质谱冲洗时间校准方法

[color=#3e3e3e][b]衣服穿久了要洗，色谱柱用久了要冲，不过冲洗色谱柱可不像洗衣服那么简单，到底该怎么洗，还是有些门道的：[/b][/color][color=#3e3e3e][b]第一个问题：用什么冲[/b]1.1：什么叫冲洗色谱柱通常，色谱柱冲洗就是把色谱柱上的脏东西和对色谱柱有损坏的东西冲出来，并且保存在合适的溶剂中；还有另一种情况，也可以算作冲洗的范畴，就是梯度方法间重新平衡色谱柱的过程。1.2：常用的溶剂针对于反相色谱柱，通常是用到纯的水和有机溶剂，水主要是作为冲洗掉色谱柱中的盐和其他添加剂，而有机溶剂则是用来冲洗掉一些在色谱柱上有较强保留的污染物，除了在分析中常用到的甲醇和乙腈之外，还有一些对污染物去除能力更强的有机溶剂也可以使用，比如异丙醇。[/color][color=#3e3e3e][b]第二个问题：冲多久[/b]色谱柱到底要冲多久，这个是经常困扰大家的问题，20分钟，30分钟，还是1小时？2.1.1：色谱柱冲洗的计算原理其实，冲洗色谱柱并不是一个时间概念，而是一个体积的问题：通常要完全置换色谱柱中的流动相，需要至少十倍柱体积，也就是说，要有至少十倍于色谱柱体积的溶剂流过色谱柱才能把里面原有的溶剂彻底置换。2.1.2：色谱柱体积的计算色谱柱的柱体积就是色谱柱的圆柱型体积乘以色谱柱柱填料的孔隙率（一般约为0.6），所以算下来，一根常用的4.6×150mm的色谱柱柱体积大约是1.5mL，如果是10倍柱体积的量，就是15mL，按照常用的1mL/min的流速，就是15min的时间。2.2.1：梯度重新平衡的冲洗时间不过，这仅仅是置换所有溶剂的时间，其实仅仅是适合于短期冲洗色谱柱，比如梯度方法间的平衡时间，但是这还要受到仪器延迟体积的影响，已经流动相是否容易重新达到化学平衡的考虑，通常仪器的延迟体积越大，这个时间要越长，如果所使用的流动相不容易达到化学平衡，还要加长时间，比如使用使用某些缓冲盐的情况。当然也有很多情况下，梯度方法间的平衡时间是不需要这么长的。2.2.2：清洁色谱柱的冲洗时间如果需要彻底冲洗色谱柱，还需要更长的时间，通常建议是20倍的柱体积，也就是说，对于4.6×150mm的色谱柱，要冲30分钟才能保证冲洗完全。其他规格的色谱柱可以根据色谱柱的规格和流速进行简单的计算。[/color][color=#3e3e3e][b]第三个问题：怎么冲[/b]色谱柱的冲洗，无非两个情况：正常情况下的冲洗和非正常情况下的冲洗[b]3.1：正常情况下色谱柱的冲洗步骤[/b]3.1.1：使用不含添加剂流动相后的冲洗正常情况下，仅仅是对色谱柱进行流动相替换和净化，对于一般的方法，只需在方法结束后使用高比例的有机相比如甲醇或者乙腈冲洗色谱柱大约20倍柱体积即可。3.1.2：使用含盐或添加剂后的冲洗如果是使用的到的方法的流动相中含有缓冲盐或者其他添加剂的时候，先要使用和方法流动相起始比例相同的纯水相替代缓冲盐一相，冲洗20倍柱体积之后，再换上高比例有机相冲洗20倍柱体积。3.1.3：色谱柱冲洗后的保存对于色谱柱的保存，一般是存放在纯的有机相中，短期存放，甲醇乙腈均可，长期存放，建议储存在甲醇中。[b]3.2：非正常状况下的冲洗[/b]如果是非正常的状况，就要考虑一些不走寻常路的冲洗办法了：什么叫做非正常状况？常见的有两种，柱效下降和堵塞：3.2.1：柱效下降色谱柱的冲洗对于柱效下降，我们首先要确定是色谱柱的问题而不是由于仪器或分析方法造成的，排除这两者，如果不是色谱柱损坏比如塌陷（物理冲击造成），键合相水解（高温低pH下长时间使用），硅胶基质水解（高pH下使用）等不可逆损伤造成的柱效下降，因为排除上述问题外，多数情况都是因为色谱柱不太正常的“脏”了，可以首先使用纯的甲醇或乙腈长时间冲洗色谱柱，如果还不能奏效，可以考虑使用纯的异丙醇冲洗色谱柱，异丙醇的洗脱能力比甲醇乙腈更强，能把很多这两种溶剂无法冲洗的污染物从色谱柱上洗脱下来。如果效果仍旧不明显，可以参考色谱柱说明书中的“色谱柱再生”一项里面的说法，使用更加强大的溶剂冲洗，不过这些溶剂通常不是常用的反相液相色谱溶剂。3.2.2：堵塞色谱柱的冲洗如果是遇到堵塞的情况，首先要确定堵塞是由于什么原因引起的，如果是由于色谱柱中残留的缓冲盐引起的，这是最万幸的堵塞了，可以尝试用高比例的水相（推荐95%）在较高的温度下冲洗色谱柱。如果是由于样品原因导致色谱柱堵塞，又要考虑另外的办法，如果是样品中含有太多吸附性很强的物质（有时是复杂样品中的某些杂质，无法通过过滤离心等办法去除）沉积吸附在柱头导致堵塞，可以尝试使用不同的溶剂（对此类物质有较好溶解性的）慢慢冲洗。如果是由于样品过滤不当或者样品在色谱柱上析出导致某些颗粒杂质堵塞了色谱柱，除了尝试寻找合适溶剂冲洗之外，只能考虑反冲了，通常，不建议反冲色谱柱，因为可能对色谱柱造成较大损害，所以反冲是迫不得已的死马当活马医的办法，一定要慎用。做好样品的前处理并使用预柱或在线过滤器才是保护色谱柱的好办法！[b]3.3：快速冲洗色谱柱[/b]看上去很好很强大的说法，其实很简单，在冲洗色谱柱的时候，可以通过增加流速来缩短冲洗时间，我们已经知道色谱柱冲洗的完全程度是通过体积衡量的，所以提高流速是可以节省下时间的。但是要特别注意的是，对于堵塞的色谱柱，提高流速可能并不是个很可行的办法...[/color][color=#3e3e3e]转载于：液相达人馆[/color]

衣服穿久了要洗，色谱柱用久了要冲，不过冲洗色谱柱可不像洗衣服那么简单，到底该怎么洗，还是有些门道的：第一个问题：用什么冲1.1：什么叫冲洗色谱柱通常，色谱柱冲洗就是把色谱柱上的脏东西和对色谱柱有损坏的东西冲出来，并且保存在合适的溶剂中；还有另一种情况，也可以算作冲洗的范畴，就是梯度方法间重新平衡色谱柱的过程。1.2：常用的溶剂针对于反相色谱柱，通常是用到纯的水和有机溶剂，水主要是作为冲洗掉色谱柱中的盐和其他添加剂，而有机溶剂则是用来冲洗掉一些在色谱柱上有较强保留的污染物，除了在分析中常用到的甲醇和乙腈之外，还有一些对污染物去除能力更强的有机溶剂也可以使用，比如异丙醇。第二个问题：冲多久色谱柱到底要冲多久，这个是经常困扰大家的问题，20分钟，30分钟，还是一个小时？2.1.1：色谱柱冲洗的计算原理其实，冲洗色谱柱并不是一个时间概念，而是一个体积的问题：通常要完全置换色谱柱中的流动相，需要至少十倍柱体积，也就是说，要有至少十倍于色谱柱体积的溶剂流过色谱柱才能把里面原有的溶剂彻底置换。2.1.2：色谱柱体积的计算色谱柱的柱体积就是色谱柱的圆柱型体积乘以色谱柱柱填料的孔隙率（一般约为0.6），所以算下来，一根常用的4.6×150mm的色谱柱柱体积大约是1.5mL，如果是10倍柱体积的量，就是15mL，按照常用的1mL/min的流速，就是15min的时间。2.2.1：梯度重新平衡的冲洗时间不过，这仅仅是置换所有溶剂的时间，其实仅仅是适合于短期冲洗色谱柱，比如梯度方法间的平衡时间，但是这还要受到仪器延迟体积的影响，已经流动相是否容易重新达到化学平衡的考虑，通常仪器的延迟体积越大，这个时间要越长，如果所使用的流动相不容易达到化学平衡，还要加长时间，比如使用使用某些缓冲盐的情况。当然也后很多情况下，梯度方法间的平衡时间是不需要这么长的。2.2.2：清洁色谱柱的冲洗时间如果需要彻底冲洗色谱柱，还需要更长的时间，通常建议是20倍的柱体积，也就是说，对于4.6×150mm的色谱柱，要冲30分钟才能保证冲洗完全。其他规格的色谱柱可以根据色谱柱的规格和流速进行简单的计算。第三个问题：怎么冲色谱柱的冲洗，无非两个情况：正常情况下的冲洗和非正常情况下的冲洗3.1：正常情况下色谱柱的冲洗步骤3.1.1：使用不含添加剂流动相后的冲洗正常情况下，仅仅是对色谱柱进行流动相替换和净化，对于一般的方法，只需在方法结束后使用高比例的有机相比如甲醇或者乙腈冲洗色谱柱大约20倍柱体积即可。3.1.2：使用含盐或添加剂后的冲洗如果是使用的到的方法的流动相中含有缓冲盐或者其他添加剂的时候，先要使用和方法流动相起始比例相同的纯水相替代缓冲盐一相，冲洗20倍柱体积之后，再换上高比例有机相冲洗20倍柱体积。3.1.3：色谱柱冲洗后的保存对于色谱柱的保存，一般是存放在纯的有机相中，短期存放，甲醇乙腈均可，长期存放，建议储存在甲醇中。3.2：非正常状况下的冲洗如果是非正常的状况，就要考虑一些不走寻常路的冲洗办法了：什么叫做非正常状况？常见的有两种，柱效下降和堵塞：3.2.1：柱效下降色谱柱的冲洗对于柱效下降，我们首先要确定是色谱柱的问题而不是由于仪器或分析方法造成的，排除这两者，如果不是色谱柱损坏比如塌陷（物理冲击造成），键合相水解（高温低pH下长时间使用），硅胶基质水解（高pH下使用）等不可逆损伤造成的柱效下降，因为排除上述问题外，多数情况都是因为色谱柱不太正常的“脏”了，可以首先使用纯的甲醇或乙腈长时间冲洗色谱柱，如果还不能奏效，可以考虑使用纯的异丙醇冲洗色谱柱，异丙醇的洗脱能力比甲醇乙腈更强，能把很多这两种溶剂无法冲洗的污染物从色谱柱上洗脱下来。如果效果仍旧不明显，可以参考色谱柱说明书中的“色谱柱再生”一项里面的说法，使用更加强大的溶剂冲洗，不过这些溶剂通常不是常用的反相液相色谱溶剂。3.2.2：堵塞色谱柱的冲洗如果是遇到堵塞的情况，首先要确定堵塞是由于什么原因引起的，如果是由于色谱柱中残留的缓冲盐引起的，这是最万幸的堵塞了，可以尝试用高比例的水相（推荐95%）在较高的温度下冲洗色谱柱。如果是由于样品原因导致色谱柱堵塞，又要考虑另外的办法，如果是样品中含有太多吸附性很强的物质（有时是复杂样品中的某些杂质，无法通过过滤离心等办法去除）沉积吸附在柱头导致堵塞，可以尝试使用不同的溶剂（对此类物质有较好溶解性的）慢慢冲洗。如果是由于样品过滤不当或者样品在色谱柱上析出导致某些颗粒杂质堵塞了色谱柱，除了尝试寻找合适溶剂冲洗之外，只能考虑反冲了，通常，不建议反冲色谱柱，因为可能对色谱柱造成较大损害，所以反冲是迫不得已的死马当活马医的办法，一定要慎用。做好样品的前处理并使用预柱或在线过滤器才是保护色谱柱的好办法！3.3：快速冲洗色谱柱看上去很好很强大的说法，其实很简单，在冲洗色谱柱的时候，可以通过增加流速来缩短冲洗时间，我们已经知道色谱柱冲洗的完全程度是通过体积衡量的，所以提高流速是可以节省下时间的。但是要特别注意的是，对于堵塞的色谱柱，提高流速可能并不是个很可行的办法...

在光电光谱分析中，对试样的激发要有一段预燃时间。试样在充有氩气的火花室中激发，空气绝大部分被赶跑，所以激发放电中选择性氧化的影响、氧化吸收紫外线的影响就比较小，但依然存在着复杂的物理化学过程，如蒸发、扩散等，必须经过一定时间后，才能达到稳定放电，即各元素谱线的绝对强度和相对强度更趋于稳定，此过程称为预燃阶段。不同材料、不同元素的预燃时间是不一样的，中低合金钢的预燃时间可选4～6s，高合金钢的预燃时间可选5～8s，易切削钢的预燃时间可选10～30s，铝合金的预燃时间可选3～10s。　　冲洗时间一般由冲洗曲线来决定。　　曝光时间的确定，主要取决于激发样品中元素分析再现性的好坏，曝光过程是光电流向积分电容中充电（也称积分）的过程。积分的结果可认为是取光电流的平均值，所以积分时问不要过短。为了保证分析精度，火花放电的总次数应在2000～3000次，使铁与分析元素的光强值和比值比较适中。正常分析时，曝光时间一般采用3～5s。但必须指出，曝光时间长短与光源的能量大小有关。　　在日常分析中，一般都要做预燃时间、冲洗时间、曝光时间的条件实验来确定各自的时间。对于采用描迹法作出各元素的预燃、冲洗、曝光曲线，要综合兼顾每个元素达到光强稳定的时间，以确定共同的预燃、冲洗、曝光时间。

大家在分析工作中经常会用到缓冲盐，是不是每天都需要冲洗一下色谱柱呢。那么在企业三班倒的情况下，多长时间冲洗一次色谱柱为好呢。

一根色谱柱，大家多长时间进行一次彻底的冲洗呢？怎么样冲洗呢？

故障现象：质谱仪的质量标尺无法校准产生故障的可能原因及排除方法：a. 质谱仪调谐未达到最佳状态，排除方法是重新调谐质谱仪；b. 离子源温度过高或过低，排除方法是将离子源温度设在180~220℃；c. 空气泄漏，排除方法是检查空气峰m/z 28的高度, 若大于10%氦气峰m/z 4的高度，表明有空气泄漏，用注射器将丙酮滴在各接口处，通过观察丙酮的分子离子峰m/z 58的强度变化, 进一步查明泄漏的确切位置；d. 发射电子的能量不合适，排除方法是将发射电子的能量设定为70eV。故障现象：灵敏度低产生故障的可能原因及排除方法：a. 质谱仪调谐未达到最佳状态，排除方法是重新调谐质谱仪；b.质谱仪的质量标尺校准不精确，排除方法是重新校准质谱仪的质量标尺；c.离子源被污染，排除方法是对离子源依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min；d.离子源温度过高或过低，导致样品分解或吸附在离子源内，排除方法是调节离子源温度；e.柱子伸人离子源内的深度不合适，排除方法是调整柱子进人离子源的深度；f.分流进样器和阀有故障，排除方法是检查进样器和阀；g.柱效降低，排除方法是更换柱子；h.进样器被污染，排除方法是对衬管依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min或更换衬管i.检测器电压太低，排除方法是检测器电压应为350~450Vj.空气泄漏，排除方法是检查空气峰m/z 28的高度，若大于10%氦气峰m/z 4的高度，表明有空气泄漏，用注射器将丙酮滴在各接口处，通过观察丙酮的分子离子峰m/z 58的强度变化，进一步查明泄漏的确切位置。故障现象：质量色潜图中无噪音（呈一条平直的线）产生故障的可能原因及排除方法：检测器电压太低，排除方法是提高检测器电压。故障现象：噪音过多产生故障的可能原因及排除方法：a. 离子源被污染，排除方法是对离子源依次用甲醇、丙酮超声清洗各15min；b. 供电系统产生杂峰，排除方法是安装电源净化装置。

预燃、冲洗和曝光时间的选择（文章节选）： 在光电光谱分析中, 对试样的激发要有一段预燃时间。试样在充有氩气的火花室中激发, 空气绝大部分被赶跑, 所以激发放电中选择性氧化的影响、氧化吸收紫外线的影响就比较小, 但依然存在着复杂的物理化学过程, 如蒸发、扩散等, 必须经过一定时间后, 才能达到稳定放电, 即各元素谱线的绝对强度和相对强度更趋于稳定, 此过程称为预燃阶段。不同材料、不同元素的预燃时间是不一样的, 中低合金钢的预燃时间可选4～6s, 高合金钢的预燃时间可选5～8s,易切削钢的预燃时间可选10～30s, 铝合金的预燃时间可选3～10s。 冲洗时间一般由冲洗曲线来决定。 曝光时间的确定, 主要取决于激发样品中元素分析再现性的好坏, 曝光过程是光电流向积分电容中充电(也称积分) 的过程。积分的结果可认为是取光电流的平均值, 所以积分时间不要过短。为了保证分析精度, 火花放电的总次数应在2000～3000 次, 使铁与分析元素的光强值和比值比较适中。正常分析时, 曝光时间一般采用3～5s。但必须指出, 曝光时间长短与光源的能量大小有关。 在日常分析中, 一般都要做预燃时间、冲洗时间、曝光时间的条件实验来确定各自的时间。对于采用描迹法作出各元素的预燃、冲洗、曝光曲线, 要综合兼顾每个元素达到光强稳定的时间, 以确定共同的预燃、冲洗、曝光时间。

各位大虾大鱼们，大家好，我是超新手！请问岛津的HPLC是怎么样冲洗的？是按purge清洗吗？还是就让他按download下来的方法进行走基线？还是走空白，然后更改设置的时间？备注：已经卸下柱子，准备用异丙醇清洗管路。还是有什么特别规范的操作方法？在这里谢谢各位了！不胜感激！

你们用的样品冲洗时间一般为多长?20秒?15秒?或者....??

我在去年3月份气相版面的讲座中增加提到过，色谱柱的维护有两种方法，一种是高温老化，一种是色谱柱冲洗。高温老化虽然能除去部分高沸点物质的残留，但是会对色谱柱造成不可逆损坏，降低柱效和使用时间，而色谱柱冲洗无论从清洗的彻底程度还是对色谱柱的损害较高温老化都有明显优势，但问题在于这个操作相对麻烦，要求也高，很少有人会去做。不过还是想问下有没有高手试过，真如传说中那么麻烦吗？维护效果如何呢？

我单位使用的是安捷伦1100液相色谱，用于测PAHS的柱子受污染了，怎样进行冲洗？通道受污染了，怎样才能在不冲洗柱子的情况下将管路冲洗干净？

安捷伦1260液相，安捷伦6410质谱联用。问题：泵压很高，更换了过滤白头，没效果。想进一步判断问题所在时，发现色谱柱前段螺丝拧送了但是拔不出来！色谱柱后端拧开了，设置流量为0.04ml/min,90%水，10%甲醇，泵压为365bar，冲洗一天了泵压仍然不下降，而且关闭泵后压力降得非常慢。是不是色谱柱堵塞了，请教高手该怎么办？

我用的糖分析柱在检测完样品后就冲洗柱子。由于忙于其它事情，中间有两个星期没做样。但一直将仪器冲洗，隔几天就加次水。但两个星期后，再做样品时发现，峰高明显降低，展宽，而且两个峰之间分不开，柱效降低的很厉害。柱压没有明显变化。请问难道是冲洗时间太长了？柱子的固定相流失了？郁闷呀。我用的柱子是BioRad公司的HPX－78。请大家指教。

我编了一个冲洗方法，时间程序都设置好了，可这又不是跑样，那怎么开始运行这个方法。有人告诉我，把方法设好之后，每隔十几分钟，分三次设置泵的浓度，每设一次下载一次方法，就完成冲洗了，不需要运行序列，几乎都是手动。（为什么我觉得这么不合理呢？）综上，①我想知道怎么冲洗柱子。②那个人的冲洗方式可行吗。

我是A的一名用户，上次有个研究生做项目连续用半个月50mM三乙胺水溶液做项目（先前休假不知道），后来我接仪器后调谐过不过后报修。A的工程师来后发现是三乙胺搞鬼，让我用0.5~0.8%乙酸/甲酸水冲洗仪器手动改了下参数就走人。后来我就配了4L.8%乙酸1mL/min冲洗，开始打到MS本底有6M，连续冲了一周后变成了400K。在0流速下确定质谱无污染下重新调谐，但结果为ON PASS。我就用80度的纯开水冲洗脱气机，再用甲醇冲洗脱气机，A、B均用了半小时左右。后来直接LC-MS突然发现了m/z102到了11M，吓我一大头啊！我想来想去是不是哪出问题了，直接把针、针座全换，将喷针直接用异丙醇超声10分钟，配了个异丙醇：乙腈：甲醇=2：1：1，将脱气机A、B冲半小时后直接1mL/min打到MS，m/z102本底有12M。后来1mL/min冲液相部份，第二天来后打MS，发现102只有600K了，不过出现了个m/z425（估计是异丙醇里面的）。换上纯水打到MSm/z102只有8000的本底了，后来我配了个95%甲醇水mL/min打到MS过夜，第二天来后打到MSm/z102只有10K了，将离子源用开水泡洗了5次，调谐了一次就PASS。回头想了想A的工程师用0.5~0.8%乙酸/甲酸水是不是有问题浪费了一周时间，还是我配异丙醇：乙腈：甲醇=2：1：1，效果比0.5~0.8%乙酸/甲酸水好。希望大家发表下见解，一年多的A新手！

大家好!谁有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]反冲洗方法?急用!!!

冲洗对色谱柱的影响 　　用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量90%不会对色谱柱造成任何影响。　　原因分析：　　首先，由于目前所用的色谱柱大多以硅胶为基质，硅胶的溶解特点是在纯水中的溶解度比在含有一定浓度有机溶剂的流动相中要大得多，所以长时间的用纯水冲洗会导致固定相的流失，引起柱效下降。　　其次，对于常规的C18柱而言，由于C18长链与水是不互溶的，C18长链之间的相互作用力大于C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱(如我公司的 UltimateTM AQ-C18 柱)，这种纯水柱可以用纯水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。

用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量90%不会对色谱柱造成任何影响。原因分析： 首先，由于目前所用的色谱柱大多以硅胶为基质，硅胶的溶解特点是在纯水中的溶解度比在含有一定浓度有机溶剂的流动相中要大得多，所以长时间的用纯水冲洗会导致固定相的流失，引起柱效下降。 其次，对于常规的 C18 柱而言，由于C18 长链与水是不互溶的，C18 长链之间的相互作用力大于C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱，这种纯水柱可以用纯水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。* 第三，如使用过含缓冲盐的流动相的色谱柱，用纯水冲洗，并一定能将缓冲盐完全洗去。因为，由于缓冲盐难溶于有机溶剂，C18 反相柱中用的填料是在硅胶表面上接上许许多多的C18 长链，相当于一个疏水的有机相，而硅胶基体被有机物质包裹着，所以用纯缓冲盐水溶液做流动相时也许缓冲盐不容易到达硅胶基质，不至损害基体。但所用的流动相通常会含一部分有机溶剂，而且这些有机溶剂与C18长链是互溶的，因此有机溶剂的加入增强了流动相渗入硅胶基质的能力，能使部分缓冲盐达到硅胶基质。同样的道理，用纯水冲洗只能洗掉表面的缓冲盐，而渗入深处的缓冲盐则仍然残留在那里。所以最好在水中加入部分有机溶剂进行冲洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要视分析时使用的流动相来定，原则上，用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于缓冲盐用后清洗的情况，

PMT和CCD直读光谱的冲洗、预燃和曝光时间有何不同？

每次用 色谱柱 之前， 先用有机相看一下柱子的压力，用完后，用纯水冲洗很长一段时间后，接着 ，再用有机相冲洗，出现过以下几种情况：1 压力回到原来的数值，但是下次用的时候，压力还是比较高2 压力一直冲不下，而且还越冲越高（所用的流动相都是现用现配的，应该不会出现问题，柱子是一根新柱子） 请问，高手，这大概是些什么原因？ 万份感激！！

因为手动，所以样品冲洗不均匀，也就10-15秒，大家都是如何设置样品冲洗时间的？冲洗多少秒？

国家标准对这些分析条件有一个推荐范围，有些光谱仪的这些条件参数可以调整。那GS1000型的冲洗、预燃、曝光时间是多少，能调整么

二氯甲烷可以长时间冲洗反相C18色谱柱吗？会不会溶解碳链，或者产生其他破坏性？请高手赐教，谢谢！

色谱柱使用完毕后就是冲洗色谱柱，大家一般是怎么冲洗的呢？1.我们一般是：先冲洗水，然后再冲洗甲醇或乙腈。大家也这样吧？2.冲洗水或甲醇时的流速、时间控制在多少呢？是和实验时一致还是变小呢？3.是水冲洗的时间长还是甲醇长呢？

柱子上次用用的是乙醇和水的流动相，这次我的流动相是甲醇：水＝1：1，现在想冲洗一下柱子，应该选用何种试剂比较好？先用纯甲醇冲，还是直接用我配好的流动相（甲醇和水）冲？我有一瓶500ml的色谱纯乙腈，需要用它冲吗？冲的时间为多少，是不是只要基线平了就算冲好了？

[font=微软雅黑] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]-质谱联用仪(以下简称“[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]”)因具有高灵敏度和高选择性被广泛应用于石油化工、医药分析、环境检测、食品安全检测等领域，其中三重四级杆[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]在各行各业的实验室内最为多见。为了保证其检测结果的准确可靠，对该仪器进行计量校准是非常必要的。[/font][b][font=微软雅黑]一、调谐[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]校准前一天要通知客户开机抽真空，抽真空一般要四五个小时甚至更长时间，如果当天开机抽真空，校准工作未必能当天完成。在校准仪器前必须调 谐，通过调谐能使仪器达到最好的灵敏度及最佳的分辨力。JJF1164-2006《[/font][/font][url=https://www.antpedia.com/standard/7963894.html][font=微软雅黑][color=#0000ff][font=微软雅黑][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url][/font][font=微软雅黑]-质谱联用仪校准规范[/font][/color][/font][/url][font=微软雅黑][font=微软雅黑]》中要求用全氟三丁胺进行自动调谐或手动[/font] [font=微软雅黑]调谐，直到调谐通过为止。从调谐报告中可以得到校准规范中的两个指标：分辨力和质量范围。分辨力即半峰宽，它的值有无偏差与峰形有很大的关系，如果峰形不[/font] [font=微软雅黑]好，半峰宽就不够准确。质谱仪调谐没有达到最佳状态、离子源被污染了或者灯丝老化了都可能导致峰形不好，可通过再一次调谐仪器、清洗离子源或更换灯丝来改[/font] [font=微软雅黑]善峰形。如果报告上没有[/font][font=微软雅黑]≥600的高质谱峰则很可能是四级杆被污染了，平时高沸点的样品做多了就容易污染四级杆，这就需要清洗四级杆。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑] 调谐通不过的原因有很多，离子源被污染了、离子体脏了、四级杆被污染了等，但绝大多数是因为漏气。调谐报告中氮气与氧气的比例如果是4∶1左右或氮气大 于10%，那就是漏气了。正常情况下，水、氮气、氧气都不超过3%。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]部分和质谱部分都可能漏气。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]部分漏气多是因为一些经常拆卸的接头密封垫圈没有 装好、破损或老化；质谱部分则多是因为传输线末端的色谱柱螺帽处温度反复变化造成松动后漏气，或是因为装色谱柱时螺帽拧得太紧，把石墨圈压碎了导致漏气。 丙酮检漏是现在常用的方法。用棉签蘸取少量丙酮，涂在容易发生漏气的部位，每次只能涂一个位置，如果涂完后，工作站即时基线出现一个峰，即丙酮峰，就表明 该地方漏气了，需要更换或重新安装零配件。[/font][/font][b][font=微软雅黑]二、信噪比[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]　　校准规范[/font] [font=微软雅黑]中[/font][font=微软雅黑]EI源和负CI源的信噪比都是进1μL100pg/μL的八氟萘-异辛烷标准物质，提取m/z=272，计算信噪比；正CI源是进1μL10.0ng /μL的苯甲酮-异辛烷标准物质，提取m/z=183，计算信噪比。在校准这个项目时，需要注意的是MS里阈值的设置。因为阈值高走出来的基线是一条直 线，无法得到噪声的高度。所以一般把阈值设为10左右。很多仪器都有自动计算信噪比功能，但最好还是从谱图上读取标准物质的信号高度以及一定时间 范围内的噪声高度来获得仪器的信噪比。因为不同厂家的仪器，系统里信噪比的计算方法不尽相同，作为检定员，应该采用同一种固定的方法计算每台仪器的信噪 比。[/font][/font][font=微软雅黑]　　现在很多仪器用久了，调谐通过了，但是信噪比无法达到校准规范的要求，亦即灵敏度降低了。此时可通过以下手段提高灵敏度：一是清洗离子源；二是更换新柱子，保证柱子有较高的柱效；三是清洗、活化或更换衬管，保证进样口不被污染。[/font][b][font=微软雅黑]　三、质量准确性[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑] 校准规范中质量准确性是用10.0ng/μL的硬脂酸甲酯-异辛烷标准物质做的。校准规范要求有效数值保留到小数点后两位。有的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]的质荷比的图 上只有整数，此情况下可把小部分质荷比图放大，整数后面就会出现一位小数；有的仪器(像岛津)可以通过系统设置改变小数点后的有效数字。[/font][/font][b][font=微软雅黑]四、定量重复性[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑] 就有可能是进样针堵塞或泄漏了，或者是进样口垫子漏气了；如果是手动进样，插拔针的快慢以及操作人员的熟练程度都影响着定量重复性。对于手动进样，进样快拔针慢，这样能防止组分在拔针时还没有完全进入柱子而随针跑出，引起进样误差。(2)仪器的离子源污染了、离子源加热器不稳定。(3)影响正常 积分的拖尾峰、歪斜峰或者始终不断升高的总离子流色谱图也会导致定量重复性差。此时可通过调整载气流速、更换衬管以及老化柱子等方法来获得较好的重复性。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑] 定量重复性可以用10.0ng/μL的六氯苯-异辛烷标准物质做，也可以用客户的工作标准溶液做。校准规范中定量重复性的参考指标RSD只要≤10%， 但是在实际校准过程中经常会超过10%。主要有3个原因：(1)进样误差：进样误差将直接影响定量结果的重复性。如果自动进样的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]定量重复性不好，就有 可能是进样针堵塞或泄漏了，或者是进样口垫子漏气了；如果是手动进样，插拔针的快慢以及操作人员的熟练程度都影响着定量重复性。对于手动进样，建议进样快 拔针慢，这样能防止组分在拔针时还没有完全进入柱子而随针跑出，引起进样误差。（2）仪器的离子源污染了、离子源加热器不稳定。（3）影响正常积分的拖尾 峰、歪斜峰或者始终不断升高的总离子流色谱图也会导致定量重复性差。此时可通过调整载气流速、更换衬管以及老化柱子等方法来获得较好的重复性。[/font][/font][font=Calibri] [/font]

最近一直在用SKALAR连续流动分析仪做阴离子这个项目，但是冲洗时间一直很长，而且冲洗效果也不好，基线上漂。请哪位高人指点一下，谢谢！

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]-质谱联用仪(以下简称“[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]”)因具有高灵敏度和高选择性被广泛应用于石油化工、医药分析、环境检测、食品安全检测等领域，其中三重四级杆[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]在各行各业的实验室内最为多见。为了保证其检测结果的准确可靠，对该仪器进行计量校准是非常必要的。　　一、调谐　 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]校准前一天要通知客户开机抽真空，抽真空一般要四五个小时甚至更长时间，如果当天开机抽真空，校准工作未必能当天完成。在校准仪器前必须调 谐，通过调谐能使仪器达到最好的灵敏度及最佳的分辨力。JJF1164-2006《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]-质谱联用仪校准规范》中要求用全氟三丁胺进行自动调谐或手动 调谐，直到调谐通过为止。从调谐报告中可以得到校准规范中的两个指标：分辨力和质量范围。分辨力即半峰宽，它的值有无偏差与峰形有很大的关系，如果峰形不 好，半峰宽就不够准确。质谱仪调谐没有达到最佳状态、离子源被污染了或者灯丝老化了都可能导致峰形不好，可通过再一次调谐仪器、清洗离子源或更换灯丝来改 善峰形。如果报告上没有≥600的高质谱峰则很可能是四级杆被污染了，平时高沸点的样品做多了就容易污染四级杆，这就需要清洗四级杆。　 调谐通不过的原因有很多，离子源被污染了、离子体脏了、四级杆被污染了等，但绝大多数是因为漏气。调谐报告中氮气与氧气的比例如果是4∶1左右或氮气大 于10%，那就是漏气了。正常情况下，水、氮气、氧气都不超过3%。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]部分和质谱部分都可能漏气。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]部分漏气多是因为一些经常拆卸的接头密封垫圈没有 装好、破损或老化；质谱部分则多是因为传输线末端的色谱柱螺帽处温度反复变化造成松动后漏气，或是因为装色谱柱时螺帽拧得太紧，把石墨圈压碎了导致漏气。 丙酮检漏是现在常用的方法。用棉签蘸取少量丙酮，涂在容易发生漏气的部位，每次只能涂一个位置，如果涂完后，工作站即时基线出现一个峰，即丙酮峰，就表明 该地方漏气了，需要更换或重新安装零配件。　　二、信噪比　　校准规范 中EI源和负CI源的信噪比都是进1μL100pg/μL的八氟萘-异辛烷标准物质，提取m/z=272，计算信噪比；正CI源是进1μL10.0ng /μL的苯甲酮-异辛烷标准物质，提取m/z=183，计算信噪比。在校准这个项目时，需要注意的是MS里阈值的设置。因为阈值高走出来的基线是一条直 线，无法得到噪声的高度。所以一般把阈值设为10左右。很多仪器都有自动计算信噪比功能，但最好还是从谱图上读取标准物质的信号高度以及一定时间 范围内的噪声高度来获得仪器的信噪比。因为不同厂家的仪器，系统里信噪比的计算方法不尽相同，作为检定员，应该采用同一种固定的方法计算每台仪器的信噪 比。　　现在很多仪器用久了，调谐通过了，但是信噪比无法达到校准规范的要求，亦即灵敏度降低了。此时可通过以下手段提高灵敏度：一是清洗离子源；二是更换新柱子，保证柱子有较高的柱效；三是清洗、活化或更换衬管，保证进样口不被污染。　　三、质量准确性　 校准规范中质量准确性是用10.0ng/μL的硬脂酸甲酯-异辛烷标准物质做的。校准规范要求有效数值保留到小数点后两位。有的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]的质荷比的图 上只有整数，此情况下可把小部分质荷比图放大，整数后面就会出现一位小数；有的仪器(像岛津)可以通过系统设置改变小数点后的有效数字。　　四、定量重复性　 就有可能是进样针堵塞或泄漏了，或者是进样口垫子漏气了；如果是手动进样，插拔针的快慢以及操作人员的熟练程度都影响着定量重复性。对于手动进样，进样快拔针慢，这样能防止组分在拔针时还没有完全进入柱子而随针跑出，引起进样误差。(2)仪器的离子源污染了、离子源加热器不稳定。(3)影响正常 积分的拖尾峰、歪斜峰或者始终不断升高的总离子流色谱图也会导致定量重复性差。此时可通过调整载气流速、更换衬管以及老化柱子等方法来获得较好的重复性。　 定量重复性可以用10.0ng/μL的六氯苯-异辛烷标准物质做，也可以用客户的工作标准溶液做。校准规范中定量重复性的参考指标RSD只要≤10%， 但是在实际校准过程中经常会超过10%。主要有3个原因：(1)进样误差：进样误差将直接影响定量结果的重复性。如果自动进样的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]定量重复性不好，就有 可能是进样针堵塞或泄漏了，或者是进样口垫子漏气了；如果是手动进样，插拔针的快慢以及操作人员的熟练程度都影响着定量重复性。对于手动进样，建议进样快 拔针慢，这样能防止组分在拔针时还没有完全进入柱子而随针跑出，引起进样误差。（2）仪器的离子源污染了、离子源加热器不稳定。（3）影响正常积分的拖尾 峰、歪斜峰或者始终不断升高的总离子流色谱图也会导致定量重复性差。此时可通过调整载气流速、更换衬管以及老化柱子等方法来获得较好的重复性。

最近发现在冲洗色谱柱的时候，泵里面会发出应该是摩擦的声音，色谱柱是硅胶柱，用的溶剂是正己烷，冲洗一段时间后就会有声音出来，而且压力会跳动很大，其它溶剂冲洗不会有这种现象，想问下，这是什么原因？是泵头里面有磨损吗？

目前，看到园子谈到色谱柱冲洗的问题。我来谈谈我自己的一点意见，主要针对的反向色谱柱而讲的。1.[B]色谱柱简介[/B]最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性添充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用,正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。 填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在15nm（1nm=10埃）以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用PH2~8的流动相。当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用PH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用PH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。2.[B]色谱柱的冲洗体积确定[/B]一般情况都是冲洗色谱柱10-20倍柱体积，具体可以这样计算，根据柱内径和柱长算出色谱柱内体积。短柱一般时间就是30分钟、长柱一般冲洗60分钟就可以了。举例：内经为4.6mm、长250mm，其柱内体积=3.14*4.6*4.6/4*250=4.153毫升，流速是1.0毫升每分钟，折中取15被柱内体积，则冲洗时间就出来了。3.[B]色谱柱冲洗[/B]冲洗色谱柱最好在分析结束后，用流动相冲洗到基线平稳，然后用10%左右的有机溶剂冲洗色谱柱，主要是冲洗干净流动相中的缓冲盐。然后用100有机溶剂冲洗。最好是梯度变化冲洗。分析物可能为一些能溶解在水中，有些需要用纯溶剂才能完全去除。如果分析时间紧迫一定要把盐分冲洗干净，一般情况不要用纯水冲洗色谱柱，特别是反向柱的填料的键合集团容易折断，对色谱柱造成损伤。色谱柱被使用在某种程度上就是开始被污染了，所以色谱柱的寿命和我们使用的情况有很大的关系。虽然被污染但是对我们分析目标物没有造成影响我们也就是认为还能用。4.[B]色谱柱维护冲洗[/B]常见故障筛板阻塞，解决办法是：a、过滤流动相；b、过滤样品；c、运用在线过滤或保护柱。 柱头塌陷解决方法是：：a、避免使用PH8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）；b、使用保护柱 ；c、使用预柱（饱和色谱柱）。前面谈到的不管用什么溶剂一定要加入一定比例的用机溶剂，主要是考虑到一些疏水基团在有机溶剂里面容易伸展利于冲洗其包藏的杂质等。当我们的色谱柱在压力和柱效下降时，我可以拆开泵近端柱头的螺丝取出筛板，清洗筛板以及观察里面的填料，如填料污染严重，就要进行挖取一部分被污染的填料然后用其他废弃的柱子相同填料来填补，用新的筛板或清洗好的筛板拧好螺丝。然后冲洗观察柱压变化和测试柱效等。5.[B]特殊冲洗[/B] 强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。清洗方法： 1.未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。3.补救方法：水——乙腈——氯仿（或异丙醇）——乙腈——水每一步以 1.0ml/min 流速反向冲洗色谱柱 60min。希望大家提出更好的建议和办法。