液相色谱含量外标法

[color=#444444]液相色谱使用外标法定量，但是经常出现所有组分含量总和超过100%的现象~~这是为什么，希望高人能够指点一下。[/color]

请问各位专家：液相色谱外标法测定含量（80%左右）时一般允许的误差是多少呢？2%以内可以吗？

用高效液相色谱仪外标法测定兽药含量可不可以不建立标准曲线？测出标准品和样品的色谱峰之后直接带入公式求含量可以吗？

同一个样品，检测两次，均采用外标法，一个是气相色谱，一个是液相色谱含量差距很多，气相含量是百分之90左右，液相含量是百分之95左右，求大神分析原因？

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（HPLC）中外标法是一种常用的定量分析方法，其基本概念是通过测量已知浓度的标样（外标）和未知浓度的样品的色谱峰面积或峰高，从而计算出样品中目标物质的浓度。一般分为外标单点法和外标曲线法，现在对不同国家的外标法进行对比。 [size=18px][b][color=#595959]01.中国药典中的外标法（2025版的公示稿） [/color][/b][/size][b][size=16px][color=#595959]1）外标法的一般步骤：[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]（可以理解为外标法） [/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.按照各品种项下的规定，精确称取或量取对照品和供试品，配制成溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.分别精确量取对照品溶液和供试品溶液的一定体积，进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.记录色谱图，并测量待测物质的峰面积（或峰高）； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.使用公式 C[sub]X[/sub]=C[sub]R[/sub]×A[sub]X[/sub]/A[sub]R[/sub]计算含量，其中 C[sub]X[/sub]是供试品中待测物质的浓度，C[sub]R[/sub]是对照品的浓度，A[sub]X[/sub]是供试品溶液中待测物质的峰面积（或峰高），A[sub]R[/sub]是对照品溶液中待测物质的峰面积（或峰高）。 [/color][/size][b][size=16px][color=#595959]2)[/color][/size][size=16px][color=#595959]对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系，可以采用[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]外标标准曲线法[/color][/size][size=16px][color=#595959]进行含量测定。[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.精确称取适量的对照品，或从对照品储备液中精确量取，配制成不同浓度的系列溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.精确量取这些系列溶液，进行色谱分析，记录色谱图，并测量峰响应； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.利用峰响应（或经转换）对浓度绘制标准曲线，并通过最小二乘法计算出回归曲线方程； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.在相同的色谱条件下，精确量取供试品溶液，进行色谱分析，记录色谱图，并测量待测成分的峰响应； e[/color][/size][size=16px][color=#595959].根据待测成分的峰响应（或经转换）和回归曲线方程，确定供试品溶液中待测成分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]简单理解就是做一条标准曲线，得出标准曲线方程，再将待测品的峰相应代入方程进行计算，得出样品浓度。 [/color][/size][size=16px][color=#ff4c41][b][color=#595959]02.欧洲药典中的外标法 [/color][/b][/color][/size][color=#ff4c41][b][size=16px][color=#595959]1）[b]多点校准（使用校准函数）： [/b][/color][/size][/b][/color][size=16px][color=#595959]a.准备一系列含有不同梯度浓度的对照品溶液，这些浓度应该在已经证明可以得到线性响应的范围内； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.取固定体积的这些对照品溶液进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到峰面积或峰高，并以此绘制校正曲线，横坐标是对照品的量，纵坐标是峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归得到校准函数； [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.按照各论中规定的程序准备待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的操作条件下进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.测量待测组分的峰面积或峰高，并根据校准函数读取或计算组分的含量； [/color][/size][size=16px][color=#595959]2[b]）单点校准： [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中，通常选择一个校准曲线线性范围内的对照品溶液，以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析，通过比较得到的响应来定量分析组分的含量； [/color][/size][color=#595959]c.在这种方法中，所有操作步骤，如进样程序，都必须在恒定条件下进行 [img=,690,801]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061421193322_2231_3203140_3.jpg!w690x801.jpg[/img] 图1.欧洲药典原文描述[b][color=#595959]03.美国药典中的外标法 [/color][/b][size=16px][color=#595959][b]1）校准函数法（多点校准）： [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.制备一系列含有不同浓度的对照品标准溶液，这些浓度应在已知能够产生线性响应的范围内； b[/color][/size][size=16px][color=#595959].取固定体积的这些标准溶液进行色谱分析，并注射到色谱系统中； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到的峰面积或峰高，绘制校准曲线，横坐标是对照品的量，纵坐标是峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归方法得到校准函数； [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.根据各论中规定的程序制备待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的色谱条件下分析样品，测量待测组分的峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.通过校准函数计算出样品中待测组分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#595959][b]2）单点校准法：[/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中，选择一个浓度在线性范围内的标准溶液，以及一个浓度接近该标准溶液的待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析，通过比较得到的响应来定量分析组分的含量； [/color][/size][color=#595959]c.这种方法中，所有操作步骤，包括进样程序，都必须在恒定条件下进行，以确保分析结果的一致性 [img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061424187996_390_3203140_3.jpg!w690x214.jpg[/img] 图2.美国药典原文描述 [color=#595959][b]总结一下：[/b][/color][size=16px]1）中国药典提供了外标法的一般步骤和标准曲线法的详细描述，但没有明确描述单点校准法。 [/size][size=16px]2）欧洲药典和美国药典都详细描述了多点校准和单点校准的方法，并且强调了所有操作步骤需要在恒定条件下进行。（这两家基本是一 致的描述） [/size][size=16px]3）三种药典都强调了在色谱分析中保持操作条件的一致性，以确保分析结果的准确性和重现性 [img=,690,249]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061426098030_8014_3203140_3.jpg!w690x249.jpg[/img] [/size][/color][/color]

液相色谱法检测含量是液相分析工作的重要的一项，液相色谱法检测含量用的基本是外标法和内标法。其中外标法检测的准确性受到更多因素的影响，更需要丰富的经验来避免或减小误差。本人是做农药制剂分析出身，经过多年的锻炼，自认为对外标法含量检测小有心得，加之最近论坛有坛友问及相关问题，所以想写一篇这方面的小文章，以供大家参考，同时也希望大家补漏拾遗，如有不对的地方，也请指出。首先，我们来看看外标法含量检测的计算公式：含量=m对*P*A样*V样/（m样*A对*V对）*100%其中的各个符号的意义大家都知道，我就不赘述。这其中的任何一项发生了改变，都会使得检测结果发生变化，而这其中的任何一项，都有很多种原因使其发生变化。下面我们就逐一分析。1. m对/m样——对照品称样量/样品称样量1.1 天平准确性天平是否经过校准，其是否在正常工作状态，称量时天平是否带有静电，是否有空气流动，这些都是影响读数的因素。1.2 称量方式采用的是加量法还是减量法，都是很有讲究的。正常情况下，肯定要采用加量法，一次称取到位，这样才能得到准确的称样量。1.3 称量操作称量时，是否足够小心，不会在转移样品时使样品撒漏，这个是非常重要的。1.4 样品性质样品如果具有挥发性，直接称样时，必然会挥发一部分造成误差；另外，如果样品不稳定，或在溶液中不稳定，那么实际上来讲，也是影响了样品量。还有，样品要保证均匀，固体不必说，液体样品要保证是均相，称量之前要摇匀。1.5 称样量对于万分之一天平，称样量最好能在100mg以上；对于十万分之一的天平，称样量应在10mg以上。 2. P——对照品含量2.1 对照品质量对照品是否有合法来源，其含量值是否准确，这个相信大家都知道。2.2 对照品的保存对照品是否按要求保存，也是至关重要的。因为如果对照品没有按照规定保存，那么其右可能会发生降解，进而影响含量值；另外，如果对照品是保存在冰箱中，称量时，应取出放在干燥器中回至室温再称量，否则其很有可能会吸收空气中的水分，影响含量值。同理，如果对照品引湿性很强的话，长期暴露在空气中，也会使其P发生变化。 3. A样/A对——样品峰面积/对照品峰面积3.1 方法的可靠性如果所用的分析方法可靠性不好，样品峰面积或保留时间容易变化，那么检测结果也是很重现性不好的。关于方法的可靠性，做过分析方法验证的人应该都能明白，这里包括系统适用性、精密度、准确性和耐用性以及线性等。3.2 仪器进样精密度这其实可以包括在上述3.1因素中。3.3 残留或污染如果仪器系统被污染产生残留，而本身峰面积就不大的情况下，这个因素产生的误差就更明显了。3.4 积分如果样品峰形不够好，或者分离度不够好的情况下，积分就很重要。 4. V样/V对——样品稀释体积/对照品稀释体积4.1 容量瓶、移液管等体积是否准确一般来说，新买的容量瓶体积是符合要求的，但是也难免会买到个别次品，这就需要进行校验了。4.2 容量瓶、移液管规格这个是很重要的，一般大家都能注意这个问题，做到合理使用。4.3 容量瓶等使用习惯容量瓶在使用时，不能使其至于高于40摄氏度的环境下，否则容量瓶会发生变形。我们以前有个习惯，冬天尤其频繁——瓶子不够用了，而洗过的还没干，就用电吹风吹干，这种行为不光会影响体积，还会使容量瓶瓶口发生变化，摇匀时造成漏液现象。4.4 定量操作这个包括容量瓶和移液管的使用，正确的使用方法就不用说了吧。我只说一些注意事项，一是移液管吸液时，液面不要高刻度太多，放液时千万不要用洗耳球吹，并且尽量保持每次操作时间都一样，粘度大的溶液尤其需要如此。二是观察液面时，要使容量瓶和移液管保持垂直，这时很多人喜欢用三根手指捏住，其实这样不容易保持垂直，最好用两根手指，轻轻捏住就好。三是注意接触容量瓶移液管等的面积越小越好，以免体温加热溶液。4.5 温度[font=Times New Roma

我们开展新的产品的检测方法，1.3环己二酮的含量检测，用乙腈和0.5%乙酸水做流动相（25:75），254波长紫外检测器。用的是单标的外标法检测，取样0.02g，定容50mL，然后稀释后进样的进样浓度（40ppb左右），然后我们测得样品含量的数据很不稳定，前天95-97%左右，昨天99%-103%，今天还是101%左右。求高手指导改进什么地方！！！注：1，单个浓度点的样品的峰面积重现性很好标准偏差0.4%左右。2，我们样品含量应该不超100%，用单标测别家的产品在99%左右。

有做聚乙氧基化非离子表面活性剂中聚乙二醇含量的测定 高效液相色谱法 的没有，请教下外标法做曲线，聚乙二醇标样600-2000，是只取一种配制不同浓度，做曲线，还是600,1000,2000的都取。具体怎么个情况？

[color=#444444]最近做的不同批次的同一样品，用的是安捷伦1200液相色谱仪，流动相为70%乙腈，波长为215nm。结果如下[/color][color=#444444]1、用面积归一化法计算，纯度为85%，可是用外标法计算含量时，却高达97%（没有乘以总重量，下同）[/color][color=#444444]2、另测一批样品，归一化纯度为86%，外标法计算含量时，却高达100%。[/color][color=#444444]请问这是什么情况？[/color]

求大神列出外标法计算含量的的公式。要具体的啊，按无水干燥物计算

液相色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的外标法和内标定量有何区别?是如何处理的?

本人刚接触液相色谱，想要检测某饮料中某一物质的含量采用外标法，该物质的大体含量不清楚，看了几篇参考文献说外标法中浓度范围最好包括样品浓度，这该怎么做呢？难道扩大外标法中的浓度范围吗，这样好像比较麻烦又不见得准确啊？还有就是进样量应该怎么确定啊？

问题: 问下各位外标法中各峰面积的百分比可以代表含量浓度吗回复: 不可以，纯度和含量明显是两个东西，这个东西是要和标准品进行计算得到的，从峰面积看不出含量的。你先了解下归一化面积法和外标法应用条件吧。

[table=100%][tr][td]现在正在测一个样品的含量，有96%的标样一份，待测样品一份 待测样品取了两份 用外标法测含量，结果一份算出来95% 一份96.2% 请问这两份差多少为这个外标实验成功啊？有没有一个标准[/td][/tr][/table]

摘要：本文介绍了采用LC-600高效液相色谱仪测定变压器油中糠醛含量的方法。油样中的糠醛用甲醇提取出来后，采用C18柱，以甲醇－水为流动相，在紫外检测器波长为280nm的条件下进行检测，检测限能达到0.01μL/L，在0.05μL/L～10μL/L范围内线性良好，RSD为0.32％。关键词：糠醛；高效液相色谱；变压器油；微量分析2.1 仪器与试剂LC-600高效液相色谱仪，P600高压恒流泵，UV600紫外检测器，手动进样阀(7725i)，P600色谱工作站(可以反控主机），JL-120型超声波清洗器，甲醇（HPLC级），超纯水。2.2 色谱条件色谱柱为C18（5μm，250mm×4.6mm）； 柱温为室温；流动相为甲醇—水（40/60，V/V），流速为1.0mL/min，使用前需进行超声波脱气处理；紫外检测器波长为280nm；进样量20μL。2.3 实验方法标准储备液的配制：精确量取10uL糠醛，加入1000mL容量瓶中，用甲醇定容至1000mL。该标准储备液的浓度为10μL/L。4 结论本文采用LC-600高效液相色谱仪分析了变压器油中的糠醛含量，采用C18柱，甲醇－水（40/60）为流动相，以外标法定量。该方法的最低检测限为0.01μL/L，RSD为0.321％，本法具有准确性好，重复性高，检测限低，分析速度快等的优点。

大家好,请大家来帮助讨论一下外标法测一样品的杂质含量:我现在有一个样品要求用外标法测其含量小于100ppm,现在已经有一杂质的标准品,请问如用外标法测的话如何配制标准杂质的浓度和样品浓度?

问题:?问一个问题，有一种产品不过滤直接进样，用外标法计算，大学一个月后，计算含量就会偏低，冲一夜后，含量就又高了的，原因是什么呀回复:首先要理解外标法计算的公式原理，再者：样品浓度，峰面积，样品含量之间的关系。

岛津的液相色谱，配有自动进样器。用外标定量时，只配一个标样，选择用改变的进样量（即1微升，2微升。。。。）这种方式来做标准曲线，是不是线性更好一些。

做液相色谱正相外标的时候，如果样品峰面积和稀释100倍后的对照液的峰面积不成100：1的时候该怎么办？

液相色谱，外标法定量，对标准样品的纯度有要求吗？是不是一定要大于98％？现在只能买到FLUKA质保书上纯度为95％的标准品（GC)，可以用于外标法定量吗。大家平时有没有碰到过标准品纯度不高的问题，是不是说明这种物质很难提纯？

[color=#444444]请问，液相色谱测定含量双样双针的，f值有没有统一规定的啊？F=称样量/A峰面积/稀释倍数，要不要除以对照品的稀释体积啊？是随便写还是有统一规定写法啊？[/color]

张静等建立了液相色谱-三重四级杆质谱法（LC-MS-MS）快速测定化妆品中地氯雷他定等51种抗组胺类药物含量的方法。样品经10 mmol/L乙酸铵甲醇溶液超声提取后，经0.2 μm滤膜过滤后，以10 mmol/L乙酸铵水-甲醇作为流动相进行梯度洗脱，经Eclipse Plus C18色谱柱（100 mm×3.0 mm×1.8 μm）分离，采用电喷雾离子源在正、负离子 模式下进行多反应监测，外标法定量。结果表明，51种抗组胺类药物在2 ~ 50 ng/mL范围内线性关系良好（r0.999），检出限和定量限分别为0.15 μg/g和0.5 μg/g。对液态水基、乳液、膏霜、面膜、液态油基、凝胶、粉、蜡基8种不同化妆品基质在0.5、1.0、5.0 μg/g加标水平下的平均回收率为70.3% ~ 127.8%，相对标准偏差（RSD）小 于7.7%（n=6）。该方法前处理操作简便、快速、专属性强、灵敏度高、精密度、准确度均较好，可用于化妆品中51种抗组胺类药物含量的快速测定。 文章具体内容见附件

各位好，我刚学习液相，不是很明白在做液相时内标法和外标法，哪位能详细解释下啊。谢谢~~~

各位前辈，我用液相检测一个产品的含量（外标法），暂时没有买对照品，纯度是99.5%，那么含量大概会是多少？是不是产品的纯度越高，含量就越高？

纯度一般指化合物物的分面积归一法测得面积百分比　　含量使用容量分析法(滴定)或者色谱外标法、内标法紫外分光光度法等等测得的质量百分含量。　　补充一点:纯度往往指扣除水份或盐份后标的物的含量.含量指单位质量的物料中标的物的百分比(%)或体积比或绝对量(如**g/L).如75%酒精的乙醇含量为总质量的75%,但其纯度与除水以外的其他杂质有关,若你用一点杂质没有的乙醇来配制,则其酒精纯度为100%;,若你用含有5%甲醇的乙醇来配制, 则其酒精纯度为95%.　　检测方法也有异:同样用液相色谱,面积归一法测得面积百分比是纯度,内/外标法测得的是含量.不完全是，归一法也可以测含量，也可以当作含量。我们一般在生产分析中把归一法检测的当作含量。但实际是纯度！ http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif