饰的抗体，义翘神州需要收取少量的成本费用，用于可行性试验和工艺开发（如需）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]同时义翘神州还提供[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service][b]Fab[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/fab-scfv-antibody-production-service][b]抗体片段表达服务[/b][/url]，更多详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/fab-antibody-production[/font][/font][font=宋体] [/font]

（1）对羟基苯甲酸酯类：对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯，亦称尼泊金类。这类的抑菌作用随烷基碳数增加而增加，但溶解度则减小，丁酯抗菌力最强，溶解度却最小。本类防腐剂混合使用有协同作用。通常是乙酯和丙酯（1：1）或乙酯和丁酯（4：1）合用，浓度均为0.01%～0.25%.这是一类很有效的防腐剂，化学性质稳定。在酸性、中性溶液中均有效，但在酸性溶液中作用较强，对大肠杆菌作用最强。在弱碱性溶液中作用减弱，这是因为酚羟基解离所致。　　（2）苯甲酸及其盐：在水中溶解度为0.29%，乙醇中为43%（20℃），通常配成20%醇溶液备用。用量一般为0.03%～0.1%.苯甲酸未解离的分子抑菌作用强，所以在酸性溶液中抑菌效果较好，最适pH值是4.溶液pH值增高时解离度增大，防腐效果降低。苯甲酸防霉作用较尼泊金类为弱，而防发酵能力则较尼泊金类强。苯甲酸0.25%和尼泊金0.05%～0.1%联合应用对防止发霉和发酵最为理想，特别适用于中药液体制剂。　　（3）山梨酸：本品为白色至黄白色结晶性粉末，熔点133℃，溶解度：水中为0.125%（30℃），丙二醇中5.5%（20℃），无水乙醇或甲醇中12.9%；甘油中0.13%.对细菌最低抑菌浓度为0.02～0.04%（pH＜6.0），对酵母、真菌最低抑菌浓度为0.8%～1.2%.本品的防腐作用是未解离的分子，医学|教育网搜集整理在pH值4水溶液中效果较好。山梨酸与其他抗菌剂联合使用产生协同作用。苯甲酸钠在酸性溶液中的防腐作用与苯甲酸相当。山梨酸钾、山梨酸钙作用与山梨酸相同，水中溶解度更大。需在酸性溶液中使用。　　（4）苯扎溴铵：又称新洁尔灭，为阳离子表面活性剂。淡黄色粘稠液体，低温时形成蜡状固体，极易潮解，有特臭、味极苦。无刺激性。溶于水和乙醇，微溶于丙酮和乙醚。本品在酸性和碱性溶液中稳定，耐热压。作防腐剂使用浓度为0.02%～0.2%.　　（5）醋酸氯乙定：又称醋酸洗必泰，微溶于水，溶于乙醇、甘油、丙二醇等溶剂中，为广谱杀菌剂，用量为0.02%～0.05%.　　（6）其他防腐剂：邻苯基苯酚微溶于水，使用浓度为0.005%～0.2%；桉叶油为0.01%～0.05%；桂皮油为0.01%.薄荷油为0.05%.　　（五）矫味剂：分为甜味剂、芳香剂、芳香剂、泡腾剂等。　　（六）着色剂：分为天然色素与合成色素。　　（七）其他附加剂：在液体制剂中为了增加稳定性，有时需要加入抗氧剂、pH调节剂、金属离子络合剂等。

1.乙醇：没有特殊说明时，乙醇指95%（V/V）乙醇，可与水、甘油、丙二醇等溶剂任意比例混合，能溶解大部分有机药物和药材中的有效成分，如生物碱及其盐类、挥发油、树脂、鞣质、有机酸和色素等。20%以上的乙醇即有防腐作用。但乙醇有一定的生理活性，有易挥发、易燃烧等缺点。　　2.丙二醇：药用一般为l，2-丙二醇，性质与甘油相近，但粘度较甘油为小，可作为内服及肌内注射液溶剂。丙二醇毒性小、无刺激性，能溶解许多有机药物，一定比例的丙二醇和水的混合溶剂能延缓许多药物的水解，增加稳定性。丙二醇对药物在皮肤和粘膜的吸收有一定的促进作用。　　3.聚乙二醇：液体制剂中常用聚乙二醇300～600，为无色澄明液体、理化性质稳定，能与水、乙醇、丙二醇、甘油等溶剂任意混合。聚乙二醇不同浓度的水溶液是良好溶剂，医学|教育网搜集整理能溶解许多水溶性无机盐和水不溶性的有机药物。本品对一些易水解的药物有一定的稳定作用。在洗剂中，能增加皮肤的柔韧性，具有一定的保湿作用。

近期，中国科学院合肥物质院安光所孙敦陆研究员课题组在2.7~3微米波段中红外晶体制备及激光性能研究方面取得一系列新进展，相关研究成果分别以《Ho,Pr:YAP晶体的热学、光谱及~3微米连续激光性能》、《Er:YGGAG晶体的结构、光谱与激光性能》和《LD侧面泵浦YSGG/Er:YSGG/YSGG晶体实现28.02瓦的2.8微米连续激光》为题发表在光学领域国际知名期刊Optics Express上，第一作者分别为乔阳博士研究生、陈玙威博士研究生和张会丽副研究员。[align=center][img=,600,259]https://img1.17img.cn/17img/images/202404/uepic/80f41813-1ef4-49a7-9a8a-43345007fd08.jpg[/img][/align][align=center][img=,600,257]https://img1.17img.cn/17img/images/202404/uepic/b4d989c0-7726-4f29-9a76-67fa44ebd245.jpg[/img][/align][align=center][img=,600,257]https://img1.17img.cn/17img/images/202404/uepic/dcd0a1e9-5af5-4265-993a-750d02e274e0.jpg[/img][/align]2.7~3微米中红外激光处于水分子的强吸收带，在生物医疗、光学遥感及非线性光学等领域有着广泛的应用前景。稀土离子Ho[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]（钬离子）通过[font=等线][sup][size=13px]5[/size][/sup][/font]I[font=等线][sub][size=13px]6[/size][/sub][/font]至[font=等线][sup][size=13px]5[/size][/sup][/font]I[font=等线][sub][size=13px]7[/size][/sub][/font]的辐射跃迁，可产生3微米附近波段中红外激光。然而，Ho[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]的激光下能级[font=等线][sup][size=13px]5[/size][/sup][/font]I[font=等线][sub][size=13px]7[/size][/sub][/font]的荧光寿命较长，容易产生自终止效应，不利于实现激光上、下能级之间的粒子数反转。针对这一问题，我们提出提高激活离子Ho[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]的掺杂浓度，同时共掺适量能级耦合离子Pr[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]（镨离子），以降低Ho[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]激光下能级寿命，抑制自终止效应。采用熔体提拉法，成功生长出了4 at.% Ho[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]、0.1 at.% Pr[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]共掺YAP晶体，系统开展了晶体结构、晶体质量、热学、光谱及其激光性能的研究。由于退激活离子Pr[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]的掺入，其激光下能级寿命由5.391毫秒降至1.121毫秒，同时激光上能级寿命变化较小，表明共掺Pr[font=等线][sup][size=13px]3+[/size][/sup][/font]能够有效抑制自终止效应，有利于降低激光阈值、提高激光性能。采用1150纳米拉曼光纤激光器端面泵浦，在Ho,Pr:YAP晶体上实现了最大平均功率502毫瓦的~3微米连续激光输出，相应的斜效率为6.3%。与Ho:YAP晶体相比，其激光阈值降低，最大输出功率及效率均得到了提高。目前，LD泵浦Er:YSGG晶体的中红外脉冲激光已高达数十瓦，而连续激光输出功率仅有瓦级，采用连续LD侧面泵浦有望进一步提高连续激光输出功率。由于在激光运转过程中，激光增益介质内部会产生温度梯度，导致产生各种热效应，限制了激光输出功率和效率的提高。我们通过在Er:YSGG晶体棒的两端键合高热导率的未掺杂YSGG晶体作为端帽，以改善热效应。采用978纳米LD侧面泵浦YSGG/Er:YSGG/YSGG键合晶体，实现了最大平均功率28.02瓦的~2.8微米连续激光输出，这是目前报道的在氧化物晶体中获得最高功率的~2.8微米连续激光输出，相应的斜效率和光-光转换效率分别为17.55%和12.29%。其最大功率和斜效率均高于相同泵浦条件下的未键合Er:YSGG晶体，表明键合可有效改善热效应，提高激光性能。实验测试并理论计算了LD侧面泵浦未键合Er:YSGG晶体和YSGG/Er:YSGG/YSGG键合晶体在不同泵浦功率下的热焦距，结果表明，YSGG/Er:YSGG/YSGG键合晶体更适于在高泵浦功率下工作。以上研究工作得到了国家自然科学基金、替代专项、安徽省自然科学基金和合肥物质院院长基金的支持。[来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

[font=宋体][font=宋体]单克隆抗体（[/font][font=Calibri]Monoclonal antibodies[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]）是由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞产生，并能特异性靶向抗原的免疫球蛋白。单克隆抗体不仅是生物化学、分子生物学和医学研究中必不可少的工具，其在临床治疗上的应用也以革命性的速度改进了多种疑难杂症的治疗方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1975[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]Khler[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Milstein[/font][font=宋体]提出的杂交瘤技术（[/font][font=Calibri]Hybridoma technology[/font][font=宋体]），使得大量获得单克隆抗体成为可能，为基础研究及其临床应用提供了无限潜力。其他科学和技术进步也促进了单克隆抗体的发展、丰富了单克隆抗体的制备方法。 经过近[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]年的发展，单克隆抗体制备方法不再局限于免疫小鼠的淋巴细胞术，噬菌体展示技术（[/font][font=Calibri]Phage display[/font][font=宋体]）、人源抗体转基因小鼠（[/font][font=Calibri]Human antibody-producing mice[/font][font=宋体]）和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术（[/font][font=Calibri]Single B cell antibody technology[/font][font=宋体]）也都陆续登上舞台。这些方法虽然有各自的局限性，但都已广泛应用于单克隆抗体筛选。同时，这些技术都不完全是独立存在的，如果能充分利用各技术的优点，采用灵活的方法将各技术优化组合就能更加高效、快速地进行抗体开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一、杂交瘤技术[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术是一种将[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合生产小鼠单克隆抗体的传统方法，是目前应用最广泛的单克隆生产技术。在这种技术中，首先收集免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，并将其与[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]小鼠骨髓瘤细胞融合，从而形成永生化的杂交瘤细胞。然后筛选杂交瘤细胞，鉴定出能生产特异性抗体的单克隆细胞株。十几年后，[/font][font=Calibri]1988[/font][font=宋体]年，兔单克隆抗体制备方法首次被《[/font][font=Calibri]Science[/font][font=宋体]》杂志报道 [/font][font=Calibri][1][/font][font=宋体]。该研究使用小鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔异种杂交瘤方法生产兔单克隆抗体，但鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔异种杂交瘤细胞分泌抗体的效率较低、不稳定，且无法长时间分泌抗体。时间进展到[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代中期，[/font][font=Calibri]1995[/font][font=宋体]年，《[/font][font=Calibri]PNAS[/font][font=宋体]》报道了能稳定生产兔单抗的兔[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔杂交瘤细胞。但兔杂交瘤细胞也被证明不如常规鼠杂交瘤细胞稳定，这大大阻碍了其实验室水平的广泛使用。并且，由于融合和转化效率低下，使用兔杂交瘤细胞生产单克隆抗体在应用推广中受到了极大的限制。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多年发展及应用，杂交瘤技术作为一种成熟的产生鼠单克隆抗体的方法已被广泛应用于多种抗体的生产。然而，由于缺乏合适的骨髓瘤融合伴侣，杂交瘤技术一直局限于免疫啮齿动物。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]80[/font][font=宋体]年代，《[/font][font=Calibri]PNAS[/font][font=宋体]》报道了一种应用人杂交瘤技术生产治疗用抗体的文章 [/font][font=Calibri][3][/font][font=宋体]。利用该方法可以在无额外修饰的情况下产生天然的人源抗体，并用于临床治疗。随着融合伴侣和电融合技术的发展，人杂交瘤细胞融合成功率逐步增加，这将在未来促进治疗性抗体的开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二、噬菌体展示技术[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1990[/font][font=宋体]年开始，噬菌体展示技术被视为一种新的产生单克隆抗体的方法。这种方法是从淋巴细胞中收获抗体可变区基因（[/font][font=Calibri]V gene[/font][font=宋体]）全集，克隆[/font][font=Calibri]VHs[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VLs[/font][font=宋体]的组合并与外壳蛋白融合后表达于丝状噬菌体表面，然后筛选表达特异性抗体的噬菌体。与受限于啮齿动物的杂交瘤技术相比，噬菌体展示技术已经成功用于任何已知免疫球蛋白基因的物种中筛选和分离单克隆抗体。[/font][font=Calibri]2000[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Rader[/font][font=宋体]等人首次介绍了应用噬菌体展示技术生产兔单克隆抗体的全过程。在这篇文章中，[/font][font=Calibri]Rader[/font][font=宋体]等人用噬菌体展示技术筛选和人源化的人[/font][font=Calibri]A33[/font][font=宋体]兔抗体，不仅对人[/font][font=Calibri]A33[/font][font=宋体]抗原有高特异性，且保留高亲和力。目前，噬菌体展示技术因为其高效、简便及体外控制在原核或真核系统中原则参数的能力正逐步成为生产治疗用抗体的重要技术平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]随着我们对抗体结构、功能和序列多样性研究的不断深入，除了原有的抗体库外，一种新的合成抗体库技术也在不断发展。例如，[/font][font=Calibri]HuCAL&Ylanthia[/font][font=宋体]文库中，为了使筛选出的人源抗体能更好的进行分子识别，将精确设计的序列插入抗原结合位点，并优化设计多种可变重链、轻链框架区域 [/font][font=Calibri][7-10][/font][font=宋体]。随着文库设计和筛选方法的不断进步，合成抗体文库将成为快速生产具有高特异性和高亲和力单克隆抗体不可或缺的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]三、人源抗体转基因小鼠[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1985[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Alt[/font][font=宋体]等人首次提出将人抗体基因引入小鼠种系并使用转基因小鼠中产生人抗体的想法 [/font][font=Calibri][11,12][/font][font=宋体]。随着基因编辑技术的进步，使用人源抗体转基因小鼠生产人源化抗体已不再是天方夜谭。与其他技术相比，使用人源抗体转基因小鼠有许多优势，如无需人源化、具有更多的生物多样性，且由于体内成熟具有天然的亲和力。但是，人免疫球蛋白体量庞大对转基因小鼠抗体生产是一个巨大的挑战。为了克服这些困难，研究人员们通过使用不同策略已成功地获得转基因动物表达的人源抗体库，如全人源抗体小鼠和嵌合人源抗体小鼠等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]虽然杂交瘤技术和噬菌体展示技术已经在单克隆抗体生产中广泛应用，但它们依然存在较难克服的缺点制约着抗体生产过程。近些年，为了克服杂交瘤技术细胞融合效率低，噬菌体展示技术导致重链、轻链的天然同源配对丢失等问题，单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术正被逐步开发和应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说，单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术包含以下几个步骤：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]a.[/font][font=宋体]从外周血或免疫器官中初步提取淋巴细胞；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]b.[/font][font=宋体]使用磁性活化细胞分选（[/font][font=Calibri]MACS[/font][font=宋体]）或荧光活化细胞分选（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）技术鉴定和分离出特定的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]c.[/font][font=宋体]将分离出的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞进行单细胞培养；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]d.[/font][font=宋体]使用逆转录聚合酶链式反应（[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]）和抗体特异性引物鉴定单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分泌抗体的特异性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]e.[/font][font=宋体]扩增特异抗体基因；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]f.[/font][font=宋体]将抗体基因克隆到表达载体中，并在细菌或细胞系统中表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]g.[/font][font=宋体]纯化表达产生的抗体，并用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等方法进行评估。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术现在已广泛用于人和小鼠单克隆抗体生产，如一些治疗性中和单抗，可用于治疗多种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病和传染性疾病亡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总结[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]种方式制备单克隆抗体的优缺点[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]：[/font][font=宋体]优势：技术成熟、研发成本低[/font][font=宋体]劣势：周期长、融合率低、需要进行人源化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]人源抗体转基因小鼠：[/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①可用杂交瘤技术获得人源抗体[/font][font=宋体]②良好的免疫原性[/font][font=宋体]③亲和力高[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①存在免疫耐受[/font][font=宋体]②依然有鼠抗产生[/font][font=宋体]③难以免疫毒性抗原[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]：[/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①基因来源灵活[/font][font=宋体]②随机库可以避免免疫耐受[/font][font=宋体]③可以灵活，特异得调整设计方案[/font][font=宋体]④可长时间保存[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①重链轻链非天然配对[/font][font=宋体]②展示效率具有偏好性[/font][font=宋体]③需要再次进行功能验证[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术：[/font][/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①无需杂交瘤融合[/font][font=宋体]②制备周期短[/font][font=宋体]③重链、轻链天然配对[/font][font=宋体]④无需合成基因[/font][font=宋体]⑤可直接获得各物种抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①需要新鲜样本[/font][font=宋体]②抗原特异性细胞比例低[/font][font=宋体]③操作环境要求严格[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体制备服务[/b][/url]，同时拥有流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选平台、噬菌体抗体库技术平台、杂交瘤开发平台…… 可供大家选择，有需求或者了解具体详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体]在生物医学领域中，[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-production][b]多克隆抗体制备[/b][/url]是一个重要的技术，广泛应用于疾病诊断、治疗和基础研究中。然而，许多初学者对于这一技术可能存在一些疑问。本文将针对多克隆抗体制备过程中的常见问题，进行详细的解答和解析，帮助读者更好地理解和应用这一技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫宿主该如何选择[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择宿主时，一般要考虑两个问题：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫效果能否保证。特别是对于蛋白抗原的情况，为了保证免疫成功，就要求宿主与抗原来源物种之间有较远的亲缘关系，如果不太能确定亲缘关系的远近，建议把抗原的序列与被免疫的宿主相应的蛋白的序列进行一个对比，优先选择同源性较低的物种进行免疫。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]抗血清产量的问题。根据实验目的不同，抗血清的用量也有所不同。如果后续是做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]，那么只需要一点点血清就够了，这个时候就可以选用小[/font][font=Calibri]Mouse[/font][font=宋体]这样的小宿主作为免疫宿主，而如果想生产二抗作为商业使用，则可选用羊、驴、马这样的大型宿主，大型宿主还可以进行多次放血，以提高宿主的利用率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、如何选择抗原？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]降解的蛋白抗原利于制备用于筛选细菌表达[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库或免疫沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]用于筛选真核细胞转染系统表达的[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库或免疫沉淀，最好选用自然的蛋白抗原。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]如果制备抗独特型抗体，所用抗原可以是可溶性[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]分子，或者是完整的细胞，也可以是基因工程表达产品独特型决定簇、人工合成多肽及抗原化抗体等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]目前，以各类病原生物活体感染宿主而获得多克隆抗体（抗血清）作为检测抗体，仍是常用方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、多克隆抗体有哪些优势？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）成本低廉，技术门槛低，制备周期短。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能识别一个抗原上的多个表位，可在[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]等实验中获得更加理想的结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）多抗因为靶蛋白可在多个表位上结合不止一个抗体分子，有助于放大低表达水平的靶蛋白信号。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）能识别出与免疫原蛋白具有高同源性的蛋白，或者从非免疫原物种的组织样品中筛选靶蛋白，例如当未测试物种中的抗原性质未知时，有时会使用多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）可识别多个结构域，即使原始抗原的一些空间结构或者序列发生小变化或者部分抗原决定簇变化，仍可以识别抗原，因此有更大的适应性[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、多抗用来做[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测为何有杂带出现？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）你可能是用[/font][font=Calibri]ProteinA/G[/font][font=宋体]来进行抗体纯化，这种纯化方式得到的多抗掺杂有宿主本身对其自身抗原产生的抗体，这些抗体在检测中会识别样本中的蛋白而出现杂带，建议采用抗原亲和纯化来避免杂带的产生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）天然蛋白存在复杂的翻译后修饰。可以通过信息学分析来解释。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）翻译后蛋白前体经切割可能会使部分蛋白分子量偏小，而天然组织中同时存在蛋白前体和切割加工后的蛋白，二者序列有相同部分，可能会产生杂带。最好是通过查阅与目的蛋白相关文献进行了解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）当目的蛋白有同源家族蛋白时，蛋白异构体的存在可能会使分子量偏离预测分子量，因为天然样本中由同一个[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]不同的剪接方式进行翻译形成的蛋白产物也会有相同的抗原表位，同时被抗体识别时会产生杂带。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）强烈的蛋白间相互作用在还原条件下也有可能不解聚导致条带偏大。如二聚体或三聚体，这些多聚体的形式通常会抵制[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]时所做的还原条件，因此造成检测的条带偏大。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、多克隆抗体如何保存及运输？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]我们的抗体是添加[/font][font=Calibri]5%[/font][font=宋体]甘油，免疫前血清和抗血清已添加[/font][font=Calibri]0.02%[/font][font=宋体]防腐剂，若客户有其他要求，会提前告知生产；抗体会超低温包装运输寄送， 收到抗体请尽快检测，建议分装成小包装（分装为每次使用量）后保存于[/font][font=Calibri]-80[/font][font=宋体]摄氏度冰箱，并避免反复冻融， 保存时间若超过[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]年，使用前请先电泳检测蛋白是否降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、制备的多克隆抗体是否可以保证后续[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]实验？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体的抗原是原核重组表达的蛋白，与后续用于[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]的天然蛋白样品是有差异的，无法保证构象及活性与天然蛋白一致，所以不能保证后续应用于天然蛋白的[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，但可以保证制备出的抗体与抗原蛋白是[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]呈阳性的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services][b]多克隆抗体制备服务[/b][/url]，最快仅需[/font][font=Calibri]45[/font][font=宋体]天交付抗血清或纯化抗体。您只需提供抗原的基因序列，我们就可以为您制备高亲和力的多克隆抗体，以满足您在研究或诊断方面的应用。[/font][/font]

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