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非接触式超声波细胞裂解系统SL型型号简介:非接触式超声波细胞裂解系统可获得传统超声方法无可比拟的质量、效率和安全性,在分子生物学研究领域样品前处理掀起一场新的浪潮。用途广泛, 常用于细胞的破碎、裂解,细胞颗粒的释放。尤其是应用于腺病毒的微粒释放,除适合制备高效价的重组腺病毒外,还可以制备病毒DNA,DNA终端蛋白化合物,同时是土壤样品制备的理想仪器。已经成为CHIP(染色质免疫共沉淀)研究平台不可缺少的标准化工具。特点:1.无气雾浮质产生-增强生物安全性,用于无菌操作; (如:分支杆菌,乙肝病毒,甲肝病毒,流感(包括H1N1),非典病毒SARS);2. 消除了样品交叉污染的危险;能隔着离心管能打断染色体、破碎细胞。3.消除了传统的手持探头,固定探头的繁琐,带有消音压紧装置;4.可有效阻止样品泡沫的产生;5.中文液晶显示,功率可以微调,击进方式可每次5W微调;6.采用周期性的脉冲破碎细胞,脉冲的启动和终止时间可调,可调时间精确至0.1秒7.可处理多种样品,样品处理范围广泛;8.可使用标准地可抛弃式容器 (PCR tubes Eppendorf, 1.5~50ml Corning/Falcon tubes) ;9.可用于处理微量样品;最少到5uL;10.可一次性处理4~32个样品,需选择相应的型号;11.自动的连续旋转离心管则使超声波的能量分布更为均匀,数据专一,且可以重复;12. 带冷却水循环槽,可选配低温冷却液循环机,避免了破碎过程中温度过高,影响病毒的感染力。
(一)几种主要裂解器的比较 表(上)对四种主要裂解器的原理作了总结,可以作为选择裂解器的参考。有人通过比较不同裂解器的性能发现,对于特定的样品,居里点裂解器可以给出特征性谱图,但这种裂解器容易被污染,且样品附着在铁磁载体上比较困难。若使用传统的管式炉裂解器,则难以获得重复性的结果。实验过程中污染不断增加,从而导致裂解谱图的逐渐变化。对于挥发性有机物来说,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]裂解器可以给出与理论预测一致的裂解产物分布。而热丝裂解器和居里点裂解器则给出不同的结果。在研究聚合物结构表征时,居里点裂解器比管式炉裂解器更为有效,用热丝裂解器也可获得与居里点裂解器相同的结果,但所用裂解温度应低于后者。作为一个典型的例子,表(下)列出了聚苯乙烯(PS)在不同裂解器上得到的产物分布。显然,不同的裂解器所得的结果是不同的。虽然不同的样品会有不同的裂解产物分布,但研究证明,样品的性质如分子量对裂解产物分布的影响是很小的。因此,引起产物分布差异的主要原因是裂解器和裂解方法的不同。[img=,690,811]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801051623_5871_2384346_3.jpg!w690x811.jpg[/img](二)选择与安装裂解器 从上面的比较可知,不同的裂解器有不同的特点,所以在选择裂解器时要考虑具体情况,如样品的来源和性质、研究目的、现有仪器装置等等。如果只是在实验室内部研究聚合物的裂解谱图,而不做实验室之间的比较,那么,原则上各种裂解器均可使用,每种裂解器都能为这种实验室内部的比较研究提供有用的信息。如果改变裂解器的类型,以前装置上所得数据就可能失去意义,这是因为同一样品在不同类型的裂解器上往往难以得到完全重现的结果。对于复杂的生物样品来说,裂解谱图的区别往往在于某些裂解碎片产率的不同,因此必须严格控制裂解条件。在Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] 研究中,只有对样品量、样品在裂解器中的负载情况和裂解器的加热特性进行严格控制,方可获得长期的和实验室之间的重现性。当对裂解产物进行定量分析,研究反应机理和反应动力学时,应最大限度地减少二次反应,同时严格控制裂解条件。综上所述,我们推荐首先选择使用热丝裂解器和大功率居里点裂解器。 管式炉裂解器由于二次反应严重而较少用于聚合物和生物样品的Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]研究。当然,微型炉裂解器的性能要好得多,在聚合物的表征应用方面获得了很好的结果。尽管如此,热效裂解器和居里点裂解器的应用还是更为广泛一些,其中热效裂解器的实用性更强。居里点裂解器由于受铁磁材料种类的限制,裂解温度不能连续调节。在研究裂解机理和动力学以及优化裂解调条件时,这一点是很重要的。此外,在分析复杂的混合物时,或者分析无机物基体中的有机成分时,用热丝裂解器还可进行多阶裂解,即对同一样品进行不同温度(由低到高)下的裂解研究。 至于激光裂解器,虽然也可用于聚合物的裂解分析,但由于其裂解温度不易精确控制,故使用较少。它的应用领域主要在有机地球化学方而。如岩矿中有机物的Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]分析,采用一般的裂解器所获挥发性产物的产率较低,激光裂解器则可获得较为理想的结果。在研究挥发性样品的裂解时,多用管式炉裂解器。此外,静态裂解是管式炉裂解器的长处。例如用静态裂解法分析石油馏分就比用热丝裂解器的动态法更为有效。总之,裂解器的选择要根据具体情况,综合考虑。必要时还可改装仪器,以适应特定的研究目的。 裂解器选定之后,就可将其安装在色谱仪上。现在的商品化裂解器一般都适用于各种 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] 仪器,大都采用一根细不锈钢管通过硅橡胶密封垫或 O 形圈及锁紧螺母将裂解器直接装在色谱仪进样口上。在裂解器和色谱柱之间死体积应尽可能小,否则会降低分离效率。同时要注意裂解器和色谱仪之间连接管的保温问题,以防裂解产物在此处冷凝。图示为裂解器和色谱仪连接的典型载气气路图。仪器之前气路上的三通主要是用于保护色谱柱,其中一路载气的流速可用色谱仪固有的气路系统控制。当打开裂解器进样时,通过裂解器的载气就被放空,此时,直接进入色谱柱的载气仍能保持一定的流速,不至于因空气扩散进入色谱柱而造成固定液的氧化降解。而当老化色谱柱时,或者维修裂解器时,也可让载气直接进入色谱柱,而不通过裂解器。[img=,300,376]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801051623_4230_2384346_3.png!w300x376.jpg[/img] 需要强调指出,色谱仪汽化室是构成Py-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url]系统死体积的一个重要因素,因此必须予以考虑。比较理想的方法是在其中的衬管中装填一些涂有固定液的填料(与填充柱的填料相同,且要注意所用固定液与色谱柱固定液相同,用石英玻璃毛堵塞衬管两端以防止填料被吹入色谱柱)。这样,既大大减少死体积,又能防止高沸点裂解产物可能对色谱柱的污染。它还相当于预柱,能起到预分离的作用,而次预柱的温度可以方便地用原仪器的汽化室控制系统控制。 仪器安装好后应检漏,以确保气路系统的密闭性。在进样前,还应对裂解器进行空载加热,以消除本底的影响。然后,就可以用待测药品来选择和优化裂解条件了。
1.裂解器 裂解器是完成裂解反应的装置,它可控制样品裂解的温度和时间,因此,裂解器的性能对结果的影响是不言而喻的。我们将在下一节详细介绍裂解器的性能指标,这里仅就裂解器的选择作一简单讨论。 目前商品化的四类裂解器为热教(带)裂解器、居里点裂解器、管式炉(包括微型炉)裂解器和激光裂解器。这些裂解器各有其优缺点(见下一节),选择裂解器首先要根据研究的目的和样品的性质,其次是实验室现有条件。当涉及到样品的降解机理时,必须考虑加热元件对样品的催化作用。热丝(带)裂解器和微型炉裂解器的样品负载元件多由铂制成,居里点裂解器则由铁、镍、钻的合金材料制成。裂解室(裂解时样品负载元件置于其中)多由内衬玻璃或石英的不锈钢制成。样品在这些加热的金属表而可能受到催化作用,或发生二次反应,从而造成分析结果的误差。尤其当研究生物大分子的裂解,或者是其他能产生强极性、热不稳定裂解产物的样品时,更应考虑这一点。这时就应选择那些有玻璃和石英内衬的裂解器,或者用石英样品管将样品与金属隔开。2.裂解温度 裂解温度一般是指裂解器的设定温度,而裂解时样品实际达到的温度常被称为平衡温度,后者低于或等于前者。合适的裂解温度应当使样品的裂解过程以初级反应为主。温度过高,样品裂解的初级反应加剧,二次反应大为增加。温度过低,样品裂解不完全。对于大多数样品,合适的裂解温度在400-800℃之间。如合成高分子样品多采用600℃左右的裂解温度,微生物和生物大分子样品多采用500-1000℃,而药物分析的裂解温度则为350-600℃。当然,实际选择时还应考虑具体的样品性质、形态、样品量以及裂解时间、升温速率等因素。3.裂解时间和升温速率 裂解时间是指样品开始升温到裂解完成所用时间。原则上讲,裂解时间越短,二次反应越少,对分析越有利。但必须保证在此时间内样品达到设定裂解温度且裂解基本完全。对于升温速率可调的裂解器,升温速率慢时,裂解时间应相应长一些。同样,裂解温度越高,裂解时间也应越长。一般情况下,采用最高升温速率(如20℃/ms) ,裂解时间为10s左右。对于采用程序升温裂解的研究则另当别论。有些裂解器,如管式炉裂解器,其升温速率是不可调的,这时可依据裂解器的 TRT (从加热开始到达设定温度所需的时间)来设定裂解时间。原则当然是裂解时间要大于TRT。总之,最终裂解条件的确定要通过实验来优化。4.裂解室温度(即样品的初始温度) 对于管式炉裂解器(连续式裂解器)这一温度常常等于室温,而对于热教和居里点裂解器(脉冲式裂解器),该温度是可以控制的。图所示为上述两类裂解器的温度——时间曲线,可见二者是很不同的。图a中设定裂解室温度为250℃,裂解温度600℃。样品进入裂解室(时间为0)后,其温度先由室温升至250℃,裂解时快速升温至600℃,裂解结束后降温至250℃;图b中裂解温度同样为600℃,但裂解开始前样品处于室温,裂解时样品才进入裂解室,快速升温至600℃,此后,直到将样品取出裂解室,样品温度一直维持在600℃。[img=,690,319]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711160756_01_2384346_3.png!w690x319.jpg[/img] 裂解室温度太低,会使裂解产生的高沸点产物冷凝在内壁而失去有用的信息。反之,裂解室温度太高,可能使样品在裂解前就发生挥发或部分裂解,还可能使高沸点产物进入色谱柱后冷凝(如果色谱柱温度不是很高)。使用连续式裂解器就不存在这个问题。另一方面,如果样品在裂解前必须除去挥发性成分,如溶剂,那么,使用脉冲式裂解器是有利的,而且很容易实现多阶裂解,即同一个样品可在不同的温度下裂解,以研究每次裂解后残留的样品情况。5.裂解器的清洗 前面我们己提到样品负载元件的材料性质可能对裂解有催化作用。同样品的污染一样,负载元件的污染也三角影响实验重现性的重要因素。任何类型的裂解器,在每次裂解之后,样品负载元件的表面状态都会有所改变。这是因为碳化物、氮化物或/和金属氧化物残渣会在上述表面形成,而这些活性残留物常常会对其后的裂解起催化作用。所以,为了获得重现的裂解结果,样品负载元件表面应尽可能保持干净,起码应当除去前次裂解的残留物。 清洗样品负载元件的方法主要有三种:一是用溶剂清洗,例如用丙酮、乙醇、甚至某些酸浸泡、清洗,然后烘干。二是用工具清洗,如用小刀刮去表面残留物。二是高温灼烧,例如在裂解器的最高温度下灼烧,或者将样品负载元件置于酒精灯或酒精喷灯上灼烧,以除去污染物。以上三种方法可以视具体情况而结合使用。此外,裂解室内壁也应注意清除污染物。