自从Waters 推出收款超高效液相色谱之后,其他各大厂商也都纷纷推出自己的产品。而沃特世科技(Waters)的 ACQUITY UPLC H-CLASS 液相色谱系统 与 安捷伦科技(Agilent)的 1290 Infinity 液相色谱是超高效液相色谱中的佼佼者。如果您是使用这两款仪器中的其中一款仪器,欢迎您来谈谈在日常使用遇到的问题以及解决的过程,仪器使用心得体会,以及在仪器应用等情况。如果您是这两家厂商技术人员,我们也欢迎您前来谈谈仪器的参数情况,仪器性能情况以及在日常使用需要注意的问题,以便让大家更好的使用该仪器;另外也欢迎您对大家的疑问前来答疑解惑。也欢迎大家就我们的讨论发表您的看法,请勿灌水或相互攻击,否则杀无赦!本次PK仅供参考,如果有什么建议欢迎与我们联系~
要实现超高效液相色谱分析,除必须制备出装填粒度小于2μm固定相的色谱柱外,还必须提供高压溶剂输送单元、低死体积的色谱系统、快速的检测器、快速自动进样器和高速数据采集、控制系统等,才能促成超高效液相色谱的实现。超高效液相色谱的优点基于1.7μm小颗粒技术的超高效液相色谱与人们熟知的高效液相色谱(HPLC)技术,具有相同的分离原理。不同的是,超高效液相色谱不仅比HPLC具有更高的分离能力,而且结束了人们多年不得不在速度和分离度之间取舍的历史。使用超高效液相色谱可以在很宽的线速度、流速和反压下进行高效的分离工作,并获得优异的结果。提高分离度超高效液相色谱发挥了1.7μm颗粒提供柱效增高的全部优越性。尤其是1.7μm颗粒提供的柱效比5μm颗粒提高了3倍。因为分离度与粒度的平方根成反比,1.7μm颗粒的分离度比5μm颗粒提高了70%。在梯度分离中也具有同样的优越性。提高分析速度由于超高效液相色谱系统采用1.7μm颗粒,柱长则可以比使用5μm颗粒时缩短3倍而保持柱效不变,而且使分离在高3倍的流速下进行,结果使分离时间缩短而分离度保持不变。提高检测灵敏度浓缩样品和采用各种高灵敏度的检测器都能提高灵敏度,而在超高效液相色谱中通过减小颗粒度,使色谱峰变得更窄,信噪比(S/N)增大,灵敏度得到额外的提高。提高质谱离子化效率减小基质效应[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]已经是液相色谱发展的主流,能够充分发挥LC高分离度和MS高灵敏度的优势,超高效液相色谱与MS的联用使这种优势更加明显:一方面,超高效液相色谱系统达到最佳线速度时,其流动相流速一般在0.25~0.50ml/min之间,这与质谱能承受的流速更加匹配(API接口一般能承受0.20ml/min),使离子化效率增加,而新的nano超高效液相色谱的流量更可低至200nl/min,可以不需分流而直接进入质谱 另一方面,超高效液相色谱的分离度比HPLC有很大提高,其色谱峰扩展很小,峰浓度很高,这样不但有利于化合物的离子化,同时有助于与基质杂质分离,在一定程度上能降低基质效应,从而使灵敏度和重现性得到提高。
自从Waters 推出收款超高效液相色谱之后,其他各大厂商也都纷纷推出自己的产品。而沃特世科技(Waters)的 ACQUITY UPLC H-CLASS 液相色谱系统 与 安捷伦科技(Agilent)的 1290 Infinity 液相色谱是超高效液相色谱中的佼佼者。如果您是使用这两款仪器中的其中一款仪器,欢迎您来谈谈在日常使用遇到的问题以及解决的过程,仪器使用心得体会,以及在仪器应用等情况。如果您是这两家厂商技术人员,我们也欢迎您前来谈谈仪器的参数情况,仪器性能情况以及在日常使用需要注意的问题,以便让大家更好的使用该仪器;另外也欢迎您对大家的疑问前来答疑解惑。也欢迎大家就我们的讨论发表您的看法,请勿灌水或相互攻击,否则杀无赦!本次PK仅供参考,如果有什么建议欢迎与我们联系~
[color=#156200][size=3]超高效液相色谱是大家谈论的热点,你认为是厂家故意炒作还是真的有其发展的空间和生存的价值?超高效液相色谱会取代高效液相色谱么?他们的关系如何?超高效液相色谱的发展前景如何?你使用过超高效液相色谱么?使用的情况如何?欢迎大家一起来PK~[/size][/color]============================================================2010中国科学仪器发展年会的下午让我们一起与业内专家和知名厂商一起解读此问题。
[b]超高效液相色谱[/b][i]高效液相色谱方法及应用(第二版)作者:于世林[/i]由以上讨论中,可知在HPLC分析中,使用粒度dp为5~10μm固定相,色谱柱长10~25cm, Δp为3~10MPa,就可获得n≥3000的柱效,使用大多数有机溶剂或水作流动相,可在2~30min内,实现大多数不同组成样品的分析要求。上述结论是在20世纪80年代末期获得的,90年代后,液相色谱使用了粒度dp=3.5μm的固定相,2000年很道了使用dp=2.5μm的固定相,由于高压愉液泵提供压力的限制,实现了仅用色谱柱长为3~5cm的快速分析。直至2004年美国Waters公司在匹茨堡会议上展出了最新研制的ACQUITY超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatographay,UPLC),它使用dp仅为1.7μm的新型固定相,色谱仪提供的Δp达140MPa(2000psi),可使在常规高效液相色谱需要30min时间的样品分析在超高效液相色谱短短为仅需5min,.并呈现出色谱柱柱效达20万块/m理论塔板数的超高柱效。 UPLC保持了HPLC的基本原理,全面提升了液相色谱的分离效能,不仅提高了分辨率,也使检侧灵敏度和分析速度大大提高、使液相色谱更高水平上实现了突破。因此,必将大大拓宽液相色谱的应用范围,井大大加强了UPLC在分离科学中的重要地位。一、超高效液相色谱的理论基础在高效液相色谱的速率理论中,范第姆特方程的简化表达式(7-23):[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/11/200611251040_33593_1613333_3.jpg[/img]如果仅考虑固定相的粒度dp对H的影响,其简化方程式可表达为[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/11/200611251042_33595_1613333_3.jpg[/img]
[font=宋体][font=宋体]超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是在传统高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的基础上升级改进,使之获得更高的系统耐受压力。这样就可以适配更小填料粒径的色谱柱,因为越小粒径的色谱柱,柱效越高,反压也越高。常规的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统无法承受亚[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]微米的色谱柱带来的高反压。超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]搭配小粒径色谱柱,能够提供更高的分辨率、更快的分离速度和更高的灵敏度,是搭载质谱检测器的理想分离系统。目前超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]国产与进口品牌种类繁多,如何选择合适的设备,这里谈谈我的经验。[/font][/font][font=宋体]1、[/font][font=宋体]输液系统[/font][font=宋体]1)[/font][font=宋体]输液泵[/font][font=宋体]目前市面上主流的是凸轮往复泵和直线电机泵两种。凸轮泵因为设计上的原因需要加装阻尼器来稳定压力脉冲,系统的延迟体积要大于电机泵。流量的准确度与精密度上电机泵也要更出色。但成本上电机泵会更高一些。[/font][font=宋体]2)[/font][font=宋体]泵组合[/font][font=宋体][font=宋体]分为二元泵系统和四元泵系统,二元泵是两组输液泵分别控制有机相与水相流路,混合比例靠控制[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]泵跟[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]泵的流量,混合点位于泵后,属于高压混合,混合效果更好,不足是只能同时使用四路溶剂中的两路。四元泵系统只有一组输液泵,通过控制比例阀的开合时间,控制溶剂混合比例,混合器位于泵前段,属于低压混合,混合精度上不如二元泵系统。但四元泵可以灵活使用四路流动相中的任意[/font][font=Calibri]1-4[/font][font=宋体]种,更适合方法开发。因为四元泵系统中,有机相和水相共用一组输液泵,泵内更容易析出结晶盐损害密封组件。所以在使用四元泵时,需要特备注意缓冲盐溶液与有机相的混合比例,避免结晶盐析出。[/font][/font][font=宋体]3)[/font][font=宋体]电动放空阀,手动是真的不方便。溶剂压缩补偿技术,这也是很重要的参数,但各厂家技术的优劣难以把握。各厂商一般都会提供流量准确度与紧密度参数,但测试条件各厂家都不一样。漏液传感器、真空脱气、柱塞清洗等功能基本都是标配了。[/font][font=宋体]2、[/font][font=宋体]自动进样器[/font][font=宋体]1)[/font][font=宋体]进样器[/font][font=宋体]主要关注的就是进样误差和进样重复性,这两个厂商基本都会提供,可比性还是很高的。虽然各厂家都会提供交叉污染的测试数据,但我们用户在选择时,更应该关注进样针时流路设计还是旁路设计。旁路设计的进样方式有个天然缺陷,就是无法清洗进样口,导致交叉污染会比流路设计大。而流路针也有缺陷,因为针跟针座会在运行样品时连接到流路中,针座密封就需要做到耐高压。但是在反复进样的过程中,针座密封圈不不断磨损而漏液。[/font][font=宋体]2)[/font][font=宋体]附加功能[/font][font=宋体][font=宋体]类似于瓶位检测、顶针堵针保护等附加功能可以很好避免误操作时带来的仪器损害。温控功能主要考虑组件的耐用程度,温控的准确度和稳定性在[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]℃以内都是可接受的。[/font][/font][font=宋体]3、[/font][font=宋体]柱温箱[/font][font=宋体]主要关注温控范围、准确度、稳定性,最关键的参数是温度的稳定性,这将直接影响分析测试时保留时间的稳定性与峰面积的重现性。流动相预加热功能可以保障进入色谱柱的流动相与色谱柱的温差尽可能小,提供更好的色谱峰重现性。温控组件目前市面上性能最好的是帕尔帖元件。[/font][font=宋体]近年来国产[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的发展越来越好,性能上并不比进口产品差。但是由于超高效设备主要配置质谱检测器,进口质谱厂商多有配套[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]设备,加上国产质谱发展水平受限,国产超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的市场占有率并不高。希望此次分享能为大家在今后的仪器选购中提供帮助,也祝愿国产仪器越来越好。[/font]
我公司有台岛津LC-20A高效液相色谱仪,双泵,单泵最高压可达25mpa ,有没有可能配置成超高效液相色谱,请大家指点!
高效液相色谱和超高效液相色谱有什么区别与联系吗?
《超高效液相色谱仪开发与应用》----项目验收会上海伍丰科学仪器有限公司承担的上海市科研计划项目项目“超高效液相色谱仪开发与应用”(编号:14142200300),于2017年3月8日通过上海市科委组织的专家验收。项目采用多种新技术和新工艺,完成国内首台超高效液相色谱系统研制。验收专家组听取了项目负责人所作的汇报总结,审阅了有关技术资料,参观了仪器的现场演示,对项目组取得的成果给予了高度评价。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/03/201703120950_01_1636655_3.jpgEX1700S-HPLC(项目研究成果)耐压范围在0~80MPa,对应使用1.8~2.0μm色谱柱,对比常规压力的HPLC,具有更加理想的分离效果,更高分辨率、更快速分析的特点。实际分析时间可以缩短至常规HPLC的1/8~1/10。为了推广超效、超快速分析检测理念,EX1700S-HPLC提供了更为合理的实验室解决方案,同时大大的降低了客户的使用成本。所有无论从分析效率、分析精度,还是综合成本,EX1700都有绝对的优势来取代进口品牌常规压力的高效液相类产品。EX1700S-HPLC可适用医药、科研院校、第三方检测机构,生物制药、食品安全、环境监测等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/03/201703120950_02_1636655_3.jpg
液相色谱经历了几十年的快速发展,色谱系统从20世纪60年代后期出现新型柱填料、高压输液泵和高灵敏度检测器到现在高效液相色谱。可谓是发生了巨大变化。色谱系统更是从经典的高效液相色谱发展到了超高效液相色谱、快速液相色谱。我原来问Waters的工程师:液相色谱到超高效液相色谱后还会推出什么样的色谱系统?他说差不多已经到顶了。[color=#DC143C][B]我们的液相色谱系统还能走多远,出现超高效液相色谱系统后还能研究出更好的色谱系统吗?[/B][/color]
[align=center][b][size=2]超高效液相色谱UPLC[sup][/sup]简介[/size][/b][/align][size=2][b]UPLC原理基础[/b]随着科学技术的进步,液相色谱用户对液相色谱技术的要求也不断提高,他们需要“更快地得到更好的结果"。因此超高效液相色谱(UltraPerformance LC[b][sup][/sup][/b])概念的提出也就十分自然;简单的说:UPLC是用HPLC的极限作为自己的起点,把分离科学推向一个新领域。沃特世公司引入UPLC的概念是由研究著名的van Deemter 方程式及其曲线开始。由van Deemter曲线可以得到以下几点启示:首先,颗粒度越小柱效越高;其次,不同的颗粒度有各自最佳柱效的流速;最后,更小的颗粒度使最高柱效点向更高流速(线速度)方向移动,而且有更宽的线速度范围。所以降低颗粒度不但能提高柱效,同时还能提高分析速度。使用更高的流速会受到色谱柱填料耐压及仪器耐压的限制。反之;如果不用到最佳流速,小颗粒度填料的高柱效就无法体现。此外;更高的柱效需要更小的系统体积(死体积)、更快的检测速度等一系列条件的支持,否则小颗粒度填料的高柱效同样无法充分体现。因此;要真正创建一个全新的分离科学领域 - UPLC,必须解决以下几个问题:1. 大幅度提高色谱柱的性能:第一要解决小颗粒填料的耐压问题,第二要解决小颗粒填料的装填问题,包括颗粒度的分布以及色谱柱的结构。2. 高压溶剂输送单元(超过15,000psi)3. 完善的系统整体性设计,降低整个系统的体积,特别是死体积,并解决超高压下的耐压及渗漏问题。4. 快速自动进样器,降低进样的交叉污染 5. 高速检测器;优化流动池以解决高速检测及扩散问题6. 系统控制及数据管理,解决高速数据的采集、仪器的控制问题[b]新型的色谱填料及装填技术[/b]UPLC分离只有在新型的、耐压而且颗粒度分布范围很窄的1.7µ m颗粒填料合成出来之后才有可能实现。色谱柱技术应该涵盖几个方面的内容:首先是填料的合成,以得到高质量的填料颗粒,包括:耐高压、耐酸碱等等。其次是颗粒的筛选,选出颗粒度分布尽可能窄的填料。最后是装填技术,以保证既能堵住颗粒不使其外流,又不至于引起反压的大幅升高。沃特世公司的ACQUITY UPLC[b][sup][/sup][/b][sup] [/sup]BEH色谱柱使用了更严格的筛分技术,使1.7µ m填料的分布很窄,并且使用了全新筛板(专利申请中)及其它色谱柱硬件(柱管及其连接件),在超过20,000psi的压力下装填。沃特世公司为此安装了一条新的色谱柱装填生产线及新的测试设备。因此;ACQUITY UPLC色谱柱的性能及质量比目前的HPLC柱有了质的飞跃。[/size][align=left][size=2]基于1.7 μm小颗粒技术的UPLC,与人们熟知的HPLC技术具有相同的分离原理。不同的是:UPLC不仅比传统HPLC具有更高的分离能力,而且结束了人们多年来不得不在速度和分离度之间忍痛割舍的历史。使用UPLC可以在很宽的线速度、流速和高反压下进行高效的分离工作,并获得优异的结果。见下图[/size][/align][align=left][size=2][/size][/align][align=left][size=2][/size][/align][align=left][size=2] UPLC用1.7μm颗粒提高了分离能力,可以分离出更多的色谱峰,从而对样品所能提供的信息达到了一个新的水平。而且又极大地缩短了开发方法所需的时间。[/size][/align][align=left][size=2][/size][/align][align=left][size=2][/size][/align][size=2][b]UPLC:HPLC的未来[/b]UPLC可以更快的速度和更高的质量完成以往HPLC的工作,沃特世将致力于丰富已有的UPLC产品,现已推出了六种新的色谱柱,包括:BEH C18、C8、苯基和ShieldRP18、 HILIC 及HSS T3。同时还有适应UPLC使用的蒸发光散射检测器(ELSD),进一步扩展了UPLC的应用领域。[color=#c001cb]一套真正的UPLC需要哪些技术参数的支撑?[/color][color=#c001cb]1、耐高压系统(要求能耐多少压力以上,真的是[color=#c001cb]超过15,000psi才算吗[/color]?)[/color][color=#c001cb]2、精确的流速和温控系统(相对标准偏差要求在多少之内?);梯度延迟时间等?[/color][color=#c001cb]3、小内径小填料(多少规格?)色谱柱[/color][color=#c001cb]4、高灵敏小检测池(多大的检测池?)的检测器[/color][color=#c001cb]5、快速进样系统(进样速率是多少?)[/color][color=#c001cb]6、沃特世的UPLC参数就是当今超高效液相的标准了吗?[/color][color=#c001cb]7、包括上文中提到的一些要求,还有哪些是其标志性参数?[/color][/size]
超高效液相色谱能使用普通色谱柱么,
[align=center][b]浅谈超高效液相色谱柱和液相色谱柱的区别[/b][/align]从色谱柱填料的发展大趋势来讲,色谱柱填料一直是超更小粒径微粒的方向发展的,2004年超高效液相色谱应运而生。更小的粒径,意味着更高的泵压。在色谱柱的发展历程中,泵压、粒度、柱长、柱效这四个因素是相互制约的。随着技术的发展超高效液相色谱可以提供的泵压为140Mpa,而大多数液相色谱仪的最大压强仅为40Mpa。泵技术的突破为超高效液相色谱的产生奠定了基础。两者的区别如下:1、UPLC比HPLC有更好的分离度;我们不难理解填料粒径变小以后,分离度会变好。1.8um颗粒的分离度比5um颗粒提高了70%;2、UPLC比HPLC有更高的分析速度;常规的液相色谱通常在20分钟内完成分离,而超高效液相通常情况下5分钟内就可以完成分析;3、UPLC比HPLC有更高的灵敏度。分析过程中峰展宽变窄,峰高会更高,提升了色谱检测的灵敏度。单纯从色谱柱填料来讲,主要有三个方面的区别 1、Kromasil提供给超高效液相色谱柱的填料粒径为1.8um,普通色谱柱通常填料的粒径为5um。作为液相色谱来说,填料硅胶球的尺寸分布要求非常严格,填料的粒径越小,实际上对硅胶球的要求更高。所以超高效液相色谱柱的填料成本也是高于液相色谱柱的。2、超高效液相的柱压更高,要求填料的抗压性更强,这就要求在填料合成过程中要考虑抗压性的影响,无疑增加了合成难度。3、色谱柱的装填也更加严苛,超高效液相对装填工程师的要求也更高。超高效液相的柱管和柱塞板也是升级和优化过的。
http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif超高效液相色谱的新纪元(安捷伦)讲座时间:2014年12月04日 10:30主讲人:肖尧肖尧现任安捷伦科技公司生命科学与化学分析集团液相色谱产品应用工程师。2005年毕业于四川大学,2005-2008年就读于北京协和医学院药物研究所,并于2008年获得药物分析硕士学位。后就职于安捷伦科技(中国)有限公司任液相色谱产品应用工程师至今,从事超高效液相色谱方法开发及转换,液相方法自动化解决方案及多维液相分离方法开发等工作。http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif【简介】介绍安捷伦全新一代1290II液相色谱系统如何帮助使用者从分析效率,仪器效率和实验室效率三个方面提升日常工作的整体效率。以及仪器的人性化设计及相关应用解决方案如何能够帮助实验室提高自动化程度及分析数据质量。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间:2014年12月04日 10:004、报名参会:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/12465、报名及参会咨询:QQ群—231246773
Waters高效液相色谱系统的使用和维护
【参数解读】超高效液相色谱仪器性能和技术参数解读http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130803/4888003/超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC)是分离科学中的一个全新类别,UPLC借助于HPLC(高效液相色法)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域,作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世,之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前,超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。如图:HPLC与UPLC分离比较http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_648018_1608710_3.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆请您来解析:1、一套真正的UPLC哪些技术参数是支撑?有哪些是其标志性参数?UHPLC的标志性特点就是压强高,进样量少,死体积小,流速慢,出峰快。耐压是首要的,然后就是色谱柱了,其次就是仪器系统的整体设计。对UHPLC来说,重点还是流量的精准和耐压吧,还有就是延迟体积小,响应时间要够快。2、耐高压系统评价:要求能耐多少压力以上才算UPLC,真的是超过15,000psi才算吗?有版友觉得能满足要求就好。一般12000psi可以耐受大部分的试验条件,如果色谱条件更改导致压力再提升,色谱柱的寿命可能会受影响,可能得不偿失。对于绝大多数要进行成本核算的使用者来说。3、泵系统控制精确的流速,相对标准偏差要求在多少之内才算稳定?梯度延迟时间等?有多少个方法的流速是需要设置到小数点后第三位的?绝大多数方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之类的设置,小数点后两位的精度足够我们用了。目前大多数色谱软件识别色谱峰的保留时间窗都是5%。记得我曾看过一家外企药厂的内控标准,好像样品保留时间与标准品的偏差小于1%即可。延迟体积,对于新开发的方法或者方法传递的要求而言,是越小越好。目前各厂家好像都能控制在500ul以下,甚至于100ul以下。4、小内径小填料色谱柱,用什么规格的最合适?根据检测的样品来定5、高灵敏小检测池的检测器,检测器的耐压,都与普通LC检测器有哪些区别?耐压更高,灵敏度要高几倍。DAD检测器也很有门道,要达到更高的灵敏度和信噪比,目前的潮流是全反射光纤流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材质(比金子都贵的材料呀),也有用石英光纤的。Waters的流通池貌似改过几版,老一些UPLC上的是挂在外面的粗棒子,新的放在机箱内了。6、超高效液相的仪器性能,你最看重哪些参数,你实际使用的仪器感觉都有哪些性能不足?稳定性在流动相必须用缓冲盐的情况下,我更愿意用HPLC。我觉得用UPLC的时候对流动相和样品的前处理要求明显要高很多,不然极易堵柱和系统。对于大多数使用者来说,应该都是希望购买的不是最贵的,而是最合适的仪器。作为一个纯粹的LC的操作者,版友比较偏重的的是系统的重现性、耐用性与灵活性等等。欢迎大家参与讨论,补充自己想交流的参数,说说自己的认识或者提出自己的疑问!!!
高效液相色谱法与超高效液相色谱法的区别?
随着技术的发展,超高效液相色谱会取代高效液相色谱吗?
超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC)是分离科学中的一个全新类别,UPLC借助于HPLC(高效液相色法)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域,作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世,之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前,超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。如图:HPLC与UPLC分离比较http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308032042_455796_1608710_3.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆列举部分仪器的个别参数,供参考:技术参数:泵系统:最大操作压力 15000psi(1mL/min)流速范围:0.001-2.000mL/min, 增量0.001mL;流速精度:0.075% RSD;流速准确度:±0.5%;梯度准确度:± 0.3%;梯度精度:0.15%RSD;压力范围:0-15,000 psi;真空脱气机:在线真空脱气,六通道均可在线脱气,有自动柱塞清洗和进样针清洗功能。温控自动进样器:进样精度: 0.999;进样体积:0.1 to 50 μL,增量0.1μL;样品污染度:0.004%;样品温度范围:4°C -40°C,增量:1°C,带制冷功能;温控稳定性:±0.5℃;样品盘数:96,384 两种规格;样品瓶:2mL样品瓶,0.65mL,1.5mL两种规格的离心管。柱温箱:温度范围:室温以上5°C -90°C;控温精度:±0.1°C;温度准确性±0.5℃。二极管阵列检测器:二极管数:≥1024;波长范围:190-800 nm;分辨率:≤1.2 nm;波长准确度:≤±1nm;波长精度:≤±0.1nm;基线噪音:<±1.0×10-6AU;基线漂移:<1×10-4AU/h;最大采集频率:≥100 Hz;检测器配置 紫外可见检测器、光电二极管矩阵检测器、蒸发光散射检测器〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析:1、一套真正的UPLC哪些技术参数是支撑?有哪些是其标志性参数?2、耐高压系统评价:要求能耐多少压力以上才算UPLC,真的是超过15,000psi才算吗?2、泵系统控制精确的流速,相对标准偏差要求在多少之内才算稳定?梯度延迟时间等?3、小内径小填料色谱柱,用什么规格的最合适?4、高灵敏小检测池的检测器,检测器的耐压,都与普通LC检测器有哪些区别?5、你的仪器快速进样系统都是如何来实现高通量进样的?6、超高效液相的仪器性能,你最看重哪些参数,你实际使用的仪器感觉都有哪些性能不足?欢迎大家参与讨论,补充自己想交流的参数,说说自己的认识或者提出自己的疑问!!!往期回顾:【参数解读】ICP光谱仪的技术参数解读及仪器性能评价
制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中,组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中,酶的分离是微克级;在植化和合成化学领域中,为了鉴别未知成份并进行结构测定,需要得到一至若干毫克的纯品;在药品和医药学测试中,需要克级的标准品和对照品;在当今的工业级提纯中,制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定,包括:生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品(分析标准)毒物学分析所需组份:高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产,活性成份,药物 制备方法的发展和扩大规模的计算 在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级,甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积(小于1:100)。 在这种条件下,会达到很好的分离效果,峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中,最大的区别就是超量进样。其结果,超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线 分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多,峰高和峰面积会增加,但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 在分析液相中,最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱,吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称,表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中,这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中,根据进样量的增加,容量因子也相应变大,并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少,那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样 大样品量的纯化有两种可行的方法:分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品,因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样,暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法,在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。 在浓缩法中,样品的浓度会提高,但进样体积保持不变。容量因子k’降低,同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 如果样品组份的溶解性很差,浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中,这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积,峰高不变,但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎,因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素,所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 需要小颗粒填料 方法的放大 浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性,那么在放大分析方法的时候,优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的,选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量,因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的 判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数:产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的,因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率,但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品,但是产量和收率却是很低的。 在色谱图2中峰有很好的分离,因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量,但是生产效率却很低。 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开,这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。 在实际应用中,每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试,某种组份必须被完全单独提取,那么组份的纯度是最重要的参数,产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化,并且需要有足够的量为下一步合成作准备,那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题,因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的,因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。
3月9日,美国热电集团推出一款全新的高效液相色谱系统——Finnigan Surveyor Plus。该仪器号称采用了当今最高性能的光二极管阵列(PDA)检测器,其紧凑式的设计使得仪器占地面积大为减小。 从应用范围来看,Finnigan Surveyor Plus高效液相色谱系统可被广泛使用在QA/QC实验室,科研机构,药物研发以及食品和饮料工业。 该产品采用了一体式柱温箱设计,同时,热电的LightPipe专利技术保证了仪器的高灵敏度,灵敏度是传统的光二极管阵列检测器的五倍。
1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统(有梯度控制器的高压输液泵)、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成,另外还包括打印机、UPS和通风柜等辅助设备。5. 程序
为什么超高效液相色谱采用细粒径、细内径可以提高柱效?[em0910]
萌新刚开始做超高效液相色谱要做多久?
最近公司准备买一台超高效液相色谱仪做中控,有没有用过的大神推荐一下哪种的比较好用,之前单位一直用的安捷伦1260,不知道换到超高效液相上方法需不需要变动,麻烦用过的告知一下各个品牌的仪器性能,价格,售后……谢谢大家!
各位老师好,我现在需要检测一个极其微量的物质,为了提高它的检测灵敏度,打算采用超高效液相色谱,因为我查资料说超高效液相色谱的检测灵敏度是普通液相的3倍多,超高效液相色谱为什么比普通液相色谱的灵敏度更高呢?希望大家不吝解惑。
各位好,想请问一下,超高效液相色谱的工作压力一般在什么范围内?谢谢
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=17216]岛津高效液相色谱系统标准操作规程[/url]
GMP、CNAS等认证体系对超高效液相色谱的认证情况如何,尤其是GMP,一些药典普通的液相方法无法直接移植到超高效液相上。
近些年来,随着科技的飞速发展,液相色谱技术应用也逐渐步入快车道,沃特世、岛津、安捷伦、戴安等分析仪器知名公司都相继研发成功并将最新的的超高效液相色谱仪推向市场,业界内外纷纷一味追求高精尖,追逐快速高效,殊不知液相色谱类仪器并非一味追求快速,而是好比谈恋爱,要看是不是适合自己的工作要求,这其中难免就会涉及到分析项目、分析精度以及工作成本等等一系列因素,本文就自己心得以及所学在此做与大家一起来探讨交流: 首先,众所周知,高效液相色谱是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有异极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入不同类型的检测器进行检测,从而实现对样品的定性定量分析。而超高效液相色谱与高效液相色谱原理基本相同,不同之处就是:1、色谱柱发生了变化 小颗粒高性能微粒固定相出现,2、流动相超高压输液泵出现 3、采集速度更快的检测器出现 ,主要因素就是基于这三点。但是,超高效液相色谱仪并非针对每一种分析样品,每一种分析化合物都如此高效快速,必须因样而选,否则的话,就会适得其反,事倍功半,前功尽弃。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201023_561650_2328678_3.jpg 笔者单位去年采购一台 Waters ACQUITY UPLC H-CLASS,在国内环境监测业界还算是高大尚的液相色谱仪器,根据介绍可以实现:无需更改现有工作流程即可获得UPLC性能灵活和简便的四元溶剂混合和直接注射取样 完美兼容HPLC方法,无缝转换至UPLC方法 方法转换包可保证分离方法的一致性,流速范围0.010 ~ 2.000 mL/min,以0.001 mL增速步进,最高操作压力:15,000 psi最高到1 uL/min,9,000 psi最高到2 mL/min,据于此类性能,加之单位以前有一台服役多年面临脱保的安捷伦LC-1100,可以接班服役,同时提高工作效率,不必再劳神费心,一个样品等待大把时间,因此,趁着还在维保范围内,迅速入手,希望短时间之内形成"作战“能力,投入实战。 恰逢迪马科技在论坛搞一个色谱柱试用活动,遂参加尝试用液相色谱法分析水中苯系物,以做直观比较:色谱柱型号:迪马 DiamonsilPlus (固定相),250mm(柱长)4.6 mmx5 μm色谱柱型号:Agilent Eclipse PAH固定相),250mm(柱长) 4.6 mm x 5 μm WATERS XBridge C18 250mm(柱长)4.6 mmx 5 μm 以及 UHPLC WATERS 50mm(柱长)2.1mm x 1.7 μm,其中HPLC分析条件如下: 流动相: 甲醇 :水= 65: 35 (如有梯度请注明梯度表)流速: 1.0 mL/min柱温: 40 ℃检测器:UV 260 nm 或其他检测器 进样量: 10 μL分析结果如下:Diamonsil Plus谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201112_561654_2328678_3.jpgAgilent Eclipse PAHhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201113_561655_2328678_3.jpgWATERSXBridge C18http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201114_561656_2328678_3.jpg上述结果分析:分析比较:Diamonsil Plus与Agilent EclipsePAH WATERS XBridge C18所分析谱图比较:前者为甲醇中的六中苯系物谱图,后者为二硫化碳中的苯系物,其他条件相同,前者流速为1mL/min进样量为20ul,后者流速为0.5mL/min进样量为5ul,通过比较可以基本得出如下结论:Diamonsil Plus 可以承受大进样量的化合物分析,柱效表现良好,在20/5的情况下,峰形保持较好;Agile