细胞电融合电穿孔系统

近日，东胜创新主办的“电穿孔、电融合技术的应用”巡回讲座分为三场依次在广州、上海、北京举行。在广州的专场已于10月21日圆满结束，来自美国BTX公司的技术专家Robin E. Butler介绍了“Electroporation and Electrofusion——A methodology for efficient gene transfer in In vivo, In Utero,96 Well and Fusion applications”。 接下来的两场分别将于 10月22日下午14:30—17:00在上海中国科学院营养所35号楼2楼多功能厅； 10月24日上午 9:00—11:30在北京中国农业大学新综合楼马协三层举行。 上海的专场还将增加由中国科学院神经科学研究所的丁玉强研究员介绍“在体子宫内胚胎电转技术——在神经科学研究中的应用”；北京的专场还将增加由中国农业大学生命科学学院的卫恒习介绍“电融合技术在转基因动物克隆中的应用”。 背景介绍： 一、电穿孔、电融合技术的应用范围： 哺乳动物细胞或组织的转染、细菌和酵母的转化、动物细胞融合、活体/离体基因或药物导入、卵内基因或药物导入、核转移、植物组织和原生质体的转化、杂交瘤生成、胚胎操作、植物原生质体融合、蛋白质电整合/电插入。 二、美国BTX公司——电穿孔、电融合专家 自1983年成立以来，以电穿孔仪、电融合仪为主要产品，开发了电穿孔、电融合、转染、转化等方面的众多最新技术和产品，成为电穿孔、电融合领域全球领先的专业厂家。 三、东胜创新BTX产品链接 http://www.eastwin.com.cn/product_btx.asp

【买美国BTX电穿孔仪 东胜新年送大礼】 2008岁末将至，为迎接新一年的到来，为了答谢广大新老用户对东胜创新的一贯支持， 特推出买美国BTX公司电穿孔仪送大礼优惠活动。 &mdash &mdash 从即日起至2008年12月31日止，凡签约购买BTX电穿孔仪ECM399、ECM830，除获得特价优惠外，还将获得： 购买ECM830的用户，将获得一千万像素数码相机一台。 购买ECM399的用户，将获得名牌运动背包一个。 机会有限，欲购从速 详情请来电垂询： 010-51663168-6212分机，或133813 26239 BTX产品专员 欢迎登陆东胜网站：www.eastwin.com.cn 还有更多惊喜等着您！ 【东胜创新生物科技有限公司】： 东胜创新生物科技有限公司以服务并推动中国的生命科学事业发展为使命，主要提供生命科学研究领域的各种仪器设备和试剂耗材，代理着数十个一流进口品牌，还创立了自主仪器品牌&ldquo 东胜龙&rdquo 和服务品牌&ldquo 东胜心服务&rdquo 。 公司总部位于北京，全国有十余个办事处，拥有一支近两百人的服务团队。 代理的进口品牌有：Agilent、Alpha、BTX、Kodak、NEB、Qiagen、Tecan等。东胜创新网站：www.eastwin.com.cn 【美国BTX公司中国总代理】： 东胜创新生物科技有限公司，获全球唯一专业的电穿孔&电融合仪生产厂家&mdash &mdash 美国BTX公司授权，为其在中国大陆及香港地区的总代理，销售BTX各种电穿孔/电融合仪、多种配套的电击杯、活体电极、融合电极和各种配件。 美国BTX公司网站：www.btxonline.com 【新闻】： BTX产品ECM2001细胞电融合&电穿孔仪被美国冷泉港实验室列入标准实验操作程序 http://cshprotocols.cshlp.org/cgi/content/full/2008/10/pdb.prot5040 【ECM399指数衰减波电穿孔仪】  产品简介 ECM 399 是一款指数衰减波电穿孔系统，其提供的电场强度和脉冲强度是专为细菌和酵母的简单转化而设计的。在低压模式中，ECM399也可以运用于部分哺乳动物细胞上。ECM 399是和PEP（个人电穿孔包）一起配送的，但它同样可以和BTX样品杯安全台兼容。  应用方向  高压模式（HV）为大肠杆菌和酵母转化专门设计，适用于构建cDNA文库和突变体库的各种转化操作。  低压模式（LV）适合于淋巴细胞、骨髓瘤、胶质瘤、成纤维细胞和Cos7细胞等多种哺乳动物的转染。  仪器特点  应用广泛：低压模式，既可以满足细菌和酵母的电转化，也可以满足多种哺乳动物细胞的转染。  液晶显示：液晶屏幕高分辨率显示，轻松直观地设定参数及实际参数。  安全防护：电弧淬灭，短路保护。  兼容性广：PEP、安全台、两针阵列电极、35mm培养皿电极、显微载玻片电极、夹心式扁平室等都可兼容。 【ECM830方波电穿孔仪】  产品简介 ECM830是为体外和体内电穿孔设计的方形波电穿孔系统。BTX方波技术为研究者提供了更高的细胞转染率和存活率。ECM830主机可和BTX的各种专业电极及配件结合使用，应用范围十分广泛。  应用方向  哺乳动物细胞的转染  活体/离体基因或药物导入  卵内基因或药物导入  核转移  植物组织和原生质体的转化  蛋白质电整合/电插入  技术特点  转化效率高：温和的方波提高电穿孔后的细胞存活率。  应用范围广：动物细胞的转染、植物原生质体的转化，动物及植物组织活体基因导入，核移植等等。  可配电极多：电击杯、活体电穿孔电极、细胞融合电极。  安全操作:电弧淬灭功能，使由电弧引起的损害降至最低；短路保护，避免脉冲发生器遇到短路时被损坏。

成果名称 低压直流细胞电穿孔微流芯片系统 单位名称 北京大学 联系人 马靖 联系邮箱 mj@labpku.com 成果成熟度 □研发阶段 &radic 原理样机 □通过小试 □通过中试 □可以量产 成果简介： 电穿孔（电转染）是一种利用外加电场击穿细胞膜，使平时不能穿透细胞膜的大分子(核酸、蛋白质、药物等)进入细胞的技术。电穿孔技术已在细胞实验、基因治疗等领域广泛应用。但目前的技术均需要金属电极，金属电极产生的金属离子渗出、气泡等对细胞有不利影响，降低了转染效率。此外，高压脉冲电源的使用使得目前此类仪器操作复杂、价格居高不下。这些都大大限制了电穿孔技术的广泛应用。针对上述问题，北京大学工学院熊春阳课题组采用微流芯片技术，实现一种不需要微电极，仅利用简单低压直流电源即可实现的细胞电穿孔技术。这一技术将大大降低仪器制造成本，简化操作流程，并可以进一步发展为高通量、高效率的细胞电转染系统。 2009年，熊春阳副教授申请的&ldquo 低压直流细胞电穿孔微流芯片系统&rdquo 项目得到了第二期&ldquo 仪器创制与关键技术研发&rdquo 基金的支持。课题组利用微流体中因尺度效应而产生的层流，用高电导率的液体来代替电极，将细胞悬浮液通过流动聚焦技术夹在高电导率溶液之间，形成三个平行流动的稳定流层。通过将电极与两侧的高电导率溶液相连，再与直流电源相连，电压会大部分施加在中间电阻较大的细胞流层。由于微流尺度较小，即使很低的电压都可产生较大的场强，从而可以实现细胞电穿孔。 这项工作在基金的支持下得以顺利的推进，通过相关设备的购置和实验测试，课题组完成了微流控芯片的设计和加工、液体导电层的引入、不同类型细胞电转染参数的优化等工作。该项目目前已经顺利结题，相关成果已经申请中国专利，正在申请国际专利。 应用前景：该项目实现一种不需要微电极，仅利用简单低压直流电源即可实现的细胞电穿孔技术。这一技术将大大降低仪器制造成本，简化操作流程，并可以进一步发展为高通量、高效率的细胞电转染系统。由于课题组具有完全的自主知识产权，这一工作可以打破目前国外同类仪器建立的技术壁垒，具备较强的市场推广前景。

奥然科技于2009年10月在中国农科院海南香饮所的设备采购中，中标一套日本BEX* LF301细胞电融合仪。 日本BEX是世界知名的电穿孔仪、细胞融合仪生产商，LF301是其最新型号的细胞电融合仪。奥然是BEX的中国总代理。

据美国物理学家组织网10月16日报道，美国俄亥俄州立大学科学家开发出一种名为“纳米隧道电穿孔”的新技术，或称为NEP。利用其给细胞注射基因治疗药剂时，不用针头，而是用电脉冲通过微小的纳米隧道，几毫秒内就能把精确剂量的治疗用生物分子“注射”到单个活细胞内。该研究发表在最近的《自然纳米技术》杂志网站上。 　　长期以来，在进行基因治疗时，人们对插入细胞的药剂数量无法控制，因为人体绝大部分细胞都太小，最小的针头也无能为力。而“NEP让我们能研究药剂和其他生物分子是怎样影响了细胞的生物和基因路径的，现有其他技术都无法达到这么细微的水平。”该校化学与生物分子工程教授詹姆斯李说。他们用这种方法，将定量的抗癌基因成功插入到白血病细胞中并杀死了它们。 　　研究人员用聚合物压制成一种电子设备样机，用DNA(脱氧核糖核酸)单链作为模板来构建纳米隧道。詹姆斯李发明了一种使DNA链解旋的技术，并使其按照需要形成精确结构。他们给DNA链涂上一层金涂层并加以拉伸，使之连接两个容器，然后将DNA蚀去，在设备内部留下一条连通两个容器的尺寸精确的纳米隧道。 　　隧道中的电极将整个设备变成一个微电路，几百伏特的电脉冲从一个装药剂的容器经纳米隧道到达另一个装细胞的容器，在隧道出口处形成了强大的电场，与细胞自身的电荷相互作用，迫使细胞膜打开一个小孔，足够投放药物而不会杀死细胞。调整脉冲时间和隧道宽度，就能控制药物剂量。 　　为了测试NEP能否递送活性药剂，他们把一些治疗用RNA(核糖核酸)插入了白血病细胞，发现5毫秒的电脉冲能递送足够剂量的RNA杀死这些细胞 而更长的脉冲，如10毫秒，能杀死几乎所有的白血病细胞。作为对照，他们还插入了一些无害的RNA到白血病细胞中，这些细胞都没死。 　　詹姆斯李指出，由于这种方法一次只能给一个或几个细胞注射，更适合用在实验室。目前他们正在开发一种机械式细胞装载系统，一次能给10万个细胞注射，有望用于临床诊断和治疗。 　　“我们希望NEP能最终用于早期癌症检测与治疗，比如在干细胞或免疫细胞中插入精确剂量的基因或蛋白质，引导它们分化改变，不必担心过量注射带来的安全问题，然后把这些细胞放回体内作为一种细胞基础疗法。”詹姆斯李说，这种方法还可能用于白血病、肺癌及其他肿瘤。

哈佛仪器网络讲堂第二期- 高效基因导入-电穿孔在生命科学研究中的应用，将于2014年7月8日14：00开课。报名网址：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/1086 ， 欢迎参与研讨!本期简介：现代分子生物学发展的突飞猛进，随着人类基因组计划的完成，21世纪生物学研究已经进入了基因和DNA的微观量级。在这样的大背景下，电穿孔技术经过不断 发展正展示出愈发重要的价值和地位。电穿孔技术是利用电场作用使细胞膜的脂双层膜结构进行重新排列，形成许多微小的孔径，从而是外源分子可以通过细胞膜进 入细胞的一种重要分子生物学技术。如今被广泛应用于生物医药领域，实现基因和药物导入特定的细胞、siRNA基因沉默和基因疗法、细胞融合和单克隆抗体制 备以及核转移和动物克隆。与其他化学和生物导入方式相比，电穿孔有着得天独厚的优势，对导入的外源分子大小没有限制、无细胞毒性、具有很高的实验可重复性 并且操作简单快捷。配合专业设计的多样性电极，电穿孔技术的应用对象也拓展至体外悬浮细胞、活体动物、离体组织、子宫内胚胎、卵内胚胎和贴壁细胞，并且可 以进行大规模96孔高通量应用，从而使得电穿孔技术的应用领域得到了无限扩展，新的应用技术不断涌现......

日本BEX公司的活体/单细胞基因电转化系统及细胞融合系统，在国际上享有盛名!尤其是新款的 LF301细胞融合系统和CUY21VIVIO-SQ活体电传孔系统，因其独到的方波波形加上电阻/电流测量专利技术，以及数十种可供选择的电极，使得细胞融合、基因的转移变得高效而方便! 　　BEX提供数百篇国际权威杂志发表的应用文献，及几十个protocol供参考! 　　日前，首台 LF301细胞电融合系统 落户 中科院上海生命科学研究院细胞生化所&ldquo 动物实验技术平台&rdquo 。用户的融合实验顺利，对仪器的性能高度赞赏! 　　 　　双细胞胚胎融合前后的对照 　　产品咨询热线：13918980949 侯先生

基于全身循环的静脉注射给药模式是癌症化疗最常见的方式。在临床上，化疗药物作用剂量与全身毒性之间存在矛盾关系。局部给药策略可以提高药物在靶部位的积累，但在促进药物在肿瘤内高效递送和在细胞内高效转运的效果方面较为欠缺；而仅依靠被动扩散的药物递送常导致肿瘤细胞内化疗药物含量低，肿瘤杀伤效果欠佳。针对这一问题，北京航空航天大学常凌乾等人在《Advanced Functional Materials》 （IF: 18.8）期刊上发表了题为 “Multimicrochannel Microneedle Microporation Platform for Enhanced Intracellular Drug Delivery” 的研究论文。该工作设计了一种3D 高精度打印的（nanoArch S130，摩方精密）、具有中空微通道的微针阵列（图1）。 图1.多微通道微针微穿孔平台靶向给药原理及制备示意图（平台直径8mm，平台分布间隔500μm的21个微针，微针底部直径300μm，高度500μm，每个微针均含8个贯穿孔道，孔道直径40μm）该生物芯片利用微通道装载药物，并在低电压直流电场的作用下，实现药物分子的快速递送；通过微通道聚焦电场的作用，在微针周围的肿瘤细胞膜发生电穿孔，进一步提高药物递送进细胞的能力。在活体实验中，该技术与周身送药、实心微针和局部板电极电穿孔系统进行了在体对比，在药物递送能力、肿瘤抑制、其他器官毒副作用等方面其优势显著（图2）。图2.试验设计的4M Platform介导化疗药（DOX）体内递送及对肿瘤的抑制作用。 该研究第一单位为北京市生物医学工程高精尖创新中心和北航生物与医学工程学院；常凌乾教授为主要通讯作者；南方科技大学郭传飞教授和北京化工大学庄俭副教授为共同通讯作者；研究生林龙、博士后王玉琼和研究生蔡旻堃为论文的第一作者。 文章链接：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/adfm.202109187

项目编号：NMCX22T-0095-ND2022-06项目名称：内蒙古大学科研仪器设备采购预算金额：985.7000000 万元（人民币）最高限价（如有）：985.7000000 万元（人民币）采购需求：第一包：多功能细胞电穿孔电融合系统等，包括多功能细胞电穿孔电融合系统、细胞成像微孔板检测仪、多功能微孔板读板机，具体要求详见招标文件；预算金额为243万元。第二包：高通量单细胞分离系统等，包括高通量单细胞分离系统、荧光定量PCR仪，具体要求详见招标文件；预算金额为232万元。第三包：免疫组化染色系统等，包括免疫组化染色系统、植物光合荧光测定系统，具体要求详见招标文件；预算金额为228万元。第四包：全波长酶标仪等，包括全波长酶标仪、体式荧光显微镜、植物叶绿素荧光成像系统、基因枪系统，具体要求详见招标文件；预算金额为164.7万元。第五包：全自动体视显微镜等，包括全自动体视显微镜、便携式高通量单分子基因测序仪，具体要求详见招标文件；预算金额为118万元。合同履行期限：详见招标文件本项目( 不接受 )联合体投标。

尊敬的东胜用户： 　　东胜创新一贯注重技术与服务，致力于向广大用户提供最新、最好的技术和全方位的服务。不仅要让用户买得好，还要让用户用得好。 　　为此为用户提供培训和交流的机会是我们做好服务的内容之一。转基因是现代生物技术的核心环节，东胜创新从美国引进的BTX电转化、电融合仪代表着当今世界该领域的最高水平，其技术广泛应用于转基因的各个领域，被列为经典实验规程。 　　为了帮助广大BTX用户更好地用好BTX仪器，扩展更多的应用 也为了促进BTX用户间的交流，特此组织本次培训与经验交流会。 　　除安排主题培训活动外，我们还特别安排了经验交流环节，特邀经验丰富的用户与大家分享实验心得和研究思路，就热门话题进行讨论。 　　热忱欢迎广大BTX用户，到会参加培训和交流经验，促进共同提高。也欢迎已开展转基因研究或正准备要开展相关研究的老师与同学，到会交流。 　　特此通知! 　　北京东胜创新生物科技有限公司 　　2009年11月10日 　　培训讲师：Mrs. Robin Butler，美国Harvard Apparatus公司BTX产品专家 　　议程安排： 　　1)　用户培训阶段：“电转化、电融合技术和应用介绍及常见问题”，现场解答实验中遇到的问题。 　　2)　经验交流阶段：有经验的用户，介绍自己的实验心得和研究思路，提出热门话题，大家进行探讨交流。 　　时间和地点： 　　2009年11月19日下午——上海 　　2009年11月20日下午——北京 　　2009年11月23日上午——沈阳 　　积极参与鼓励：对于现场积极发言的用户，我们将提供小礼品一份，以示鼓励。 　　报名参会方式：感兴趣参会的用户，请与东胜创新各地办事处联系报名参会 　　上海：021-64814661，北京：010-51660023，沈阳：024-22814181 　　也可来电来邮总部咨询报名，电话：010-51663168-6204，联系人：闫小姐 　　信箱：marketing@eastwin.com.cn 　　东胜创新——生命科学产业的助推器，服务并推动生命科学产业的发展! 　　网址：www.eastwin.com.cn 客服热线：800-8108-897

p style=" TEXT-ALIGN: center" strong 第二届电镜网络会议(iCEM 2016)邀请报告 /strong /p p style=" TEXT-ALIGN: center" strong 冷冻样品超分辨光电融合成像技术 /strong /p p style=" TEXT-ALIGN: center" img title=" 纪伟.jpg" style=" HEIGHT: 278px WIDTH: 200px" border=" 0" hspace=" 0" src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201609/insimg/65f6bf9d-8b5c-4597-b5b3-806bc64fa3c8.jpg" width=" 200" height=" 278" / /p p style=" TEXT-ALIGN: center" strong 纪伟 高级工程师 /strong /p p style=" TEXT-ALIGN: center" strong 中国科学院生物物理所 /strong /p p strong 报告摘要： /strong /p p 　　近十年来超分辨荧光成像可以说是生物物理领域最热门的研究方向，尤其是基于单分子定位的超分辨荧光成像技术,它为细胞生物学的研究提供了新的技术手段，高精度的单分子定位图像能帮助研究者观察到许多以前看不到的精细结构。冷冻电镜技术近几年来也是发展的如火如荼，为细胞生物学和结构生物学注入了新的活力。单分子定位荧光成像具有特异性标记、精确分子定位的优势，电镜具有超高分辨率、解析细胞内部细节结构优势。这两种技术的结合衍生出来的超分辨光电融合成像技术(Correlative light and electron microscopy, CLEM)给生物成像技术带来了新的发展契机，该技术通过把定位位置信息和结构信息进行整合、处理，可以表征出目标分子机器在细胞原位的分布、结构。相比常温样品的光电融合成像，冷冻样品的光电融合成像更具优势：(1)低温下荧光分子发光性能提高，成像定位精度也大幅度提高 (2)冷冻样品制备方法能保持样品的近天然状态。 /p p strong 报告人简介： /strong /p p 　　纪伟，中国科学院青促会会员，中国科学院关键技术人才。生物物理研究所正高级工程师。从事新型成像系统的研制工作近十年，发展了单分子探测和超高分辨率光电融合成像技术。 参与三项中国科学院重大科研装备研制项目，其中主持一项。作为主要骨干参与首批国家重大科研仪器设备研制专项《超分辨光电融合生物显微成像系统》的研制。研制的设备和发展的技术产出的成果发表于PNAS、Cell Research、Biophysical Journal、Nature methods等杂志。 /p p strong 报告时间： /strong 2016年10月26日下午 br/ /p p a title=" " href=" http://www.instrument.com.cn/webinar/icem2016/index2016.html" target=" _self" img src=" http://www.instrument.com.cn/edm/pic/wljt2220161009174035342.gif" width=" 600" height=" 152" / /a /p

将小分子、核酸、蛋白质和药物导入细胞是监测和了解细胞行为以及生物功能的重要途径。然而，质膜是阻止外源分子进入细胞的生物屏障。因此，如何在保持细胞活力的同时高效地将外源分子递送到细胞中是细胞生物学领域的一个重要课题。为了克服现有大规模细胞内递送方法的弱点，例如细胞活性和递送效率不一致，主要基于膜破坏介导机制的微技术已成为一种有前景的解决方案。利用化学质膜穿孔进行单细胞递送的尚未得到广泛研究。2024年4月26日，清华大学化学系林金明教授团队在《ACS Applied Materials & Interfaces》杂志在线发表了题为“Chemical Plasma Membrane Perforation Generated by a Microfluidic Probe for Single-Cell Intracellular Protein Delivery”的工作。该研究使用微流控探针将含有毛地黄皂苷和货物的溶液精确地作用到单细胞上。毛地黄皂苷与质膜中的胆固醇结合诱导质膜穿孔，货物通过孔进入细胞。碘化丙啶 (0.67 kDa) 和 FITC-葡聚糖 (10、40 和 150 kDa) 可以在3分钟内成功引入单细胞，同时保持细胞活力。两种蛋白质（细胞色素C和亲环素A）被递送进入细胞，并观察到它们在细胞中得生理功能。图1. 微流控探针诱导单细胞化学质膜穿孔首先，利用Comsol Multiphysics软件对微流控探针形成的微区域进行数值模拟。使用荧光素（扩散系数=500 μm2 /s）来指示溶质扩散。结果表明，注入的溶液可以被完全吸出，并且溶质被限制在液滴状微区域内而不会扩散。微区内溶质浓度分布均匀。计算了基质上的剪切应力，低剪切应力不会对细胞造成额外的机械损伤。实验在与模拟相同的条件下进行，使用荧光素显示微流控探针产生的微区域，与浓度分布模拟结果一致。溶液的连续流动使微区中毛地黄皂苷和货物的浓度几乎恒定，有利于维持递送过程的连续性和稳定性。图2. 流体的数值模拟通过微流控探针进行碘化丙啶（PI）的细胞内递送来验证该方法的可行性以及优化递送条件。尝试使用 20-100 μg/mL 毛地黄皂苷将 PI 递送至U87细胞。随着毛地黄皂苷浓度的增加，ts（PI开始进入时间）和tm（PI进入速度最大时间）逐渐减少，表明细胞穿孔加速。当毛地黄皂苷浓度为60 μg/mL时，ts约为20 s，1 min内即可观察到清晰的荧光。此外，还尝试了不同的PI浓度进行细胞内递送，较高的PI浓度也使得PI能够更快地进入细胞。还测试了流速对递送结果的影响。注入流量保持2 μL/min，抽出流量在6~14 μL/min之间调整。当抽吸流速大于8 μL/min时，进入细胞的PI量随着流速的增长而显着增加。图3. 毛地黄皂苷浓度、PI浓度和流速对细胞内递送的影响为了证明该方法的效率和通用性，使用该方法将PI递送至U87、HUVEC和A549细胞。当递送时间为20秒时，三种类型的细胞几乎不发出荧光。随着递送时间逐渐增加，细胞的相对荧光强度显着增加，递送处理50 s后观察到强烈的红色荧光。由于洋地黄皂苷的作用，质膜逐渐透化，PI通过质膜上形成的孔继续进入细胞。还检查了该方法递送大分子的能力，使用不同分子量（10、40和150 kDa）的 FITC-葡聚糖作为货物。FITC-葡聚糖可以在3min内进入细胞，并且FITC-葡聚糖进入的量随着递送时间的增加而增加。图4. PI和FITC-葡聚糖递送的结果在验证了这种方法用于单细胞胞内递送的可行性后，作者尝试了细胞内蛋白质递送。Cyt C ( Mw = 13 kDa) 是线粒体中的一种蛋白质，可将电子转移到呼吸链以维持ATP的产生。当cyt C释放到细胞质中时，它会引发细胞凋亡。由于外源cyt C在正常情况下不能进入细胞，利用微流控探针将cyt C递送至A549中作为抗肿瘤药物以诱导细胞凋亡。对照组和仅用毛地黄皂苷或cyt C处理的细胞之间未观察到caspase-3水平和Hoechst 33342染色结果的显着差异。毛地黄皂苷诱导的质膜穿孔不会引起细胞凋亡。仅用cyt C处理的细胞中caspase-3的水平也没有增加，表明正常情况下cyt C不能穿过质膜进入细胞激活凋亡途径。然而，在进行毛地黄皂苷介导的cyt C递送的细胞中，caspase-3水平显著增加，蓝色荧光显著增强。细胞形态发生明显变化，细胞体积缩小，并形成凋亡小体。这些结果表明，递送的cyt C成功诱导细胞凋亡，并且外源蛋白可以通过微流控探针有效地引入细胞内并发挥作用。图5. Cyt C被递送至A549以诱导细胞凋亡为了进一步探索这种方法在细胞研究中的潜力，作者利用它来研究肿瘤耐药性。CypA (M w = 18 kDa) 是一种广泛存在的细胞内蛋白质，可充当抗氧化剂。最近有报道称CypA通过重塑细胞氧化状态介导结直肠癌耐药。BCNU是一种常用的抗肿瘤药物，其诱导细胞毒性的机制之一是谷胱甘肽还原酶的抑制导致ROS的积累。利用微流控探针将CypA递送到U87中，研究CypA对胶质瘤耐药性的影响。与对照组相比，未经CypA递送的细胞经BCNU处理1小时后ROS水平显着升高，并且细胞形态发生改变。对于递送CypA的细胞，ROS含量显着低于未递送细胞，并且细胞保持正常形态。结果表明，递送的CypA在细胞中具有抗氧化作用，这可能增强U87对BCNU的耐药性。抑制CypA表达可能是治疗神经胶质瘤的潜在方法。图6. CypA对胶质瘤耐药性的影响总结作者开发了一种基于开放式微流控探针的方法，以方便高效地实现单细胞递送。该方法通过使用化学试剂对单个细胞进行质膜穿孔，将最大分子量为150 kDa 的外源货物递送到细胞中。与载体介导或场辅助递送方法相比，该方法不需要对货物进行额外处理，无需物理场辅助的温和递送条件也避免了对货物和细胞的额外损伤。作者展示了使用微流控探针进行cyt C和CypA的细胞内递送，证明了该方法能够研究外源蛋白质对细胞生命活动的影响。未来，各种货物（肽、蛋白质、mRNA、DNA、质粒、细胞器等）可以通过这种方法导入细胞内，调节细胞的生理功能和命运。而且该方法不需要昂贵的设备，操作简单，有望成为单细胞递送的一种理想方法。清华大学化学系林金明教授为该论文的通讯作者，清华大学化学系2022级博士生宋扬为本论文的第一作者。该研究受到国家重点研发计划（No.2022YFC3400700）和国家自然科学基金（No.22034005）的支持。关于林金明教授工学博士，分析化学专业。1984年福州大学毕业，1992年在日本昭和大学国际交流基金的资助下前往该大学药学部从事访问研究。1994年获得日本政府奖学金转入东京都立大学攻读博士学位，1997年3月获得工学博士学位，同年留校任教，2000年入选中国科学院“百人计划”，受聘中科院生态环境研究中心研究员、博士生导师；2001年获得国家杰出青年科学基金，2002年3月底回国工作，2004年入选清华大学“百名人才引进计划”，受聘清华大学化学系教授、博士生导师。2008年受聘教育部长江学者特聘教授,2014年入选英国皇家化学会会士。目前主要从事微流控芯片质谱联用细胞分析、化学发光/荧光免疫分析、复杂样品前处理分析、空气负离子检测与健康评估等研究。已培养博士研究生43名（含联合培养，其中留学生2名）、硕士研究生28名、博士后11名（其中留学生3名）、访问学者10名（其中外国访问学者1名）。

p style=" text-align: center" img style=" width: 500px height: 333px " src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201607/insimg/a958b6ad-b8e4-428c-ac59-22f50c57a8e8.jpg" title=" " height=" 333" hspace=" 0" border=" 0" vspace=" 0" width=" 500" / /p p & nbsp & nbsp & nbsp 2016年6月21日，国家重大科研仪器研制项目(部门推荐)“光电融合超分辨生物显微成像系统”现场验收会在北京召开。国家自然科学基金委员会(以下简称基金委)副主任沈岩院士出席会议并讲话。基金委计划局局长王长锐、生命科学部常务副主任杜生明研究员、生命科学部副主任冯雪莲研究员、财务局副局长郝观玮及计划局、财务局和生命科学部相关工作人员参加会议。现场验收会议由杜生明研究员主持并担任项目管理工作组长。 /p p 　　根据《国家重大科研仪器设备研制专项实施管理工作细则》和《国家重大科研仪器研制项目验收工作方案(试行)》要求，本次现场验收考核专家组由重大科研仪器专项专家委员会委员、科学部专家咨询委员会委员、管理工作组专家、科技财务评审专家及相关专业同行专家等共13位专家组成，分为仪器测试专家小组、技术文件档案专家小组和财务验收专家组，分别由北京大学程和平院士和中国科学院力学研究所龙勉研究员担任组长。 /p p 　　会上，验收专家组分别听取了项目负责人中国科学院生物物理研究所徐涛研究员的项目工作报告和项目监理组长中国科学院动物学研究所孟令霞研究员的项目监理报告，对仪器技术指标进行了现场实地考察和仪器测试，对项目技术文件档案及归档情况、相关账务报告等进行了审核。经认真讨论，专家组认为，该项目研制原理正确，方案设计合理，通过自主研制核心功能模块，结合购置关键标准化部件，完成了设备级系统的研制，建议继续积极探索该项目研制的科研仪器的开放运行机制，尽快推动仪器使用以发挥其最大效益。 /p

[中国上海]7月17日到19日，2018哈佛仪器亚太区经销商培训会在上海圆满举办，豪沃生物科技（上海）有限公司作为美国哈佛仪器的全资子公司承办了此次会议。来自亚洲各国各地区的经销商都参加了此次会议，共同探讨了BTX新产品、尖端应用以及操作维护使用技巧等，现场反应十分热烈。大会伊始，哈佛仪器亚太区业务总监邓德文先生致欢迎辞。邓总全面介绍了哈佛仪器的创立历史、旗下品牌及公司的经营理念，感谢广大经销商伙伴对哈佛仪器的支持和帮助。BTX作为哈佛仪器旗下品牌至今在电转（电穿孔）和电融合领域已拥有超过30多年的专业经验，世界上第一只著名的克隆羊多利就是利用BTX的电融合仪完成的。邓总表示今后会继续加强合作，争取在亚洲区开辟出更大的天地。 随后，哈佛仪器亚太高级渠道经理张旭先生详细地与大家分享了最新发布的BTX产品。BTX自1983年成立以来，就以电穿孔仪、电融合仪为主要产品，是第一家生产高质量电穿孔仪器的生产厂家，开创了诸多在电穿孔、电融合、转染、转化等方面的最新产品和技术。目前公司在经典款的基础上进行升级，发布了全新的Gemini系列和ECM系列，同时推出了集大容量、电转和电融合于一体的ECM 2001+。新发布的产品，不仅外观更加优雅，性能也日益强大。张经理深入介绍了新款产品的原理特性和市场定位，讲解了如何进行推广，并详细回答了各合作伙伴提出的问题。大家对于BTX电穿孔和电融合仪有了全新的认识，并且充满信心！ BTX是全球专业的转基因、电融合、活体转基因仪及配件的生产厂家，可支持20ul到10mL电转体系，并且可应用于活体、离体、胚胎和卵等等，应用范围非常广泛。亚太区技术专家田蕾女士详尽讲解了BTX电穿孔仪和电融合仪的应用，并结合CRISPR和CAR-T等热门的应用，详细介绍了每款BTX产品的应用方向，大家受益匪浅。 此外，本次会议特别从美国邀请了BTX高级工程师Brian Kangas先生详细地介绍产品的维护和故障判断。Brian Kangas先生以他多年的研发经验，给大家讲解了日常仪器操作技能、仪器条件选择、常见故障判断与排除等。最后会议还安排了上机操作，更换主要配件的方法等学习。通过两天的现场学习，大家对BTX的优越性能和便捷操作给予了肯定，表示以后能更高效率的解决用户在日常操作中遇到的问题，并帮助用户更好的使用BTX产品。 经过三天的交流，与会人员都纷纷表示受益匪浅，大家以热烈的掌声感谢了各位讲演者非常专业的分享，并希望将来能更多的参与此类培训会。至此，2018哈佛仪器亚太区经销商培训会顺利落幕。该培训会不仅提供了高品质的技术交流平台，也加深了哈佛仪器与行业内各企业的沟通、交流、紧密协作。在未来，哈佛仪器将一如既往为广大新老用户提供性能优异的产品和强大的技术支持，共同推动电转电融合应用朝更好更广更深的方向发展！

科技日报讯 美国西北大学开发出一种新型电穿孔微流控装置，能对分化中的干细胞进行电穿孔操作，在细胞生命的最重要阶段能够进行分子输送。这提供了研究神经元等原代细胞所必要的条件，为探索神经疾病致病机制打开了一扇门，可能会引发新一代的基因疗法。 　　电穿孔技术是分子生物学中强有力的技术手段。利用电脉冲在细胞膜上创建一个临时的纳米孔洞，研究人员就能将化学品、药物和DNA(脱氧核糖核酸)直接输送到单个细胞中。 　　但是，现有的电穿孔技术要用很高的电场强度来保持细胞悬浮在溶液中，打断了细胞通路，使敏感的原代细胞处在恶劣的环境中。因此，研究人员要在细胞持续分化和扩大过程中研究细胞的自然属性几乎没有可能。 　　据物理学家组织网近日报道，这个新型装置的英文缩写为LEPD，适用于在人工衬底而非自由浮动的培养基中生长的贴壁细胞，这类细胞的生长必需有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的活培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长和繁殖。 　　研究人员说：&ldquo 不破坏分化却能推送分子进入贴壁细胞的能力，是生物技术学研究者进一步了解相关基础知识的必要条件，尤其有利于进行最先进的干细胞研究。在生物学和医学研究领域，对细胞进行正确环境下的无损操作是非常关键的技术。&rdquo 　　相关成果发表在《英国皇家化学学会》杂志上。

2011年三月美国Harvard Apparatus公司BTX全球销售总监再次亲临北京东胜创新生物科技有限公司拜访，并授予“BTX全球2010年度最佳代理商”。 这是继2010年美国Harvard Apparatus公司授予北京东胜创新生物科技有限公司“2009 BTX全球年度最佳代理商”称号后，我们再度获此殊荣，对东胜创新公司在BTX电穿孔&电融合品牌及产品在中国的销售业绩和市场推广给予了高度的美誉。 东胜创新与BTX厂商在产品的推广、销售和售后等多个方面共同努力，提供给广大用户细致周到的技术及应用支持，从而牢固的树立了在该市场的专业地位和领导地位。 北京东胜创新生物科技有限公司将继续作为BTX产品在中国大陆及香港地区的独家代理商，与美国Harvard Apparatus公司深入合作，并将继续为广大用户提供优秀的产品与服务! 下图：北京东胜创新生物科技有限公司荣获美国Harvard Apparatus公司“2010 BTX全球年度最佳代理商”称号 BTX全球销售总监Ms. Hayley. Smith(左一)、产品专家Ms. Robin Butler(右一)，北京东胜创新生物科技有限公司代表CTO聂尚海(左二)、产品经理李倩倩(右二)。

日本BEX成立近20年，是一家从事分子生物学仪器、试剂研发、生产的科研型公司。至今，产品已经销往100多个国家，已有数百篇使用BEX电穿孔、电融合系统的文献发表在国际知名杂志如Science、Nature上。 　　BEX的产品早期曾经以“半贴牌”方式通过NepaGene等几家公司销售。自2008年后，BEX在原有产品基础上开发一些新的型号，开始拓展自己的全球销售渠道。从此，用户可以用便宜20%的价格买到更高级的产品。 　　长期通过销售BEX产品牟取暴利的OEM经销商从此走上绝路，他们四处散播不实言论迷惑用户，以期鱼目混珠。甚至某孙姓经销商，公然宣称BEX是NepaGene的代理商，销售的是仿制NepaGene的产品，这些谎言指鹿为马，不攻自破! 　　奥然科技呼吁国内代理商凭借自己的实力拓展市场，不要散布不实言论，更不要期望垄断市场以获暴利。适当的利润是企业生存的需要，也是做好售后的保证，但单纯的暴利只会让用户远离我们! 　　注：“半贴牌”意思是在保留原厂家品牌、型号基础上，另外再贴一个销售商的名字

2011年7月12日，北京华盛中天咨询有限责任公司受中国农业科学院特产研究所(以下简称“采购人”)的委托，就“中国农业科学院特产研究所2011年度修购专项仪器设备采购项目”公开中标结果，采购仪器包括拉曼光谱仪、液相色谱仪、激光共聚焦显微镜等60台套仪器设备，采购金额高达1250余万元。具体内容如下所示： 　　1. 项目名称：中国农业科学院特产研究所2011年度修购专项仪器设备采购项目 　　2. 招标编号：HSZT2011HG/023 　　3. 招标公告日期：2011年6月15日 　　4. 开标日期：2011年7月5日 　　5. 定标日期：2011年7月6日 　　6. 中标供应商如下： 包号 设备名称 数量 备注 中标厂商及金额 第1包 拉曼光谱仪 1 进口 北京昊特伟业科技有限公司 人民币2419000元 超高压液相色谱仪 1 进口 第2包 激光共聚焦显微镜 1 进口 北京锐驰恒业仪器科技有限公司 人民币1698000元 第3包 全自动快速电泳系统 1 进口 北京元业伯乐科技发展有限公司 人民币1288700元 全自动电泳系统 1 进口 高效DNA电泳系统 1 进口 荧光差异双向电泳系统 1 进口 凝胶成像系统 1 进口 蛋白质纯化层析系统 1 进口 电穿孔仪 1 进口 第4包 大容量高速冷冻离心机 1 进口 吉林省一向科技有限责任公司 人民币1009180元 高速冷冻离心机（二） 1 进口 多功能酶标仪 1 进口 高温灭菌二氧化碳培养箱 2 进口 厌氧工作站 1 进口 梯度PCR仪 1 进口 第5包 电融合仪 1 进口 长春轩盛经贸有限责任公司 人民币1595400元 微量样品高灵敏光吸收酶标仪 1 进口 小型智能化移液工作站 1 进口 舒适型恒温混匀仪 1 进口 精子动力分析系统 1 进口 试纸条三维喷点平台 1 进口 第6包 倒置显微注射仪 1 进口 北京锐驰恒业仪器科技有限公司 人民币1082000元 智能型系统生物显微镜 1 进口 正置荧光显微镜（一） 1 进口 正置荧光显微镜（二） 1 进口 第7包 恒温摇床 1 进口 北京迪索仪器有限公司 人民币1500000元 实时荧光定量PCR系统 1 进口 高速台式冷冻离心机 1 进口 高速冷冻离心机（一） 1 进口 落地式高速离心机 1 进口 超低温冰箱 2 进口 -85℃立式超低温冰箱 1 进口 台式细菌罐/细胞罐 1 进口 厌氧培养箱 1 进口 二氧化碳培养箱 1 进口 中试发酵罐 1 国产 制冷型培养摇床 1 进口 第8包 梅特勒精密天平 1 进口 北京昊特伟业科技有限公司 人民币1139100元 近红外分析仪 1 进口 核酸蛋白测定仪 1 进口 冷冻研磨机 1 进口 灌注型旋转细胞培养系统 1 进口 水纯化系统 1 进口 自来水处理系统 1 进口 自动高压蒸汽灭菌器 1 进口 立式超声波处理器 1 进口 第9包 生物安全柜 2 国产 吉林市威腾医疗仪器有限公司 人民币857000元 热风循环烘箱 1 国产 高档型呼吸麻醉机 1 国产 小鼠独立送回风净化笼IVC 1 国产 真空灭菌柜 1 国产 立式超低温冰箱 1 国产 试纸条切割机 1 国产 实验室常规冻干机 1 国产 二级生物安全柜 2 进口 　　7. 评标专家：赵飞、阚飙、王荣福、刘世亮、李毅民、刘继忠、陈立志 　　8. 采购人：中国农业科学院特产研究所 　　9. 招标代理机构：北京华盛中天咨询有限责任公司 　　联系人：熊小平 　　电 话：010-62262447 北京华盛中天咨询有限责任公司 2011年7月12日

近日，清华大学欧阳证教授课题组在analytical chemistry上发表了single-cell mass spectrometry analysis of metabolites facilitated by cell electro-migration and electroporation，且以acs editors' choice形式亮点报道。 文章介绍了基于细胞电迁移-电穿孔的单细胞质谱分析方法，该方法无需细胞高精度操控平台，仅通过对单细胞施加一定序列的电压，即可实现对单个酵母等具有细胞壁的细胞内代谢物的可控释放与质谱分析。 acs美国化学会报道： acs 编辑良择 | 基于细胞电迁移-电穿孔的单细胞质谱分析方法通讯作者：欧阳证，清华大学作者：zishuai li (李自帅)，zhengmao wang (王正茂)，junmin pan (潘俊敏)，xiaoxiao ma (马潇潇)，wenpeng zhang (张文鹏)，zheng ouyang (欧阳证) 单细胞分析对研究细胞在转录组学、蛋白组学以及代谢组学等方面的异质性有着重要的意义。目前，科学家们开发了大量的单细胞分析方法和技术，例如荧光分析法、微流控芯片、流式细胞仪、单细胞测序等。质谱分析，因其低样品消耗量、高灵敏度、高定量准确性等优势，已经被广泛应用于单细胞蛋白组学、脂质组学和代谢组学分析中。然而，目前大部分的单细胞质谱分析方法，都需要依托于高精度操作平台，这给单细胞分析技术的应用带来了一定的挑战。 清华大学欧阳证教授课题组报道了一种基于细胞电迁移-电穿孔的单细胞质谱分析方法。该方法无需细胞高精度操控平台，仅通过对单细胞施加一定序列的电压，即可实现对单个酵母等具有细胞壁的细胞内代谢物的可控释放与质谱分析。如图1所示，在硼玻璃纳喷管中加入适当体积(约0.5 μl)的细胞悬浮液(约104细胞/ml)，该溶液内平均只含有单个细胞。由于细胞表面通常带负电，通过非接触式电极对溶液施加直流负电压，使细胞迁移到纳喷管尖端，并在针尖处封闭一段超小体积(约1.5 pl)的液体。之后施加高压脉冲电压，在细胞膜表面形成电穿孔，细胞内代谢物即释放到前端的超小体积液体中，从而避免了细胞内代谢物的过度稀释。最后，采用非接触式电极加压，由纳升电喷雾离子化将该部分溶液离子化并进行质谱分析。图1. 基于细胞电迁移-电穿孔的单细胞质谱分析方法 该研究中，首先用酵母细胞进行了方法验证。如图2所示，从离子流热图中可以看出，施加脉冲电压后，在质荷比m/z 50到800的范围内出现了大量的代谢物离子信号。图2b-c中比较了施加脉冲电压前后的单细胞分析质谱图。通过精确质量对比、串级质谱分析等方法，该课题组在单个酵母细胞内检测到了71种代谢物。图3a-f展示了几种典型代谢物的串级质谱谱图。 图2. (a)质谱离子流热图。在5 s时刻施加了高压脉冲电压。(b)负离子模式。(c)正离子模式。 图3. 负离子模式下单酵母菌代谢产物典型的串级质谱谱图 (a) glu, (b) gsh, (c) amp, (d) adp, (e)atp, (f) udp-hex. 除了酵母细胞，该方法还可用于其他种类的具有细胞壁结构的单细胞菌类的高灵敏度质谱分析。图4展示了莱茵衣藻(chlamydomonas reinhardtti)、杜氏盐藻(dunaliella salina)、斜生栅藻(scenedesmus obliquus)、绿眼虫(euglena viridis)的单细胞分析质谱图。图4. 不同种类细胞的单细胞质谱谱图。从内向外依次为：莱茵衣藻，杜氏盐藻，斜生栅藻，绿眼虫。 此外，该课题组还研究了不同培养环境下，单个细胞内代谢物相对含量的变化情况。将两组莱茵衣藻细胞，分别在有/无光照条件下培养24小时，之后采用本方法进行单细胞内代谢物的质谱分析。单细胞质谱分析表明，在黑暗条件下，衣藻细胞内的卡尔文循环内的碳固定被终止，细胞内有氧呼吸强度下降，糖酵解代谢增强。此时，细胞的光合作用停止，细胞通过糖酵解分解糖类以提供基本的代谢需求，同时降低有氧呼吸强度以维持生存。图5. 黑暗条件下的莱茵衣藻单细胞内部分代谢物强度比值变化。 本研究的相关结果已发表在analytical chemistry，并以acs editors' choice形式亮点报道。该论文得到了国家自然科学基金项目的支持。 文章链接：https://pubs.acs.org/doi/full/10.1021/acs.analchem.0c02147

新华社华盛顿1月4日电(记者任海军)美国麻省理工学院4日发表公报称，该学院科学家开发出一种高效的细胞融合新方法，大大提高了细胞融合的准确率。 　　细胞融合又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象。自发的动物细胞融合几率很低，从上世纪60年代开始，人工诱导细胞融合作为一门新兴技术发展起来，目前已被广泛应用于细胞生物学和医学研究各个领域。 　　据麻省理工学院介绍，过去，人工诱导细胞融合技术面临的最大障碍是难以高效地将细胞正确配对。例如，科学家希望将分属不同类型的细胞A和细胞B进行配对融合，通常情况下，除了得到所需的AB型细胞外，还会得到很多不需要的AA型和BB型细胞。而该学院科学家开发出的新方法，则能够保证获得所需要的配对细胞，提高了细胞融合的准确率。 　　细胞融合技术在医学上有重要意义，例如，可通过把病变组织和器官的细胞与健康干细胞融合，对患者进行治疗 还可通过阻止癌细胞融合控制癌症发展等。 　　这项研究成果已刊登在4日的《自然• 方法学》杂志网络版上。

北京华盛中天咨询有限责任公司受中国农业科学院特产研究所(以下简称“采购人”)的委托，就“中国农业科学院特产研究所2011年度修购专项仪器设备采购项目”进行公开招标，欢迎合格的供货商前来进行密封投标。 　　1.1 项目名称：中国农业科学院特产研究所2011年度修购专项仪器设备采购项目 　　1.2 招标编号：HSZT2011HG/023 　　1.3 项目资金来源：财政资金 　　1.4 招标内容： 　　本次招标内容分为9包，共56个品目60台套设备。各包遴选1家合格的供货商为采购人提供供货服务。具体分包情况如下： 序号 包号 设备名称 数量 备注 1 第1包 拉曼光谱仪 1 进口 2 超高压液相色谱仪 1 进口 3 第2包 激光共聚焦显微镜 1 进口 4 第3包 全自动快速电泳系统 1 进口 5 全自动电泳系统 1 进口 6 高效DNA电泳系统 1 进口 7 荧光差异双向电泳系统 1 进口 8 凝胶成像系统 1 进口 9 蛋白质纯化层析系统 1 进口 10 电穿孔仪 1 进口 11 第4包 大容量高速冷冻离心机 1 进口 12 高速冷冻离心机（二） 1 进口 13 多功能酶标仪 1 进口 14 高温灭菌二氧化碳培养箱 2 进口 15 厌氧工作站 1 进口 16 梯度PCR仪 1 进口 17 第5包 电融合仪 1 进口 18 微量样品高灵敏光吸收酶标仪 1 进口 19 小型智能化移液工作站 1 进口 20 舒适型恒温混匀仪 1 进口 21 精子动力分析系统 1 进口 22 试纸条三维喷点平台 1 进口 23 第6包 倒置显微注射仪 1 进口 24 智能型系统生物显微镜 1 进口 25 正置荧光显微镜（一） 1 进口 26 正置荧光显微镜（二） 1 进口 27 第7包 恒温摇床 1 进口 28 实时荧光定量PCR系统 1 进口 29 高速台式冷冻离心机 1 进口 30 高速冷冻离心机（一） 1 进口 31 落地式高速离心机 1 进口 32 超低温冰箱 2 进口 33 -85℃立式超低温冰箱 1 进口 34 台式细菌罐/细胞罐 1 进口 35 厌氧培养箱 1 进口 36 二氧化碳培养箱 1 进口 37 中试发酵罐 1 国产 38 制冷型培养摇床 1 进口 39 第8包 梅特勒精密天平 1 进口 40 近红外分析仪 1 进口 41 核酸蛋白测定仪 1 进口 42 冷冻研磨机 1 进口 43 灌注型旋转细胞培养系统 1 进口 44 水纯化系统 1 进口 45 自来水处理系统 1 进口 46 自动高压蒸汽灭菌器 1 进口 47 立式超声波处理器 1 进口 48 第9包 生物安全柜 2 国产 49 热风循环烘箱 1 国产 50 高档型呼吸麻醉机 1 国产 51 小鼠独立送回风净化笼IVC 1 国产 52 真空灭菌柜 1 国产 53 立式超低温冰箱 1 国产 54 试纸条切割机 1 国产 55 实验室常规冻干机 1 国产 56 二级生物安全柜 2 进口 　　注：上述设备清单中“备注”栏中填“进口”的设备，均已通过财政部门的进口产品审批。 　　1.5 供货商资格 　　1.5.1 在中华人民共和国境内(不包括港澳台地区)依法注册的独立法人，注册资金在伍拾万元人民币以上 　　1.5.2 具有所投设备的国内代理权或制造商授权，所投设备可在中国境内合法销售并提供相应服务 　　1.5.3 具备《政府采购法》第22条规定的必须具备的如下条件：具有良好的商业信誉和健全的财务会计制度 具有履行合同所必需设备和专业技术能力 有依法缴纳税收和社会保障资金的良好记录 参加政府采购活动前三年内，在经营活动中没有重大违法记录。 　　1.5.4 供货商必须在近三的经营活动当中没有重大违法纪录，不能是正在接受有关部门审查、被其他企业兼并(收购、重组等)和因重大经济纠纷正在法院打官司的企业，也不应是被相关机构宣布上了“黑名单”的企业。 　　1.5.5 必须向招标机构购买招标文件并登记备案，未向招标机构购买招标文件并登记备案的潜在供货商均无资格参加投标。 　　1.6 本项目不接受联合体投标，不允许将部分项目分包和转包。 　　1.7 招标文件售价：人民币500元 若邮购，每份加收人民币50元，招标文件售后不退。 　　1.8 招标文件发售时间、地点及注意事项 　　1.8.1 发售时间：自2011年6月15日至2011年6月21日，每天(法定节假日除外)上午9:00-11:30，下午13:30-16:00。 　　1.8.2 发售地点：北京市海淀区西直门北大街甲43号金运大厦B座1008室。 　　1.8.3 注意事项：供货商在购买招标文件时须向招标代理机构提供加盖公章的营业执照复印件。 　　1.9 投标文件递交、截止的时间和地点　　1.9.1 递交时间：2011年7月5日9:00-9:30。 　　1.9.2 截止时间：2011年7月5日9:30，超过截止时间递交投标文件将不予受理。 　　1.9.3 递交地点：北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院研究生院办公楼二层第二会议室 　　1.10 开标时间和地点 　　1.10.1 开标时间：2011年7月6日9:30，届时请各供货商派代表出席开标仪式。 　　1.10.2 开标地点：北京市海淀区中关村南大街12号中国农业科学院研究生院办公楼二层第二会议室 　　1.11 招标代理机构相关情况 　　开户名称：北京华盛中天咨询有限责任公司 　　开户银行：中国民生银行北京西直门支行 　　银行账户：0123014170005724 　　联 系 人：王先生、熊先生 　　电 话：010-62272347 　　传 真：010-62272347 　　电子邮箱：hsztzb@126.com

北京倍辉科技诚邀辽宁、吉林，黑龙江三省独家合作代理商倍辉科技有限公司是国内创新科技的引领代理商，位于科技密集的北京中关村。我们致力于将先进的产品及技术更好的服务于中国快速发展的生命科学及药物研究领域，涵盖活体动物成像，基因表达研究，非标记细胞成像研究，蛋白功能研究，转基因领域及纳米技术。有意向的代理商，请发邮件至：info@bio-sun.com.cn 或联系13701242384 蔡经理，也诚挚邀请其他省份的代理商联系合作。一． 两大重量级常规仪器（独家代理）1. 美国Denovix公司DS-11/DS-11+超微量分光光度计，采用安卓智能app触摸屏操作，高端悬臂式检测模式（远优于微量比色杯式），自动感应变换光程，最新的斜率检测技术，终生无需校准，堪称目前性能最好的超微量分光光度计2. 日本BEX公司CUY21EDIT II超级多模式细胞/活体基因电转化仪， BEX专利多模式脉冲技术，不用任何专用试剂即可高效转染原代细胞，血液细胞，免疫细胞等难转细胞，以及最佳的动物活体基因电转功能，既1998年BEX研发出全球第一款专业活体基因电转化仪之后又一款具有里程碑意义的电转化仪。CUY21Vitro-ex电穿孔仪，常规细胞电穿孔明星产品。LF301细胞融合仪，具备最佳的融合性能。二． 两大高端细胞研究利器（独家代理）1. 瑞典Phiab公司激光全息细胞成像及分析系统。激光全息技术是目前最佳的非标记细胞分析技术，可以提供完整的细胞形态学参数及图像分析，尤其适合于细胞增殖分化，细胞计数，细胞迁移，细胞凋亡，细胞3D成像分析等的研究。产品分为M3高端型和M4 mini型2. 瑞典Ridgeview公司Green蛋白-细胞相互作用分析系统。瑞典Ridgeview公司的创建者也是SPR技术的发明人。SPR技术是小分子互做研究的经典，但不适合于细胞样品的分析。Green是目前唯一一款细胞基础上的互做研究产品，应用广泛，包括病毒-细胞，细菌-细胞，蛋白-细胞，药物-细胞，细胞-细胞等的互做研究三． 其他著名品牌1. 日本ATTO公司，著名的基因表达发光检测仪，电泳，凝胶成像制造商。最新款RGB多色凝胶成像分析系统，超高性价比（独家代理）。2. 美国MDI公司，著名的拉针仪，煅磨针中心，细胞超微注射泵制造商（独家代理）3. 丹麦Labogene公司，著名的冻干机，真空浓缩仪，冷却循环水浴制造商（一级代理）北京倍辉科技有限公司www.bio-sun.com.cn发布者：倍辉科技有限公司联系电话：010-51581369/E-mail：info@bio-sun.com.cn

近年来，肿瘤免疫疗法已广泛应用于癌症的临床治疗中，各种类型的免疫细胞特别是那些可以通过细胞间接触溶解靶细胞的免疫细胞受到了研究人员的重点关注。其中，由于自然杀伤细胞（NK）具有非特异性直接杀伤肿瘤细胞的特性，被认为是人体抵抗癌细胞和病毒感染的第一道防线。许多研究表明，免疫突触（IS）的形成是NK细胞清除靶细胞的关键，它们可以识别和消除病毒感染和转化的癌细胞。尽管对IS的特征及其形成过程有了深入了解，但通过细胞骨架调节其稳定性的机制尚不清楚。近期，韩国生物科学与生物技术研究院免疫治疗研究中心的研究团队在著名期刊《Nature immunology》发表了题为“NgR1 is an NK cell inhibitory receptor that destabilizes the immunological synapse”的文章，他们报道了一种新型的NK细胞抑制性受体Nogo受体1（NgR1），它通过干扰接触稳定性和调节IS形成来影响NK细胞对表达NogoA靶细胞的杀伤能力，并确定NgR1为IS形成过程中的免疫检查点，提出了一个可用于改善肿瘤免疫治疗的潜在靶点。为了验证NgR1干扰NK细胞的抗肿瘤功能，该团队首先研究了NgR1在细胞表面的表达，结果显示NgR1在多种免疫细胞中均有表达，如小鼠原代NK细胞、CD8 T细胞和EL4细胞系（图1a），而NgR1的配体NogoA在各种癌细胞系中表达。随后，对NgR1是否参与免疫细胞的细胞溶解过程进行了研究，发现在NEP1-40（NgR1的拮抗肽）处理后，NgR1敲除小鼠（KO）的脾细胞比WT小鼠的脾细胞具有更高的细胞溶解能力（图2c），并验证了NEP1-40的特异性（图1d）。接下来，通过建立WT和KO小鼠肺转移小鼠同基因模型（图1e），进一步证明了NK细胞中的NgR1对肿瘤生长具有负调控作用。此外，为了研究NgR1缺陷导致的抗肿瘤效果的改善是否源于免疫成分的内在变化，对WT和KO小鼠的免疫细胞群进行了分析（图1h）。结果表明，NgR1缺陷并不影响免疫细胞的组成，提示NgR1主要参与NK细胞的效应功能。图1 NgR1缺陷增强了NK细胞杀伤能力在小鼠中，NgR1参与了NK细胞的肿瘤控制，因而在人类NK细胞中也可能具有重要的作用。作者发现，NgR1及其辅助受体在人体UCB-NK、PB-NK、MNK、NK92和Jurkat细胞系中都有表达（图2a）。为研究NgR1的信号转导机制，使用Nogo-P4（NgR1激动肽）在NK细胞中激活了NgR1，发现在NK92细胞和UCB-NK细胞中，RhoA和LIMK都被激活，而Cofilin失活（图2b）。RhoA的激活通过肌动球蛋白的收缩和粘连蛋白的失活来促进应力纤维的形成，导致肌动蛋白细胞骨架重组。且F-肌动蛋白的积聚会引起细胞膜突起的形成，从而影响细胞的迁移和黏附。通过在表达Lifeact-GFP的NK92细胞中直接显示F-肌动蛋白，并使用视频显微镜观察Nogo-P4处理对F-肌动蛋白动态变化的影响。结果表明，经过Nogo-p4处理的NK92细胞中F-肌动蛋白强度和膜突出频率都显著增强（图2c、d、e）。这些数据表明，NK细胞中的NgR1通过RhoA信号调节肌动蛋白细胞骨架。图2 NgR1促进NK细胞F-肌动蛋白聚合随后，为了评估NgR1在NK细胞杀伤中的特异性，作者通过调节NK细胞或靶细胞中NgR1的表达来探究NK细胞介导的细胞杀伤作用。在几乎不表达NogoA的肿瘤细胞中，使用或不使用NEP1-40阻断NgR1对NK的杀伤效果没有差异（图3a）。而在过表达NogoA的K562肿瘤细胞中，NK介导的杀伤效果显著降低，并可以被NEP1-40所挽救（图3b、c）。在用NEP1-40处理后，NK细胞对U87MG细胞的细胞毒性增强（U87MG细胞是一种已知高表达NogoA35的脑瘤细胞系）（图3d）。并且当抑制U87MG细胞中NogoA的表达或NK92细胞中NgR1的表达时，同样会增强NK细胞毒性（图3e、f）。因此，上述结果表明，在NogoA存在的情况下，NgR1对NK细胞的细胞溶解功能具有抑制作用。值得一提的是，为了在K562细胞中过表达NogoA和在NK92细胞中抑制NgR1的表达，研究人员使用了NEPA GENE公司的NEPA21高效基因转染系统分别对上述细胞进行电穿孔，并成功将pCMV-NogoA质粒和NgR1 siRNA导入至相应细胞中，实现基因过表达和敲降的目的。图3 NK细胞介导的杀伤作用以NogoA-NgR1依赖性方式被抑制接下来，作者通过活细胞成像系统观察了NK细胞与靶细胞之间的相互作用，以探究NgR1如何抑制NK细胞介导的细胞杀伤。结果表明，大多数对照NK92细胞与U87MG细胞只有瞬时相互作用，而NEP1-40处理的NK92细胞与U87MG细胞稳定接触，且部分NK92细胞最终杀死U87MG细胞（图4a）。通常情况下，NK细胞与靶细胞先产生瞬时相互作用，然后形成稳定突触，再引导裂解细胞颗粒的极化分泌进行靶细胞裂解（图4b）。研究发现，NEP1-40处理显著减少了瞬时相互作用，增加了接触时间，从而增强了细胞毒性（图4c-e）。这表明，NgR1信号通过干扰稳定的突触形成来降低NK细胞的杀伤作用。在后续实验中，该团队还通过一系列实验深入探究了NgR1信号调节NK细胞与靶细胞接触的分子机制，证明了NK细胞与靶细胞的接触是由NgR1信号通路介导的F-肌动蛋白动态变化实现的，NgR1能促进F-肌动蛋白从细胞间接触向外聚合，导致NK92细胞在细胞颗粒向IS极化之前脱离。最后，他们使用异种移植小鼠模型对NgR1阻断剂的治疗效果进行了初步研究，证明了NgR1在免疫细胞中的表达可以作为免疫检查点抑制IS的形成，并认为NgR1可能是肿瘤控制中一个新的治疗靶点。总之，作者通过严谨的实验设计和巨大的工作量证明了NgR1是一种新型的NK细胞抑制性受体，它通过LIMK-cofilin介导的肌动蛋白动态变化来抑制稳定IS的形成，进而调控NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，揭示了NgR1改善NK细胞功能的一种潜在机制。在本研究的转染实验中，该团队多次借助NEPA21电转染仪将质粒和siRNA成功导入至肿瘤细胞或NK细胞中，这显现出NEPA21在难转染细胞中具有良好的转染效果，可以为科研人员在NK细胞的研究中提供强大助力。NEPA21高效基因转染系统采用全新设计的电转程序，配合专利的电压衰减设计，在获得高转染效率的同时，提高细胞存活率。操作简单，电转参数可见可调，适用性强。特别适用于难转染的原代免疫细胞、干细胞、神经细胞、活体动物、受精卵及宫内胚胎等的转染，已应用于众多著名期刊文献中，是进行悬浮/贴壁细胞、活体和离体组织转染的电转系统主流品牌之一。 文献信息（1）论文链接：https://www.nature.com/articles/s41590-022-01394-w（2）参考文献：Oh, SC., Kim, SE., Jang, IH. et al. NgR1 is an NK cell inhibitory receptor that destabilizes the immunological synapse. Nat Immunol 24, 463–473 (2023).https://doi.org/10.1038/s41590-022-01394-w

水牛是一种分布于热带和亚热带气候条件下的一种家畜，可为人类提供奶、役力和牛肉。全世界水牛总数约为15.8亿头，亚洲存养的水牛数占世界的97%。 由于其经济效益和应用价值，繁殖动物学家需要对牛、羊等大型动物进行研究。近年来，转基因经济动物，如转基因牛、乳腺发生器等研究非常热门。但牛不是一种常规实验室的模式生物，所以在细胞转染和基因改造时，可参考的经验不多。 文献表明，脂质体转染法对水牛细胞的转染效率不高，常规的电穿孔仪常带来较高的细胞死亡率、且转染率也不理想。一些新型的电转染仪，虽然能为许多难转染的细胞带来福音，但其转染试剂盒多针对人、鼠等动物开发，没有专用于牛的试剂盒。 NEPA21不需要转染试剂盒，利用优化的程序即可达到高的转染效率，为水牛甚至其它经济动物的转基因研究带来了便利。 2012年4月，华粤行仪器有限公司在广西大学展开水牛胎儿成纤维细胞的转染试用活动，获得了较高的转染效率和细胞存活率。实验者对NEPA21的转染效果给予了较高的评价。 GFP标准质粒转染水牛胎儿成纤维细胞效果图

细胞与基因治疗是生物制药市场中增长最快的细分领域之一，也是除抗体药物领域外，另一个备受资本市场追捧的赛道，虽然一度受2016年的魏则西事件所影响，但仍阻挡不住各方对这一领域的看好和投入，近些年，国内不断涌现出专注于细胞与基因治疗产品的企业，到2024年，预计全球细胞与基因治疗市场规模将达437亿美元。有人说，细胞与基因治疗正在开创一个新的医疗时代。近几年，细胞与基因治疗研发投入在急剧增加，而这一过程必然离不开相关的技术和实验室工具，用于基因操作、细胞生长和维持，目前，许多现有实验室工具和新的技术正被应用于细胞与基因治疗产品研发、质量控制和生产制造过程中。2021年最新调研数据显示，细胞与基因治疗的实验室工具市场规模超过20亿美元，其中许多技术和产品呈双位数增长，随着这一领域的快速发展，相关的实验室产品市场也将水涨船高，目前，已有众多规模不一的仪器供应商加快了该领域的布局。细胞与基因治疗研发生产所用的仪器和耗材可简单分为六个部分：通用技术、基因治疗工具、转导与转染、细胞富集、细胞培养与扩增和冷冻保存。每一部分都包括一套广泛用于细胞与基因治疗开发制造的技术，包括仪器和消耗品。其中有成熟的实验室技术和产品，如PCR和流式细胞仪，还有较新的技术，如CRISPR和自动细胞处理系统。微流控、实时监测和生物信息学相关分析技术主要用于细胞与基因治疗确保产品产品的安全性和法规依从性，以及解决生产效率的问题，这些问题正是细胞与基因治疗走向市场所面临的挑战。细胞与基因治疗 实验室工具清单类别产品通用技术PCR细胞分析细胞计数基因治疗工具CRISPR质粒提取纯化转导与转染病毒载体转座子电穿孔细胞富集细胞分离细胞分选仪自动化细胞处理系统细胞培养与扩增乳细胞培养若血清补充剂GMP细胞培养基GMP血清及补充剂常规生物反应器一次性悬浮生物反应器一次性附着生物反应器冷冻保存冷冻介质和保护剂冷冻袋和冷冻瓶据悉，细胞培养和扩增产品在细胞与基因治疗工具市场中占比最高，最常用的消耗品是细胞培养基和血清，在细胞扩增领域的仪器方面，一次性生物反应器的需求正在快速增长。与传统反应器相比，一次性生物反应器具有更加灵活和节省时间的优越性。这一市场的规模也一定程度上反映了细胞疗法的高成本。上面所说的细胞培养和扩增细分市场占比最高，不包括按市场规模划分的两个最大的单个技术细分市场，主要是归类到通用技术和基因治疗工具市场中，这两类市场也是细胞与基因治疗领域非常具有代表性的市场，同样由耗材产品驱动，其中通用技术贯穿与整个实验室工作流。在细胞与基因治疗领域，赛默飞、默克生命科学是两大领先的实验室产品供应商，他们可提供的产品范围十分广泛，并且在细胞培养和扩增市场占有重要地位，此外，Cytiva、赛多利斯、BD和康宁公司也是这一领域主要的实验室产品供应商。除以上主要的工艺产品供应商外，还有一些特定技术的供应商，包括艾本德、贝克曼库尔特、Miltenyi Biotec和STEMCELL Technologies等。随着全球越来越多的细胞与基因治疗产品获得监管部门的批准，逐步形成标准化的研发流程和生产流程，细胞与基因治疗实验室工具将伴随着这一领域的发展而前景广阔。

中国 河北（2011年9月27日）9月20日，全球领先的生物技术公司Eppendorf 在中国农业大学成功举办显微操作及细胞培养讲座。来自中国农业大学和农科院畜牧所的近30位师生参加了本次讲座，并现场体验了Eppendorf的显微操作仪。 上午的讲座中，来自Eppendorf 的产品专家重点介绍了当iPS（诱导多能干细胞）研究的新进展，以及显微操作技术在iPS研究中的应用。同时，进行了Eppendorf显微操作仪、二氧化碳培养箱和电穿孔仪等细胞学领域相关应用产品的操作演示。在下午的实验环节中，师生们亲自动手参与实践，通过Eppendorf 的显微操作系统进行小鼠卵细胞的显微注射实验，加深了对Eppendorf显微操作仪卓越性能的体验。 iPS是近年细胞学研究的热点，中国农业大学和农科院畜牧所一直是转基因动物研究领域的重点机构，拥有众多高水平的实验室和一流研究学者。一直以来，Eppendorf 非常关注细胞学研究领域，并注重客户对公司产品的体验。在与尖端院所的合作中，Eppendorf产品得到了广大客户的认可，坚定了公司在细胞学领域发展的信心。 更多细胞学相关信息，请登录公司主页www.eppendorf.cn 关于艾本德(Eppendorf) 德国艾本德股份公司于1945年在德国汉堡成立，是一家全球领先的生物技术公司。产品包括移液器、分液器和离心机，以及微量离心管和移液吸头等耗材，此外还提供从事细胞显微操作的仪器和耗材、全自动移液系统、DNA扩增的全套仪器。产品主要应用于科研、商业化的研发机构、生物技术公司以及其他从事相关生物研究的领域。2007年Eppendorf收购美国New Brunswick Scientific (NBS) 公司，拓展了其细胞培养领域的产品线。 关于艾本德中国(Eppendorf China Ltd.) 2003年Eppendorf在中国注册了艾本德（上海）国际贸易有限公司和艾本德中国有限公司，分别在北京、广州设立分公司，启动直销的经营模式，为中国客户提供更便捷的技术售后服务。目前全国雇员数量近200名，产品销售覆盖各大中型城市，是Eppendorf全球发展最快的子公司。

2012第三届国际神经科技大会将与第五届世界癌症大会、第二届分子与细胞生物学大会于5月18日至20日，在北京国际会议中心同期举行。本次大会主题为&ldquo 打开神经系统的黑匣子&rdquo ，探讨交流的内容涉及神经科学的突破性研究、神经元沟通的新机制、感觉和运动系统、神经科学与医学等十大分会的近百余个议题。届时，将邀请全球神经研究领域最顶级最著名的专家、各国科学院院士、500强企业高管等做报告。并邀请来自世界上30多个国家和地区的神经领域科学家、研究员、课题组长等出席大会。 此次，华粤行将派遣专业技术队伍参加大会，并邀请日本NEPA GENE公司创始人早川先生及海外营业部经理宫村敦先生来华参会，我们将在我们的展位（展位号为17号）为您展示我们为细胞/动物研究提供的完整解决方案。同时在19日16：40分301会议室，宫村敦先生将作为演讲嘉宾发表题为&ldquo Transfection into neurons in diverse ways using an advanced electroporation system&rdquo 的演讲，内容丰富、技术含量高，精彩不容错过！ 经过近30年的发展革新，电转染已成为基因的功能研究领域中不可或缺的技术手段。NEPA GENE公司专业研发、生产细胞电转染仪及电融合仪等，其生产电转染仪在研究领域中久负盛名，已被数百篇文献引用，其中不乏高水平杂志的文章，如Nature、Cell、PNAS、Genes &Dvelopment等。 2011年，NEPA GENE推出新一代全能型高效基因转染系统NEPA21，该系统采用专利设计的三步法电转染程序，在对细胞膜进行穿孔的同时，利用&ldquo 电泳效应&rdquo 将外源基因高效的导入到细胞当中。并且配合独有的反向导入（Reverse Transfer）及电压衰减（Voltage Decay）设计，可在提高转染效率的同时，大大提高细胞存活率。 欢迎各位届时莅临指导！

肺癌是最具侵略性的肿瘤类型之一，根据致癌因素对病人进行分层的靶向治疗会显著改善非小细胞肺癌（Non-small-cell lung cancer，NSCLC）患者的治疗效果【1】。然而在NSCLC中最常见的肺腺癌中有25-40%的病例中找不到具体的致癌驱动因素【2】。为了对非小细胞肺癌的致癌驱动因素进行进一步地探究，2021年11月24日，日本国家癌症中心东医院Koichi Goto研究组与Susumu S. Kobayashi研究组合作发文题为The CLIP1-LTK fusion is an oncogenic driver in non-small-cell lung cancer，揭开了非小细胞癌肺癌新驱动因素CLIP1-LTK融合蛋白，并发现了可以作为临床治疗的药物参考。致癌驱动因素的发现会揭示非小细胞肺癌的发病机制，比如在76%的肺腺癌样本中受体酪氨酸激酶-RAS-RAF通路会出现体细胞致癌驱动突变【3】。而基于转录组测序的方法可以帮助发现非小细胞肺癌中其他的致癌驱动因素，比如CD74-NRG1蛋白融合【4】。而基于这些研究响应开发出来的激酶抑制剂会对病人的治疗策略进行进一步的优化，从而提高患者的生存率。2013年，作者们构建了多机构联合的肺癌基因组筛查平台LC-SCRUM-Asia，该平台可以识别肺癌的致癌驱动因素，并在临床开发分子靶向治疗。作者们希望利用该平台寻找目前无法治疗的NSCLC患者中的致癌驱动因素。为了对新的致癌驱动融合基因进行鉴定，作者们对目前LC-SCRUM-Asia平台中目前成因未知的病人样本进行了全转录组测序分析（Whole-transcriptome sequencing，WTS），从中鉴定发现了一个符合阅读框的转录本：位于染色体12q24的CLIP1以及位于15q15位置的LTK融合转录本（图1）。LTK和ALK构成受体酪氨酸激酶的ALK/LTK亚家族，而CLIP1是微管末端跟踪蛋白家族的成员之一。图1 CLIP1-LTK融合蛋白结构域示意图随后，作者们想知道该融合蛋白与肺癌之间的关系，所以对LC-SCRUM-Asia平台中所有572个肺癌样本都进行了检测，发现其中有两个病人表现出CLIP1-LTK融合转录本阳性的特征，占NSCLC病人比例的0.4%，并且这两个病人体内没有其他已知的致癌驱动因素。该结果说明CLIP1-LTK融合转录本的出现可能是NSCLC的特征性致癌原因。CLIP1-LTK融合蛋白中具有coiled-coil结构域，该结构域会协助蛋白质的二聚化，因此作者们想知道该融合蛋白是否会形成二聚体从而组成性地激活LTK的激酶活性。通过CLIP1、LTK以及CLIP1-LTK分别在细胞中进行瞬时转染，作者们对LTK的磷酸化水平进行检测，发现与其他组别相比CLIP1-LTK的转染显著增加LTK的磷酸化水平， 也就是说在融合蛋白存在的情况下LTK具有更高的激酶活性。随后，作者们找到了CLIP1-LTK融合蛋白中的激酶活性缺失突变位点，该结果进一步地确认了CLIP1-LTK是组成性激活的。另外，作者们也对CLIP1-LTK融合蛋白的定位进行检测，发现CLIP1-LTK融合蛋白与LTK本身在细胞表面的表达模式不同，由于该融合蛋白缺乏LTK的跨膜结构域，所以CLIP1-LTK融合蛋白主要定位在胞质之中。进一步地，通过对细胞进行表型分析，作者们发现瞬时转染CLIP1-LTK融合蛋白的细胞会表现出圆形的细胞形态，同时细胞之间也会缺乏接触抑制，这些结果说明CLIP1-LTK融合蛋白使得细胞具有转移特征。为了证实CLIP1-LTK融合蛋白在体内的转移活性，作者们将体外培养的细胞移植到裸鼠的体侧（图2），发现只有CLIP1-LTK融合蛋白会导致肿瘤产生因因而是致癌驱动因素，并且该融合蛋白发挥作用依赖于其激酶活性。图2 CLIP1-LTK融合蛋白会导致肿瘤产生以上的结果表明，CLIP1-LTK融合蛋白可能会是NSCLC病人体内的潜在治疗靶标。所以作者们首先对CLIP1-LTK融合蛋白转染的细胞中施用了一些美国食品和药物管理局批准的或正在研究酪氨酸受体激酶抑制剂，发现其中Lorlatinib的处理会显著降低肿瘤细胞的生长。进一步地，作者们对病人进行Lorlatinib 100mg每天的常规剂量进行临床治疗，发现CLIP1-LTK融合蛋白激酶活性受到抑制，同时肿瘤的生长也会受到抑制（图3）。图3 CLIP1-LTK融合蛋白分型的NSCLC病人施用Lorlatinib会抑制肿瘤生长总的来说，该工作发现CLIP1-LTK融合蛋白是非小细胞肺癌新的致癌驱动因子，并表明激酶抑制剂Lorlatinib可以靶向该融合蛋白。未来将需要对CLIP1-LTK融合蛋白进行分子靶向抑制剂的临床开发，以及对该致癌驱动因素进行临床筛查和验证。原文链接：https://doi.org/10.1038/s41586-021-04135-5

项目概况广州海洋实验室仪器公共平台（一期）设备购置（第二批）采购项目 招标项目的潜在投标人应在www.o-science.com；获取招标文件，并于2021年12月22日 09点30分（北京时间）前递交投标文件。一、项目基本情况项目编号：OITC-G210351355项目名称：广州海洋实验室仪器公共平台（一期）设备购置（第二批）采购项目预算金额：1450.0000000 万元（人民币）最高限价（如有）：1450.0000000 万元（人民币）采购需求：包号序号采购内容数量是否允许采购进口产品最高限价（万元人民币）11分选型流式细胞仪1套是3402分子相互作用分析仪（又称生物分子相互作用分析仪）1套是1803厌氧工作站1台是214超速冷冻离心机1套是725大容量高速冷冻离心机1套是436高速冷冻台式离心机1台是157高速冷冻离心机1套是88微孔板离心机1台是139全自动染色机1套是3810冰冻切片机1台是2811植入式动物生理监测系统1套是11012光控神经元电生理记录分析系统1套是11513制备/半制备液相色谱系统1套是4814微量热泳动仪1台是15815石蜡包埋机1台是1416石蜡切片机1台是1617烘片机1台是1.218摊片机1台是1.219恒温培养箱1台否2.820-80℃超低温冰箱10台否9021电子天平（十万分之一）1台否4.222普通天平2台否1.823PH计1台否0.324超声波清洗器1台否0.9525电热鼓风干燥箱2台否1.226超净工作台4台否6.427二氧化碳培养箱2台否1228生物安全柜2台否1129全自动高压蒸汽灭菌器1台否730制冰机1台否4.531小动物麻醉机1台否432气动皮升点针式电穿孔显微操作仪1套是1733激光散斑血流监测视频系统1台否4534组织研磨仪1台是1135低温保存箱1台否336低速冷冻离心机1台否4.6537电子天平（千分之一）1台否1.8 合同履行期限：品目1～18为合同签订后4个月内交货，品目19～37为合同签订后1个月内交货。本项目( 不接受 )联合体投标。二、申请人的资格要求：1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定；2.落实政府采购政策需满足的资格要求：无3.本项目的特定资格要求：1）符合“《中华人民共和国政府采购法》第二十二条要求” ；2）在中华人民共和国境内依法注册的，具有独立承担民事责任能力，遵守国家法律法规，具有良好信誉，具有履行合同能力和良好的履行合同的记录，具有良好资金、财务状况的法人实体；3）为本项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商，不得参加本项目投标；4）投标单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同供应商，不得参加同一合同项下的政府采购活动；5）按本投标邀请的规定获取招标文件；6）本项目不接受联合体投标；7） 投标人不得为列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单、政府采购严重违法失信行为记录名单的供应商。三、获取招标文件时间：2021年12月01日 至 2021年12月08日，每天上午9:00至12:00，下午14:00至17:00。（北京时间，法定节假日除外）地点：www.o-science.com；方式：登录东方在线www.o-science.com注册并购买。

外泌体内容物包含蛋白质、RNA、DNA和脂类，可以被设计用于药物传递系统与疾病的新型诊断标志物，具有重要的研究意义。但传统的技术方法如Western Blot，ELISA，无法获得单个外泌体的蛋白表型，更不能将检测内容物与粒径分析、浓度分析、计数等联系起来，大地制约了外泌体内容物的相关研究。单外泌体表征分析（Exoview）是将免疫学与光学结合的一种新技术[1]。先利用免疫识别将特定的外泌体进行捕获分离，然后再对目标外泌体的表面标志物及内容物（如携带的蛋白质、RNA、DNA及细胞因子）进行定量分析，从而更加全面地反映外泌体内容物的特性。相对于传统的手段主要优势有：☛ 无论是尿液、血清、血浆、组织液、细胞液均无需纯化，即可检测；☛ 检测灵敏度高，单外泌体水平探测；☛ 一次性输出指标丰富，单次检测即可输出外泌体的：粒径、技术、表面标志物（CD9/CD63/CD81）、荧光表达及亚群分布；本文选取了部分单外泌体表型分析技术在内容物方向的新进展，供大家参考。J Extracell Vesicles：单外泌体水平的蛋白内容物检测与定量 外泌体的内容物可以通过生物工程手段修饰。其中，将选择的蛋白内容物与外泌体的EV-sorting proteins通过细胞工程融合是常用的方法。这种方法既可以在腔内储存可输送到靶细胞的内容物，也可以让内容物与靶细胞表面受体结合来增强它们的治疗信号特性或靶向能力。因此，Silva等[2]在单外泌体水平上，通过分析工程化外泌体技术对不同外泌体的EV-sorting proteins在促进蛋白内容物的装载效率进行了评估。研究人员分别将含有7种EV-sorting proteins（GFP偶联）的质粒分别转染Expi293F细胞，分离纯化了细胞分泌的外泌体后检测外泌体的表型并进行蛋白定量。ExoView芯片上包被的CD63/CD81/CD9抗体捕获外泌体后，使用带红色荧光的CD63/CD81/CD9荧光抗体标记所有外泌体，带绿色荧光的GFP荧光抗体标记表达GFP的外泌体（图1a）。图1b是外泌体的荧光扫描图像，可以确认每个荧光标记了GFP外泌体同时也被CD63/CD81/CD9标记，由此可以计算出含目标蛋白外泌体占总数的比例（图1c）。ExoView还可以检测单个外泌体的荧光强度，进而得到样品荧光强度的均值（图1d），可以表示GFP的相对含量。以上结果表示，CD63，TSPAN14和CD81TM能够使目的蛋白内容物高效地装载外泌体。图1. ExoView检测外泌体表型与相对含量 Lab on a Chip：细胞外囊泡介导的母胎之间HMGB1信号诱导早产早产（PTB，小于37周的妊娠）每年影响了全球约11％的孕妇，造成100万新生儿的死亡。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是一种警报素，是衰老羊膜细胞通过细胞外囊泡释放的炎症信号之一。羊水、脐带血和孕妇血液中的HMGB1水平升高与足月和早产有关。Enkhtuya Radnaa等[3]通过电穿孔把正常羊膜上皮细胞的外泌体改造为装载HMGB1的外泌体（eHMGB1）并对其进行表征。结果显示导致PTB的装载HMGB1的外泌体（eHMGB1）与增加的母-胎界面（FMi）炎症有关。该研究证明了胎儿外泌体介导的旁分泌信号传导可以产生炎症并诱导分娩。其中，研究人员使用单个外泌体表型分析技术( ExoView )检测了电穿孔法向外泌体载入HMGB1的效率。ExoView的芯片上包含了CD63/CD81/CD9抗体，分别捕获了未装载（eCTRL）和装载HMGB1的外泌体（eHMGB1），使用试剂盒自带的穿膜试剂对外泌体进行处理后，再使用荧光抗体分别标记HMGB1/CD63/CD9，进行粒径检测和表型分析。图2粒径检测结果显示，eCTRL和装载HMGB1的外泌体（eHMGB1）的粒径分布没有显著差异，表示电穿孔处理没有改变外泌体的粒径。 图2. ExoView检测未装载（eCTRL）和装载HMGB1的外泌体（eHMGB1）的粒径分布 图3荧光计数结果显示，装载HMGB1的外泌体（eHMGB1）中HMGB1阳性外泌体数量明显高于eCTRL，而CD9和CD63阳性的外泌体在两个样本中数量接近，这表明HMGB1已成功装载到eHMGB1中（图3）。图3 ExoView检测未装载（eCTRL）和装载HMGB1的外泌体（eHMGB1）的表型 在以上的研究中，ExoView系统能够以高的灵敏度和特异性地检测到外泌体的内容物，同时对外泌体的表型进行准确全面的表征。外泌体内容物的研究、编辑和外源分子导入，是当今外泌体研究的重点，在临床诊断和生物治疗方面具有巨大的潜力。作为外泌体表征分析的倡导者，美国NanoView Biosciences于2018年推出了全自动外泌体荧光检测分析系统ExoView，该系统一经推出，便引起了外泌体领域科研工作者的广泛关注，凭借其稳定、出色的性能，短短几年在全球已有近百个客户，发表文献100多篇。ExoView的表征，能够帮助科学家更深入地了解外泌体与疾病之间的关系，助力疾病诊断和新药开发。参考文献： [1] Radnaa, E., Richardson, L. S., Sheller-Miller, S., Baljinnyam, T., de Castro Silva, M., Kammala, A. K., ... & Menon, R. (2021). Extracellular vesicle mediated feto-maternal HMGB1 signaling induces preterm birth. Lab on a Chip, 21(10), 1956-1973.[2] Silva, A. M., Lázaro‐Ibáñez, E., Gunnarsson, A., Dhande, A., Daaboul, G., Peacock, B., ... & Dekker, N. (2021). Quantification ofprotein cargo loading into engineered extracellular vesicles at single‐vesicle and single‐molecule resolution. Journal of Extracellular Vesicles, 10(10), e12130. 全自动外泌体荧光检测分析系统（ExoView R100）简介Nanoview所开发的全自动外泌体荧光检测分析系统（ExoView R100）采用单粒子干涉反射成像传感器（SP-IRIS）技术，是一款无需纯化的全自动的新型外泌体表征设备。该设备能够提供全方位的外泌体表征信息，包括颗粒大小、计数、表型与生物标志物共定位等，提供多层次和全面的外泌体测量解决方案。 为了更好的服务中国客户，Quantum Design中国子公司在北京建立了专业的客户服务中心，正式推出专业的全方位外泌体表征测试服务，您只需要少量样品即可获得全方位的外泌体表征数据。欢迎各位老师垂询：010-85120280。前10名订购服务的老师，可享受8折优惠！扫描上方二维码，即刻订购吧！