液相质谱测抗生素含量

各位大神，单位新买的液相质谱，头为省钱让自己做抗生素残留检测http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif现有这样的疑问，文献中已有的离子对，碰撞能量等参数能直接用吗？还是必须要针对这个仪器重新做？如果要重新做的话，几类不同的抗生素（四环素类，喹诺酮类，大环内酯类等）能混到一起，用蠕动泵打进质谱分别扫吗？还是必须一种一种单独来？仪器型号：Thermo LTQ XL；离子阱质谱谢谢各位了！！

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=152834]液相色谱-串联质谱法检测牛乳中多肽类抗生素残留量[/url]摘 要选用牛奶为研究对象．建立了一种可同时测定多粘菌素B、粘杆菌素、杆菌肽和维吉尼霉素等4种多肽类抗生素残留量的液相色谱一串联质谱法(Lc—Ms／Ms)检测方法。样品经甲醇一0．1％甲酸体系提取，正己烷脱脂，固相萃取柱净化后，利用Lc—Ms／Ms进行定性和定量分析。结果表明，该方法4种多肽类抗生素检出限分剐为：多粘茵素B 25O g／kg，粘杆菌素25 g／kg，杆菌肽A 5O g／kg，维吉尼霉素2O g／kg。平均回收率分别为：多粘茵素B 92．16％—95．89％，粘杆菌素92．24％ 97．87％，杆菌肽94．54％—97．96％，维吉尼霉素 93．58％ 8．25％。变异系数为2-54^ ．55。

今天和皎然版主简单探讨了一下关于抗生素检测的问题，现在2010版药典将抗生素的检测方法由2005版的效价“升级”为“高效液相色谱法”，你认为此次“升级”使检测更合理？更安全么？欢迎大家前来讨论～　　　＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝[B]皎然版主的理解内容：[/B][color=#00008B]对于含量测定，从抗生素的治疗效果方面考虑，我个人还是比较倾向效价测定，效价测定更能反应抗生素的治疗效果；当然效价测定也存在着一定的不足，比如说菌种的选择和菌液的制备、接种杯的规则、培养皿的铺制、加样后的培养、接种环的测量（以往的是人工测定，现在多用仪器了）等，这些过程中的影响因素很多，需要很多的经验的试验人员操作……HPLC法具有操作简便，快速（相对于抑菌培养），影响因素少等优点，但是否能真正反应效价我不敢苟同，所以这个方法的改变我不能用“进步”二字[/color]。更多内容见： http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100128/2373825/

你们好，请教一下用液相色谱仪怎么来检测血液中氯霉素等抗生素的含量，包括样品的前处理过程！谢谢各位，拜托拉！

药典上一些抗生素，有有关物的HPLC测定方法，但其含量用抗生素效价法测定，请问：可以用检有关物的方法来测定此抗生素的含量么？

随着我国经济的快速发展，人们追求效益最大化，抗生素的使用越来越普遍，如用抗生素治疗奶牛的乳腺炎；畜禽养殖户在饲料中添加抗生素和激素，提高种畜的抗病能力和食欲；水产养殖用户为了让大闸蟹加快脱壳过程、长得肥大生猛，给蟹喂食大量抗生素和激素等。我国是抗生素生产和使用大国，据统计每年约有6000吨抗生素用于饲料添加剂，占全球抗生素饲料添加剂的50%。抗生素的大量滥用已经严重威胁到人们的身体健康，专家指出，经常食用含有抗生素的食品，即使是微量的，也能使人出现荨麻疹或造成过敏性休克。时常摄入含有抗生素的食品，可使某些菌株产生耐药性，从而带来预防与治疗某些人畜疾病的困难。如果长期食用抗生素残留的食物，可造成人体中一些非致病菌的死亡，使菌群平衡失调或引起核黄素缺乏症和紫癜性损伤。特别是氯霉素的滥用，极易损害人类骨髓的造血功能，并由此导致再生障碍性贫血的发生。两年前，四川资阳地区曾暴发猪链球菌疫情，微生物专家李明远教授认为，很可能是养殖业者长期在猪饲料里滥用抗生素导致的。常用抗生素包括β-内酰胺类、四环素类，氨基糖苷类，大环内酯类，磺胺类等，世界各国均对抗生素的使用量提出严格标准，欧盟的标准比日本和美国的标准更加严格，限量值更低，我国要想保障本国食品安全并出口产品到上述国家，就必须加强我国的自身的检测能力。一般来说，肉类（畜禽），鱼虾（水产），蛋类，奶类，饲料、蜂蜜等产品需要进行抗生素检测，常用方法包括：液相色谱或液相色谱与质谱联用，微生物抑制法和酶联免疫方法。色谱方法是一种理化检测方法,一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高，但检测程序复杂，费用较高，需购买色谱仪等检测设备，不适合小型检验室。微生物抑制法和酶联免疫方法属于筛选方法，操作简便、快速，消耗成本低，不需要购买大型仪器，但阳性结果需要其他方法进行确认。酶联免疫方法存在一定的假阳性，下面针对微生物方法进行详细介绍。

我用液相色谱测磺胺类抗生素和喹诺酮类抗生素（共五种物质），除了不到两分钟有两个溶剂峰，再也没有峰了，一直很平的直线。流动相是甲醇-水，还试过乙腈-水，均没有峰。求大神指导一下。

抗生素残留检测仪的工作原理主要基于特定的生物化学反应和检测技术，用于测定样品中的抗生素残留量。其核心原理可以分为几类：　　基于微生物抑制的原理：　　这类检测仪利用微孔板技术，将待测样品中的细菌与特定浓度的抗生素共培养。抗生素的存在会抑制细菌的生长，通过测量细菌生长抑制率，可以间接推算出样品中的抗生素浓度。　　基于免疫学的原理：　　有些检测仪采用抗原-抗体反应，即利用特异性抗体与样品中的抗生素结合。这种结合会引起物理或化学性质的改变，通过检测这种改变可以确定抗生素的存在和浓度。　　基于生物化学发光的原理：　　部分仪器利用荧光或化学发光技术，通过加入特定的荧光染料或发光试剂，使得抗生素与这些试剂发生反应并产生光信号。光信号的强度与抗生素浓度成正比，通过测量光信号的强度可以确定抗生素的含量。　　基于色谱或质谱的原理：　　高级的抗生素残留检测仪采用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)或质谱(MS)技术，通过分离和识别样品中的抗生素成分，可以精确地测定抗生素的种类和浓度。　　每种原理都有其特点和适用范围，使用者可以根据实际需要选择合适的抗生素残留检测仪。无论采用哪种原理，都需要严格遵循仪器的操作说明，以确保检测结果的准确性和可靠性。此外，由于抗生素种类繁多，不同的抗生素可能需要不同的检测方法和条件，因此在实际应用中，还需根据具体的检测对象和目的进行选择和调整。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291716256710_2000_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

[color=#444444]最近做的一个项目涉及到四环素这类抗生素的液相检测，但是之前没有做个这个药物的分析工作？有否有大神知道这类抗生素用什么检测器？进液相需要注意些什么？药典录入的检测方法可信么？（未标明流动相流速）[/color]

[color=#444444]本人在实验过程中，用高效液相色谱仪测定环丙沙星等抗生素，一直未能出峰，到底是哪个环节出错了[/color][color=#444444][color=#444444]流速0.8，磷酸三乙胺（0.05mol/l）（ph为③）：甲醇＝79：21[/color][color=#444444]检测波长275nm[/color][/color][color=#444444][color=#444444]只有溶剂峰[/color][/color]

万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁均属于糖肽类抗生素，对革兰氏阳性菌具有很强的抗菌作用，可用于治疗由严重耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林表皮葡萄球菌引起的感染。目前，糖肽类抗生素作为添加剂普遍用于家禽、猪、牛饲料和兽药中，对人类安全造成威胁。[align=center][img=,600,451]http://www.gdkjfw.com/images/image/32891528255363.jpg[/img][/align]来自河北省食品检验研究院和河北省食品安全重点实验室的范素芳，王丽明，李强等建立了基于快速前处理的牛乳中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的高效液相色谱-串联质谱测定方法。结果与分析1 实验条件优化及方法验证取适量牛乳样品，加入0.1%甲酸水溶液-乙腈溶液（85∶15，V/V），经涡旋混匀、超声提取、离心后，万古霉素和去甲万古霉素经阳离子交换柱净化、替考拉宁经C18固相萃取柱净化，采用HP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS仪测定。采用外标法定量，通过绘制标准曲线进行定量分析，万古霉素和去甲万古霉素的线性范围为10～100 μg/L，替考拉宁为20～100 μg/L。以目标化合物仪器响应信号与仪器噪声比（RS/N）约为3时的目标化合物添加量为方法的检出限（limit of detection，LOD），以RS/N约为10时的目标化合物添加量为方法的定量限（limit of quantitation，LOQ）。结果表明，本方法中万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的LOD分别为2、1、2 μg/kg，LOQ分别为4、2、4 μg/kg。分别作LOQ、5 倍LOQ和10 倍LOQ 3 个水平的添加回收率实验，结果表明，3 种分析物的方法回收率为77.3%～84.5%，相对标准偏差为4.7%～7.2%。2 基质效应评价万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的基质效应分别为80.2%、81.3%和91.5%，表明3种分析物均存在离子化抑制效应，且万古霉素和去甲万古霉素的ME相对比较严重。3 实际样品测定从当地市场购买的15 份牛乳样品中均未检测到万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁。上述结果表明，该方法可用于市售牛乳样品中糖肽类抗生素万古霉素、去甲万古霉素和替考拉宁的检测。本文来源于《乳业科学与技术》2018年41卷第2期文章《高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳中3 种糖肽类抗生素残留》，作者：范素芳，王丽明，李强，张冬生，孙文毅，张岩（河北省食品检验研究院，河北省食品安全重点实验室）。

带有抗生素的鸡还是不是一只好鸡？大家一听到抗生素都觉得这肯定不太好呀，因为养殖过程中使用抗生素是非常有必要的措施，动物跟人一样也会生病，如果抗拒使用抗生素药物，那生病快死的动物你敢食用吗？现在越来越多的鸡带有抗生素，甚至连他们的宝宝鸡蛋也带有一定的抗生素，有人会惊呼那这还能吃了吗？答案是只要抗生素使用的合理，没有超标的残留量，是可以放心的食用的，而且在一定程度上保证了动物健康成长，也保障了人们安全的食用。聚酯类抗生素在鸡的养殖过程中使用的挺广泛的，接下来我们来了解了解。 说起聚酯类抗生素一般人可能不太熟悉，但是兽医和养殖场人员应该对它比较了解，它是抗生素中较大的类群，其中的莫能菌素和盐霉素，比较广泛的在应用在兽药和畜牧业中，主要添加在动物饲料当中作为动物生长促进剂，和球虫病的治疗剂。但是在加工的过程过量的使用药物或加工方式不正确没有搅拌均匀，会使食入动物中毒死亡，加工人员在加工过程中没有采取保护措施，吸入过多的药物也会引起中毒。所以本次检测实验我们选用了高效液相色谱-柱后衍生法来检测一下我们在市场上盲选的鸡蛋中莫能菌素和盐霉素的残留量有没有超标。实验试剂：所用试剂均为色谱纯或分析纯，实验用水为超纯水。莫能菌素标准品（99.0%）盐霉素标准品（93.5%）香草醛（98.0%）甲醇冰乙酸浓硫酸（具有强腐蚀性，使用的时候要保护好自己哦！）实验仪器高效液相色谱仪配备二极管阵列检测器[img=,573,430]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907091227414016_7862_3763765_3.jpg!w690x517.jpg[/img]HX-2000型柱后衍生仪[img=,248,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907091228387327_5364_3763765_3.jpg!w690x943.jpg[/img]HX-01溶剂过滤器（带有真空泵）[img=,453,340]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907091230263807_5993_3763765_3.jpg!w690x517.jpg[/img]旋转真空浓缩仪超纯水器JJ-5型组织捣碎匀浆机[img=,358,330]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907091231199517_6478_3763765_3.png!w543x500.jpg[/img]色谱条件高效液相色谱仪检测波长520nm 色谱柱为C18柱温：40℃ 流动相: 甲醇/5%冰乙酸(体积比90∶10)，流速0.7mL/min ；柱后衍生反应器1:反应温度为环境温度, 反应管体积0.1mL 反应器2:反应温度为90℃,反应管体积1.4mL 衍生试剂1: 浓硫酸 / 甲醇液(体积比4∶96)；衍生试剂2: 香草醛 / 甲醇液；衍生试剂1和试剂2流速均为0.3mL/min 样品进样量20μL 。样品前处理： 莫能菌素标准储备溶液的配制: 准确称取一定量的莫能菌素标样, 用甲醇溶解并定容混匀, 其质量浓度为1mg/mL。临用前用甲醇/水(体积比90∶10 )稀释至工作浓度。 盐霉素标准储备溶液的配制使用前稀释于莫能菌素相同。其标准溶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量浓度也为1mg/mL。 将市售鸡蛋样品用捣碎机搅匀, 称取五组5.0g蛋液分别放入五个 50 mL 离心管中,取其中三个离心管在其中分别加入含量为0.5μg/g的莫能菌素和含量为1.0μg/g的盐霉素各20μg作为回收,在剩下两个中选其中一个入莫能菌素、盐霉素标准溶液各20μg，在这五个离心管中分别加入异辛烷20 mL,振荡10 min后,以5200 r/min的转速离心10 min,取出上清液,再加入10 mL异辛烷重复提取1次,合并两次上清液,于旋转蒸发仪上40℃旋转蒸发近干,用2 mL甲醇/水(体积比90∶10)溶解定容,过0.45μm微孔滤膜,待测。流动相配制:取5mL的冰乙酸,用水定容至100 mL制成百分之五的冰乙酸, 转移到1000mL容量瓶中,用甲醇定容, 混匀。衍生试剂1：移取40mL浓硫酸, 缓慢加入装有甲醇的1000mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度线,混匀。衍生试剂2：准确称取30.000g香草醛, 用475mL甲醇溶解, 混匀。检测及结果 按上述色谱条件将鸡蛋样液进行检测，莫能菌素和盐霉素的保留时间分别在 13min和17min ,检测到的峰分离完全。莫能菌素标样含有莫能菌素A和莫能菌素B两种组分,通常情况下主要含量以莫能菌素A计算。 在鸡蛋样品中添加莫能菌素的量为0.5μg/g ,盐霉素为1.0μg/g时, 莫能菌素的平均回收率为92.1%,盐霉素的平均回收率为91.4%，经过检测我们买回来的鸡蛋中莫能菌素和盐霉素的残留量均在标准范围内，可以放心的食用。 抗生素残留含量在国家规定标准范围内，那么就不会危害到我们的健康。为了我们大家的身体健康，在养殖场或饲料厂辛勤工作的人，要辛苦你们在使用抗生素时要合理，含量要符合标准，不要超标哦。因为在日常生活中大家不可能对买回来的鸡蛋以及肉制品进行检测，所以奋斗在养殖和生产一线的人们要替广大的人民群众把好关啦！

长期使用抗生素会造成畜禽免疫力下降，引起畜禽内源性感染和残留，而食用过抗生素超量的畜产品的人，会产生抗药性，或大量蓄积而对机体产生毒害。近年，牛奶中的抗生素残留成为人们日益关注的话题。 　　奶牛乳腺炎是世界奶牛养殖业中发病率最高、流行最快、造成损失最大的疾病之一。根据美国奶协统计，亚临床型奶牛乳腺炎发病率高达50%，而总发病率可占整个牛群的70%。　　抗生素是目前国内外普遍采用的一种治疗奶牛乳腺炎的手段。欧美等国多年前明文禁止抗生素残留超量的牛奶上市。1990至1991年期间，美国奶业基金会规定超过允许量标准的牛乳及其乳品全部废弃处理，不得食用。近年来，我国也颁布了相关管理条例，但是牛奶中抗生素残留问题仍然不时发生。　　目前抗生素的检测方法，按照检测原理和使用的仪器可分微生物法、免疫法、理化仪器法等3类：　　微生物测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用，来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留。微生物法的优点是费用低，一般实验室都能操作。缺点是时间长、显色状态判断通过肉眼辨别、易产生误差、对微红色者无法做出准确判断、操作复杂。　　免疫分析技术最突出的优点是操作简单，速度快、分析成本低。免疫测定法取样量小，前处理简单、容量大，仪器化程度低，检测牛奶的灵敏度高。是目前奶牛场和牛奶公司使用最广泛、快速、灵敏的检测抗生素残留的方法。目前部分抗生素已经建立了免疫测定法，如磺胺二甲基嘧啶、氯霉素、沙拉沙星、链霉素、四环素、莫能菌素等。该法适用于现场监控和大量样品的筛选，具有广阔的应用前景。但是免疫法直接测定也存在样本信息量太少，假阳性和理化分析技术选择性低等不足，当样品中含有与某类抗生素结构相似的化合物时，可能出现免疫交叉反应而呈现假阳性结果。　　最常用的理化仪器分析方法是高效液相色谱和质谱联用技术。高效液相色谱法(HPLC)是目前广泛应用的一种理化检测方法，分离速度快、效率高和操作可自动化，已成为大多数抗生素残留的常规分析方法。由于奶样品中药物残留量少，背景干扰往往很严重，因此一般都通过柱前衍生反应来提高紫外检测器检测残留的灵敏度。目前，HPLC方法已用于红霉素、庆大霉素、羧苄青霉素和吩羧青霉素残留的测定。　　近期，国外在抗生素残留检测方法上正在由各种分析技术联用代替单一的色谱技术。例如检测氯霉素的联用技术有液相色谱/质谱联用（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/质谱联用（GC-MS）、高效液相色谱/光阵列检测器（HLPC/PAD）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/电子捕获检测器（GC-ECD）等，目前[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]已进入实用阶段。　　目前国家食品质量安全监督检验中心研制出一种液相色谱／离子阱多级质谱联用仪，它可完成对复杂基体的定性及定量分析。适于分析食品、小分子量药物、药物代谢产物、农药、除草剂等样品。

农业土壤抗生素含量及分布研究，采样时应该注意什么？采得土样需要测定哪些理化性质？样品可以保存多久？保存时有什么注意事项？我是新手，刚进实验室老师就要求独立做课题，对于具体执行上没什么经验，希望大家指教哈~~~

请问有用固相微萃取液相色谱法检测磺胺类抗生素的啊

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=70930]抗生素合集[/url]包含了抗生素液相分析方法及谱图,以及2005版药典新增得很多不易分开得药物也分得很好,感兴趣得可以传阅一下

大家做过乳制品中青霉素类抗生素的谈谈自己的经验以及遇到的各种问题，是用的那种方法，对GB/T 21315-2007 动物源性食品中青霉素族抗生素残留量检测方法-液相色谱-质谱质谱法以及GB/T 22975-2008牛奶和奶粉中阿莫西林、氨苄西林、哌拉西林、青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林和双氯西林残留量的测定-液相色谱-串联质谱法这两种方法的检测有什么看法，回收率怎么样？基质干扰明显嘛？样品测定液干净吗？大家共同来探讨一下，分享经验，共同进步！

我想测水中抗生素的含量，但学样这边没办法用SPE富集一下，可以直接用HPLC测？

[color=#333333]乳制品中抗生素的含量的测定如何采样[/color]

毕业设计就快要结束了，可我的实验还没有头绪，请大家支支招，先谢过大家了！！[em17] 我做的是用液相色谱来检测牛奶中的抗生素残留，我查了很多资料，现在主要问题就是对牛奶样品的前处理还没有确定，请大家帮帮忙。

[color=#444444]最近在做四环素类和磺胺类抗生素的测定实验，对于几个实验细节不太清楚，麻烦各位有经验的前辈能够解答一下，谢谢了！[/color][color=#444444]1.标准曲线的配置的过程中，标准品的称量必须要用百万分之一天平吗？万分之一够用吗？[/color][color=#444444]2.前处理过程中要用到的玻璃仪器比如旋蒸用的球瓶应该怎么清洗啊，用酸缸还是碱缸浸泡啊，之后需要用马弗炉烧吗？玻璃仪器再用的时候应该用什么有机溶剂润洗啊，我这有甲醇和乙腈，这两种可以吗？[/color][color=#444444]3.出峰顺序的确定，因为液相后面没联质谱，想问一下应该怎么确定出峰顺序啊？[/color]

一说到抗生素，很多人就想到吃药其实，你不吃药也躲不了！也许每天你都吃了不少抗生素土豆、水稻、玉米……家禽……鱼类抗生素几乎都有涉猎！论坛有多少版友做抗生素的检测？农作物中的抗生素、家禽里面含有多少抗生素？在人体的代谢情况如何？欢迎做抗生素的，检测抗生素的，检测农作物、家禽等抗生素含量的朋友前来一起交流下~有关抗生素的相关检测文章：一共147篇http://www.instrument.com.cn/download/search.asp?searchType=title&keywords=%BF%B9%C9%FA%CB%D8

来源：中国论文下载中心 作者：冯建成　张容鹄乳及乳制品是老少皆宜的营养品，在我国，乳制品及乳制品工业发展迅速，同时畜牧业也发展迅猛，β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类等抗生素在乳畜饲养业中广泛应用，造成乳及乳制品中抗生素残留，给消费者健康带来了潜在威胁，因而提高抗生素残留的检测技术显得尤其重要，尽快开发或引进先进的抗生素检测技术以解决我国当前乳和乳制品行业面临的难题已成为当务之急。　　　　1 抗生素残留现状　　　　我国乳制品中抗生素的残留现状不容乐观，2006年的一份对北京、天津、石家庄5个零售点的77个牛奶样品进行β-内酰胺酶的残留检测，63.6%的样品检测为阳性。一项对我国几个大城市如西宁、南宁、广州、杭州、泉州、北京等城市乳制品质量的检测调查结果显示，在近八百份乳品采样中，抗生素残留超标居不合格项目第一位。　　　　2 抗生素残留的来源及其危害　　　　乳和乳制品中抗生素残留的来源要追寻到原料生产及其流通过程。首先，使用抗生素防治动物疫病。对患病奶牛用药不当及不遵守停药期是造成牛奶中抗生素残留的重要因素。其次，抗生素类饲料添加剂的使用。第三，饲养户和经营商为了保鲜，将抗生素人为添加到畜产品中，来抑制微生物的生长、繁殖，防止牛奶酸败变质 ，也是造成抗生素残留超标的重要因素。　　从乳制品加工的角度来看，原料乳中抗生素残留物严重干扰发酵乳制品的生产，抗生素残留可严重影响干酪、黄油、发酵乳的起酵和后期风味的形成。长期服用含低剂量抗生素残留的乳制品，日积月累会危害人体健康。主要危害表现在：其一，毒性作用，如长期摄入氨基糖苷类抗生素严重超标的乳产品可导致肾毒性和耳毒性。其二，过敏反应。其三，病原菌耐药性增加。其四，破坏人体胃肠道微生物菌群的动态平衡。其五，妨碍我国畜产品的国际贸易。　　　　3 抗生素残留检测方法的研究进展　　　　目前抗生素残留检测的方法很多，基本上可以分为四大类型：一是经典的微生物检测方法；二是现代仪器分析方法；三是生化免疫分析法；四是专一试剂盒法。　　3.1 经典微生物检测法　　其测定原理基于抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作检测用，因而与临床应用的要求一致，但其测定时间长且结果误差较大。如TTC法、戴尔沃检测（Delvotest SP）法、BY法等。　　3.1.1 TTC法 　　TTC法是国际上较早通用的标准测定法，也是我国鲜奶中抗生素残留量检验标准（GB4689.27-94）规定的检测法。如果牛奶中含有抗生素，则加入菌种（嗜热链球菌）经培育2.5-3h后，加入TTC指示剂（三苯基四氮唑）不发生还原反应，所以样品呈无色状态；如果牛奶中不含抗生素，则样品呈红色。TTC法检测的各种抗生素灵敏度如下：青霉素为0.004单位、链霉素0.5单位、庆大霉素0.4单位、卡那霉素5单位。TTC法主要对于青霉素类和氯霉素药物敏感，但对链霉素不太敏感，对新霉素根本不敏感，并且消毒剂可干扰TTC试验。TTC法检测抗生素残留虽然费用较低，但检测方法消耗时间也相对较长，因此应用受到一定限制。　　3.1.2 戴尔沃检测（Delvotest SP）法　　是由荷兰其试剂是由荷兰DSM公司生产并由AOAC认证。原理是利用微生物——嗜热芽胞菌在64℃条件下培养2.5～3h后会产酸，酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色；若牛奶样品中不含抗生素，培养后样品呈黄色，如样品中含有抗生素, 嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸，指示剂将不变色。可检测到β-内酰胺类抗生素在内的更多抗生素，如磺胺类、四环素类等，其中对青霉素和磺胺类抗生素特别灵敏。Delvotest SP 法操作方便，严格实用，容易判断，结果可靠，费用适中等优点；但也易出现假阳性，此方法适用于农场、企业、实验室及政府监测部门。　　3.1.3 BY法　　BY法，也称蓝黄检测法，是一种广谱的微生物抑制法，能在较短的时间里检测到乳制品中抗生素的残留，通过颜色的对比判断阳性、阴性和可疑样品。B• Linage等通过这种方法对β-内酰胺类、大环内酯类、四环素类等25种抗生素进行了检测，其残留的检测限与欧盟规定的检测限很接近。此方法耗时短，操从简单，检测抗生素种类较多，但误差较大，容易误检。　　3.2 现代仪器分析方法　　是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应或理化特性，借助现代仪器对抗生素残留进行精确分析的一种方法。如色谱法、荧光法、毛细管电泳、色谱质谱联用技术等。　　色谱法有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]（GS）、高效液相色谱（HPLC）法、反相高效液相色谱法等。检测的过程运用了色谱理论，通过高灵敏度的检测器，分离速度快、效率高和操作自动化。一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤，能检测抗生素的具体含量。蔡颖用反相HPLC法测定乳制品中土霉素、四环素和金霉素残留量。检测限为：土霉素为15.0μg/kg、四环素为20.0μg/kg、金霉素为18.0μg/kg。Jian Wang等运用超高效液相色谱和飞行质谱联用(UPLC/Q-Tof MS)和LC/MS/MS测定牛奶中大环内酯类抗生素的残留量，其检测限为：红霉素40ug/kg，泰乐菌素50ug/kg，替米考星50ug/kg，能满足各国对这六种β-内酰胺类抗生素的最低检出要求。　　仪器分析方法分离速度快、效率高和自动化程度高，能检测抗生素的具体含量，敏感性较高，结果准确，但待检样品需经一系列的预处理，繁琐费时，还必须有相应的价格昂贵的仪器设备。一般在大型实验室使用，适合于精确测定。　　3.3 生化免疫法　　目前应用的生化免疫分析技术，是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术。其基本原理是抗原抗体的竞争性结合。可分为酶联免疫测定法（ELISA）、荧光免疫测定法(FIA)、免疫分析技术与常规理化分析技术联用的方法等。　　酶联免疫吸附测定(ELISA)：以待测抗原（或抗体）与酶标抗体（或抗原）的特异结合反应为基础，通过酶活力测定来确定抗原（或抗体）含量。因为结合了免疫反应和酶催化反应，所以是一种特异而又敏感的技术。YONG JIN运用酶联免疫法(ELISA)对庆大霉素的检测限度为0.5 ng/mL。Bucknal等运用免疫检测法测定了在牛奶中几种喹诺酮药物的残留量。酶联免疫法测定，其敏感性和特异性好，检测的灵敏度以普遍使用的β-内酰胺类计：青霉素为5ppb，阿莫西林为10ppb，氨苄西林为10ppb，头孢西林为8ppb。其检测结果快速准确，9分钟内即可检测出牛奶中β-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留含量，可监控牧场用药的情况。　　荧光免疫测定(FIA)法原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与抗原抗体复合物(Mb)浓度呈正比，可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。Huth 已经用荧光免疫法测定了牛奶中的6种β-内酰胺类抗生素，得到它们的最低检测限为：青霉素G3.2μg/kg、氨苄青霉素2.9μg/kg、羟氨苄青霉素3.6μg/kg、头孢匹林16.3μg/kg；该法重复性好，具有快速、敏感、准确的特点。生化免疫法测定抗生素残留灵敏度极高，达到ng级水平；检测快速、专一性强。由于此法的高度专一性，每检测一种抗生素就要制备或购买相应的抗原或抗体，导致检测费用较高。因此生化免疫检测法不可能取代色谱或光谱等常规分析方法，只能作为其重要的补充。　　　　4 专一试剂盒法　　　　ECLIPSE试剂盒的原理是含有芽孢杆菌的琼脂培养基和pH指示剂，当在(65±1)℃下培养时，孢子发育生长，降低培养基pH值，在pH指示剂的作用下，蓝(紫)色变为绿-黄色。生鲜牛乳中的抗生素残留使微生物生长和酸的产生受到抑制，由于没有酸生成，颜色将不会改变。。　　ECLIPSE试剂盒有ECLIPSE50和ECLIPSE100两种试剂盒。ECLIPSE50的精确度虽然没有ECLIPSE100的高，但其检测限都符合欧盟标准，弥补了快速方法只能单一检测某类抗生素的缺陷，同时提高了检测的广谱性和高灵敏度，同时也可以同欧盟等国家的先进检测技术和标准接轨我国的牛奶事业提供非常有效和准确的抗生素残留检测方法。且操作简单，灵活性强，无需对样品进行任何的处理，只需严格按照说明书上规定的方法进行操作，就能获得理想的效果，且不易出现假阳性现象，被检样品的需要量少，且费用低，越来越被广泛应用。　　乳制品抗生素残留的检测方法很多，有的操作烦琐,有的实验条件要求高，有的检验时间太长；这些不仅会给乳制品生产企业造成经济上和时间上的损失，而且检测结果常常会被原辅材料和人为操作等因素所影响。牛奶中抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题，开发出越来越准确、快速，误差越来越小的检测方法，方便地检出乳和乳制品中抗生素残留，净化消费环璄，就能为居民的身心健康提供保障，促进中国乳业健康发展。　　

高效液相色谱法测定淡水鱼中抗生素残留

应符合中国药典2000年版附录V D高效液相色谱法及附录XIX A药品质量标准分析方法验证的有关规定。若另有规定者应于正文中写清楚，如拖尾因子，附录中规定应在0.95~1.05，某品种若不能达到，可另制订合适指标。 一. “含量测定”可按下述格式表述 多数抗生素类药品的含量测定采用的是HPLC-紫外检测器法，其书写格式包括以下内容： （一）照高效液相色谱法（附录V D）测定。 （二）色谱条件与系统适用性试验：包括以下内容：色谱柱填料种类，流动相组成及配制方法，流速，检测波长，柱理论板数，拖尾因子，分离度测定溶液配制方法及分离度要求，进样量，数次进样对照品溶液应达到的精密度等。 注：1. 如果理论板数对分离度及定量测定结果影响不显著时可省略。 2 如果色谱峰的对称性较好，可不规定拖尾因子，但对称性差的品种应规定拖尾因子。 3. 考核分离度的方法有： （1）用已知杂质对照品，测定其与主组分峰的分离度，如头孢克洛含量测定时规定头孢克洛与d-3异构体对照品混合溶液的分离度应符合规定。 （2）杂质对照不能获得的情况下，可通过样品的适当处理使降解，测定降解物与主组分峰的分离度，如头孢呋辛钠含量测定中，取对照品溶液在60℃水浴中加热10分钟，冷却，使部分头孢呋辛转变为去氨基甲酰头孢呋辛后，测定头孢呋辛峰与去氨基甲酰头孢呋辛峰的分离度。 （三）对照品溶液的制备：应写清楚对照品溶液制备所用溶剂及溶液浓度。若储备液与测定液溶剂（稀释液）有差异时，应分别写清楚配制方法。 （四）测定法：应写清供试品溶液的配制方法。对于制剂若由于辅料会影响取样均一性者，还应规定合适的取样量。对于溶液稳定性差的品种，应写清“临用前配制”或“供试液应冷处保存”等。含量测定溶液浓度的确定，除了应在线性范围内外，应以规定的进样量测定的峰面积积分值在6位数以上为宜。 另外，也有一些无特征紫外吸收物质，例氨基糖苷类抗生素，可以采用HPLC-蒸发光散射检测器（Evaporative Light-Scattering Detector, ELSD）法测定含量。当采用该法测定含量时，书写格式可参考上述HPLC-紫外检测器法，但应注意以下几点： （1）“色谱条件与系统适用性试验”项：液相色谱条件中应注明流速，因为流速大小直接影响ELSD的检测器条件；检测器条件中应注明漂移管温度，载气流速。系统适用性试验一般要包括数次进样对照品溶液应达到的精密度（RSD），以确保检测器的稳定性（一般来说，该法要求RSD不得过2%）。 （2）“对照品溶液的制备”项：由于ELSD的响应值（A）与进样浓度（C）间呈指数关系（A=aCb，a，b均为常数），在采用该法测定含量时，计算方法宜采用随行校正曲线法（lgA=algC+b，a，b分别为校正曲线的斜率、截距），故对照品溶液的浓度至少应包括高、中、低3个不同浓度，浓度设计以能覆盖供试品溶液浓度为宜。 （3）“供试品溶液的制备与测定”项：同HPLC-紫外检测器法，但计算方法采用的是随行校正曲线法，即供试品浓度是根据供试品溶液中主峰峰面积和随行校正曲线（lgA=algC+b）来确定的，具体计算方法可参见“3 项撰写细则”一章中的“1.7 组分检查或纯度检查”部分。 二. 有关物质测定* （一） 有关物质测定的色谱条件与含量测定相同者，可参照中国药典2000版中头孢呋辛钠有关物质检查法表述。但其中有如下几点不完美： 1. 供试品溶液浓度低于含量测定时供试品浓度，有可能影响杂质的检测，应适 当提高。 2. 结果评价应以加校正因子或不加校正因子的主组分自身对照法计算出单个最大杂质或表观含量大于0.1%含量以上的杂质总和的含量或表观含量，而不以单个最大杂质或杂质峰面积总和不得大于对照品溶液主峰峰面积的多少倍表示。 （二） 有关物质测定的色谱条件与含量测定不同者，可参照中国药典2000年版中头孢克洛有关物质检查法表述，但其中有如下表述方法需作修改。 1. 流动相梯度洗脱方式以列表方式表述如下： 流动相A与流动相B按下表变换方式进行洗脱： 时间（分） 流动相A（%，V/V） 流动相B（%，V/V） 0~30 95%®75% 5%®25% 30~45 75%®0% 25%®100% 45~55 0 100% 55~56 0®95% 100%®5% 56~71 95% 5% 2. 结果评价方式同上，应计算出单个最大杂质含量或表观含量大于0.1%以上的杂质总和的含量或表观含量。 （三）有关物质测定中明确规定对照品溶液数次进样后相对标准偏差的限度，并以数次进样的平均值计算出各有关物质的量。 （*注：最低检出限或最低定量限的确定应按照中国药典的要求进行验证，以保证结果的可*性。）

据央视报道,全国主要河流,黄浦江、长江入海口、珠江等都被检出了抗生素,其中,珠江广州段受抗生素污染非常严重,脱水红霉素、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶的含量分别为460纳克/升、209纳克/升和184纳克/升,远远高出了欧美发达国家河流中100纳克/升以下的含量。此外,南京、安庆、铜陵、阜阳、蚌埠等部分地区的居民自来水中也被检出抗生素。　　消息一出迅即引发人们关注,调侃者揶揄“以后感冒是不是只要喝水就好了”,“市民会不会每天喝着富含抗生素的消毒水”?这个匪夷所思的等式似乎在当下正成为一种担忧。　　查看过往报道则发现,类似的消息在今年5月曾有传出,当时广州市环保局相关人员回应“珠江水含抗生素”的问题时表示,“地表水中含有抗生素与饮用水安全并没有直接关系,饮用水来源不是普通的地表水,自来水厂会对有机物质进行降解和消毒,这一过程中抗生素的影响都会消除,自来水出厂时也都会按照饮用水标准进行检测,所以请市民放心”。　　遗憾的是,这样的解释在当前的情况下已经很难让市民放心了,因为借由这一次媒体报道,公众方才得知:我国的饮用水检测标准中根本就没有抗生素指标这一项!　　这是南京水务集团在回应央视报道“南京鼓楼区居民家中自来水被检出阿莫西林”时透露的,其称“现行国家颁布的生活饮用水水质标准106项指标中无抗生素指标检测标准,我们目前供水水质完全达到国家标准”。　　南京水务集团的回应固然有避重就轻之嫌,但它却残忍地道出一个事实,那就是:现行的饮用水检测标准并不会查抗生素,因此自来水厂在对有机物质降解和消毒的过程中能否完全消除了抗生素的影响很难说,至少依靠目前的饮用水检测标准是不能判定居民饮用水在抗生素指标方面是否达标的。　　目前,南京水务集团称将立即安排委托专业权威机构,对全市供水区域抽样,进行抗生素专项检测,有结果后即对外公布;不知广州方面如果将自来水做抗生素检测,结果又会如何?当初“请市民放心”的广州市环保局,现在是否有勇气再站出来给市民吃定心丸呢?　　看起来,将抗生素检测纳入饮用水检测标准,已是摆在政府部门面前亟待解决的一个重要问题。只是,水体抗生素含量标准如何制定,怎样迅速推广专业检测手段和设备,如何在短时间内消除居民饮用水中的抗生素污染,这些问题恐不是朝夕之间就能解决的。　　形势无疑是非常严峻的:抗生素既没有被专门监测,也没有被专门处理,那么,面对已渗透到地表水乃至自来水中的抗生素污染,我们该怎么应对?环保部门虽然表态要从污染源头上加强对抗生素的控制和治理,可是,抗生素的三大来源分别是人体排泄、药厂排放的污水和医院的医疗废水、动物饲料和水产养殖,相对应的治理难度都是极高的,诸如山东鲁抗医药这样大量偷排抗生素污水的上市企业都管不住的话,那些小规模的偷排抗生素行为就更难得到有效遏制了。　　地表水乃至饮用水中的抗生素超标问题已经为我们敲响了公共卫生安全的警钟,如何避免“喝水=吃药”的噩梦,需要政府、企业乃至每个个体都行动起来,共同寻找出路。

-内酰胺类化合物除外。对于这些抗生素，为防止假阳性反命的发生，通常不检测其抑 制特性,而检测其中的13 -内酰胺酶.因为菌株的抑制剂除抗牛素外还有i污剂或消毒 剂等其他物质。噬菌休或其他热敏性抑制剂可能产生假阳件结果，在确认试验前对样品 进行热处理便可以排除：这类试验通常有对比结果，所以必须按要求规范实验操作。is 法中测试的灵敏度和痕贵抗生素的检出限取决丁特定测试条件下选用菌株的敏感性。常 用的对奶中抗生素的常规分析方法是纸片分析法和染色剂还原法二本书对这些方法举例 迸行r描述。另外，也可使用快速现场测试法,这些方法町用于农场或平台放行检测。检 测芦-内酰胺抗生素的SNAP测试(美国缅因州IDEXX实验室)就是其屮的一个例子，它 可在lOmin内得到检测结果：Bell等人也证明该方法是一种可靠的现场检测方法。 (1)片碟法将敏感菌株接种于琼脂培养基后倾倒平板,并使之凝固，然后将浸泡在 样品中的小圆形滤纸片放在琼脂忐面。将平板智于适当的温度下培养，直至长出菌落。 若有抗生素或其他抑制物渗人培养基，则在纸片周围会出现清晰的抑菌圏。通过与巳知 对照平板抑制圈直径的比较（条件是严格的标准状态），可得到牛奶中抗生素的含量 所有敏感菌株均可用于此项试验，如藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌 改进的方法使用了嗜热的嗜热脂肪芽孢杆菌作为敏感阐株，其优点为平板可在55℃培养，能较快 地得到检测结果。AOAC官方规定片碟法检测内酰胺抗生素时所使用的敏感菌株为 嗜热脂肪芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌(AOAC, 1995)