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如题:用于植物原生质体融合的电融合仪有哪些进口品牌,价位各是多少?另外,电融合仪怎么选型?
正在研究包括电穿孔/电融合有关技术方面的课题,这方面资料太少,回看高效基因导入-电穿孔在生命科学研究中的应用还这么不方便,本网站视乎互动方面不是很亲民的,也可能是个人活动太少无经验吧
植物细胞原生质体制制备与融合2006-11-20 17:14植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示,逐渐将眼光转向细胞融合,试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。1937年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。196O年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶,成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体,开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备(1)取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强,再生与分生比例较高。常用的外植体包括:种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗2~3次,然后浸人 70%酒精消毒后,再放进 3%次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次,并用无菌滤纸吸干。(2)酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液:反应液应是一种PH值在5·5~5·8的缓冲液,内合纤维素酶0.3%~3.0%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等,②酶解:除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃~30℃,2~4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标,说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应,避免脆弱的原生质体受到更多的损害。(3) 分离 在反应液中除了大量的原生质体外,尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取200~400目的不锈钢网或尼龙布j叭i过滤除渣,也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。(4) 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂,应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤2~4次。 (5) 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁,此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中,则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察,残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测,基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外,尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合(1)化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器,试剂易于得到,因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇(PEG)纳合成钙高pH诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法(在无菌条件下进行):按比例混合双亲原生质体-----滴加 PEG溶液,摇匀,静置----滴加高钙高pH值溶液,摇匀,静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。(2)物理法诱导融合 1979年Senda等发明了微电极法诱导细胞融合。1981年Zi。。mann等提出了改进的平行电极法,现简介如下:将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后,插入微电极,接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲,则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂,作用条件比较温和,而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当,亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因,要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近,有人提出以X射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤,融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移;致死量处理后合u可能产生没再仅体万染色体w划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法,大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型.2) 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体,发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3) 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成,可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种,某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4) 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或DNA片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞,一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养(液体或固体),再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞:若一方细胞大,另一方细胞小,则大。小细胞融合的就是杂合细胞;若~方细胞基本无色,另一方为绿色,则自绿色结合的细胞是杂合细胞;如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征,则可作为识别杂合的标志;发现h述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出,移置再牛培养基培养。(2)以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信,但实验者有时会受到仪器的限制,工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补:不同基山叨的白化突变株出aBxAh,可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补:甲细胞株缺外源激素A不能生长,乙细胞株需要提供外源激素B才能生长,则甲株与乙株融合,杂合细胞在不含激素A、B的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选:假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性(如抗卡那霉素),则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选:根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点,用它处理受体原生质体,只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复,等等。 (3)采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株,可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP,见8.2.2.2)和随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。(4)根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。
植物细胞原生质体制制备与融合1、原生质体常现的杂交育种由于物种间难以逾越的天然屏障而举步维艰。科学家们受细胞全能性理论及组织培养成功的启示,逐渐将眼光转向细胞融合,试图用这种崭 图3-2新的手段冲破自然界的禁钢。1937年michel率先实施植物细胞融合的试验。如何去除坚韧的细胞'接成了牛物学工作者必须解决的首要难题。196O年该领域终于出现了重大突破。由英国诺丁汉大学Cocking教授领导的小组率先利用真菌纤维素酶,成功地制备出了大量具有高度活性可再生的番茄幼根细胞原生质体,开辟了原生质体融合研究的新阶段。植物细胞原生质体是指那些已去除全部细胞壁的细胞。2、原生质体制备(1)取材与除菌 为了让制得的原生质体一般都生活力较强,再生与分生比例较高。常用的外植体包括:种子根。子叶、下胚轴、胚细胞、花粉母细胞、悬浮培养细胞和嫩叶。对外植体的除菌要因材而异。悬浮培养细胞一般无需除菌。对较脏的外植体往往要先用肥皂水清洗再以清水洗2~3次,然后浸人 70%酒精消毒后,再放进 3%次氯酸钠处理。最后用无菌水漂洗数次,并用无菌滤纸吸干。(2)酶解 现以叶片为例说明如何制备植物原生质体。①配制酶解反应液:反应液应是一种PH值在5·5~5·8的缓冲液,内合纤维素酶0.3%~3.0%以及渗透压稳定剂、细胞膜保护剂和表面活性剂等,②酶解:除菌后的叶片 撕去下表皮 切块放人反应液 不时轻摇 (条件25℃~30℃,2~4h)反应液转绿。反应液转绿是酶解成功的一项重要指标,说明已有不少原生质体游离在反应液中。经镜检确认后应及时终止反应,避免脆弱的原生质体受到更多的损害。(3) 分离 在反应液中除了大量的原生质体外,尚有一些残留的组织块和破碎的细胞。为了取得高纯度的原生质体就必需进行原生质体的分离。可选取200~400目的不锈钢网或尼龙布j叭i过滤除渣,也可采用低速离心法或比重漂浮法直接获取原生质体。(4) 洗涤刚分离得到的原生质体往往还含有酶及其他不利于原生质体培养。再生的试剂,应以新的渗透压稳定剂或原生质体培养液离心洗涤2~4次。 (5) 鉴定 只有经过鉴定确认已获得原生质体后才能进行下阶段的细胞融合工作。由于已去除全部或大部分细胞壁,此时植物细胞呈圆形。如果把它放人低渗溶液中,则很容易胀破。也。'厂月荧光增白剂染色后置紫外显微镜下观察,残留的细胞壁呈现明显荧光。通过以上观测,基本上可判别是否原生质体及其百分中 此外,尚可借助台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察以及测定人、作用、呼吸作用等参数定量检测原生质体的活力。4、 原生质体的融合(1)化学法诱导融合 化学法诱导融合无需贵重仪器,试剂易于得到,因此一直是细胞融合的主要方法。尤其是聚乙二醇(PEG)纳合成钙高pH诱导融合法已成为化学法诱导细胞融合的主流。以下简介此方法(在无菌条件下进行):按比例混合双亲原生质体-----滴加 PEG溶液,摇匀,静置----滴加高钙高pH值溶液,摇匀,静置-----滴加原生质体培养液洗涤数次-----离心获得原生质体细胞团一筛选、再生杂合细胞。(2)物理法诱导融合 1979年Senda等发明了微电极法诱导细胞融合。1981年Zi。。mann等提出了改进的平行电极法,现简介如下:将双亲本原生质体以适当的溶液悬浮混合后,插入微电极,接通一定的交变电场。原生质体极化后顺着电场排列成紧密接触的珍珠串状。此时瞬间施以适当强度的电脉冲,则使原生质体质膜被击穿而发生融合。电激融合不使用有毒害作用的试剂,作用条件比较温和,而且基本上是同步发生融合。只要条件摸索适当,亦可获得较高的融合率。上述操作实际上是供体与受体原生质体对等融合的方法。由于双方各具几万对基因,要筛选得到符合需要且能稳定传代的杂合细胞是相当困难的。最近,有人提出以X射线、伽玛射线。纺锤体毒素或染色体浓缩剂等对供体原生质体进行前处理。轻剂量处理可造成染色体不同程度的丢失、失活、断裂和损伤,融合后实现仅有少数染色体甚至是DNA片段的转移;致死量处理后合u可能产生没再仅体万染色体w划她旋余种。利用这种价值不对称融合方法,大大提高了融合体的生存率和可利用率。经过上述融合处理后再生的细胞株将可能出现以下几种类型.2) 亲本双方的细胞核和细胞质能融洽地合为一体,发育成为完全的杂合植株。这种例子不多。3) 融合细胞由一方细胞核与另一方细胞质构成,可能发育为核质异源的植株。亲缘关系越远的物种,某个亲本的染色体被丢失的现象就越严重。 4) 融合细胞由双方胞质及一方核或再附加少量他方染色体或DNA片段构成。④原生质体融合后两个细胞核尚未融合时就过早地被新出现的细胞壁分开。以后它们各自分生长成嵌合植株。5、 杂合体的鉴别与筛选双亲本原生质体经融合处理后产生的杂合细胞,一般要经含有渗透压稳定剂的原生质体培养基培养(液体或固体),再生出细胞壁后转移到合适的培养基中。待长出愈伤组织后按常规方法诱导其长芽、生根、成苗。在此过程中可对是否杂合细胞或植株进行鉴别与筛选。 (1) 杂合细胞的显微镜鉴别 根据以下特征可以在显微镜下直接识别杂合细胞:若一方细胞大,另一方细胞小,则大。小细胞融合的就是杂合细胞;若~方细胞基本无色,另一方为绿色,则自绿色结合的细胞是杂合细胞;如果双方原生质体在特殊显微镜下或双方经不同染料着色后可见不同的特征,则可作为识别杂合的标志;发现h述杂合细胞后可借助显微操作仪在显微镜下直接取出,移置再牛培养基培养。(2)以互补法筛选杂合细胞 显微鉴别法虽然比较可信,但实验者有时会受到仪器的限制,工作进度慢且未知其能否存活与个长 遗传互补法则可弥补以上不足。 遗传互补法的前提是获得各种遗传突变细胞株系。白化互补:不同基山叨的白化突变株出aBxAh,可互补为绿色细胞株AaBb。生长互补:甲细胞株缺外源激素A不能生长,乙细胞株需要提供外源激素B才能生长,则甲株与乙株融合,杂合细胞在不含激素A、B的选择培养基上可能生长。抗性互补筛选:假如某个细胞株具某种抗性(抗青霉素)另一个细胞株具另一种抗性(如抗卡那霉素),则它们的杂合株将可在含上述两种抗生素的培养基上再生与分裂。这种筛选方式即所谓的抗性互补筛选。代谢互补筛选:根据碘代乙酚胺能抑制细胞代谢的特点,用它处理受体原生质体,只有融合后的供体细胞质才能使细胞活性得到恢复,等等。 (3)采用细胞与分子生物学的方法鉴别杂合体 经细胞融合后长出的愈伤组织或植株,可进行染色体核型分析、染色体显带分析、同功酶分析以及更为精细的核酸分子杂交、限制性内切酶片段长度多态性(RFLP,见8.2.2.2)和随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,以确定其是否结合了双亲本的遗传素质。(4)根据融合处理后再生长出的植株的形态特征进行鉴别质。
TAG: ips 冈野荣之 干细胞 绒猴 http://img.antpedia.com/attachments/2010/12/27501_201012101146281.jpg 据物理学家组织网12月8日报道,日本研究人员称,他们利用诱导多功能干细胞(iPS)使一只瘫痪小猴的运动能力恢复到接近正常水平,这只小猴因为脖子以下脊椎受伤而不能正常运动。 日本东京庆应义塾大学冈野荣之教授称,这是世界上第一个在小型灵长类动物身上用干细胞修复脊椎损伤的例子。此前,他和研究小组曾用相似方法,帮一只小鼠恢复了运动能力。 研究人员移植了四种基因到人体皮肤细胞,生成诱导多功能干细胞,然后再把诱导多功能干细胞注射到一只瘫痪的绒猴(美洲产小型长尾猴)体内。冈野荣之说,考虑到治疗最佳时机,研究人员在绒猴受伤后第九天进行了注射,这是最有效的时机。在随后的两到三周内,绒猴开始活动它的四肢。“6周以后,它恢复到了又能到处蹦跳的水平,这已经非常接近于正常水平。它用前肢抓住物体的力量也恢复到了80%。” 但冈野荣之说,虽然用人类胚胎干细胞作为治疗癌症和其他疾病具有很大潜力,但要取得能发育成几乎所有组织的细胞,就要破坏人类胚胎,因此胚胎干细胞研究面临诸多争议,并受到宗教保守人士的反对。而日本研究人员的新研究为在人类身上使用类似医疗技术开拓了道路。
[font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白是一种由免疫球蛋白(如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等)的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合,可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能,同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用,增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如,普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短,只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟,这限制了其在体内的持续作用时间。然而,通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合,重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍,从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外,延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率,减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]结构域[/font][/b][/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白的主要特点是含有[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段,这也是影响其理化性质和生物学活性的关键因素。类似于单克隆抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段,融合蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段可以延长功能蛋白在血浆中的半衰期,增加分子的稳定性,并且能够特异性地结合体内的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体,发挥相应的生物学功能。此外,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段还可以特异性地结合[/font][font=Calibri]protein A[/font][font=宋体],有利于简化[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白的纯化过程,对相关生物制品的研发制备具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白功能[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]功能蛋白能特异性地识别某个靶点分子,并决定了融合蛋白的药理活性。功能蛋白的种类很多,可以是能结合内源性受体(或配体)的可溶性配体(或受体),或其他需要延长半衰期的活性物质,如细胞因子、毒素、酶等。功能蛋白的作用各不相同,主要包括抗炎性感染、抗病毒感染、抗瘤免疫、抗移植排斥、治疗痛觉过敏以及自身免疫性疾病的治疗等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri][url=http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins]Fc[/url][/font][font=宋体][url=http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins]融合蛋白[/url]的优势[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①延长半衰期:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在血浆内有较长的半衰期。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与新生[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体([/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体])的结合并呈[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]依赖性:在[/font][font=Calibri]pH 7.4[/font][font=宋体]的生理条件下,[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]不结合;在细胞内涵体[/font][font=Calibri]pH 6.0~6.5[/font][font=宋体]的酸性条件下,两者结合,从而避免了融合蛋白在细胞内被溶酶体等快速降解。另外,[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能够增大分子体积,不易被肾小球滤过,也从一定程度上延长了半衰期。这就是[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白长效原理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②增强稳定性:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]铰链区的二硫键连接形成稳定的二聚体。如果对二硫键进行基因工程改造,还可以使[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白形成更稳定的六聚体复合物。另外,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域可以独立折叠,确保分子的稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③发挥生物学效应:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白可以结合不同的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体,包括[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ [/font][font=Calibri](CD64)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ [/font][font=Calibri](CD32)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅲ [/font][font=Calibri](CD16)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ和[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体],从而介导不同的生物学功能,如炎症反应、抗体依赖性细胞毒性([/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体])和补体依赖性细胞毒性([/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体])、调节细胞因子分泌等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可参看:[/font][font=Calibri]http://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font]
[font='calibri'][size=13px]融合蛋白[/size][/font][font='calibri'][size=13px]是什么?[/size][/font][font='calibri'][size=13px]融合蛋白和单抗的区别[/size][/font][font='calibri'][size=13px]及优势?[/size][/font]融合蛋白是指将目标蛋白与免疫球蛋白融合而产生的新型重组蛋白,其中,目标蛋白可以是细胞因子、受体、抗原肽或者其他具有生物学活性等功能蛋白质。融合蛋白具有较强的生物活性,还具有一些抗体性质,可以用于疾病治疗,可以通过延长血浆半衰期,加强其治疗能力,同时,降低肾小球清除率,可以提高药物在体内的药物浓度。单抗即单克隆抗体,是由单一的B细胞克隆产生的抗单一表位的抗体,具有多个优点,包括高度的特异性:能够特定的针对单一的抗原表位,选择性的杀伤靶细胞,具有更强的疗效;安全性:由于单抗只针对靶细胞,对机体的其他细胞影响不大,相比其他药物不良反应少;多样性:不同的单抗结合,不同的抗原表位作用机制各不相同,可以针对不同的疾病选择相应的单抗。融合蛋白和单抗具有各自的优点和作用特点,近年来,对这两种相关药物的研究越来越多,对于一些恶性肿瘤等相关性疾病的治疗得到了较大的提高。因此,融合蛋白和单抗具有上述区别,但用于疾病的治疗各自有优势。单克隆抗体定制服务推荐:义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商,目前已成功交付了数以万计的抗体项目,客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。针对定制单克隆抗体,义翘神州提供了一套全面的解决方案。我们将与您通力合作,完成从抗原设计、纯化和抗体验证的完整过程。义翘神州拥有包括杂交瘤、噬菌体抗体库和单B细胞在内的抗体发现平台, 我们可根据您感兴趣的靶点、抗体应用和时间表等,来选择最合适的技术平台。 此外,义翘神州还提供ELISA、WB、流式细胞术、IHC、基于细胞的筛选、亲和力检测等多种表征和筛选技术,确保最终鉴定到最佳的抗体,以满足研究、诊断和治疗领域等应用。单克隆抗体定制服务:https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services
[font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]:根据是否需要发挥[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段结合[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]来介导抗体依赖细胞介导的细胞毒性([/font][font=Calibri]antibody-dependentcell-mediated cytotoxicity[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体])或结合补体[/font][font=Calibri]C1q[/font][font=宋体]来介导补体依赖的细胞毒性([/font][font=Calibri]complement-dependent cytotoxicity[/font][font=宋体], [/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体])等的生物学活性,可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白分为溶细胞性([/font][font=Calibri]cyto-lytic[/font][font=宋体])和非溶细胞性([/font][font=Calibri]non-lytic[/font][font=宋体])[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]溶细胞性融合蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由功能性蛋白与天然或活性提高的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合而成。不仅具有功能蛋白的生物学活性和长效血浆半衰期,并且保留 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段介导 [/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]效应的能力,可以靶向杀伤功能蛋白受体阳性细胞。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]非溶细胞性融合蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由功能性蛋白与活性降低的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合,通过对[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段上补体受体结合域或糖基化模式的突变改造,调节[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]与相关受体的结合亲和力,降低或消除[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]效应,只保留功能蛋白的生物学活性和 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段长效体内半衰期,而不产生细胞毒性。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白优势有哪些?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]延长半衰期:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在血浆内有较长的半衰期。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段与新生[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体([/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体])的结合并呈[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]依赖性:在[/font][font=Calibri]pH 7.4[/font][font=宋体]的生理条件下,[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]不结合;在细胞内涵体[/font][font=Calibri]pH 6.0~6.5[/font][font=宋体]的酸性条件下,两者结合,从而避免了融合蛋白在细胞内被溶酶体等快速降解。另外,[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]段能够增大分子体积,不易被肾小球滤过,也从一定程度上延长了半衰期。这就是[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白长效原理。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]增强稳定性:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白通过[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]铰链区的二硫键连接形成稳定的二聚体。如果对二硫键进行基因工程改造,还可以使[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白形成更稳定的六聚体复合物。另外,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域可以独立折叠,确保分子的稳定性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]发挥生物学效应:[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白可以结合不同的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体,包括[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ [/font][font=Calibri](CD64)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ [/font][font=Calibri](CD32)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]γ[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅲ [/font][font=Calibri](CD16)[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅰ、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]ε[/font][font=Calibri]R[/font][font=宋体]Ⅱ和[/font][font=Calibri]FcRn[/font][font=宋体],从而介导不同的生物学功能,如炎症反应、抗体依赖性细胞毒性([/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体])和补体依赖性细胞毒性([/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体])、调节细胞因子分泌等。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]蛋白的应用[/font][/font][/b][font=宋体]在临床方面[/font][font=宋体][font=宋体]([/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体])大部分 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白药物的作用机制为受体与配体之间的相互作用,同时辅以 [/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]片段的多种生物学功能。截止 [/font][font=Calibri]2014[/font][font=宋体]年 [/font][font=Calibri]9 [/font][font=宋体]月,已有 [/font][font=Calibri]9 [/font][font=宋体]种人 [/font][font=Calibri]IgG-Fc [/font][font=宋体]融合蛋白药物经美国食品及药品监督管理局([/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体])批准临床使用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]([/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体])[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白也可以作为一种新型疫苗形式,将病原体的部分抗原肽与 [/font][font=Calibri]IgG-Fc [/font][font=宋体]片段进行融合,诱导机体产生抗原特异性免疫应答。研究表明,[/font][font=Calibri]HIV-1 Gag p24[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]gp120 V3 [/font][font=宋体]以及流感病毒 [/font][font=Calibri]HA [/font][font=宋体]胞外域与小鼠 [/font][font=Calibri]IgG2a-Fc [/font][font=宋体]的融合疫苗,可提高小鼠抗原特异性体液免疫反应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]([/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体])[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白较传统蛋白类药物具有多种新特性,在全世界范围内受到广泛关注。随着相关技术与理念的不断进步,[/font][font=Calibri]Fc [/font][font=宋体]融合蛋白在临床治疗、医学生物研究等领域必将发挥更大的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在疫苗方面[/font][font=宋体][font=Calibri](1) [/font][font=宋体]疫苗设计的关键在于有效活化抗原递呈细胞([/font][font=Calibri]antigen presenting cell[/font][font=宋体],[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]),由于 [/font][font=Calibri]APC [/font][font=宋体]表面能够表达 [/font][font=Calibri]FcR[/font][font=宋体],所以抗原[/font][font=Calibri]-Fc [/font][font=宋体]融合蛋白能够作为抗原运载工具,借助[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段靶向结合 [/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体],缩短抗原在血浆中的游离时间,减少蛋白酶对抗原的降解,提高抗原半衰期,从而加强抗原的递呈。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](2) [/font][font=宋体]转染抗原[/font][font=Calibri]-Fc [/font][font=宋体]基因的[/font][font=Calibri]DC [/font][font=宋体]细胞,不仅能够持续表达抗原[/font][font=Calibri]-Fc [/font][font=宋体]融合分子,产生较长效的免疫激活,还可以克服其他体外抗原刺激方法不可避免的问题,如抗原 [/font][font=Calibri]MHC [/font][font=宋体]复合物解离或细胞 [/font][font=Calibri]MHC[/font][font=宋体]分子降解。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3) [/font][font=宋体]由于细胞内能够结合 [/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]并影响免疫反应的受体蛋白如[/font][font=Calibri]FcRL[/font][font=宋体]和 [/font][font=Calibri]TRIM21[/font][font=宋体]等不断被发现,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白类疫苗能结合的受体不仅仅局限于[/font][font=Calibri]APC[/font][font=宋体]表面的[/font][font=Calibri]FcR[/font][font=宋体],应用前景也将大大扩展。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[/font][font=Calibri]FC[/font][font=宋体]融合蛋白表达服务,更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font]
[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白是一种将抗体片段与功能蛋白融合表达的重组蛋白,具有抗体的特性和功能蛋白的活性。它可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化、抗体和抗原的定量分析以及免疫导向药物的制备等领域。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同,可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]与[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b])[/b][/url]融合蛋白。制备抗体融合蛋白的方法主要有化学交联法和基因工程技术,其中基因工程技术是目前主要的方法。在制备过程中,需要注意两蛋白间的接头序列的长度,以确保蛋白质的折叠和稳定性。抗体融合蛋白在免疫学、生物制药和医学等领域具有广泛的应用前景,为疾病的诊断、治疗和药物研发提供了新的工具和方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]双特异性抗体如何与蛋白融合[/font][font=Calibri]?[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]双特异性抗体是一种特殊的抗体,具有两个不同的抗原结合位点。通过技术手段,可以将双特异性抗体与另一种蛋白质融合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①使用基因工程技术,将双特异性抗体的基因与目标蛋白质的基因进行融合,然后通过表达载体在细胞内表达融合蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②使用化学手段,将双特异性抗体与目标蛋白质进行化学偶联。这需要使用特定的化学偶联剂,将双特异性抗体的特定基团与目标蛋白质的特定基团连接起来。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要注意的是,融合蛋白质的功能和性质取决于其组成成分的特性和比例,因此在融合过程中需要谨慎选择和设计组成成分,以确保融合蛋白质具有所需的功能和性质。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白具有广泛的应用,包括但不限于以下方面:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①免疫诊断:抗体融合蛋白可以用于检测抗原,如病毒、细菌、肿瘤标志物等。通过将抗体片段与荧光蛋白、酶等标记物结合,可以实现对抗原的高灵敏度检测。[/font][font=宋体]②免疫治疗:抗体融合蛋白可以用于治疗肿瘤、感染性疾病等。通过将抗体片段与细胞毒素、免疫调节因子等效应分子结合,可以实现对肿瘤细胞的靶向杀伤或调节免疫反应。[/font][font=宋体]③抗体纯化:抗体融合蛋白可以用于分离和纯化抗体。通过将抗体片段与亲和标签结合,可以利用亲和层析等技术实现对抗体的纯化和富集。[/font][font=宋体]抗体和抗原的定量分析:抗体融合蛋白可以用于定量分析抗体和抗原的浓度。通过将抗体片段与荧光染料等标记物结合,可以利用流式细胞术等技术实现对抗体和抗原的定量分析。[/font][font=宋体]④免疫导向药物的制备:抗体融合蛋白可以用于制备免疫导向药物,即将药物与抗体片段结合,利用抗体的特异性结合能力,将药物定向引导至病变部位,提高药物的疗效并降低副作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
[font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]是指与靶蛋白相连的融合蛋白(参阅什么是融合蛋白)的亚结构域或肽序列。有许多在重组蛋白生产中广泛应用的蛋白标签。蛋白标签是一种方便有效的工具,可以提高重组蛋白的溶解性、简化蛋白纯化,并提供了一种在蛋白表达和纯化过程中跟踪蛋白的简便方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]根据不同的应用,融合标签主要分为三类:表位标签、亲和标签和荧光标签。[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①表位标签往往是短肽序列,可用于免疫学应用,如[/font][font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②亲和标签一般较长,可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③荧光标签可用于活细胞和死细胞,并广泛用于影像学研究,如细胞定位和共表达实验。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]标签揭秘选择[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]选择将标签融合到目标蛋白的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端还是[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端,很大程度上取决于蛋白本身:蛋白的折叠方式,以及您选择的末端是否有功能要求。例如,如果[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端在蛋白内部折叠,那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小;或者,如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切,那么标签将从目标蛋白中移除。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果有资源或准备开展新型实验,最好同时克隆[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端和[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端标签的构造,从而确定最佳选择。一研究小组发现,与[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端的标签融合蛋白相比,更多的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是,需要强调的是,虽然[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端标签蛋白的定位和表现往往符合预期,但并不是始终可以预测。融合蛋白定位是否正确,可通过免疫荧光进行检测;免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达,免疫共沉淀有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合标签优缺点:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点:无需特异性蛋白即可分离目标蛋白;有时可在纯化后裂解标签;可将多个标签连接到同一蛋白上,增加其功能;避免免疫沉淀中出现抗体干扰;荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白;多种标签供选择,适合不同的应用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:某些标签可能会影响蛋白功能;可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置,导致实验成本增加。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注义翘神州蛋白标签页:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font]
[font=宋体]在生物学研究中,融合标签作为一种强大的工具,广泛应用于蛋白质纯化、定位和功能分析等方面。而在众多的融合标签中,表位标签、亲和标签和荧光标签是三种常见的分类。它们各自具有独特的特性和应用,为生物学研究提供了便利。表位标签主要用于蛋白质的检测和识别,通过特定的抗体与表位结合,实现对目标蛋白质的精准定位。亲和标签则依赖于其与特定配体的亲和力,用于蛋白质的纯化和分离。荧光标签则以其独特的发光性质,为蛋白质在细胞内的定位和动态变化提供了直观的观察手段。本文将深入探讨这三种标签的区别及其在各自领域的应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]为什么要考虑融合标签?融合标签的优缺点:[/font][/b][font=宋体]优点:[/font][font=宋体]①无需特异性蛋白即可分离目标蛋白[/font][font=宋体]②有时可在纯化后裂解标签[/font][font=宋体]③可将多个标签连接到同一蛋白上,增加其功能[/font][font=宋体]④避免免疫沉淀中出现抗体干扰[/font][font=宋体]⑤荧光标签可用于显示活细胞中的蛋白[/font][font=宋体]⑥多种标签供选择,适合不同的应用[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:[/font][font=宋体]①某些标签可能会影响蛋白功能[/font][font=宋体]②可能需要多次尝试才能找到最佳标签位置,导致实验成本增加[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]标签揭秘:表位标签、亲和标签和荧光标签[/font][font=宋体][/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]融合标签主要分为三类,适用于不同的应用:表位标签、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/affinity-tag][b]亲和标签[/b][/url]和荧光标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]表位标签往往是短肽序列,可用于免疫学应用,如[/font] [font=Calibri]Western Blot [/font][font=宋体]和免疫共沉淀。[/font][/font][align=center][font=宋体] [/font][img=表位标签抗体+序列,534,481]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403051443476642_6751_5907840_3.png!w534x481.jpg[/img][/align][font=宋体]亲和标签一般较长,可用于蛋白纯化或增加蛋白溶解度。[/font][align=center][font=宋体] [/font][img=亲和标签抗体+序列,500,284]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403051444164170_2397_5907840_3.png!w500x284.jpg[/img][/align][font=宋体]荧光标签可用于活细胞和死细胞,并广泛用于影像学研究,如细胞定位和共表达实验。[/font][align=center][img=荧光标签抗体+序列,537,191]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403051444342533_295_5907840_3.png!w537x191.jpg[/img][/align][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]标签揭秘选择[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端还是 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端?[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]选择将标签融合到目标蛋白的[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端还是 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端,很大程度上取决于蛋白本身:蛋白的折叠方式,以及您选择的末端是否有功能要求。例如,如果 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端在蛋白内部折叠,那么您收到融合蛋白信号的可能性非常小;或者,如果蛋白在标签融合末端进行翻译后剪切,那么标签将从目标蛋白中移除。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]如果您有资源或准备开展新型实验,最好同时克隆[/font] [font=Calibri]C [/font][font=宋体]端和 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端标签的构造,从而确定最佳选择。一研究小组发现,与 [/font][font=Calibri]N [/font][font=宋体]端的标签融合蛋白相比, 更多的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端融合蛋白定位于目标亚细胞腔隙。但是,需要强调的是,虽然 [/font][font=Calibri]C [/font][font=宋体]端标签蛋白的定位和表现往往符合预期,但并不是始终可以预测。[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]定位是否正确,可通过免疫荧光进行检测;免疫印迹有助于确认融合蛋白的大小是否正确并以预期的水平表达,[url=https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service][b]免疫共沉淀[/b][/url]有助于评估融合蛋白与已知底物的相互作用方式。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag][b]蛋白标签[/b][/url]详情可以查看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-tag[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白([/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白)是指在基因水平上将目的基因同免疫球蛋白部分片段基因相连,并在真核或原核表达系统中表达的重组蛋白。抗体融合蛋白具有抗体的特性及融合功能蛋白的活性,可广泛应用于免疫诊断、免疫治疗、抗体纯化及抗体和抗原的定量分析等,特别可用于免疫导向药物的制备。根据结合的[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段的不同,可以将抗体融合蛋白分为[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白与单链抗体([/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体])融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白结构:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白研究表明,抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区([/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体])形成的抗原结合部位十分接近,有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成,如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合,可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响,从而降低抗体与抗原的结合能力。因此,通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合,形成抗体融合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合,可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同,可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白作用原理:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区,可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性,通过这种特性的引导,将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位,进而发挥一定的生物效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区,不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分,利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]抗体融合蛋白制备:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法,但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大,随着基因工程技术的发展,该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其制备原理为:将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列([/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体])进行链接,然后将链接产物亚克隆至载体中,并用原核或者真核表达系统进行表达。制备抗体融合蛋白过程中,一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri](Linker)[/font][font=宋体]的长度,[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短,可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠,从而相互干扰;如果接头序列太长,又涉及免疫原性的问题。抗体融合蛋白与双特异性抗体抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白,若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白,即可得到双特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]结构:[/font][font=Calibri]Y[/font][font=宋体]型[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备方法:杂交瘤技术[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]基因重组[/font][/font][font=宋体][font=宋体]表达系统:真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理:特异性识别抗原,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段引起[/font][font=Calibri]ADCC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]ADCP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]CDC[/font][font=宋体]等作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]结构:具有多种结构[/font][font=宋体]制备方法:基因重组[/font][font=宋体][font=宋体]表达系统:真核系统[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]原核系统[/font][/font][font=宋体][font=宋体]作用原理:功能蛋白与靶分子间的受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体的相互作用[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以参考:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=Calibri] [/font]
Fastwinbt MTM-60 多功能组织细胞研磨器在大量DNA样品提取中的强大作用作为一名植物分子生物学实验室的成员,我们经常会遇到大量提取DNA样品进行检测的实验,而成百上千的样品的DNA提取成为了这种检测的重要限速步骤。为了对上千株的油菜的基因组进行PCR检测,我不得不对它们的DNA分别进行提取。做过植物DNA样本提取的朋友都知道,研磨是这个简单实验中最最令人头疼的部分。我是一个比较懒惰的分子生物学科研人员,所以在开始这项头疼的研磨工作之前,我开始四处打听有没有方便快速的研磨的工具。进口的多样本自动研磨器都很贵,不适合我这种偶尔进行一次这种大规模研磨的需要;幸好,与此同时,同事向我推荐了下面Fastwinbt MTM-60 多功能组织细胞研磨器,几千块钱的价格,并且可以满足我的实验需求,我很满意。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211130911_403606_1306303_3.jpg 研磨样品的过程中,我发现油菜样品虽然比单子叶的水稻,小麦要容易研磨的多,但是与培养间嫩嫩的拟南芥相比还是有很大差异。方统公司提供的助研磨的小钢珠要重复使用,每次还需清洗灭菌,个人认为比较麻烦。为了提高研磨效率,我去批发市场买了很多自行车上用的滚珠子,每个样品放两颗,一次使用后扔掉,真是方便快捷。下面秀一下仪器的工作场面。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/11/201211130912_403607_1306303_3.jpg 怎么样,还不错吧?一次可以磨60个样品,让我的实验事半功倍。方统公司的售后服务还是很热情周到的,我用过之后,帮我解决遇到的问题,随访了好几年呢如果你也有类似的需求,不妨试一下。不过最后声明一下,我跟他们公司可没有任何关系哟,不是做广告,只是有了好的东西与大家分享一下。
[font=宋体][b][font=宋体]什么是[/font][font=Calibri]fc[/font][font=宋体]融合蛋白?[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由免疫球蛋白(如[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IgA[/font][font=宋体]等)的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段与目标蛋白序列融合而成的新型重组蛋白。通过将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域与其他蛋白质或肽段融合,可以赋予这些蛋白质或肽段新的特性和功能,同时利用[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区域的稳定性和免疫系统的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]受体相互作用,增强融合蛋白的稳定性和半衰期。例如,普通重组[/font][font=Calibri]IL-2[/font][font=宋体]的体内半衰期较短,只有[/font][font=Calibri]6.9[/font][font=宋体]分钟,这限制了其在体内的持续作用时间。然而,通过与免疫球蛋白的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]片段融合,重组[/font][font=Calibri]IL-2/Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在体内半衰期延长了近[/font][font=Calibri]700[/font][font=宋体]倍,从而使其能够在体内更长时间地发挥作用。此外,延长半衰期还可以降低药物的剂量和频率,减少潜在的副作用和毒性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白有哪些?[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]是一种由至少两个结构域组成的蛋白,这些结构域由被连接起来的独立基因编码,因此能够作为一个单元被转录和翻译,产生单克隆多肽。现在几乎所有的重组蛋白都是利用融合结构域制备,也被称为[/font][font=宋体]“标签”(参阅重组蛋白标签的完整列表)。因此,融合蛋白又称融合标签蛋白或嵌合蛋白。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]大体上有两种类型的融合蛋白:第一种是由两个蛋白或蛋白亚单位端对端融合,通常由一个[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]连接,第二种是来自两个供体的氨基酸穿插在融合蛋白产物中。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白应用:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白最重要的三个用途是:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]作为克隆基因纯化的辅助手段[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]作为报告的表达水平[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]作为组织化学标签,使蛋白质在细胞、组织或生物体中的位置可视化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白在纯化中可以通过亲和层析简单方便地纯化,如葡萄球菌蛋白[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]、谷胱甘肽[/font][font=Calibri]-S-[/font][font=宋体]转移酶[/font][font=Calibri](gst)[/font][font=宋体]、麦芽糖结合蛋白[/font][font=Calibri](mbp)[/font][font=宋体]和纤维素结合蛋白。 重组融合蛋白最常用作报告构建体的融合伙伴,包括 β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶、荧光素酶和绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]荧光融合蛋白[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合蛋白中,最多的一类称为荧光蛋白,如绿色荧光蛋白([/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体])、橙色荧光蛋白([/font][font=Calibri]OFP[/font][font=宋体])和黄色荧光蛋白([/font][font=Calibri]YFP[/font][font=宋体])。 绿色荧光蛋白 [/font][font=Calibri](GFP) [/font][font=宋体]等荧光蛋白能够直接观察动态细胞内过程。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]绿色荧光蛋白([/font][font=Calibri]GFP[/font][font=宋体])是一种荧光蛋白,最初是从水母维多利亚发光管中分离出来的。 与荧光素酶不同,[/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]具有不需要任何底物、荧光素以及 [/font][font=Calibri]ATP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]O2 [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]Mg2+ [/font][font=宋体]的优势。 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]在被蓝光或紫外线激发时会发出绿光,在许多情况下可用于活的、完整的细胞和生物体,从而确保 [/font][font=Calibri]GFP [/font][font=宋体]作为自发荧光蛋白的功能。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]融合蛋白标签[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在融合标签中,既有短序列(如[/font] [font=Calibri]PolyHis[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PolyArg[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]FLAG[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]c-Myc[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Streptag [/font][font=宋体]等),也有大蛋白([/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MBP [/font][font=宋体]等)。 在许多情况下,短序列不会影响分子的三级结构及其生物学特性,而大融合分子更常用于增强所需蛋白质的溶解度。 与短序列标签不同,需要从重组构建体中去除大的融合标签。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多融合标签,既包含经过充分验证的标签,也包含最近开发的具有各种特性和不同优缺点的标签。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font]
http://www.bioon.com/biology/UploadFiles/201203/2012030911450761.jpg细胞S-腺苷甲硫氨酸成像图,随着每个时间点蛋氨酸(右下)的增加,荧光强度也增高通过基因工程技术使得细胞表达一种经修饰(改造)过的RNA,又称Spinach,研究人员能对活细胞中的小分子代谢物进行成像,并观察它们随时间变化是如何改变的。每个细胞新陈代谢都会产生代谢产物。假如能得知产物生成效率的话,就能辨识如癌症状态下细胞代谢的异常或确定药物能否将细胞的代谢状况恢复到正常状态。康奈尔大学威尔医学院的研究人员说发表在3月9日的《科学》杂志上的相关论文详细描述了这种先进的技术方法,这一技术将有可能彻底颠覆以往对代谢组学的认识,提供数千种细胞内代谢产物的动态变化的化学指纹图谱。威尔康乃尔医学院药理学副教授Samie R. Jaffrey博士说:“动态观察到代谢产物的变化将为我们提供新的和强大的武器,方便我们了解代谢在疾病状态下是如何改变的,并帮助我们找到可以将它们恢复到正常水平的方法”。Jaffrey博士领导威尔康乃尔的其他三名研究人员共同完成了这项研究。他说:“细胞的代谢水平调控着细胞诸多功能,也正因为如此,代谢水平的变化可以是细胞内在特定的时间内发生什么变化的写照”。例如生物学家都知道,肿瘤细胞存在代谢异常,这些细胞对葡萄糖能源的利用存在异常并产生独特的代谢产物如乳酸,从而有不一样的新陈代谢过程。Jaffrey博士说:“能够看到这些代谢异常的话,就可以了解癌症的发生发展。但是到现在为止,测量活细胞中代谢产物一直非常困难。Jaffrey博士和他的团队展开的科学研究表明:可以用特定的RNA序列来检测细胞中代谢产物的水平。这些RNAs是基于能在细胞发出绿色光的Spinach RNA设计的。Jaffrey博士研究小组修改Spinach的RNAs,使得它们一旦遇到它们专属绑定的代谢物时就关闭,造成Spinach荧光开启。他们设计出了RNA序列以追踪细胞中五个不同代谢产物包括二磷酸腺苷、细胞能量分子ATP和参与调节基因活性的甲基化过程的SAM(S-腺苷蛋氨酸)水平的变化。他说:“在此之前,一直没有人能够实时观察到细胞中代谢产物水平是如何变化的”。Jaffrey博士说:“在活细胞中运用RNA传感器,研究人员能够测量单个细胞中的目标代谢产物水平随着时间的变化而发生的改变,你可以看到这些代谢物如何响应信号刺激或遗传变化进而发生动态变化的。你可以筛选出能使得这些基因异常发生正常化的药物,我们的一个主要目标是确定药物是否能使细胞的新陈代谢正常化。新技术克服了现行的用绿色荧光蛋白(GFP)标记活细胞以充当传感器的缺点。如果将绿色荧光蛋白和其他发光蛋白质融合到能结合某种代谢物产物的自然存在的蛋白质中的话,绿色荧光蛋白和其他发光蛋白质就可以用来充当代谢感应器。但在某些情况下,代谢产物与自然存在的蛋白质结合方式会扭转蛋白质结构,进而影响已经融入到这些蛋白质中的荧光蛋白。另外,对于大多数的代谢产物,并没有可用来融合绿色荧光蛋白以制造传感器的蛋白质。通过使用RNA作为代谢物传感器,这个问题引刃而解了。Jaffrey博士说:“关于RNA令人惊奇的是,你可以得到基本上你想要结合任何一种小分子代谢物的RNA序列。他们可以在几个星期就能生产出来”。然后,这些人造序列融合到Spinach中,并在细胞中以单链RNA的形式表达。Jaffrey博士说:“这种做法能让你得到任何你想研究的小分子代谢物,以及这些小分子代谢物在细胞内的情况”,他和他的同事们将这一技术的运用范围扩大到能检测活细胞内的蛋白质和其他分子。他补充说道:该技术可应用于多种疾病研究中。Jaffrey博士说:“我们非常有兴趣研究导致发育障碍如自闭症的大脑神经细胞内的代谢如何是变化的,有很多的机会能让这一新的工具发挥用处”。这篇研究论文的合著者包括威尔康乃尔医学院药理系Jeremy S. Paige博士、Thinh Nguyen Duc博士、Wenjiao Song博士。这项研究由美国国立卫生研究院的生物医学成像和生物研究所以及McKnight基金会资助。康奈尔科技企业和商业中心(CCTEC)已经代表康奈尔大学提出了这项技术的专利保护申请。Samie Jaffrey博士是Lucerna技术的创始人和科学顾问,并持有该公司股权。此外,Lucerna技术拥有上述描述技术的相关许可证。
1、【仪器名称】: 细胞融合仪。2、【仪器型号】:CF-150B。3、【生产厂家】:匈牙利BLS公司。4、【检测适用范围 】:专为哺乳动物胚胎分裂球电融合而设计,此细胞融合仪可在电解液或非电解液中运用5、【仪器使用优点、缺点】:(1)产品小巧,易操作,专为胚胎细胞融合设计,专一性稳定性强,性价比极高(2) 应用于测试新衍生的或遗传控制的胚胎干细胞的发育潜能(3) 完全ES衍生细胞胎儿为不同功能或遗传研究提供丰富的组织和器官前身资源(4) gene-trap用于完全衍生ES胚胎聚合,此胚胎由ES四倍体细胞胚胎产生,从而获取基因表达模式的直接信息6、【仪器外观描述或者图片】:见下图总尺寸宽x 高 x 长185 x 80 x 226 mm重量2.5 kg7、【说明书或者操作规范 】:脉冲电压 10 to 150 V脉冲时间 10 to 150 微秒脉冲电压 10 to 150 V第一步:按模式键选择‘脉冲宽度’识别器(LED闪亮),转动分压器(5)设置脉冲宽度三格数字显示屏(此页未显示)在你转动分压器至100 micro sec.时将显示脉冲宽度值变化。第二步:再按模式键选择‘脉冲宽度’并转动分压器(4)在三格数字显示屏上显示93V。第三步:按上下序列键(2和3)设置重复次数(脉冲数量)第四步:按触发键开始预设脉冲。提示: 这些步骤可以单独设置也可按不同次序设置 8、【仪器维护及保养知识 】:此仪器无短寿命部件,因此唯一的维护工作就是保持清洁。此仪器有抗腐蚀涂层---使用软布和少量清洁剂清洁外表面。 http://img.dxycdn.com/upload/2008/05/12/52894822.jpg
科技日报 2013年10月19日 星期六 科技日报讯 如果你问一个生物学家,某个细胞下一步会做什么?他可能先要问你该细胞的电压、氧化性、pH值、渗透性、葡萄糖浓度等等,然后才可能据此预测它是正要发起一个动作电位,还是要进入有丝分裂,抑或正在走向凋亡。但如果你能轻松地得到亚细胞范围的温度曲线图,比如每个线粒体、中心粒甚至内质网区的温度,就像母亲给孩子量体温那么容易,情况又会完全不一样。 据物理学家组织网10月16日报道,日本京都大学科学家最近将绿色荧光蛋白和沙门氏菌体内感受热量的一种蛋白融合在一起,制造出一种能检测细胞内部不同细胞器温度波动的基因编码“温度计”,并将细胞器温度变化与细胞内部功能联系在一起,有助于人们进一步理解细胞行为。相关论文发表在最近的《自然·方法学》杂志上。 制做这种新型“温度计”的关键,是一种已知的名为TlpA的蛋白,这种蛋白由沙门氏菌制造,其正常作用是作为一种自动调节抑制器,感知温度以控制转录,能在37℃左右进行迅速可逆的结构转录。研究人员把绿色荧光蛋白(GFP)的荧光片段与TlpA融合,使GFP的荧光光谱随温度变化,最后再把融合蛋白加入到能瞄准线粒体、内质网或细胞质膜蛋白的序列中。 这种以蛋白质为基础的新型热传感器还能通过基因编码,直接瞄准不同的细胞器,比如线粒体,同时测量膜蛋白和产生的能量,并在温度变化与细胞器的内部功能之间建立联系。在本实验中,研究人员能探测到褐脂肪线粒体的生热作用,并把温度与线粒体膜蛋白、三磷酸腺苷(ATP)生产联系在一起。 利用这种序列,他们能同时绘制出“感温”GFP随线粒体膜蛋白电压指示器JC-1的染色图。他们发现,在温度高的地方,电压也相应较高。他们还用另一种基因编码传感器(ATeam26)结合荧光共振成像(FRET)检测ATP,再次证实了这种相关性。ATP主要是在氧化磷酸化过程中由一种电化学泵产生的,反映了线粒体的质子变化曲线,与JC-1所指示的类似。 研究人员指出,这一技术充分发挥作用的最佳地方是脑细胞。它能更好地处理温度变化,不仅在轴突的内外,而且能在神经胶质细胞内部。胶质细胞包裹着髓磷脂,所以携带了脉冲能量的很大一部分,有助于人们更好地理解神经信号的传输。但这还有争议,脉冲神经元热动力学主要还是由实验驱动,而并非不太精确的外在温度传感器。(常丽君)
[font=宋体][b]什么是重组蛋白?[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production][b]重组蛋白[/b][/url]的产生是应用了重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]或重组[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]融合蛋白和重组蛋白的区别[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、重组蛋白[/font][/font][font=宋体]重组蛋白是指应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。[/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白是指通过重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]技术将你要表达的目的蛋白基因同表达载体上融合蛋白基因相连,这样表达出的蛋白质就会是同时具有目的基因蛋白和融合基因蛋白两个部分的重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白与重组蛋白不是一个层次上对立的概念,融合蛋白表达只是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。因为融合表达具有表达效率高、产物稳定而且水溶性好、易于鉴定和纯化等优点,现已被广泛采用。融合蛋白又称标签([/font][font=Calibri]Tag[/font][font=宋体]),常用的[/font][font=Calibri]His[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总结:在生物制药领域,重组蛋白具有较高的活性和纯度,更易吸收,安全性也更高的特点。重组蛋白的利用率也更高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为了生产重组蛋白,基因被分离并克隆到表达载体中。重组蛋白的生产需要蛋白表达系统、蛋白纯化系统和蛋白识别系统。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]获取重组蛋白的基本步骤:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]目标基因的扩增。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]插入克隆载体。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]亚克隆到表达载体中。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]转化到蛋白表达宿主中[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]细菌[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大肠杆菌[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞系统[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]重组蛋白鉴定试验[/font][font=Calibri](Western blot[/font][font=宋体]或荧光[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]大规模生产。[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]大规模发酵[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分离和纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]需要考虑多种因素:[/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选择哪个宿主系统?[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]如何分离和纯化重组蛋白?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]选择适当的表达宿主或使用正确的纯化方法并不容易,应考虑目标重组蛋白的性质。下面列出了一些重要因素:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]? 膜结合[/font][font=宋体]? 溶解度[/font][font=宋体]? 单或多结构域[/font][font=宋体][font=宋体]? 大小[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]分子量[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]? 表达位置[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于大多数没有足够经验来表达和分离重组蛋白的人来说,重组蛋白的生产是非常耗时的。许多生物公司为各种不同规模的重组蛋白表达提供良好的服务,例如义翘神州[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]参考重组蛋白生产的详细服务清单)[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供重组蛋白和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]等相关信息,详情可以关注[/font][font=宋体][font=宋体]融合蛋白:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]重组蛋白生产:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-production[/font][/font]
[font=宋体][font=宋体]抗体融合蛋白,亦被称为[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]融合蛋白,是通过在基因层面上巧妙地将目标基因与免疫球蛋白的部分基因片段相互连接,随后在真核或原核表达系统中实现表达而得到的一种重组蛋白。这种独特的蛋白不仅继承了抗体的卓越特性,更融合了功能蛋白的活性,使其在多个领域展现出广泛的应用前景。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在免疫诊断领域,抗体融合蛋白能够精准识别并绑定抗原,为疾病的早期发现和诊断提供了有力工具。在免疫治疗领域,它则能够引导药物直达病灶,提高治疗效果并减少副作用。此外,抗体融合蛋白在抗体纯化、抗体和抗原的定量分析等方面也发挥着重要作用,特别是在免疫导向药物的制备中,其重要性更是不言而喻。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]根据与[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]片段结合方式的不同,抗体融合蛋白可分为多个类型,包括[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、[/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]Fc[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fc-fusion-proteins][b]融合蛋白[/b][/url]以及[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]单链抗体([/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b]scFv[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/scfv-antibody-production][b])[/b][/url]融合蛋白。这些不同类型的抗体融合蛋白各具特色,为科学研究和临床应用提供了丰富的选择。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]结构[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白、单链抗体融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]研究表明,抗体可变区的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端空间结构上与互补决定区([/font][font=Calibri]CDR[/font][font=宋体])形成的抗原结合部位十分接近,有的抗体可变区[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端残基甚至直接参与抗原结合部位的形成,如果将效应蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端结合,可能对抗体可变区的空间构型造成较大影响,从而降低抗体与抗原的结合能力。因此,通常将蛋白与抗体片段的[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端进行结合,形成抗体融合蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白在结构上是将抗体的[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区与功能蛋白进行融合,可将[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端或[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]端与目的基因进行融合。根据结合蛋白的不同,可以有多种构型。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]作用原理[/font][/b][font=宋体]含有抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]融合蛋白与[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]融合蛋白含有抗体的可变区,可以进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,其作用原理为利用抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异性结合的特性,通过这种特性的引导,将具有生物活性的蛋白靶向引导至细胞的特定部位,进而发挥一定的生物效应,也就是所谓的“生物导弹”。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]不含抗体可变区的抗体融合蛋白[/font][font=宋体][font=宋体]该类融合蛋白含有的抗体功能区为[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]区,不能进行抗原[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗体反应,[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]段的作用为延长药物在血浆内的半衰期、增加融合蛋白的稳定性等。[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]融合蛋白药理作用的发挥依赖于功能蛋白部分,利用受体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]配体之间的相互作用产生一系列的生物学效应。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]抗体融合蛋白制备[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]最初抗体融合蛋白制备的方法为化学交联法,但这种方法制备的抗体融合蛋白组成不均一、性能不稳定、免疫源性大,随着基因工程技术的发展,该技术已被淘汰。目前主要利用基因工程技术来进行抗体融合蛋白的制备。其制备原理为:将抗体基因与目的蛋白基因通过一段接头序列([/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体])进行链接,然后将链接产物亚克隆至载体中,并用原核或者真核表达系统进行表达。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]制备抗体[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein][b]融合蛋白[/b][/url]过程中,一个关键的问题是两蛋白间的接头序列[/font][font=Calibri]( Linker )[/font][font=宋体]的长度,[/font][font=Calibri]linker[/font][font=宋体]的长短对蛋白质的折叠和稳定性非常重要。如果接头序列太短,可能影响两蛋白高级[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]结构的折叠,从而相互干扰;如果接头序列太长,又涉及免疫原性的问题。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白与双特异性抗体[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]抗体融合蛋白是将抗体的部分片段与目的蛋白进行融合表达得到的重组蛋白,若将两个具有不同抗原特异性的抗体片段连接至同一蛋白,即可得到[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/bispecific-antibody][b]双特异性抗体[/b][/url]。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]单克隆抗体与抗体融合蛋白区别[/font][/b][font=宋体] [/font][img=单克隆抗体与抗体融合蛋白区别,690,155]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403081113369902_7816_5907840_3.png!w690x155.jpg[/img][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/fusion-protein[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
流式细胞仪(Flow cytometer, FCM)是70年代发展起来的对单个细胞进行定性定量测定的新型仪器,亦称荧光激活细胞分类仪(FACSC),是一种将现代免疫荧光技术与流体力学、激光学、应用电子学和计算机等学科的先进技术相融合用于基础与临床细胞生物学研究的一项高科技实验检测仪器。它能在一定功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选,高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测到多个参数。与传统的荧光镜检测相比,具有速度快、精度高、准确性好等优点,成为当代最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪以其快速、灵活、大量、灵敏和定量的特点,已在医学、生物学的几乎所有领域里得到迅速的推广,并在各学科研究中发挥着重要的作用。我的这片文章9月发表,等正式发表了,我贴出来,需要的话可联系我shuguangfang@tom.com
请各位朋友帮下小弟,多功能混合碾磨仪有什么用处,主要是用来干嘛的?
细胞因子(cytokine)是由免疫细胞及相关细胞产生的一类调节细胞功能的高活性、多功能的多肽分子,不包括免疫球蛋白、补体和一般生理性的细胞产物。细胞因子通常由淋巴细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞等相关细胞产生,按其功能及与免疫学的关系可分为:⑴具有抗病毒活性的细胞因子,如干扰素(interferon,IFN);⑵具有免疫调节活性的细胞因子,包括白细胞介素(interleukin,IL)类的IL 2、IL 4、IL 5、IL 7、IL 9、IL 10和IL 12,以及β型转化生长因子(transforming growth factor β,TGF β);⑶具有炎症介导活性的细胞因子,包括以肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)及IL 1、IL 6和IL 8为代表的结构相似的小分子趋化因子;⑷具有造血生长活性的细胞因子,包括IL 3、IL 11、集落刺激因子(colony-stimulating factor,CSF)、促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、干细胞因子(stem cell factor,SCF)和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)等。 重组细胞因子是利用基因工程技术生产的细胞因子产品,作为药物用于治疗肿瘤、感染、造血障碍等,可收到良好的疗效。近十多年来,重组细胞因子类药物的研制有较快发展,相关的新药陆续上市。本文重点介绍各类药物的研究进展、不同表达系统的表达水平和基因来源情况,以及各类重组细胞因子的基本特点和适应症。 国内外研究动态和市场现状 目前国内市场上主要的国产重组细胞因子类药物包括乙肝疫苗、IFN、IL 2、G-CSF、重组链激酶(recombinant streptokinase, rSK)、重组表皮生长因子(recombinant endothelial growth factor,rEGF)等15种基因工程药物。组织溶纤原激活剂(tissue plasminogen activator,T-PA)、IL 3、重组人胰岛素、尿激酶等十几种多肽药物正处于临床Ⅱ期试验阶段,单克隆抗体的研制已从实验阶段进入临床阶段。正在开发研究中的项目包括采用新的高效表达系统生产重组凝乳酶等40多种基因工程新药。 在欧美市场上,对现有重组药物进行分子改造而开发的某些第二代基因药物已经上市,如重组新钠素、胞内多肽等。另外,重组细胞因子融合蛋白、人源单克隆抗体、反义核酸,以及基因治疗、新的抗原制备技术、转基因动物生产等,均取得了实质性的进展。国外生物医药的目前发展动向,主要反映在以下几方面。 与血管发生有关的细胞因子 肿瘤血管生长因子(tumor angiogenesis factors,TAF)包括研究较多的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)、血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)等,它们促进肿瘤新生微血管的生长。临床研究表明,阻断VEGF受体2(VEGFR 2)和PDGF受体β(PDGFR β)等,可达到通过抗血管生成来治疗肿瘤的目的。1998年,美国科研人员发现两种用于治疗癌症的血管发生抑制因子(即抗血管生长因子)和内皮抑制素,以及一种抗血管生长蛋白,即血管抑制素(vasculostatin),都有较好的疗效。另外,VEGF、FGF和血管生长素(angiopoietin)等能够通过刺激动脉内壁的内皮细胞生长来促进形成新的血管,从而对冠状动脉疾病和局部缺血产生治疗作用。
干细胞使与衰老有关的肌无力的速度放缓 在小鼠中的一则新的研究报告指出,用干细胞来增加年轻的肌肉可减缓与年龄老化相关的肌无力的进程。 这些发现可能会导致再生性肌肉疗法的出现,这种疗法也许会对罹患肌营养不良症的病人或是那些虚弱的老年人有帮助。 文章的作者提出,如果科学家们能够发现可刺激肌肉中干细胞的小分子或分子组合(这可能会比将干细胞移植到人体内要更容易些),那么这些分子可被用于增进肌肉修复或减少肌肉丧失。 在成年期,损伤后或疾病后肌肉再生主要是靠卫星细胞,这是一种会分裂并参与修复、重新恢复活力和控制骨骼肌组织的干细胞,它可通过发育成为肌肉细胞而令肌肉生长。 Bradley Olwin及其同事在这里利用了干细胞的能力并防止了在幼小的小鼠中某一单一肌肉的与年龄老化有关的消瘦。 在该研究中,研究人员将少数的干细胞移植到肌肉受伤的幼小小鼠体内。 该研究小组在两年后对这些小鼠进行检查时发现,这种手术永久性地改变了移植的细胞,使得它们能够抵抗肌肉中的老化过程。 明确地说,这些移植的细胞能够控制它们所在的肌肉并与肌肉融合以形成新的肌肉纤维。 尽管人们对这一过程的机制还不了解,但这些发现提示,通过模仿这些移植的干细胞的功效,科学家们也许能够防止肌肉功能和重量的丧失,而这些通常是在人类老化时出现的情况。
据美国物理学家组织网报道,研究人员发现,在酸度出现变化的环境下,蛋白分子的结构将在原子水平上发生改变,引发病毒入侵并与宿主细胞发生融合。美国普渡大学和巴斯德研究所的研究小组分别研究了酸性环境和中性环境中的蛋白结构。结合两个小组的研究成果,能够说明病毒在进入宿主细胞并准备与之融合时蛋白质结构所发生的变化,而这恰恰是病毒感染的关键步骤。研究人员借助电子显微镜清楚观测到这种病毒表面蛋白质的3D结构,他们发现,蛋白质E1、E2、p62等在病毒入侵机制中发挥着关键作用。此前研究人员已经知道了包膜蛋白1(E1)的结构,仅知道包膜蛋白2(E2)的一般特征,如它在蛋白质复合体的位置,但还不了解它的结构。普渡大学研究人员现在已确定了E2的结构,以及E1、E2蛋白质复合体在原子水平上的精确结构。他们已经了解了E2的三种结构域,以及在酸性环境中,E2如何与细胞膜融合。E2是一种受体结合蛋白,病毒可附着其上进入宿主细胞。病毒在宿主细胞的酸性环境中引发蛋白复合物结构发生变化,从而可使病毒与细胞膜融合,形成一个“融合孔”,病毒可通过“融合孔”将遗传物质转移到宿主细胞,宿主细胞在感染病毒后会产生新的病毒粒子。普渡大学著名生物科学教授迈克尔·罗斯曼认为,这一发现具有里程碑意义,有助于人们掌握病毒如何感染人类和其他生物的相关知识,也有助于人们生产更好的疫苗和抗病毒药物。
[b][url=http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/puncher.html][b]单细胞转移分离系统[/b][/url]是可用于单细胞转移,单细胞分离和单细胞隔离,单细胞成像应用的多功能单细胞分离操作仪器,它可以实现从微孔芯片转移单细胞到细胞收集管中。单细胞转移分离系统[/b][color=#666666]集单细胞成像,单细胞隔离,单细胞选择功能于一体,自动聚焦成像。[/color][b]单细胞转移分离系统转移单细胞到Eppendorf微管,PCR微孔板或其它反应微管中,[/b][color=#666666]在隔离单细胞后,它可以对选定收集的细胞进行扫描并成像。[/color][b]单细胞转移分离系统[/b][color=#666666]采用Nikon Ti-2倒置荧光显微镜,配备自动扫描显微镜载物台,自动聚焦器件,高灵敏度荧光CCD相机和LED激发光源组建而成。[/color][img=单细胞转移分离系统]http://www.f-lab.cn/Upload/single-cell-isolation.JPG[/img][b]单细胞转移分离系统[/b]特点完全自动化,步进系统高质量单细胞荧光成像单细胞分离的效率超过90% 超过70%分离的细胞增殖 分离后兼容所有的单细胞的WGA工具包(放大器的‐1,picoplex,复制‐G)实惠微Wells基于硅微孔微腔。由薄膜封闭70µ m,井底直径(1µ m),包含一个单孔。样品流体进入威尔斯并从底部的孔隙中流出。单个细胞被拖着走。一旦单个细胞降落到孔隙上,流动停止,其他细胞就不会进入井内。有用的细胞被识别出来。选定的细胞穿孔从微孔到384孔PCR板或离心管等等。单细胞转移分离系统:[url]http://www.f-lab.cn/cell-analyzers/puncher.html[/url]
常见的真核细胞翻译的起动因子的功能 各种版本的教材和专著上写的常见的真核细胞翻译的起动因子的功能太乱了,我根据Michael B.Mathews, Nahum Soneberg,John W.B.Hershey,Translational Control onBiology and Medicine,Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007, 整理了出来。1.eIF1:起始密码子的识别:(1)使不正确的密码子与反密码子配对解离并且correct parings in poor sequence contexts in P site,(2)介导40S亚基对于正确的AUG密码的辨识的相关反应。参与确保起始密码子选择的忠实性(与原核的IF3相似)。2.eIF1A:与原核生物的IF1功能相似,eIF1A可以占领真核细胞的核糖体A位(40S亚基),并使得40S亚基的一些结构域的相对位置发生变化。此外,eIF1A与eIF1还能够增强eIF3将80S核糖体解离为40S和60S亚基的活性。3.eIF2:携带(Met-tRNAi Met)与40S亚基结合,形成三元复合体(40S complex),eIF2有GTPase活性。eIF2结合上的GTP水解为GDP+Pi的反应由eIF5介导,结合上eIF2的GDP与GTP交换反应由eIF2B介导。4.eIF2B:结合在eIF2的GDP更换为GTP的反应由eIF2B催化,否则eIF2B上的GDP掉下来换上GTP的过程非常缓慢。5.eIF3:有依赖性RNA的(RNA independent)解离80S核糖体为40S和60S亚基的活性,此活性可被eIF1A加强,部分地被eIF1增强。eIF3能够结合到60S亚基的内表面的平台部位(platform),并且锁住40S亚基到达18Sr RNA元件(18r RNA属于40S亚基的通道),18Sr RNA元件位于40S亚基与60S亚基的内部接触面(inter subunit),并且象一座桥一样连接40S亚基中的B2b和B2d。eIF3的另外功能:促进mRNA的结合与核糖体40S亚基的结合。6.eIF4F:eIF4A,Eif4E和eIF4G各一个分子组成一个完整的eIF4F分子。7.eIF4A:RNA helicase,使mRNA去除二级结构,其本身是较低的非持续性的螺旋酶(nonprocessive helicase),其酶活性能够被eIF4B所活化。也可以认为eIF4B是eIF4A的cofactor,eIF4B可能是增加了eIF4A与mRNA的亲合性而增加了eIF4A的RNA螺旋酶活性。8.eIF4B:与eIF4A共同行使RNA螺旋酶活性,去除mRNA的二级结构。9.eIF4E:真核mRNA的5'-帽子的结合蛋白。10.eIF4G:连结eIF4E与PAB。11.eIF5:与eIF2结合时会增强eIF2的GTPase活性,eIF5也是核糖体依赖性的GTPase。eIF5的GAP功能对40S亚基与60S亚基的结合是一个必需的先决条件(prerequisite),至少在细胞内是如此,因为敲除了酵母细胞eIF5基因会削弱翻译起并且引起48S前起始复合物(PTCs)的堆积。12.eIF5B:有GTPase活性,eIF5B结合上GTP但未水解时,会占领核糖体40S亚基的A位。eIF5B的功能与原核的eIF2近似,eIF5B有很弱的结合Met-tRNAi Met活性。13.eIF6:亚单位解聚,结合于60S亚单位。参考:Michael B.Mathews, Nahum Soneberg,John W.B.Hershey,Translational Control onBiology and Medicine,Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2007, P113, P91-P94, P100-P101, P103, P110-P111, P116, P104-105, P114, P250-P251, P253-254,P319。
月旭科技秉持分享传承生物制药相关技术,汇集生物制药相关细分技术,以生物技术分享传承和助力发展为初衷,月旭材料是集生物分离纯化介质研发、生产、销售于一体的高新技术企业。公司专注生物分离填料的研制和生物工艺下游技术工艺开发。有琼脂糖微球填料,葡聚糖微球填料,琼脂糖交联葡聚糖微球填料,琼脂糖交联纤维素微球填料,琼脂糖交联纤维素交联葡聚糖微球填料,涵盖离子交换,亲和,排阻和疏水等多款高品质填料。[b]融合蛋白不挂金属螯合亲和层析柱01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]超声的功率不对( 太大,蛋白炭化,太小,蛋白没有释放)[/b][color=#fcb441]解决方法:[/color]改变超声功率或超声前尝试添加溶菌酶增加细胞破碎率。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]组氨酸标签暴露不完全[/b][color=#fcb441][b]解决方法:[/b][/color]在变性条件下( 用4-8 M 脲,或4-6 M 盐酸胍) 进行纯化,常规Ni-6FF(IDA) ,在变性条件下镍离子容易脱落,此时可选择[b]耐受变性剂的螯合填料(推荐月旭材料的亲和填料Ni Tanrose FF(NTA)。03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]His标签丢失[/b][color=#fcb441][b]解决方法1:[/b][/color]WB 检查His 是否表达,上游构建,改变His-tag 的位置(C- 端或N- 端),必要时增加His 个数。[color=#fcb441][b]解决方法2:[/b][/color]孵育的时间不够,降低流速和增加孵育的时间。[color=#fcb441][b]解决方法3:[/b][/color]改变螯合的金属离子,寻找到最佳的结合金属离子。[color=#fcb441][b]解决方法4:[/b][/color][b]选择高载量高特异性的螯合填料(月旭材料的亲和填料 Ni Tanrose FF(IDA) )。融合蛋白结合在螯合填料上洗脱不下来01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]洗脱条件太温和(融合蛋白质仍然结合在柱上,结合力较强)[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。[b]02 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]降低pH 的方法洗脱,若pH 低于3.5,会导致镍离子脱落[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]改变洗脱办法,咪唑竞争性洗脱。[b]03 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]蛋白已沉淀在柱上[color=#fcb441]解决方法1:[/color][/b]减少上样量,或使用咪唑的线性梯度而不是分步洗脱以降低蛋白的浓度。试用去污剂或改变NaCl 的浓度,或在变性条件( 去折叠) 下洗脱( 用4-8 M 脲,或4-6 M 盐酸胍)。[b][color=#fcb441]解决方法2:[/color][/b]蛋白在柱上变性固化,用0.5M氢氧化钠洗柱。[b]04 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]非特异性疏水或其他相互作用[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如:2% Triton X-100)或增加NaCl 的浓度。[b]05 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]在填料表面形成高密度融合蛋白的聚集[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]选择合适载量的填料,切勿一味追求高载量。[b]镍柱使用中出现棕色是怎么回事01 [/b][color=#1a237e][b]可能原因:[/b][/color][b]缓冲液中DTT的影响, DTT会对镍柱的颜色和纯化效率有很大的影响,在碱性的缓冲液条件下,镍离子会被DTT还原生成棕色的沉淀,所以要尽量避免DTT的参与。[color=#fcb441]解决方法:[/color][/b]若样品中含有DTT,在上样之前, 我们推荐采用不含还原性试剂的空白运行来除去任何较弱结合的镍离子;空白运行方法(使用不含还原剂的平衡液和洗脱液)1)5倍柱体积的双蒸水洗柱 ;2)5倍柱体积的平衡液洗柱;3)5倍柱体积的洗脱液洗柱;4)10倍柱体积的平衡液平衡。当不使用时,勿将Ni Tanrose 6FF(IDA)保存于含还原性试剂的缓冲液中。
http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif高效基因导入-电穿孔在生命科学研究中的应用 讲座时间:2014年7月8日 14:00 主讲人:张 旭 生物科学硕士,毕业于美国普度大学,拥有丰富分子生物仪器技术经验,现任美国哈佛仪器大中华区上海代表处渠道经理。http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif【简介】 电穿孔技术是利用电场作用使细胞膜的脂双层膜结构进行重新排列,形成许多微小的孔径,从而是外源分子可以通过细胞膜进入细胞的一种重要分子生物学技术。如今被广泛应用于生物医药领域,实现基因和药物导入特定的细胞、siRNA基因沉默和基因疗法、细胞融合和单克隆抗体制备以及核转移和动物克隆。与其他化学和生物导入方式相比,电穿孔有着得天独厚的优势,对导入的外源分子大小没有限制、无细胞毒性、具有很高的实验可重复性并且操作简单快捷。配合专业设计的多样性电极,电穿孔技术的应用对象也拓展至体外悬浮细胞、活体动物、离体组织、子宫内胚胎、卵内胚胎和贴壁细胞,并且可以进行大规模96孔高通量应用,从而使得电穿孔技术的应用领域得到了无限扩展,新的应用技术不断涌现......本期摘要:电穿孔/电融合技术介绍电穿孔技术原理影响电穿孔效率的关键因素电融合技术特点介绍-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元京东卡一张哦~3、报名截止时间:2014年7月8 日 13:30 4、报名参会:http://simg.instrument.com.cn/meeting/images/20100414/baoming.jpg
我们要用玻璃融合枪,来融合安培瓶,就是那种玻璃房用的,有乙炔和氧气导管,燃烧的东西,不知道哪位有这东西