液相色谱中外标法定量

液相色谱，外标法定量，对标准样品的纯度有要求吗？是不是一定要大于98％？现在只能买到FLUKA质保书上纯度为95％的标准品（GC)，可以用于外标法定量吗。大家平时有没有碰到过标准品纯度不高的问题，是不是说明这种物质很难提纯？

岛津的液相色谱，配有自动进样器。用外标定量时，只配一个标样，选择用改变的进样量（即1微升，2微升。。。。）这种方式来做标准曲线，是不是线性更好一些。

液相色谱法定量用外标法定量时，含量超过100%的可能性有多少，可信吗？有多少改善的余地？

为什么高效液相色谱可以用外标法定量

液相色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的外标法和内标定量有何区别?是如何处理的?

[color=#444444]液相色谱使用外标法定量，但是经常出现所有组分含量总和超过100%的现象~~这是为什么，希望高人能够指点一下。[/color]

利用高效液相外标法定量需要扣除样品空白吗

用液相做外标法定量，为获得更可靠结果，标准样和待测样都各测量6次，究竟应该分别连续测量，还是做一针标样做一针盲样？这两种测试方法有多大差异，分别会引入哪些不确定度分量？

外标法定量公式如何推导？目的肽含量等于待测峰面积/对照品峰面积*对照品进样体积/待测进样体积*待测样品体积*对照品浓度； 求助大佬们

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]（HPLC）中外标法是一种常用的定量分析方法，其基本概念是通过测量已知浓度的标样（外标）和未知浓度的样品的色谱峰面积或峰高，从而计算出样品中目标物质的浓度。一般分为外标单点法和外标曲线法，现在对不同国家的外标法进行对比。 [size=18px][b][color=#595959]01.中国药典中的外标法（2025版的公示稿） [/color][/b][/size][b][size=16px][color=#595959]1）外标法的一般步骤：[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]（可以理解为外标法） [/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.按照各品种项下的规定，精确称取或量取对照品和供试品，配制成溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.分别精确量取对照品溶液和供试品溶液的一定体积，进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.记录色谱图，并测量待测物质的峰面积（或峰高）； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.使用公式 C[sub]X[/sub]=C[sub]R[/sub]×A[sub]X[/sub]/A[sub]R[/sub]计算含量，其中 C[sub]X[/sub]是供试品中待测物质的浓度，C[sub]R[/sub]是对照品的浓度，A[sub]X[/sub]是供试品溶液中待测物质的峰面积（或峰高），A[sub]R[/sub]是对照品溶液中待测物质的峰面积（或峰高）。 [/color][/size][b][size=16px][color=#595959]2)[/color][/size][size=16px][color=#595959]对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系，可以采用[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]外标标准曲线法[/color][/size][size=16px][color=#595959]进行含量测定。[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.精确称取适量的对照品，或从对照品储备液中精确量取，配制成不同浓度的系列溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.精确量取这些系列溶液，进行色谱分析，记录色谱图，并测量峰响应； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.利用峰响应（或经转换）对浓度绘制标准曲线，并通过最小二乘法计算出回归曲线方程； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.在相同的色谱条件下，精确量取供试品溶液，进行色谱分析，记录色谱图，并测量待测成分的峰响应； e[/color][/size][size=16px][color=#595959].根据待测成分的峰响应（或经转换）和回归曲线方程，确定供试品溶液中待测成分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]简单理解就是做一条标准曲线，得出标准曲线方程，再将待测品的峰相应代入方程进行计算，得出样品浓度。 [/color][/size][size=16px][color=#ff4c41][b][color=#595959]02.欧洲药典中的外标法 [/color][/b][/color][/size][color=#ff4c41][b][size=16px][color=#595959]1）[b]多点校准（使用校准函数）： [/b][/color][/size][/b][/color][size=16px][color=#595959]a.准备一系列含有不同梯度浓度的对照品溶液，这些浓度应该在已经证明可以得到线性响应的范围内； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.取固定体积的这些对照品溶液进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到峰面积或峰高，并以此绘制校正曲线，横坐标是对照品的量，纵坐标是峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归得到校准函数； [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.按照各论中规定的程序准备待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的操作条件下进行色谱分析； [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.测量待测组分的峰面积或峰高，并根据校准函数读取或计算组分的含量； [/color][/size][size=16px][color=#595959]2[b]）单点校准： [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中，通常选择一个校准曲线线性范围内的对照品溶液，以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析，通过比较得到的响应来定量分析组分的含量； [/color][/size][color=#595959]c.在这种方法中，所有操作步骤，如进样程序，都必须在恒定条件下进行 [img=,690,801]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061421193322_2231_3203140_3.jpg!w690x801.jpg[/img] 图1.欧洲药典原文描述[b][color=#595959]03.美国药典中的外标法 [/color][/b][size=16px][color=#595959][b]1）校准函数法（多点校准）： [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.制备一系列含有不同浓度的对照品标准溶液，这些浓度应在已知能够产生线性响应的范围内； b[/color][/size][size=16px][color=#595959].取固定体积的这些标准溶液进行色谱分析，并注射到色谱系统中； [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到的峰面积或峰高，绘制校准曲线，横坐标是对照品的量，纵坐标是峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归方法得到校准函数； [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.根据各论中规定的程序制备待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的色谱条件下分析样品，测量待测组分的峰面积或峰高； [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.通过校准函数计算出样品中待测组分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#595959][b]2）单点校准法：[/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中，选择一个浓度在线性范围内的标准溶液，以及一个浓度接近该标准溶液的待测样品溶液； [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析，通过比较得到的响应来定量分析组分的含量； [/color][/size][color=#595959]c.这种方法中，所有操作步骤，包括进样程序，都必须在恒定条件下进行，以确保分析结果的一致性 [img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061424187996_390_3203140_3.jpg!w690x214.jpg[/img] 图2.美国药典原文描述 [color=#595959][b]总结一下：[/b][/color][size=16px]1）中国药典提供了外标法的一般步骤和标准曲线法的详细描述，但没有明确描述单点校准法。 [/size][size=16px]2）欧洲药典和美国药典都详细描述了多点校准和单点校准的方法，并且强调了所有操作步骤需要在恒定条件下进行。（这两家基本是一 致的描述） [/size][size=16px]3）三种药典都强调了在色谱分析中保持操作条件的一致性，以确保分析结果的准确性和重现性 [img=,690,249]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061426098030_8014_3203140_3.jpg!w690x249.jpg[/img] [/size][/color][/color]

[color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]用外标法定量分析，做标准曲线用的乙醇配溶液，实测时是乙酸做溶剂的溶液，这样结果影响大吗[/color]

[color=#444444]最近在做瘦肉精及降糖中药中化学添加成分的测定，使用液相-离子阱质谱来分离测定，可是发现一般国标及文献上都用的是氘代内标来定量，经费不足啊！那些内标都好贵啊！单纯用外标法来定量的话行不？有没有什么好的办法？另外有没有虫友用过天津光复的色谱纯试剂，用国产的色谱纯试剂做流动相行不行？[/color]

气相色谱外标法定量，改变分析条件，进样量不改变，会影响标准曲线和定量么？

采用外标法定量，空白未检出待测物，但标准曲线的截距比较大，造成色谱图上有峰，但计算时结果却为负值，请高手们帮分析分析原因，谢谢！

请问许多文献上提出核磁内标法（绝对测量法）定量分析时不需引进任何校正因子，不需制作标准曲线，但高效液相色谱为何需制作标准曲线？高效液相色谱和核磁内标法定量的原理差不多呀？[em09]

硼砂做液相色谱，外标定量，峰面积相差不大，

做液相色谱正相外标的时候，如果样品峰面积和稀释100倍后的对照液的峰面积不成100：1的时候该怎么办？

请问各位专家：液相色谱外标法测定含量（80%左右）时一般允许的误差是多少呢？2%以内可以吗？

现在有一样品，里面有硝酸，硫酸，有机物和盐。现在测定里面的有机物含量，想用外标法，称取一定量的样品m g，先除去里面的酸，水洗后，用甲苯萃取有机物含量。稀释到相应的倍数，这时就有了样品浓度，可以直接外标法定量。但如果酸溶于甲苯，会影响有机物的定量吗？

请问使用外标法定量过程中如果走标品的分流比与走样品时的分流比不一样，这样还能用该标品的结果定量吗？谢谢

用外标法定量时，ＲＥＰＯＲＴ里应怎么设置啊？列如，我秤的是１００ＭＧ样品，稀释到５０ＭＬ．ＡＭＯＵＮＴ里输入１００，Multipliter, dilution　是什么意思啊，应填多少啊？谢谢拉　还有下面的５％是啥意思啊？？？

有一个固体样品，杂质是甲苯，很容易挥发，主含量用外标法定量，称量完毕后，甲苯挥发会不会对主含量的定量有影响。

各位好，我刚学习液相，不是很明白在做液相时内标法和外标法，哪位能详细解释下啊。谢谢~~~

液相色谱定量大家一般用外标方法么，还是什么别的方法？

使用液相色谱定量分析时候采用外标法分析,请问按国家标准的话，配制标准溶液和试样溶液各几份？目前我都是配一个标准溶液 和2份 试样溶液(标识：试样A+试样B)分析的，请问这可行吗？进样顺序如下：进数针标样平行后+ 2针试样A + 2针试样B + 1针标样 请问下同行了兄弟姐妹，这样做法可行否？还有算结果时我是取最后1针标样和数针标样中的一针加和平均来算

各位兄弟姐妹，大家好。实验中遇到不顺，真诚的请教大家。我做的是苯酚羟基化反应，产物中有苯酚，苯二酚（邻，对），苯醌，焦油，用安捷伦1100液相色谱分析，外标法计算选择性和转化率。但一直以来，计算出的结果老是差强人意。偶尔算出一个好的结果，但是一重复又不行了，有时候重复做几次都不一样，很是郁闷。最近又老算出来选择性超过100%。开始怀疑稀释误差的问题（样品是稀释以后去测的)，但现在操作的时候非常小心了，怀疑标准曲线的问题，但是重新做了好几条了。但结果就是很奇怪，自己想了想：1.因为液相色谱仪是公用的，所以特意买了专用的色谱柱。但经常测的时候发现柱压不一样，是不是因为这个影响了峰面积，进而影响了结果？柱压的影响这么大么？2.是不是外标法就不准确？该用单点校正法？之前觉得每次测样前都配一个标样有点麻烦，所以没用。3.还是别的什么原因？我用的柱子是ZORBAX SB-C18, 用的甲醇：水=3：7，每个峰都分的很开。取样后离心去掉催化剂，再定量稀释然后去测的。因为分析的问题有时候做实验都怕是白做，很着急，希望好心人和懂的高手给予指点，不胜感激，谢谢了，祝你们学业事业有成。

想按外标法定量，看了一下Agilent 6890 化学工作站操作培训教材中，外标法定量时只要做二级校正表，一般校正曲线不是要做5、6个点吗？

本期视频介绍一下关于外标法定量的基础知识外标法是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中应用最多的定量方法具体方法是进样不同浓度的标准品测定标准品的峰高或峰面积之后用最小二乘法或设定程序计算浓度与峰高或峰面积的校正曲线的相关系数rr愈接近1精确度愈高被测组分的峰高或峰面积只要落在这个校正曲线范围内就可以精确地计算出被测组分的浓度[size=10px][color=#ffffff]#青岛睿谱分析仪器有限公司#WLK-8抑制器#RPIC2017[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]#[/color][/size]