液相梯度洗脱检测器

示差检测器能不能使用梯度洗脱呢 书上说不能 那参比池不能扣除梯度洗脱的不同之处吗

紫外检测器走梯度洗脱程序合适吗？我知道紫外检测器可以用梯度洗脱，所以想问下做的时候用的多不多。我个人认为紫外使用梯度程序得到的结果相比ELSD很糟糕，试了很多次，基线太差了，有些低含量组分都被不平的基线遮盖了。

请问液相梯度洗脱，DAD检测为什么会出现倒峰？[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711081204_01_3318616_3.jpeg[/img]

我现在用蒸发光检测器，梯度洗脱，发现基线漂移很大，当不通过色谱柱直接接到检测器基线很稳，只要通过色谱柱，基线就漂移了，是不是梯度洗脱对色谱柱有影响？我用的merk的氨基柱，流动相为A：乙腈-水-异丙醇：80-5-15；A：乙腈-水-异丙醇：80-20-15，梯度为20分钟内B由30％到100％,我的漂移管温度92度，载气流量2L/min,用的氨基柱。

[b][color=#444444]现用到液相梯度洗脱,但不知梯度洗脱时间怎么设定(两个梯度冲洗时间).哪位高手指点一下?[/color][/b]

[b][font=宋体][back=white]解答：[/back][/font][/b][font=宋体][back=white]在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：[/back][/font][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围后就不会互溶。例如：乙腈和[/font]1 mol/L[font=宋体]的醋酸铵（[/font]pH=5.16[font=宋体]）做梯度洗脱，乙腈含量超过[/font]70%[font=宋体]时就会出现不溶。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头上后会被强的溶剂洗脱出来，用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止溶剂混合时产生气泡。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）混合溶剂的黏度常随其组成而变化，因此在梯度洗脱时常会出现压力变化，例如纯水或甲醇的黏度都比较小，但是当二者以相近的比例混合时黏度会增大很多（甲醇[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]水体积比为[/font]1[font=宋体]：[/font]1[font=宋体]时压力最大），因此要防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力。[/font][font=宋体]（[/font]4[font=宋体]）每次梯度洗脱程序运行完之后必须对色谱柱进行彻底平衡，使其恢复到初始的状态，需让[/font]10~30[font=宋体]倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相和初始流动相达到完全平衡，平衡不好会影响下一针样品的分离度和保留时间。[/font][font=宋体]（[/font]5[font=宋体]）注意梯度洗脱用水的有机物残留。往往在等度洗脱时用的水，在梯度洗脱时发生问题（鬼峰）。这是因为在梯度过程中，水占的比例很高时的流动相洗脱能力很低，此时水中的有机物残留就被色谱柱吸附并浓缩，等到强溶剂占高比例时，浓缩的有机物被高洗脱能力的流动相洗脱而流出色谱柱，并成为一个色谱峰，从而干扰分析。[/font][font=宋体]（[/font]6[font=宋体]）梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

液质联用精密度问题在做液质联用定量分析中药中多种成分时，以A：0.3%甲酸水，B：乙腈为流动相，采用梯度洗脱，洗脱程序：0-6min 20%-40% B，6-8min 40%-100% B，8-14 min 100% B，13 min内所定量成分能完全出峰，主要是香豆素和生物碱类，以前的液相条件在质谱上分离挺好，但20 min之后保留时间漂移较大，也曾用等度洗脱试，峰分不开，采用现在的梯度条件，保留时间基本稳定，做好线性关系后，精密度考察出现问题，采用多反应离子监测，每次所测含量呈不规律变化，有时高有时低，进样20多针相同浓度的混标液精密度依然很差，RSD能达到20多，有的成分含量前后能相差1倍，用的是Agilent1200的液相，6410 QQQ-MS色谱柱是2.1×150 mm，1.8u的，流速是0.3 ml/min，混标液是用部分甲醇和部分流动相溶的，仪器也是前段刚检过的，都pass了，不知什么原因，是每次离子化程度不一样吗，请各位高手指教。还有做精密度、重现性、回收率时，每次都要做一次线性关系吗

实验室有液相色谱，用的是荧光检测器，老师在考虑要装梯度洗脱，但是目前只有一个泵，型号是岛津LC-20AD，还需要配置哪些配件才能使用梯度洗脱呢？一定要两个泵吗？？？之前有一个工程师说可以装四元低压梯度阀就可以了，请教各位有没有比较好的方案~求助！谢谢！

想用超高效液相--蒸发光散射监测器测二硝托胺及代谢物，用乙腈：0.1%甲酸水（75：25）等度洗脱时，两者出峰时间基本重合了；梯度洗脱还没弄出来，我该怎样设梯度程序呢 大神指导， 注：代谢物极性大

求教：液相梯度洗脱流动相是随时变化的还是一下变化的。例如梯度 0-5min A 90% B10%，5-8min A 70% B 30%流动相在5min后A相是一下变成70%的还是0-5minA相是慢慢变化成70%的，我感觉是后一种，求教大神解答

能得出梯度曲线是否证明液相色谱仪能做梯度洗脱！！我很想知道！！请知道的朋友尽快和我联系！！谢谢！！

求助：高效液相如何进行梯度洗脱？

在液相色谱分析中梯度洗脱与等度洗脱差异？

高效液相梯度洗脱如何选择？

请教各位大峡梯度洗脱是怎么回事，最近想买一台液相色谱，实验室本来只有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]，所以对液相不太了解．如果想买一台液相色谱，能做梯度洗脱，对设备有什么要求，是不是一定需要两台泵．

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的梯度洗脱和等度洗脱都是用在什么操作中呢？梯度洗脱有什么优势呢？

液相梯度洗脱基线不平怎么回事？怎么解决？

液相梯度洗脱设置，泵是日力1110,多组分分析需要梯度洗脱进行，不知道怎么设置

专家好，我的问题是：检测器：PDA, 流动相：甲醇-水，检测波长240nm, 梯度洗脱，最近几天换了另一厂家的甲醇后， 发现基线飘的特别厉害，吸收值到了100-200MAU，进空白也是一样。今天把检测池用甲醇冲了6个小时，把流动相瓶子也清洗一遍，还是不行。

单泵的液相能做梯度洗脱吗？有的说可以，有的又说不行，到底是怎么回事呀

梯度洗脱对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，很难得到理想的分离结果。要么分离时间太长，要么分离度太差。液相色谱中采用梯度洗脱,目的：缩短的时间；提高分离效果。梯度洗脱：流动相由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k'，并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。梯度洗脱特点：提高柱效改善检测器的灵敏度当样品中的一个峰的k'值和最后一个峰的k'值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。梯度范围：指流动相中强溶剂分别在起始液和终止液中的浓度。调节梯度范围对得到最佳的梯度分离起重要作用。最佳梯度范围：第一个峰处分时间大约为2倍的t0，梯度结束时把最后一个峰洗脱出来。梯度洗脱的形式线形梯度：在梯度洗脱时，流动相强度的变化梯度时间成线性比例。在一定时间内流动相强度越大，直线斜率越大。指数梯度：在梯度洗脱时，流动相强度岁梯度时间变化称指数关系 。凹形：梯度起始阶段强度变化缓慢，随时间增加强度变化加快。凸形：起始阶段梯度速度变化快，终止阶段梯度速度变化慢。折线形： 选择适当的A,B溶剂强度：A溶剂为低强度；　　　B溶剂为高强度，B溶剂的强度应能够在梯度过程中使所有欲测谱带都能被洗脱，并使各谱带的k’值在2-10之间。初步分离　　选择好A、B两种溶剂，先按中等强度进行配比，在此恒定强度下进行初步分离。A、B混合溶剂强度应使所有谱带的k’值在1-10之间。梯度形式选择经过初步分离，一般可能得到3种分离色谱图：① 前半部峰重叠，后半部峰分离度过大，保留时间太长；　 可选择线形梯度，或凹形梯度。② 前半部分离良好，后半部峰重叠；　 可选择凸形梯度。③ 前后两部分分离良好，中间部分峰重叠。　 可选择折线梯度。

最近在做液相，流动相是甲醇和乙酸铵，缓冲盐乙酸铵0.05mol/L。用的是C18色谱柱。在做专属性考查时，有一个中间体的极性很差，需要用梯度洗脱，将它洗脱出来。那我摸条件时，可以用甲醇比例高的流动相逐渐降低而找到合适的梯度条件吗，会不会甲醇比例高时使缓冲盐在柱子中析出呢。（比如95%甲醇，5%乙酸铵）http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif

[b][font=宋体]问题描述：等度条件下目标物质与杂质组分不能分开，如何设置梯度洗脱程序进行分离？[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]在摸索梯度分离条件时，可以先尝试用等度的方式实现目标物与杂质的分离，然后再优化梯度洗脱程序，在保证分离度的情况下，缩短分析时间。[/font][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）[/font][font=宋体]梯度洗脱是指在同一个分析周期内，按照一定程度不断改变流动相浓度比例，使性质差异较大的组分依据各自的容量因子不同，实现目标物质的分离与测定，在液相色谱中对组分复杂的样品多采用梯度洗脱的方法。[/font][align=left][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）是否能够通过梯度洗脱实现分离，不仅与待测物质的性质有关，还与仪器的性能有关，需要仪器支持多元流动相通道。[/font][/align][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）在设置梯度洗脱程序时，不仅可以改变流动相浓度比例，还可以通过改变流速、梯度曲线等方式实现目标物的分离。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

老师们好，又有新问题请教。我用液相做梯度洗脱，流动相70%水：30%乙腈保持5分钟，10分钟内将乙腈升至100，再保持10分钟，结束。运行乙腈空白时，谱图上1.684min出峰，应该是溶剂峰。后面，14min--18min出现七、八个峰，有两、三个峰信号强度比溶剂峰大很多，差不多有十几倍。我不知道这是什么原因造成的，是我用的进口色谱纯试剂有问题，还是梯度设置的有问题？请教老师们了，帮我分析下出现这种情况还有什么原因。谢谢！

我们公司的高效液相是安捷伦1200，配备单泵，但是《中国药典》里面的方法是需要双泵梯度洗脱，因此我公司无法按此法检测，现在老板不愿意再买一台泵，要求我从流动相的配比上面来解决单泵洗脱达到双泵梯度洗脱效果的问题，各位专家有什么高招，在此讨论讨论

各位老师： 我刚接触液相不久，现在很多样品分析涉及到梯度洗脱，只是听大家说，自己还不会，非常着急，请大家能否帮忙提供与液谱梯度洗脱相关的知识资料，谢谢大家了！

梯度洗脱装置分两种：高压梯度：用两台高压输液泵将两种溶剂输入低压梯度：在常压下将两种溶剂（或多元溶剂）混合，然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。梯度洗脱可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度。但在使用中，梯度洗脱也有许多与等度洗脱不同的地方需要注意。那么，本周讨论话题就是：[color=#DC143C][size=4]梯度洗脱时应注意哪些事项？？[/size][/color]希望大家就自己的经验说一说。[color=#DC143C]小结：[/color]1、注意各溶剂间的互溶性。2、对溶剂的纯度要求更高（影响重现性）。3、注意梯度变化时系统压力的变化，防止超出限度。4、梯度结束后，用初始流动相冲洗，使柱子平衡一段时间（再生），使系统回复到初始状态。（梯度周期）5、低压梯度要注意脱气，混合后容易产生气泡。6、容易出现鬼峰，应作空白试验。7、梯度选择时尽量几相之间相变化要小,否则不易平衡。8、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。9、要注意水相中盐的浓度，防止在有机相提升过程中盐的析出。