液相色谱分离分析系统

多维液相色谱分离系统一般采用定量环(loop)或富集柱（trap ）作为中转环节，按照用途可分为分析型和制备型，按照运行原理可分为并行系统和串行系统。分析型一般采用并行模式，分离速度快，国外产品占用优势。制备型一般采用串行模式，国内产品具有领先优势。

最近，研究二维液相色谱系统，发现岛津和湖南德米特的二维液相色谱系统，几乎独家垄断，价格比两套lc20还高。

第九课 液相色谱仪－进样系统，分离系统 进样系统一般高效液相色谱多采用六通阀进样。先由注射器将样 品常压下注入样品环。然后 切换阀门到进样位置，由 高压泵输送的流动相将样品送人色谱柱。样品环的容积 是固定的，因此进样重复性好。 分离系统 分离系统包括色谱柱、连接管、恒温器等。色谱柱是高 效液相色谱仪的心脏。它是 由内部抛光的不锈钢管制成 ，一般长10—50cm，内径2—5mm，柱内装有固定相。液 相色谱的固定相是将固定该涂在担体上而成。担体有两 类：一类是表面多孔型担体；另一类是全多孔型担体。 近年来又出现了全多孔型微粒担体。这种担体检度为5 —10 um，是由nm级的硅胶微粒堆积而成，又叫堆积硅 珠。由于颗粒小，所以柱效高，是目前最广泛使用的一 种担体。 在高效液相色谱分析中，适当提高柱温可改善 传质，提高桂效，缩短分析时间。因 此，在分析时可以 采用带有恒温加热系统的金属夹套来保持色谱拄的温度。 温度可以在室温到60℃间调节。

液相色谱柱柱温对分离分析有多大的影响？

在测试中心液相色谱组呆了20多年，见过无数的客户，不同的客户对色谱的理解不一。很多人认为色谱就是打一针，出个谱图而已，容易的很，跟他们的科研档次无法比。觉得样品给你了，你必须做出来，而且很快得到其所需要的结果，全然不管你的仪器能否满足要求。做不好或者不想做，就会去告状，服务态度不好之类的。所以一旦征求意见，必然出现各种各样的服务问题。测试人员的地位在学校可见一斑。也有少数本身做液相色谱的，这些人沟通起来非常融洽，因为知道其实际做起来不容易，可惜这类的客户仅有百分之几。在色谱分析的三大分支中，我对液相、离子熟悉，对气相只是很了解，没动手做过。对于这三大类型，其实在实际中做的差别是很大的。先以我精通的离子色谱而言，我几乎涉及了所有的类型，离子色谱能否做关键在于设备，常规的很简单，特殊的全靠设备支撑，因为大部分离子色谱的分析都是优化的方法，固定的模式做起来并不难。但非常规的样品，则难度大大增加，即使同一个组分，由于基体差别，分析方案也是千差万别。也就是常规的很简单，特殊的则很难。现在厂家离子色谱方法开发就是一种特化的过程。离子色谱主要分析离子以及一些极性的化合物，表面上看应用范围比较窄，其实在很多领域有很好的应用，可以解决液相色谱无法解决的一些问题。对于气相色谱，复杂性比离子色谱要高，因为被测的有机化合物种类大大增加，但从气相的结构看，其载气的选择是非常有限的，主要靠色谱柱（极性，非极性，弱极性等），分离则依赖温度的程序升温，它真正的变化在色谱柱，在一般的分析中，大多变化在温度，柱子的变化并不多。因此对于气相色谱，基本就几根柱子。当然一些特别的检测则需要更高级特殊的装置，这跟离子色谱一样。由于受沸点的制约，气相色谱的应用受到很大的限制。而对于液相色谱，就我20年的经历，我认为其复杂性远远高于离子色谱和气相色谱。因为其变化比前二者更多，一是液相色谱分离有很多机理，每种机理都有对应的色谱柱类型，液相色谱的分离机理大约有十来个，很少有人会用过全部机理类型的色谱柱。虽然反相是最常见的分离手段，但由于反相的广泛使用，C18柱的变化类型极多差异很大，这不同C18柱之间的差异有时不亚于不同机理之间的差异。二是，液相色谱最大变化是流动相，不仅有机相类型有变，添加剂类型和浓度有变，不同pH差别很大，面对变化无穷的样品，这个流动相选择变化规律全靠长期的经验积累，很难用文字一言以蔽之。三是，液相色谱的检测器类型最多，离子色谱就三种，气相四五种，而液相色谱的检测器有十来种，相互之间差别极大，不同的检测器对色谱分离机理也有很大的选择性。因此要做好一张液相色谱图，很多情况下只能是你现有条件下的最佳分离，并不是这个化合物的最佳分析条件。对于特殊样品的分析，液相色谱更多的依赖于检测器和柱子的变化，同离子色谱不同。给你一个样品，用那类色谱(液相、气相还是离子)，什么柱和条件，则完全依赖你的功底和阅历，当你拥有尽可能多的仪器装备，你才能充分发挥你的能力，依据化合物的特点，样品的特性，选择合适的仪器和配置，做出最佳的色谱图。

液质联用仪因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。 液质联用仪用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。液质联用仪还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。

Agilent 1200系列快速高分离液相色谱系统培训文档安捷伦1200系列快速高分离 LC 系统，与常规 HPLC 相比，在没有牺牲分辨率、精密度和灵敏度的前提下，分析速度提高20倍，高分辨率提高60%。安捷伦1200系列快速高分离液相系统可提供最快分析速度、最高分辨率，同时最大限度地保持系统低压力而设计的。因此，它保留了常规 HPLC 仪器和方法的耐用性和工作原理。这种独特的设计使1200 RRLC成为了一种通用的液相分析流速范围适合的柱尺寸从1 到4.6-mm ID, 10 到 300-mm 柱长，粒度1.5到 10 µ m。 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=67227]安捷伦1200系列快速高分离系统[/url]

下式为分离度计算公式http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/R.JPGN：柱效(Efficiency)反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。在其他条件恒定的情况下，塔板数增加一倍，分离度仅提高40%。操作中，可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度：其一，使用长柱或双柱串联，但也会使分离时间大大延长；其二，使用细粒径填料的色谱柱，但这需要耐更高压力的液相色谱系统。相比之下后者更为可取。α：选择性(selectivity)是指色谱柱-流动相体系分离两个化合物的能力。选择性主要与固定相、流动相组成以及柱温等因素有关，与保留值也密切相关，其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反相模式为例，反相柱(包括C18、C8、PH等)是以分配作用对化合物进行保留的，不同化合物的分离是基于它们在键合相与流动相中分配系数的差异，如果两种化合物的水溶性、在烷烃-水体系的分配系数等方面存在明显差异，那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离；PH柱对具有苯环的化合物具有特殊保留。正相模式下，硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用，对化合物的基团具有选择性，常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面，降低流动相的洗脱强度通常可以增大分离度；而有机溶剂类型也会影响分离，比如反相条件下，乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异，这种差异需要在实践中摸索，但无论如何，多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能。k：随着容量因子k的增大，分离度也随之增加，这种影响在k值较低时非常明显，当k值大于10时，k值增加对分离度的影响就不再显著，这就告诫无原则地提高k值以增大分离度是没有意义的。增加键合相密度能够提高k值；另外改变键合基团类型也能改变k值，比如在反相色谱中，随着键合相碳链长度的增加，k值逐渐增大。

1 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项高效、快速的分离分析技术。液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。这种柱色谱技术称做高效液相色谱法。它可用来作液固吸附，液液分配，离子交换和空间排阻色谱（即凝胶渗透色谱）分析，应用非常广泛。高效液相色谱法具有以下几个突出的特点。1.1 高压 液相色谱法以液体作为流动相（称为载液），液体流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。在现代液相色谱法中供液压力和进样压力都很高，一般可达到150~350×105Pa。高压是高效液相色谱法的一个突出特点。1.2 高速 高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液体色谱法少得多，一般都小于1h，例如分离苯的羟基化合物七个组分，只需要1min就可完成；对氨基酸分离，用经典色谱柱，柱长约170㎝、柱径0.9㎝、流动相流速30mL·h-1，需用20多小时才能分离出20种氨基酸，而用高效液相色谱法，只需1h之内即可完成。载液在色谱柱内的流速较之经典液体色谱法高得多，一般可达1~10mL·min-1。1.3高效 气相色谱法的分离效能很高，柱效约为2000塔板/米；而高效液相色谱法的柱效更高，约可达3万塔板/米以上。这是由于近年来研究出了许多新型固定相（如化学键合固定相），使分离效率大大提高。1.4高灵敏度 高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如紫外检测器的最小检测量可达纳克数量级（10-9g）；荧光检测器的灵敏度可达10-11g。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少，微升数量级的试样就足以进行全分析。高效液相色谱法由于具有上述优点，因而在色谱文献中又将它称为现代液相色谱法，高压液相色谱法或高速液相色谱法。气相色谱法虽具有分析能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子质量大（大于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75％~80％）原则上都可用高效液相色谱法来进行分离、分析。高效液相色谱法的基本概念及理论基础，如保留值、分配系数、分配比、分配度、塔板理论、速率理论等与气相色谱法是一致的，但有其不同之处。液相色谱法与气相色谱法的主要区别可归结于流动相的不同。液相色谱法的流动相为液体，气相色谱法的流动相为气体。液体的扩散系数只有气体的万分之一至十万分之一、液体的粘度比气体大一百倍，而密度为气体的一千倍左右。这些差别显然将对色谱过程产生影响。

浅谈高效液相色谱分析中常见问题及对策高效液相色谱（HPLC）作为一种分离技术和方法，目前已经发展到一个全新的阶段。高精度的输液泵，应用广泛的色谱分离柱，低噪音、高灵敏度的各种检测器和功能强大的数据处理软件系统的出现，都推动了液相色谱技术的迅猛发展。液相色谱仪正以它分辨率高、分析速度快和应用广泛的优点倍受仪器分析工作者的青睐，广泛地应用于医药卫生、环境监测、食品检测等领域。作者本人从事液相色谱分析分析工作二十多年，应用HPLC技术在血药浓度、生物胺、核普酸、蛋自质浓度测定等实际工作中，积累了许多的方法和经验，在这里与大家交流，希望能对同行们有所帮助和借鉴，共同促进液相色谱分析技术的发展。1 高效液相色谱仪的基本工作原理　　高效液相色谱仪如图1所示，是由溶液贮器、高压泵、进样系统、色谱分离柱、检测器和数据处理系统几部分组成。http://www.came-online.org/userfiles/090109150117044709ny0sff.jpg

制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中，组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中，酶的分离是微克级；在植化和合成化学领域中，为了鉴别未知成份并进行结构测定，需要得到一至若干毫克的纯品；在药品和医药学测试中，需要克级的标准品和对照品；在当今的工业级提纯中，制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定，包括：生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品（分析标准）毒物学分析所需组份：高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产，活性成份，药物 制备方法的发展和扩大规模的计算　　在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别就是超量进样。其结果，超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线　　分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 　 在分析液相中，最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。　 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中，这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少，那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样　　大样品量的纯化有两种可行的方法：分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样，暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法，在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。　在浓缩法中，样品的浓度会提高，但进样体积保持不变。容量因子k’降低，同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 　　如果样品组份的溶解性很差，浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中，这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素，所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 　 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 　 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 　 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 　 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 　 需要小颗粒填料 方法的放大　浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的时候，优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 　　因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的，选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量，因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的　　判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数：产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的，因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率，但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品，但是产量和收率却是很低的。　 在色谱图2中峰有很好的分离，因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量，但是生产效率却很低。　 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开，这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。　 在实际应用中，每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。

1月23日，安捷伦科技推出了该公司最新一代Agilent 1200系列液相色谱系统，该系列将是安捷伦科技著名的1100系列液相色谱的换代产品。作为一种常规的分析测试手段，全球有超过250，000家的用户在使用液相色谱产品，其市场规模约为二十亿美金，这也是安捷伦科技LSCA部收入的主要来源之一。 自从1995年1100系列液相色谱问世以来，安捷伦总计售出了大约60，000套液相色谱系统（如果按单个系统模块计算，则超过400，000），使得1100系列成为液相色谱市场最为成功的产品之一。最新推出的1200和现在的1100具有良好的兼容性，从而最大限度地保障了用户单位在资金和时间方面的投入不受损失。用户单位可以根据自己的需要，选择新的模块和现有的模块进行组合，也可以继续使用已有的分析方法而无需花费资金去开发新的方法以及重新培训操作人员。对于那些暂时使用非安捷伦操作软件的用户，安捷伦科技还可以专门为他们提供一种1100仿真模拟模式。 据安捷伦科技有关人士介绍，Agilent 1200是一款功能极其完善的液相色谱系统，其可选的仪器模块数量超过60个，可以灵活组合以满足液相色谱不同应用领域的需要，包括：快速分离液相（最新推出）、制备液相、标准液相、窄柱液相、毛细管液相、纳升级液相以及安捷伦科技开创性的芯片液相等。目前，芯片液相技术既可以用于小分子领域也可用于大分子领域，即可用于色谱分离，也可作为进样装置。而采用纳流喷雾离子化的HPLC-Chip/MS技术，其灵敏度较之常规的LC/MS提高了1000倍。

[font=arial, helvetica, sans-serif][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱购买网站：www.hplcs.cn[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（Liquid Chromatography, LC）是一种用液体作为流动相的色谱技术，它以化学分子在移动相与定相之间的相互作用力不同而分离化合物。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱分离中，样品通过液体载流剂（流动相）在拥有化学成分不同的柱填充剂（定相）中分离。柱填充剂可以选择性地吸附特定成分，或者在某些情况下，通过反应改变样品分子的表面性质，以分离成分。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]具体来说，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱分离的原理是样品分子在流动相和定相之间发生不同的相互作用力。这些相互作用力包括静电作用、疏水作用、亲水作用、氢键作用、离子键作用、金属络合作用等。在柱填充剂中，这些样品分子会与柱填充剂中的固定相发生相互作用，被吸附或排斥，使得化合物在柱中的滞留时间不同。因此，化合物分离时，需要根据样品分子的特性和柱填充剂之间的相互作用选择不同的流动相和柱填充剂。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]总体而言，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱分离是一种在流动相和定相之间通过吸附、反应或其他相互作用力将样品分离的技术。这种分离方法主要用于药物分析、天然产物分析、食品化学分析、石油化学分析等各种领域。[/font][img=空柱管柱筛板5]https://www.hplcs.cn/uploads/4ec892851.jpg[/img]

在液相色谱分析过程中，我们经常遇到的问题主要有二种，一种与液相色谱仪器本身因素有关，如液相色谱的阀门、混合器、检测器的光源以及其它的一些硬件设备。出现这类问题后，如果能找出问题根源，解决起来一般很简单，而且这类问题可以通过对仪器的精心维护来避免;而另一类问题则是分析方法本身造成的问题，如出现色谱峰形状不好、峰与峰之间不能分开、基线飘移等等。不幸的是，如果出现这类问题，看起来似乎很明显，但是要找出原因并解决这类问题却非常困难。为了减少出现这一类型的问题，就必须在分析之前，仔细研究并选择一个好的分析方法，有了一个好的分析方法，就很容易获得理想的分离效果，而且在出现问题是也很便于找出原因。要选择一个好的分析方法，就必须对液相色谱分析的一些基本原则要有一个很深的了解。下面是我们实验室对色谱分析人员进行技能培训的一些基本知识。　　一：分析方法选择的基本原则　　假如你想做一顿丰盛的晚餐，首先必须看一下食谱，然后检查一下你所需的东西是否齐全，如果少了配料还必须去商店购买，这样你才可能做出一顿可口的晚餐。同样进行液相色谱分析时，也必须按照一定的程序进行，首先你必须要有专门的仪器和试剂，然后有目的地选择分析方法，这样你才可能得到好的分析结果，避免走一些弯路。　　二：柱子的选择　　在液相色谱分析方法中最重要的就是色谱柱的选择，色谱分析人员面对几百种色谱柱，你从何入手呢?我采取的方法就是订阅 LCGC亚太版中RonMajors 的“色谱柱观察”这一专栏，自1984（1）年以来，RonMajors在这一专栏中介绍许多新柱子、色谱柱新技术、色谱柱使用方法等方面的信息。　　现在大部分液相色谱分析都是使用反相液相色谱柱，其中以C18 和C8柱最为流行。然而色谱分析并不是流行歌曲，这两种色谱柱之所以运用广泛是因为在大多数情况下，使用这两种柱子都能获得理想的分离效果。尽管一些样品的分离并不是这两种柱子（如表一所示），但 C18和C8经常是最好的固定相，C18和C8柱两者之间并无明显的差别，但在我们实验室中以常使用的是C8柱。　　色谱分析人员遇到的多数样品需要利用反相色谱柱进行分析，但一些样品可能需要其它的分析技术才能成功地分离，这些样品及分离方法在表一中作了简要的叙述，在以后的章节中将进一步阐述。　　表一：样品及分析方法[color=bla

[color=#00008B][B]该帖为楼主自己整理，帖中所有楼主撰写的内容未经授权不得转载，否则属侵权违法行为！[/B][/color]看到很多版友发帖求助讨论准确性的问题，我特意整理了一个关于定量分析误差问题的帖子，希望对大家有所帮助。高效液相色谱定量分析过程可分为样品的前处理、标准品的配制、进样、色谱分离、检测及数据处理等七个步骤。[B]一 误差的主要来源[/B]随着现在市场销售仪器自动化程度的提高，进样、色谱分离、检测及数据处理等实验环节对实验结果产生的误差越来越小，尤其在高效液相色谱定量分析中，实验结果的误差可能主要来源于样品的前处理及标准品的配制。[B]1、样品的前处理 [/B]样品的萃取率是样品前处理时存在的主要问题。当固-液萃取（含柱分离的前处理方法），液-液萃取时，存在萃取率不高且不稳定的问题。尤其在除去蛋白质时，存在变性蛋白质会吸附一些被测组分，导致萃取率降低的情况。通常，萃取率是通过在式样中添加被测成分在萃取的方法评价的。也就是说，被测成分的增加量和液相色谱中的峰面增大成比例关系，通过这种方法可以确定溶液中被测成分的变化趋势。 如果存在萃取率不稳定的问题，就有必要改变萃取的方法，要预先添加内标，然后萃取。这种情况采用的内标，必须与被测物质的化学结构类似，萃取的萃取率才可能相近。如果回收率不但接近100%而且较为稳定，可以证明这种前处理方法较为可靠。在分析中如果能充分考虑以上误差产生的各种原因，才有可能得到精确的分析结果。 [B]2、标准品的配制[/B]本帖中讨论的问题带有普遍性，影响高效液相色谱分析结果准确性的因素较多，仅在标准溶液的配置过程中，可以分为标准物质的称量，溶液的配制和溶液的储存三个环节。 作为标准溶液使用的标准物质其纯度要求很高，应避免使用纯度不符合要求的试剂，作为标准溶液使用的标准物质具有不可替代性，现在市场有销售的HPLC专用的溶剂及各种标准试剂可供实验选择；其次选择与样品浓度要求相适应的天平，应该尽可能使用高精度的天平，这样才能把由于天平使用带来的称量操作误差降至最低。[B]二 消除误差的方法[/B] 要提高分析结果的准确度，必须考虑在分析过程中可能产生的各种误差，采取有效措施，将这些误差减到最小。[B]1、选择合适的分析方法[/B] 各种分析方法的准确度是不同的。化学分析法对高含量组分的测定能获得准确和较满意的结果，相对误差一般在千分之几。而对低含量组分的测定，化学分析法就达不到这个要求。仪器分析法虽然误差较大，但是由于灵敏度高，可以测出低含量组分。在选择分析方法时，一定要根据组分含量及对准确度的要求，在可能条件下选最佳分析方法。[B]2、增加平行测定的次数[/B] 如前所述增加测定次数可以减少随机误差。在一般分析工作中，测定次数为2—4次。如果没有意外误差发生，基本上可以得到比较准确的分析结果。[B]3、消除测定中的系统误差[/B] 消除测定中系统误差可采取以下措施：其一是做空白实验，即在不加试样的情况下，按试样分析规程在同样操作条件下进行的分析。所得结果的数值称为空白值。然后从试样结果中扣除空白值就得到比较可靠的分析结果。其二是注意仪器校正，具有准确体积的和质量的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平，都应进行校正，以消除仪器不准所引起的系统误差。因为这些测量数据都是参加分析结果计算的。其三是作对照试验，对照试验就是用同样的分析方法在同样的条件下，用标样代替试样进行的平行测定。将对照试验的测定结果与标样的已知含量相比，其比值称为校正系数。 校正系数=标准试样组分的标准含量/标准试样测定的含量 被测试样的组分含量=测得含量×校正系数 综上所述，在分析过程中检查有无系统误差存在，作对照试验是最有效的办法。通过对照试验可以校正测试结果，消除系统误差。[B]4、样品定量分析过程中的误差[/B]样品处理要尽量减少操作者的技术问题带来的误差，样品的稀释次数、稀释工具都是误差的祸根，应尽量减少稀释次数，稀释工具用高准确度的。样品中的干扰组分会直接影响分析的准确度，而且有些组分会损坏柱子。纯化样品的过程尽量少用蒸发至干的步骤（在色谱分析中这一步又是不可少的），正确操作固相柱萃取、纯化小柱使用的步骤，注意提高每一步的回收率，使用内标法也是一个能准确定量的方法。 在手动进样中进样体积至少是样品定量环管体积的3倍，色谱分离程序要使色谱峰的分离度大于1.5，控制流动相、流量、温度等的平稳。流动相的污染都会抬高基线或减少信噪比，分辨率下降，试验条件的变化，如柱退化、不好的流动相等都能引起保留时间变化，引起一个峰或更多的峰不能被鉴别。正确设定仪器参数，选用合理的数据处理参数，用峰面积计算结果比峰高更精确。[B]三 结论 [/B]以上的分析的是我们能尽量控制的误差，还有一些不是操作者所能控制的误差，如被测定组分易分解、组分的含量高低、介质效应等。我们把能控制的误差减小到最低，那你的结果准确度将更高。

液相色谱分析条件的选择字体: 小 中 大 | 打印 发布: 2010-09-14 14:46:32 来源: 上海禾工科学仪器有限公司 在液相色谱分析过程中，我们经常遇到的问题主要有二种，一种与液相色谱仪器本身因素有关，如液相色谱的阀门、混合器、检测器的光源以及其它的一些硬件设备。出现这类问题后，如果能找出问题根源，解决起来一般很简单，而且这类问题可以通过对仪器的精心维护来避免;而另一类问题则是分析方法本身造成的问题，如出现色谱峰形状不好、峰与峰之间不能分开、基线飘移等等。不幸的是，如果出现这类问题，看起来似乎很明显，但是要找出原因并解决这类问题却非常困难。为了减少出现这一类型的问题，就必须在分析之前，仔细研究并选择一个好的分析方法，有了一个好的分析方法，就很容易获得理想的分离效果，而且在出现问题是也很便于找出原因。要选择一个好的分析方法，就必须对液相色谱分析的一些基本原则要有一个很深的了解。下面是我们实验室对色谱分析人员进行技能培训的一些基本知识。　　一：分析方法选择的基本原则　　假如你想做一顿丰盛的晚餐，首先必须看一下食谱，然后检查一下你所需的东西是否齐全，如果少了配料还必须去商店购买，这样你才可能做出一顿可口的晚餐。同样进行液相色谱分析时，也必须按照一定的程序进行，首先你必须要有专门的仪器和试剂，然后有目的地选择分析方法，这样你才可能得到好的分析结果，避免走一些弯路。　　二：柱子的选择　　在液相色谱分析方法中最重要的就是色谱柱的选择，色谱分析人员面对几百种色谱柱，你从何入手呢?我采取的方法就是订阅 LCGC亚太版中RonMajors 的“色谱柱观察”这一专栏，自1984（1）年以来，RonMajors在这一专栏中介绍许多新柱子、色谱柱新技术、色谱柱使用方法等方面的信息。　　现在大部分液相色谱分析都是使用反相液相色谱柱，其中以C18 和C8柱最为流行。然而色谱分析并不是流行歌曲，这两种色谱柱之所以运用广泛是因为在大多数情况下，使用这两种柱子都能获得理想的分离效果。尽管一些样品的分离并不是这两种柱子（如表一所示），但[font=

[align=center][size=21px]温度对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统的影响[/size][/align][size=16px] [/size][size=16px] [/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]能进行很多微量和复杂样品分析，在分析界算是精密仪器。很多精密仪器都有一个共同点，那就是工作时受温度影响，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]也不列外，一般仪器都受温度影响较大，其中流动相、色谱泵、色谱柱、检测池、氘灯等受温度影响较大。[/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]工作温度[/size][size=16px]大多[/size][size=16px]都是1[/size][size=16px]5[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-35[/size][size=16px]℃，[/size][size=16px]当然每个厂家，每个型号的仪器也都不太一样，[/size][size=16px]2[/size][size=16px]0[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-30[/size][size=16px]℃一般仪器都能较好的工作，[/size][size=16px]但[/size][size=16px]有的[/size][size=16px]苛刻些，最佳工作温度可能是2[/size][size=16px]2[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-27[/size][size=16px]℃，或者2[/size][size=16px]0[/size][size=16px]℃[/size][size=16px]-25[/size][size=16px]℃等等，要求就更高一些，在这个最佳工作温度内使用，温度影响不大，超过这个温度影响相对就较大。[/size][size=16px] 流动相受温度影响。[/size][size=16px]流动相温度要和系统温度相匹配，不能过低也不能过高。温度过低，流动相中会溶解进较多空气，影响泵流速，如果色谱柱和检测器没有控温装置的，可能还[/size][size=16px]会影响色谱分离、影响基线噪声和基线漂移[/size][size=16px]等。温度过高也可能[/size][size=16px]会影响色谱分离、影响基线噪声和基线漂移[/size][size=16px]，甚至会损坏仪器。[/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵受温度影响。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵主要是指[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵泵头，泵头温度过高或过低，一是会影响流动相流速，二是会影响流动相温度，从而导致色谱问题。[/size][size=16px] 色谱柱受温度影响。色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中非常核心的部件，工作中对温度要求一般都很高，大多都是常温到4[/size][size=16px]5[/size][size=16px]℃，有的是3[/size][size=16px]0[/size][size=16px]℃到4[/size][size=16px]5[/size][size=16px]℃，有的分析要求温度稳定在一个温度，否则可能会对分离度，定性、定量检测，基线漂移等指标影响较大。[/size][size=16px] 检测池受温度影响。检测池是检测器的核心部件，它对温度也很敏感，受温度影响比较明显。直接影响就是定量不准确，基线不稳定[/size][size=16px]，有漂移，可能伴随有不规律波动等。[/size][size=16px] 氘灯受温度影响。氘灯温度不稳定，氘灯发出的光能量就不稳定，波长准确性和光路特性可能也会受影响。光能量不稳定，波长不准确，光路不正等情况对检测影响都很大，所以为了保证检测结果的准确、有效，氘灯温度或光路温度也得严格控温。[/size][size=16px] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是精密仪器，所做的分析都[/size][size=16px]有较[/size][size=16px]高[/size][size=16px]要求[/size][size=16px]，它的各个重要、核心部件对温度要求都较高，为了保证所做的分析结果的准确、有效，控温[/size][size=16px]必不所少（有些实验室实验室温度控制的较好，最后效果也较好）。[/size]

在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡。由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏。 　　造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净;三是在注入样品时不注意混入了空气。 为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。　　常用脱气方法有以下几种：1. 吹氦脱气法 使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少;2. 加热回流法 此法的脱气效果较好;3. 抽真空脱气法 此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。4. 超声波脱气法 它是目前实验室使用最广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。5. 在线真空脱气法 把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多体系。

[b]一、HPLC市场整体状况 [/b] 1、概述 现代科技和产业的发展，促进了以色谱仪器为代表的复杂样品的分离分析和分离纯化仪器的迅猛发展，各种更新、更适用的色谱技术和色谱仪器不断涌现，据不完全统计，仅液相色谱仪器的销售额就占全世界分析仪器市场销售总额近20％，每年世界销售总额达十几亿美元。（引自李彤等主编的） 中国每年有5000－6000台液相色谱仪器的需求，从销售额的角度比较，国产液相色谱仪占据了不到10%的市场份额。（根据部分厂家的客户名单等资料不完全统计，有主观臆测的成分，仅供参考！） 2、主要HPLC品牌 （1）进口品牌 沃特世（Waters）、安捷伦（Agilent）、日本岛津（Shimadzu）、美国科学系统（SSI）、戴安（Dionex）、 PE（PerkinElmer）、瓦里安（Varian，被安捷伦收购）、热电（Thermo）、日立（Hitachi、天美代理）、日本分光（Jasco、华洋科仪代理）、德国诺尔（Knauer）、贝克曼（Bekman）还有韩国英麟（YoungLin）、澳大利亚GBC、吉尔森（Gilson）等。 （2）国产品牌（含国内组装） 大连依利特、赛智科技（杭州）有限公司、北分瑞利、莱伯泰科（北京）、北京创新通恒、北京温分、北京东西电子、苏州岛津、上海天美、上海伍丰、上海通微、南京科捷、浙江福立等。 （3）补充一些生产特殊检测器的厂家 美国奥泰（Alltech）、法国SEDERE公司、法国Eurosep公司、美国惠泽公司（ESA）、美国索福达（SofTA）、德国SFD公司、英国 PL (Polymer Laboratories、被瓦里安收购)、日本Shodex、瑞士万通（Metrohm）等

8月，赛智科技隆重推出了LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统——LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，此前，公司产品已经进入清华大学、中国地质大学、南方科技大学、中国检验检疫科学研究院、中科院青岛能源所、华大基因等机构，获得了广泛认可。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561917027136.jpeg[/img]近年来，在分析测试领域，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的应用需求日益增长，赛智科技紧跟市场需求，通过自主研发和生产，推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，此举不仅满足了用户的多样化需求，更丰富了公司的产品线。这是赛智科技的一小步，却是国产高端分析仪器市场的一大步。[b]长期坚持自主研发，推出国产高端新品[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是重要的科研分析仪器，可以对复杂的混合物样品进行分离并分析样品的成分及含量，在食品安全、药物分析、生命科学研究、环境监测、临床检测、工业制造等多个领域都有广泛应用。但是，由于国内企业起步较晚，我国的高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]市场长期被Waters、安捷伦、岛津、赛默飞等跨国公司垄断，国产厂商只能做中低端市场，产品附加值较低。《第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》中明确提出，要深入实施制造强国战略，加强高端科研仪器设备研发制造。在此背景下，赛智科技坚持自主研发核心部件，积极公关技术难点，经过不懈努力，终于推出了拥有自主知识产权的国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，成为少数掌握高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]核心制造技术的国内企业。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561135690083.png[/img][b]深耕分析测试领域，树立中国制造业标杆[/b]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的研发和生产需要系统集成，比如，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）是由LC8100系列溶剂组织器、LC8200系列高压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器（或选配DAD检测器）等核心零部件组成，而LC8000四元低压自动系统则是由LC8245四元低压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器等核心部件组成，要想实现高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的整机研发，核心部件的制造和整机系统的设计都非常关键。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056712030640.png[/img]自成立以来，赛智科技长期专注于分析测试领域，公司创始人路文初先生拥有深厚的学术和科研背景，他和团队共同研发的N2000色谱工作站操作简单、性价比高，目前拥有的客户数已经突破十万，在国内市场的占有率高达80%以上。不仅如此，在过去的十多年时间里，赛智科技不断强化自研自产能力，多项技术打破了国外技术垄断，并且建立了全流程的自研产品线，在高壁垒的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]领域，逐步实现了溶剂组织器、高压输液泵、四元低压输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外-可见检测器等核心零部件的生产制造，实现了核心零部件全部国产化，树立了中国高端仪器制造业标杆。[b]掌握核心技术专利，积极开拓海内外市场[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是基础医学、药学、材料科学领域的基础科研仪器，随着中国产业升级的稳步推进，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]市场也从常规的色谱分离向高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析、二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析方向拓展，此次，赛智科技推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，未来将会成为市场主流。LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）具有卓越的梯度精度和优化的延迟体积，更加适合复杂的应用环境或与质谱等联用。凭借进样器带来的自动化进样便利和多种检测器，获得更多数据易如反掌，同时产品还具有超高性价比和良好的稳定性，且维护简单。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056203994952.png[/img]LC8000四元低压自动系统具有极佳的灵活性且高度自动化，可以轻松应对药物、环境、食品安全、石油化工、农林牧渔等各个领域的复杂需求。在Ultrachrom色谱工作站控制下，可以实现全自动分析、报告、系统冲洗和关机，大幅提高工作效率。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430571355364781.png[/img]虽然是国产高端新品，但是依托赛智科技长期自主研发积累的技术专利和制造能力，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，以卓越的梯度精度、高度自动化、超高性价比和功能强大的配套色谱软件，让所有用户都可以获得良好的产品性能，并能大幅提高工作效率，在药物分析、食品和环境中的污染物检测、生物医药等相关领域都有广泛的应用需求。赛智科技长期从事的是科学仪器的研发和生产，公司深知只有把核心技术掌握在自己手中，才能真正掌握竞争和发展的主动权。正因如此，赛智科技始终坚持自主研发与“产学研”相结合的创新方式，产品的国产化率一直处于国内行业前列地位，目前公司已打通了高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]研发、生产、销售、售后服务的发展全链条，未来该系统将会应用于国内的大专院校、科研单位、化工厂、医院、制药厂、生物科技公司、第三方检测机构等多个领域，并有望远销伊朗、印度尼西亚、印度、泰国等海外市场扩大销售份额。8月，赛智科技隆重推出了LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统——LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，此前，公司产品已经进入清华大学、中国地质大学、南方科技大学、中国检验检疫科学研究院、中科院青岛能源所、华大基因等机构，获得了广泛认可。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561917027136.jpeg[/img]近年来，在分析测试领域，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的应用需求日益增长，赛智科技紧跟市场需求，通过自主研发和生产，推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，此举不仅满足了用户的多样化需求，更丰富了公司的产品线。这是赛智科技的一小步，却是国产高端分析仪器市场的一大步。[b]长期坚持自主研发，推出国产高端新品[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是重要的科研分析仪器，可以对复杂的混合物样品进行分离并分析样品的成分及含量，在食品安全、药物分析、生命科学研究、环境监测、临床检测、工业制造等多个领域都有广泛应用。但是，由于国内企业起步较晚，我国的高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]市场长期被Waters、安捷伦、岛津、赛默飞等跨国公司垄断，国产厂商只能做中低端市场，产品附加值较低。《第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》中明确提出，要深入实施制造强国战略，加强高端科研仪器设备研发制造。在此背景下，赛智科技坚持自主研发核心部件，积极公关技术难点，经过不懈努力，终于推出了拥有自主知识产权的国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，成为少数掌握高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]核心制造技术的国内企业。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561135690083.png[/img][b]深耕分析测试领域，树立中国制造业标杆[/b]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的研发和生产需要系统集成，比如，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）是由LC8100系列溶剂组织器、LC8200系列高压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器（或选配DAD检测器）等核心零部件组成，而LC8000四元低压自动系统则是由LC8245四元低压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器等核心部件组成，要想实现高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的整机研发，核心部件的制造和整机系统的设计都非常关键。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056712030640.png[/img]自成立以来，赛智科技长期专注于分析测试领域，公司创始人路文初先生拥有深厚的学术和科研背景，他和团队共同研发的N2000色谱工作站操作简单、性价比高，目前拥有的客户数已经突破十万，在国内市场的占有率高达80%以上。不仅如此，在过去的十多年时间里，赛智科技不断强化自研自产能力，多项技术打破了国外技术垄断，并且建立了全流程的自研产品线，在高壁垒的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]领域，逐步实现了溶剂组织器、高压输液泵、四元低压输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外-可见检测器等核心零部件的生产制造，实现了核心零部件全部国产化，树立了中国高端仪器制造业标杆。[b]掌握核心技术专利，积极开拓海内外市场[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是基础医学、药学、材料科学领域的基础科研仪器，随着中国产业升级的稳步推进，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]市场也从常规的色谱分离向高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析、二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析方向拓展，此次，赛智科技推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，未来将会成为市场主流。LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）具有卓越的梯度精度和优化的延迟体积，更加适合复杂的应用环境或与质谱等联用。凭借进样器带来的自动化进样便利和多种检测器，获得更多数据易如反掌，同时产品还具有超高性价比和良好的稳定性，且维护简单。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056203994952.png[/img]LC8000四元低压自动系统具有极佳的灵活性且高度自动化，可以轻松应对药物、环境、食品安全、石油化工、农林牧渔等各个领域的复杂需求。在Ultrachrom色谱工作站控制下，可以实现全自动分析、报告、系统冲洗和关机，大幅提高工作效率。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430571355364781.png[/img]虽然是国产高端新品，但是依托赛智科技长期自主研发积累的技术专利和制造能力，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，以卓越的梯度精度、高度自动化、超高性价比和功能强大的配套色谱软件，让所有用户都可以获得良好的产品性能，并能大幅提高工作效率，在药物分析、食品和环境中的污染物检测、生物医药等相关领域都有广泛的应用需求。赛智科技长期从事的是科学仪器的研发和生产，公司深知只有把核心技术掌握在自己手中，才能真正掌握竞争和发展的主动权。正因如此，赛智科技始终坚持自主研发与“产学研”相结合的创新方式，产品的国产化率一直处于国内行业前列地位，目前公司已打通了高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]研发、生产、销售、售后服务的发展全链条，未来该系统将会应用于国内的大专院校、科研单位、化工厂、医院、制药厂、生物科技公司、第三方检测机构等多个领域，并有望远销伊朗、印度尼西亚、印度、泰国等海外市场扩大销售份额。

[b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]与液相的概念[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left][/align][align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。[/align][b]液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而,使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。[/align][align=left][/align][align=center][b][/b][/align][b]应用范围[/b][align=left] [/align][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left][/align][align=left]分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。。。[/align][align=left]受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。。。[/align][align=left][/align][b]液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（些物质几乎占有机物总数的75%～80%）。原则上，都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。[/align][align=left] [/align][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]仪器构造[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left]由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。[/align][align=left][b]1.柱箱：[/b][/align][align=left]色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离，从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端（接头）均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱并且操作方便。色谱柱（样品）需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制，并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。[/align][align=left]对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。[/align][align=left][/align][align=left][b]2.进样器：[/b][/align][align=left]进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。[/align][align=left]根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择：[/align][align=left]填充柱进样器[/align][align=left]毛细管不分流进样器附件[/align][align=left]毛细管分流进样器附件[/align][align=left]毛细管分流/不分流进样器[/align][align=left]六通阀气体进样器[/align][align=left][/align][align=left][b]3.检测器：[/b][/align][align=left]检测器的作用是将样品的化学信号转化为物理信号（电信号）。[/align][align=left]检测器也需要在一定的温度条件下才能正常工作，因此，采用微机对检测器进行温度控制。[/align][align=left]根据各种样品的化学物理特性，共有五种检测器可供选择：[/align][align=left]氢火焰离子化检测器（FID）；[/align][align=left]热导检测器（TCD）；[/align][align=left]电子捕获检测器（ECD）；[/align][align=left]氮磷检测器（NPD）；[/align][align=left]火焰光度检测器（FPD）；[/align][align=left][/align][align=left][b]4.数据处理系统：[/b][/align][align=left]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[/align][b]高效液相仪器构造液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱仪主要有：进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。[/align][align=left][b]1.进样系统[/b][/align][align=left]一般采用：隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。[/align][align=left][/align][align=left][b]2.输液系统[/b][/align][align=left]该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4×107Pa流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、pH值或改用。。。[/align][align=left][/align][align=left][b]3.分离系统[/b][/align][align=left]该系统包括：色谱柱、连接管和恒温器等。。。[/align][align=left]色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管）内径为2～5mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，柱内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成），固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如，硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中固定相的制备一样）或者用化学法偶联各种基因（如，磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。。。[/align][align=left][/align][align=left]因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性，例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。。。[/align][align=left][/align][align=left]另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小、微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。[/align][align=left][/align][align=left]这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60℃通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。[/align][align=left][/align][align=left][b]4.检测系统[/b][/align][align=left]高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种：[/align][align=left][b](1)紫外检测器[/b][/align][align=left]该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。[/align][align=left]其特点：使用面广（如，蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10g/mL）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。[/align][align=left][/align][align=left][b](2)示差折光检测器[/b][/align][align=left]凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测；糖类化合物的检测使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但是，灵敏度低（检测下限为10-7g/mL），流动相的变化会引起折光率的变化；因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。[/align][align=left][/align][align=left][b](3)荧光检测器[/b][/align][align=left]凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如，多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等。。。）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g/mL）痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。[/align][align=left][/align][align=left][b]5.数据处理系统[/b][/align][align=left]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[/align][b]高效液相色谱与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法优点和不足分析[/b][align=left][/align][align=left]只有20%样品可不经化学处理而能满意地用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。[/align][align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高分离的选择性；另外，可作流动相的化合物多，选择余地广。[/align][align=left][/align][align=left]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]相比，高效液相色谱仪的另一个优点是：样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。[/align][align=left][/align][align=left]高效液相色谱不足的是，日前，检测器的灵敏度不及[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]。必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影响。[/align][align=left][/align][align=left][color=#888888](内容来源：互联网)[/color][/align]

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。 ?应用范围[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]:分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。液相:高效液相色谱法只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(些物质几乎占有机物总数的75%~80%)原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%而能用液相色谱分析的约占70~80%。 仪器构造（一）[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。1.柱箱:色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端(接头)均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱，并且操作方便。色谱柱(样品)需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。2.进样器:进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择:填充柱进样器毛细管不分流进样器附件；毛细管分流进样器附件；毛细管分流/不分流进样器；六通阀气体进样器；

UPLC超高效液相色谱和HPLC高效液相色谱的区别在哪里？请阐述下分离度、分析速度、柱效等等的两者间的区别。

药物分析液相色谱流动相应用小常识 《药物分析杂志》摘编 一、 液相色谱流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 ③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 ④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。超声脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用完毕。

请问液相色谱的柱温设置跟分离有很大的关系吗？请给为老板油提供帮助。因为我目前的液相分析不是很好！

在高压液相色谱快速多组份阳离子分离分析中,因为峰会相邻很近,如何实现将分离开的单组份阳离子收集.

药物分析液相色谱流动相应用小常识 一、 液相色谱流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。超声脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用完毕。

原创与否转帖 部分高效液相色谱法及其在药物分析中的应用 法，这种色谱法的柱效能低、分离周期长。高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。目前，已经发展了多种不同的固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。下面介绍高效液相色谱法的有关知识，新的方法和技术以及在药物分析中的应用。一、分类 高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类： （一）吸附色谱法（adsorption chromatography）以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。 （二）液-液分配色谱法（liquid- liquid chromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。