液相色谱数据积分方法

在做液相色谱分析的时候，有一段时间的数据，不能积分，很明显的峰也不显示在报告中，怎么解决？

液相色谱得到的谱图，什么时候用谷谷积分，什么时候用垂直积分，有时候自动积分好像不准啊，能附图说明一下吗？

各位大神好，我想请问一下，液相色谱图手动积分保存后，是否还能恢复到之前自动积分的图谱？我用的戴安的仪器。

液相色谱峰积分时，什么时候适合自动积分，什么时候适合手动积分？

当液相色谱峰行不好时，大家通常是采取什么样的标准来积分的啊？

工作初学液相色谱，领导要扣除空白样和积分，完全不懂，求大神指导

各位老师好：我在做一个混合样的分离，用的是waters的紫外液相色谱，利用三段的梯度洗脱进行分离，每一个梯度的变化都很大，是阶梯状的洗脱。现在我在做定量分析，打算利用一个内标物进行内标（因为我走的时间较长，如果每次都打外标不现实）。积分这块遇上了麻烦：我的内标物是在第一个基线出的，三段梯度上都有我要的物质，我该如何积分？我这种肯定是需要手动积分，每段上我都需要重新设置阈值与峰宽进行积分，也就是我会有三个积分方法，那么问题就来了，我的内标物需要用哪种方法积分，是利用第一段的方法积出来内标物的面积，然后每段上的物质进行比对，还是利用每段上的方法重新积一个对应的内标峰进行比对。还有一个问题是，我每次进样，方法需要重新设置吗？我的谱图基本如图，内标物出峰在10min（图中未显示）。请教各位老师，如何才能减小误差。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/12/202012040008067914_2001_5086198_3.png[/img]

请问各位大佬了解沃特世、安捷伦[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的峰面积积分原理吗，自己尝试用现在的主流积分原理，积分结果显示：部分分离度很差的峰积分要么包一起，要么峰积的不对，想了解仪器公司的积分原理是啥？

关于给予液相色谱版每月发帖前五名积分奖励的规定从2008年06月开始，液相色谱版将对每月发帖子前五名的版友进行积分奖励。奖励如下：第一名：50分第二、三名：20分第四、五名：10分希望大家共同为LC的繁荣努力！！ 灌水者一律按照版规处理8月前5名xky0230699 (140帖) ：50分 kikiboy (138帖) ：20分 cbjcn1985 (76帖) ：20分 wangzijin (69帖) ：10分 juju11 (54帖) ：10分

[color=#444444]各位大神，岛津LC2010A液相色谱仪积分，怎么扣空白？谢谢！[/color]

继去年帮助了42个版友，共计发了550分后，今年我仍然将个人积分拿出3000个，作为积分基金。新到液相色谱的版友如果需要积分下载资料，可以在这里跟帖，我将赠送相应的积分。具体格式如下：资料名称：下载链接：所需积分：[B][size=4][color=#DC143C]注意：1、严禁发表与此不相关的帖子，一发现就删除。2、只给哪些积分不够下载资料的网友。3、格式不对的也将删除。[/color][/size][/B]

我将个人积分拿出3000个，作为积分基金，新到液相色谱的版友可以在这里跟帖，我将赠送相应的积分。具体格式如下：资料名称：下载链接：所需积分：注意：1、严禁发表与此不相关的帖子，一发现就删除。 2、只给哪些积分不够下载资料的网友。 3、格式不对的也将删除。

20090603液相色谱仪（HPLC）市场调查报告要1000积分？太多了！是不是搞错了？

液相色谱waters积分中的阈值与峰宽该怎么设？

哪位朋友知道液相色谱仪的积分仪的基线斜是什么原因造成的吗？如何处理？

求助：岛津液相色谱工作站AIA格式数据各位同行：大家好！ 本人因研究色谱指纹图谱软件急需3个岛津液相色谱工作站AIA格式数据（原始数据和已积分过的数据），希望大家给予帮助。谢谢！王巨存wangjucun2000@163.com

[size=16px][color=#595959]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（HPLC）的积分是色谱数据处理中的一个重要步骤，它涉及对色谱图上的色谱峰进行量化分析，以确定各个组分的含量。积分过程包括峰识别、峰面积计算、峰高的测量以及结果的解释等。积分的准确性对于实验结果的可靠性至关重要。[/color][/size][size=16px][color=#595959]在HPLC分析中，色谱图上的每个峰代表一个特定的化合物或组分。积分算法通过比较峰的斜率与一个固定的阈值来识别峰的起点和终点。Empower软件提供了传统和ApexTrack两种积分算法，用户可以根据需要选择不同的积分事件。这些事件包括允许负峰、指数曲线切削、强迫垂线、按峰或时间强迫基线、禁止积分等，每种事件都有其特定的应用场景和参数设置。传统积分算法和ApexTrack积分算法是两种常见的积分方法。传统积分算法通过比较峰斜率与阈值来识别峰，而ApexTrack算法使用峰顶点作为特征数据点来检测峰，并利用色谱图的二阶导数来检测峰，这种方法能够检出各种大小的色谱峰，包括共洗脱峰以及倾斜或漂移基线上的峰。[/color][/size][size=16px][color=#595959]此外，积分类型也很重要，通常不建议手动积分，因为手动积分可能会引入主观性和误差。如果必须进行手动积分，应该按照建立的SOP进行，并保存好记录。在审查色谱图是否使用了手动积分时，可以通过检查积分方法和记录来确定。（具体可以参见[url=http://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MzkzNjcyNzg0MA==&mid=2247485051&idx=1&sn=56f76696a5d9bc061dfb2af0b4f226b1&chksm=c29b0234f5ec8b2268a32ab6f56356e3513bbe0bd42cd8da26879b9a1bcd87594482a0c6cc8d&scene=21#wechat_redirect]手动积分[/url]） [/color][/size][b][size=18px][color=#595959]01.常见的积分手段 [/color][/size][/b] [size=16px][color=#595959]a.垂直切割法（Forced Vertical Cut）：在两峰的峰谷到水平基线之间添加一条垂直线，可以通过垂直切割将相邻的峰分开[/color][/size][size=16px][color=#595959] [/color][/size][img=,219,277]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092116253670_271_3203140_3.png!w219x277.jpg[/img][size=16px][color=#595959] b.平滑曲线法（Curve Smoothing）：在色谱图上对基线或峰进行平滑处理，以减少噪声的影响并改善峰的识别 [/color][/size] [size=16px][color=#595959] [img=,294,288]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092140250582_7776_3203140_3.png!w294x288.jpg[/img] [/color][/size] [size=16px][color=#595959] [/color][/size] [size=16px][color=#595959]c.切线切削法（Tangent Skimming）：在峰的[/color][/size][size=16px][color=#595959]肩部或峰谷处使用切线进行积分，以排除邻近峰的干扰。 [/color][/size][size=16px][color=#595959] [/color][/size][color=#595959] [img=,217,286]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092142121877_3185_3203140_3.png!w217x286.jpg[/img] d.峰谷到峰谷（Valley-to-Valley）：在相邻峰之间的最低点（谷）进行基线设置，以确保峰的完全积分。 [/color] [img=,590,597]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092143172310_5286_3203140_3.png!w690x699.jpg[/img] [b][size=18px][color=#595959]02.各国法规上的相关要求[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.美国药典：未与主峰完全分离的任何杂质的峰面积的积分最好通过切线撇取法进行。 [img=,477,577]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092144312073_7138_3203140_3.png!w477x577.jpg[/img] b.欧洲药典：任何未与主峰完全分离的杂质峰面积的积分通常通过切线撇取法进行。[/color][/size] [size=16px][color=#595959] [img=,492,586]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092147587648_2350_3203140_3.png!w492x586.jpg[/img] [/color][/size] [size=16px][color=#595959]c.中国药典：默认为垂直积分 [/color][/size] [color=#595959][b][size=16px][color=#595959]为什么说中国药典是默认垂直积分呢？[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]答：在系统适用性试验部分，提到了峰谷比的计算，这需要使用垂直积分方式来实现，而不是切向积分方式。如果采用撇除法，那这个参数的意义就没有了。[/color][/size] [/color] [img=,690,191]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092127247998_838_3203140_3.png!w690x191.jpg[/img] [img=,349,355]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092127526662_1236_3203140_3.png!w349x355.jpg[/img] [img=,490,14]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092129241844_785_3203140_3.png!w490x14.jpg[/img] [color=#595959][b]额外说一下：[/b][/color] [color=#595959]根据《Introduction To Modern Liquid Chromatography》一书里面提到的，作为经验法则：如果较小峰的峰高10%的较大峰的峰高，那么垂线分割法就更加适用。[/color] [img=,690,111]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409092130192153_5078_3203140_3.png!w690x111.jpg[/img]

药典液相色谱方法的调整 • 根据药典附录“液相色谱法”规定，可调整适当参数 ---调整目的：满足系统适用性的要求 ---系统适用性的要求 ---HPLC方法调整的考虑因素 05版药典的系统适用性要求1、理论塔板数： ----反映整个色谱系统的状态 填料状态 管线连接 ----有不同的计算方法 主要是峰宽取值方法不同 不同计算方法计算结果有差异 ----影响因素： 被测组分的保留时间、进样量等 积分参数 系统死体积 测定色谱方法、样品与计算方法保持恒定，以便比较 05版药典的系统适用性要求 2、分离度： ---影响因素： * 影响柱效的因素 色谱柱尺寸 填料性能 进样量 * 影响分离选择性的因素 流动相组成 色谱柱品牌 柱温 * 柱外体积 ---有不同的计算方法，结果有差异 05版药典的系统适用性要求3、重复性（进样精密度）： * 外标法：对照品溶液（n：5） 峰面积RSD：2.0% * 内标法：相当于80%，100%，120%的对照品溶液，加入规定量内标 溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子（[font=Times New Roman

用液相色谱检测控制杂质限量，要求是杂质含量超过0.1%的不能超过三个。但是设定不同的积分参数（峰高，峰面积，峰宽，斜率等），得到的杂质峰个数可能就不一样，请问大家在遇到这种情况的时候是怎么做的？对此有没有标准文件可以参考的？还是全凭经验来？个人有个想法就是根据仪器检测限，即3倍信噪比来确定峰高这一参数，不知道合理不合理？请个人大神指教！

1.关于色谱积分，想请教各位大神，什么样的情况可以采用谷到谷积分，又在什么样的情况下可以采用垂线积分，有大神知道具体依据没？如果出现一个小的杂质峰，但是附近基线走的不好（有点有点像双峰的感觉），又该如何合理积分？2.关于数据处理，按照GMP要求：是不是每次数据处理方法必须要一致，不允许有任何改动？如果是，具体原则是什么，出于药典哪条法规？3.峰识别，系统溶液中各组分峰的保留时间与样品中相应组分峰之间的保留时间相差多少，是可以被接受的？这个问题同样站在审计角度！

[font=宋体][back=white]关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分（[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]Reintegration[/back][/font][font=宋体][back=white]）的注意事项。[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]FDA[/back][/font][font=宋体][back=white]的[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]2001[/back][/font][font=宋体][back=white]年定稿指南[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]Bioanalytical Method Validation[/back][/font][font=宋体][back=white]，及相应的[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]2013[/back][/font][font=宋体][back=white]年草案指南也有类似的要求。生物样本分析的方法验证[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]2013[/back][/font][font=宋体][back=white]草案指南，第[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]III.C[/back][/font][font=宋体][back=white]节[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]“[/back][/font][font=宋体][back=white]样本数据再积分[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]”[/back][/font][font=宋体][back=white]规定：[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]SOP[/back][/font][font=宋体][back=white]应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分；应清楚描述、并记录再积分的理由；应报告原始和再积分数据。第[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]VII.D[/back][/font][font=宋体][back=white]节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]EMA[/back][/font][font=宋体][back=white]的[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]2011[/back][/font][font=宋体][back=white]年指南[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]Guideline on bioanalytical method validation[/back][/font][font=宋体][back=white]，第[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]5.5[/back][/font][font=宋体][back=white]节规定：应该有[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]SOP[/back][/font][font=宋体][back=white]描述色谱的积分和再积分。应在分析报告中讨论偏离这个[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]SOP[/back][/font][font=宋体][back=white]的任何偏差。应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据，并在要求时立即可得。[/back][/font][font=宋体][back=white]目前没有关于手动积分的公认的定义，[/back][/font][font='Times New Roman','serif'][back=white]Hill[/back][/font][font=宋体][back=white]的一篇文章，讨论了手动再积分的范围和术语，并总结认为，建立一致的定义是有必要的。[/back][/font][font=宋体]在[/font][font='Times New Roman','serif']2015[/font][font=宋体]年[/font][font='Times New Roman','serif']11[/font][font=宋体]月，美国费城的[/font][font='Times New Roman','serif']ISPE[/font][font=宋体]年会上，企业人员[/font][font='Times New Roman','serif']Bob McDowall[/font][font=宋体]和[/font][font='Times New Roman','serif']Mark Newton[/font][font=宋体]建议区分手动干预（[/font][font='Times New Roman','serif']Manual Intervention[/font][font=宋体]），和手动积分（[/font][font='Times New Roman','serif']Manual Integration[/font][font=宋体]）[/font][font='Times New Roman','serif'],[/font][font=宋体]并提出：[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]手动干预：没有手动改变基线，例如：对峰重命名，或调整积分窗口；改变积分参数；[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]手动积分：分析员手动重新划基线。[/font][font=宋体]举两个例子说明：[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]例[/font][font='Times New Roman','serif']1[/font][font=宋体]，在色谱峰的保留时间不在预期的时间窗口内，需要手动干预时间窗口，而峰面积不会改变；需要调查保留时间偏离的原因。可能[/font][font='Times New Roman','serif']FDA[/font][font=宋体]会把这个干预也归为手动积分；但是[/font][font='Times New Roman','serif']Bob[/font][font=宋体]认为不必归类为手动积分。所以希望监管机构给出明确定义的指南。[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]例[/font][font='Times New Roman','serif']2[/font][font=宋体]，有[/font][font='Times New Roman','serif']IPEM[/font][font=宋体]学员单位提议：手动干预、手动积分这两种方式在有些情况下可替代使用的。峰无法识别（或不能正确识别）时可能通过手动积分（重画基线）或调整积分参数解决；峰积分不好时可通过手动积分（重画基线）或调整积分参数解决。[/font][align=center][font=宋体]什么情况下可以手动积分[/font][/align][font='Times New Roman','serif']1[/font][font=宋体]、低分离度或低响应；[/font][font='Times New Roman','serif']2[/font][font=宋体]、流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小；[/font][font='Times New Roman','serif']3[/font][font=宋体]、色谱柱性能：运行过程中，出现异常峰；[/font][font='Times New Roman','serif']4[/font][font=宋体]、软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；[/font][font='Times New Roman','serif']5[/font][font=宋体]、由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱[/font][font='Times New Roman','serif']/[/font][font=宋体]肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序）、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。[/font][align=center][font=宋体]手动积分检查的不合格项[/font][/align][font=宋体]在[/font][font='Times New Roman','serif'] 2014[/font][font=宋体]年，[/font][font='Times New Roman','serif']FDA[/font][font=宋体]对欧洲某实验室的检查中，[/font][font='Times New Roman','serif']483[/font][font=宋体]表格中有一个观察项这样表述：没有描述如何进行手动积分的操作规程（[/font][font='Times New Roman','serif']Noprocedure exists describing how to perform manual integration[/font][font=宋体]）。[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]在[/font][font='Times New Roman','serif']2007[/font][font=宋体]年[/font][font='Times New Roman','serif']8[/font][font=宋体]月，[/font][font='Times New Roman','serif']FDA[/font][font=宋体]给[/font][font='Times New Roman','serif']Leiner Health Products[/font][font=宋体]公司的警告信中，有一条缺陷项这样表述：检查员记录了很多[/font][font='Times New Roman','serif']“[/font][font=宋体]数据捏造[/font][font='Times New Roman','serif'](manipulation of data)[/font][font=宋体]，却没有解释捏造原因[/font][font='Times New Roman','serif']”[/font][font=宋体]。这个捏造包括：改变色谱积分参数、重新标记峰，这样之前本应该积分的峰就不再积分，不计入杂质的计算。这说明了[/font][font='Times New Roman','serif']FDA [/font][font=宋体]是接受手动积分的，但应该有操作规程控制手动积分的条件、权限、注意事项等，不能背离科学地通过手动积分使检验结果合格。[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]备注：在[/font]FDA[font=宋体]的现场检查中，例如发现预进样、重复检验的情况，检查员的观点是：如果企业证明是科学的、必要的，就应该写入操作规程。这也意味着，需要经过充分验证、科学评估。[/font][align=center][font=宋体]手动积分的好处[/font][/align][align=center][font=宋体]理想条件下，在通过系统适用性试验后，标准品、样品的色谱应一直以相同的方法进行积分。但是实际情况并非如此，尤其是接近定量限、检测限的情况下，有些峰自动积不上，需要手动积分。手动积分虽然会受主观因素的影响，在科学分析色谱结果时也是需要的。[/font][font=宋体]举两个例子说明：[/font][/align][font=宋体]例[/font][font='Times New Roman','serif']1[/font][font=宋体]，当出现异常峰，分离度不好的峰时，可以手动强制分割。[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]例[/font][font='Times New Roman','serif']2[/font][font=宋体]，研发阶段，[/font][font='Times New Roman','serif']API[/font][font=宋体]、稳定性样品的纯度、降解产物的检验方法色谱运行条件相同，但应考虑到检测分析的重点不同，可能需要不同的积分参数。在这种情况下，最好建立不同的分析方法、程序。[/font][align=center][font=宋体]手动积分使用的注意事项[/font][/align][align=left][font=宋体]通常，在得到自动积分色谱图后，分析保留时间、峰型是否如预期，峰是否被正确识别，基线是否满足要求，或者其它标准。只有在色谱图不可接受时，才可考虑是否可以进行手动积分，或者进行实验室调查。[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]有两种情况，是禁止进行手动积分的：[/font][font='Times New Roman','serif'][/font][font=宋体]在自动积分后，对称的峰有可接受的基线；[/font][/align][align=left][font=宋体]增强峰、或削减峰的目的是为了满足系统适用性接受标准，或满足放行质量标准。[/font][/align][b][font=宋体][color=#FCFDFF][back=white]关于手动积分的指南[/back][/color][/font][/b]

药典液相色谱方法的调整 • 根据药典附录“液相色谱法”规定，可调整适当参数 ---调整目的：满足系统适用性的要求 ---系统适用性的要求 ---HPLC方法调整的考虑因素 05版药典的系统适用性要求1、理论塔板数： ----反映整个色谱系统的状态 填料状态 管线连接 ----有不同的计算方法 主要是峰宽取值方法不同 不同计算方法计算结果有差异 ----影响因素： 被测组分的保留时间、进样量等 积分参数 系统死体积 测定色谱方法、样品与计算方法保持恒定，以便比较 05版药典的系统适用性要求 2、分离度： ---影响因素： * 影响柱效的因素 色谱柱尺寸 填料性能 进样量 * 影响分离选择性的因素 流动相组成 色谱柱品牌 柱温 * 柱外体积 ---有不同的计算方法，结果有差异 05版药典的系统适用性要求3、重复性（进样精密度）： * 外标法：对照品溶液（n：5） 峰面积RSD：2.0% * 内标法：相当于80%，100%，120%的对照品溶液，加入规定量内标 溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子（[font=Times New Roman

[color=#444444]本人用的是岛津液相色谱LC-2010A，做出的一个色谱图在8分钟出现杂质峰，我想可以取5分钟之前的数据，可以不重做直接在此图上处理么？如果可以，请教下该怎么做？[/color]

用液相色谱配紫外和二极管阵列检测器做一些农药残留分析，数据处理过程中会发现一些误认和峰丢失的现象，想请教高手：液相色谱数据处理是不是一定要一个个的仔细辨认才能做到精确？

液相色谱不积分了是怎么回事?

分子大小组成相似，分子大小相近，如何用液相色谱法分离分级？液相色谱中哪种方法更好呢？

液相色谱分析时，积分方式应该是采用峰谷到峰谷，还是采用基线积分，这两种方式有何不同？哪种更准确些