液相色谱中增加进样量

本人在做方法学时，需要检测对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯，色谱条件中，进样量是1ul，谱图中所要峰面积较小，想通过增加进样量，改2ul进样，结果对甲苯磺酸甲酯峰面积反而降低了，但乙酯、异丙酯峰面积是很正常的，在增大，求大神指导（分流比为5.0）当我把分流比从5.0调到3.0时，三个峰面积都在增大，但对甲苯磺酸甲酯峰面积增加的幅度相对于另外两个溶剂来说很小。这是为啥呢，谢谢大家了

听别人介绍 原子荧光是可以控制进样体积的 做标准曲线时 就是利用这点 用低浓度不同量的标准溶液来做曲线 那么是不是浓度很低的样品溶液也可以通过增加进样量来测? 荧光的强度应该是跟进样溶液中含有多少量的待测物有关而不是所谓的浓度吧 ? 为什么说测汞时溶液中酸过多 而产生氢气过多会稀释汞的浓度从而影响检测?难道仪器没把吸进去的汞都处理掉而只是处理了其中一部分体积的?

请问论坛大牛们 何为气相色谱灵敏度 ?如何理解增加进样量能够提高气相色谱灵敏度?

制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中，组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中，酶的分离是微克级；在植化和合成化学领域中，为了鉴别未知成份并进行结构测定，需要得到一至若干毫克的纯品；在药品和医药学测试中，需要克级的标准品和对照品；在当今的工业级提纯中，制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定，包括：生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品（分析标准）毒物学分析所需组份：高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产，活性成份，药物 制备方法的发展和扩大规模的计算　　在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别就是超量进样。其结果，超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线　　分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 　 在分析液相中，最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。　 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中，这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少，那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样　　大样品量的纯化有两种可行的方法：分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样，暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法，在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。　在浓缩法中，样品的浓度会提高，但进样体积保持不变。容量因子k’降低，同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 　　如果样品组份的溶解性很差，浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中，这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素，所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 　 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 　 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 　 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 　 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 　 需要小颗粒填料 方法的放大　浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的时候，优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 　　因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的，选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量，因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的　　判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数：产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的，因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率，但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品，但是产量和收率却是很低的。　 在色谱图2中峰有很好的分离，因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量，但是生产效率却很低。　 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开，这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。　 在实际应用中，每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱柱压会随着时间缓慢增大，一些顽固性的物质在清洗柱子时无法冲洗下来，这也就导致柱子的寿命减短，柱压大了超过你压力的上限时还想再用用，只能将仪器的的压力上限值调大一下，实在不行得考虑换色谱柱了!

我们知道液相色谱可以通过六通阀和四元梯度泵减少死体积，那么我们把柱放大，（大概2l的柱子）进液量增加，（进液体积100l左右，淋洗也要10l，）这些方法也可以吗？或者说能保证两种进液不混合吗？

玉米赤霉醇：盲目追求增重的危害· 什么是玉米赤霉醇　玉米赤霉醇又名“右环十四酮酚”，商品名字“畜大壮”，是玉米赤霉菌在生长过程中产生的次生代谢产物玉米赤霉烯酮的还原产物，属于雷索酸内酯类非甾体类同化激素。它是一种皮埋增重剂。· 食品中为什么会残留玉米赤霉醇玉米赤霉醇能直接或间接作用于脑下垂体和胰脏，提高体内生长激素和胰岛素水平，促进动物机体蛋白质的合成，提高饲料利用率，从而产生促增重作用。由于玉米赤霉醇作为牛羊增重剂效果好，经济回报高，部分违法者在畜禽养殖过程中使用玉米赤霉醇，导致玉米赤霉醇可能会残留在各种食用组织（如牛羊肉、动物肝脏、肾脏和血液等）中。· 玉米赤霉醇有哪些危害　　玉米赤霉醇及其代谢产物具有雌激素类物质的生物活性，对促性腺激素结合受体、体外肝脏激素结合受体均有抑制作用。雌激素类物质的残留会引起人体性激素机能紊乱及影响第二性征的正常发育，在外部条件诱导下，可能致癌。玉米赤霉醇排出动物体外后，还可经饮水和食物造成二次污染及环境污染。· 　玉米赤霉醇的检测方法　　目前，玉米赤霉醇残留量的主要检测标准是推荐性国家标准GB/T 21982-2008《动物源食品中玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和赤霉烯酮残留量检测方法，液相色谱-质谱/质谱法》，另外还有3个是农业部公告方法：农业部1025号公告-3-2008《动物性食品中玉米赤霉醇残留检测酶联免疫吸附法和气相色谱-质谱法》、农业部1025号公告-19-2008《动物源性食品中玉米赤霉醇类 药物残留检测 液相色谱-串联质谱法》和农业部1077号公告-6-2008《水产品中玉米赤霉醇类残留量的测定液相色谱-串联质谱法》。南京科捷高效液相色谱：LC600高效液相色谱仪(梯度配置) P600宝石恒流泵 2台UV600紫外检测器 1台7725i六通进样阀 1只进口C18柱 150x4.6 5u 1根WS600色谱工作站 1套主要特点:1 智能化---状态智能监测系统，人性化更强 2 自动化---自动控制及反馈功能，操作更便捷 3 网络化---多台仪器网络接口链接，平台更先进 4 高精度，高稳定性----全数字化信号系统有效的提高了仪器精度； 各部件长寿命的设计标准以及低能耗的运行有效地保证了仪器的稳定性

[align=center][font='calibri'][size=13px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析中[/size][/font][font='calibri'][size=13px]进样量对[/size][/font][font='calibri'][size=13px]测定结果的影响[/size][/font][/align][align=center][font='calibri'][size=13px]通标小菜[/size][/font][font='calibri'][size=13px]鸟[/size][/font][/align][font='calibri'][size=13px]在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析中，样品[/size][/font][font='calibri'][size=13px]进样量的[/size][/font][font='calibri'][size=13px]选择直接关系到我们色谱出峰的好坏，一旦[/size][/font][font='calibri'][size=13px]进样量过高[/size][/font][font='calibri'][size=13px]，[/size][/font][font='calibri'][size=13px]出峰就[/size][/font][font='calibri'][size=13px]会异常，进而会导致目标物组分无法准确定量和定性分析。正常[/size][/font][font='calibri'][size=13px]的出峰色谱图[/size][/font][font='calibri'][size=13px]是一种对称的，峰宽合适，峰顶部尖锐的符合正态分布的图形，如下所示：[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/07/202307011749508632_3015_3141805_3.jpeg[/img][/align][font='calibri'][size=13px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析中[/size][/font][font='calibri'][size=13px]进样量对[/size][/font][font='calibri'][size=13px]色谱出峰的影响主要分为以下两类：[/size][/font][font='calibri'][size=13px]1.进样体积超载[/size][/font][font='calibri'][size=13px]在日常分析样品过程中，对于一个未知浓度的样品，我们往往无法准确估计其浓度大小，因而为了保险起见，都会进行大体积进样，确保其在色谱上有响应，能够正常出峰。然后对于浓度较小的试样来说，大体积进样对出峰影响不大，但是对于浓度较高的样品，仅仅只是进样10ul，甚至是5ul，色谱出峰就会异常，如下图所示：[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/07/202307011749511182_2329_3141805_3.jpeg[/img][/align][font='calibri'][size=13px]我们可以从图中清楚的看到色谱峰的峰宽正常，峰高也正常，但在峰顶[/size][/font][font='calibri'][size=13px]点除处会[/size][/font][font='calibri'][size=13px]出现一个平台，我们常常将其称之为“平头峰”。[/size][/font][font='calibri'][size=13px]其实这是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url][/size][/font][font='calibri'][size=13px]进样量过大[/size][/font][font='calibri'][size=13px]导致信号过大，信号超过记录仪的最大测量值，不再上升而出现平头峰。遇到这种情况我们应该从以下几个方面来解决：[/size][/font][font='calibri'][size=13px]a.减少进样体积，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]不像[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]可以通过调整分流比来[/size][/font][font='calibri'][size=13px]减小进[/size][/font][font='calibri'][size=13px]样量，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]进[/size][/font][font='calibri'][size=13px]样通过[/size][/font][font='calibri'][size=13px]定量环进样，因而可以在软件中设置小的进样体积，比如设置1ul、2ul的进样体积；[/size][/font][font='calibri'][size=13px]b.适当调节检测器信号衰减，改变记录仪量程；[/size][/font][font='calibri'][size=13px]c. 增大色谱仪上衰减倍数，减小灵敏度；[/size][/font][font='calibri'][size=13px]2.试样质量超载[/size][/font][font='calibri'][size=13px]试样质量超载也是过载的一种，尽快我们选择的进样体积很小，但也有可能因为试样中目标物组分的质量太高或者说浓度太高，同样也会造成柱过载，导致[/size][/font][font='calibri'][size=13px]样品峰展变宽[/size][/font][font='calibri'][size=13px]，峰型改变，保留时间漂移。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/07/202307011749510566_4189_3141805_3.jpeg[/img][/align][font='calibri'][size=13px]这种情况下的色谱出[/size][/font][font='calibri'][size=13px]峰一般[/size][/font][font='calibri'][size=13px]为前倾峰，随着样品浓度的增加，峰会前倾的越来越严重，直至变成一个类似于[/size][/font][font='calibri'][size=13px]直角三角形得峰型[/size][/font][font='calibri'][size=13px]。[/size][/font][font='calibri'][size=13px]以上两种[/size][/font][font='calibri'][size=13px]出峰情况[/size][/font][font='calibri'][size=13px]都是不正常的出峰（鉴定杂质故意使其过载除外），如果在实际分析中遇到这两种情况，我们只需要对样品进行稀释减小浓度或者[/size][/font][font='calibri'][size=13px]减小进[/size][/font][font='calibri'][size=13px]样体积就能避免类似情况的发生。[/size][/font][align=center][font='calibri'][size=13px]　[/size][/font][/align]

[b]液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节[/b]　高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。1 　样品预处理方法样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤 ②萃取 ③衍生化(柱前衍生) ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下:

我这里有两个皂苷化合物，极性类似，结构上差别只是多连了两个葡萄糖，我想在液相色谱上增加两个物质的保留时间差，但不知道怎么调节流动相比例包括等度与梯度，之前试过不同的比例，时间差总是2min左右，各位大神有什么建议，我用的流动相识甲醇与0.1%的甲酸

我使用安捷伦1260型液相色谱仪测定大豆维生素E含量，溶剂为80%乙醇，流动相为90%乙腈和10%甲醇。现在出现进样后压力增加30bar左右，是什么原因有人知道吗？我该怎么解决。

高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析。目前高效液相色谱已成为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可少的工具之一。虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。1 　样品预处理方法样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤 ②萃取 ③衍生化(柱前衍生) ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下:111 　水溶性样品(1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂解后进样。(2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。(3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接用反相色谱法分析。112 　脂溶性组分萃取方法:有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。2 　分析中的污染一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因素。211 　环境污染仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污染,影响检测结果,这种污染很难校正。因此,仪器室与其他实验室应隔离,保持清洁,仪器室内应安装空调,注意防潮、防腐、防震、空[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]对湿度应小于70 %为宜。212 　容器实验室常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类等,在进行分析时,应按照待则样品的要求来选则器皿,不管使用哪种器皿,容器的洗条清洁都是很重要的,也是取得好的检测结果的基本保证。213 　试剂在液相色谱分析中,所选用的试剂必须是色谱纯、优级纯或分析纯,如果用含量有杂质的试剂,则会出现杂峰而影响测定结果。3 　标准溶液的配置在配置标准溶液时,先要配置现定浓度的内标溶液,在标准溶液和样品溶液中最好使用同一批次配制的内标溶液以减少误差。(1) 配制标准溶液的物质应当是色谱纯的、性质稳定。(2) 常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保存。(3) 在配制维生素类标准品时,要放置在棕色容量瓶中或避光放置以免分解。4 　样品预处理过程中的主要故障与解决办法(1) 色谱图中出现无关的峰,原因有可能是样品过滤器带来污染,解决方法如下:①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验 ②改变过滤器类型 ③采用交替清洗技术。(2) 一些或全部化合物的峰比预期的小,尤其是低浓度的样品,原因可能是样品过滤器表面吸附下降,解决方法如下:①改变过滤器类型 ②严格按相同条件处理所用样品 ③采用交替清洗技术。(3) 回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解决方法如下:①增加萃取时间,使用热溶剂 ②修改清洗方法。(4) 色谱峰变宽,柱寿命缩短,原因可能是样品带来的干扰与污染,应改进清洗方法。(5) 精度差,原因可能是回收不完全,解决方法如下:①改进或替换衍生化、分离、萃取或其他条件 ②用自动化处理装置提高精度。总之,对分析仪器来说,避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节,切忌盲目操作,对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞,保证绝缘,并减少各种系统误差要注意以上要点,但还要注意日常的仪器保养,色谱柱子的维护,仪器室保持清洁,这样才能使液相色谱处于最佳工作状态,在分析中发挥其重要的作用。

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。尚普咨询行业分析师指出：2014年1-2月，全球液相色谱仪行业销售总额超过6.6亿美元，同比增长了7.2%。2013年，全球液相色谱仪行业销售总额达到了36.4亿美元，同比增长了8.3%。2011-2014年全球液相色谱仪行业销售总额及增长情况液相色谱仪是目前世界上发展速度最快的分析仪器之一。高效液相色谱法(hplc)自问世以来在分析化学各个领域得到了日趋广泛的应用，成为分析化学中最有效的分离分析手段之一。最近几年，全世界每年发表的有关液相色谱的论文数量已超过气相色谱，而且液相色谱的应用领域也大大超过气相色谱，85%的有机化合物均可采用液相色谱进行分析，而气相色谱能分析的有机化合物约占15%~20%。发展趋势主要表现是：基于微电子技术和计算机技术的应用实现高效液相色谱仪的自动化，通过计算机控制器和数字模型进行数据采集、运算、统计、处理，提高高效液相色谱仪数据处理能力，数字图像处理系统实现了高效液相色谱仪数字图像处理功能的发展;分析仪器的联用技术向测试速度超高速化、分析试样超微量化、分析仪器超小型化的方向发展。2014年1-2月，我国高效液相色谱仪行业市场规模超过2千台，同比增长了24.7%。2013年，我国高效液相色谱仪行业市场规模达到了万余台，同比增长了25.5%。高效液相色谱法是一种国际上60年代末才发展起来的具有很高分离效率的仪器分析方法，直到80年代才把这项技术引进我国。色谱仪可对物质进行检测分析，应用范围非常广泛，它被广泛应用于环保，石油化工，有机化学，生物工程，染料，油漆，日用化工，医疗卫生，医药，化肥，食品，饮料，酒类，司法公安，体育，国防科研，大专院校诸多领域和单位，像日本已普及到中学，可见其应用的广泛。我国1995年制定的药典，明确规定许多药品(中，草，西药)都需要液相色谱仪检测，全国大大小小的制药厂几千家，农药也要液相色谱仪检测，我国是一个农业大国，农药厂也有几千家，其需要量是可观的。近些年来较发达国家液相色谱仪需要量大大超过气相色谱仪，从我国发展的趋势来看，也会如此。我国高效液相色谱仪行业的发展应该重点围绕科研、生产、人类环境三大领域展开，以基础工业和支柱产业的产品质量控制及环保、防病治病等领域需要的高效液相色谱仪和技术含量高的中档产品为主，重点开发开发高灵敏度检测器、样品预处理装置和高效快速专用分析仪器，生命科学分离分析仪器，工业在线分析仪器，拥有自主知识产权的及微型化分析仪器和专用软件等。《2014-2018年中国高效液相色谱仪行业预测及投资策略研究报告》显示，国内用户要增强对国产仪器的信心，以实际行动支持国产仪器的发展，同时国产仪器行业也应该借助我国军工的技术优势，在加工工艺、装配等方面寻求突破，早日打破国外产品在高档、精密分析仪器市场的垄断局面。（来源：尚普咨询）

[color=#444444]做苯酚氧化羰基化反应，采用外标曲线法对碳酸二苯酷和苯酚的含量进行定量分析，结果很奇怪，随着反应时间增加转化率增大，但反应到9h转化率突然降低，降低了近一半，重复制备分析还是同样的结果。我想是不是分析方法出了问题，苯酚氧化羰基化合成碳酸二苯酯一般用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]，可是DPC沸点高，所以改用液相分析，可是出现了这个情况，有哪位能解答下，不胜感激！[/color]

[color=#444444]做苯酚氧化羰基化反应，采用外标曲线法对碳酸二苯酷和苯酚的含量进行定量分析，结果很奇怪，随着反应时间增加转化率增大，但反应到9h转化率突然降低，降低了近一半，重复制备分析还是同样的结果。我想是不是分析方法出了问题，苯酚氧化羰基化合成碳酸二苯酯一般用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]，可是DPC沸点高，所以改用液相分析，可是出现了这个情况，有哪位能解答下，不胜感激！[/color]

下式为分离度计算公式http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/R.JPGN：柱效(Efficiency)反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。在其他条件恒定的情况下，塔板数增加一倍，分离度仅提高40%。操作中，可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度：其一，使用长柱或双柱串联，但也会使分离时间大大延长；其二，使用细粒径填料的色谱柱，但这需要耐更高压力的液相色谱系统。相比之下后者更为可取。α：选择性(selectivity)是指色谱柱-流动相体系分离两个化合物的能力。选择性主要与固定相、流动相组成以及柱温等因素有关，与保留值也密切相关，其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反相模式为例，反相柱(包括C18、C8、PH等)是以分配作用对化合物进行保留的，不同化合物的分离是基于它们在键合相与流动相中分配系数的差异，如果两种化合物的水溶性、在烷烃-水体系的分配系数等方面存在明显差异，那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离；PH柱对具有苯环的化合物具有特殊保留。正相模式下，硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用，对化合物的基团具有选择性，常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面，降低流动相的洗脱强度通常可以增大分离度；而有机溶剂类型也会影响分离，比如反相条件下，乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异，这种差异需要在实践中摸索，但无论如何，多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能。k：随着容量因子k的增大，分离度也随之增加，这种影响在k值较低时非常明显，当k值大于10时，k值增加对分离度的影响就不再显著，这就告诫无原则地提高k值以增大分离度是没有意义的。增加键合相密度能够提高k值；另外改变键合基团类型也能改变k值，比如在反相色谱中，随着键合相碳链长度的增加，k值逐渐增大。

[align=center][b]液相色谱为什么要使用保护柱[/b][/align]一般情况下，大多数色谱柱峰形变差的原因都是色谱柱收到了污染，而保护柱，顾名思义就是保护色谱柱的，使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命，使其可以大于一万次进样，虽然保护柱的使用会增大柱压，延长分析时间，但是保护柱应当被认为是延长色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲。保护柱的填料应该与分析色谱柱保持一致。良好的、优质的保护柱还可以起到改善分析色谱柱的分离效率。我们实验室进行了尝试，所以购买了液相色谱保护柱！

我们用的是安捷伦1100的高效液相色谱仪，在做一个软膏剂的时候，标准规定的浓度进样10μl，峰形有前延峰，把浓度稀释一半，进样10μl，峰的对称性在1.0左右，如果再把浓度稀释一半，进样20μl的话，峰形又不对称了。大家分析一下是什么原因？液相色谱的进样量与峰形之间的关系怎样？（药品名字是“复方地塞米松乳膏”，内标法测定地塞米松含量，内标物是甲睾酮）

[color=#444444]请教各位一个液相色谱的问题！刚开始做液相，用RP—HPLC，流动相为甲醇和水，想让出峰时间变早，是增加甲醇的量还是增加水的量？为什么？另外，色谱柱保留的分子机理是什么？[/color]

[b]原则：[/b] 对于柱长为50~250 mm，内径为4~5 mm进行的分离，样品中单个化合物的量应该≤50 μg，样品的进样体积也应≤25 μl（当把流动相用作进样的溶剂）。 对于内径比较小的柱子，样品大小应该减少至与柱子直径的平方成正比。如果样品中包含可电离的分子，样品量＞1 μg就会出现柱子超载的现象。 [b]样品进样量对HPLC分离效果影响基于以下原因：[/b] 为了避免由于样品进样量太大，而在分离中出现不想要的变化； 为了增加痕量分析中检测器的敏感度需要使用尽可能大的样品进样量； 为了在制备 HPLC 中最大化回收净化后的产品量。 由于样品的进样体积或进样量太大而造成的分离度和（或）保留时间的变化，分别称为[b]体积超载[/b]和[b]质量超载[/b]。 [b]体积超载：[/b]样品体积对分离效果的影响 假设样品中的分子浓度保持不变，样品体积对峰的尺寸和形状的影响如下图所示，随着样品的进样体积按照进样顺序1~4不断增加，色谱峰开始逐渐加宽，然后形成一个平扁的顶部。 [img=,690,438]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409051642597593_5016_3203140_3.jpg!w690x438.jpg[/img] 几种不同的色谱柱构造，它们的最大样品进样体积如下： (150mm x 4.6mm，3μm 颗粒）Vs≤80 μl (100mm x 4.6mm，3μm 颗粒）Vs≤50 μl (30mm x 4.6mm，3μm 颗粒）Vs≤30 μl (30mm x 2.1mm，1.5μm 颗粒）Vs≤4 μl 如果色谱图中较早洗脱出来的峰的分离度并不是关键，那么就可以进样较大体积的样品。 样品可能溶解在某种溶剂的溶液中而不是在流动相里。当样品溶剂比流动相要弱时，可以进样体积较大的样品而不会对峰宽和分离度造成负面影响。相反，进样溶解在比流动相强的溶剂里的样品，往往会使得色谱图中较早洗脱出来的色谱峰发生谱带加宽和（或）扭曲变形。用比流动相强的溶剂来配备样品是一种常见的错误， 如果有可能应该尽量避免。如果不方便更换样品溶剂，那么虽然样品溶解在较强的溶剂里， 但是只要进样体积够小，色谱图就不会受到影响（可以忍受）。 以1:1的比例用较弱的A溶剂（比如水）稀释样品，然后以2 倍的体积进样。这样做能有效地减少样品溶剂带来的问题（尤其是当一个样品溶剂＞50%B) ，而同时也能保持进样的样品量不变。较大的进样体积和较强的样品溶剂可以在梯度洗脱法里使用，因为在梯度洗脱开始的时候样品会和较弱的流动相（较低的％B ）混合。如果有疑问，那么将进样体积减小为原来的一半以及增加为原来的2 倍，并且观察不同的进样体积对分离度的影响，接着再根据相应的情况作进一步调整。 [b]质量超载：[/b]样品重量对分离效果的影响 即便样品的进样体积较小，溶解样品的质量也会有可能导致色谱柱超载，造成样品峰的加宽和变形。这种情况的发生是因为柱子保留样品分子的容量是有限的；也就是说靠近峰带的固定相中样品饱和。下图显示的是一个由于柱子超载而造成的谱带加宽的例子。样品进样量的大小顺序为1a1b1c1d234（最大进样量）。 [img=,690,428]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409051646063485_3784_3203140_3.jpg!w690x428.jpg[/img] 只要样品中各个成分的重量不要过多（ 通常对于4.6 mm 内径的柱子进样量50 μg ，内径小的柱子，进样量也相应要减少），每个峰带在柱子内的移动就不会受到样品中其他峰带的影响。因此，样品中单个化合物的重量，往往决定了色谱柱是否会超载，峰形是否会发生改变，而与样品总重量无关。其中一个化合物引起色谱柱的超载，也不会影响到样品中其他色谱峰的分离（只要它们都是基线分离的）。只有当单个化合物的进样量太大，才会发生色谱柱超载的现象并同时出现色谱峰的拖尾（ 比如对于内径为4.6 mm 的柱子进样量＞50 μg)。[img=,600,282]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409051649465969_829_3203140_3.jpg!w600x282.jpg[/img] [b]避免进样过多所引起的问题[/b] 以常规的HPLC 分离实验执行样品分析的时候，针对同样的分离程序，最好能保证不同化合物的k、N和Rs值保持不变。这个要求简化了基于保留时间的定量分析和色谱峰的识别。要保持k、N和Rs的值不变，就必须保证样品的进样量足够小，以避免柱子超载，并且分离效果也就不会随着样品进样量大小而变化，通常需要样品量和体积都不超过一定的界限。样品体积一般在HPLC 实验里是保持不变的，主要担忧的是样品中的分析物浓度过高。再次，Wmax的值应该是指样品中各个化合物的重量， 而不是样品的总重量。举例说，如果样品中没有一个成分超过样品总量的10% ，那么与仅仅含有单个成分的样品相比，此样品的最大样品进样量就可以多10 倍。 [b]比预想的样品浓度要高[/b] 如果一个分析物在不同样品中的浓度不同，那么质量超载就可能会由于样品浓度过高而发生，造成分离度丢失，保留时间改变。分析物的浓度或重量对分离结果造成的这种影响，应该在最后的HPLC 程序中都要考虑到（在方法建立之后）；样品的最大进样浓度或者最大进样重量Wmax应该早早确定，这样就能避免因为样品超载引起的问题，包括检测器的超载，引起非线性的检查结果。超过这个浓度的样品就要再次稀释或者重新分析。 [b]痕量分析[/b] 在痕量分析中，最好能把峰高最大化，从而增加信噪比。通常被进样的痕量分析物的量都非常小，因此不会造成色谱柱超载的问题，但是样品中的其他成分却可能会引起色谱柱超载，可能会对分析物的分离效果造成潜在的负面影响。也就是说一个化合物的进样量如果过大，则可能会影响邻近的另一个色谱峰谱带的分离效果。 如果样品中包含过多干扰性的化合物，在展开HPLC分离实验前最好就是能把样品清洁一遍，除去干扰的化合物。在痕量分析中，进样最大可能的样品体积是有利的。当感兴趣的色谱峰和邻近的峰分离非常好并且也有足够的样品可以使用的话，增加样品的进样体积有助于一步增加峰高。如果溶解样品的溶剂远比流动相弱，那么我们就可以使用较大的进样体积，并且色谱峰的大小也能保持与进样体积成正比，而不会出现额外的谱带加宽的问题（这个方法尤其在梯度洗脱的时候会常用到）。这种增加检测器灵敏度的方法是以充足的样品量为前提的。

1、[color=#004aae]有奖调查-你使用过哪些品牌的色谱柱?(回复加分)2、[color=#7f007f]有奖调查--你使用液相仪器的年限?(回复加分)[/color][color=#000000] 3、[size=3]有奖调查--你实验室液相仪器的历史? (回复有奖)[/size] 如果你是销售人员，可能还有点用处，看看大家手上都有哪些仪器，哪些色谱柱，如果是操作人员，那作用可以说微乎其微，给你什么你就用什么吧，没得挑。但这类帖子的回复率却是远高于真正的技术类帖子，为什么呢，技术讨论的回复好的，我也会加分，所以不是积分吸引了大家，那我就不明白，难道是因为这个回复用不着消耗大家脑细胞的原故？那我可以给其它版的版主一个增加回复量的建议了，如分析化学版，可以有奖调查－你使用过的最久的一根滴定管，PH计；分光版的可能调查紫外分光光度计，反正所有实验室仪器都调查一遍，这个活动可以持续很久的，论坛一定红火。[/color][/color]

不同点：一、流动相不同：HPLC为液体流动相，GC为永久性气体作流动相（通常叫做载气）二、进样器不同：高效液相为平头进样针，气相色谱为尖头进样针三、色谱柱长不同：（1）气相色谱柱通常几米到几十米（气相色谱由于载气的相对分析量较低，分子间隙大，故粘度低，流动性好，组分在气相中流动速度快，因此可以增加柱长，以提高柱效）。（2）液相色谱柱通常为几十到几百毫米四、分析种类有差异：气相色谱分析的对象多为（不适绝对）：分子质量小于1000，低沸点，易挥发，热稳定性好的化合物。液相色谱：更适用于分析高沸点，难挥发，热稳定性差，分子质量较大（1000 - -2000）的液体化合物。五：样品柱前变化不同：气相色谱的样品在柱前必须变为气体（气化室汽化），而液相色谱的样品在柱前则无变化。六、所用检测器有差异：液相主要为：紫外检测器，荧光检测器、示差折光检测器.....气相色谱主要为：氢火焰离子化检测器（FID）,热导检测器（TCD）,电子捕获检测器（ECD）,火焰光度检测器（FPD）,氮磷检测器（NPD）.....相同点：基本原理相同。都是利用物质在流动相和固定相中的分配系数的差别，从而在两相间反复多次（1000-1000000次，甚至更多）的分配，使原来分配系数差别很小的各组分分离开来。

2012 年 4 月 19日，北京——安捷伦科技公司宣布推出 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案，可实现全二维方式以及中心切割方式的二维分离。该仪器对极为复杂的样品有出色的分离能力，例如生物药品、肽谱、植物提取物、食品基质、聚合物以及其他难以分离的混合物。其采用1290 Infinity二元泵及创新的二维液相色谱阀，配合专用的二维色谱软件，可在短短数分钟内完成二维液相色谱的配置和方法设置。通过组合两个正交的HPLC分离到一个单一的二维液相色谱分析中，色谱峰容量将成倍地增加，与常规的液相色谱相比，分离能力也随之大大增加。因此，对于需要最高分离能力的极其复杂样品而言，二维液相色谱无疑是理想的工具。1. 你了解过二维液相色谱吗？2. 你知道二维液相色谱和普通液相色谱的差异吗？3. 你心目中的二维液相色谱是怎么一回事？

色谱柱的维护 1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）2．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3．避免流动相组成及极性的剧烈变化4．流动相使用前必须经脱气和过滤处理5．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存大乙腈中 6．压力升高是需要更换预柱的信号 HPLC六通阀进样器的使用及保养 六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。工作原理：1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出； 2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。 虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。[em0805]

本人刚接触液相色谱，想要检测某饮料中某一物质的含量采用外标法，该物质的大体含量不清楚，看了几篇参考文献说外标法中浓度范围最好包括样品浓度，这该怎么做呢？难道扩大外标法中的浓度范围吗，这样好像比较麻烦又不见得准确啊？还有就是进样量应该怎么确定啊？

2020版药典高效液相色谱法中新增了多维液相色谱，各位不了解的小伙伴快来看看吧[b]一维液相色谱的劣势[/b]色谱作为复杂混合物的分离工具，对化合物的分离分析发挥了很大的作用。目前使用的大多数仪器为一维色谱，使用一根柱子，适合于含几十至几百个物质的样品分析。当样品更复杂时，例如有人分析鹿茸蛋白，得到上千个色谱峰，可是经质谱定性表明，平均每个峰又含有二个组分，就要用到多维色谱技术。[b]多维液相色谱的优势多维液相色谱[/b]又称为色谱/色谱联用技术，是采用匹配的接口将不同分离性能或特点的色谱连接起来，di一级色谱中未分离或需要分离富集的组分由接口转移到第二级色谱中，第二级色谱仍需进一步分离或分离富集的组分，也可以继续通过接口转移到第三级色谱中。理论上，可以通过接口将任意级色谱串联或并联起来，直至将混合物样品中所有的难分离、需富集的组分都分离或富集之。但实际上，一般只要选用两个合适的色谱联用就可以满足绝大多数难分离混合物样品的分离或富集要求。因此，一般的色谱/色谱联用都是二级，即二维色谱。[align=center][img]http://img71.chem17.com/9/20190925/637050010323097953487.png[/img][/align][align=center]图1、二维液相色谱示意图[/align][b]二维液相色谱分类[/b]在二维色谱的术语中，1D和2D分别指一维和二维；而1D和2D则分别代表di一维和第二维。[b]二维液相色谱[/b]可以分为差异显著的两种类型。若两种色谱的联用仅是通过接口将前一级色谱中某一些组分传递到后一级色谱中继续分离，这是[b]中心切割式二维色谱[/b](heart-cuttingmode two-dimensional chromatography)，一般用(LC-LC)表示。当两种色谱联用，接口将前一级色谱中的全部组分连续地传递到后一级色谱中进行分离，这种二维色谱称为[b]全二维色谱[/b](comprehensive two-dimensional chromatograghy)一般用LC×LC表示。LC×LC是将1D色谱柱的流出物连续转移至2D色谱柱。相比之下，LC-LC则是将1D流出物选择性地（部分地）转移至2D色谱柱中。此外，这两种类型下还有若干子类，包括选择性二维色谱(sLC×LC)和多中心切割2D-LC(mLC-LC)。LC-LC或LC×LC两种二维色谱可以是相同的分离模式和类型，也可以是不同的分离模式和类型。接口技术是实现二维色谱分离的关键之一，原则上，只要有匹配的接口，任何模式和类型的色谱都可以联用。和一维色谱一样，二维色谱也可以和质谱、红外和核磁共振等联用。[b]SCX/RP二维液相色谱用于珠蛋白酶解产物分析[/b][align=center][img]http://img69.chem17.com/9/20190925/637050011599571773521.png[/img][/align][align=center]图2、 SCX/RP高通量分析珠蛋白酶解产物[/align]🔻 di一维采用SCX强阳离子交换色谱柱，流动相A为5mM NaH2PO4+1%乙腈，B为A+1.0mol/L NH4Cl，流动相pH4.0。🔻 第二维采用两支相同的C18常规反相色谱柱，流动相A为含0.1%TFA的水溶液，B为含0.1%TFA的乙腈。样品进入阳离子交换色谱，由SCX流动相逐步增加盐浓度间断洗脱，通过接口的有效转移将SCX洗脱的产物导入第二维反相色谱中进一步分离。在选定实验条件下的二维分析结果，在离子交换色谱和反相色谱构成的二维液相色谱系统中，因离子交换色谱较高的柱容量通常作为di一维系统，而反相色谱与离子交换色谱流动相有较好的兼容性及较高的分辨率常作为第二维系统。由于SCX对样品的切割分离，二维分离的结果大大降低了样品分析的复杂性。同时由于二维分离机理的正交性，进一步拓宽了样品的分离空间，增强了系统的分离能力。在分析珠蛋白酶解产物中，di一维离子交换切割次数为19次，由图2可知第二维反相色谱峰容量为174，这种台阶式洗脱切割方法峰容量为di一维切割次数乘以第二维峰容量，因此SCX/RP二维液相色谱的峰容量可达到3306。

请大家谈谈液相色谱中样品溶液的浓度问题，已同事说可以看色谱图中的峰面积，差不多在7000000左右，还有就是响应值在500mV左右，他说的有道理吗？还是必须要做浓度线性关系呢？