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请问:国产和进口变性梯度凝胶电泳一般都在什么价位。比较好的品牌有那几个,谢谢!
凝胶电泳(英语:Gel electrophoresis)或称胶体电泳 是一大类技术,被科学工作者用于分离不同物理性质(如大小、形状、等电点等)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。凝胶电泳仪 - 使用方法凝胶电泳被广泛用于分子生物学、遗传学和生物化学:1.大的DNA或者RNA分子通常利用琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis)分离,也可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。2.蛋白质的凝胶电泳通常在加入十二烷基硫酸钠的聚丙烯酰胺凝胶中进行(SDS-PAGE),或者非变性凝胶电泳,或二维电泳。 SDS-PAGE 蛋白质凝胶电泳图。 3.毛细管电泳 4.酶谱法(zymography) 5.变性梯度胶凝电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE) 琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。 琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:1、 DNA的分子大小。度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中蠕行,因而迁移得越慢。 2、 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。 3、 DNA分子的构象DNA分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而开环双链DNA移动最慢。如在电泳鉴定质粒纯度时发现凝胶上有数条DNA带难以确定是质粒DNA不同构象引起还是因为含有其他DNA引起时,可从琼脂糖凝胶上将DNA带逐个回收,用同一种限制性内切酶分别水解,然后电泳,如在凝胶上出现相同的DNA图谱,则为同一种DNA。
变性梯度胶凝电泳(DGGE)能够将具有单个碱基差别的DNA分子分离开来。分离以 DNA在溶液中的解链特性为基础。以温度或变性剂浓增高时,DNA分子在不同的区域相 对应的解链温度称为基础。解链区域的长度从25个碱基对到数百个碱基对不等,与每 一个解链区域相对应的解链温度称为解链温度(Tm)。由于一个DNA链上相邻碱基间的 堆积作用在DNA双螺旋的稳定上起着相当重要的作用,因此解链区域的Tm值主要取决 于的序列。既使是很小的变化也会引起DNA片段Tm值的改变,如单碱基替代可 引起1.5℃的差异。在DGGE系统中,DNA片段在变性剂梯度聚丙烯酰胺凝胶中电泳,凝 胶中自上而下所含变性剂浓度呈线性增加。DNA片段在进入变性剂某一浓度时,此浓 度下DNA片段在最低温度解链区域解链(相当于该区域的Tm值),此时DNA分子成分枝状 结构,它使DNA分子在胶中的移动减慢。如果梯度条件选择恰当,因单个碱基变化使 不同的DNA片段在凝胶中的不同位置分叉,随后DNA片段移动减慢,从而使笪DNA片段 最终分离开来。DGGE可以用来检测除最高温度解链区域以外的所有发生单个碱基变化的DNA片段。例如一个DNA片段有三个解链区域,其中头两个区域中的碱基变化能够检测到;但 是最后一个区域的碱基变化,由于缺乏完全解链区域时依赖序列移动的DNA片段,一 般不能检测。我们能够利用克隆的DNA片段通过一个富含GC片段与有两个解链区域的 DNA片段结合来解决这一困难,富含GC的片段我们称之为GC发夹。当缺乏GC发夹时, 只有那些发生在此DNA片段第一个区域所发生的单碱基变化可用DGGE分开;而GC发夹与 该DNA片段结合能够区分第二区域所发生的单碱基改变。\par我们对GC发夹的研究最 初是通过将突变的DNA片段克隆入一个质粒载体,使其与一个含80%鸟嘌呤与胞嘧啶的 300bp片段连接,并用限制性内切酶隆解此克隆DNA,使之释放出与GC发夹结合的靶片 段。虽然该方法是行得通的,但是要设计一个适合于直接检测基因组DNA片段、特别 是带有长达300bp的GC发夹的片段仍然存在着困难。克服这个困难的第一步是有关的 实验观察以及理论推算,结果表明GC发夹长为30bp就足能用于绝大多数DNA片段的 DGGE分析。第二步进展在聚合酶链反应(PCR)基础上,设计一方法使短的GC发夹与DNA 基因组结合。该方法是根据一篇报道,即有限制性内切酶位点的DNA短片段能够与寡 核苷酸相连,此寡核苷酸用于PCR扩增DNA片段;这些在DNA基因组织中未编聯的寡聚核 苷酸的wè5'尾斣陂织PCR过程中有效地掺入扩增的DNA片段的5'末端。我们最近将该原 理用于DGGE方法,结果表明长40-45bp的GC发夹能够与来源于人基因组的扩增DNA片段 结合,此GC发夹能检测发生单个碱基变化的DNA片段,而当其缺乏GC发夹时,DGGE检 测不到。PCR扩增过程中DNA片段的大量扩增增加了灵敏度,所以只需少量DNA样品, 经EB染色的DNA可以很容易地检测出来,因而不需使用放射性探针。因不需与放射性 探针杂交,此法也能比较容易地检测低、中和高拷贝数的重复序列,而这些序列用 Southern杂交来分析有时是十分困难的。在此将详细描述本方法的实验过程,并且专 门讨论该方法如何用于完整的从短到中等长度的基因的分析。