多光子显微成像系统

[ 产品简介 ]多光子成像与全息光刺激系统 DeepVision是神经科学、肿瘤免疫和药物代谢等相关研究领域进行活体显微成像的理想平台。DeepVision核心技术来自于复旦大学脑科学转化研究院李博团队及工程与应用技术研究院董必勤团队的多年研发成果。系统采用了创新的设计理念和先进技术，能够实现双光子、三光子快速深层成像，并可拓展实现单细胞精度的三维双光子全息光遗传操控。[ 产品特点 ]&bull 更大的样品空间：龙门架式结构，可放置猕猴等非人灵长类动物或搭载小动物VR装置，实现小鼠跑球等行为学实验。&bull 更深的成像深度：三光子成像深度最大超过1500 μm，能记录到活体小鼠海马区神经元钙信号。&bull 多脑区同步成像：同一视野下可对多个脑区同步成像或刺激，实现多脑区互作神经环路研究。&bull 同步高精度光遗传刺激：对分布在三维空间中的多个目标神经细胞进行单细胞精度的全息光遗传学操控。&bull 无荧光标记谐波成像：利用二次谐波（SHG）或三次谐波（THG）进行无需荧光标记的谐波信号成像。[ 应用领域 ]&bull 活体脑（鼠/猴等）深层成像、神经元功能钙成像、光遗传实验&bull 各类模式生物（果蝇/斑马鱼/线虫）活体深层成像、神经元功能钙成像&bull 多色样品深层成像、谐波成像&bull 各种类器官和血管深层成像、谐波成像&bull 行为学实验中的神经元功能钙成像 活体小鼠海马区神经元钙信号成像（复旦大学脑科学转化研究院李博实验室）小鼠活体皮层三维双色成像，绿色：小胶质细胞；红色：皮层血管 （（复旦大学脑科学转化研究院李博实验室））脑类器官三光子三次谐波（THG)信号成像，无需荧光标记 （复旦大学脑科学转化研究院李博实验室）在三维空间中的多个目标神经细胞进行单细胞精度的光遗传学操控（复旦大学脑科学转化研究院李博实验室）

多光子显微镜采用在生物组织中穿透性强的近红外/红外激光去激发样品中的荧光发光基团，进行荧光成像。该技术光毒性低，成像深度高，因此适用于厚的活体组织（如脑片、完整器官）甚至活体生物标本的成像及功能研究。2013年Bruker收购Prairie Technology公司，该公司于1996年开始生产双光子显微镜，是最早推出商业化双光子的厂家之一，在欧美市场的占有率极高。目前，Bruker的双光子产品主要有专注于高品质活体成像的Investigators系列以及专注于进行活体功能性研究的Ultima系列。20多年的技术沉淀，使得Bruker的双光子产品在仪器性能、使用便利性以及仪器应用拓展性方面都展现出无与伦比的优势。（1）三种成像扫描模式：常规的检流振镜扫描（Galvo Scanning），龙卷风扫描（Spiral Scanning）和快速振镜扫描（Resonant Scanning）；（2）有多种旋转物镜可供选择(单轴手动，多轴手动旋转、多轴电动)，进行离轴成像，可以从不同角度对实验样品进行成像；（3）可升级移动显微镜平台，结合旋转物镜，无需样品移动，使其保持在自然生理状态下，即可找到感兴趣的成像视野或进行多视野图像采集

荧光和荧光寿命分子包含多个单能态S0、S1、S2… 和三重态T1… ，每个能态都包含多个精细的能级。正常情况下，大部分电子处在*低能态即基态S0 的*低能级上，当分子被光束照射，会吸收光子能量，电子被激发到更高的能态S1 或S2 上，在S2 能态上的电子只能存在很短暂的时间，便会通过内转换过程跃迁到S1 上，而S1 能态上的电子亦会在极短时间内跃迁到S1 的*低能级上，而这些电子会存在一段时间后通过震荡弛豫辐射跃迁到基态，这个过程会释放一个光子，即荧光。此外，亦会有电子跃迁至三重态T1 上，再由T1 跃迁至基态，我们称之为磷光。荧光特性研究荧光特性时，主要在以下几方面进行分析：激发光谱，发射光谱、荧光强度、偏振荧光、荧光发光量子产率、荧光寿命等。其中荧光寿命（Fluorescence Lifetime）是指荧光分子在激发态上存在的平均时间（纳秒量级）。荧光寿命测试荧光寿命一般在几纳秒至几百纳秒之间，如今主要有两类测试方法：时域测量和频域测量时间稳定性实验测试曲线：1 时域测量由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1，接着测量荧光的发射几率随时间的变化。其中目前广泛应用的是时间相关单光子计数，即TCSPC(Time Correlated Single Photon Counting)时间相关单光子计数(TCSPC) 实现了从百ps-ns-us 的瞬态测试，此方法对数据的获取完全依赖快速探测器和高速电路。用统计的方法计算样品受激后发出的第一个( 也是*一的一个) 光子与激发光之间的时间差，也就是下图的START( 激发时刻) 与STOP( 发光时刻) 的时间差。由于对于Stop 信号的要求，所以TCSPC 一般需要高重复频率的光源作为激发源，其重复至少要在100KHz 以上，多数的光源都会达到MHz 量级；同时，在一般情况下还要对Stop 信号做数量上的控制，做到尽量满足在一个激发周期内，样品产生且只产生一个光子的有效荧光信号，避免光子对的出现。2 频域测量对连续激发光进行振幅调制后，分子发出的荧光强度也会受到振幅调制，两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差，因此可以测量该相位差计算荧光寿命。 左图为正弦调制激发光（绿色）频域显示，发射光信号（红色）相应的相位变化频域显示。右图为对应不同寿命的调制和相位的频域显示。TM- 调制寿命，TP- 相位寿命。[1]显微荧光寿命成像技术（FLIM）显微荧光寿命成像技术（Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy，FLIM）是一种在显微尺度下展现荧光寿命空间分布的技术，由于其不受样品浓度影响，具有其他荧光成像技术无法代替的优异性能，目前在生物医学工程、光电半导体材料等领域是一种重要的表征测量手段。FLIM 一般分为宽场FLIM 和激光扫描FLIM。宽场FLIM（Wide Field FLIM,WFM）该技术是用平行光照明并由物镜聚焦样品获得荧光信号，再由一宽场相机采集荧光成像。宽场FLIM 常用于快速获取大面积样品成像。时域或是频域寿命采集都可以应用在宽场成像FLIM 上。宽场FLIM 有更高帧率和低损伤的优势。2 激光扫描FLIM（Laser Scanning FLIM,LSM）激光扫描FLIM 是针对选定区域内的样品逐点获取其荧光衰减曲线，再经过拟合最终合成荧光寿命图像。相比宽场FLIM，其在空间分辨率、信噪比方面有更大的优势。扫描方式有两种：一种是固定样品，移动激光进行扫描，一种是固定激光，电动位移台带动样品移动进行扫描。显微荧光寿命成像系统RTS2-FLIM应用材料科学领域宽禁带半导体如GaN、SiC 等体系的少子寿命mapping 测量量子点如CdSe@ZnS 等用作荧光寿命成像显微镜探针钙钛矿电池/LED 薄膜的组分分析、缺陷检测铜铟镓硒CIGS，铜锌锡硫CZTS 薄膜太阳能电池的组分、缺陷检测镧系上转换纳米颗粒GaAs 或GaAsP 量子阱的载流子扩散研究生命科学领域细胞体自身荧光寿命分析自身荧光相对荧光标记的有效区分活细胞内水介质的PH 值测量局部氧气浓度测量具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分活细胞内钙浓度测量时间分辨共振能量转移（FRET）：纳米级尺度上的远差测量，环境敏感的FRET 探针定量测量代谢成像：NAD(P)H 和FAD 胞质体的荧光寿命成像显微荧光寿命成像系统RTS2-FLIM应用案例1 用荧光分子对海拉细胞进行染色用荧光分子转子Bodipy-C12 对海拉细胞（宫颈癌细胞的一种） 进行染色。(a) 显微荧光寿命成像图，寿命范围1ns（蓝色）到2.5ns（红色）；(b) 荧光寿命直方图，脂肪滴的短寿命约在1.6ns 附近，细胞中其他位置寿命较长，在1.8ns 附近。用荧光分子转子的时间分辨测量*大的好处在于荧光寿命具备足够清晰的标签特性，且与荧光团的浓度无关。[2]2 金属修饰荧光金属修饰荧光：(a) 荧光寿命是荧光团到金表面距离的函数；(b) 用绿色荧光蛋白（GFP）标记乳腺腺癌细胞的细胞膜的共聚焦xz 横截面，垂直比例尺：5m；(c) b 图的FLIM 图，金表面附近的GFP 荧光寿命缩短。[2]3 钙钛矿太阳能电池下图研究中，展示了一种动态热风（DHA）制备工艺来控制全无机PSC 的薄膜形态和稳定性，该工艺不含有常规的有害反溶剂，可以在大气环境中制备。同时，钙钛矿掺有钡（Ba2+） 碱金属离子（BaI2:CsPbI2Br）。这种DHA 方法有助于形成均匀的晶粒并控制结晶，从而形成稳定的全无机PSC。从而在环境条件下形成完整的黑色相。经过DHA处理的钙钛矿光伏器件，在0.09cm小面积下，效率为14.85%，在1x1cm的大面积下，具有13.78%的*高效率。DHA方法制备的器件在300h后仍然保持初始效率的92%。4 MQWs 多量子阱研究在(a) 蓝宝石和(b) GaN 上生长的MQWs 的共焦PL mapping 图像。具有较小尺寸的发光团的最高密度是观察到在GaN 上生长的MQWs。在(c) 蓝宝石和(d)GaN 上生长的MQWs 的共焦TRPL mapping 图。仅对于在GaN 上生长的MQWs，强的PL 强度区域与较长PL 衰减时间的区域很好地匹配。在(e) 蓝宝石和(f)GaN 上生长的MQWs 在A 点和B 点测量的局部PL 衰减曲线，均标记在图中。对于在GaN 上生长的MQWs，点A 和B 之间的PL 衰减时间差更高。显微荧光寿命成像系统FLIM参数配置北京卓立汉光仪器有限公司提供的显微荧光寿命成像系统是基于显微和时间相关单光子计数技术，配合高精度位移台得到微观样品表面各空间分布点的荧光衰减曲线，再经过用数据拟合，得到样品表面发光寿命表征的影像。是光电半导体材料、荧光标记常用荧光分子等类似荧光寿命大多分布在纳秒、几十、几百纳秒尺度的物质的选择。参数指标：系统性能指标光谱扫描范围200-900nm最小时间分辨率16ps荧光寿命测量范围500ps-1μs@ 皮秒脉冲激光器空间分辨率≤1μm@100X 物镜@405nm 皮秒脉冲激光器荧光寿命检测IRF≤2ns配置参数激发源及匹配光谱范围（光源参数基于50MHz 重复频率）375nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：30ps，平均功率1.5mW，荧光波段：400-850nm405nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：25ps，平均功率2.5mW，荧光波段：430-920nm450nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：50ps，平均功率1.9mW，荧光波段：485-950nm488nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：70ps，平均功率1.3mW，荧光波段：500-950nm510nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：75ps，平均功率1.1mW，荧光波段：535-950nm635nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：65ps，平均功率4.3mW，荧光波段：670-950nm660nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：60ps，平均功率1.9mW，荧光波段：690-950nm670nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：40ps，平均功率0.8mW，荧光波段：700-950nm科研级正置显微镜落射明暗场卤素灯照明，12V，100W5 孔物镜转盘，标配明场用物镜：10×，50×，100×监视CCD：高清彩色CMOS 摄像头，像元尺寸：3.6μm*3.6μm，有效像素：1280H*1024V，扫描方式：逐行，快门方式：电子快门电动位移台高精度电动XY 样品台，行程：75*50mm（120*80mm 可选），最小步进：50nm，重复定位精度：＜ 1μm光谱仪320mm 焦距影像校正单色仪，双入口、狭缝出口、CCD 出口，配置三块68×68mm 大面积光栅，波长准确度：±0.1nm，波长重复性：±0.01nm，扫描步距：0.0025nm，焦面尺寸：30mm(w)×14mm(h)，狭缝缝宽：0.01-3mm 连续电动可调探测器：制冷型紫外可见光电倍增管，光谱范围：185-900nm（标配，可扩展）光谱CCD（可扩展PLmapping）低噪音科学级光谱CCD（LDC-DD），芯片格式：2000x256，像元尺寸：15μm*15μm, 探测面：30mm*3.8mm，背照式深耗尽芯片，低暗电流，*低制冷温度-60℃ @25℃环境温度，风冷，最高量子效率值95%时间相关单光子计数器（TCSPC）时间分辨率：16/32/64/128/256/512/1024ps… … 33.55μs，死时间＜ 10ns，*高65535 个直方图时间窗口，瞬时饱和计数率：100Mcps，支持稳态光谱测试；OmniFluo-FM 荧光寿命成像专用软件控制功能：控制样品平移台移动，通过显微镜的明场光学像定位到合适区域，框选扫描区域进行扫描，逐点获得荧光衰减曲线，实时生成荧光图像等数据处理功能：自动对扫描获得的FLIM 数据，逐点进行多组分荧光寿命拟合（组分数小于等于4），对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示图像处理功能：直方图、色表、等高线、截线分析、3D 显示等操作电脑品牌操作电脑，Windows 10 操作系统软件界面控制测试界面测试软件的界面遵循“All In One”的简洁设计思路，用户可在下图所示的控制界面中完成采集数据的所有步骤：包括控制样品平移台移动，通过显微镜的明场光学像定位到合适区域，框选扫描区域进行扫描，逐点获得荧光衰减曲线，实时生成荧光图像等。数据处理界面功能丰富的荧光寿命数据处理软件，充分挖掘用户数据中的宝贵信息。可自动对扫描获得的FLIM 数据，逐点进行多组分荧光寿命拟合（组分数小于等于4），对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示。自主开发的一套时间相关单光子计数（TCSPC）荧光寿命的拟合算法，可对荧光衰减曲线中最多包含4 个时间组分的荧光过程进行拟合，获得每个组分的荧光寿命，光子数比例，计算评价函数和残差。TCSPC 荧光寿命通常并非简单的指数衰减过程，而是与光源及探测器相关的仪器响应函数（IRF）与荧光衰减过程相互卷积的结果，因此适当的拟合方法和参数选择对获得正确可靠的荧光寿命非常重要。该软件可导入实际测量的IRF 对衰减曲线进行卷积计算和拟合。但是大多数情况下， IRF 很难正确的从实验获得，针对这种情况，软件提供了两种无需实验获取IRF 的拟合方法：1.通过算法对数据上升沿进行拟合，获得时间响应函数IRF，然后对整条衰减曲线进行卷积计算和拟合得到荧光寿命。2.对于衰减时间远长于仪器响应时间的，可对衰减曲线下降沿进行直接的指数拟合。该软件经过大量测试，可以很好的满足各种场合的用户需求。MicroLED 微盘的荧光强度像（3D 显示）：

荧光和荧光寿命分子包含多个单能态S0、S1、S2…和三重态T1…，每个能态都包含多个精细的能级。正常情况下，大部分电子处在*低能态即基态S0 的*低能级上，当分子被光束照射，会吸收光子能量，电子被激发到更高的能态S1 或S2 上，在S2 能态上的电子只能存在很短暂的时间，便会通过内转换过程跃迁到S1 上，而S1 能态上的电子亦会在极短时间内跃迁到S1 的*低能级上，而这些电子会存在一段时间后通过震荡弛豫辐射跃迁到基态，这个过程会释放一个光子，即荧光。此外，亦会有电子跃迁至三重态T1 上，再由T1 跃迁至基态，我们称之为磷光。荧光特性研究荧光特性时，主要在以下几方面进行分析：激发光谱，发射光谱、荧光强度、偏振荧光、荧光发光量子产率、荧光寿命等。其中荧光寿命（Fluorescence Lifetime）是指荧光分子在激发态上存在的平均时间（纳秒量级）。荧光寿命测试荧光寿命一般在几纳秒至几百纳秒之间，如今主要有两类测试方法：时域测量和频域测量时间稳定性实验测试曲线：1 时域测量由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1，接着测量荧光的发射几率随时间的变化。其中目前广泛应用的是时间相关单光子计数，即TCSPC(Time Correlated Single Photon Counting)时间相关单光子计数(TCSPC) 实现了从百ps-ns-us 的瞬态测试，此方法对数据的获取完全依赖快速探测器和高速电路。用统计的方法计算样品受激后发出的*一个( 也是唯一的一个) 光子与激发光之间的时间差，也就是下图的START( 激发时刻) 与STOP( 发光时刻) 的时间差。由于对于Stop 信号的要求，所以TCSPC 一般需要高重复频率的光源作为激发源，其重复至少要在100KHz 以上，多数的光源都会达到MHz 量级；同时，在一般情况下还要对Stop 信号做数量上的控制，做到尽量满足在一个激发周期内，样品产生且只产生一个光子的有效荧光信号，避免光子对的出现。2 频域测量对连续激发光进行振幅调制后，分子发出的荧光强度也会受到振幅调制，两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差，因此可以测量该相位差计算荧光寿命。 左图为正弦调制激发光（绿色）频域显示，发射光信号（红色）相应的相位变化频域显示。右图为对应不同寿命的调制和相位的频域显示。TM- 调制寿命，TP- 相位寿命。[1]显微荧光寿命成像技术（FLIM）显微荧光寿命成像技术（Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy，FLIM）是一种在显微尺度下展现荧光寿命空间分布的技术，由于其不受样品浓度影响，具有其他荧光成像技术无法代替的优异性能，目前在生物医学工程、光电半导体材料等领域是一种重要的表征测量手段。FLIM 一般分为宽场FLIM 和激光扫描FLIM。宽场FLIM（Wide Field FLIM,WFM）该技术是用平行光照明并由物镜聚焦样品获得荧光信号，再由一宽场相机采集荧光成像。宽场FLIM 常用于快速获取大面积样品成像。时域或是频域寿命采集都可以应用在宽场成像FLIM 上。宽场FLIM 有更高帧率和低损伤的优势。2 激光扫描FLIM（Laser Scanning FLIM,LSM）激光扫描FLIM 是针对选定区域内的样品逐点获取其荧光衰减曲线，再经过拟合*终合成荧光寿命图像。相比宽场FLIM，其在空间分辨率、信噪比方面有更大的优势。扫描方式有两种：一种是固定样品，移动激光进行扫描，一种是固定激光，电动位移台带动样品移动进行扫描。FLIM 应用材料科学领域宽禁带半导体如GaN、SiC 等体系的少子寿命mapping 测量量子点如CdSe@ZnS 等用作荧光寿命成像显微镜探针钙钛矿电池/LED 薄膜的组分分析、缺陷检测铜铟镓硒CIGS，铜锌锡硫CZTS 薄膜太阳能电池的组分、缺陷检测镧系上转换纳米颗粒GaAs 或GaAsP 量子阱的载流子扩散研究生命科学领域细胞体自身荧光寿命分析自身荧光相对荧光标记的有效区分活细胞内水介质的PH 值测量局部氧气浓度测量具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分活细胞内钙浓度测量时间分辨共振能量转移（FRET）：纳米级尺度上的远差测量，环境敏感的FRET 探针定量测量代谢成像：NAD(P)H 和FAD 胞质体的荧光寿命成像OmniFluo-FLIM系列显微荧光寿命成像系统应用案例1 用荧光分子对海拉细胞进行染色用荧光分子转子Bodipy-C12 对海拉细胞（宫颈癌细胞的一种） 进行染色。(a) 显微荧光寿命成像图，寿命范围1ns（蓝色）到2.5ns（红色）；(b) 荧光寿命直方图，脂肪滴的短寿命约在1.6ns 附近，细胞中其他位置寿命较长，在1.8ns 附近。用荧光分子转子的时间分辨测量*大的好处在于荧光寿命具备足够清晰的标签特性，且与荧光团的浓度无关。[2]2 金属修饰荧光金属修饰荧光：(a) 荧光寿命是荧光团到金表面距离的函数；(b) 用绿色荧光蛋白（GFP）标记乳腺腺癌细胞的细胞膜的共聚焦xz 横截面，垂直比例尺：5 m；(c) b 图的FLIM 图，金表面附近的GFP 荧光寿命缩短。[2]3 钙钛矿太阳能电池下图研究中，展示了一种动态热风（DHA）制备工艺来控制全无机PSC 的薄膜形态和稳定性，该工艺不含有常规的有害反溶剂，可以在大气环境中制备。同时，钙钛矿掺有钡（Ba2+） 碱金属离子（BaI2:CsPbI2Br）。这种DHA 方法有助于形成均匀的晶粒并控制结晶，从而形成稳定的全无机PSC。从而在环境条件下形成完整的黑色相。经过DHA处理的钙钛矿光伏器件，在0.09cm小面积下，效率为14.85%，在1x1cm的大面积下，具有13.78%的*高效率。DHA方法制备的器件在300h后仍然保持初始效率的92%。4 MQWs 多量子阱研究在(a) 蓝宝石和(b) GaN 上生长的MQWs 的共焦PL mapping 图像。具有较小尺寸的发光团的*高密度是观察到在GaN 上生长的MQWs。在(c) 蓝宝石和(d)GaN 上生长的MQWs 的共焦TRPL mapping 图。仅对于在GaN 上生长的MQWs，强的PL 强度区域与较长PL 衰减时间的区域很好地匹配。在(e) 蓝宝石和(f)GaN 上生长的MQWs 在A 点和B 点测量的局部PL 衰减曲线，均标记在图中。对于在GaN 上生长的MQWs，点A 和B 之间的PL 衰减时间差更高。OmniFluo-FLIM系列显微荧光寿命成像系统参数配置北京卓立汉光仪器有限公司提供的显微荧光寿命成像系统是基于显微和时间相关单光子计数技术，配合高精度位移台得到微观样品表面各空间分布点的荧光衰减曲线，再经过用数据拟合，得到样品表面发光寿命表征的影像。是光电半导体材料、荧光标记常用荧光分子等类似荧光寿命大多分布在纳秒、几十、几百纳秒尺度的物质的不二选择。参数指标：系统性能指标光谱扫描范围200-900nm*小时间分辨率16ps荧光寿命测量范围500ps-1μs@ 皮秒脉冲激光器空间分辨率≤1μm@100X 物镜@405nm 皮秒脉冲激光器荧光寿命检测IRF≤2ns配置参数激发源及匹配光谱范围（光源参数基于50MHz 重复频率）375nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：30ps，平均功率1.5mW，荧光波段：400-850nm405nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：25ps，平均功率2.5mW，荧光波段：430-920nm450nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：50ps，平均功率1.9mW，荧光波段：485-950nm488nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：70ps，平均功率1.3mW，荧光波段：500-950nm510nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：75ps，平均功率1.1mW，荧光波段：535-950nm635nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：65ps，平均功率4.3mW，荧光波段：670-950nm660nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：60ps，平均功率1.9mW，荧光波段：690-950nm670nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：40ps，平均功率0.8mW，荧光波段：700-950nm科研级正置显微镜落射明暗场卤素灯照明，12V，100W5 孔物镜转盘，标配明场用物镜：10×，50×，100×监视CCD：高清彩色CMOS 摄像头，像元尺寸：3.6μm*3.6μm，有效像素：1280H*1024V，扫描方式：逐行，快门方式：电子快门电动位移台高精度电动XY 样品台，行程：75*50mm（120*80mm 可选），*小步进：50nm，重复定位精度：＜ 1μm光谱仪320mm 焦距影像校正单色仪，双入口、狭缝出口、CCD 出口，配置三块68×68mm 大面积光栅，波长准确度：±0.1nm，波长重复性：±0.01nm，扫描步距：0.0025nm，焦面尺寸：30mm(w)×14mm(h)，狭缝缝宽：0.01-3mm 连续电动可调探测器：制冷型紫外可见光电倍增管，光谱范围：185-900nm（标配，可扩展）光谱CCD（可扩展PLmapping）低噪音科学级光谱CCD（LDC-DD），芯片格式：2000x256，像元尺寸：15μm*15μm, 探测面：30mm*3.8mm，背照式深耗尽芯片，低暗电流，*低制冷温度-60℃ @25℃环境温度，风冷，*高量子效率值95%时间相关单光子计数器（TCSPC）时间分辨率：16/32/64/128/256/512/1024ps……33.55μs，死时间＜ 10ns，*高65535 个直方图时间窗口，瞬时饱和计数率：100Mcps，支持稳态光谱测试；OmniFluo-FM 荧光寿命成像专用软件控制功能：控制样品平移台移动，通过显微镜的明场光学像定位到合适区域，框选扫描区域进行扫描，逐点获得荧光衰减曲线，实时生成荧光图像等数据处理功能：自动对扫描获得的FLIM 数据，逐点进行多组分荧光寿命拟合（组分数小于等于4），对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示图像处理功能：直方图、色表、等高线、截线分析、3D 显示等操作电脑品牌操作电脑，Windows 10 操作系统 FLIM 软件界面控制测试界面测试软件的界面遵循“All In One”的简洁设计思路，用户可在下图所示的控制界面中完成采集数据的所有步骤：包括控制样品平移台移动，通过显微镜的明场光学像定位到合适区域，框选扫描区域进行扫描，逐点获得荧光衰减曲线，实时生成荧光图像等。数据处理界面功能丰富的荧光寿命数据处理软件，充分挖掘用户数据中的宝贵信息。可自动对扫描获得的FLIM 数据，逐点进行多组分荧光寿命拟合（组分数小于等于4），对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示。自主开发的一套时间相关单光子计数（TCSPC）荧光寿命的拟合算法，可对荧光衰减曲线中*多包含4 个时间组分的荧光过程进行拟合，获得每个组分的荧光寿命，光子数比例，计算评价函数和残差。TCSPC 荧光寿命通常并非简单的指数衰减过程，而是与光源及探测器相关的仪器响应函数（IRF）与荧光衰减过程相互卷积的结果，因此适当的拟合方法和参数选择对获得正确可靠的荧光寿命非常重要。该软件可导入实际测量的IRF 对衰减曲线进行卷积计算和拟合。但是大多数情况下， IRF 很难正确的从实验获得，针对这种情况，软件提供了两种无需实验获取IRF 的拟合方法：NO.1 通过算法对数据上升沿进行拟合，获得时间响应函数IRF，然后对整条衰减曲线进行卷积计算和拟合得到荧光寿命。NO.2对于衰减时间远长于仪器响应时间的，可对衰减曲线下降沿进行直接的指数拟合。该软件经过大量测试，可以很好的满足各种场合的用户需求。MicroLED 微盘的荧光强度像（3D 显示）：测试案例

多光子显微镜采用在生物组织中穿透性强的近红外/红外激光去激发样品中的荧光发光基团，进行荧光成像。该技术光毒性低，成像深度高，因此适用于厚的活体组织（如脑片、完整器官）甚至活体生物标本的成像及功能研究。Bruker的双光子产品主要有专注于高品质活体成像的Investigators系列以及专注于进行活体功能性研究的Ultima系列，2018年Bruker推出重磅新品Ultima 2Pplus。该套设备在仪器性能、使用便利性以及仪器应用拓展性方面都展现出无与伦比的优势。（1）三种成像扫描模式：常规的检流振镜扫描（Galvo Scanning），龙卷风扫描（Spiral Scanning）和快速振镜扫描（Resonant Scanning）；（2）成像视野方面（FOV，Field of View），采用大尺寸的光学镜组和6mm的扫描振镜，成像视野是常规产品的3~4倍；（3） 有多种旋转物镜可供选择(单轴手动，多轴手动旋转、多轴电动)，进行离轴成像，可以从不同角度对实验样品进行成像；可升级移动显微镜平台，结合旋转物镜，无需样品移动，使其保持在自然生理状态下，即可找到所需的成像视野或进行多视野图像采集。（5）镜下空间极大。有利于多种应用拓展。（6）有full-field LED illumination、1p/2p uncaging module、SLM等多种光刺激模块可选，能够进行刺激/成像序列实验、刺激/成像同步实验、多点同时刺激/成像同步实验。扫描光路在400nm-1700nm纳米范围内优化，在该范围内任意波长的光刺激实验均可灵活选择。（7）支持三光子成像。

紧凑型多光子显微成像系统2PM 基于近红外飞秒激光技术，具有亚细胞空间分辨率的光学层切成像测量系统，可应用于:? 细胞和组织的高分辨率成像? 组织工程学? 在线药品检测? 动物研究? 干细胞研究? 检测荧光发光蛋白? 神经生物学 关于紧凑型多光子显微成像系统2PM的详细信息介绍，请访问下面网址：http://www.dpiv.cn/data/upload/publications/Jenlab/2PM_Microscope_JenLab.pdf

微型化双光子显微镜成像系统自主研制的快速微型化双光子显微成像系统FIRM-TPM，实现了自由运动小鼠单个树突棘水平神经元功能活动的高速高分辨实时成像。这款头戴式双光子显微镜可实时记录自由行为动物的大脑神经元和树突棘活动，支持钙成像，并可在同一视野长时程反复成像。系统能够配置移动的轴向扫描模块，实现三维成像和多平面快速切换实时成像，用于脑神经回路观察；还可配置光遗传模块，对神经元和大脑神经回路活动进行精确控制。目前该产品已在小动物活体光学成像，尤其是神经科学领域已经得到了广泛应用，并在皮肤成像，疾病诊疗，干细胞研究等领域开展了项目研究。FIRM-TPM微型化双光子显微镜大视场型1.FIRM-TPM微型化双光子显微镜大视场型探头重量约为2.8g, 可佩戴在动物头部2.成像视野400 μm×400 μm, 通过颅窗可记录数十个神经元、上千个神经突触的动态信号3.可传播920nm飞秒脉冲激光，对神经生物学常用探针GCaMp进行成像4.探头可拔插设计，简化实验并避免动物长时间运动而造成的光纤和电缆的缠绕5.可配置轴向扫描模块，进行三维成像和多平面切换成像，用于神经元网络结构研究6.可配置红色通道和绿色通道的荧光采集模块，实现双通道成像探头重量~2.8 g探头体积：10 mm×16 mm×21 mm分辨率 1.3 μm成像速度9Hz@512×512，18 Hz@256×256成像视野400 μm×400 μm工作距离~ 1 mm三维变焦模块变焦范围：0~100 μm；平面间切换速度： 4Hz飞秒脉冲激光器激发波长：920 nm/ 1030 nm；平均功率： 400 mW；脉冲宽度： 200 fs荧光采集模块接收范围：300~720 nm； 绿色通道：520/50 nm；红色通道：605/50 nm成像控制模块zui大采样率：≥ 120 MS/s；模拟输入分辨率：≥ 16- bit；模拟输入带宽：≥ 110 MHz成像处理模块系统: win 10操作系统 CPU内存: 32G 硬盘: 256固态硬盘和2T机械硬盘 显卡: 2GB DDR5专业显卡 成像分析系统: GINKGO-MTPM系统尺寸成像系统：955 mm×1380 mm×825 mm；行为学箱：1380 mm×1380 mm×2179 mm系统环境温度：24 ± 2 ℃；湿度： 60% FIRM-TPM微型化双光子显微镜高分辨型1. FIRM-TPM微型化双光子显微镜大视场型探头重量约为2.2g，可佩戴在小动物在头部2.分辨率850 nm, 能够清晰地看到小鼠树突棘结构，实现亚微米级别分辨率成像3.无失真传导920飞秒脉冲激光，对神经生物学常用的探针GCaMp、GFP进行成像4.探头整体可拔插，简化实验操作并避免动物长时间运动而造成的光纤和电缆的缠绕5.可配置轴向扫描模块进行三维成像和多平面切换成像，用于神经元网络结构的研究6.可配置红色通道和绿色通道的荧光采集模块，实现双通道成像成像视野180 μm×180 μm探头重量2.2 g成像速度9Hz @ 512×512, 18Hz @ 256×256分辨率 850 nm探头体积9.5 mm×15.5 mm×17 mm工作距离390 μm三维变焦模块变焦范围: 0~30 μm 平面间切换速度: 4Hz飞秒脉冲激光器激发波长: 920 nm/ 1030 nm 平均功率: 400 mW 脉冲宽度: 200 fs荧光采集模块接收范围: 300~720 nm 绿色通道: 520/50 nm 红色通道: 605/50 nm成像控制模块蕞大采样率: ≥ 120 MS/s 模拟输入分辨率: ≥ 16-bit 模拟输入带宽: ≥ 110MHz成像处理模块系统: win 10操作系统 CPU内存: 32G 硬盘: 256固态硬盘和2T机械硬盘 显卡: 2GB DDR5专业显卡 成像分析系统: GINKGO-MTPM系统环境温度：24 ± 2 ℃；湿度： 60%系统尺寸成像系统：955 mm×1380 mm×825 mm；行为学箱：1380 mm×1380 mm×2179 mm更多详情请联系昊量光电/欢迎直接联系昊量光电关于昊量光电：上海昊量光电设备有限公司是光电产品专业代理商，产品包括各类激光器、光电调制器、光学测量设备、光学元件等，涉及应用涵盖了材料加工、光通讯、生物医疗、科学研究、国防、量子光学、生物显微、物联传感、激光制造等；可为客户提供完整的设备安装，培训，硬件开发，软件开发，系统集成等服务。您可以通过我们昊量光电的官方网站www.auniontech.com了解更多的产品信息，或直接来电咨询4006-888-532。

紧凑制冷型双光子显微成像系统2PM-Cryo功能介绍提供激光器系统，激光器件，光学精密仪器设备，流动可视化测量和分析设备的最新进展和前沿应用信息 紧凑制冷型双光子显微成像系统2PM-Cryo基于近红外飞秒激光技术，高于亚微米分辨率，在冻结和加热条件下的成像测量-196°C - +600°C (77K – 873K)制冷速率: 0.01K/分钟-150K/分钟? 冻结样本的无标记自发荧光测量? 荧光寿命成像显微镜(FLIM)? 倍频(SHG)成像? 显微光谱学应用:超低温保存,热应力,气候变化,低温实验方法优化, 生物冷冻库的高技术工具,人类，动物,植物组织/细胞/矿物植物（阿拉伯芥）叶片的双光子制冷荧光寿命成像显微（FLIM）测量结果。内生的叶绿体中叶绿素荧光。高空间分辨率和时间分辨率（300 nm / 200 PS）。重要技术参数? 紧凑型即开即用的掺钛蓝宝石飞秒激光器激光输出脉冲宽度: 100 fs - 200 fs重复频率: 80 MHz激光输出功率: 1.3 W激光输出波长范围: 710-920 nm?全幅扫描,局部自定义（ROI）区域扫描,线扫描,单点照明(单点波长扫描)?典型测量视场（FOV）: 250 μm x 250 μm (水平) 深度: 2 mm?典型空间分辨率: 0.5 μm (水平) 2 μm (垂直)?典型时间分辨率: 200 ps (时间相关单光子计数（TCSPC）方式, 最大可达256个时间通道)?聚焦光学元件: 40x NA 1.3 (标准配置), 可选其它参数物镜?控制和图像处理软件(JenLab Control, JenLab Image)?温度范围 -196°C (液氮) - +600°C (77K - 873K)?制冷速率: 0.01K/分钟 - 150K/分钟?电源需求: 230 VAC (50 Hz) 或 115 VAC (60 Hz)?符合CE认证标准?体积尺寸: 700x520x800mm3(不含激光器)备注说明:这些参数指标可能会有变化，恕不事先通知.参考文献:Breunig, Tümer, K?nig. Multiphoton imaging of freezing and heating effects in plant leaves.J Biophotonics (2012), 发行中

MPX系列多光子多模态成像平台具有高度模块化，提供三种标准型号，可通过选项和附件进行定制。用户可灵活设计符合其特 &bull 全 量 影 像 &bull 光遗传学 &bull 深 层 组 织 成 像 &bull &bull 生物打印 微球和类器官 定需求和预算的多光子显微镜。扫描头可轻松配置在不同位置，模块化设计允许在同一平台上进行未来升级和添加额外功能。

KARTHALA AOD多光子随机扫描显微镜法国KARTHALA AOD多光子随机扫描显微镜。光遗传学（optogenetics）是一项整合了光学、软件控制、基因操作技术、电生理等多学科交叉的技术。自2005年，斯坦福大学Karl Deisseroth实验室通过在神经细胞中表达光敏蛋白，响应不同波长的光刺激实现对神经功能的调控，宣布人类正式拥有了操控大脑的工具。长久以来，我们对复杂的神经网络连接的理解仅停留在相关性上，有了光遗传学，我们终于有能力，微创地探究特定的神经环路和大脑功能之间的关系。为您介绍目前市场上专业的商业化多光子声光偏转器随机扫描成像，AOD多光子随机扫描显微镜AOD多光子随机扫描显微镜： 可用ASAP3进行神经动作电位成像全场成像非机械超快速扫描 10KHz/line在整个视场中的停留时间恒定且可调光遗传学双光子扫描：ROI成像可自由选择ROIsROIs之间的飞行速度为10us光遗传学扫描检测系统：任意访问点可自由选择的POIs高达100KHz/POI低于10nm的指向和可重复性光遗传学双光子扫描：随机访问区域超快速局部体积激发（ULOVE)20KHz/Vols全息体积扩展减少活体运动伪影提高光遗传学刺激效率目前世界范围内大多神经类仪器都是检测钙离子为主，而我们不仅仅是钙离子成像，还能做到神经电压指示器成像。这在市场上的其他厂家是无法做到的。AOD多光子随机扫描显微镜系统真正意义上的对神经动作电位进行扫描检测，有了光遗传学双光子扫描，终于有能力探究特定的神经环路和大脑功能之间的关联。法国KARTHALA AOD多光子随机扫描显微镜结合了多光子声光偏转器扫描，声光随机扫描使这一切都变成可能。

Ultima多光子显微镜是一套完美的系统。 它的一些特点,包括模块化设计、极其准确的光激活和光遗传学操作能 力、PrairieView软件等,都成为业界竞相模仿的典范。Ultima系统配置灵 活,其高分辨率成像、深层组织成像、高速成像能力、同时进行成像和 光操作、可整合和同步各种刺激和电生理学记录设备等,都决定了Ultima 是世界上突出的活体多光子显微镜系统。为科学家在更高的空间和时间分辨率上观察生 物学现象提供了可能:基于单分子定位技术 可进行超高分辨率的活细胞动态观察 可同时进行四荧光通道超高分辨率成像(需安装750 nm 激光器)三维成像,成像深度达15μm 专为生物学家设计的软件和操作流程 活细胞超高分辨率成像专用的成像步骤和工作流程 通用的数据格式,无论采用布鲁克还是第三方的算法均 可进行分析完善的应用支持“在细胞生物学走向系统研究和定量分析的今天,单分子定位 成像系统缓慢的数据采集速度、较小的成像视野,大大阻碍了 单分子定位技术在细胞生物学系统研究中的应用。

多个不同荧光标记的组合越来越多地用于研究细胞和分子之间的动态相互作用和空间关系。 目的是理解各种各样复杂的生物事件，例如细胞连通性、细胞表型检测、蛋白质 相互作用或者蛋白共表达和共定位。 要将这类研究扩大到整个器官或组织，需要合适的大体积多色显微镜学方法。 现在，DIVE 和 STELLARIS 相结合，为您提供灵活的多色多光子成像的强大性能。 而且，您还可以通过额外的无标记成像功能扩展实验的潜力。STELLARIS 8 DIVE 可无缝集成到共聚焦软件界面中，提供快速且出色的导航功能 ，可轻松研究复杂样本中的动态过程。STELLARIS 8 DIVE——为您的研究提供各种可能性。活小鼠大脑皮层的神经元（GFP，绿色）和小胶质细胞（YFP，黄色）带有遗传标记，星形胶质细胞通过磺酰罗丹明（蓝色）标记，在尾静脉中注射 Alexa680-Dextran 将血管染色（红色）。 整体约 250 x 250 x 250 µ m。 样本由德国神经退行性疾病研究中心光学显微镜设备部门（德国波恩）提供。强大的在体分析能力，较之前提供更多细节STELLARIS 8 DIVE 可为您提供深度超过 1 毫米的灵活多色成像。 使用 4Tune 光谱可调非退扫描检测器，最多可同时定义四个检测波段，或者在发射光谱中的任何区域先后成像时获得无限数量的荧光团。 您可以根据所需的荧光团组合进行灵活调节。 使用 STELLARIS 8 DIVE ，您可以通过超过 10 亿个荧光团组合进行多光子实验，您能够更详细地研究复杂的过程，例如神经元连通性、器官结构、动态相互作用或者细胞和蛋白质的空间关系。利用 STELLARIS 8 DIVE，您可以通过四种或更多颜色研究活体样本中的细胞转移、区分相关蛋白、观察清醒小鼠的海马体活动或者固定的厚肠切片的结构！上图： 4Tune 非退扫描检测系统： 1) 可变二向色镜 (VD)。 2) 可变带通 (VB)。 3) Power HyD NDD 或 PMT。 下图： 直观的 4Tune 用户界面，可轻松设置 380 至 800 纳米的所有颜色的检测窗口。轻松使用 DIVE——4Tune 检测器 4Tune 非退扫描检测系统 可以配备 2 至 4 个检测器，并且可自由配置混合检测器 (Power HyD NDD)、光电倍增管 (PMT) 或将两者结合使用。 发射光通过可变二向色镜和带通滤波器的组合方法分离。 在整个可见光光谱（380 - 800 纳米）范围内自由调节您的检测范围！使用 4Tune 用户界面，可以通过简单的拖放操作来优化多个转基因标志物的发射光设置。 用户界面设计清晰直观，操作非常简单，几乎无需培训。使用 STELLARIS 8 DIVE，您能够为任何现有的和新开发的转基因标志物做好准备，而且可以适应未来的新发展！小鼠大脑皮层，Thy1-eYFP。 使用“深度优先”设置将穿透深度增加 20%。 IRAPO 25x1.0 W motCorr. 样本由德国神经退行性疾病研究中心光学显微镜设备部门（德国波恩）Kevin Keppler 提供。深入探索新维度使用 STELLARIS 8 DIVE，您能够灵活调节实现更深层更细微观察。 使用新型可变光路扩束镜 (VBE)，您可针对任何物镜对所有激发光束进行独立优化调节。VBE 能够根据您的研究问题优化共定位，并实现分辨率和深度之间的良好平衡。可调式可变光路扩束镜 (VBE)使用可变光路扩束镜优化深度和分辨率徕卡可变光路扩束镜 (VBE) 将可调光束直径与可调发散度相结合。 为您提供可调深度、分辨率和全色校正。可调光束直径可实现分辨率与深度之间的平衡优化STELLARIS 8 DIVE 能够根据您的样本要求进行调节。 使用可变扩束镜，您可以选择： 优化分辨率——光束充满物镜后孔径，以及优化穿透深度——光束直径稍稍小于物镜后孔径。 后孔径未充满会使焦点体积增大、光程缩短，从而增大有效激发。可调光束发散可实现全色校正我们的 IR APO 物镜在红外波段上不会出现色差。 配备 STELLARIS 8 DIVE，您就可以使用适合红外线以及多条红外激光线的物镜： 可变光路扩束镜可用于校正色差，完成更实用的多色实验。五彩斑斓的小鼠小肠：胶原蛋白 1 显示为灰色（无标记 SHG），谱系追踪干细胞显示为青色、绿色、黄色和红色。干细胞在生物体内癌症的传播中发挥着重要作用。样品由荷兰癌症研究所的 Jacco van Rheenen 提供。通过无标记成像功能扩展体内深度实验的潜力胶原蛋白和弹性蛋白等分子在癌症等疾病中起到相关作用。 我们的 4 tune 检测器可使用二次和三次谐波产生信号，无需染色即可研究这些重要结构。DIVE 与 STELLARIS 相结合，还可使用荧光固有的寿命信息。 借助这种能力，您可以通过 NADH 或 FAD 的寿命成像进行实验，例如进行样本代谢绘图。一旦显微镜学家找到胶原蛋白结构，她就知道她感兴趣的组织（这里是肠道干细胞）在附近了。五彩斑斓的小鼠小肠：来自 SHG，灰色表示胶原蛋白 1，青色、绿色、黄色和红色谱系示踪干细胞。样品由荷兰癌症研究所的 Jacco van Rheenen 提供。轻松在组织中导航，无需额外染色在组织中导航通常需要使用导向标志来了解感兴趣区域的位置。 胶原蛋白的支架特性有助于在组织中导航并找到感兴趣区域，且无需复染。大多数生物组织含有胶原蛋白，它是结缔组织的主要成分。 例如，肠被一层胶原蛋白包裹。 通过精确采集 &half 激发波长的发射信号，可以在多光子显微镜下轻松观察胶原蛋白。 通过 4Tune 灵活的检测窗口，可使用任何波长采集这类信号，无需额外的标记或工作。被培养的 HeLa 细胞用葡萄糖处理前后的 NADH 自体荧光。 左：使用 TauContrast 的定性结果。 右：使用 FALCON 中的相量图进行的定量分析。将多光子成像和荧光寿命信息相结合，研究代谢变化代谢变化可能是组织健康的重要标记。STELLARIS 8 DIVE 可提供 TauSense 的所有优势，后者是一套基于荧光寿命的成像工具。 当细胞的代谢状态发生变化时，可通过 NADH 等分子的荧光寿命变化来显现出来。 NADH 在糖的新陈代谢中起到主要作用，其荧光寿命取决于葡萄糖浓度。 在引起葡萄糖分解的生物化学反应中会发生构象变化，这种变化会改变 NADH 荧光寿命。STELLARIS 8 DIVE 可与 FAst Lifetime COntrast（FALCON）结合使用，进行全定量荧光寿命分析。使用 RapidClear 透明化处理的肾脏切片并使用多光子激发成像。第一个图像是强度图像，第二个是 TauContrast（850 nm 激发），第三个来自四个光谱通道，其中红色表示血管（AF488，920 nm 激发）、灰色表示胶原蛋白 (SHG)、绿色表示神经细胞（SytoxOrange，1040 nm 激发）和蓝色表示色核（AF633，1100 nm 激发）。由 SunJin 实验室提供。为多光子实验增加额外维度自发荧光是组织中内源性荧光团（例如 NADH 或 FAD 等小分子或组织结构）发射的自然荧光。 它在样本成像时经常会导致问题。 但是，如果您能发挥它的优势呢？现在，将 DIVE 和 TauSense 相结合，可以通过寿命信息进行分离，从自发荧光信号中获得有价值的信息。 这一功能为您提供了一个额外的渠道，从而能够从宝贵的样本中获得更多信息。直径 3.5 mm 的肠道切片，用 RapidClear 透明化并用 Navigator 成像：黑白：SHG – 胶原蛋白；蓝色：Sytox Orange – 细胞核；绿色：Alexa 633 – 神经细胞；红色：Alexa 488 – 血管。由 SunJin 实验室提供。STELLARIS 的独特软件功能提高工作效率多光子系统通常使用严格，需要根据每个实验和用户进行调整。 此外还有使用活体动物或新移植组织工作的压力，您很快就会了解进行多光子实验时功能灵活性带来的优势。 STELLARIS 软件中无缝集成了多光子功能，STELLARIS 8 DIVE 可为您提供涵盖从实验设置到最终结果的轻松、无忧的工作流程。 使用 ImageCompass 顺利设置实验 使用 LAS X Navigator 在样本上找到感兴趣区域的直观方法 通过动态信号增强提高速度和分辨率ImageCompass 可以完全控制 STELLARIS 8 DIVE 的硬件，并允许轻松定义实验设置。使用 ImageCompass 轻松快速设置多色多光子成像实验STELLARIS 8 DIVE 多光子硬件完全集成到 STELLARIS 的 ImageCompass 界面中，您可以轻松定义实验设置，以便快速启动。系统可利用范围广泛的荧光团数据库自动定义 MP 激发和发射。 您也可以点击几下鼠标进行手动定义。 按序设置以及快速预览和 3D 查看器——多色多光子成像从未如此简单。使用 LAS X Navigator 和 TauContrast 成像的肾脏切片（SunJin Labs，用 RapidClear 透明化）。整个切片尺寸为 10 x 7 mm，厚度为 500 µ m。蓝色的较短到达时间代表胶原蛋白（SHG 信号），而绿色的较长值代表用 Alexa 633 染色的神经细胞。即时观察重要细节，同时始终进行样本概览LAS X Navigator 是功能强大的导航工具，可让您从逐个图像的搜索方式快速转变为查看整个样本概况的模式。 DIVE 和 STELLARIS 相结合，使您的多光子实验效率更高。 获益于在大型复杂样本中自由导航的功能，通过快速概览、多位置成像和区块扫描获得深度多色成像。轻松获得 1 厘米长、0.5 毫米厚的肾脏切片的拼图，并全面了解肾神经细胞和胶原蛋白系统（此处与 TauContrast 结合使用）。

宽带飞秒光纤激光器SCH——多色双光子显微专用昊量光电新推出宽带飞秒光纤激光器SCH，是一种用于多色双光子显微镜的新型光纤激光器。基于独有的技术，宽带飞秒光纤激光器SCH能够同时激发蕞大种类的荧光探针，并提供优异的图像亮度，一种性价比高，免维护的飞秒激光光源。宽带飞秒光纤激光器SCH提供了非常宽的光谱带宽，在近红外光谱中扩展到900-1200nm光谱。 这与大多数绿色和红移荧光标记的双光子激发光谱重叠，包括eGFP、mRFP和dred。 这大大超过了传统飞秒激光器(包括宽调谐激光器和单线飞秒光纤激光器)可以同时激发的荧光标记的范围。宽带飞秒光纤激光器SCH提供了一种高度灵活的解决方案，增强了可以在样品上同时成像的特性，这对体内和体外显微镜特别重要。利用宽带飞秒光纤激光器SCH激光激发的花粉自荧光成像显示花粉粒在不同光谱通道同时激发，图像质量良好。不仅光谱更宽，而且宽带飞秒光纤激光器SCH还提供更短的脉冲。 结合一个专用的色散预补偿器，实现到达显微镜样品平面的脉宽达15-20fs量级。 这实现了一个非凡的峰值功率和样品平面上无与伦比的光子通量，达到了传统100-200fs飞秒激光的光子通量的7倍以上。更大的光子通量与卓越的宽带飞秒光纤激光器SCH峰值功率相关，使得每个区域和时间内到达样品的光子数量增加。 与传统的固定波长或宽调谐激光器相比，这将双光子激发效率提高了49倍。当使用荧光标签DsRED，能实现超过50%的效率。 宽带飞秒光纤激光器SCH的红移近红外波长与更高的激发效率相结合，可以获得更好的图像亮度和更深的穿透性。 宽带飞秒光纤激光器SCH激发一个200微米深的斑马鱼样本图像如下。 宽带飞秒光纤激光器SCH的宽谱带不仅可以激发大范围的探针，而且允许900-1200 nm范围内单次扫描进行多色激发，使不同探针的同时激发成为可能。 这消除了与宽调谐激光器相关的显微镜对准问题。 小鼠肠道和铃兰的图像说明了当用宽带飞秒光纤激光器SCH激光的宽带宽照射这些样品时，可以实现的卓越的图像质量。宽带飞秒光纤激光器SCH在900-1200nm光谱范围内提供200nm的带宽，脉冲为15fs，重复频率为75MHz，增强了双光子激发，并能够单独或同时激发丰富的荧光探针。更多详情请联系昊量光电/欢迎直接联系昊量光电关于昊量光电：上海昊量光电设备有限公司是国内知名光电产品专业代理商，代理品牌均处于相关领域的发展前沿；产品包括各类激光器、光电调制器、光学测量设备、精密光学元件等，涉及应用领域涵盖了材料加工、光通讯、生物医疗、科学研究、国防及更细分的前沿市场如量子光学、生物显微、物联传感、精密加工、先进激光制造等；可为客户提供完整的设备安装，培训，硬件开发，软件开发，系统集成等优质服务。您可以通过我们昊量光电的官方网站了解更多的产品信息，或直接来电咨询。

提供化学指纹信息的在线多光子层析成像系统 MPTflexTM CARS功能介绍提供激光器系统，激光器件，光学精密仪器设备，流动可视化测量和分析设备的最新进展和前沿应用信息 MPTflex CARS提供化学指纹信息的在线多光子层析成像系统亚细胞空间分辨率光学活体检测，提供化学成分信息，基于近红外激光和非线性激光光谱学技术研发。可应用于:化妆品研究皮肤老化评价黑色素瘤/皮肤癌诊断在线药品检测皮肤病诊断组织工程学动物学研究干细跑研究活体细胞成像手术导引太空医学 神经生物学

灵巧型非介入式多光子光活检层析成像系统MPTflex功能介绍提供激光器系统，激光器件，光学精密仪器设备，流动可视化测量和分析设备的最新进展和前沿应用信息 MPTflex 多光子激光层析成像灵巧型非介入式在线多光子光活检层析成像系统MPTflex - C临床应用在线光学活体检测。具有亚细胞光学分辨率。采用近红外飞秒激光技术。可应用于:黑色素瘤检测皮肤病诊断组织工程学化妆品研究，皮肤老化在线药品检测动物学教学和研究干细跑研究探测荧光发光蛋白质人皮肤的临床多光子（双光子）成像检测

Deep In Vivo Explorer多光子显微镜STELLARIS 8 DIVESTELLARIS 8 DIVE（Deep In Vivo Explorer）是一款检测光谱可调的的多光子显微镜。STELLARIS 8 DIVE让您可自由调节检测光谱： STELLARIS 8 DIVE配备可调光谱非退扫描探测系统4Tune，为您提供无限的灵活性，并使您能够开展新的多色体内深度成像实验。STELLARIS 8 DIVE优化成像的穿透深度和对比度： 新型可变扩束镜可进行调节，将穿透深度增加1毫米以上，并同步提高分辨率。 使多色体内深度成像达到更高对比度和深度。 STELLARIS 8 DIVE为您带来理想实验结果！使用4Tune畅享光谱自由转基因和合成标志物的数量在不断地快速发展。 使用STELLARIS 8 DIVE，您只需点击几下鼠标，就能紧随标志物的发展，适应现有和新的荧光标志物！光谱自由这一特点源于突破性的4Tune非退扫描探测技术，该技术正在申请专利。 4Tune探测技术能够用于全发射光谱，并能分离严重重叠的光谱。STELLARIS 8 DIVE能够按照标志物的发射光谱进行与之相匹配的调节——您可以捕获两倍的荧光信号，增加穿透深度和成像速度，并降低体内成像的光毒性。————————————————————————————————————————————————“传统的二向色镜一直无法优化区分所有荧光团，但是现在利用光谱探测器可以轻松地实现这一点，因为我们可以真正做到为每个荧光团优化您要探测的波长。荷兰癌症研究所（荷兰阿姆斯特丹） Jacco van Rheenen 教授/博士。彩色显示的小鼠小肠，使用荧光标记并通过多色示踪剂追踪谱系。谱系示踪干细胞以青色(CFP)、绿色(GFP)、黄色(YFP)和红色(RFP)显示。 图像大小约为700x700x150立方微米。 使用STELLARIS 8 DIVE进行双光子激发成像。 样本由荷兰癌症研究所（荷兰阿姆斯特丹）J. van Rheenen提供。轻松使用DIVE——4Tune探测器 4Tune 非退扫描探测系统 可以配备2至4个探测器，并且可自由配置混合探测器 (Power HyD NDD)、光电倍增管 (PMT) 或将两者结合使用。 发射光通过可变二向色镜和带通滤波器的组合方法分离。 在整个可见光光谱（380 - 800纳米）范围内自由调节您的探测范围！使用4Tune用户界面，您可以通过简单的拖放操作来优化多个转基因标志物的发射光设置。 用户界面设计清晰直观，操作非常简单，几乎无需培训。使用STELLARIS 8 DIVE，您能够为任何现有的和新开发的转基因标志物做好准备，而且可以适应未来的新发展！上图： 4Tune非退扫描探测系统： 1) 可变二向色镜 (VD)。 2) 可变带通(VB)。 3) Power HyD NDD 或 PMT。 下图： 直观的4Tune用户界面，可轻松设置380至800纳米的所有颜色的探测窗口。深入探索新维度使用 STELLARIS 8 DIVE，您能够调节观察到样品深处和微小的细节。 使用新型可变扩束镜(VBE)，您可使用任何物镜对所有激发光束进行优化调节。VBE能够根据您的研究问题优化共定位，并达到分辨率和深度之间的平衡。小鼠大脑皮层，Thy1-eYFP。 使用“深度优先”设置将穿透深度增加20%。 IRAPO 25x1.0 W motCorr物镜。 样本由德国神经退行性疾病研究中心光学显微镜设备部门（德国波恩）Kevin Keppler提供。使用可变扩束镜优化深度和分辨率徕卡可变扩束镜(VBE) 将可调光束直径与可调发散相结合。 它能够兼顾成像深度、分辨率和全色校正。可调光束直径可实现分辨率与深度之间的平衡优化STELLARIS 8 DIVE能够根据您的样本要求进行调节。 使用可变扩束镜，您可以选择： 分辨率优先——光束充满物镜后孔径，以及穿透深度优先——光束直径稍稍小于物镜后孔径。 后孔径未充满会使焦点体积增大、光程缩短，从而增加有效激发。可调光束发散可实现全色校正我们的IR APO物镜在红外波段上不会出现色差。 使用 STELLARIS 8 DIVE，您就可以使用适合红外线以及多条红外激光线的物镜： 可变扩束镜可用于校正色差，完成更实用的多色实验。可调式可变扩束镜(VBE)可重现的多色体内深度成像结果通过 颜色拆分在一个实验中激发多个转基因标志物。 甚至在一个衍射极限区域内进行局部的高精度光操作和光刺激。 STELLARIS 8 DIVE最多可同时配备三条激发光光路。 利用可调至1300纳米的激光，您甚至可以使用红色和远红染料进行多光子实验。 通过较大的波长和较少的散射可以实现更大的穿透深度，从而获得明亮的深层细节图像。要进行更实用的多色实验，需要有稳定的实验条件。 出色的机械稳定性与光束捕集器相结合可确保性能可靠。 光束捕集器可以轻松解决一些无法控制的因素产生的偏差——无论是激光调谐、温度波动还是附近的施工工作，光束捕集器通过简单的软件运行来恢复红外线和可见激光线的重叠。 为了获得最精确的调节，专业使用者甚至可以进一步微调——实现体内深度共定位！利用荧光寿命获得更多样本信息4Tune可以充分利用STELLARIS FALCON（FAst Lifetime CONtrast）和TauSense的荧光寿命成像(FLIM)的优势。这种额外的灵活性为多光子成像增加了新的维度，可实现信号多路复用和代谢成像。下载TauSense应用指南野生斑马鱼胚胎的自发荧光多光子成像。寿命对比信息通过不同的辅助因子和维生素获得。此例中为NADH（游离型和蛋白结合型）、类维生素A和FADH（游离型和蛋白结合型）。激发：740纳米。发射：501-580纳米。样本提供方：南加州大学洛杉矶分校Francesco Cutrale。为行为研究提供空间灵活性您可在行为研究实验中为STELLARIS 8 DIVE配备扩大工作空间的DM8 CS显微镜支架。 DM8 CS安装在根据您的实验要求定制的级联工作台上。 显微镜支架可以为大型而复杂的实验布置提供空间灵活性。配备DM8 CS显微镜支架的STELLARIS 8 DIVE能够进行各种实验，例如监测动物在清醒状态下的大脑活动。STELLARIS 8 DIVE上装配的DM8 CS显微镜支架安装在级联工作台上，可为行为研究提供更大的工作空间。SP8 DIVE上装配的DM8 CS显微镜支架安装在级联工作台上，可为行为研究提供更大的工作空间。

美國 BrukerUltima 活體多光子顯微鏡系列快速、靈活的活體深層成像平台更深 (1350um)、更快 (45FPS@12KHz)、更清楚、並適合大動物成像。Ultima 系統配置靈活，其高分辨率成像、深層組織成像、高速成像能力、同時進行成像和光操作，可整合和同步各種刺激和電生理學記錄設備等，都奠定了 Ultima 是世界上最好的活體多光子顯微鏡系統。(1) Ultima 2Pplus 新一代大視場多光子光遺傳學顯微鏡一個完整的活體多光子成像光學工作站隨著視場、靈敏度、波長和樣品調節的新進展，Ultima 2Pplus 提供了靈活性、分辨率、成像深度和速度的理想組合，允許用戶以更高的效率和有效性執行同步成像、刺激和電生理協議。該系統專為活體成像設計，具有對目標 X-Y-Z 位置的完全電動控制，及用於精確成像定位的兩個旋轉軸。第二掃描路徑能夠同時成像和光激活。優化的光學系統為大視場的邊緣提供了卓越的性能。特點：1. 看到更多 - 多光子成像的一流視場Ultima 2Pplus，高達 28mm 視場直徑，每次掃描都能提供更完整的生物學圖像。即使在視場邊緣，也具有卓越的視場平坦度和性能，從而能夠以最大的可用面積實現高質量成像。2. 捕獲每一個光子 - 高效光收集和探測Ultima 2Pplus 進一步改進了 Ultima 系列的檢測光學系統，在物鏡瞳孔附近配備了大型定制的采集光學系統。圖像更深，信噪比更高，即使在高散射組織內。3. 功能更多 - 同時成像和光激活 記錄和照片以精確的時間和空間精度操作細胞。結合 Ultima 2Pplus 和 Neuralight 3D 空間光調制器，提供神經元活動的 3D 實時控制，是光遺傳學實驗的理想選擇。(2) Ultima Investigator主要用於活體成像、神經的在體成像、行為模式的在體成像、光激活。主要特點：采用正置顯微鏡設計，是最具性價比的 Ultima 多光子顯微鏡系統。功能強大的基礎配置：Investigator 配備了科學家進行大多數研究所需的一切配置，包括掃描振鏡、正置顯微鏡平台、電動 Z 調焦裝置、激光導入和整形光路、兩個熒光通道光路 /PMT、模擬輸入和輸出電路、高性能工作站及全功能的 PrairieView 軟件。靈活的升級配置：Investigator 提供了大量的升級選項，用於滿足最具挑戰性的實驗需求。Prairie View 軟件&bull 延時體成像&bull Z 軸層切&bull 多維成像&bull 大視野拼圖成像&bull 線掃成像&bull ROI 成像&bull 全視野光激光&bull 點狀或者螺旋狀光刺激Ultima 的拓展模塊Ultima 系統可根據用戶的需求定制，以下是一些科研工作者經常用到的模塊：&bull 光刺激模塊 &bull 全角度物鏡轉盤&bull 雙波長成像模塊&bull 橋式樣品台&bull 全視野輸入輸出模塊&bull 熒光壽命份析模塊&bull 下置探測器

多光子显微镜采用在生物组织中穿透性强的近红外/红外激光去激发样品中的荧光发光基团，进行荧光成像。该技术光毒性低，成像深度高，因此适用于厚的活体组织（如脑片、完整器官）甚至活体生物标本的成像及功能研究。2013年Bruker收购Prairie Technology公司，该公司于1996年开始生产双光子显微镜，是最早推出商业化双光子的厂家之一，在欧美市场的占有率极高。目前，Bruker的双光子产品主要有专注于高品质活体成像的Investigators系列以及专注于进行活体功能性研究的Ultima系列。20多年的技术沉淀，使得Bruker的双光子产品在仪器性能、使用便利性以及仪器应用拓展性方面都展现出无与伦比的优势。（1）三种成像扫描模式：常规的检流振镜扫描（Galvo Scanning），龙卷风扫描（Spiral Scanning）和快速振镜扫描（Resonant Scanning）；（2）有多种旋转物镜可供选择(单轴手动，多轴手动旋转、多轴电动)，进行离轴成像，可以从不同角度对实验样品进行成像；（3）可升级移动显微镜平台，结合旋转物镜，无需样品移动，使其保持在自然生理状态下，即可找到感兴趣的成像视野或进行多视野图像采集

双光子显微镜系统可长时间多次观察，动物实时成像，包括清醒的动物成像，活体双光子显微镜搭载zui新的COHERENT飞秒激光器，成像波长可达690-1050 nm，穿透深度可达1000 um 活体共聚焦成像模块搭载4色通道（405, 420, 445, 473, 488, 505, 514, 532, 561, 633, 642, 660, 685, 705, 730, 785 nm (可任选4通道)），成像速度高达100 fps @ 512 x 512 像素。1、IVIM双光子显微镜 技术-超快旋转多面镜扫描仪-实现超高速体内成像（512x512像素，zui大100fps）-在整个成像视场（FOV）上实现均匀的激发照明-在FOV的中心区域没有降低的荧光信号和信噪比（SNR）-FOV边缘区域没有过度的光漂白-在整个FOV上均一的高信噪比-改善图像质量而不会浪费过多的光子2、IVIM双光子显微镜技术-集成运动伪影补偿-自动无忧的高精度运动补偿-通过GPU辅助并行计算立即获取运动补偿的成像结果，以加快算法处理速度-超快的活体成像的协同效应-确保从慢速运动的组织（例如肝，肾，脾等腹腔器官）到快速运动的组织（例如心脏，肺等胸腔器官）的时空组织运动范围广泛的zui佳结果该系统应用范围为：小鼠模型中各个器官的体内成像：-肝脏，淋巴结，脾脏，皮肤，视网膜，肺，脑，结肠，胰腺，小肠，前列腺，肾脏，心脏，气管，食道，食道，骨髓，胸腺等。细胞水平的图像处理和分析：-细胞动力学（细胞运动，细胞运输，细胞运动，细胞归巢）-细胞-细胞/细胞微环境/细胞-分子相互作用-细胞死亡/存活，细胞分布，细胞分化多种人类疾病的小鼠模型：-使用荧光癌细胞系（肺癌/乳腺癌/结肠癌/胰腺癌，胶质母细胞瘤，白血病，黑素瘤等）的异种移植和同基因癌症模型-急性/慢性炎症模型（全身注射，器官/组织）损伤，缺血再灌注损伤）-嵌合体模型，用于特定细胞类型的活体内成像（干细胞移植，淋巴细胞的过继性细胞转移等）

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振电相干拉曼多模态非线性光学显微镜系统UltraViewMultimodal Nonlinear Optical Microscopy SystemUltraView多模态非线性光学显微镜系统，包括多种成像方式：相干拉曼，Coherent Raman scattering (CRS)瞬态吸收，Transient absorption (TA)二次谐波，Second harmonic generation (SHG)双光子，Two-photon excited fluorescence (TPEF)图1 (a) 大鼠乳腺的相干反斯托克斯拉曼散射 (CARS)（红色）和二次谐波产生 (SHG)（绿色）多模态图像，分别显示脂肪细胞和胶原纤维。 (b) 兔主动脉组织的 CARS（红色）、SHG（绿色）和双光子激发荧光 (TPEF)（蓝色）多模式图像，分别突出显示脂质、胶原蛋白和弹性蛋白成分。 (c) CARS，(d) 和频生成 (SFG)，以及 (e) 猪 V 型动脉粥样硬化病变切片的 TPEF 图像。Cheng, J. X., et al, Coherent Raman scattering microscopy in biology and medicine. Annual review of biomedical engineering, 17, 415-445, (2015).相干拉曼(CRS)的特点：灵敏度高，较自发拉曼高一百万倍视频级成像速度，1s即可获得拉曼成像图多窗口大范围相干拉曼光谱扫描无荧光背景干扰，高信噪比可实现3D化学成像和大视野拼图多色标记，多至20个靶点分布成像多模态共定位成像（双光子荧光、瞬态吸收、二次谐波）应用范围：细胞代谢，合成生物学，植物学，电化学，超多重免疫组化更多应用案例请点击：相干拉曼散射显微成像系统的应用举例

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时间相关单光子计数相机——宽场荧光寿命成像FLIM姓名：谷工(Givin) 电话： 邮箱：光子计数是获得尽可能多的光所带来的信息的方法。在这里，我们提出的时间相关单光子计数相机系统不仅可以检测单个光子的到达时间，而且可以像相机一样直观地定位。单光子计数相机LINCam可以将任何简单的广域显微镜扩展成强大的荧光寿命成像系统。时间相关单光子计数相机LINCam是一种解决无扫描时间相关的单光子计数问题的相机。这款时间相关单光子计数相机可以精确地分辨单个光子的X和Y位置，拥有1000*1000像素的CCD和50ps的精确时间分辨能力。与脉冲光源配合时，时间相关单光子计数相机LINCam使任何传统的荧光显微镜成为一个强大的寿命测量仪器。带有现成光学元件的单光子计数相机LINCam也是激光雷达等宏观应用的解决方案。应用领域：宽视场荧光寿命显微成像FLIM光照明3D FLIM时间相关拉曼显微时间飞行测量弱光观测宽场TCSPC荧光寿命显微成像FLIM谷百合样本荧光寿命成像的示例：强度图像(a)是获得光子的位置的直方图。荧光寿命分析揭示了四个组成部分：τ1=0.19ns；τ2=0.67ns；τ3 = 1.95ns；τ4 = 3.75ns。所得到的叠加图像(b)显示了强度图像和平均寿命。数据采集处理：采集系统集成了时幅转换器TAC、模数转换器ADC、电源供应、参考信号恒比鉴别器CFD等功能。技术参数：

现在就考虑起来升级你的激光扫描显微镜吧！！！德国refined-laser专为相干拉曼散射显微术（CRS)设计的全光纤双色激光器。 refined-laser激光器专利调谐机制使系统没有机械延迟，并允许同步双色脉冲舒适地光纤传输。通过保偏光纤技术，降低了对维护和环境条件的要求。 该产品有以下几大特点： 1. 可用调谐速度 光子晶体光纤中波长转换的宽调谐范围；每一波长步调谐小于5ms；保持可选双输出之间的时间重叠 2. 为移动操作而设计 采用专利光纤技术，结构紧凑、坚固、可移动；不需要光学工作台-经证明可抵抗高达25米/秒的冲击；用于柔性和屏蔽脉冲传输的可选光纤输出 3. 舒心而为的操作体验 即插即用安装（可以和任一激光扫描显微镜搭配使用） ；风冷激光头；免提操作 主要应用：生物医学成像 使用两个不同颜色的同步激光束探测样品中的分子振动，不依赖于标记，例如使用染料。这种无标签的特性导致了它在生物医学领域的成功，是将CRS转变为临床环境的主要动力之一。 实时成像复杂的技术和生物样品含有丰富的不同成分，每种成分都有一组独特的分子振动。由于我们的双色激光的激发波长可以在5毫秒内调谐到特定的振动，因此对这些样品进行实时多色成像成为可能。在这样的调谐速度下，假设调谐和图像采集的时间跨度相等，每秒可成像100个用户可选择的振动分量。这是CRI应用于手术室等时间关键环境或大型研究中多个样本的重要前提。 应用CARS应用： （1）CARS 显微镜对脂肪储存的无标记成像依赖于 C-H 的固有分子振动，同时使 用 CARS 和双光子激发荧光（Two-photon excited fluorescence,TPEF）成像可以实现中性脂滴和自发荧光肠道颗粒的无标记可视化，用于分析脂质储存的遗传变异和代谢途径之间的关系[4]。图 CARS与双光子荧光信号用于脂滴成像[9]SRS应用： （1）用于对脂类分子定量地观察其空间分布。为了更好地了解肥胖及其相关代谢问题，需要深入 分析脂肪在细胞水平和组织水平积累的调控机制。SRS显微术使追踪脂类分子的动态活动成为可能，为解释与脂质相关的生理现象与机制提供了新的方法。 （2）SRS用于准确地运输过程及定位，进而分析药物分子对特定生理功能的实现作用。 例如下图所示，使用SRS 显微镜观察了组织中无标记的药物输运情况。二甲亚砜(DMSO)和维甲酸(RA)两种物质在小鼠皮肤组织中的转运过程图像。二甲亚砜和维甲酸亲水性不同, 通过角质层的方式也不同。 SRS 图像显示了这两者在输运方式上的差别和在角质层中的分布, 具有很强的药代动力学探测能力[8]。图 二甲亚砜(DMSO) 左 维和甲酸(RA) 右 的SRS成像结果[8]参考文献[1]Terhune R W , Maker P D , Savage C M . Measurements of Nonlinear Light Scattering[J]. Physical Review Letters, 1965, 14(17):681-684. [2]Duncan M D, Reintjes J F, Manuccia T J. Scanning coherent anti-Stokes Raman microscope[J]. Optics Letters, 1982, 7(8):350-352. [3]Zumbusch A , Holtom G R , Xie X S . Three-Dimensional Vibrational Imaging by Coherent Anti-Stokes Raman Scattering[J]. Physical Review Letters, 1999, 82(20):4142-4145. [4]李姿霖,李少伟,张思鹭,沈炳林,屈军乐,刘丽炜.相干拉曼散射显微技术及其在生物医学领域的应用[J/OL].中国激光:1-18[2020-02-17]. [5]Cheng J X , Xie X S . Coherent Anti-Stokes Raman Scattering Microscopy:? Instrumentation, Theory, and Applications[J]. The Journal of Physical Chemistry B, 2004, 108(3):827-840. [6]陈涛,虞之龙,张先念,谢晓亮,黄岩谊.相干拉曼散射显微术[J].中国科学:化学,2012,42(01):1-16. [7]Woodbury EJ, Ng WK. Ruby laser operation in the Near IR. Proc of the IRE.1962,50:2367 [8]Freudiger C W, Min W, Saar B G, et al. Label-Free Biomedical Imaging with High Sensitivity by Stimulated Raman Scattering Microscopy[J]. Science,2008,1857-1861. [9]Yen K , Le T T , Bansal A , et al. A Comparative Study of Fat Storage Quantitation in Nematode Caenorhabditis elegans Using Label and Label-Free Methods[J]. PLOS ONE, 2010, 5.

SUPERNOVA-100以媲美传统台式双光子显微镜的成像分辨率，实现对自由运动动物的大脑神经元和神经突触清晰稳定的成像。为神经科学家提供了一款开拓性的新工具，开拓了神经科学研究的新范式。集成于 SUPERNOVA-100 的 FHIRM 系列微型化探头使得在自由运动小动物上进行活体成像成为现实，将——更优化的微型化探头更卓越的双光子成像性能更灵活的适配性能及多模态应用……集于一身，目前已被应用于学习记忆、认知、注意力、感知运动等各类神经环路和神经疾病的研究中。SUPERNOVA-100 最大的创新亮点在于采用整机一体化设计，更加灵活，并能兼容多种应用场景，简单易用。Small“戴着跑”的显微镜&blacksquare 2.6g 微型化探头，小动物轻松佩戴&blacksquare 一体化设计的高度集成系统Superior卓越的成像性能&blacksquare 成像分辨率可达 0.65 μm，实现对神经元单个树突棘成像&blacksquare 大视野 1 mm×0.87 mm，可同时对数以千计的神经细胞成像&blacksquare 成像深度高达 800 μm，实现对小鼠大脑各皮层成像Smart灵活适配，轻松使用&blacksquare 适配各品牌飞秒激光器&blacksquare 标准化流程，微型化探头简易佩戴&blacksquare 可与 EEG、EMG、DBS 等多模态同步记录产品应用✦ Part.1社会竞争在决定个人的社会地位方面起着关键作用。动物行为学实验发现获胜行为与血管活性肠多肽（VIP）顺序启动的锥体（PYR）神经元和细小白蛋白（PV）中间神经元的钙活动相关。在清醒小鼠中使用微型双光子显微镜和光学记录，发现 VIP 刺激直接导致 PYR 和 PV 神经元快速抑制后激活的两阶段活动模式，这种去抑制 VIP-PV-PPYR 基序形成了 dmPFC 微环路的核心，以控制社会竞争行为。Chaoyi Zhang et al. | Neuron | February 2, 2022Part.2研究自由行为动物的瘙痒感知需要极小的感知刺激输入。微型双光子显微镜使神经钙成像能够用于瘙痒研究。通过操纵脊髓中的 GRPR 神经元诱发瘙痒，微型化双光子成像技术用于记录小鼠抓挠时 S1Tr 神经元的活动。Xiao-Jun Chen et al. | National Science Review | June, 2022Part.3直接测量乙酰胆碱（ACh）释放的能力是理解其生理功能的重要步骤。微型化双光子成像被利用于检测 ACh 传感器，以灵敏指示在执行各种行为的小鼠多个大脑区域中的单次 ACh 动态。Miao Jing et al. | Nature Methods | September 28, 2020Part.4对自由行为的小鼠脊髓进行长期成像被证实是可行的，利用微型双光子显微镜可对脊髓参与的自由行为小鼠感觉知觉及相关疾病作用机制进行研究。Furong Ju et al. | bioRxiv preprint | January 11, 2022Part.5社会行为研究需要动物处于行为自由的状态。使用微型双光子显微镜（mTPM）观察自由行为小鼠 PrL 与社会行为相关的神经元活动，发现 GABA 能神经元的 Ca2+ 瞬变与社会行为的相关性比谷氨酸能神经元的更高。Zhe Zhao et al. | Science Advances | August 31, 2022Part.6多模态地利用快速高分辨率的微型化双光子显微镜，结合脑电图（EEG）记录和行为评估，用于研究自由活动小鼠注射红藻氨酸诱发癫痫发作的开始和传播。Zhuoran Zhang et al. | Neurosci. Bull | May 11, 2022Part.7水凝胶广泛应用于神经组织修复，具有良好的组织相容性。微型化双光子显微镜可通过柔性多峰透明电生理水凝胶（MTEHy）电极成像，以记录自由行为动物的神经元 Ca2+ 活性。Wei Wei et al. | Acta Biomaterialia| August 28, 2022技术参数✦ SUPERNOVA-100 提供完整的活体成像解决方案，助力神经科学研究！

产品介绍Videometer Mic是一款新型、功能强大且性价比较高的将显测量技术与多光谱技术结合的成像测量系统。通过控制系统就可进行高分辨率显微多光谱成像。基础模块包括标配10个散射波段，波长范围为280-1050nm。可固定摄像头或移动摄像头。Videometer Mic显微多光谱成像系统是一款自动多光谱显微成像系统，集成了多光谱相机传感器，安装在xyz平台上，可实现达30mmX30mm的样品自聚焦和扫描，可以测量较小的样品，比如拟南芥种子等小植株、用多孔板培养的植物、多孔板里的叶圆片、以及植物的种子等，分析软件功能强大。Videometer Mic显微多光谱测量系统通过测量样品在10种不同波长的LED频闪光下的成像来获取有用的信息。这些图像可以独立分析使用，也可以叠加起来合成高分辨率的彩色图像。Videometer备选模块包括滤波轮，用于荧光相关研究测量。Videometer Mic也可用于食品样品成像分析测量领域如海鲜品质评估、肉类品质评估、肌肉、脂肪和肉色测量、肌肉和脂肪分布、果品和蔬菜品质检测、琼脂平板菌落计数、质构分析、颗粒涂层分析、孔隙结构分析等；可专用于寄生虫检测。Videometer已经有成熟的针对颗粒例如种子的研究方案，这些形态、表型成像技术，完全可在显微镜下使用，尤其是显微镜下的多光谱特征，是一个全新的探索领域，例如多光谱显微分析法还可用于植物组织、颗粒研究，如小麦、水稻。产品特点5-10秒钟内实现光谱成像和定量分析10种不同波长/光源1.4百万像素图片标准设备包括使用设备校准与传统RGB技术相比具有先进的彩色测量功能根据应用需求可自动切换动态范围光源寿命长、可达10万小时少有LED光源技术稳定性增强研究用强大探索软件易用常规应用配方构建模型（建模）多光谱荧光备选应用领域肌肉、脂肪和肉色测量菌落鉴别寄生虫分析海鲜品质评估肌肉和脂肪分布植物病害肉类品质评估果品和蔬菜品质检测质构分析孔隙结构分析测量参数细微尺寸细微形状细微颜色细微形态纹理光谱质构与细微表面化学相关的光谱成分计数应用案例水稻雄性不育是水稻杂种优势利用的基础。长期以来，显微镜下的细胞学证据是判别水稻雄性不育系花粉细胞败育程度和区分不同雄性不育细胞质的较主要依据之一。法碘化钾染色是较简单的方之一。该方法是基于水稻在花粉发育过程中，正常发育的花粉积累大量淀粉，能被碘—碘化钾染色且着色深而均匀；败育花粉不能正常积累淀粉、不能被染色或染色较浅。但是，在发育过程中有些水稻雄性不育系的花粉也能积累少量淀粉。花粉败育过程中的复杂性，降低了碘—碘化钾染色法鉴别水稻花粉育性的可靠性，有时其结果很可能反映不出花粉生活力的真实情况。另外也有用醋酸洋红等其它染色方法进行的各种研究报道。这些传统的常规方法存在植物雄性不育是水稻等农作物利用杂种优势的理论基础。在农作物遗传育种的研究领域中，一个基础性的研究课题就与水稻的雄性不育的有关。研究可利用Videometer Mic多光谱显微成像系统，比较观察水稻花药发育的全过程以及两水稻不育系花粉败育的不同特征。技术参数标准：5-10秒钟内实现光谱成像和定量分析光源寿命长：可达10万小时光源：具有10个高功率LED 灯源，波段范围从280 nm-1050 nm图像尺寸： 图1.4M 分辨率：1~5 μm /像素 样品尺寸：3 x 3cm分析时间：每个样品5-10秒室温：操作: 5 - 40℃，储存；-5 – 50℃环境湿度：20-90 % RH相对湿度，非冷凝电源：100-240V AC，50/60HZPC 要求：较低配置: Intel i7或较高，16GB RAM，USB2端口，USB3高速端口，千兆以太网软件：Microsoft Windows 7 Professional, 64 bit, 全新windows版本硬件备选：滤波轮（用于荧光）可选软件：图像处理工具盒（IPT）、光谱成像工具盒（MSI）、斑点工具盒

振电相干拉曼多模态非线性光学显微镜系统UltraViewMultimodal Nonlinear Optical Microscopy SystemUltraView多模态非线性光学显微镜系统，包括多种成像方式：相干拉曼，Coherent Raman scattering (CRS) 瞬态吸收，Transient absorption (TA)二次谐波，Second harmonic generation (SHG)双光子，Two-photon excited fluorescence (TPEF)图1 (a) 大鼠乳腺的相干反斯托克斯拉曼散射 (CARS)（红色）和二次谐波产生 (SHG)（绿色）多模态图像，分别显示脂肪细胞和胶原纤维。 (b) 兔主动脉组织的 CARS（红色）、SHG（绿色）和双光子激发荧光 (TPEF)（蓝色）多模式图像，分别突出显示脂质、胶原蛋白和弹性蛋白成分。 (c) CARS，(d) 和频生成 (SFG)，以及 (e) 猪 V 型动脉粥样硬化病变切片的 TPEF 图像。Cheng, J. X., et al, Coherent Raman scattering microscopy in biology and medicine. Annual review of biomedical engineering, 17, 415-445, (2015).相干拉曼(CRS)的特点：比自发拉曼的灵敏度提高106倍无损，无标记200-500 nm 成像分辨率相干拉曼的优势：具有化学特异性，能够特异性地识别分子振动；无标记成像，避免荧光带来的光毒性和光漂白造成的无法统计分析；相比色谱质谱等，能够做到和荧光成像一样的单细胞原位分析。更多应用案例请点击：相干拉曼散射显微成像系统的应用举例

FKM（Fluorescence Kinetic Microscope）多光谱荧光动态显微成像系统是目前功能最为强大全面的植物显微荧光研究仪器，是基于FluorCam叶绿素荧光成像技术的显微成像定制系统。它由包含可扩展部件的增强显微镜、高分辨率CCD相机、激发光源组、光谱仪、控温模块以及相应的控制单元和专用的工作站与分析软件组成。它不仅可以进行微藻、单个细胞、单个叶绿体乃至基粒-基质类囊体片段进行Fv/Fm、Kautsky诱导效应、荧光淬灭、OJIP快速荧光响应曲线、QA再氧化等各种叶绿素荧光及MCF多光谱荧光（multicolor fluorescence）成像分析；还能通过激发光源组进行进行任意荧光激发和荧光释放波段的测量，从而进行GFP、DAPI、DiBAC4、SYTOX、CTC等荧光蛋白、荧光染料以及藻青蛋白、藻红蛋白、藻胆素等藻类特有荧光色素的成像分析；更可以利用光谱仪对各种荧光进行光谱分析，区分各发色团（例如PSI和PSII及各种捕光色素复合体等）并进行深入分析。 FKM多光谱荧光动态显微成像系统使荧光成像技术真正成为光合作用机理研究的探针，使科研工作者在藻类和高等植物细胞与亚细胞层次深入理解光合作用过程及该过程中发生的各种变化，为直接研究叶绿体中光合系统的工作机理提供了最为有力的工具。FKM作为藻类/植物表型和基因型显微研究的双重利器，得到了学界的广泛认可并取得了大量的科研成果。功能特点• 内置现今叶绿素荧光研究的全部程序，如Fv/Fm、Kautsky诱导效应、荧光淬灭、OJIP快速荧光响应曲线、QA再氧化等，可获得70余项参数。• 配备10倍、20倍、40倍、63倍和100倍专用生物荧光物镜，可以清晰观测到叶绿体及其发出的荧光。• 激发光源组中包括红外光、红光、蓝光、绿光、白光、紫外光和远红光等，通过红蓝绿三色光还可以调出可见光谱中的任何一种色光，能够研究植物/藻类中任何一种色素分子或发色团。• 可进行GFP、DAPI、DiBAC4、SYTOX、CTC等荧光蛋白、荧光染料的成像分析• 高分辨率光谱仪能够深入解析各种荧光的光谱图。• 控温系统可以保证实验样品在同等温度条件下进行测量，提高实验精度，也可以进行高温/低温胁迫研究。 应用领域• 微藻、大型藻类/高等植物的单个细胞、单个叶绿体、基粒-基质类囊体片段等的显微结构植物光合生理研究• 藻类/植物逆境研究• 生物和非生物胁迫的研究• 藻类/植物抗胁迫能力及易感性研究• 突变体筛选及光合机理研究• 藻类长势与产量评估• 藻类特有色素与光合作用关系• 藻类/植物——微生物交互作用研究• 藻类/植物——原生动物交互作用研究• 基因工程与分子生物学研究测量样品• 植物活体切片• 植物表皮• 植物细胞• 绿藻、蓝藻等各种单细胞和多细胞微藻• 叶绿体提取液• 类囊体提取液• 含有叶绿体的原生动物工作原理 FKM分析过程中，通过连接在显微镜上的激发光源组和内置在6位滤波轮中的一系列滤波器、分光镜激发植物样品中各种发色团的动态荧光。样品激发出的荧光经显微镜放大后进行荧光光谱分析和荧光动力学成像分析。SM 9000光谱仪通过光纤与显微镜连接，以进行激发荧光光谱分析。安装在显微镜顶部的高分辨率CCD相机则用于荧光动力学成像分析。全部工作过程通过工作站和控制单元按照预先设定好的程序自动进行。测量过程中，可通过温控模块调控藻类、植物细胞等实验样品的温度。蠕动泵可以实现培养藻类的连续测量。仪器组成1. 增强显微镜 2. 高分辨率CCD相机 3. 激发光源组 4. SM 9000光谱仪 5. 主控制单元 6. 工作站及软件 7. 控温模块的控制单元8. 6位滤波轮技术参数• 测量参数?Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv' / Fm' , Fv/ Fm ,Fv' ,Ft,ΦPSII, NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qP，QY, QY_Ln, Rfd, ETR等50多个叶绿素荧光参数，每个参数均可显示2维荧光彩色图像?OJIP快速荧光曲线：测定分析OJIP曲线与二十几项相关参数包括：Fo、Fj、Fi、P或Fm、Vj、Vi、Mo、Area 、Fix Area、Sm 、Ss 、N（QA还原周转数量）、Phi???_Po 、Psi_o 、Phi_Eo、Phi_Do、Phi_pav、ABS/RC（单位反应中心的吸收光量子通量）、TRo/RC（单位反应中心初始捕获光量子通量）、ETo/RC（单位反应中心初始电子传递光量子通量）、DIo/RC（单位反应中心能量散失）、ABS/CS（单位样品截面的吸收光量子通量）、TRo/CSo、RC/CSx（反应中心密度）、PIABS（基于吸收光量子通量的“性能”指数或称生存指数）、PIcs（基于截面的“性能”指数或称生存指数）等（选配）?GFP、DAPI、DiBAC4、SYTOX、CTC等荧光蛋白和荧光染料的成像分析（选配）?QA再氧化动力学曲线（选配）?Spectrum荧光光谱图（选配）• 具备完备的自动测量程序（protocol），可自由对自动测量程序进行编辑?Fv/Fm：测量参数包括Fo，Fm，Fv，QY等?Kautsky诱导效应：Fo，Fp，Fv，Ft_Lss，QY，Rfd等荧光参数?荧光淬灭分析：Fo，Fm，Fp，Fs，Fv，QY，ΦII，NPQ，Qp，Rfd，qL等50多个参数，2套制式程序?光响应曲线LC：Fo，Fm，QY，QY_Ln，ETR等荧光参数?Dyes & FPs稳态荧光成像测量?OJIP快速荧光动力学分析：Mo（OJIP曲线初始斜率）、OJIP固定面积、Sm（对关闭所有光反应中心所需能量的量度）、QY、PI等26个参数（选配）?QA再氧化动力学（选配）?Spectrum荧光光谱分析（选配）• 荧光激发光源：红外光、红光、橙光、蓝光、绿光、白光、紫外光等可选，根据客户要求定制光源组• 透射光源（选配）：白光、远红光?高分辨率TOMI-2 CCD传感器：?逐行扫描CCD?最高图像分辨率：1360×1024像素?时间分辨率：在最高图像分辨率下可达每秒20帧?A/D 转换分辨率：16位（65536灰度色阶）?像元尺寸：6.45μm×6.45μm?运行模式：1）动态视频模式，用于叶绿素荧光参数测量；2）快照模式，用于GFP等荧光蛋白和荧光染料测量?通讯模式：千兆以太网• 显微镜：Axio Imager M2，可选配Axio Scope A1简洁版或Axio Imager Z2高级版?物镜转盘：研究级7孔自动物镜转盘?透射光快门?聚光器 Achr Apl 0.9 H?6位反光镜转盘?双目镜筒(100:0/30:70/0:100)?机械载物台：75×50mm，硬膜阳极氧化表面?样品架：76×26mm• 物镜：10倍、20倍、40倍、63倍和100倍专用生物荧光物镜（可选）• 6位滤波轮：叶绿素荧光、GFP/SYTOX、DAPI/CTC等• SM9000光谱仪?入射狭缝：70μm×1400μm ?光栅：平场型校正?光谱范围：200-980nm?波长绝对精确度：0.5nm?再现性：0.1nm?温度漂移：0.01nm/K• 温度调控模块：温度调节范围 5℃-70℃，精确度0.1℃• 蠕动泵（选配）：流速10-5600μl/min，用于藻类连续培养测量• FluorCam叶绿素荧光成像分析软件功能：具Live（实况测试）、Protocols（实验程序选择定制）、Pre–processing（成像预处理）、Result（成像分析结果）等功能菜单 • 客户定制实验程序协议（protocols）：可设定时间（如测量光持续时间、光化学光持续时间、测量时间等）、光强（如不同光质光化学光强度、饱和光闪强度、调制测量光等），具备专用实验程序语言和脚本，用户也可利用Protocol菜单中的向导程序模版自由创建新的实验程序• 自动测量分析功能：可设置一个实验程序（Protocol）自动无人值守循环成像测量，重复次数及间隔时间客户自定义，成像测量数据自动按时间日期存入计算机（带时间戳）• 快照（snapshot）模式：通过快照成像模式，可以自由调节光强、快门时间及灵敏度得到清晰突出的植物样本稳态荧光和瞬时荧光图片• 成像预处理：程序软件可自动识别多个植物样品或多个区域，也可手动选择区域（Region of interest，ROI）。手动选区的形状可以是方形、圆形、任意多边形或扇形。软件可自动测量分析每个样品和选定区域的荧光动力学曲线及相应参数，样品或区域数量不受限制（1000）• 数据分析模式：具备“信号计算再平均”模式（算数平均值）和“信号平均再计算”模式，在高信噪比的情况下选用“信号计算再平均”模式，在低信噪比的情况下选择“信号平均再计算”模式以过滤掉噪音带来的误差• 输出结果：高时间解析度荧光动态图、荧光动态变化视频、荧光参数Excel文件、直方图、不同参数成像图、不同ROI的荧光参数列表等叶绿素荧光与光谱分析结果典型应用：产地：捷克参考文献：1.Küpper H, et al. 2019. Analysis of OJIP Chlorophyll Fluorescence Kinetics and QA Reoxidation Kinetics by Direct Fast Imaging. Plant Physiology 179: 369-3812.Konert G, et al. 2019. Protein arrangement factor: a new photosynthetic parameter characterizing the organization of thylakoid membrane proteins. Physiologia Plantarum 166: 264-277.3.Exposito-Rodriguez M, et al. 2017. Photosynthesis-dependent H2O2 transfer from chloroplasts to nuclei provides a high-light signalling mechanism. Nature Communications, 8: 494.Higo S, et al. 2017. Application of a pulse-amplitude-modulation (PAM) fluorometer reveals its usefulness and robustness in the prediction of Karenia mikimotoi blooms: A case study in Sasebo Bay, Nagasaki, Japan. Harmful Algae, 61:63-705.Jacobs M, et al. 2016. Photonic multilayer structure of Begonia chloroplasts enhances photosynthetic efficiency. Nature Plants, doi:10.1038/nplants.2016.1626.Andresen E, et al. 2016. Cadmium toxicity investigated at the physiological and biophysical levels under environmentally relevant conditions using the aquatic model plant Ceratophyllum demersum. New Phytol., 210(4):1244-12587.Thomas G, et al. 2016. Deficiency and toxicity of nanomolar copper in low irradiance—A physiological and metalloproteomic study in the aquatic plant Ceratophyllum demersum. Aquatic Toxicology, 177:226-2368.Fujise L, et al. 2014. Moderate Thermal Stress Causes Active and Immediate Expulsion of Photosynthetically Damaged Zooxanthellae (Symbiodinium) from Corals. PLOS ONE, DOI:10.1371/journal.pone.01143219.Gorecka M, et al. 2014. Abscisic acid signalling determines susceptibility of bundle sheath cells to photoinhibition in high light-exposed Arabidopsis leaves. Philosophical Transactions of the Royal Society B, 369(1640), DOI: 10.1098/rstb.2013.023410.Mishra S, et al. 2014. A different sequence of events than previously reported leads to arsenic-induced damage in Ceratophyllum demersum L. Metallomics, 6: 444-45411.Ferimazova N, et al. 2013. Regulation of photosynthesis during heterocyst differentiation in Anabaena sp. strain PCC 7120 investigated in vivo at single-cell level by chlorophyll fluorescence kinetic microscopy. Photosynthesis Research, 116(1): 79-9112.Andresen E, et al. 2013. Effects of Cd & Ni toxicity to Ceratophyllum demersum under environmentally relevant conditions in soft & hard water including a German lake. Aquatic Toxicology. 142–143, 15: 387–402

荧光和荧光寿命分子包含多个单能态S0、S1、S2… 和三重态T1… ，每个能态都包含多个精细的能级。正常情况下，大部分电子处在*低能态即基态S0 的*低能级上，当分子被光束照射，会吸收光子能量，电子被激发到更高的能态S1 或S2 上，在S2 能态上的电子只能存在很短暂的时间，便会通过内转换过程跃迁到S1 上，而S1 能态上的电子亦会在极短时间内跃迁到S1 的*低能级上，而这些电子会存在一段时间后通过震荡弛豫辐射跃迁到基态，这个过程会释放一个光子，即荧光。此外，亦会有电子跃迁至三重态T1 上，再由T1 跃迁至基态，我们称之为磷光。荧光特性研究荧光特性时，主要在以下几方面进行分析：激发光谱，发射光谱、荧光强度、偏振荧光、荧光发光量子产率、荧光寿命等。其中荧光寿命（Fluorescence Lifetime）是指荧光分子在激发态上存在的平均时间（纳秒量级）。荧光寿命测试荧光寿命一般在几纳秒至几百纳秒之间，如今主要有两类测试方法：时域测量和频域测量时间稳定性实验测试曲线：1 时域测量由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1，接着测量荧光的发射几率随时间的变化。其中目前广泛应用的是时间相关单光子计数，即TCSPC(Time Correlated Single Photon Counting)时间相关单光子计数(TCSPC) 实现了从百ps-ns-us 的瞬态测试，此方法对数据的获取完全依赖快速探测器和高速电路。用统计的方法计算样品受激后发出的第一个( 也是*一的一个) 光子与激发光之间的时间差，也就是下图的START( 激发时刻) 与STOP( 发光时刻) 的时间差。由于对于Stop 信号的要求，所以TCSPC 一般需要高重复频率的光源作为激发源，其重复至少要在100KHz 以上，多数的光源都会达到MHz 量级；同时，在一般情况下还要对Stop 信号做数量上的控制，做到尽量满足在一个激发周期内，样品产生且只产生一个光子的有效荧光信号，避免光子对的出现。2 频域测量对连续激发光进行振幅调制后，分子发出的荧光强度也会受到振幅调制，两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差，因此可以测量该相位差计算荧光寿命。 左图为正弦调制激发光（绿色）频域显示，发射光信号（红色）相应的相位变化频域显示。右图为对应不同寿命的调制和相位的频域显示。TM- 调制寿命，TP- 相位寿命。[1]显微荧光寿命成像技术（FLIM）显微荧光寿命成像技术（Fluorescence Lifetime ImagingMicroscopy，FLIM）是一种在显微尺度下展现荧光寿命空间分布的技术，由于其不受样品浓度影响，具有其他荧光成像技术无法代替的优异性能，目前在生物医学工程、光电半导体材料等领域是一种重要的表征测量手段。FLIM 一般分为宽场FLIM 和激光扫描FLIM。宽场FLIM（Wide Field FLIM,WFM）该技术是用平行光照明并由物镜聚焦样品获得荧光信号，再由一宽场相机采集荧光成像。宽场FLIM 常用于快速获取大面积样品成像。时域或是频域寿命采集都可以应用在宽场成像FLIM 上。宽场FLIM 有更高帧率和低损伤的优势。2 激光扫描FLIM（Laser Scanning FLIM,LSM）激光扫描FLIM 是针对选定区域内的样品逐点获取其荧光衰减曲线，再经过拟合最终合成荧光寿命图像。相比宽场FLIM，其在空间分辨率、信噪比方面有更大的优势。扫描方式有两种：一种是固定样品，移动激光进行扫描，一种是固定激光，电动位移台带动样品移动进行扫描。显微荧光寿命成像系统RTS2-FLIM应用材料科学领域宽禁带半导体如GaN、SiC 等体系的少子寿命mapping 测量量子点如CdSe@ZnS 等用作荧光寿命成像显微镜探针钙钛矿电池/LED 薄膜的组分分析、缺陷检测铜铟镓硒CIGS，铜锌锡硫CZTS 薄膜太阳能电池的组分、缺陷检测镧系上转换纳米颗粒GaAs 或GaAsP 量子阱的载流子扩散研究生命科学领域细胞体自身荧光寿命分析自身荧光相对荧光标记的有效区分活细胞内水介质的PH 值测量局部氧气浓度测量具有相同频谱性质的不同荧光标记的区分活细胞内钙浓度测量时间分辨共振能量转移（FRET）：纳米级尺度上的远差测量，环境敏感的FRET 探针定量测量代谢成像：NAD(P)H 和FAD 胞质体的荧光寿命成像显微荧光寿命成像系统RTS2-FLIM应用案例1 用荧光分子对海拉细胞进行染色用荧光分子转子Bodipy-C12 对海拉细胞（宫颈癌细胞的一种） 进行染色。(a) 显微荧光寿命成像图，寿命范围1ns（蓝色）到2.5ns（红色）；(b) 荧光寿命直方图，脂肪滴的短寿命约在1.6ns 附近，细胞中其他位置寿命较长，在1.8ns 附近。用荧光分子转子的时间分辨测量*大的好处在于荧光寿命具备足够清晰的标签特性，且与荧光团的浓度无关。[2]2 金属修饰荧光金属修饰荧光：(a) 荧光寿命是荧光团到金表面距离的函数；(b) 用绿色荧光蛋白（GFP）标记乳腺腺癌细胞的细胞膜的共聚焦xz 横截面，垂直比例尺：5m；(c) b 图的FLIM 图，金表面附近的GFP 荧光寿命缩短。[2]3 钙钛矿太阳能电池下图研究中，展示了一种动态热风（DHA）制备工艺来控制全无机PSC 的薄膜形态和稳定性，该工艺不含有常规的有害反溶剂，可以在大气环境中制备。同时，钙钛矿掺有钡（Ba2+） 碱金属离子（BaI2:CsPbI2Br）。这种DHA 方法有助于形成均匀的晶粒并控制结晶，从而形成稳定的全无机PSC。从而在环境条件下形成完整的黑色相。经过DHA处理的钙钛矿光伏器件，在0.09cm小面积下，效率为14.85%，在1x1cm的大面积下，具有13.78%的*高效率。DHA方法制备的器件在300h后仍然保持初始效率的92%。4 MQWs 多量子阱研究在(a) 蓝宝石和(b) GaN 上生长的MQWs 的共焦PL mapping 图像。具有较小尺寸的发光团的最高密度是观察到在GaN 上生长的MQWs。在(c) 蓝宝石和(d)GaN 上生长的MQWs 的共焦TRPL mapping 图。仅对于在GaN 上生长的MQWs，强的PL 强度区域与较长PL 衰减时间的区域很好地匹配。在(e) 蓝宝石和(f)GaN 上生长的MQWs 在A 点和B 点测量的局部PL 衰减曲线，均标记在图中。对于在GaN 上生长的MQWs，点A 和B 之间的PL 衰减时间差更高。显微荧光寿命成像系统FLIM参数配置北京卓立汉光仪器有限公司提供的显微荧光寿命成像系统是基于显微和时间相关单光子计数技术，配合高精度位移台得到微观样品表面各空间分布点的荧光衰减曲线，再经过用数据拟合，得到样品表面发光寿命表征的影像。是光电半导体材料、荧光标记常用荧光分子等类似荧光寿命大多分布在纳秒、几十、几百纳秒尺度的物质的选择。参数指标：系统性能指标光谱扫描范围200-900nm最小时间分辨率16ps荧光寿命测量范围500ps-1μs@ 皮秒脉冲激光器空间分辨率≤1μm@100X 物镜@405nm 皮秒脉冲激光器荧光寿命检测IRF≤2ns配置参数激发源及匹配光谱范围（光源参数基于50MHz 重复频率）375nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：30ps，平均功率1.5mW，荧光波段：400-850nm405nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：25ps，平均功率2.5mW，荧光波段：430-920nm450nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：50ps，平均功率1.9mW，荧光波段：485-950nm488nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：70ps，平均功率1.3mW，荧光波段：500-950nm510nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：75ps，平均功率1.1mW，荧光波段：535-950nm635nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：65ps，平均功率4.3mW，荧光波段：670-950nm660nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：60ps，平均功率1.9mW，荧光波段：690-950nm670nm 皮秒脉冲激光器，脉宽：40ps，平均功率0.8mW，荧光波段：700-950nm科研级正置显微镜落射明暗场卤素灯照明，12V，100W5 孔物镜转盘，标配明场用物镜：10×，50×，100×监视CCD：高清彩色CMOS 摄像头，像元尺寸：3.6μm*3.6μm，有效像素：1280H*1024V，扫描方式：逐行，快门方式：电子快门电动位移台高精度电动XY 样品台，行程：75*50mm（120*80mm 可选），最小步进：50nm，重复定位精度：＜ 1μm光谱仪320mm 焦距影像校正单色仪，双入口、狭缝出口、CCD 出口，配置三块68×68mm 大面积光栅，波长准确度：±0.1nm，波长重复性：±0.01nm，扫描步距：0.0025nm，焦面尺寸：30mm(w)×14mm(h)，狭缝缝宽：0.01-3mm 连续电动可调探测器：制冷型紫外可见光电倍增管，光谱范围：185-900nm（标配，可扩展）光谱CCD（可扩展PLmapping）低噪音科学级光谱CCD（LDC-DD），芯片格式：2000x256，像元尺寸：15μm*15μm, 探测面：30mm*3.8mm，背照式深耗尽芯片，低暗电流，*低制冷温度-60℃ @25℃环境温度，风冷，最高量子效率值95%时间相关单光子计数器（TCSPC）时间分辨率：16/32/64/128/256/512/1024ps… … 33.55μs，死时间＜ 10ns，*高65535 个直方图时间窗口，瞬时饱和计数率：100Mcps，支持稳态光谱测试；OmniFluo-FM 荧光寿命成像专用软件控制功能：控制样品平移台移动，通过显微镜的明场光学像定位到合适区域，框选扫描区域进行扫描，逐点获得荧光衰减曲线，实时生成荧光图像等数据处理功能：自动对扫描获得的FLIM 数据，逐点进行多组分荧光寿命拟合（组分数小于等于4），对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示图像处理功能：直方图、色表、等高线、截线分析、3D 显示等操作电脑品牌操作电脑，Windows 10 操作系统软件界面控制测试界面测试软件的界面遵循“All In One”的简洁设计思路，用户可在下图所示的控制界面中完成采集数据的所有步骤：包括控制样品平移台移动，通过显微镜的明场光学像定位到合适区域，框选扫描区域进行扫描，逐点获得荧光衰减曲线，实时生成荧光图像等。数据处理界面功能丰富的荧光寿命数据处理软件，充分挖掘用户数据中的宝贵信息。可自动对扫描获得的FLIM 数据，逐点进行多组分荧光寿命拟合（组分数小于等于4），对逐点拟合获得的荧光强度、荧光寿命等信息生成伪彩色图像显示。自主开发的一套时间相关单光子计数（TCSPC）荧光寿命的拟合算法，可对荧光衰减曲线中最多包含4 个时间组分的荧光过程进行拟合，获得每个组分的荧光寿命，光子数比例，计算评价函数和残差。TCSPC 荧光寿命通常并非简单的指数衰减过程，而是与光源及探测器相关的仪器响应函数（IRF）与荧光衰减过程相互卷积的结果，因此适当的拟合方法和参数选择对获得正确可靠的荧光寿命非常重要。该软件可导入实际测量的IRF 对衰减曲线进行卷积计算和拟合。但是大多数情况下， IRF 很难正确的从实验获得，针对这种情况，软件提供了两种无需实验获取IRF 的拟合方法：1.通过算法对数据上升沿进行拟合，获得时间响应函数IRF，然后对整条衰减曲线进行卷积计算和拟合得到荧光寿命。2.对于衰减时间远长于仪器响应时间的，可对衰减曲线下降沿进行直接的指数拟合。该软件经过大量测试，可以很好的满足各种场合的用户需求。MicroLED 微盘的荧光强度像（3D 显示）：

现在就考虑起来升级你的激光扫描显微镜吧！！！德国refined-laser专为相干拉曼散射显微术（CRS)设计的全光纤双色激光器。 refined-laser激光器调谐机制使系统没有机械延迟，并允许同步双色脉冲舒适地光纤传输。通过保偏光纤技术，限度地降低了对维护和环境条件的要求。 该产品有以下几大特点： 1. 可用调谐速度 光子晶体光纤中波长转换的宽调谐范围；每一波长步调谐小于5ms；保持可选双输出之间的时间重叠 2. 为移动操作而设计 采用光纤技术，结构紧凑、坚固、可移动；不需要光学工作台-经证明可抵抗高达25米/秒的冲击；用于柔性和屏蔽脉冲传输的可选光纤输出 3. 舒心而为的操作体验 即插即用安装（可以和任一激光扫描显微镜搭配使用） ；风冷激光头；免提操作 主要应用：生物医学成像 使用两个不同颜色的同步激光束探测样品中的分子振动，不依赖于标记，例如使用染料。这种无标签的特性导致了它在生物医学领域的成功，是将CRS转变为临床环境的主要动力。 实时成像复杂的技术和生物样品含有丰富的不同成分，每种成分都有一组独特的分子振动。由于我们的双色激光的激发波长可以在5毫秒内调谐到特定的振动，因此对这些样品进行实时多色成像成为可能。在这样的调谐速度下，假设调谐和图像采集的时间跨度相等，每秒可成像100个用户可选择的振动分量。这是CRI应用于手术室等时间关键环境或大型研究中多个样本的重要前提。 应用CARS应用：（1）CARS 显微镜对脂肪储存的无标记成像依赖于 C-H 的固有分子振动，同时使 用 CARS 和双光子激发荧光（Two-photon excited fluorescence,TPEF）成像可以实现中性脂滴和自发荧光肠道颗粒的无标记可视化，用于分析脂质储存的遗传变异和代谢途径之间的关系[4]。图 CARS与双光子荧光信号用于脂滴成像[9]SRS应用：（1）用于对脂类分子定量地观察其空间分布。为了更好地了解肥胖及其相关代谢问题，需要深入 分析脂肪在细胞水平和组织水平积累的调控机制。SRS显微术使追踪脂类分子的动态活动成为可能，为解释与脂质相关的生理现象与机制提供了新的方法。（2）SRS用于准确地运输过程及定位，进而分析药物分子对特定生理功能的实现作用。 例如下图所示，使用SRS 显微镜观察了组织中无标记的药物输运情况。二甲亚砜(DMSO)和维甲酸(RA)两种物质在小鼠皮肤组织中的转运过程图像。二甲亚砜和维甲酸亲水性不同, 通过角质层的方式也不同。 SRS 图像显示了这两者在输运方式上的差别和在角质层中的分布, 具有很强的药代动力学探测能力[8]。