用于组织破碎,有哪种超声破碎仪好?匀浆机跟超声破碎仪有什么区别吗?
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式,一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。超声破碎的条件一般是300 w,10 s/10 s,20分钟,具体条件可根据自身情况而定。 超声前菌体的准备:菌液离心后,先用PBS将菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体,裂解液的成分:50 mMTris-HCl, pH8.0, 2 mM EDTA,100 mM NaCl,加溶菌酶至100 ug/ml,0.1%Triton X-100。切记冰浴超声! 如何判断是否超声完全:根据网友的经验,一般有以下几个方面: 1. 外观判断:超声前菌悬液是浑浊的,超声完全后变的透明、清澈。2. 液体的粘滞性:超声后菌液从枪头滴下不粘连。3. 高速离心:有用高速离心检测超声破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般离心收集菌体的转速高一点)。 沉淀是未破碎或破碎不完全的菌体。 4. 染色:破碎后的菌液涂片,革兰氏结晶紫溶液染色0.5分钟,镜检。超声后加入核酸酶消除核酸对蛋白的污染。一些需要注意的问题: 1. 蛋白以包涵体形式表达,追求的是高破碎率,要求细胞碎片很小,而另一种蛋白是可溶形式表达,所以细胞碎片不能很小,两种情况要求不同但目的相同,都是便于后期的固液分离。2. 如果超声时出现黑色沉淀,说明超声功率太强。3. 超声时间太长、功率太高对蛋白活性肯定有影响。4. 尽量防止泡沫的产生。
超声破碎的原理:超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时,摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动,使部分能量转化为局部高热(42-43℃)。空化效应是在超声照射下,生物体内形成空泡,随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外,空化泡破裂时产生瞬时高温(约5000℃)、高压(可达500×104Pa),可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应,超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化,引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。所以如果使用玻璃管,可能会碎裂,而通常使用的是塑料试管。 1、大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候,用含有1%triton-X-100的PBS悬浮,然后超声的效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。 2、3、酵母破碎的问题/a、一般的PROTOCOL都是用glass beads,破碎酵母细胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠,效率很高,而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。 b、化学裂解的方法,10g酵母 加1ml的乙酸乙酯,充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的。加尿素裂解液(尿素8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH值8.0),据说效果可以c、毕氏酵母细胞破碎法文献上的方法: The pelleted cells were resuspended in 200 ll 1±8 M NaOH, 1±2 M b-mercaptoethanol, and incubated for 5 min on ice. After addition of 200 ll 10%TCA, the mixture was incubated for 5 min, centrifuged, and the pellet was resuspended in 50 ll 2?SDS-PAGE loading buffer and neutralized at pH 7±0 by adding 5±10 ll 1 M Tris base. The samples were heated to 95 °C for 3 min before loading onto SDS-PAGE gels (12% acrylamide). 若是想得到胞内蛋白可以用蜗牛酶处理,效果比较好!
刚买了个配件国产超声破碎探头,1500RMB大家觉得如何?
8.0,加入后需静置20min),进行超声破碎,超声条件:400W,工作5秒,间隔5秒,重复一定次数,(根据我们的仪器找出一个比较好的工作条件)。直至菌体溶液变清澈为止,大约花费时间 。2.2.2 取少量经超声破碎后的菌液,10000rpm离心10分钟,分别对上清和沉淀进行检测,并用全菌作为阳性对照,检测菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。注意事项:(1) 超声破碎具体条件可根据实验情况而定,要掌握好功率和每次超声时间,降低蛋白被降解的可能。(2) 功率大时,每次超声时间可缩短,不能让温度升高,应保持在4度左右,超声时保持冰浴。(3)菌体破碎后总蛋白浓度的测定可用Bradford 法或者紫外吸收法。(4)可通过SDS-PAGE 电泳观察菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式一种是在强启动子条件下的高效表达,由于蛋白的过度表达,使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲,以固体颗粒的形式堆积于胞间质中,这就是所说的包涵体,另外一种是间质内的可溶性表达,即可以发生正常折叠,具有生物活性。一般情况下,细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开。 超声破碎的条件一般是300w,10s/10s,20分钟,具体条件可根据自身情况而定。超声前菌体的准备:菌液离心后,先用PBS将菌沉淀洗2-3遍,然后按原菌液体积的1/5-1/10加入裂解液重悬菌体,裂解液的成分:50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA,100mM NaCl,加溶菌酶至100ug/ml,0.1%Triton X-100。切记冰浴超声!
请问大家用的超声破碎仪都是什么厂家的啊,性能怎么样,实验室准备购买,但不知道什么厂家的性价比比较好,请教各位了!
非接触式超声波细胞裂解系统SL型型号简介:非接触式超声波细胞裂解系统可获得传统超声方法无可比拟的质量、效率和安全性,在分子生物学研究领域样品前处理掀起一场新的浪潮。用途广泛, 常用于细胞的破碎、裂解,细胞颗粒的释放。尤其是应用于腺病毒的微粒释放,除适合制备高效价的重组腺病毒外,还可以制备病毒DNA,DNA终端蛋白化合物,同时是土壤样品制备的理想仪器。已经成为CHIP(染色质免疫共沉淀)研究平台不可缺少的标准化工具。特点:1.无气雾浮质产生-增强生物安全性,用于无菌操作; (如:分支杆菌,乙肝病毒,甲肝病毒,流感(包括H1N1),非典病毒SARS);2. 消除了样品交叉污染的危险;能隔着离心管能打断染色体、破碎细胞。3.消除了传统的手持探头,固定探头的繁琐,带有消音压紧装置;4.可有效阻止样品泡沫的产生;5.中文液晶显示,功率可以微调,击进方式可每次5W微调;6.采用周期性的脉冲破碎细胞,脉冲的启动和终止时间可调,可调时间精确至0.1秒7.可处理多种样品,样品处理范围广泛;8.可使用标准地可抛弃式容器 (PCR tubes Eppendorf, 1.5~50ml Corning/Falcon tubes) ;9.可用于处理微量样品;最少到5uL;10.可一次性处理4~32个样品,需选择相应的型号;11.自动的连续旋转离心管则使超声波的能量分布更为均匀,数据专一,且可以重复;12. 带冷却水循环槽,可选配低温冷却液循环机,避免了破碎过程中温度过高,影响病毒的感染力。
超声波细胞破碎仪是一种利用超声波在液体中产生空化效应的多功能、多用途仪器;用于多种动植物、病毒、细胞、细菌及组织的破碎,同时可用来乳化、分立、裂解、匀化、提取、消泡、清晰、纳米材料的植被、分散及加速化学反应等。主要技术参数:1.超声功率常用超声输出功率有150W、250W、650W、1000W、1200W、1800W不等,亦有功率可调类型。因此超声破碎仪可以按照功率大小分150W到1800W等各个型号; 2.破碎容量超声波细胞破碎仪的破碎容量有0.5-500ml、0.5-600 ml、10-100 ml、50-1000 ml、550-1200 ml不等,所配破碎杯根据实验样品的量选择;一般根据超声功率和破碎容量即可选定型号。 3.温度控制一般超声输出功率650W以上都配有温度控制功能,可以防止样品过热破坏样品;4.控制面板控制面板有传统的旋钮式操作面板与较先进的大屏液晶显示两种类型,液晶显示操作简便,并带有程序存储功能。
大肠杆菌表达外源蛋白,在超声破碎的时候,用含有1%triton-X-100的PBS悬浮,然后超声的效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品1buffer,再加5ul的巯基乙醇,混匀,离心,煮沸10min,直接上样,染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮10min 就可以。 在表达重组蛋白后超声波破碎细胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一会就产生大量泡沫,影响了破碎功率,pbs和tris缓冲液都是这样,最后都是破碎不完全,而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部,约1cm(我一般是距底部0.5mm)。功率根据仪器不同会有所不同,但你可以观察液面,有波动但不要太剧烈就好。2*破3S停10S,破个二三十次看看。 3*变幅杆位置摆放也要注意,听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。 在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过60%. 4*尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说,你的方法很难散热,导致蛋白变性产生气泡,最好停顿时间稍长一些,这种情况多见于包涵体形式的蛋白。链霉菌(放线菌)超声破碎的,用的方法条件是什么?前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声破碎时采用的具体条件是:(1)取细菌的24 h培养液于5 000 r/min 下离心5 min收集菌体.(2)用pH 7.5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1:3的菌悬液.置于40 mL大塑料试管内.(3)将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波破碎(功率200 W,1/2”探头,破碎30 s,间歇30 S).(4)破碎液于12 000 r/min下高速冷冻离心30 min,收集细胞碎片和上清夜. 超声破菌流程与 上述基本一致,就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris-HCl,洗涤一次就可以。另外,超声剂量随样品量、菌体改变比较大,功率可以到400-600w,超5s,停5s,冰浴,要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数,有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。 放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%)高的革兰氏阳性菌(Eubacteria)分枝类群,它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性,但在其不同类群中,细胞壁的化学组分变化很大。 在做大肠杆菌超声时,采用的是400W,超5停5的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,似乎没什么效果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢,因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。 再有镜检是检验破碎效果,但是细胞破碎程度和我需要的酶获得之间有正比关系吗?破碎时间长也会影响到酶的活性。所以想问问anaisai战友,你提供的“功率200 W,1/2”探头,破碎30 s,间歇30 S”的条件好像是用于破碎链霉菌孢子的,也可以用于发酵离心后的菌泥吗?如果可以,你破碎的全程时间大概是多少呢? 如果你需要的是胞内酶,细胞破碎程度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断,最直接的办法是先绘制相关曲线(酶活性和时间的关系曲线)。 实验中,破碎的是棒状杆菌(也是很难破壁的G+菌),破碎时间控制在30min左右,酶活较好。
超声波细胞破碎仪是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。常规使用方法是把要破碎的材料放到烧杯中,开电源设定时间(震动时间和间歇时间),将破碎仪的探头放到材料中。使用过程中,超声波发生器电路将50/60Hz的市电转换成18-21KHz的高频高压电能,因此破碎过程中会大量产热,一般在冰浴下破碎。超声波细胞破碎仪的两大组成部件为超声波发生器和换能器(有的配置有隔音箱)。1、超声波发生器:工作原理:由信号发生器来产生一个特定频率的信号,这个特定频率就是换能器的频率,一般应用在超声波设备中的超声波频率为20KHz、25KHz、28KHz、33KHz、40KHz、60KHz。2、换能器组件:换能器组件主要由换能器和变幅杆组成。3、隔音箱:可以有效地的降低工作过程中的所发出的噪音,保持实验室安静。超声波细胞破碎仪在我国的行业推广已进入成熟阶段,而应用仍不够普及!该仪器(设备)应用范围非常广泛,这是其它仪器设备所不能比拟的。也正因如此,该仪器(设备)的市场潜力很大,所以生产厂家也日趋增多,这也同时造成了超声清洗行业及市场的相对混乱,可以用八个字来形容“鱼龙混杂,良莠不齐”!超声波细胞破碎仪分类如下:一、按探头(“tip”)直径分类处理不用体积的样品需要选择不同“tip”头的超声波破碎仪。由于各制造厂家的产品结构不同,其“tip”头直径不尽相同。一般“tip”头从微量5mm(适合1ml处理量)到25mm(适合1000ml处理量),有连续流探头,处理量可达80升/小时。可能会发生磨损的高能应用中会用到可更换“tip”头。当能量通过“tip”头被传递时,金属表面留下痕迹的地方会发生腐蚀。随着时间的推移,发生腐蚀的地方会产生轻微的蚀损斑。“tip”头可以用砂纸或纱布来打磨,除非是损坏到一定的程度;当这种情况发生时,“tip”头将很难进行调谐频率,取而代之的可能是发出长而尖的噪音,最终产生裂纹。 要有效地加工给定剂量的样品,有两个主要的因素需要考虑:“tip”头尺寸和输出功率。这两个因素必须同时匹配才能获得最佳效果。小功率大“tip”头,则“tip”头无法工作;而太大的功率则“tip”头可能损坏。购买时请注意所需型号附件。二、按功率分类超声波细胞破碎仪的功率大小是客户的首选指标,它决定着被破碎物的数量、大小、质量及效果。所以各生产厂家对此指标也都非常重视。一般情况下,实验室、化验室、研究所、药品检验所等科研单位,使用的功率都不大,(一般在500W以下);而生物公司、制药厂、化工企业等生产单位,所用的功率大都在500W-2000W左右。由于各制造厂家的产品结构不同,其功率的标注方法也不尽相同。不过按照用户常用的惯例,一般有以下几种:50W、100W、150W、250W、300W、350W、500W、1000W、2000W。一般超声波细胞破碎仪输出功率可根据需要适度调节。 标准超声波细胞粉碎机产品的额定工作频率是20千赫兹。一些超声波细胞粉碎机有自动调谐功能可以使频率在一个小的范围内变化。
超声波细胞破碎仪是利用一种超声波在液体中产生的空化效应而使目标细胞破碎的多功能、多用途的仪器。超声波细胞破碎仪的原理:由换能器将电能转换为超声能,超声能量作用于液体介质产生密集的空泡,随着空泡的生长破裂,产生巨大的剪切力及高温高压,从而起到将目标细胞破碎乳化的目的。超声波细胞破碎仪用途广泛:1、超声波提取生物纳米在超声波化学反应中,由空化效应产生的强压力脉冲,能够产生许多化学合成所要求的高温高压,超声波化学合成所利用的正是空化效应的能量,利用这些能量能在一些特殊粉末表面合成出需要的纳米粒子。 2、超声波制药(1)注射用药的细化、均化——将磷脂类与胆固醇混合用适当方法与药物混合在水溶液中,经超声细化、均化得到更小的利于静脉注射的微小药物粒子。(2)中草药提取——利用超声分散破坏植物组织,加速溶剂穿透组织作用,提高中草药有效成分提取率。如金鸡纳树皮中全部生物碱用一般方法侵出需5小时以上,采用超声分散只要半小时即可完成。(3)制备混悬剂——在超声空化和强烈搅拌下,将一种固体药物分散在含有表面活性剂的水溶液中,可以形成1um左右口服或静脉注射混悬剂。例如“静注喜树碱混悬剂”、“肝脏造影剂”、“硫酸钡混悬剂”等。(4)疫苗制备——将细胞或病菌借助于超声作用将其杀死以后,再用适当方法制成疫苗。 3、超声波对化妆品的分散为了更进一步提取药物精华和粒子微细化,并节约生产成本,达到分散、乳化效果,使化妆品更深入渗透到肌肤里层,让肌肤很好的吸收,发挥药物的效力和作用,采用超声波乳化可达到非常理想的效果。 4、超声波对酒的醇化酒味醇厚的主要影响因素是酸的形成、酯化。刚出厂的白酒含有戍醇,有辛辣味,传统制造时,这种气味要经过很长时间贮藏才能使酒味变醇。而利用超声波处理的白酒可使酒的老熟时间缩短1/3到1/2。超声波细胞破碎仪可以并且已经被广泛用于生物化学、微生物学药理学、物理学、动物学、农学、医学、制药等领域的教学、科研、生产。
我看到一篇外文文献提到,将碳纳米管转移到塑料离心管,用探头超声破碎仪将碳纳米管分散到水中,然后又离心分离该悬浮液(根据英文翻译,大概是这个意思) 不清楚超声破碎仪是干啥的,以上这一步是什么作用? 谢谢。
之前仪器自动进样时,泵停止,发现针座处液相小瓶在进样的时候破碎。清理之后进样,针座处漏液,怀疑是碎片进入针座,于是反冲,拆下来超声,接泵头反冲,压力降下来了,然而进样依旧漏液。最后工程师将针座针头全部换了新的,进样正常了。猜测原因是进样小瓶的隔垫需要及时更换。但是一周之后又出现了进样小瓶破碎的现象。隔垫已经是全新的了。现在不知道什么原因,但是每一次破碎都是因为加了内衬管,内衬管之前进样也没出现过问题啊,所以想请大家来讨论一下,有什么原因,或者说是针的位置低吗?
随着分子生物学的快速发展,许多实验的目标物质都是细胞内物质,要进行实验研究或产物收集就必须将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取,因此细胞破碎就变成了提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将常用的几种细胞破碎方法介绍如下。1.超声波破碎 利用超声波高强度声能产生的空化现象引起冲击波和剪切力进行细胞破碎。超声破碎的效率与超声频率、超声功率、处理时间、细胞浓度及处理量等因素有关。 不足及须加强的问题:超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但超声波产生的化学自由基团可能使某些敏感性活性物质变性失活影响实验结果。且大容量装置声能利用率低,装置散热性差。2.生物酶溶法 就是用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶β-1.3-葡聚糖酶、蛋白酶等。 不足:易造成产物抑制作用,这可能是导致胞内物质释放率低的最主要因素。而且溶酶价格高,限制了大规模利用。若回收溶酶,则又增加分离纯化溶酶的操作。另外酶溶法通用性差,不同菌种需选择不同的酶。3.物理珠磨法 微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混合,珠子之间以及珠子和细胞之间和互相剪切、碰撞,使细胞壁破碎,释出内容物,在珠波分离器的协助下,珠子被滞留在破碎室内,浆液流出,从而实现连续操作,破碎中产生的热量由夹套中的冷却液带走。缺陷:效能利用率仅为1%左右,且破碎过程产生大量的热能无法利用。4.化学渗透法 某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使细胞内容物物有选择地渗透出来。其作用机理;化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 不足:时间长,效率低;化学试剂毒性较强,同时对产物也有毒害作用,进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂;通用性差。
随着重组DNA技术得到广泛应用以来,生物技术发生了质的飞跃。很多基因工程产物都是胞内物质,必须将细胞破壁,使产物得以释放,才能进一步提取,因此细胞破碎是提取胞内产物的关键步骤,破碎方法的得当与否,直接影响到所提取产品的产量、质量和生产成本。现将近年来常用的几种细胞破碎方法介绍一下。 1. 高压匀浆法 设备是高压匀浆器,它由高压泵和匀浆间组成,美国Microfluidics公司和ATS公司均有产品出售。其破碎机理:细胞在一系列过程中经历了高速造成的剪刀,碰撞以及由高压到常压的变化从而造成细胞的破碎。 存在的问题;较易造成堵塞的团状或丝状真菌,较小的革兰氏阳性首以及有些亚细胞器,质地坚硬,易损伤匀浆阀,也不适合用该法处理。 2. 高速珠磨法 设备是珠后机,瑞士WBC公司和德国西门子机械公司均制造各种型号的珠磨机,其破碎机下:微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌浆作用下充分混合,珠子之间以及珠子和细胞之间和互相剪切、碰撞,促使细胞壁破碎,释出内含物,在珠波分离器的协助下,珠子被滞留在破碎室内,浆液流出,从而实现连续操作,破碎中,生的热量由夹套中的冷却液带走。 存在的问题:操作参数多,一般赁经验估计并且珠子之间的液体损失30%左右。 3. 超声破碎 频高于15-20KHz的超声波在高强度声能输入下可以进行细胞破碎。其破碎机理:可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关。超声破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞浓度及首种类型等因素有关。 存在问题;超声波破碎在实验室规模应用较普遍,处理少量样品时操作简便,液量损失少,但是超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质变性失活。而且大容量装置声能传递,散热均有困难。 4. 酶溶法 就是用生物酶将细胞壁和细胞腊消化溶解的方法。常用的溶酶有溶菌酶β-1.3-葡聚糖酶、蛋白酶等。 存在的问题;易造成产物抑制作用,这可能是导致胞内物质释放率低的一个重要因素。而且溶酶价格高,限制了大规模利用。若回收溶酶,则又增加百分离纯化溶酶的操作。另外酶港法通用性差,不同菌种需选择不同的酶。 5. 化学渗透法 某些有机溶剂(如苯、甲苯)、抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性从而使内合物有选择地渗透出来。其作用机理;化学渗透取决于化学试剂的类型以及细胞壁和膜的结构与组成。 存在的问题;时间长,效率低;化学试剂毒性较强,同时对产物也有毒害作用,进一步分离时需要用透析等方法除去这些试剂;通用性差:某种试剂只能作用于某些特定类型的微生物细胞。 本文介绍了几种细胞破碎的方法,可谓各有千秋,在实际应用中,应尽量考虑全面,选择最科学、有效的方法。
我想问超声破碎仪能用于细胞器分离吗?有人做过相关实验吗?其中的原理是怎么样的呢,是用不同的能量打碎不同的细胞器吗?还是……?
除了某些细胞外的多肽激素和某些蛋白质与酶以外,对于细胞内或多细胞生物组织中的各种生物大分子的分离纯化,都需要事先将细胞和组织破碎,使生物大分子充分释放到溶液中,并不丢失生物活性。不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织,其细胞破碎的难易不一,使用的方法也不相同,如动物脏器的细胞膜较脆弱,容易破碎,植物和微生物由于具有较坚固的纤维素、半纤维素组成的细胞壁,要采取专门的细胞破碎方法。1.机械破碎(1)研磨研磨是将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中,加入少量石英砂研磨或匀浆,即可将动物细胞破碎,这种方法比较温和,适宜实验室使用。工业生产中可用电磨研磨。细菌和植物组织细胞的破碎也可用此法。(2)匀浆匀浆这是一种较剧烈的破碎细胞的方法,通常可先用家用食品加工机将组织打碎,然后再用10000r/min-20000r/min 的内刀式组织捣碎机(即高速分散器)将组织的细胞打碎,为了防止发热和升温过高,通常是转10秒-20秒,停10秒-20秒,可反复多次。(3)胶体磨胶体磨的基本原理是流体或半流体物料在离心力的作用下,强制通过高速相对运动的定齿与动齿之间,使物料受到强大的剪切力,磨擦力、高频振动和高速旋涡等复杂力等作用,有效地被粉碎、乳化、均质、混合,从而达到精细超微的效果。定转子间的高速相对运动是使胶体磨工作获得物理微细度的主要条件,只有提高磨盘的精密度与线速度,才能达到良好的加工效果。2. 物理破碎(1)压榨压榨是一种温和的、彻底破碎细胞的方法。在1000×105Pa-2000×105Pa 的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压,细胞将彻底破碎。这是一种较理想的破碎细胞的方法,但仪器费用较高。(2)冷热交替冷热交替是在90℃左右维持数分钟,立即放入冰浴中使之冷却,如此反复多次,绝大部分细胞可以被破碎,细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此技术。(3)反复冻融反复冻融是将待破碎的细胞冷至15℃-20℃,然后放于室温(或40℃)迅速融化,如此反复冻融多次,由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞破碎。(4)超声波超声波是借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。破碎微生物细菌和酵母菌时,时间要长一些,处理的效果与样品浓度和使用频率有关。使用时注意降温,防止过热。3.化学与生物化学破碎(1)有机溶剂有机溶剂是利用氯仿、甲苯、丙酮等脂溶性溶剂或SDS(十二烷基硫酸钠)等表面活性剂处理细胞,可将细胞膜溶解,从而使细胞破裂,此技术也可以与研磨法联合使用。(2)自溶自溶是将新鲜的生物材料存放于一定的pH 和适当的温度下,细胞结构在自身所具有的各种水解酶(如蛋白酶和酯酶等)的作用下发生溶解,使细胞内含物释放出来,此法称为自溶法。该法使用时要特别小心操作,因为水解酶不仅可以使细胞壁和膜破坏,同时也有可能会把某些要提取的有效成分分解。(3)溶胀溶胀是在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中,由于存在渗透压差,溶剂分子大量进入细胞,将细胞膜胀破释放出细胞内含物。(4)酶解酶解是利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、蜗牛酶和酯酶等,于37℃,pH8,处理15分钟,可以专一性地将细胞壁分解,释放出细胞内含物,酶解破碎适用于多种微生物。例如从某些细菌细胞提取质粒DNA 时,可采用溶菌酶(来自蛋清)破细胞壁,而在破酵母细胞时,常采用蜗牛酶(来自蜗牛),将酵母细胞悬于0.1mmol/L 柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液(pH=5.4)中,加1%蜗牛酶,在30℃处理30分钟,即可使大部分细胞壁破裂,如同时加入0.2%疏基乙醇效果会更好。此法可以与研磨联合使用
超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它是一种波动形式,因此它可以用于探测人体的生理及病理信息,既诊断超声。同时,它又是一种能量形式,当达到一定剂量的超声在生物体内传播时,通过它们之间的相互作用.超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它是一种波动形式,因此它可以用于探测人体的生理及病理信息,既诊断超声。同时,它又是一种能量形式,当达到一定剂量的超声在生物体内传播时,通过它们之间的相互作用,能引起生物体的功能和结构发生变化,即超声生物效应。超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时,摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动,使部分能量转化为局部高热(42-43℃),因为正常组织的临界致死温度为45.7℃,而肿瘤组织比正常组织敏感性高,故在此温度下肿瘤细胞的代谢发生障碍,DNA、RNA、蛋白质合成受到影响,从而杀伤癌细胞而正常组织不受影响。空化效应是在超声照射下,生物体内形成空泡,随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡,使肿瘤出血、组织瓦解以致坏死。另外,空化泡破裂时产生瞬时高温(约5000℃)、高压(可达500×104Pa),可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应,超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化,引起细胞结构损伤。杀伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。工作原理 同时,它又是一种能量形式,当达到一定剂量的超声在生物体内传播时,通过它们之间的相互作用.超声波是物质介质中的一种弹性机械波,它是一种波动形式,因此它可以用于探测人体的生理及病理信息,既诊断超声。同时,它又是一种能量形式,当达到一定剂量的超声在生物体内传播时,通过它们之间的相互作用,能引起生物体的功能和结构发生变化,即超声生物效应。超声对细胞的作用主要有热效应,空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时,摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动,使部分能量转化为局部高热,因为正常组织的临界致死温度为45.7℃,而肿瘤组织比正常组织敏感性高,故在此温度下肿瘤细胞的代谢发生障碍,DNA、RNA、蛋白质合成受到影响,从而杀伤癌细胞而正常组织不受影响。空化效应是在超声照射下,生物体内形成空泡,随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡,使肿瘤出血、组织瓦解以致坏死。另外,空化泡破裂时产生瞬时高温、高压,可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应,超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化,引起细胞结构损伤。杀伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。超声波细胞破碎仪的原理并不是太神秘、太复杂。简单说就是将电能通过换能器转换为声能,这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡,这些小气泡迅速炸裂,产生的象小炸弹一样的能量,从而起到破碎细胞等物质的作用
[color=#333333]1.用专用的电源线连接发生器背面的电源输入接口(220VAC 50Hz),把换能器组件的信号输入接口与发生器的信号输出接口连接,把温度传感器(选配)连接到温度计接口,把换能器组件插入隔音箱顶部中间的专用孔内,把被破碎的物质放置在隔音箱的升降台上,把升降台上升至变幅杆浸入溶液10mm-15mm。即完成了本仪器的安装。[/color][color=#333333] 2.检查仪器后面板上变幅杆选择开关是否选择在与变幅杆相应的位置。一般新仪器或新配的变幅杆应与选择开关对应。[/color][color=#333333] 3.打开电源开关,指示灯亮。[/color][color=#333333] 4.数据设定或查询:[/color][color=#333333] 用户在使用时,可根据前次设定的数据直接启动(掉电自动保存设置数据),也可重新设定:间隙时间(S)、超声时间(S)、全程时间(min)和仪器保护温度(℃)。(在设定过程中,连续两次按键的间隔应小于5秒,否则机器会跳出设定程序)设定方法如下:按设置键,最左边显示窗显示“-l”,进入间隙时间设定状态,此时最右边显示窗所显示的是出厂数据,如需重新输入数据则按置数键(+10 、+01此时间单位为秒),置数完后再按功能键进入下一个功能设定。(如不修改数据可直接按功能键)进入下一项功能设定:此时最左边显示窗显示“-2”,表示进入超声时间设定状态,按置数键(+10 、+01),设置超声时间(最好10秒以下),完成后再按功能键,此时最左边显示窗显示“-3”,进入全程时间设定,按置数键设置全程时间(此时时间单位为分),完成后再按功能键,最左边显示窗显示“-4”,表示进入仪器保护温度设定,按置数键设置仪器保护温度(一般为50℃),所有功能设置完后在确认无误时按设置键.再按开/停键即开始按你所设置的各项功能数据开始工作,最左边显示窗开始倒计时,超声指示灯(开),间隙指示灯(停)轮换亮,待全程工作时问过后,中间显示窗显示全程时间,并闪烁跳动,自动报警并停止工作。如需重复上述实验,先按数据恢复键再按开/停键即开始工作。如工作中需暂停,请再次按开/停键,以此类推。[/color][color=#333333] 在设定期间,按设置键则退出设定状态,返回工作状态并自动保存已设定的数据。[/color][color=#333333] 当由于外部信号出现故障或出现保护的情况时,则保护指示灯亮,仪器停止工作,此时提示工作人员排除故障,待排除故障后,按保护复位键恢复正常工作。[/color][color=#333333] 5.功率调节:通过调节面板上的两只功率加减键,从而得到您所需要的功率值.(建议您最好在超声间隙时调节功率)[/color][color=#333333] 6.[b][url=http://www.chinanoted.com/]超声波破碎仪[/url][/b]简易操作方法:按设置键 按功能键 按置数键(-1间隙时间设定) 按功能键 按置数键 (-2超声时间设定) 按功能键 按置数键(-3全程时间设定)[/color]
问题:本项目主要从事废旧塑料的分选粉粹及清洗,本项目以废塑料瓶为原料,通过以下工艺:1,人工分拣:废塑料经人工分选去杂物后,通过传送带送入破碎机破碎。2,湿法破碎:废塑料破碎前浸湿后在密闭的破碎机进行湿法破碎。3,清洗及脱水:对破碎后的废塑料用清水清洗并脱水后即可得到废塑料破碎原料(主产品)。 请问本项目是否可以豁免办理环境影响评价?回复:根据《建设项目环境影响评价分类管理名录(2021年版)》第五条以及“三十九、废弃资源综合利用业”有关规定,分拣、破碎的废塑料处理项目不纳入环评管理。建议进一步结合项具体情况,径向当地生态环境部门咨询。
实验室常用来破碎大肠杆菌,用于提取表达外源蛋白等试验,在超声波破碎大肠杆菌过程中常常温度探头测得大肠杆菌菌液中温度逐渐升高,有可能会致使热敏物质失活,该怎么解决呢?今天来谈谈在超声波细胞破碎仪处理大肠杆菌过程中降低温度的解决措施。 超声波细胞破碎仪在处理大肠杆菌过程中,由于超声波的空化效应会产生大量的热使菌液的温度逐渐升高,所以我们在处理样品的时候一定要采用冰浴或者其他降温方法,在这您提供两点建议,一种是用实验室的碎冰来做冰浴,示意图如下:(同学们的智慧是无穷的,此图来自于中国药科大学某实验室正在处理大肠杆菌) http://www.shunmayq.com/Upload/image/dachangganjun.jpg (图中液体为冰水混合物,也可以用碎冰) 另外一种方法一般适用于50或者50毫升以上超声细胞破碎仪处理大肠杆菌时使用。图片中超声波细胞破碎仪,。您可以将菌液放置于我们特制的双层夹套反应杯中,在冷却水循环系统上设置好您需要的温度,就可以放心实验不必担心菌液的温度升高啦 http://www.shunmayq.com/Upload/image/1234.jpg 与此同时,在处理大肠杆菌过程中实验条件摸索也来得尤为重要。功率是根据您的处理量多少来调节的,我们建议如果可以用小功率来处理样品切忌用大功率,功率越小对应的超声波的热效应也会相对降低,另外超声时间尽量放短,间隙时间尽量放长,例如超声1秒停2-3秒。
使用前请详细阅读操作说明手册 1.超声波破碎仪的背后,电源调压开关必须设置到220V位置 2.S150D标配1/8"微探头,使用时振幅请勿超过70% 3.探头请勿接触容器壁,否则可能损坏探头,或使玻璃器皿破损,待测样品会漏出 4.请勿在无待测样品时,使破碎仪探头空转,容易损坏仪器 5.使用超声波时,请勿触摸探头,否则可能导致重伤。若要拆下或着加装此类探头,请确认开关在OFF的位置 6.仪器底部有散热通风口,请勿堵塞。定期对其进行清理,避免灰尘堵塞通气口 7.安装时,在连接换能器与探头时,需加入一个标配的圆形垫片,并拧紧
作为精密科研仪器,大家在使用LC-CS650超声波细胞破碎仪时要注意哪些呢?下面就是几点常见的注意要点。1、切记将超声变幅杆插入样品后才能开机,防止空载对仪器的损伤。2、变幅杆探头入水深度:1到2 厘米之间,液面高度宜30mm以上,探头居中不可贴壁。3、超声参数设置: 1)时间:时间设定应以超声短时多次原则,超声工作时间应小于5秒,间隙时间应大于或等于超声时间,以便于热量散发。2)超声功率: 不宜太大,以免样品飞溅或起沫。小于10ml样品容量,功率应在200w以内,选用2mm超声探头(2MM的小探头功率严禁超过350W);10-200ml样品容量,功率应在200-400w,选用6mm超声探头;200ml以上的样品容量,功率在300-600w,选用10mm超声探头;(2MM的小探头功率严禁超过350W)3)破碎容器选择:根据样品量选择破碎杯(可用烧杯代替);参数设定实例:如100ml大肠杆菌样品设置参数:300W, 70次,超声5秒,间隙5秒(总时间为10分钟)。
[align=center] [b]中草药快速常温提取--组织破碎提取法(闪提)[/b][/align][align=left] 绿色提取(green extraction)是由本团队核心专家刘延泽教授于2013年在南京举行的全国第四届中草药提取分离关键技术与提取物产业化应用研讨会上首次提出,绿色提取是指:利用安全、易得、无毒、易回收、无残留的适当溶剂,将目标生物活性成分以最快的速度、最低的消耗、最大的收率从动植物材料中转移出来,并且实现目标活性成分与母体残渣全利用、零排放、零污染的一种或一类提取技术。2014、2015年又分别在长沙、青岛举行的全国第五届、第六届中草药提取分离关键技术与提取物产业化应用研讨会上进一步阐述其原理、应用成果和前景,得到了与会专家的热烈响应和一致认可。[/align] 绿色提取的基础是刘延泽教授等于1993年首次提出并在河南科学上发表的植物组织破碎提取法,当时主要是应用于热敏感成分丹宁及多元酚类化合物的提取。之后,相继在河南省、国家自然科学基金、科技部等的支持下研制出了实现这一方法的设备—中草药组织破碎提取器。经过20余年的实践证明,该方法不仅适用于几乎所有类别中药有效成分的提取,其独特的快速、节能、环保、可持续利用的优势是当今任何方法都无可比拟的,完全具有当今人类发展关键元素的“绿色科技、可持续利用、和谐自然”。但是,由于人们对新生事物的接受及其他多种因素的影响,目前经该方法研究的中草药尚不足百种,并且尽管几乎都取得了预期效果,但仍未真正应用到生产中去,与我们国家的近万种中草药和数十个应用领域相比仅仅沧海一粟,前景极其巨大。 本项目将在20余年成功实践的基础上,首先完善不同规格组织破碎提取器的研制和定型生产,满足本提取计划的需求,包括微量分析型(20ml)、实验研究型(2L)、中试规模型(200L)、和生产应用型(1000L);对一期目标中的药典提取物、单味中药提取物(药典)、国际标准提取物、特色中草药提取物(色素、香料、调味剂、添加剂)等进行提取。[b] [/b]中草药组织破碎提取器利用高速液体组织破碎、高速研磨、高速搅拌和超分子渗滤技术,在室温液体状态下数秒内把植物组织破碎、研磨至细微颗粒状,通过细胞组织的破裂和组织外围溶剂的快速渗透与包容,使组织内有效成分分子迅速解离并进入到溶剂体系中,并迅速实现药材组织内外有效成分分子浓度的平衡,达到快速提取的效果。产品特点及用途:● 室温提取、保护成分: 把溶解提取成分的溶剂装入提取容器内,再将适量中草药饮片也装入提取容器,物料和溶剂混合后在室温状态下进行组织破碎提取,有效的保护了热敏成分;● 剪切研磨、瞬间完成: 提取器利用高速液体组织破碎、高速研磨、高速搅拌和超分子渗滤技术,在30秒左右完成组织破碎提取过程;● 速度可调,对不同材料方便个性化处理;● 全不锈钢结构,耐各种有机溶剂;● 刀具与容器一体化设计,清洗更为容易,一冲即可;● 该仪器为集成了高速液体组织破碎、高速研磨、高速匀浆、高速搅拌功能与优势为一体的设备,广泛用于中草药提取、生物工程、农林化工、烟草化工、制药、保健食品、天然美容品、洗浴疗养品及轻工等领域。
颚破是以电动机为动力,通过电动机皮带轮,由三角皮带和槽轮驱动偏心轴,使动颚按预定轨迹作往复运动,从而将进入由固定颚板,活动颚板和边护板组成的破碎腔内的物品予以破碎,并通过下部的排料口将成品物料排出。颚式破碎机破碎腔的侧壁上安有螺钉或楔条固定的锰钢侧衬板。固定颚衬板除用螺钉固定外,下端在机架上焊有钢板,上端有压板,使固定颚衬板不致上下活动。动颚衬板下方支承在动颚下部的凸台上,上方由楔铁压紧。定颚、动颚上都有衬板,衬板上有齿牙,有助于破碎物料。衬板的作用是防止定颚、动颚受到磨损。心轴的两端由轴承支承,其上安有连杆。连杆的连杆头与杆身分开制造,电动机通过V带带动带轮及偏心轴。在连杆下方的凹槽中,装有推力板支座,前推力板及后推力板分别支承于支座上。偏心轴除在破碎机一端安有带轮外,在另一端安装飞轮。在后推力板与后支座之间,有一组垫板,用来调整排料口宽度。增加垫板厚度,使推力板和动颚向左方推移,颚式破碎机排料口减小。反之,减少垫板厚度,颚式破碎机排料口将增大。颚式破碎机破碎物料是经常可以看到的现象,只有充分分析整个的破碎过程,才能真正了解它的流程和工艺特点。通常来讲,如果精矿品位低,尾矿品位高和中矿产率大,往往是解离度不够造成的。所以碎矿和磨矿是选别前必不可少的作业。就矿物的组织看,除了少数极粗粒嵌布的矿石,仅用碎矿即获得相当多的单体解离颗粒以外,一般都必须经过磨矿,才能得到充分高的解离度。矿石被破碎后,只含一种矿物的粒子,称为单体解离颗粒;而几种矿物连生着的颗粒称为连生体。矿物的解离度,就是该矿物的单体解离颗粒数,与含该矿物的连生体颗粒数及该矿物的单体解离颗粒数之和的比值,用百分率表示。破碎产物过于粗,达不到应有的单体解离度,选出的精矿品位及回收率都差。相反,破碎产物过细不仅没有必要,甚至可能造成危害,因为破碎矿石会发生难以选别的微细粒。过粉碎的危害体现在:难以控制的微细粒多,精矿品位和回收率都差,设备的处理能力降低,颚式破碎机破碎矿石的无益的功率消耗增多。过粉碎的发生以磨矿过程为主,碎矿过程也有少量呈现。处理脆性矿石的钨锡矿重力选矿厂,更须重视此问题。发生过粉碎的原因,通常是:1、操作不当;2、碎矿细度超过最佳粒度;3、碎矿与磨矿流程不合理;4、所用设备与矿石性质不适应。
[b][color=#ff0000] 绿色快速提取技术--组织破碎提取法[/color][/b] 推荐“绿色快速提取技术”--《中草药组织破碎提取法》(闪提)。该技术的核心就是:在室温和液体状态下,利用高速破碎、精准研磨、和超分子渗透等技术,对药材进行瞬间组织破碎、研磨至细微颗粒,使药材组织细胞内的目标生物活性成分以最快的速度(60秒完成)、最低的能耗、和最大的收率迅速从细胞中解离出来进入溶剂体系中,且不会破坏热敏成分,实现药材组织细胞内外有效成分分子浓度平衡,从而达到快速提取之目的。 中草药组织破碎提取器,运用上述技术,从容器底部进行精准研磨,快速完成提取,该技术已申请到了专利。 《医药工业发展规划指南》:提到“提高制药设备的集成化、连续化、自动化、信息化、智能化水平。”中药装备有其特殊性,中药的原料为中药材或中药饮片,存在“品种规格多,物料不规则、加工技术繁杂”等特点,尤其在前处理与提取环节,问题较为突出。建议在这两个环节增加关于中药生产关键技术的支持。[color=#ff0000]提取[/color]是制造各种中药片剂、丸剂、胶囊、冲剂、颗粒剂及注射剂等各种制剂的首要及核心关键工艺。传统提取技术中的煎煮法、回流法、浸泡法及晚近的超声波法等均存在有时间长、效率低、能耗高、浪费大、污染重等缺点,且对一些热不稳定性成分破坏严重。这些缺点的存在,直接对种植、运输、储存、加工、成本、环境、及可持续发展影响极大。工业和农业现代化、人类大健康产业的发展、实现绿色、生态、和谐的可持续发展社会呼唤创新性技术去克服这些制约因素。近年来出现的“闪式提取-《组织破碎提取法》”等中药超快速提取技术,将大大的提升中药生产效率,更好的满足绿色、生态的要求。 [img=,690,859]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907241406163853_6309_3382228_3.png!w690x859.jpg[/img]
[b][font=微软雅黑][size=10.5pt]一、机械破碎法:[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器[/font] [font=微软雅黑]等将细胞破碎开来[/font] [font=微软雅黑]。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]1. 高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至最慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]2. 玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。[/size][/font][b][font=微软雅黑][size=10.5pt]二、物理破碎法:[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt]指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]1.用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器)。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]机制:可能与强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关,空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]超声波破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。(使用时注意降温,防止过热)。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]2. 高压破碎:细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]3. 反复冻融法:将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。[/size][/font][b][font=微软雅黑][size=10.5pt]三、化学破碎法:[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜,使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变[/font] [font=微软雅黑]。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠([/font]SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。浓度一般为1mg/ml。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]四、酶学破碎法[/font] [font=微软雅黑]:[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]选用合适的酶,使细胞壁遭到破坏,进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]裂解液标准配方[/font]: :50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]综合叙述:无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸([/font]DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入PMSF也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且应该在破碎的同时多加几次;另外,还可通过选择pH、温度或离子强度等,使这些条件都要适合于目的物质的提取。[/size][/font]
[color=#333333]组织破碎提取法是在常温液体状态下利用高速破碎、高速研磨、高速搅拌和超分子渗透等技术,数分钟内对药材进行组织破碎、研磨至细微颗粒,通过细胞组织的破裂和组织外围溶剂的快速渗透与溶解,使药材组织细胞内的目标生物活性成分以最快的速度、最低的能耗、最大的收率迅速从细胞中解离出来进入溶剂体系中,实现药材组织细胞内外有效成分分子浓度的平衡,且不会破坏热敏成分、并达到快速绿色提取的效果。[/color]
破碎机工作时,难免会出现各种各样的情况,怎么才能更有效合理的运作破碎机?一、破碎机的合理运用 破碎机油压的电气联锁体系任何情况下不得撤除,机器工作时,在破碎机反转面内不得站人,工作过程中任何人员不得用手去取进入机内的大块矿石或其它物品,破碎机给料标准不该超过给矿口尺度的0.85倍。5破碎机必须空载起动,合理调配破碎机的运用,使破碎机的类型与相适应的矿石对应起来。二、工作前的预备与查看 破石机起动前必须首要查看各光滑点能否正常,有无阻塞、漏油表象,操作手柄干油泵使各光滑点加油足够,查看各外表能否无缺,查看破碎腔内有无矿石或其它非破碎物料,查看电器连锁设备,灯火接号及各防护设备能否完全正常,矿石的抗压和耐磨强度,湿度的异样,所以在进行破碎时也应该依据矿石的本身特色挑选恰当的破碎设备,还有一些中等硬度的矿石,如粘土质岩石、不巩固的石灰岩、砂岩、致密度泥灰岩等,此类矿石可以用颚式破碎机破碎,重锤反击式破碎机,也可用辊式破碎机,反击式破碎机,锤式破碎机进行破碎,可选的规模比较广,从矿石的含水量方面来讲,湿度过大的矿石不适宜用带有蓖板靠蓖板孔出料的锤式破碎机,例如粘土质的混合料。关于脆性矿石则不宜用研磨式的破碎机,不然产物中的过细粉磨就会太多,此类矿石宜用反击式破碎。