高效液相空白色谱柱出峰的原因？ 高效液相色谱，色谱柱是Kromasil C18（15cm*5Um），流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水，走空白色谱柱时在整个保留时间的中间位置出现较大的色谱峰，走了好几针空白，每针的响应都不同，有的很高，有的又很低，但杂峰一直存在，不像是色谱柱里有杂质，用流动相冲洗后依然出现此问题，什么原因？ 【分析原因】1.确定检测波长，如果是末端吸收，排除三氟乙酸的干扰。2.使用100%乙腈作为流动相，乙腈作为样品进样，如果为基线，则说明色谱柱及系统完好。3.然后在换流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水，样品为乙腈，如果有上述“中间位置出现较大的色谱峰”，那说明八成问题在三氟乙酸上，或者稀释三氟乙酸的水上。4.如果上述2、3都有“中间位置出现较大的色谱峰”，检查检测器及进样器。5.这些还不能解决，请联系工程师 空白乙腈出峰的原因？ 高效液相色谱仪，进空白乙腈，在样品峰位子出现倒峰，进双蒸水在样品峰出现正峰，进样品时有杂峰干扰，我已经排除了水和乙腈的问题，不知道是不是进样池或者检测器污染了，已经整了10多天，还是没效果，请指教原因和解决办法。 【分析原因】液相中出现倒峰，主要原因是样品吸收比流动相吸收小，所以排除影响，不仅要考虑进样系统污染和检测池污染，还要考虑流动相和色谱柱的影响。换一根柱子试试，考察系统的情况，如果照旧，就排除色谱柱的影响，然后更换流动相试试，再以后清洗进样系统和检测池等等。 或将色谱柱从系统中断开，直接用乙腈或水做流动相清洗检测器就可以知道是否是检测器受污染，如果基线正常，再检查你的进样系统，样品，前处理是否有问题，如果都没问题，就去检查色谱柱吧。
[table=100%][tr][td]我做氨甲环酸的液相色谱分析，用药典的方法，最开始做都没什么问题，出峰也正常，后来因为有几个数据不清楚，想重新做一下，同样的方法，仪器，就不出峰了，请教一下大家是什么原因，谢谢。[/td][/tr][/table]
丙二酸单乙酯钾盐产品中除单钾盐外混有二钾盐、酒精、丙二酸二乙酯等杂质 请教用液相色谱分析方法。
本法用甲醇-水为流动相，在C18反相柱上建立了陆英中具有乌索酸含量测定的高效液相色谱法，以95%乙醇为溶剂处理样品具有提取率高、色谱干扰小、物质分离效果好的优点，本法简便易行、快速准确，其最小检出限为0.2ug。不同浓度水平检测结果日间、日内相对误差小于4.0%。关键词：陆英草 乌索酸 高效液相色谱 含量测定Analysis of Ursolic Acid in Herba Sambuci Chinensis using HplcThe paper reported the determination of Ursolic Acid inHerba Sambuci Chinensis using Hplc,the separation was achieved by applying an Waters -ODS 150×4.6 mm (5um) column and methanol-water (90:10) as mobile phase at flow rate of 0.8 ml/min. the UV detector was set at 210nm External standard method was applied .The linear range was 150-2000ug/ml with the lower limit of detection of 0.2ug.It was found to be effielent and low interference to extract the samples with ether.陆英（Herba Sambuci Chinensis ）系为忍冬科接骨木属植物，生于山坡、路旁、溪边、荒野灌丛中。产于长江以南地区。 据报道[1]陆英草含氯原酸、α-香树脂素棕榈酸酯（α-amyin palmitate）、乌索酸、β-谷甾醇、豆甾醇、油菜甾醇、硝酸钾、黄酮、鞣质等。目前其它中药材乌索酸含量的测定多采用比色法及薄层扫描[2]以及衍生化法[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]检测[3]，其操作繁琐，显色及前处理误差大，费事费力。本文采用高效液相色谱法用甲醇-水为流动相，检测波长210nm，在C18反相色谱柱上建立了其含量的测定方法，具有简便可行、准确、快速、物质分离效果好的优点，重现性好，适应范围广，利于对陆英草的准确、深入研究。实验部分一、 仪器设备及试剂Waters 600E Hplc系统，UV-2487 可变波长检测器 ，20ul定量环，M32数据处理工作站。乌索酸对照品：中国医学科学院药物研究所 95%乙醇（AR） 甲醇（AR） 水二、实验方法1、色谱条件 色谱柱:Waters -ODS 150×4.6 mm (5um)；流动相：甲醇-水 （90：10）； 流速：0.8 ml/minUV波长：210nm ；量程：0.005 AUFS ；温度：25℃数据处理：峰面积外标定量。2、样品处理 （1）将原料（樟树医药公司）的叶粉碎过筛并恒重。（2）称取样品10克，置索氏提取器中，加95%乙醇回流提取8小时，提取液浓缩定容于100毫升的容量瓶中，取上清液约5毫升过针式过滤器过滤，取滤液待测。3、标准曲线的确定分别吸取配好的5.0mg/ml乌索酸标准液0.4、0.8、1.6、2.8、3.6ml置于10ml容量瓶中，用甲醇稀释成 0.2、0.4、0.8、1.4、1.8mg/ml系列标准溶液，在选定的色谱条件下，重复进3次每次20ul,以标准品峰面积与浓度关系得出回归方程：Y=3.35 E+005X+8.74E+003 R=0.99994、样品测定 将预处理好的待测样品液进样20 ul 检测，通过软件操作的得出浓度值。三、结果1、乌索酸对照品与陆英样品的色谱图1 图1 图22、方法重现性 用两个浓度水平进行连续和间隔时间及连续3天测定，考察方法重现性。结果：其最大相对标准偏差小于4.0%。2、加标回收率 吸取5.0mg/ml乌索酸标准液 0.8、1.6、3.6各三份，分别加入原料样品10克，按前法操作，测定结果，计算回收率结果为99.9%-100.8%，平均100.4%，RSD为1.0%。讨论1、迷迭香中的乌索酸是非极性五环三萜类酸，在C18反相柱上有较大的保留值，以甲醇和水二元体系作为流动相，甲醇浓度与极性相近共存物质的分离及峰形有显著影响，本法选定比例是考虑实际样品组分分离确定的，对于其它品种样品可作适当的调整。2、检测波长 我们进行了波长扫描，乌索酸在205nm处有最大吸收峰，本法采用210nm，恒流比流动相洗脱对检测无影响。3、本法检测出陆英草中平均含0.28%的乌索酸。4、本法简便、易行，准确快速。
[align=center]高效液相色谱组分定性分析方法简述[/align]1、保留时间对照法（1）外标对照法 即在相同的色谱条件下，分别进样品溶液与高纯度的单一组分对照品溶液，这里推荐先进样品溶液，确定系统适应性没有问题了再进对照品溶液，对比两组分的保留时间，一般保留时间相对差异在5%以内，同时绝对误差在0.1min以内的认定为同一个物质，但仍遵守“同一组分保留时间肯定一样，但保留时间一样不一定是同一组分，保留时间不一样的肯定不是同一组分”的原则。（2）标准加入法 即在相同的色谱条件下，将高纯度的对照品加入样品溶液中再上机检测，与相同浓度未加对照品的样品溶液比较，峰高或峰面积应呈等比例增加的，可认定为是同一物质。此法比较适用于组分比较复杂，邻近有干扰组分峰时。上述方法尽量使用柱效高或长柱，峰高尽量小一些，甚至可以小到定量限浓度，一些在高响应下是单个峰的，在低响应时可能是两个峰，所以一定要注意峰形，只要峰形与对照品不一致，就要怀疑不是同一个物质。再严谨一点，还可以改变流动相组成、色谱柱、柱温等，样品中的组分峰应与对照品的组分峰有相同的变化。2、利用检测器选择性进行鉴别（1）DAD检测器波长扫描法 对于配有DAD检测器的还可以对比三维扫描图谱和峰纯度计算进行辅助定性。如果没有配DAD检测器，但有具波长扫描功能的可变波长检测器的，可以使用停泵扫描功能，查看扫描图谱进行鉴别。（2）质谱检测器鉴别法 该方法适用于联用有质谱分析仪的高效液相色谱仪，通过比较碎片峰进行比较鉴别。3、破坏法 将物质进行化学破坏，可以是酸、碱降解，也可以是衍生后再进行检测，看组分峰的变化。当然，此方法不适用于组分复杂的样品。
1 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。这种柱色谱技术称做高效液相色谱法。它可用来作液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱（即凝胶渗透色谱）分析，应用非常广泛。高效液相色谱法具有以下几个突出的特点。1.1 高压 液相色谱法以液体作为流动相（称为载液），液体流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。在现代液相色谱法中供液压力和进样压力都很高，一般可达到150~350×105Pa。高压是高效液相色谱法的一个突出特点。1.2 高速 高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液体色谱法少得多，一般都小于1h，例如分离苯的羟基化合物七个组分，只需要1min就可完成；对氨基酸分离，用经典色谱柱，柱长约170㎝、柱径0.9㎝、流动相流速30mL·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸，而用高效液相色谱法，只需1h之内即可完成。载液在色谱柱内的流速较之经典液体色谱法高得多，一般可达1~10mL·min-1。1.3高效 气相色谱法的分离效能很高，柱效约为2000塔板/米；而高效液相色谱法的柱效更高，约可达3万塔板/米以上。这是由于近年来研究出了许多新型固定相（如化学键合固定相），使分离效率大大提高。1.4高灵敏度 高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如紫外检测器的最小检测量可达纳克数量级（10-9g）；荧光检测器的灵敏度可达10-11g。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少，微升数量级的试样就足以进行全分析。高效液相色谱法由于具有上述优点，因而在色谱文献中又将它称为现代液相色谱法，高压液相色谱法或高速液相色谱法。气相色谱法虽具有分析能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大（大于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75％~80％）原则上都可用高效液相色谱法来进行分离、分析。高效液相色谱法的基本概念及理论基础，如保留值、分配系数、分配比、分配度、塔板理论、速率理论等与气相色谱法是一致的，但有其不同之处。液相色谱法与气相色谱法的主要区别可归结于流动相的不同。液相色谱法的流动相为液体，气相色谱法的流动相为气体。液体的扩散系数只有气体的万分之一至十万分之一、液体的粘度比气体大一百倍，而密度为气体的一千倍左右。这些差别显然将对色谱过程产生影响。
[font=arial, helvetica, sans-serif] 恒谱生[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱网站：www.hplcs.cn [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]适合于分析什么样品？[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析哪些方面[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]广泛用于应用它合成化学、石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域的分析检测。[/font][img=20141203025212877]https://www.hplcs.cn/uploads/20141203025212877.gif[/img][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]可以检测哪些物质[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 一.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]在食品分析中的应用[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 二.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]在环境分析中的应用[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 三.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]在生命科学中的应用[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面：[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 过去对这些生物大分子的分离主要依赖于等速电泳、经典离子交换色谱等技术，但都有一定的局限性，远远不能满足生物化学研究的需要。因为在生化领域中经常要求从复杂的混合物基质，如培养基、发酵液、体液、组织中对感性趣的物质进行有效而又特异的分离，通常要求检测限达ng级或pg级，或pmol，fmol，并要求重复性好、快速、自动检测；制备分离、回收率高且不失活。在这些方面，HPLC具有明显的优势。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 四.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]在医学检验中的应用[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测：[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 1.合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 2.天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙）等。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 五．[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]在无机分析中的应用[/font][font=arial, helvetica, sans-serif] [/font][font=arial, helvetica, sans-serif] 阳、阴离子的分析等。[/font]
我们想用高效液相色谱仪分析饲料中的氨基酸（呵呵，我们也只有一台waters的e2695型液相色谱仪，没有氨基酸分析仪），请问大家都用什么方法啊，我们买了郑州牧专的氨基酸分析包，可是作出来结果老是不准，就是结果偏低。另外之前负责氨基酸分析的女孩突然辞职了，可我只见过她前处理的大致步骤，不知道里面有啥关键点要必须掌握，所以我想问问大家你们有用氨基酸分析包的没啊，请指教一下吧，谢谢了
得到几份液相色谱法分析资料，刚刚整理好想和大家分享！1. 液相色谱法测试血浆中的氧氟沙星2. 液相色谱法分析废液酸中的乙酸3. 液相色谱法分析食物中残留农药（氨基甲酸酯类）
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647481_2507958_3.gif日立氨基酸分析仪和液相色谱在氨基酸分析中的解决方案时间：2014年9月12日 10:00讲师：牟晓丽 目前负责日立氨基酸分析仪和液相色谱的技术支持及市场工作讲座内容： 蛋白质是生命的物质基础，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者,没有蛋白质就没有生命。而蛋白质又是由氨基酸组成的,由此可见氨基酸对人体的重要性。人体可以通过进食粮食、水果、动物制品补充氨基酸，也可通过摄取含氨基酸的功能食品补充氨基酸。 在制药行业，以氨基酸药物为重要组成的生物制药也越来越得到大家的关注。所以，对氨基酸进行分析是非常有必要的。氨基酸的分析方法有柱前衍生法和柱后衍生法，分析仪器既有专门的氨基酸分析仪又有液相色谱仪。 在此，我们跟大家介绍使用日立氨基酸分析仪L-8900和液相色谱仪，通过柱前和柱后衍生法对氨基酸进行分析。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间：2014年9月12日 9:304、报名参会：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408011630_508801_2507958_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647481_2507958_3.gif
[b][font=宋体]问题描述：如何采用液相色谱测定氨基酸？对仪器配置有哪些要求？有哪些注意事项？[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）液相色谱通常无法直接测定氨基酸，需要对氨基酸进行衍生，衍生的方式可采用柱前衍生和柱后衍生，柱前衍生有专门的试剂包，许多分析仪器厂家有相关的应用资料；柱后衍生需要相应的衍生装置和衍生试剂。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）仪器配置方面，液相色谱仪首先需要具有梯度洗脱功能；防止温度波动导致保留时间的漂移，因此需要配备柱温箱。氨基酸衍生产物具有紫外和荧光响应，可以配置紫外检测器、二极管阵列检测器或荧光检测器进行检测。如果采用在线柱后衍生方式进行测定，还需配备柱后衍生装置。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）由于氨基酸测定种类较多（通常是[/font]18[font=宋体]种游离氨基酸），另外样品基质较为复杂，采用液相色谱测定氨基酸时，通常会出现保留时间漂移、分离度下降、杂质干扰等现象。[/font][font=宋体]（[/font]4[font=宋体]）液相色谱法测定食品中的氨基酸含量，可以参考：[/font]SN/T 5223-2019[font=宋体]《蜂蜜中[/font]18[font=宋体]种游离氨基酸的测定[/font][font=宋体]高效液相色谱[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]荧光检测法》、[/font]QB/T4356-2012[font=宋体]《黄酒中游离氨基酸的测定[/font][font=宋体]高效液相色谱法》。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]
[b]高效液相色谱进行氨基酸分析一定要衍生吗？[/b]
由于甲基丙烯酸的保质期很短（夏天三个月，易聚合），那如何用液相色谱分析过了保质期的甲基丙烯酸呢？（里面可能有多聚物生长，但与甲基丙烯酸相溶，外观看不出来），这样可以为公司过期的甲基丙烯酸是否还能用提供依据，请高手指点，谢谢。
能否用液相色谱定量分析矿物油中的醇酸酯(12C)？[em61]
我把煤用水、碱液浸泡震荡后过滤，得到溶液中想测一下其中的有机酸种类含量，用什么色谱比较好呢？液相色谱怎么做？谢谢了！在线等
液相色谱同时分析饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠及五种合成色素的标准色谱图，急用！谢谢！可以发我邮箱zjchen3189@126.com
固相萃取-高效液相色谱测定淀粉及淀粉制品中顺丁烯二酸和顺丁烯二酸酐的含量顺丁烯二酸也叫马来酸，顺丁烯二酸酐通过水解可以直接转化为顺丁烯二酸。作为一种人工合成的有机酸，顺丁烯二酸是重要的有机化工原料，顺丁烯二酸和顺丁烯二酸酐的用途非常广泛，主要用于制造混凝土高效减水剂、不饱和聚酯树脂、醇酸树脂漆、农药、润滑油添加剂等, 经深加工可生产1、4-丁二醇、酒石酸、富马、酸苹果酸等化工产品。作为淀粉处理剂，主要的作用是改善食品的弹性和黏性，以及改善食品外观光泽度,同时这种物质还可以增加淀粉的保质期。但是顺丁烯二酸这种物质并不在食品添加剂卫生标准（GB2760-2011）允许添加的食品添加剂目录中，也就是说马来酸这种物质并不是合法食品添加剂，如果用其来生产淀粉，这种行为也是违法。有研究发现顺丁烯二酸能损害眼部及肾脏。市场上，有部分企业为了提高淀粉的弹性、粘度和稳定性，在食用淀粉中加入大量顺丁烯二酸淀粉酯，但由于技术等条件的限制，作为原料的顺丁烯二酸酐存在着大量的残留，从而使食用淀粉存在着巨大的食品安全隐患，因此，建立一种检测食用淀粉中的顺丁烯二酸及顺丁烯二酸酐的方法是非常必要的。顺丁烯二酸和顺丁烯二酸酐的检测方法化学滴定法，气相色谱法，离子色谱法，毛细管电泳法和高效液相色谱法等。由于技术条件的限制化学滴定法无法对样品中较低含量的顺丁烯二酸准确定量；毛细管电泳法由于技术条件的限制仍无法大规模应用；而气相色谱法和离子色谱法在应用方法条件上对检测的样品的限制使其很难应用在淀粉和淀粉制品上。目前，检测顺丁烯二酸和顺丁烯二酸酐比较准确有效的方法是高效液相色谱法，样品中残留的顺丁烯二酸酐通过水解也转化为顺丁烯二酸进行检测。然而由于淀粉及淀粉产品种类较多，成分复杂，而顺丁烯二酸的检测波长较低，在检测过程中存在很多的干扰，对结果的判断和准确定量有较大的影响，本实验利用LC-SAX 强阴离子交换固相萃取柱对样品进行净化，以去除复杂样品中的基质干扰，提高样品纯度和检测灵敏度。方法操作简单，可靠，适用于对淀粉及淀粉制品中顺丁烯二酸和顺丁烯二酸酐进行准确的定性及定量。1材料与方法1.1材料与试剂顺丁烯二酸标准品(99% ，Sigma 公司) 。实验样品: 小麦粉，马铃薯淀粉，玉米淀粉，地瓜粉，变性淀粉，珍珠粉圆，复合淀粉均购于市场。甲醇( 色谱级) ，三氟乙酸( 色谱纯) ，无水乙醇( 分析纯) ，氨水（分析纯），硫酸（分析纯），氢氧化钠（分析纯）；强阴离子交换固相萃取柱 CNWBOND SAX 固相萃取小柱 500mg，6ml（购于上海安谱公司）。1.2仪器与设备Agilent1200 高效液相色谱仪-配二极管阵列DAD检测器( 美国Agilent 公司) ，; KQ5200超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司；3k-3000 型高速离心机(最高转速15000r/min) 德国 Sigma 公司；Mili-Q 纯水系统美国Milipore 公司。1.3方法1.3.1标准溶液的制备标准储备溶液(1.0mg/mL)的配制：称取顺丁烯二酸0.1000g于100mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度线，充分摇匀备用。此溶液于4 ℃冰箱中可储存3 个月。将标准储备溶液用水配制成 0.5、5.0、50.0、100.0、200.0μg/mL 混合系列标准溶液，使用前配制。1.3.2试样处理准确称取2.5g样品于50mL 塑料离心管中，加乙醇水（1：1）定容至刻度，充分摇匀，超声波提取10min，以3000r/min离心3min；取5.0mL 上清液加入一滴酚酞指示剂，取液用体积分数5% 氨水调至溶液变为浅红色，将液转移至已经过活化平衡的SAX 固相萃取柱中以自然流速过柱，待样品全部吸附后用3 mL水淋洗，流速约3 mL/min，抽至近干后，用2ml 0.1%硫酸以不超过1 mL/min 流速洗脱。洗脱液过滤后，供HPLC 分析。1.3.3液相色谱操作条件色谱柱：CNW®Athena C18-WP色谱柱(4.6mm × 250mm，5μm)；流动相：0.1mol/LCF3COOH；流速1.0mL/min；检测波长：215nm；进样体积：20μL；柱温：25℃。1.3.4测定步骤将标准工作溶液按照质量浓度由低到高的顺序进样测定，在215nm 波长处，以色谱图中的峰面积对其质量浓度绘制标准曲线。试样溶液进样后，以色谱图中的保留时间及相应的光谱图定性，峰面
[size=15px][/size][size=15px]高效液相色谱法中的干扰峰是广大色谱工作者甚为头疼的事情，本文通过对干扰峰的来源进行分类，对其产生原因进行分析探究，供参考，便于后期快速解决同类问题。对于液相色谱法中的干扰峰，简单归纳为3类：试剂/溶剂、器材以及液相系统。下面对每一类干扰峰来源做简单的分析。[/size][b][size=15px]一、试剂/溶剂[/size][/b][size=15px][/size][size=15px]高效液相色谱法中，常用的试剂主要是有机溶剂、各种盐类及水。有机溶剂一般多为购买的色谱级，所以出现问题的几率较小。但是分装出的有机溶剂，由于多次使用，被污染的概率较大，因此引入干扰峰的几率较高。其次是水，水中的杂质是干扰峰的主要来源之一，这是大家极易忽视的问题。采集波长较低的检测方法，建议使用高品质水，这样可以避免很多因为水质带来的问题。再次是各种盐类，这也是色谱干扰峰的主要来源之一。如图2所示，与图1相比，如图2加入磷酸二氢钾后，16.5min处出现干扰峰。对于无机盐引入的干扰峰，在方法开发初期一般就会给眼关注，寻找解决方案。方法确定后，盐的品种及级别也同时确定，因此盐对方法的影响基本可控。[/size][size=15px]水和无机盐引起的干扰峰，比较快捷的解决方案是安装鬼峰补集柱，这样可以有效的避免此类干扰。如果使用离子对试剂，则需选择不影响离子对试剂的鬼峰补集柱。[/size][img=,603,617]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081055083308_9090_3005249_3.png!w603x617.jpg[/img][b][size=15px]二、器材[/size][/b][size=15px][/size][size=15px]干扰峰来源的第二个方面是流动相配制及样品前处理过程中接触的各种器材。[/size][size=15px]首先是流动相配制过程中接触的器材，包括烧杯、玻璃棒、pH计、滤杯、滤膜、流动相瓶等。烧杯、玻璃棒是配制流动相首先接触的器材，因此建议配制流动相的烧杯、玻璃棒专用。滤杯实验人员只要清洗干净一般不会带来污染。需要注意的是，如果过滤含有离子对的流动相，建议增加清洗次数，避免清洗不干净污染后续流动相。因此，对滤杯的清洗应该建立基本的洗涤规程，保证实验人员对使用的器材清洗到位。滤膜也是干扰峰引入源头之一。如图3所示，乙腈经过有机系滤膜过滤后，在梯度洗脱中会引入较大干扰峰。鉴于色谱级试剂厂家已经过膜，且多数仪器都有脱气机，所以建议无需再对甲醇、乙腈等纯有机相过滤。流动相瓶引入干扰峰的现象主要出现在夏季，这是由于夏季温度高，纯水相容易滋生细菌。后续的流动相瓶使用人员清洗不到位，所以导致引入干扰峰。因此流动相瓶的清洗要建立严格的洗涤规程。[/size][size=15px]再次样品前处理过程中接触的器材。前处理过程中接触的器材主要包括容量瓶、滤头、注射器及进样瓶。容量瓶的清洗同流动相瓶、过滤装置一样，要建立良好的清洗规程。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]材以及滤头、注射器，多为塑料制品，其化学惰性较玻璃制品差，因此容易引入干扰峰。如下图4、图5、图6所示案例，此方法检测波长为210纳米，溶剂为正己烷-异丙醇（90:10），溶剂分别接触[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]枪头、一次性吸管、一次性注射器后，均引入不同的干扰峰。[/size][size=15px][img=,612,815]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081056561551_79_3005249_3.png!w612x815.jpg[/img][/size][size=15px]进样小瓶若为一次性使用，一般不会引入干扰峰。如果进样瓶反复清洗，多次使用，则应建立清洗规程并对其清洗干净程度进行确认。[/size][b]三、液相系统[/b][size=15px][/size][size=15px]与前两类干扰峰相比，液相系统干扰峰的解决更加困难。液相系统是一个动态过程，所以此类问题解决过程耗费时间长，而且要求实验人员有很高的色谱素养。对此类问题来源主要归结为三类：强保留物质、离子对污染和管路滋生细菌。[/size][size=15px]首先是强保留物质的干扰，其主要特征是宽峰。此类问题多数发生在等度洗脱中，梯度洗脱主要出现在高比例有机相处。这是由于强保留物质在当次进样中未洗脱出，在后续进样洗脱出来所致。如图7中9分钟处的色谱峰。[/size][size=15px][img=,604,682]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108081058092812_7861_3005249_3.png!w604x682.jpg[/img][/size][size=15px][size=15px]对于此类干扰峰，可通过延长采集时间或增加洗脱强度来消除对后续样品的干扰。至于如何延长采集时间，可通过下面的公式计算得到。[/size][/size][size=15px][size=15px]N＝5.54*(tR/Wb/2)^2（1）[/size][/size][size=15px][size=15px]由公式（1）推导可知[/size][/size][size=15px][size=15px]tR＝Wb/2 *(N/5.54)^(1/2)（2）[/size][/size][size=15px][size=15px]N-塔板数，在等度洗脱中N对所有峰相同[/size][/size][size=15px][size=15px]tR-保留时间[/size][/size][size=15px][size=15px]Wb/2-色谱峰半峰宽[/size][/size][size=15px][size=15px]由公式（2）推知， tR2= tR1* W2b/2/W1b/2。积分结果显示，图7中，7min处的色谱峰W1b/2=0.12min，9min处的宽峰W1b/2=0.32min，由此可推知，图7中9min处的宽峰保留时间tR2= 7* 0.32/ 0.12=18.6min。图8为延长采集时间的图谱，20min处即为图7中9min处的色谱峰，与公式推导结果基本接近。延长采集时间后，后续图谱干扰峰消失。尽管按照此公式计算会有一定误差，但这足以让色谱工作者对其进行预判，设置合理的采集时间。[/size][/size][size=15px][size=15px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]系统干扰峰第二个方面是离子对、螯合剂这种难以洗脱的试剂对液相系统的污染。此类污染物多半是由于使用完毕含有离子对、螯合剂之类的流动相后，对系统的冲洗不彻底所致。此类污染物主要对一些采集波长较低的方法产生干扰，普遍表现是基线噪音大或者干扰峰，但随着方法的运行会逐渐趋于正常。[/font][/size][/size][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]系统干扰峰第三个方面是系统滋生细菌。对于系统滋生细菌，多数可能觉得不可思议，因为液相系统使用完毕都会用有机相冲洗保存。目前很多方法流动相A都是水相，虽然水相每日都会新配制，但如果由滤头到比例阀这一段管路长时间在水相中就会滋生细菌。随着时间的运行，梯度洗脱中会逐渐的产生干扰峰。此类问题虽然比较隐蔽，但比较容易解决，只要每日对放置纯水相的通道用有机相冲洗即可避免此类问题。[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]以上是对干扰峰来源的简单分析。然而对于干扰峰的产生，要具体问题具体分析，因为其还与具体色谱条件有关。同一种试剂，在方法A中产生干扰，但在方法B中可能完全没有干扰。因为采集波长，有机相初始比例及最终比例等因素，都可能会对干扰峰的出现产生影响。实际工作中，色谱工作者遇到的最大困难是如何识别判断干扰峰属于哪一类。由于找不清问题根源，所以也就难以有针对性的解决问题。[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]简单分享一下解决干扰峰的经验：[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]首先，判断干扰峰是来自系统还是供试品。此时需要运行两次采集：只运行梯度与正常进样。如果只运行梯度，未进样品，依然有干扰峰，这种情况下多半是系统所致，此时解决方向应针对液相体系，而不是针对供试品。鉴于有些型号的仪器，如果不进样，不会执行进样动作。因此，对于此类仪器，建议执行正常进样与减少进样量两次采集，根据干扰峰的大小来判断是系统原因还是供试品原因。[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]其次，调查仪器使用记录，与实验人员交流。查看仪器使用记录，了解近期运行哪些方法以及这些方法的流动相组成。查看完相关记录后，再跟实验人员交流，了解其操作过程。比如，对于A通道滋生细菌问题，通过仪器使用记录发现，出现干扰峰的仪器近一周都是在运行同一个方法。实验记录显示，此方法的流动相为0.1%的磷酸水溶液，因此可能是系统滋生细菌所致。但实验人员告知，每天晚上都会用有机相冲洗色谱柱，不可能滋生细菌。再次询问得知，实验人员每晚的冲洗是切换成C通道执行，而A通道却一直在0.1%的磷酸水溶液中。因此，切换通道冲洗系统这种不规范操应尽量避免。[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]第三，采取单因素试验解决问题。每次只改变一个因素，逐步找到干扰峰的来源。此类做法看似比较费时费力，但却让色谱工作者对各类色谱问题产生原因有理性认知，增强了色谱工作者解决问题能力，有助于后期问题的解决排查。[/color][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#333333]最后，对单因素排查出的解决方案进行验证，将问题重现。如果根据单因素变量找到的解决方案无法将问题重现，很有可能排查出的影响因素并不是问题真正的根源，需继续排查。能够重现问题，问题才算解决，方可将其关闭，不再研究。[/color][/size][/font][size=15px][/size][size=15px][/size]
[color=#444444]液相色谱分析酚酸类物质，流动相A乙腈，B1%乙酸，梯度洗脱，结果出峰时间较晚并且有些地方峰连在一起，请教一下老师，这种情况怎么处理，若调节流动相配比怎么调节呢，原来20:80 [/color]
[color=#444444]最近在做β—胡萝卜素的液相色谱分析，仪器是用液相waters2695—UV检测器做，柱子是安捷伦C18色谱柱。查看了多个文献，很多都是用乙酸乙酯做流动相，可是用乙酸乙酯流动相，对反相色谱柱有伤害。有的文献是用甲醇：乙腈=90:10，但是我做了，分不出来。不知道各位大虾是什么做胡萝卜素的色谱分析的。β—胡萝卜素是用丙酮先溶解然后再用甲醇稀释，再上机。[/color]
[color=#444444]二元酸和相应的铵盐分析条件一致吗？比如，己二酸与己二酸铵，癸二酸与癸二酸铵。。岛津高效液相色谱仪二元泵可不可以只用一个?谢谢各位大神仙指路，，，，，[/color]
如何用高效液相色谱仪测柠檬酸的液相色谱我原来没接触过高效液相色谱仪，请从解析到分析，如何把峰图打印出来，尽量说得详细些。谢谢 [b]问题补充：[/b]这是我所有的分了，麻烦详细地说下。谢谢 药典就不用说了，我只有05和10版的第二部，上面没有。
最近查阅不少资料，有用HLPC分析果实品质的应用，但对具体操作不甚了解，请高手帮忙指点，怎样利用液相色谱测定还原糖，总糖，维生素C，总酸等果实品质构成元素含量,多谢！
有用液相色谱分析芥酸（C22H42O2),不饱和脂肪酸的吗？流动相都用什么？谢谢！
[color=#444444]高效液相色谱，350nm波长检测四环素类药物，在死时间总有一个干扰峰，各个浓度标准溶液一直都在。想请教一下有什么可能造成了这个干扰峰。[/color]
[color=#444444]对苯二甲酸二异辛酯，间苯二甲酸二异辛酯，邻苯二甲酸二异辛酯液相色谱分析用什么液相色谱柱？[/color]
小伙伴儿们，仪器资料分享帖很常见，仪器保养的分享帖很常见，仪器故障排除的分享帖很常见，但是图谱分析的分享不常见哦！用液相色谱的小伙伴儿们赶紧收藏啦！ 由于液相色谱仪在工作中受到的影响因素较多，因此出现的色谱图形也较为复杂，除与操作者的使用和仪器所处的环境有关外，还与分离柱、流动相性质、分析对象的性质、所选择的工作条件有关。现仅对与仪器性能有关的常见图谱作一粗略分析，供参考。1、图谱一http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015050818423764_01_0_3.png分析原因：1.环境温度变化过大； 2.液流不稳定或有漏液； 3.在技术指标范围内 。现象说明及排除：1.避开室内通风口位置和发热或制冷源 2.观察泵的工作状态,并查漏 3. ＜1×10-4Au2、图谱二http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015050818455731_01_2984502_3.png分析原因：1.外界干扰讯号； 2.输液泵柱室内有气泡； 3.流通池内有气泡。现象说明及排除：1.使机壳良好接地，排除附近干扰源 2.用“清洗”键或排放阀排除气泡 3.拆下输入导管，大流量冲洗池体或在池体出口增加阻力(接长排液导管)3、图谱三http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015050818503213_01_2984502_3.png分析原因：1.仪器在稳定中； 2.在技术指标范围内； 3.柱箱升过高温后，再处于室温工作；1. 4.检测器工作不稳定。现象说明及排除：1.正常现象； 2.属正常状态； 3.将分离柱从柱箱内取出后使用； 4.元器件工作点不稳定，修理后再使用。4、图谱四http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015050818591004_01_2984502_3.png分析原因：1.组份分离不佳 a.色谱柱选择有误 b.流动相不符合分析要求 c.柱后导管过长 2.波长选择不正确 3.流速过大现象说明及排除：1.重叠峰 a.更换色谱柱 b.重新选择流动相 c.尽可能减短柱后导管长度 2.重选波长，增大组份的吸光度差异 3.减小流量值5、图谱五http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2015050819055254_01_2984502_3.png分析原因：1．流动相已用完 2．温度控制器失控(恒温开启条件下) 3．在工作过程添加流动相[/align
[b][font='Times New Roman'][font=宋体]解答：[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）液相色谱与光谱技术联用是元素形态分析的主要分析手段，将样品中的多种形态价态的混合物分离与测定结合在一起，综合了色谱的高分离效率与检测器的专一性、高灵敏度。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）将液相色谱与光谱仪联用可以利用色谱技术将不同形态的金属化合物进行分离，再利用光谱检测技术对各形态的金属化合物进行检测，充分利用光谱仪的高灵敏度、专一性和抗干扰能力的优势。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）目前液相色谱与光谱仪联用的案例有：液相色谱与原子荧光光谱仪联用以及液相色谱与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/yp][color=#3333ff]电感耦合等离子体质谱仪[/color][/url]联用分析砷、汞、硒等元素价态。[/font][/font][font=宋体][font=宋体][img=,256,256]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/03/202103172225078224_1520_3389662_3.jpg!w256x256.jpg[/img][/font][/font]
通常进行高效液相色谱分析是优先考虑的是样品不必进行预处理，就可经溶样来进行分析，因此样品在有机溶剂和水溶液中的相对溶解性是样品最重要的性质。由于样品在有机溶剂中溶解度的大小，初步判断样品是非极性化合物还是极性化合物，进而推断用非极性溶解剂戊烷、己烷、庚烷等，还是极性溶解剂二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等来溶解样品，并通过实验判断。若样品溶于非极性溶剂，表明样品为非极性化合物，通常可选用吸附色谱法或正相分配色谱法、正相键合色谱法进行分析。若样品溶于极性溶剂或相混溶的极性溶剂，表明样品为极性化合物，通常可选用反相分配色谱法或更为广泛应用的反相键合相色谱法进行分析。若样品溶于水相，可首先检查水溶液的pH值，若呈中性为非离子型组分，常可用反相（或正相）键合色谱法进行分析。若pH值呈弱酸性，可采用抑制样品电离的方法，在流动相中加入硫酸、磷酸调节pH=2~3，再用反相键合相色谱法进行分析。若pH值呈弱碱性，则可向流动相中加入阳离子型反离子，再用离子对色谱法进行分析。若pH呈强酸性或强碱性，则可用离子色谱法进行分析。对呈强离子型水溶性生物大分子的分析仍是高效液相色谱的特殊难题之一，近年随凝胶过滤色谱和高效亲和色谱的迅速发展，对解决像蛋白质、核酸等生物大分子的分析提供了有效的途径。来源：互联网
原文来自：JANUARY 2003 LC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] NORTH AMERICA VOLUME 21 NUMBER 1 19,20,22,24,26http://www.chromatographyonline.com/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（二）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（三）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/[size=4]本文原是2年前让我的研究生左莹暑假特意翻译的，只是后来忘了。一个月前，在整理电脑资料中发现了这篇文献翻译，我重新校对，修整了一些错误，但仍可能会有些翻译不对的地方，或者语句不畅，请大家指正。[/size][color=#00008B]][color=#00FFFF][size=4]反相高效液相色谱柱的清洗和再生[/size][/color][/color] 这个月的“关注色谱柱”着眼于将一根污染的柱子回到或接近初始状态的实用方法。Ron Majors 会讨论硅胶基质或其它类型的反相柱子的清洗步骤。 反相液相色谱是迄今为止高效液相色谱法（HPLC）中使用最广泛的技术[1]。它的广泛使用是因为它能应用于大部分的非极性化合物、许多可电离的及离子化合物的分析。大部分用于反相色谱的固定相是亲水性的，因此分析物是通过其与固定相之间的亲水作用的程度来进行分离的，含有亲水组成的基团也有相似的保留行为。 表一列举了最常见的键合硅胶的固定相（1）。一些比较次等的固定相比如说一些混合固定相（例如：苯基－乙基），末端封尾和不封尾类型的，一些极性固定相同样属于硅胶键合。其它一些各种各样的填料同样也被用于反相液相色谱，包括聚合物，涂布有硅和铝的聚合物，涂有氧化锆的无机－有机杂化物和石墨化的碳。各种不同的固定相都有其自身的优点和缺点。表1 HPLC固定相中的使用比例*固定相 使用比例C1839C826CN**14.5苯基12C43.7亲水作用1.8C21.2C10.8其它0.8聚合物0.5* 来源于文献1** 包括正相色谱，因为正相与反相使用无法确定比例。 反相色谱柱由于可使用多种流动相和添加剂而得到了广泛的使用。其中使用添加剂的一些技术可改变或修饰填料表面。有时，这些添加试剂本身就会污染填料表面或键合相。 由于使用了亲水性的键合固定相，硅胶表层有了其他的化学特征。残余的硅羟基存在于所有的硅胶键合相的表层。图一描述了可能存在的不同类型的硅羟基（2）。由于是弱酸的特性，这些硅羟基会同某些分析物和基体化合物相互作用，尤其是同一些碱性化合物。因为硅羟基的Pka值大约是在4.5左右。电离可能发生在中间的pH值，因此存在其同阳离子产生静电作用的可能性。比较老的A型硅胶可能含有高浓度的金属离子（通常为100ppm，或更高），这些金属离子会在硅胶表面提供更强的酸性，同样还会和金属螯合化合物（3）相互作用。残留的硅羟基会在末端不封尾的键合硅胶和短链键合的固定相上（例如C2和C4固定相）造成较多的麻烦。 色谱柱的使用者必须清楚色谱柱固定相的表面特征和可能存在的分析物—固定相表面的相互作用，所以在使用和发展反相色谱方法时必须考虑可能存在的基体相互作用。比如一些非常疏水的材料如玉米油、特别芳香类材料和蜡可以附着在反相填料表层并改变填料层的特征。含有蛋白质的生物液体会吸附在填料表层，尽管分析者尽了最大的努力来保护高效液相色谱柱以防止外来物质对其的伤害，最终是，某些分析物-基体化合物还是会对固定相产生不利的影响。 当一根色谱柱被污染之后，它的色谱性征可能已经不同于未被污染的色谱柱了。被污染的色谱柱可能会表现出反压力的问题。对于一根被污染的色谱柱则必须通过清洗和再生将它恢复到原来的操作条件。“关注色谱柱”这部分将会讨论一些实用的方法来将色谱柱恢复或接近到初始状态。由于键合的硅胶柱是最常用的，所以我要着重讨论他们。在最后，我将会论述一些其他类型的反相色谱柱的清洗程序。 反相色谱柱中污染物是怎样的形成？ 通常，样品基体里总是含有一些对分析者来说不感兴趣的化合物。盐类、脂质、含脂肪的化合物、腐殖酸、疏水性的蛋白质和其他的一些生物化合物就是在使用中能够接触到高效液相色谱柱的可能物质。这些物质可能会比所需分析的物质更强或更弱的保留能力。那些保留能力比较弱的化合物如盐类，将以死体积被洗脱出来。这些不希望发生的干扰可以通过检测器观察到，它表现为一些色谱峰、斑点、基线干扰，甚至是一些倒峰。如果样品基体组成在色谱柱中有强的保留性，且流动相组成本身就不强到足以使其洗脱出来，这些被吸附的、或是被吸收的化合物将会累积，通常是在经过多次进样之后堵塞在色谱柱的柱头。这种特征是在等度条件下观察得到的。中等保留能力的样品混合物可以被缓慢的洗脱出来，其表现为宽峰、基线干扰或基线漂移。 有时，这些吸附的样品组成达到了比较高的浓度，它们便表现为一种新的固定相。被分析物可与这些杂质作用并表现为新的分离机理。它可能会引起保留时间的变化和峰的拖尾。如果色谱柱受到了比较严重的污染，色谱柱的反压力会达到一个无法承受的高度，这将会使泵超压工作，在堵塞的位置引起柱的塌陷并产生中空。表2分析柱的柱体积柱的尺寸（mm*mm）死体积（mL）250 * 4.62.5150 * 4.6 1.5150 * 3.00.64150 * 2.10.2850 * 4.60.5030 * 4.60.3015 * 4.60.15反相高效液相色谱柱的清洗和再生（二）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（三）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/
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