细菌中光密度测定检测方案(紫外分光光度计)
背景细菌培养基的光密度( OD) 测定是微生物学中使用的一种常见技术。 研究人员主要依靠分光光度计来进行这些测定, 然而实际上这个测定是基于培养基的光散射量而不是光吸收量。 在其标准配置中, 分光光度计并未对光散射测定进行优化, 这通常会导致仪器间所测得吸光度上的差异。方法该研究调查了不同的分光光度计光学配置对在分批培养基中生长的大肠杆菌JM109光密度测定的影响。分光光度计检测包括了使用阵列检测的反向光学系统、 基于单色器的传统系统以及一种配备积分球配件( ISA) 的单色器系统。 在每个仪器上测定OD600生长曲线, 同时, 对McFarland进行CFU/mL计数来进一步对每个光学系统进行鉴定。结果来自相同光学配置类别的分光光度计其OD数据是相当的。 用反向光学系统测定较高OD时数据变化更大,这是由较低杂散光所导致。 基于单色器的系统测试较高OD时准确度较高, 主要是因为与来自反向光学系统的多色光相比, 单色光具有更好的杂散光去除能力。然而, 反向光学系统测定OD时却有具有良好的动态范围。 使用ISA产生出的数据与用其它系统产生出的数据不同, 这是因为其具有捕捉几乎所有前向散射光的能力。 而对McFarland标准品的测定确认了这些现象。结论分光光度计进行可靠的光散射测定的能力在很大程度上取决于其光学配置; 因此, 具有不同光学配置的分光光度计会呈现出不同的OD测定值。 理想状态下, 高度散射样品( 如细胞培养基) 的吸光度是使用ISA进行测定的, 目的是为了捕捉几乎所有的散射光。 培养基生长可使用OD600测定, 然而每当改变分光光度计时, 就应该计算和应用一个换算因数。