快速蛋白液相色谱系统

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。

本文利用新型Agilent 1260 生物惰性四元液相色谱系统开发了用于表征治疗性蛋白质 P128 的高灵敏快速液相色谱方法。其中采用亚2 μ m 色谱柱技术得到最优肽图，缩短了这种蛋白的分析时间。利用新型安捷伦生物惰性高效液相色谱柱进行体积排阻色谱(SEC) 及离子交换色谱(IEX) 分析，以检测蛋白制剂中可能存在的杂质或异型体。具有生物惰性和耐腐蚀性的仪器与简单且重现性良好的方法相结合，使得该解决方案适用于QA/QC 实验室的常规应用。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统，配备ESI-MS检测器，通微 EP-100-20/30-3- C18色谱柱，通过在线富集，可以实现对低浓度蛋白质的检测。蛋白质标准品的检出限可提高20-100倍，此方法已成功应用于浓度为20 mg / mL的蛋白质的分析。结果表明我们提出的方法可能在蛋白质组学研究中发挥重要作用。

本文描述了使用配备 Agilent 1260 Infinity 荧光检测器和 Agilent 6530 精确质量 Q-TOFLC/MS 的 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统，通过亲水相互作用色谱 (HILLC) 对N-连接糖链的分析。使用 PNGase F 对单克隆抗体 (mAb) 及两种其他糖蛋白（胎球蛋白和卵清蛋白）进行酶解后，再利用 2-氨基苯甲酰胺 (2-AB) 对释放所得的糖链进行衍生化反应。Agilent AdvanceBio 糖谱分析色谱柱具有的出色分离度使我们可以对 mAb 样品中所有主要的 N-糖链进行检测和鉴定。此外，从胎球蛋白和卵清蛋白中释放出的多种高度复杂的 N-糖链可以得到良好分离。

本应用简报证实，使用配备新型 HILIC 色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱仪，可对人免疫球蛋白 G 的 N-连接糖链进行灵敏、重现的分析。对人 IgG N-连接糖链文库分析的保留时间和峰面积精度进行测定。此外，对于具有低检测限和低定量限的五种糖链标准品（M5、A2G2、A2G2S1、FA2G2S1 和 A2G2S2）混合物，在 0.016-1 pmol 的范围内具有良好的线性。配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μ m 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱仪是一款出色的系统，可实现灵敏且重现的 2-AB 衍生人免疫球蛋白 G 释放 N-连接糖链分析。

在本应用简报中，我们展示了利用阴离子交换色谱法，在使用四种不同的高盐洗脱缓冲液（最大浓度为 2 M）进行线性和阶梯梯度洗脱条件下，对四种蛋白质进行分离的相关信息。Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统的流路设计中未采用铁/钢质材料，因此可耐受生物分析和生物纯化应用中的严苛条件，从而保持其出色的 UHPLC 性能。使用四种盐（氯化钠 (2 M)、氯化钾 (1 M)、乙酸钠 (1 M) 和四甲基氯化铵 (1 M)）进行线性梯度洗脱时，均可获得极高的保留时间和峰面积精确度。此外，使用 2 M 氯化钠作为洗脱缓冲液时，结果表明保留时间和分离度可保持稳定达 48 小时以上。在此类条件下，采用不锈钢材质的液相色谱系统会面临一些问题，例如盐引起的腐蚀，因此需要执行特殊的、繁杂的清洗步骤。使用 Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统则可以完全避免此类清洗步骤，从而提高生物分析或生物纯化应用的通量和效率。

仪器间方法转换对多种行业的许多实验室来说都是充满挑战性的问题。难点在于不仅要在考虑各仪器性能的同时维持保留时间不变，而且还要在仪器间方法转换时不损失分离度。安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 能够实现从延迟体积较高且混合行为不同的液相色谱系统向 Agilent 1290 Infinity 和 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统的无缝方法转换。本应用简报介绍液相色谱方法从 Waters Alliance 2695 液相色谱系统向启用/未启用 ISET 的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统的轻松转换，同时通过 Waters Empower 软件进行控制。采用上述两种系统对扑热息痛及其杂质进行分析，并分别将保留时间与分离度进行对比。

Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统中的安捷伦智能系统模拟技术 (ISET) 能更加方便地将分析方法从 Agilent 1100 系列二元液相色谱系统等传统 HPLC 系统中进行转移。本应用简报举例证实了 ISET 在分析六种三环抗抑郁药方面的优势。在 1290 Infinity II 液相色谱系统中，与未启用 ISET 相比，启用 ISET 时可以获得 99% 的保留时间一致性。

皮革水解蛋白是从动物皮毛中水解出的物质,能增加食品中氨基酸的含量,但皮革水解物含有危害人体健康的重金属六价铬,不能用于食品加工。如果被人体吸收的话，可能导致中毒、关节肿大、关节疏松肿大。国家卫生部最新印发了《食品中可能违法添加的非食用物质名单（第二批）》，明令禁止在乳及乳制品中添加皮革水解蛋白。皮革水解蛋白与三聚氰胺不同，是真正的蛋白质，若添加到食品当中，检测起来难度更大。 本文使用岛津氨基酸柱后衍生系统锂型分析柱建立了24种氨基酸的高效液相色谱柱后衍生分析方法。

随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能.本文利用全新 Q-OT-qIT 三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化. 50 min 有效梯度, 单次实验分别从1 μ g和50 ngHeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和 2877 个非冗余蛋白, 而目前的文献报道至少需要 2~3 h. 同时, 本文考察了 Q-OT-qIT 碎裂模式、检测方法、最大注入时间和自动增益控制等参数对蛋白质组快速分析的影响, 证明了不同采集方法间的互补性, 阐述了不同扫描参数对鉴定结果的影响. 此外, 还讨论了Q-OT-qIT 的并列运行原理和扫描组合模式, 为不同实验目的和样本类型的蛋白质组快速分析奠定了基础.

采用岛津生物液相系统Nexera Bio以体积排阻色谱法建立了Fc融合蛋白多聚体的分析方法。在建立的液相色谱条件下，待测样品中的多聚体与单体分离效果良好。另外，样品经6次重复测定，Fc融合蛋白单体保留时间RSD为0.021%，单体和多聚体含量的RSD分别为0.019%和1.908%，重复性良好。

本文介绍了利用 Agilent 1260 Infinity Ⅱ 四元液相色谱系统、Agilent 1290 Infinity Ⅱ ELSD 检测器和 Agilent Poroshell 120 SB-C18, 3.0 mm × 150 mm, 2.7 μ m 色谱柱对 PEG 偶联重组蛋白注射剂中的吐温 20 进行定量分析的简单灵敏的方法。该方法采用含三氟乙酸(0.1% TFA) 的乙腈和水溶液为流动相，以梯度条件对注射剂中吐温 20 进行分离分析。该方法操作方便，灵敏度高，具有良好的线性关系、精密度和准确度，为生物制药企业测定PEG 偶联的一类重组蛋白制剂中的吐温 20 辅料提供一种可选的解决方案。

本应用简报报导了一种简易的反相 HPLC 方法，用于分析单克隆抗体 (mAb) 中的二硫键。其中通过 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD300 二苯基亚 2 μm 粒径色谱柱实现分离。在完整蛋白质及肽段消化物的反相分离中，二苯基 1.8 μm 色谱柱能够提供 UHPLC 级别的性能。当与 UHPLC 仪器联用时，这种通用型色谱柱可在更短的分析时间内获得更全面的表征结果。1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统的耐压能力高达 600 bar，能够承受采用更低粒径（低至 1.7 μm）的新型色谱柱技术所要求的更高压力。

本应用简报报导了一种简易的反相 HPLC 方法，用于分析单克隆抗体 (mAb) 中的二硫键。其中通过 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD300 二苯基亚 2 μm 粒径色谱柱实现分离。在完整蛋白质及肽段消化物的反相分离中，二苯基 1.8 μm 色谱柱能够提供 UHPLC 级别的性能。当与 UHPLC 仪器联用时，这种通用型色谱柱可在更短的分析时间内获得更全面的表征结果。1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统的耐压能力高达 600 bar，能够承受采用更低粒径（低至 1.7 μm）的新型色谱柱技术所要求的更高压力。

本文介绍了一种对实际 PEG 偶联重组蛋白注射液中吐温 20 进行高效分离的方法。该方法采用 Agilent 1260 Infinity II Prime 液相色谱系统、1290 Infinity II ELSD 检测器和 Poroshell 120 SB-C18 色谱柱。1290 Infinity II ELSD 为吐温 20 提供了较高的检测灵敏度和较好的精密度结果。吐温 20 的 LOD 和 LOQ 分别为 5 μ g/mL 和 10 μ g/mL，在 10–200 μ g/mL 浓度范围表现出良好的线性，且实际样品的测定值在理论值的± 10% 范围内，表明该方法可以实现准确定量分析。针对客户测定实际重组蛋白制剂（如偶联PEG）中吐温 20 的分析需求，本文所述的方法可作为一种可靠的解决方案。

本文将肝素免疫亲和柱应用到乳铁蛋白检测前处理的净化过程中，利用岛津Essentia LC-16液相色谱仪建立一种高效、快捷的婴幼儿奶粉中乳铁蛋白的测定方法。参照《食品安全国家标准食品中乳铁蛋白的测定》（征求意见稿）对样本进行前处理并上机测定。结果表明：乳铁蛋白在1 ~ 200 mg/L浓度范围内线性关系良好，相关系数在0.9998以上，方法检出限在0.20 mg/L；10 mg/L标准品溶液连续6针进样，保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.027%和0.48%；不同浓度的加标回收率结果在70.57~76.16%之间。

使用Agilent?1200系列高分离度快速液相色谱系统，1.8-μ m的RRHT色谱柱，并与Agilent?6330离子阱和Agilent?6210?ESI?TOF质谱联用来对药物的微量杂质进行检测和结构鉴定。采用1200系列RRLC系统，在1.8-μ m色谱柱上实现了检测所有杂质需要的分离度。离子阱串联MS/MS和MSn ，可用于结构鉴定，ESI-TOF通过准确测定质量可用于初步分子式的确证。

引起过敏的物质称为过敏原,一般为蛋白质类物质。 随着食物过敏患者的增多,以及可能导致过敏性休克甚至死亡等严重后果,已建立了一系列针对过敏原的法规及检测方法,包括核酸法(PCR)和酶联免疫法(ELISA)等。 新兴的质谱法(MS)灵敏度高、假阳性概率低,并具有方法开发快速、运行成本低等优势。葡萄酒酿造过程中需要加入澄清剂去除沉淀物质,使酒液获得长期稳定性。 酪蛋白是常用的澄清剂之一。 酪蛋白是一种来源于牛乳的过敏原,残留在葡萄酒中会对过敏人群产生危害。 但是葡萄酒,特别是红葡萄酒含有大量单宁等鞣质,单宁与蛋白质之间存在多点疏水键和氢键的作用,有很强的蛋白结合能力。 单宁常用作酶抑制剂使酶失活。 单宁极大地抑制了葡萄酒蛋白的提取与酶解,传统蛋白提取方法(超滤、透析、有机溶剂沉淀等)用于葡萄酒时回收率只有 20% ~30%。 因此,关于葡萄酒过敏原质谱分析的报道很少,研究对象也集中在单宁含量很低的白葡萄酒,对于含有大量单宁的红葡萄酒的前处理和质谱分析仍无成熟的策略。已报道的方法如十二烷基硫酸钾(KDS)法、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)法等,提取后蛋白仍需要电泳去除单宁和两性电解质,工作量大,分析通量低,蛋白质的回收率很低。交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)是 PVP 交联后形成的颗粒(约 110 μ m),具有很强的吸附能力。PVPP 竞争性地与单宁结合,释放蛋白,可以有效去除单宁等多酚类物质。本研究利用 PVPP 建立了快速、高效的红葡萄酒蛋白提取与酶解方法,使前处理时间缩短到 2 h 之内,回收率达到 80% 以上。 将本方法与三重四极杆液相色谱鄄串联质谱联用(LC-MS/ MS)结合,分析了红酒中 3 种亚型的酪蛋白,检出限达到 10 μ g/ L,比目前报道的方法提高了至少一个数量级。

Agilent 1220 Infinity II 液相色谱系统可为大麻以及来源于植物材料的产品（如食品）中 11 种最常见的目标大麻素提供可靠且稳定的分析和定量。该方法确定了分析柱、流动相改性剂和所有的系统参数，可在 10 分钟内分离目标大麻素。该方法已在两个独立的 1220 Infinity II 液相色谱系统上完成了测试和验证。

本应用简报报导了一种简易的反相 HPLC 方法，用于分析单克隆抗体 (mAb) 中的二硫键。其中通过 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统及 Agilent ZORBAX RRHD 300 二苯基亚 2 μ m 粒径色谱柱实现分离。在完整蛋白质及肽段消化物的反相分离中，二苯基 1.8 μ m 色谱柱能够提供 UHPLC 级别的性能。当与 UHPLC 仪器联用时，这种通用型色谱柱可在更短的分析时间内获得更全面的表征结果。1260 Infinity 生物惰性液相色谱系统的耐压能力高达 600 bar，能够承受采用更低粒径（低至 1.7 μ m）的新型色谱柱技术所要求的更高压力。

在化学合成实验室，新化合物的合成涉及到不同的用户。通常，一些研究小组或个人用户需要同时运行不同的分析项目。在以下分析任务中，需要应用液相色谱-质谱联用技术：? 实时反应监测? 反应产物控制? 进行制备液相色谱分析前的色谱柱初选? 制备色谱分离产物的纯度分析? 快速简便地进入正在运行的液相色谱系统? 提供具有不同选择性的色谱柱? 预设色谱方法? 快速报告样品分析结果

本应用简报证实，使用配备新型 HILIC 色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪，可对人免疫球蛋白 G 的 N-连接糖链进行灵敏、重现的分析。对人 IgG N-连接糖链文库分析的保留时间和峰面积精度进行测定。此外，对于具有低检测限和低定量限的五种糖链标准品（M5、A2G2、A2G2S1、FA2G2S1 和 A2G2S2）混合物，在 0.016-1 pmol 的范围内具有良好的线性。配备 Agilent AdvanceBio 2.7 μm 糖谱分析色谱柱和荧光检测器的 Agilent 1260Infinity 生物惰性四元液相色谱仪是一款出色的系统，可实现灵敏且重现的2-AB 衍生人免疫球蛋白 G 释放 N-连接糖链分析。

偶氮染料被广泛的用于纺织工业中的印染着色工艺中。然而，在特定条件下，偶氮染料很容易分解出对人体有害的芳香胺类。这些芳香胺能够引起人体的DNA 发生变化甚至引发癌症。在1994 年，德国就开始禁止在日化产品中使用某些偶氮染料。在 2002 年9 月，欧盟(EU) 建立了关于偶氮染料检测与定量的法规，其中规定在纺织品中偶氮染料的最大允许含量为30 ppm。目前分析偶氮染料的方法有薄层色谱(TLC)，气相色谱(GC) 与高效液相色谱(HPLC) 等。与传统液相色谱方法比较，采用亚二微米填料的超高效液相色谱技术(UHPLC) 具有更快地分析速度，更好的分离度以及灵敏度，并能够节省大量的溶剂从而降低运行成本。在本文中，共26 种偶氮染料在10 分钟之内得到了分离（包括流动相梯度再平衡在内）。根据信噪比估算这些偶氮染料的最低检出限为0.05 μ g/mL 到5 μ g/mL。

本案例以秦皮为对象，以自主研发的HT-2D-LC制备型二维液相色谱系统优化分离制备条件，应用该方法一次可获得40个以上的单体化合物，分离效果显著、分离效率高、较常规制备液相系统而言速度更快，相应组分经二次分离后纯度高；全部的分离工作在计算机控制下完成，极大地提高了中药等天然药物系统性分离制备的效率。为样品中有机高分子化合物的制备分离、活性筛选提供了高效、可靠的平台。

Nexera Bio液相色谱系统和Shim-pack Bio SEC色谱柱在单抗SEC分析中，可以提供良好色谱峰型，带来快速有效分离，保证稳定可靠分析。

本文基于Thermo Fisher Vanquish Core全新高效液相色谱系统，针对赤芍配方颗粒公示稿中特征图谱与含量测定两种不同的液相方法条件，利用Vanquish液相特有的双泵、双针模块在一台液相色谱上并联进行赤芍配方颗粒特征图谱测试和含量测试，极大的提高分析效率。通过软件自带的方法转化程序将赤芍配方颗粒特征图谱常规方法转换成超快速液相（UHPLC）方法，利用用户自定义进样程序（UDPs），消除含量测定过程中的溶剂效应。一机多用使得分析效率成倍提升，并有效的降低实验成本。

本应用介绍了用于宿主细胞蛋白质高灵敏度定量分析的工作流程，包括用于样品自动前处理的 AssayMAP Bravo 平台、用于样品分离的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统、用于数据采集的 Agilent 6495B 三重四极杆系统、用于 MRM 方法开发的 Skyline 软件中的安捷伦自动化工具、用于数据分析的 Skyline 和 Agilent MassHunter 定量分析软件的结合。使用基于多反应监测 (MRM) 的同位素稀释方法，结果显示可准确定量低至亚 ppm(ng/mg) 浓度的 HCP。

在本应用纪要中，我们将在Alliance HPLC、ACQUITY Arc UHPLC和ACQUITY UPLC H-Class PLUS这三种不同类型的液相色谱系统上运行富马酸喹硫平杂质的USP分析方法，并根据USP各论中所列的系统适应性要求评估这些系统能否成功运行该USP分析方法。

因为不同的药物对映体经常表现出明显不同的生物活性，因此对映体分离是药物分析中的一个重要目标。目前用于外消旋混合物手性分离的方法主要基于手性固定相（CSPs）。现在有几种CSPs可直接用于分离和测定药物对映体和外消旋体。特别是β -环糊精（β -CD）及其衍生物，因其具有特殊的分子结构，可增加额外的识别位点，最常用于不同色谱模式的对映体分离。β -CD作为手性固定相，已成功用于毛细管电色谱中对映体的分离检测。β -CD分离对映体主要有三种模式：开管柱毛细管电色谱、填充柱毛细管电色谱和整体柱毛细管电色谱。但是，到目前为止，尽管β -CD在反相和正相高效液相色谱系统下，已成功地引入手性分离领域，但其作为手性固定相用于高效微流电动液相色谱系统的研究却未见报道。因此，研究这种手性固定相的高效微流电动液相色谱技术是值得的。