液相色谱进样阀清洗器

液相色谱自动进样器如何清洗？因为我的自动进样器用的磷酸盐缓冲液，比较容易析晶，刚接触到自动进样，想请问液相自动进样器如何清洗？

使用安捷伦高效液相色谱仪,进不同样品时进样针用什么溶液清洗 是用流动相洗还是甲醇洗呢？用甲醇的话是百分之多少的甲醇？我要测的是有机酸 做标准曲线时 进不同浓度的标准酸品之间进样针是否清洗 用什么清洗？

液相色谱仪使用时间久了必须进行清洗，仪器在使用过程中会出现各种故障，以下是色谱仪的常见故障及清洗。 色谱仪器控制的冲洗要比手动冲洗更好，进样阀切换到进样位置后，要在此位置上保持一段时间，使流动相充分冲洗样品定量管，这样可以保证有较高的精确度，而且不用另外再冲洗样品定量管。 每进样10次，或20次最好冲洗一下注射针导入口，这样可以保证注射针导入管内充满流体。在注射针插入或拔出的过程中，清洗注射针头或稀释污染这一区域的样品的同时也使注射针导入口和样品溢出口充满流体，从而防止空气进入样品管。 当样品定量管经过充分的冲洗后，可以将旋柄转回取样位置（Load），也可以继续保持在进样位置，到下次取样前才切换回取样位置。在切换回取样位置时，将样品进样针或微量样品进样针从进样阀中拔出。 如果已发现有严重的交叉污染现象，请检查是否有下列原因造成： 1.注射针没有充分插入注射针导入口。2.使用的注射针头长度不够（针头的长度至少5cm），注射针末端不能到达定子表面。3.注射针导入口的污染物或针头密封磨损下来的削片，使注射针末端不能接触定子表面。

[color=#444444]安捷伦1100型液相色谱，六合进样器，最近堵住了，启动泵进样阀就开始漏液，有人说是进完样后没用甲醇去进样清洗堵掉了，我想知道每次走完样后是不是需要进几针甲醇去清洗，而漏液除了这个原因还有其他原因吗？我是第一天走完样冲洗柱子后，他第二天就发现说漏液的，我觉得不该会是因为没进甲醛清洗堵掉了吧！[/color]

请专家帮帮我我用的是岛津LC-10AD型液相色谱仪，今天进样时发现进的样品从六通阀的清洗管流了出来，把定量阀等清洗之后，还是会流出来。怎么办呀？请各位指点一下！！！也可以发给我： planltosurf@yahoo.com.cn谢谢了，急盼！！

[color=#444444]如题，液相色谱进样器动作正常，但不吸样品，进样针不堵，不漏液，六通阀也拆过超声了，还是进样动作正常，但吸不上样品，求助液相高手，急急急[/color]

液相色谱仪进行空白溶液注射后悔产生与前一样品或标准溶液无关的峰。冲洗针管并采用相同方式注射空白溶液。1 如果峰消失，说明针管被污染，冲洗已将其清洁，今后需要注意对针管进行定期例行冲洗。2 如果峰仍然存在，冲洗，切换至取样位置，立即进行并注射相当于定量环体积1/4的空白溶液，观察峰。再冲洗，切换至取样位置，立即进样并注射以定量环体积5倍的空白溶液。观察以下峰的变化。①如果第二次注射峰比第一次的大3~4倍，判断是来自注射器和玻璃器皿的外部污染。解决办法是使用干净的器具。不要使用会产生污染物的塑料，进一步确认鬼峰是否为氧气峰。②如果第二次注射峰消失，或者比第一次小了很多，证明是液相色谱仪进样阀内的污染物。解决办法是清洗进样阀。但有时采用其他解决方法更为方便。如果使用的是不分充填的方法，可以改用完全充填，并在必要时使用体积较小的定量环。③第二次注射的峰与第一次相同，仅仅在进行取样与进样之间而得相互切换就可使注射器内的微量污染物被清洗。确认方法：在取样位置进行冲洗，清洁放空管。切换至进样位置等待鬼峰出现之后，进行正常冲洗，在任然处于进样位置的状态下，插入一根非常干净的空注射器并保持其位置不变，以防止放空管内残留污染物或针密封上的污染物因虹吸或扩散进入定量环。将手柄切换至取样，无须再切换至进样，气动记录器。等待洗脱出的波峰。对峰进行观察。然后，注射器不动，将手柄切换至进样，再次气动记录器，观察峰。这两次操作中，只要有峰产生，就说明有内部污染物，且多数发生在转子密封圈上。这样的情况需要清洁进样阀。

目前，在一些液相色谱仪仪器或者液相色谱-质谱联用装置中使用后进样方式的阀。操作基本类似，介绍如下。液相色谱1 注射样品的步骤第一，将手柄板至进样位置，将注射器插入针管到底，此时注射器针头与定量环的末端直接相连，样品在没有任何连接物的阻碍下直接进入定量环，准备进样；第二，迅速将手柄扳至注射“进样”位置进样；第三，拔出注射器；第四，等到贮备注射下一个样品，将手柄扳回取样位置。2 进样体积与定量环体积如果进样体积等于定量环体积，漏出放空管的样品损失会高达20%，使得进样精度大幅度下降，所以进样体积应小于定量体积的50%（部分进样）或大于200%（完全进样）。3 使用合适的注射器针头针头规格一般为22号，外径0.7mm，长5.1cm（2英寸）平头。不可使用斜面、尖端或锥形的针。4 冲洗进样阀冲洗步骤：手柄切换到进样位置后，要保持在此位置一段时间，使得流体充分冲洗定量环，这样可以保证高精度，而且不用额外冲洗定量环。注意冲洗需要的流动相体积至少为样品体积的10倍。

液相色谱自动进样器和手动进样器工作原理之比较 （地址：http://www.doc88.com/p-907960098449.html ）对于液相色谱而言，无论是手动进样器或是自动进样器都是用六通阀进样的，只是自动进样的较手动进样器的死体积较大，多了计量泵和一部分联接管线。一、六通阀原理http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120503/634716354420178750.jpg 1.在Load状态，样品从进样针进来到定量环，多余的样品再到废液；来自泵的流动相直接流到色谱柱。2.在Inject状态，进样位置直接连接至废液，也就是说此时如果有样品进来的话是直接流到废液的；来自泵的流动相经定量环再到色谱柱。二、手动进样器1、实际流路连接图http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120503/634716355034241250.jpg2、手动进样器工作原理1）Load状态（充样位置）http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120503/634716355465022500.jpg 在充样位置，泵直接和柱子联接（孔2和孔3联接），并且针口和样品定量环联接。至少2到3倍定量环体积（更多，对于更好的精确度要求的）的样品通过针口注入，以便达到好的精度。样品填入环内，过量的样品通过和孔6联接的排放管排出。2）Inject状态（进样位置）http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120503/634716356222210000.jpg 在进样位置，泵和样品定量环联接（孔1和孔2联接），将全部样品从环冲洗到柱。针口和排泄管（孔5）联接。3）整个进样过程中，联接管线并没有任何变动，只是联接的三个弧形槽转动60度。3、手动进样器使用注意事项1）如下图所示，排泄毛细管出口和针口必需在同一水平面，以防止倒流泄露或产生虹吸。http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120503/634716356548303750.jpg 2）在inject位置的时候，才可以取出手动进样器的进样针，以防止倒吸或产生气泡。这时候也可以清洗一下进样口。3）手动进样器的进样量至少要大于2到3倍的定量环的体积，要么进样量要小于定量环体积的一半。4）应选用液相专用的平头针三、自动进样器 http://imgeditor.chem17.com/MTEditor/20120503/634716356822366250.jpg1.当针抽完样品，扎进针座的瞬间，进样阀同时切换位置，将样品引入系统，完成进样动作。2.自动进样器可以设置其洗针，液相自动进样器的洗针，只是把针在洗针瓶里面沾一下，也就是说洗的是针的外部，进样针是死体积的一部分。气相色谱的进样针洗针是外部和内部一起洗，进样针不是气相色谱死体积的一部分。3.液相色谱自动进样器可以进行多次吸液。气相色谱的进样针没有此功能。

原文来自：JANUARY 2003 LC[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]gc[/url] NORTH AMERICA VOLUME 21 NUMBER 1 19,20,22,24,26http://www.chromatographyonline.com/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（二）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（三）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/[size=4]本文原是2年前让我的研究生左莹暑假特意翻译的，只是后来忘了。一个月前，在整理电脑资料中发现了这篇文献翻译，我重新校对，修整了一些错误，但仍可能会有些翻译不对的地方，或者语句不畅，请大家指正。[/size][color=#00008B]][color=#00FFFF][size=4]反相高效液相色谱柱的清洗和再生[/size][/color][/color] 这个月的“关注色谱柱”着眼于将一根污染的柱子回到或接近初始状态的实用方法。Ron Majors 会讨论硅胶基质或其它类型的反相柱子的清洗步骤。 反相液相色谱是迄今为止高效液相色谱法（HPLC）中使用最广泛的技术[1]。它的广泛使用是因为它能应用于大部分的非极性化合物、许多可电离的及离子化合物的分析。大部分用于反相色谱的固定相是亲水性的，因此分析物是通过其与固定相之间的亲水作用的程度来进行分离的，含有亲水组成的基团也有相似的保留行为。 表一列举了最常见的键合硅胶的固定相（1）。一些比较次等的固定相比如说一些混合固定相（例如：苯基－乙基），末端封尾和不封尾类型的，一些极性固定相同样属于硅胶键合。其它一些各种各样的填料同样也被用于反相液相色谱，包括聚合物，涂布有硅和铝的聚合物，涂有氧化锆的无机－有机杂化物和石墨化的碳。各种不同的固定相都有其自身的优点和缺点。表1 HPLC固定相中的使用比例*固定相 使用比例C1839C826CN**14.5苯基12C43.7亲水作用1.8C21.2C10.8其它0.8聚合物0.5* 来源于文献1** 包括正相色谱，因为正相与反相使用无法确定比例。 反相色谱柱由于可使用多种流动相和添加剂而得到了广泛的使用。其中使用添加剂的一些技术可改变或修饰填料表面。有时，这些添加试剂本身就会污染填料表面或键合相。 由于使用了亲水性的键合固定相，硅胶表层有了其他的化学特征。残余的硅羟基存在于所有的硅胶键合相的表层。图一描述了可能存在的不同类型的硅羟基（2）。由于是弱酸的特性，这些硅羟基会同某些分析物和基体化合物相互作用，尤其是同一些碱性化合物。因为硅羟基的Pka值大约是在4.5左右。电离可能发生在中间的pH值，因此存在其同阳离子产生静电作用的可能性。比较老的A型硅胶可能含有高浓度的金属离子（通常为100ppm，或更高），这些金属离子会在硅胶表面提供更强的酸性，同样还会和金属螯合化合物（3）相互作用。残留的硅羟基会在末端不封尾的键合硅胶和短链键合的固定相上（例如C2和C4固定相）造成较多的麻烦。 色谱柱的使用者必须清楚色谱柱固定相的表面特征和可能存在的分析物—固定相表面的相互作用，所以在使用和发展反相色谱方法时必须考虑可能存在的基体相互作用。比如一些非常疏水的材料如玉米油、特别芳香类材料和蜡可以附着在反相填料表层并改变填料层的特征。含有蛋白质的生物液体会吸附在填料表层，尽管分析者尽了最大的努力来保护高效液相色谱柱以防止外来物质对其的伤害，最终是，某些分析物-基体化合物还是会对固定相产生不利的影响。 当一根色谱柱被污染之后，它的色谱性征可能已经不同于未被污染的色谱柱了。被污染的色谱柱可能会表现出反压力的问题。对于一根被污染的色谱柱则必须通过清洗和再生将它恢复到原来的操作条件。“关注色谱柱”这部分将会讨论一些实用的方法来将色谱柱恢复或接近到初始状态。由于键合的硅胶柱是最常用的，所以我要着重讨论他们。在最后，我将会论述一些其他类型的反相色谱柱的清洗程序。 反相色谱柱中污染物是怎样的形成？ 通常，样品基体里总是含有一些对分析者来说不感兴趣的化合物。盐类、脂质、含脂肪的化合物、腐殖酸、疏水性的蛋白质和其他的一些生物化合物就是在使用中能够接触到高效液相色谱柱的可能物质。这些物质可能会比所需分析的物质更强或更弱的保留能力。那些保留能力比较弱的化合物如盐类，将以死体积被洗脱出来。这些不希望发生的干扰可以通过检测器观察到，它表现为一些色谱峰、斑点、基线干扰，甚至是一些倒峰。如果样品基体组成在色谱柱中有强的保留性，且流动相组成本身就不强到足以使其洗脱出来，这些被吸附的、或是被吸收的化合物将会累积，通常是在经过多次进样之后堵塞在色谱柱的柱头。这种特征是在等度条件下观察得到的。中等保留能力的样品混合物可以被缓慢的洗脱出来，其表现为宽峰、基线干扰或基线漂移。 有时，这些吸附的样品组成达到了比较高的浓度，它们便表现为一种新的固定相。被分析物可与这些杂质作用并表现为新的分离机理。它可能会引起保留时间的变化和峰的拖尾。如果色谱柱受到了比较严重的污染，色谱柱的反压力会达到一个无法承受的高度，这将会使泵超压工作，在堵塞的位置引起柱的塌陷并产生中空。表2分析柱的柱体积柱的尺寸（mm*mm）死体积（mL）250 * 4.62.5150 * 4.6 1.5150 * 3.00.64150 * 2.10.2850 * 4.60.5030 * 4.60.3015 * 4.60.15反相高效液相色谱柱的清洗和再生（二）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045750/反相高效液相色谱柱的清洗和再生（三）http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20071105/1045752/

[color=#444444]各位专家，大家好，想请教1个关于HPLC的问题。[/color][color=#444444]采用岛津LC-2010C高效液相，流动相采用缓冲盐溶液，那么自动进样器清洗流路（R流路）该用什么清洗？我觉得开机的时候应该用水洗，关机的时候先用水洗，再用50%甲醇洗，不知道该洗多长时间，对不对呢？又如何从水更换到甲醇呢？[/color]

液相色谱清洗液 液相色谱的清洗液，也就是液相泵柱塞清洗液，大家一般采用10%的有机试剂。有人选择10%的甲醇水溶液，说甲醇水溶液接近流动相，粘度也小，更适应系统。有人用10%的异丙醇水溶液，说10%的异丙醇溶液粘度大，清洗能力强，更适合清洗。也有少数人用10%的乙醇水溶液，说乙醇毒性小，便宜，粘度也小，清洗能力也还不错。当然也有人采用纯净水，说纯净水更便宜，更环保。 大家都知道，液相泵柱塞清洗，主要是清洗柱塞往复运动带出的缓冲液（当然有时也要清洗流动相中的酸、碱性溶液），理论上采用纯净水就可以，但纯净水时间长了会有细菌滋生，污染系统。一般大家都会在纯净水中加入一定量的有机试剂，有机试剂一般加5-20%。5%以上的有机溶液具有较强的杀菌功能，20%以下的有机溶液，缓冲液不至于析出。至于加甲醇还是乙醇还是异丙醇、丙酮那就得看实际需要和实际情况了，各有优缺点。 当然这个清洗液远不止这些。如果是正向色谱，流动相是极性较弱的试剂，那样清洗液也尽量选择极性较弱的试剂，比如正己烷、正丁烷等。有时使用树脂填料类的色谱柱，清洗液中最好不要加有机试剂，用纯净水或在纯净水中加一点酸或碱。这个也得看具体要求和具体情况了。 所以液相色谱柱塞清洗液的选择有一些说法。我们常用的是反相色谱，清洗液一般采用10%的甲醇水溶液，10%的乙醇水溶液，10%的异丙醇水溶液，纯净水等。其它色谱法或色谱柱如有特殊需要，那就得特殊处理。这个得看具体要求和实际情况，折优选择。

三 清洗硅胶基质的色谱柱 恢复一根已受污染的高效液相色谱柱的关键在于了解污染物的性质，然后寻找一种合适的溶剂将其去除。如果污染物是由于一些强保留物质的多次进样积聚而产生，一个除去这些污染物的简单的冲洗过程往往会使色谱柱恢复性能。有时，在经过了等度操作之后，用20个柱体积的90％～100％的溶剂B（二元反相体系中较强的溶剂）将会除去这些污染物。（表二列出了各种型号的高效液相色谱柱的柱体积，所以读者可以很轻易地确定色谱柱的冲洗体积。）例如，脂质类的化合物可以使用一些非水性的溶剂来去除，如甲醇、乙睛、四氢呋喃。如果你正在使用含水的缓冲流动相，则千万不能将流动相直接跳到强溶剂中。将流动相猛然间改到高比例有机相的举动会导致高效液相色谱流动体系的缓冲沉淀，这将会造成更加严重的问题，如使筛板堵塞，接口管路堵塞，泵的密封垫失效，刮伤泵的柱塞杆，使进样阀转子失灵。相反，应使用非缓冲的流动相来冲洗色谱柱（就是用水来代替缓冲液）。在经过了5～10个柱体积的非缓冲溶剂冲洗之后才能允许较强的溶剂流经色谱柱。 有时，流动相中的强溶剂组分是不能充分去除色谱柱中的污染物的。必须另外使用一种更强的溶剂或一系列的溶剂才能清洗色谱柱。假如污染物是非生物性的，则使用者可以通过一种或更多的其他有机溶剂来去除不需要的化合物。可以使用许多种的溶剂和溶剂组合方式。访问一些色谱柱生产厂商的网站可以浏览到一些推荐使用的溶剂系统。 一般来说，所有的清洗都会遵循一个相似的模式。清洗过程中的溶剂浓度是增加的，通常最后都是使用一些非极性的溶剂（例如：乙酸乙酯，乃至碳氢化合物），它将会有助于溶解一些脂质类和油类化合物。重要的是要确保这一系列的每个溶剂都能与所使用的下一个溶剂互溶。一个清洗循环的结论是，在回到初始的流动相系统之前，可通过中间的可互溶的溶剂反向走。例如，异丙醇就是这个中间步骤的一个极好的溶剂，因为它能够同有机溶剂互溶，如正己烷和二氯甲烷，而且同样也能够和水相溶剂互溶。因为异丙醇有很大的粘度，所以必须确保清洗时流速不能太高，否则会引起泵的压力过载。同样，如果使用了紫外检测器，则需避免使用在紫外光谱区有吸收的溶剂，因为这样会需要大量的清洗溶剂才能去除所有吸收的溶剂以得到一个稳定的基线。对于典型的键合硅色谱柱和无缓冲液的流动相的一个推荐使用的清洗系统就是：l100％甲醇；l100％乙睛；l75％乙睛——25％异丙醇；l100％异丙醇；l100％二氯甲烷；l100％正己烷； 当使用了二氯甲烷或正己烷作为冲洗溶剂后，由于溶剂的不互溶性，需要先用异丙醇冲洗色谱柱，而后才能使用含水的流动相。冲洗色谱柱的清洗溶剂的体积最小为柱体积的十倍。对于一根250mm×4.6mm的色谱柱，分析者可以使用经典的1～2mL/min的高效液相色谱流量。为了要回到原来的流动相，色谱工作者可以跳过颠倒使用该系列的清洗溶剂。推荐使用异丙醇为中间的清洗溶剂，然后用不含缓冲液的流动相冲洗，最后再用最初使用的流动相进行冲洗。四氢呋喃是另一个使用广泛的溶剂，它可以被用来清洗受污染的色谱柱。如果使用者怀疑色谱柱受到了比较严重的污染，则可以用二甲亚砜或二甲基甲酰胺与水以50：50的比例，以小于0.5mL/min的流速进行清洗。成功的反向液相色谱柱的再生需要花费相当多的时间，使用溶剂进行冲洗可以设置梯度程序来进行通宵操作。* 在清洗过程中产生了是否应该将色谱柱颠倒过来冲洗的问题。因为大部分的强保留的污染物都会留在色谱柱的前端，将色谱柱颠倒过来清洗会减少已被溶解的污染物流出色谱柱的迁移距离。就填料层的稳定性而言，大部分的现代高效液相色谱柱都是用比普通操作压要高得多的压力装填的；因此，色谱柱的填料层应该不会受到反向的流速的干扰。然而，如果色谱柱顶端的筛板的空隙要比底部的来得大，这种反向的方式则是有害的。比如说，如果底部筛板的空隙为2µ m，则足够容纳装填有平均填料粒径为5µ m的色谱柱。（含有粒径5±2µ m的尺寸分布）。然而生产商往往在色谱柱的顶端安装空隙度比较大的筛板，以防止其被样品或流动相颗粒所堵塞。如果这种筛板的空隙度要比粒径大小分布的最小微粒大，部分填料会经筛板而流出色谱柱，这样就会产生中空。如果色谱柱上有一个箭头来提醒色谱柱的流向，我觉得应该在反向使用色谱柱之前参考说明使用书，浏览生产商的网站，或与技术支持组进行商讨，以确定这是否是一个安全的举动。无论你是否将色谱柱反向使用，最好要将色谱柱同高效液相色谱检测器断开，使污染物或者颗粒留在筛板上而不流经检测池，因为这些物质会污染检测池。 清洗污染的反相色谱柱的频率依懒于有多少不明物质被注射到柱子中，因为反相色谱柱有时在分辨率损失和外来物质的洗脱前可以忍受大量的污染物, 使用者往往等到他们观察到一些异常现象才对柱子进行清洗。然而，长时间累积的污染物会使色谱柱的清洗工作变得更难。正因为如此，如果你知道自己的色谱柱很容易受到脏的样品基体的污染时，我建议定期清洗你的色谱柱。清洗的次数越多，清洗条件也就越简单。反相硅胶基质色谱柱中残留蛋白质的清洗 如果一些如血浆、血清的生物物质留在了反相液相色谱柱上，色谱工作者必须使用一些不同的清洗程序。在大部分情况下，一些比较纯的有机试剂如乙睛或甲醇是不能溶解肽和蛋白质的，所以它们不能有效清洗反相液相色谱柱。然而加入了缓冲液、酸或者一些离子对试剂的混合有机溶剂能够有效清洗这些物质。起初，可以尝试含比较高浓度的溶剂B的流动相来冲洗色谱柱。Freiser和他的同事（4）发现来回反复地梯度洗脱，使用三氟乙酸的水溶液和三氟乙酸—正丁醇可以使污染的反相液相色谱柱再生。Bhadway和Day（5）建议进样100µ L的三氟乙醇到250mm×4.6mm色谱柱可以达到清洗的目的。如果这些方案都失败了的话，推荐使用Cunico和他的同事们（6）的强洗脱液和溶解性的试剂（见表三）。然而，在用这些试剂冲洗色谱柱之前，应该参考色谱柱的手册，或和生产商进行商议，以确保其不会破坏色谱柱的填料。硅键合色谱柱的填料往往能够与这些试剂共存，而聚合物色谱柱可能会因为与特定溶剂结合而使填料产生膨胀或收缩，从而影响到色谱柱的性能。表三 用于HPLC反相色谱柱蛋白质物质除去的清洗溶剂溶剂组成乙酸1%的水溶液三氟乙酸1%的水溶液0.1%三氟乙酸-异丙醇40：60（V：V）（粘稠的，通常降低流速）TEA-异丙醇40：60（V：V）（在三乙胺混合前用0.25N的磷酸调节pH到2.5）尿素或胍的水溶液5-8M（调节pH到6-8）NaCl，Na3PO4，Na2SO4水溶液0.5-1.0M (Na3PO4 pH 7.0)DMSO-水 或 DMF-水50：50（V：V）来自参考文献6。如果使用了早期的一系列溶剂，则必须确保表三中的溶剂与这个系列中的溶剂都是互溶的。异丙醇是一个良好的中间冲洗溶剂。在体系中的清洗体积最少为20个柱体积。由于一些溶剂清洗系统具有一定的粘滞性，所以必须调整冲洗流速以避免产生超压。在清洗完一根含有胍和尿素的色谱柱后，需要用至少40～50柱体积的色谱级的水进行冲洗。对于反相高效液相色谱柱来说使用一些如十二烷基磺酸钠（SDS）和Triton的清洗剂来清洗是不妥的，因为这些化合物会强烈地吸附在硅胶基质的表面而难以去除。这些试剂会影响填料表层，改变填料的性质。然而，分离小组的研究发现，肽合成过程中保护基团和净化剂产物对柱子的污染，可以通过在流动相中注射500µ L的1％SDS溶液以1mL/min的流速进行冲洗（7）。如果接下来使用含0.1％(V/V)三氟乙酸的5％～95％乙睛的梯度，在开始的条件下进行平衡，多肽的分离效果则可恢复。

我们单位打算买一台液相色谱，但是对备件这块不是很熟悉，请多给予宝贵的经验。另外，新买的液相色谱还需要配什么？已知的有：超声波清洗器，溶剂过滤器、超纯水仪、稳压电源、色谱流动相（甲醇）。感谢

液相色谱大卖场登录地址： http://www.51sepu.com 产品信息：1.COSMOSIL 色谱柱 普通C18 5微米 4.6×150mm ￥1650 普通C18 5微米 4.6×250mm ￥1750 亲水C18 5微米 4.6×150mm ￥1650 亲水C18 5微米 4.6×250mm ￥1750 耐酸C18 5微米 4.6×150mm ￥1650 耐酸C18 5微米 4.6×250mm ￥1750 Sugar-D 5微米 4.6×150mm ￥1650（分离小分子糖等高亲水化合物） Sugar-D 5微米 4.6×250mm ￥1750 2. 恒温柱箱 ￥23003.溶剂过滤器 ￥13004.超声波清洗器（3L） ￥13005.SSI/LabAlliance 三维液相色谱系统（高压四元泵+二极管阵列检测器+自动进样器+工作站） 询价6.M200S 蒸发光散射检测器（最新一代具热分流技术） 询价7.氘灯 适用于SSI TSP SP 各型检测器 ￥2900 适用于岛津6A 10A 紫外检测器 ￥2200 适用于Agilent 各型检测器 ￥4000 适用于waters 各型检测器 ￥40008.自动进样器小瓶（美国进口） 标准口螺纹瓶,透明,100/PK ￥150 螺纹瓶,透明,可书写带刻度,100/PK ￥170 标准口螺纹瓶,茶色,100/PK ￥165 螺纹瓶,茶色,可书写带刻度,100/PK ￥200 黑色开口拧盖,100/PK ￥48 客服电话：022-85687055/56/57/

摘要：本文介绍了采用LC-600高效液相色谱仪测定变压器油中糠醛含量的方法。油样中的糠醛用甲醇提取出来后，采用C18柱，以甲醇－水为流动相，在紫外检测器波长为280nm的条件下进行检测，检测限能达到0.01μL/L，在0.05μL/L～10μL/L范围内线性良好，RSD为0.32％。关键词：糠醛；高效液相色谱；变压器油；微量分析2.1 仪器与试剂LC-600高效液相色谱仪，P600高压恒流泵，UV600紫外检测器，手动进样阀(7725i)，P600色谱工作站(可以反控主机），JL-120型超声波清洗器，甲醇（HPLC级），超纯水。2.2 色谱条件色谱柱为C18（5μm，250mm×4.6mm）； 柱温为室温；流动相为甲醇—水（40/60，V/V），流速为1.0mL/min，使用前需进行超声波脱气处理；紫外检测器波长为280nm；进样量20μL。2.3 实验方法标准储备液的配制：精确量取10uL糠醛，加入1000mL容量瓶中，用甲醇定容至1000mL。该标准储备液的浓度为10μL/L。4 结论本文采用LC-600高效液相色谱仪分析了变压器油中的糠醛含量，采用C18柱，甲醇－水（40/60）为流动相，以外标法定量。该方法的最低检测限为0.01μL/L，RSD为0.321％，本法具有准确性好，重复性高，检测限低，分析速度快等的优点。

进样阀在进样过程中，必须是非常清洁的，否则得不到较好的结果。进样阀切换到进样位置(Inject)后，要在此位置保持一段时间，使流动相充分冲洗样品定量管，这样可以保证有较高的精确度，而且不用另外再冲洗样品定量管。这种由色谱仪器控制的冲洗显然要比手动冲洗更好些。注意：冲洗需要的流动相体积至少为所进样品体积的10倍。例如，如果取20μL样品至100μL样品定量管中，而流动相此时的流速为1mL/min，则需要在进样位置至少保持12s，即：20μL×10/1000μL·min-1=0.2min=12s。 当样品定量管经过充分的冲洗后，可以将旋柄转回取样位置(Load)，也可以继续保持在进样位置，到下次取样前才切换回取样位置。在切换回取样位置时，将样品进样针或微量样品进样针从进样阀中拔出。 为防止交叉污染，正常情况下不必每次进样后都冲洗进样阀注射针导入口。进样阀内根据专利设计的直接连接进样孔，可以使注射针头的前端直接连接到样品定量管的末端，没有其他空间供样品残留。这样在下一次进样时，就不会有上一次残留的样品进入样品定量管。 但是在进样针头插入或拔出过程中，会有痕量的样品沉积在针头密封区域。精密的测定显示这种残留有1nL ~ 10nL。这表明进20μL样品，会残留0.005% ~ 0.05%。每次进样后冲洗注射针导入口可以将此残留冲洗干净。冲洗注射针导入口的过程为：设定流动相的流速为0.1mL/min ~ 1mL/min，将注射针导入口冲洗头(Rheodyne部件号7125-054)连接到一只体积相对较大的注射器上，用大量的流动相只在进样位置清洗注射针导入口。这样进入进样阀中的液体绕过样品定量管由样品溢出管5# 口排出。这一过程可以将注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈彻底清洗。而采用注射器完全插入式的冲洗方式，则不能全部清洗上述部分的表面。在取样位置将注射针插入注射针导入口时，针头推动注射针密封圈内少量样品液体(上一次冲洗注射针导入管留下的)进入样品定量管。当该样品液体与所用的流动相组成不同，且同时采用部分充满定量管进样方式时，在高灵敏度的检测器上可能出现怪峰。所以冲洗注射针时最好用流动相冲洗。 如果已发现有严重的交叉污染现象，请检查是否有下列原因造成： ⅰ.使用的注射针头长度不够(针头的长度至少要5cm)，注射针末端不能到达定子表面。 ⅱ.注射针没有充分插入注射针导入口。 ⅲ.注射针导入口内的污染物或针头密封磨损下来的削片，使注射针头末端不能接触定子表面。 如果不考虑交叉污染，每进样10次或20次最好冲洗一下注射针导入口，这样可以保证注射针导入管内充满流体。在注射针插入或拔出的过程中，清洗注射针头或稀释污染这一区域的样品的同时也使注射针导入口和样品溢出5# 口充满流体，从而防止空气进入样品管

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液相色谱管路如何清洗

液相色谱平衡柱子时基线很平稳，一进样后就出现大量毛刺。更换色谱柱，新配样品，清洗管路，进样口，检测器后都没有改善，请问这是什么问题呢？（已经出现好多天了，以前都是正常的，忽然就变这样了）[img=,400,224]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/05/201805081323183509_9165_3406574_3.jpg!w690x388.jpg[/img]

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[size=4]清洗键合硅胶反相色谱柱的特殊方法[/size]有时，使用有机溶剂是不能去除色谱柱上的污染物的。如果金属离子被硅胶吸附或与键合，这种情况就特别明显了。这时，可以使用螯合试剂如0.05M的乙二胺四乙酸（EDTA）来冲洗色谱柱。EDTA会同许多金属形成络合物，并把他们进行溶解。在使用过了EDTA后，分析者可以用水彻底冲洗色谱柱。如果样品基体含有一些离子性的化合物，可以改变pH值使其变成非离子状态，然后用水—有机溶剂混合溶剂进行冲洗。例如，一个强碱性的基体化合物可以将其pH值调到小于3而将其去除，这会使质子化的胺在水中溶解性更大。对于去除酸性的基体化合物则是将pH值调到比较高—略高于其pKa——pH值大约为8或9，在这个pH值条件下，酸正处于它们的离子状态。然而，要小心键合硅胶基质的色谱柱，因为长时间暴露在高pH值下会损坏的（8）。为了控制缓冲体系和色谱柱中残留缓冲液中的细菌生长，色谱工作者可以使用一些家用的漂白剂稀释到1：10或1：20，用50个柱体积过柱，接着再用50个柱体积的高效液相色谱级的水进行冲洗。不能让漂白剂流经检测器，因为它会破坏流通池。为了防止溶剂瓶中的细菌生长，应该当天配制足够使用的缓冲液，并将不用的缓冲液存放在冰箱中，并加入0.1%的叠氮化钠，不允许在没有流速的情况下使缓冲液长时间驻留在色谱柱中。色谱工作者往往会讨论使用离子对试剂之后对色谱固定相柱产生的影响。一些离子对试剂如辛磺酸（用于阳离子）和四丁基溴化铵（用于阴离子）在含有某些有机改性剂的条件下会强烈地吸附在键合硅相的表面。色谱柱受到了污染不可能再生到他们的初始状态，这只能说用于离子对色谱的色谱柱需要为这门技术而献身，而且永远无法再用于常规的反相高效液相色谱。Bidlingmeyer（9）则并不赞同这种一般性的观点，认为较为极端的pH值，如在酸性条件下（pH 1-3）键合相和末端封尾硅羟基的水解或在高pH值（pH 7-8）条件下的硅胶溶解，这些离子对试剂能改变一些色谱柱的属性。为了去除磺酸类的离子对试剂，他推荐首先使用至少20倍柱体积的不含离子对试剂的相同流动相冲洗色谱柱，然后用不含缓冲液的流动相进行冲洗（在这个清洗步骤中，甲醇是一个比乙睛要好的有机溶剂；对于长链的离子对试剂，需要使用四氢呋喃）很明显，磺酸类的离子对试剂和胺类的离子对试剂存在不同的色谱行为，其对于色谱柱的影响是不同的。Bidlingmeyer和他的同事们（10）证明了当使用了C18柱，流动相浓度大于70％甲醇，SDS，这个长链的阴离子离子对试剂是不会吸附在固定相上的。这种发现也恰好验证了分离组的研究（7）。硅胶键合整体柱，例如Chromolith 色谱柱（Merk KGaA Darmstadt,Germany）应该被当成其他类型的硅胶色谱柱来进行处理。聚合柱的再生用来分离生物分子的聚合柱也会被污染而需要清洗。这种聚合材料的化学稳定性往往决定于它们的强度。实际上，许多的生产商推荐用1.0M的硝酸或1.0M的氢氧化钠来清洗聚合柱。某些反相聚合物柱子如聚乙烯填料（苯乙烯——二乙烯基苯）（PS-DVB）和聚合整体柱如CIM RP-SDVB的叠片柱(BIA Seperations, Ljublijana, Slovenia)以及Swift色谱柱(Isco, Lincoln, Nebraska)可以承受较宽的pH值范围（通常为1～13，有时为0～14），但是，使用者在用一些要求苛刻的有机试剂清洗色谱柱时应该谨慎。根据它们键交联度，当色谱柱暴露在有些有机溶剂中时，会使色谱柱填料产生收缩或膨胀。8—10％以上的高交联度的聚合填料通常具有非常良好的机械稳定性，在水相溶剂中有最小程度的收缩，而在有机溶剂中有最小程度的膨胀。在用一系列溶剂清洗聚合柱之前，最好能够参阅色谱柱手册，或同色谱柱生产商的技术支持部门进行商讨。按照BIA分离要求（11），使用者再生PS-DVB的聚合物整体柱可以通过：l 用10个柱体积的含0.1％的三氟乙酸的异丙醇，以一半的工作流速进行冲洗柱子；l 用至少5个柱体积的100％流动相B以一半的工作流速进行冲洗柱子；l 用至少10个柱体积的100％的流动相A以工作流速重新平衡色谱柱。如果要清洗一根有丁基和乙基的甲基丙烯酸填料的整体柱，可以用10倍柱体积的每份含1.0M的氢氧化钠、水、20％的乙醇溶液和缓冲液，反方向冲洗色谱柱（12），并将蛋白质除去。对于大部分的亲水性蛋白质，使用者应在用水清洗之后加入一个用异丙醇（30％V/V）或乙醇（70％V/V）的清洗步骤。对于微生物污染的清除和钝化，一根PS-DVB整体柱可以用0.5～1.0M的氢氧化钠完全清洗。装填的整体柱应该在室温下用氢氧化钠浸泡至少一个小时以上。用来分离复杂蛋白质如不溶性的细胞膜蛋白、结构蛋白和病毒外壳蛋白的传统聚合填料的色谱柱只需粗糙的清洗条件。例如，清洗这些复杂蛋白质（13）也许要在60 °C条件下用到含3M盐酸胍的50%的异丙醇。肽的合成中来自于固定相树脂的碎片，产生了活性碳正离子，这些碳正离子可以用苯甲醚和硫代苯甲醚来提取。这些碳正离子反应会产生大量的芳香分子，这些芳香分子会在肽的纯化中破坏反相色谱柱。这些污染物在C18柱内有很强的保留，不能用100％的乙睛或甲醇除去。为了清洗这些色谱柱，应该颠倒色谱柱的使用方向，然后用3～5个柱体积的100％异丙醇，3～5个柱体积的二氯甲烷，3～5个柱体积的异丙醇，再回到原来的初始溶剂系统进行冲洗（14）。芳香性杂质的洗脱可以用紫外检测器在260nm波长下进行核实。 氧化锆基质的高效液相色谱柱的再生ZirChrom 分离有限公司（Anoka，Minnesota）已经生产了一系列的氧化锆柱。其生产线也包括了一些反相液相色谱柱，如聚丁二烯、聚苯乙烯、石墨碳等形式。氧化锆要比硅胶更抗pH值，所以涂敷了氧化锆的色谱柱有更高的耐受性，能够经受住苛刻的操作环境，如高的pH值和操作温度。然而由于这些特殊的表面特性，分析者必须保持特定的分析条件以使他们的色谱柱成功地接受各种分析工作。碳酸、氟化物、磷酸根离子都会强烈地吸附在氧化锆柱上。为了将它们从色谱柱中清除，需用50倍柱体积的20％乙睛—0.1M氢氧化钠或0.1M的四甲基氢氧化铵，10倍柱体积的水，50倍柱体积的20％乙睛－0.1M硝酸，再用10倍柱体积的水，20倍柱体积的100％的有机溶剂进行冲洗。对于聚丁二烯和聚苯乙烯柱，色谱工作者可以用甲醇、乙睛、异丙醇或四氢呋喃。石墨碳色谱柱则需要在相同的溶剂中至少加入20％的四氢呋喃（15）。总结反相液相色谱柱会由于一些含强保留成分的样品基体的反复进样而造成污染，尤其是一些分子量高的、亲水性比较强的化合物、如蛋白质这样的生物流动性组成和一些会吸附在硅醇基上的强碱性物质。另外，某些流动相添加试剂如离子对试剂和表面活性剂会吸附在填料表面并改变其性质。被污染的色谱柱会产生糟糕的峰形、假的可重复的保留性、高的反压力和基线干扰。通常一些能够破坏污染物与色谱柱键合或硅胶表面反应的有机溶剂和试剂可以用来清洗色谱柱。 色谱工作者需要小心谨慎，因为这些试剂本身有很强的破坏作用，使用时会造成固定相本身的损坏。此外，通过使用样品的前处理过程，尽可能少地接触到污染物的样品，来防止色谱柱受污染是一个很好的步骤。在所有的应用中，本人强烈推荐使用保护柱来防止色谱柱的污染并对分析柱可能造成的伤害。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

液相色谱 进样针和六通阀污染怎么解决？