液相色谱梯度洗脱方法

能得出梯度曲线是否证明液相色谱仪能做梯度洗脱！！我很想知道！！请知道的朋友尽快和我联系！！谢谢！！

主题：液相色谱进阶讲座之梯度洗脱简介：通过实例详细介绍“梯度洗脱”的意义、应用领域、操作方法以及优化，相信能够使广大网友的液相色谱技术有一些崭新的提高讲座办法：在讲座时间内，由主讲人上传资料；讲座时间结束，网友可以参与讨论提问等；讲座内容长期保存，网友可在任何时间进行浏览或下载讲座时间：2010-7-8,14:30~16:00主讲人：Godblesschina欢迎各位朋友届时参与！

在液相色谱分析中梯度洗脱与等度洗脱差异？

请教各位大峡梯度洗脱是怎么回事，最近想买一台液相色谱，实验室本来只有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]，所以对液相不太了解．如果想买一台液相色谱，能做梯度洗脱，对设备有什么要求，是不是一定需要两台泵．

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的梯度洗脱和等度洗脱都是用在什么操作中呢？梯度洗脱有什么优势呢？

我是使用液相色谱的菜鸟，现在遇到了一点点问题，请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定，一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=75：25，在10分钟左右出峰，流速1ml/min；另一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=5:95，在6分钟左右出峰，流速0.5ml/min，如果我想同时测定，可以用梯度洗脱吗？如果可以的话，流动相比例过程中的变化改怎么设置，请各位大神赐教，谢谢。

我是使用液相色谱的菜鸟，现在遇到了一点点问题，请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定，一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=75：25，在10分钟左右出峰，流速1ml/min；另一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=5:95，在6分钟左右出峰，流速0.5ml/min，如果我想同时测定，可以用梯度洗脱吗？如果可以的话，流动相比例过程中的变化改怎么设置，请各位大神赐教，谢谢。

高效液相色谱梯度洗脱时应该注意的问题?

安捷伦1260液相色谱从哪设梯度洗脱

依利特P200II高效液相色谱仪可以做梯度洗脱吗?

有什么办法能让单泵液相色谱进行梯度洗脱?大家讨论下[em52] 我想到一个办法,不知道行不行但是现在还没想好[em53]

各位老师好：我在做一个混合样的分离，用的是waters的紫外液相色谱，利用三段的梯度洗脱进行分离，每一个梯度的变化都很大，是阶梯状的洗脱。现在我在做定量分析，打算利用一个内标物进行内标（因为我走的时间较长，如果每次都打外标不现实）。积分这块遇上了麻烦：我的内标物是在第一个基线出的，三段梯度上都有我要的物质，我该如何积分？我这种肯定是需要手动积分，每段上我都需要重新设置阈值与峰宽进行积分，也就是我会有三个积分方法，那么问题就来了，我的内标物需要用哪种方法积分，是利用第一段的方法积出来内标物的面积，然后每段上的物质进行比对，还是利用每段上的方法重新积一个对应的内标峰进行比对。还有一个问题是，我每次进样，方法需要重新设置吗？我的谱图基本如图，内标物出峰在10min（图中未显示）。请教各位老师，如何才能减小误差。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/12/202012040008067914_2001_5086198_3.png[/img]

姜黄素高效液相色谱分离，等度洗脱，第一个峰很好，第二，三峰有点重叠，峰形也有点不对称，可用吗?梯度洗脱时，梯度之间需要设置平衡时间吗，0～5min,乙腈：水（50：50）；5～10min,(60:40)；11～20min,(70:30)……,在5min,10min,20min时要设置平衡时间吗?谢谢。姜黄素高效液相色谱分离，等度洗脱，第一个峰很好，第二，三峰有点重叠，峰形也有点不对称，可用吗?梯度洗脱时，梯度之间需要设置平衡时间吗，0～5min,乙腈：水（50：50）；5～10min,(60:40)；11～20min,(70:30)……,在5min,10min,20min时要设置平衡时间吗?谢谢。

单泵液相色谱怎么样才能实现梯度洗脱？具体说说[em0805] 我们的液相是伍丰的LC—100

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]梯度洗脱就有杂峰出现，流动相前面的图为纯甲醇，0.8的流速。后面的是梯度系统，流动相为水跟纯甲醇，只要换成梯度洗脱就是有杂峰。图三是我的梯度，想问一下大家这种情况是怎么回事呀，会是柱子里面的杂质吗？[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209091705490089_2220_5515753_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209091705490206_3458_5515753_3.png[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209091705488741_2458_5515753_3.png[/img]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=111363]液相色谱梯度洗脱中柱温的影响[/url][em0815]

本人刚刚接受液相（用的是伍丰LC-100液相色谱仪）做一个实验需要梯度洗脱，单仪器只有一个泵

谁能说高效液相色谱洗脱梯度怎么回事、谢谢！

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=105421]反相高效液相色谱中流动相线性梯度洗脱条件下溶质保留时间预测的新方法.PDF[/url]对做梯度洗脱的兄弟可能有些帮助.

请问用waters 515 996型号的液相色谱进行梯度洗脱效果怎么样?请指教

[color=#444444]请教一个HPLC的梯度洗脱问题：缓冲盐是20mmol/L的醋酸铵-醋酸缓冲盐溶液，pH=4.90。[/color][color=#444444]原来的方法[/color][color=#444444]0 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]2.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]10 min 36% 甲醇 64% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]12.5 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]15 min 100% 醋酸铵缓冲盐[/color][color=#444444]原来可以检测出五种物质，出峰时间分别是2.33 2.67 5.46 6.45 10.88 min[/color][color=#444444]但是现在我只想检测两种物质（2.67 和5.46两个峰），虽然可以直接跑完这个梯度，但是比较费时间，希望调整后可以节省点分析时间。另外峰谱图后半部分基线漂移比较严重，所以想着调整本方法～[/color][color=#444444]请教一下梯度洗脱的方法应该怎么修改呢？有一个不明白的问题是怎么调整有机相比例可以避免后面不需要的几种物质残留在色谱柱中？[/color]

[color=#444444]我在使用液相色谱时，使用甲醇：水作为洗脱剂，梯度洗脱时基线跑不稳，来回上下跳动，但是波动均匀，没有很大的突变，基线就像是正玄曲线的压缩版，呵。。。。很是头疼！单泵时基线很平稳，A泵和B泵我都单独试过了，基线均很平稳。混合前就能做的很好，混合后就不行了，莫非是混合器出的问题？有气泡？若是这种情况应该怎么解决啊？若是其他情况，问题出在哪了？[/color]

花青素跟叶绿素的高效液相色谱梯度洗脱怎么设定。。。请大神帮忙

液相色谱 梯度洗脱 空白要进至少两针吗？为什么第一针和第二针出峰不一样？

岛津的液相色谱中等浓度洗脱和二元高压梯度洗脱有什么区别？有人说混标需要梯度洗脱，单表不需要梯度洗脱对吗?流速和浓度成正比吗？

[color=#444444]同样的色谱条件，同样的洗脱梯度，做同一个物质时，原来25-30min之间没有大包，现在出现大包，洗脱流动相，A，B均为不同比例的盐和乙腈，前25分钟完全由A相转换为B相，25-26min完全由B相转换为A相，此时出现大包。以前也是这个梯度，但是没有大包，求大家帮忙分析一下原因。[/color]

[b][font=宋体][back=white]解答：[/back][/font][/b][font=宋体][back=white]在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：[/back][/font][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定的比例内互溶，超出一定的范围后就不会互溶。例如：乙腈和[/font]1 mol/L[font=宋体]的醋酸铵（[/font]pH=5.16[font=宋体]）做梯度洗脱，乙腈含量超过[/font]70%[font=宋体]时就会出现不溶。当有机溶剂和缓冲溶液混合时还可能析出盐的结晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头上后会被强的溶剂洗脱出来，用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止溶剂混合时产生气泡。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）混合溶剂的黏度常随其组成而变化，因此在梯度洗脱时常会出现压力变化，例如纯水或甲醇的黏度都比较小，但是当二者以相近的比例混合时黏度会增大很多（甲醇[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]水体积比为[/font]1[font=宋体]：[/font]1[font=宋体]时压力最大），因此要防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱所能承受的最大压力。[/font][font=宋体]（[/font]4[font=宋体]）每次梯度洗脱程序运行完之后必须对色谱柱进行彻底平衡，使其恢复到初始的状态，需让[/font]10~30[font=宋体]倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相和初始流动相达到完全平衡，平衡不好会影响下一针样品的分离度和保留时间。[/font][font=宋体]（[/font]5[font=宋体]）注意梯度洗脱用水的有机物残留。往往在等度洗脱时用的水，在梯度洗脱时发生问题（鬼峰）。这是因为在梯度过程中，水占的比例很高时的流动相洗脱能力很低，此时水中的有机物残留就被色谱柱吸附并浓缩，等到强溶剂占高比例时，浓缩的有机物被高洗脱能力的流动相洗脱而流出色谱柱，并成为一个色谱峰，从而干扰分析。[/font][font=宋体]（[/font]6[font=宋体]）梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器（如紫外吸收检测器或荧光检测器），而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器（如示差折光检测器）。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

[color=#444444]请问0.02M磷酸二氢钾和甲醇这样比例和时间梯度洗脱可以吗[/color][color=#444444]时间 0.02M磷酸二氢钾 甲醇[/color][color=#444444]0 99 1[/color][color=#444444]15 0 100[/color][color=#444444]15.1 99 1[/color][color=#444444]经过0.1分钟从纯甲醇变为0.02M磷酸盐溶液可以吗？ 柱子为SB-C8色谱柱[/color]