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FPLC简介 FPLC全称为快速蛋白液相色谱(Fast protein liquid chromatography),其原理与高效液相色谱理论类似,是由经典的液体柱层析引入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]理论,并且对相体进行了改革,配用高压输液泵,采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。FPLC是专门用来分离蛋白质、多肽及多核苷酸的系统,是HPLC近年来的一项重要革新,它不但保持了HPLC的快速、高分辨率等特性,而且还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。因此在近年来在分离蛋白质、多肽及寡核苷酸等方面得到了广泛应用随着HPLC的发展,出现了两种新型填料:薄壳型填料和双扩散灌流型填料,它们对大分子物质的分离具有独特的优越性,从而使FPLC的应用领域得以拓展。其可应用于蛋白、有机化合物的分离纯化,能定量测定蛋白的含量和和确定蛋白的分子量,因此可应用于生物学领域和化学领域的研究。 The Pharmacia fast protein liquid chromatography (FPLC) system is used for methods developmnent and the purification of large quantities of various biomolecules (i.e., protein and DNA). The system includes two pumps capable of continuous flow to the purification columns (vary by user) , a peristaltic pump may be used for column equilibration, a UV monitor to detect biomolecules on the column, a mixer to produce elution gradients, motor valves may be used to assist with sample injection, column selection or flow reversal, and a controller with an integration function for computerized operation of various programs directing flow to the pumps and controlling the motor valves. A chart recorder is the typical mode of 'run' documentation.
通过对比试验研究洗脱时间、柱温、流速、洗脱梯度等对反相高效液相色谱法的影响,确立适宜小麦胚乳醇溶蛋白(Gliadin)反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分离的最佳实验方法为:在1.0mL/min的流速、60℃的柱温条件下对上样醇溶蛋白进行洗脱、洗脱梯度为流动相B的体积比在55min内由21%升至48%(V/V),最后通过210nm紫外光检测洗脱组分的吸收值。
借助高效液相色谱法测定乳制品中乳铁蛋白。方法:先通过额外加入的二价铁离子使乳铁蛋白的构型更利于沉淀。然后用体积分数60% 乙醇溶液沉淀蛋白除去糖分,再用醋酸盐缓冲液提取乳铁蛋白并分离掉酪蛋白,最后用高效液相色谱检测,采用LiChrosorb RP-C18 色谱柱,在质量浓度0.1g/100mL 的三氟乙酸溶液协助下,甲醇与水线性梯度洗脱。结果:乳铁蛋白的线性范围是0.4~2mg/mL(R2=0.9980),平均回收率95.4%。结论:此方法可以用于乳制品中乳铁蛋白的测定。