液相色谱峰面积外标法

这段时间，在做液相色谱分析时，峰面积重现性不好，是什么原因导致的，我用的是外标法。

硼砂做液相色谱，外标定量，峰面积相差不大，

做液相色谱正相外标的时候，如果样品峰面积和稀释100倍后的对照液的峰面积不成100：1的时候该怎么办？

[color=#444444]1.外标法是否需要样品中的物质全部出峰，产生各自的峰面积后，目标物的峰面积才有意义？[/color][color=#444444]2.如果有物质不出峰，对目标物的峰面积有没有影响，还是仅仅影响峰面积的占比？[/color][color=#444444]3.一般来说，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]外标法分析常见的农药是不是没有液相色谱准确，重现性是不是差一些？[/color][color=#444444]感谢各位回答！[/color]

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（HPLC）中外标法是一种常用的定量分析方法，其基本概念是通过测量已知浓度的标样（外标）和未知浓度的样品的色谱峰面积或峰高，从而计算出样品中目标物质的浓度。一般分为外标单点法和外标曲线法，现在对不同国家的外标法进行对比。 [size=18px][b][color=#595959]01.中国药典中的外标法（2025版的公示稿） [/color][/b][/size][b][size=16px][color=#595959]1）外标法的一般步骤：[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]（可以理解为外标法） [/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.按照各品种项下的规定，精确称取或量取对照品和供试品，配制成溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.分别精确量取对照品溶液和供试品溶液的一定体积，进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.记录色谱图，并测量待测物质的峰面积（或峰高）； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.使用公式 C[sub]X[/sub]=C[sub]R[/sub]×A[sub]X[/sub]/A[sub]R[/sub]计算含量，其中 C[sub]X[/sub]是供试品中待测物质的浓度，C[sub]R[/sub]是对照品的浓度，A[sub]X[/sub]是供试品溶液中待测物质的峰面积（或峰高），A[sub]R[/sub]是对照品溶液中待测物质的峰面积（或峰高）。 [/color][/size][b][size=16px][color=#595959]2)[/color][/size][size=16px][color=#595959]对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系，可以采用[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]外标标准曲线法[/color][/size][size=16px][color=#595959]进行含量测定。[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.精确称取适量的对照品，或从对照品储备液中精确量取，配制成不同浓度的系列溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.精确量取这些系列溶液，进行色谱分析，记录色谱图，并测量峰响应； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.利用峰响应（或经转换）对浓度绘制标准曲线，并通过最小二乘法计算出回归曲线方程； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.在相同的色谱条件下，精确量取供试品溶液，进行色谱分析，记录色谱图，并测量待测成分的峰响应； e[/color][/size][size=16px][color=#595959].根据待测成分的峰响应（或经转换）和回归曲线方程，确定供试品溶液中待测成分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]简单理解就是做一条标准曲线，得出标准曲线方程，再将待测品的峰相应代入方程进行计算，得出样品浓度。 [/color][/size][size=16px][color=#ff4c41][b][color=#595959]02.欧洲药典中的外标法 [/color][/b][/color][/size][color=#ff4c41][b][size=16px][color=#595959]1）[b]多点校准（使用校准函数）： [/b][/color][/size][/b][/color][size=16px][color=#595959]a.准备一系列含有不同梯度浓度的对照品溶液，这些浓度应该在已经证明可以得到线性响应的范围内； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.取固定体积的这些对照品溶液进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到峰面积或峰高，并以此绘制校正曲线，横坐标是对照品的量，纵坐标是峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归得到校准函数； [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.按照各论中规定的程序准备待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的操作条件下进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.测量待测组分的峰面积或峰高，并根据校准函数读取或计算组分的含量； [/color][/size][size=16px][color=#595959]2[b]）单点校准： [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中，通常选择一个校准曲线线性范围内的对照品溶液，以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析，通过比较得到的响应来定量分析组分的含量； [/color][/size][color=#595959]c.在这种方法中，所有操作步骤，如进样程序，都必须在恒定条件下进行 [img=,690,801]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061421193322_2231_3203140_3.jpg!w690x801.jpg[/img] 图1.欧洲药典原文描述[b][color=#595959]03.美国药典中的外标法 [/color][/b][size=16px][color=#595959][b]1）校准函数法（多点校准）： [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.制备一系列含有不同浓度的对照品标准溶液，这些浓度应在已知能够产生线性响应的范围内； b[/color][/size][size=16px][color=#595959].取固定体积的这些标准溶液进行色谱分析，并注射到色谱系统中； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到的峰面积或峰高，绘制校准曲线，横坐标是对照品的量，纵坐标是峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归方法得到校准函数； [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.根据各论中规定的程序制备待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的色谱条件下分析样品，测量待测组分的峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.通过校准函数计算出样品中待测组分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#595959][b]2）单点校准法：[/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中，选择一个浓度在线性范围内的标准溶液，以及一个浓度接近该标准溶液的待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析，通过比较得到的响应来定量分析组分的含量； [/color][/size][color=#595959]c.这种方法中，所有操作步骤，包括进样程序，都必须在恒定条件下进行，以确保分析结果的一致性 [img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061424187996_390_3203140_3.jpg!w690x214.jpg[/img] 图2.美国药典原文描述 [color=#595959][b]总结一下：[/b][/color][size=16px]1）中国药典提供了外标法的一般步骤和标准曲线法的详细描述，但没有明确描述单点校准法。 [/size][size=16px]2）欧洲药典和美国药典都详细描述了多点校准和单点校准的方法，并且强调了所有操作步骤需要在恒定条件下进行。（这两家基本是一 致的描述） [/size][size=16px]3）三种药典都强调了在色谱分析中保持操作条件的一致性，以确保分析结果的准确性和重现性 [img=,690,249]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061426098030_8014_3203140_3.jpg!w690x249.jpg[/img] [/size][/color][/color]

问题: 问下各位外标法中各峰面积的百分比可以代表含量浓度吗回复: 不可以，纯度和含量明显是两个东西，这个东西是要和标准品进行计算得到的，从峰面积看不出含量的。你先了解下归一化面积法和外标法应用条件吧。

液相含量测定请问：用液相测含量按外标法以峰面积按无水计算是将得出的浓度值直接减去水分值还是另有计算方法呀？请指点谢谢

液相色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的外标法和内标定量有何区别?是如何处理的?

液相色谱峰面积越来越大，用水多次冲洗进样阀、进样器后，进一两针水样后，峰面积变小，然后又慢慢变大。样品是用水做溶剂的；是什么原因？流动相：940磷酸氢二钾：60乙腈，用氢氧化钾调PH至3.50

[color=#444444]最近做的不同批次的同一样品，用的是安捷伦1200液相色谱仪，流动相为70%乙腈，波长为215nm。结果如下[/color][color=#444444]1、用面积归一化法计算，纯度为85%，可是用外标法计算含量时，却高达97%（没有乘以总重量，下同）[/color][color=#444444]2、另测一批样品，归一化纯度为86%，外标法计算含量时，却高达100%。[/color][color=#444444]请问这是什么情况？[/color]

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]峰面积重现性不好的一般解决步骤有：1、首先观察压力是否稳定,以及观察峰面积变化是否有规律。若压力不稳定,请检査造成压力不稳定的因素,如:漏液,排液时间不足够,盐浓度过高导致盐析,主动阀比例阀内漏等。2.若压力稳定但峰面积呈无规律变化,请检查样品量是否足够,确认样品的稳定性,必要时重新配制。检查进样阀是否漏液等。3、若压力稳定且峰面积呈规律变化,多数为色谱柱未平衡好。少数的情況进样阀4排口阻塞(尤其是经常使用高浓度盐时可能发生.)。

[color=#444444]如题[/color][color=#444444]我是用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]外标法 现在做工作曲线[/color][color=#444444]配置不同质量分数的A溶液 现在发现（以10%，wt 为例）同样的进样量 A物质出峰的面积相差悬殊（远在进样误差之外）有时候是1000+ 有时候是3000+[/color][color=#444444]请问大神是什么原因？[/color]

[color=#444444]请问，液相色谱测定含量双样双针的，f值有没有统一规定的啊？F=称样量/A峰面积/稀释倍数，要不要除以对照品的稀释体积啊？是随便写还是有统一规定写法啊？[/color]

液相色谱峰太小没峰面积怎么调

[table=100%][tr][td]液相色谱仪峰面积与什么有关，排除了流动相、仪器问题。只是在测样中比其他样多加了不同的物质但是在加物质前都加入了抑制剂，但为什么峰面积会变小呢、?[/td][/tr][/table]

请问，都有什么原因能导致液相色谱峰面积变小，谢谢

[color=#444444]液相色谱使用外标法定量，但是经常出现所有组分含量总和超过100%的现象~~这是为什么，希望高人能够指点一下。[/color]

[color=#444444]如果用液相色谱，GPC软件，要测定异戊橡胶的分子量，根据什么选择毛细管柱呢？请详细回答。[/color][color=#444444]用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]测定水中的微量乙腈，用外标法，为什么要用峰面积定量，用峰面积百分比可以吗？因为我们是手动进样器。请回答一下。谢谢[/color]

请问哪位能告诉我液相色谱图中色谱峰的峰面积单位是什么，它是依据什么定义的？ 谢谢

液相色谱，面积归一化进样量与峰面积有关系吗？

戴安测出的样品的峰面积一般是好多，为什么我做的峰面积那么低，进100都才5，进得少了才只有零点几的峰面积。而不是像其它液相色谱仪，至少都会上百。到底是怎么回事呢？

高效液相色谱仪峰面积怎么看

使用的是岛津GC-2010plus ,AOC5000顶空进样器，FID检测器，在外标法测药物残留时，第一针对照溶液峰面积总是与其余几针对照峰面积相差较大（其余几针对照溶液峰面基几乎相差无几）。本人气相小白一枚http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gif，为什么会这样呢？还望各位老师解答。

做液相色谱时，同一种物质出峰时间一样，峰型一样，保留时间一样，但是峰面积却不一样，为什么？急需请各位帮忙。

本人是新手很多对液相的知识不懂液相色谱面积归一化法是什么意思啊？具体应该怎么做，求含量？

液相色谱，外标法定量，对标准样品的纯度有要求吗？是不是一定要大于98％？现在只能买到FLUKA质保书上纯度为95％的标准品（GC)，可以用于外标法定量吗。大家平时有没有碰到过标准品纯度不高的问题，是不是说明这种物质很难提纯？

[color=#444444]用waters e2695液相色谱进行手性药物拆分，在取定波长范围内，改变波长时， 发现一个对映体的峰面积迅速增加，而另一个则没那么明显， 请问一下液相大神们 波长变化时手性对映体的吸收强度不是按浓度比改变的吗？[/color]

请问各位大侠液相色谱峰面积单位是什么？

谁知道N2000在线色谱工作站面积外标法中的方法文件怎么建立？