触屏独立型荧光定量仪

请问大家对于Bio Rad 的荧光定量仪（IQ5） 是不是需要Bio Rad专用的PCR 96孔板和 封口膜？我问过Bio rad的，比较贵。如果不需要专用的话，请大家推荐一下用什么品牌的较好？价格一般多少？

在造纸行业中，定量水分测量仪是纸张生产过程中监测及控制系统的眼睛，红外定量水分测量仪是一种用于造纸生产线上进行在线连续动态检测纸张定量、水分的专用仪表。仪表采用一个传感器同时测量纸张定量水分两个参数，克服了传统的同位素测量仪对周围环境造成放射性污染，危害人体健康的缺点。仪表传感器采用多光束测量技术，测量面积大，克服了色差变化，环境因素变化对测量精度的影响，从而保证了测量结果的准确性。仪器采用红外线测量原理，不受静电影响。信号全数字化处理，仪器采用进口器件，优化设计，从而进一步保证了工作的稳定性和可靠性。另外，仪表具有四十五种标定曲线存储功能，使得使用更加方便。方便的标准物理量标定，提高了仪表测量的准确性。同时，仪表还具有自检功能和超限报警功能，使用和维护更加方便。仪表配有0～10mA, 4～20mA标准输出接口，还配有国际标准的RS485标准串行输出接口。便于与控制系统及其它记录设备连接。一、仪表结构仪表分为传感器和信号处理两大部分。传感器分为发射探头和接收探头。探头安装于造纸生产线上，主要完成测量光信号的生成、光电信号的转换及信号放大。信号处理单元安装于控制室或其它便于观察的地方，主要完成将探头接收到的数据信号处理，以数字方式显示出被测纸张的定量、水分值。同时，输出信号给控制系统。 发射探头234mm×153mm×266mm传感器结构尺寸： 接收探头232mm×153mm×144mm信号处理单元结构尺寸： 356mm×160mm×400mm二、定量水分测量仪性能指标：★、测量范围：纸页定量10~500g/㎡★、定量测量精度Q： 10g/㎡≤纸页定量100g/㎡ Q ≤±0.5g 100 g/㎡≤纸页定量500g/㎡ Q ≤±1%★、水分测量精度Q′：纸页定量200 g/㎡ Q′≤±0.2% 200 g/㎡≤纸页定量500g/㎡ Q′≤±0.5%★、测量响应时间：t≤50ms★、输出接口配置： 0 ～10mA、 4～ 20mA标准输出信号标准RS485串行通信接口三、仪器适用范围：★、环境要求：环境温度 ≤ 55℃ 环境湿度 ≤ 80%★、工作电压：～220V±10% 50Hz （最好使用稳压电源）★、消耗功率：30W四、仪器配置 发射探头主机：传感器 接收探头信号处理单元 附件：通信电缆（长度根据厂家使用要求而定）电源电缆导纸辊（为防止打断纸页而特殊设计）精密净化交流稳压电源（选配）部分标准件（紧固件）轴流风机（两台）输出配置：标准接口0～10mA 或 4～20mA 标准RS485串行接口五、安装要求将传感器的发射探头与接收探头分别安装在纸张的两侧，发射头和接收头之间的距离为10～15mm，发射探头和接收探头的相对位置不能改变，否则，应对仪表重新标定。六、仪器特点1、仪器电气性能特点：仪器内部所使用的电子元件，都是经过严格老化处理及筛选，其它光学零件终身无需调校。这样使得仪器能长期稳定的工作，使用户使用成本极低。仪器探头为铸铝外壳，其密封性能良好，可安装于恶劣的生产现场。2、仪器可组成检测系统该仪器是一种智能仪器，可提供准确的测量信号，其探头也可作为最基本的测量单元构成一个检测系统。检测系统将探头输出的测量信号通过计算机显示出被测纸页水分的变化情况，系统可将各测量点的数据贮存、打印。3、本仪器安装方便，成本低，并克服了传统的同位素测量仪对周围环境造成放射性污染，危害人体健康的缺点。所以，被广泛应用于造纸行业。七、计算机远程实时动态监控系统该系统将红外线定量水分测量仪输出的定量、水分信号及生产过程中的其它参数传输给计算机。计算机采集这些参数，经过专用程序处理，并将这些参数变化曲线按时间顺序在计算机上显示出来，并能将显示值与曲线存贮起来，以备调用。这样，管理人员办公室可通过计算机随时了解生产过程中的纸张定量、水分变化情况及整个纸机的生产状况，更加方便地指导生产，使产品的产量、质量得以提高。

对第三方实验室而言，容量瓶等玻璃定量仪器属于强检范围吗

在基因扩增仪的几种类型中，荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。 　　实验者要购买一款合适的荧光定量PCR，需要考虑各方面的因素，首先要分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种各样的宣传资料。 　　面对各种不同性能的产品，我们该如何选择呢? 　　首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区： 　　误区一：荧光定量PCR仪无需梯度功能 　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。 　　引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。 　　梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。 　　不单是退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显著差异，优化延伸温度就显得很重要。 　　使用有梯度功能的荧光定量PCR可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程，简化了摸索 PCR反应条件的繁琐实验，既节省实验时间提高效率，又节省实验成本。 　　误区二：仪器通道越多越好 　　随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。 　　从最初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。 　　在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。 　　所以，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。 　　有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。 　　在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。 　　考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重PCR并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。 　　当我们看清误区，在选择一款最适合自己需求的荧光定量PCR仪时，我们又该关注些什么呢?

美国应用生物系统公司ABI Prism 7900HT型荧光定量PCR仪操作手册[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=190236]7900HT型荧光定量PCR仪操作手册.doc.rar[/url]

四色荧光同时检测支持各种应用需要，包括：基因表达分析，病原体定量，SNP基因分型检测和采用管内阳性对照的阳性/阴性结果检测 强大而灵活的软件包括反应板设置指南，更先进的实验结果显示与自动分析工具使实验数据的分析处理更简单直观 精确的光路设计与超低温CCD成像和先进的多组分荧光自动分析校正软件，使实验结果更准确更可靠，实验结果的重现性更好 最新型半导体热循环系统支持96孔板和单一0.2ml反应管 体积小使用方便，适用于任何空间的实验室

X荧光是不是计量仪器？如果是又怎么检定？

公司欲购买微量核酸定量仪一台，请大家帮个忙，有在使用这个仪器的，可以把仪器牌子型号说一声，给俺参考下http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09502.gif。仪器厂家销售商也可以联系15095049758

【仪器心得】实时荧光定量PCR仪使用心得 在生物科学研究领域，实时荧光定量PCR（Quantitative Real-Time PCR，简称qPCR）技术已经成为不可或缺的一部分。这一技术不仅具备高灵敏度、高特异性和高精度的特点，还能够对DNA或RNA进行定量分析，为基因表达分析、病原体检测、遗传病诊断以及药物研发等领域提供了强大的支持。作为一名分子生物学研究者，我对于实时荧光定量PCR仪的使用有着深刻的心得体会，以下将结合技术原理、特点、应用场景以及个人见解，为大家详细介绍这一强大的科研工具。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410121429543053_6906_6748942_3.jpeg实时荧光定量PCR仪技术详解原理 实时荧光定量PCR技术基于PCR（聚合酶链式反应）的基本原理，通过不断循环的变性、退火和延伸步骤，实现DNA或RNA的指数级扩增。与常规PCR不同的是，实时荧光定量PCR在反应体系中加入了荧光染料或荧光探针，这些荧光物质能够与扩增产物特异性结合，并在特定波长光的激发下发出荧光。随着PCR反应的进行，荧光信号逐渐增强，仪器通过实时监测荧光信号的变化，可以绘制出扩增曲线，进而对样本中的目标核酸进行定量分析。 特点 1. 高灵敏度：实时荧光定量PCR技术能够检测到极微量的目标核酸，使得其在低丰度基因表达分析、病原体微量检测等方面具有显著优势。 2. 高特异性：通过设计特异性的引物和探针，实时荧光定量PCR可以实现对目标基因的精确识别，避免了非特异性扩增的干扰。 3. 高精度：结合先进的荧光信号检测技术和数据分析算法，实时荧光定量PCR能够提供准确的定量结果，有助于科研工作者进行精确的数据分析和比较。 4. 快速便捷：现代实时荧光定量PCR仪通常配备有高效的热循环系统和自动化的样品处理功能，大大缩短了实验时间，提高了工作效率。 应用场景 实时荧光定量PCR技术在生命科学领域的应用广泛而深入。在基因表达分析中，它可以用于检测不同组织、不同发育阶段或不同处理条件下基因的表达水平变化；在病原体检测中，它能够快速准确地识别并定量病原体核酸，为疾病诊断和治疗提供重要依据；在遗传病诊断中，实时荧光定量PCR可以检测基因突变、基因缺失或基因重复等异常情况；此外，在药物研发、环境监测和食品安全等领域，实时荧光定量PCR技术也发挥着重要作用。 个人使用心得与推荐 作为一名长期使用实时荧光定量PCR仪的科研人员，我深刻体会到了这一技术带来的便利和优势。在使用过程中，我注意到以下几点对于获得准确可靠的实验结果至关重要： 1. 样本处理：样本的纯净度和完整性对于实验结果至关重要。因此，在进行实验前，需要对样本进行严格的预处理和质量控制，以确保样本中的目标核酸不受污染和降解。 2. 引物和探针设计[size=14px]：引物和探针的特异性是实时荧光定量PCR技术成功的关键。在设计引物和探针时，需要充分考虑目标基因的序列特征、潜在的二级结构以及可能的非特异性扩增等因素，以确保实验的准确性和可靠性。 3. 仪器选择和校准：不同品牌和型号的实时荧光定量PCR仪在性能上可能存在差异。因此，在选择仪器时，需要根据实验需求和预算进行综合考虑。同时，定期对仪器进行校准和维护也是确保实验结果准确性的重要措施。 4. 在我个人的使用体验中，某品牌的实时荧光定量PCR仪给我留下了深刻印象。该仪器不仅具备高效的热循环系统和精准的荧光信号检测系统，还配备了智能化的操作界面和数据分析软件，使得实验操作更加便捷、数据分析更加准确。此外，该仪器还支持多种荧光通道和反应体系的选择，能够满足不同实验需求。 https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/10/202410121429546220_2116_6748942_3.jpeg结语 实时荧光定量PCR技术作为生命科学领域的重要工具之一，其高精度、高灵敏度和高特异性的特点使得它在众多研究领域都发挥着不可替代的作用。通过深入了解实时荧光定量PCR仪的原理、特点和应用场景，并结合个人使用心得和推荐，相信广大科研工作者能够更好地利用这一技术，探索生命科学的奥秘，推动科研事业的进步和发展。

荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于荧光探针的应用，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，克服了常规PCR的许多缺点。如一般PCR产物都需通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色紫外光观察结果或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测，不仅需要多种仪器，而且费时费力，所使用的染色剂溴化乙锭对人体又有害，这些繁杂的实验过程又给污染和假阳性提供了机会。而FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子，其后的过程完全是闭管操作，不需要PCR后处理，避免了常规PCR操作中的诸多弊端。实验一般使用PE公司研制的ABI7100型PCR扩增仪。该仪器具有以下特点：①应用广泛：可用于DNA和RNA的PCR产物定量、基因表达研究、病原体检测及PCR条件的优化等。②独特的定量原理：采用荧光标记探针，经激光激发后荧光量随PCR循环而累积，从而达到定量目的。③工作效率高：内置9600型PCR扩增仪，电脑控制1～2小时全自动同步完成96个样品的扩增及定量。④无须凝胶电泳：无须对样品进行稀释和电泳，只须通过特殊探头在反应管内直接检测。⑤无管道内污染：采用独特全封闭反应管及光电传导系统，无须顾及污染。⑥结果重现性好：定量动态范围高达五个数量级。所以自从此项技术研制成功以来，受到许多科研工作者的重视并在多个领域得到应用。二、原理和方法FQ-PCR的工作原理是利用Taq酶的5’→3’外切酶活性，在PCR反应系统中加入一个荧光标记探针。该探针可与引物包含序列内的DNA模板发生特异性杂交，探针的5’端标以荧光发射基因FAM（6-羧基荧光素，荧光发射峰值在518nm处），靠近3’端标以荧光淬灭基团TAMRA（6-羧基四甲基若丹明，荧光发射峰值在582nm处），探针的3’开端被磷酸化以防止探针在PCR扩增过程中被延伸。当探针保持完整时，淬灭基团抑制发射基团的荧光发射。发射基团一旦与淬灭基团发生分离，抑制作用被解除，518nm处的光密度增加而被荧光探测系统检测到。复性期探针与模板DNA发生杂交，延伸期Taq酶随引物延伸沿DNA模板移动，当移动到探针切断，淬灭作用被解除，荧光信号释放出来（见图）。模板每复制一次，就有一个探针被切断，伴随一个荧光信号的释放。由于被释放的荧光基团数目和PCR产物数量是一对一的关系，因此用该技术可对模板进行准确定量。实验仪器一般使用PE公司研制的ABI7100型 PCR扩增仪，也可用其它PCR仪。如果用ABI7700型反应型反应系统进行实验，反应结束后，通过电脑分析，可直接给出定量结果。如果用其他PCR仪，则需要同时使用荧光探测仪测量反应管中的荧光信号，计算出RQ+、RQ-、△RQ。RQ+代表样品管荧光发射基团发光强度与淬灭基团发光强度的比率，RQ-代表空白管中二者的比率，△RQ（△RQ=RQ+-RQ-）代表PCR过程中荧光信号变化量，经过数据处理，即可得出定量结果。由于荧光探针的引入，显著提高了实验的特异性。探针设计一般应符合以下条件：①探针长度应在20～40个碱基左右，以保证结合的特异性。②GC碱基含量在40%～60%，避免单核苷酸序列的重复。③避免与引物发生杂交或重叠。④探针与模板结合的稳定程度要大于引物与模板结合的稳定程度，因此探针的Tm值要比引物的Tm值至少高出5℃。另外，探针的浓度、探针与模板序列的同源性，探针与引物的距离都对实验结果有影响。 http://www.biomart.cn/upload/asset/2008/07/21/1216476450.gif图.TaqMan PCR反应模式 （A）聚合反应；（B）链置换；（C）裂解； （D）聚合完成（R：FAM；Q：TAMRA，FP：上游引物；RP：下游引物）

荧光定量PCR简介荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据有关统计，在 Medline 数据库中，用“Taqman” 或 ”real time PCR” 作为关键词检索，1996 年是19 篇，1999 年157 篇，到2003 年就高达2984 篇，2009年会是多少呢？我们不得而知。但其迅猛的发展势头却是不可更改的，本公司真诚希望能和众多研究人员共同努力，抓住这一大好时机，为科研事业的发展贡献自身的力量。基于这一目标，本公司长期以来对荧光定量PCR，无论是技术还是多年来的产品，均进行了深入地研究，并及时推出更加优异的荧光定量 PCR技术服务。荧光定量PCR原理荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理：随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值（如下图所示）。荧光域值（threshold）是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍，即：threshold。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364674.jpgCt 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。Ct值与起始模板的关系：研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值如下图所示。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364675.jpg荧光定量检测荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364672.gifSYBR Green I荧光染料与DNA双链的结合双链DNA结合染料的优点：实验设计简单，仅需要2个引物，不需要设计探针，无需设计多个探针即可以快速检验多个基因，且能够进行熔点曲线分析，检验扩增反应的特异性，低的初始成本，通用性好，因此国内外在科研中使用比较普遍。荧光探针法（Taqman 技术）：PCR扩增时，加入一对引物的同时再加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸，两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR 仪检测不到荧光信号； PCR扩增时（在延伸阶段），Taq 酶的 5' － 3' 切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步，这也是定量的基础所在。其过程如下图所示http://www.biomart.cn/upload/asset/2011/01/25/1295364673.gif荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证3 、SNP 检测。检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。4、 甲基化检测。甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症， Laird 报道了一种称作 Methylight的技术，在扩增之前先处理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和 Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。医学研究1、 产前诊断：人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。2、 病原体检测：采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。3、 药物疗效考核：对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。4、 肿瘤基因检测：尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量 PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

基于计算机的测量仪器具有很大的灵活性，应用因而日益普及。通过控制仪器功能，可以开发满足特殊要求的测量系统。对任何测量系统来说，成本是第一个考虑因素。开发一个基于计算机的测量仪器的费用常常比购买一个独立的台式仪器要便宜几倍。这是由于硬件成本较低、软件可重复使用，且一个测试仪器常常可代替若干独立的测量仪器的缘故。 基于计算机的测量仪器与计算机行业联系紧密，它们得益于计算机技术的进步，这包括开放的通信标准、网络服务器和在仪器和桌面应用之间进行电子制表和字处理的简单界面。这些测量仪器也因计算机性能的稳定及价格的降低而获益，从而使基于计算机的测量仪器在没有加价的条件下性能得到持续的提高。 采用校准实现精确测量 大部分测量仪器以精度表的形式提供有关某一测量仪器的测量线路精确性的信息。精度规范表有助于确定测量仪器总的不确定性，然而，这些精确规范仅适用于被成功校准的电路板，因此，你必须在测量调整前后均要运用这些规范来验证板的工作。 测量仪器准确测量物理量变化的能力是按照一定的因子变化的。使用寿命、温度、湿度和暴露在外部环境的情况及误用都会影响测量的准确性。通过对所得测试结果与己知标准进行比较，校准将测量的不确定性进行了量化。它要验证测量仪器是否工作在规定的指标范围内。如果仪器的测量值超过了所公布的不确定性，那么就要调整测量电路以使之符合业已公布的规范。 经过一段时间，用户要对传统的测量仪器进行校准，基于计算机的测量仪器也一样需要校准。用户应当选择具备内部校准(也称自动校准)和外部校准工具的的基于计算机的测试仪器。 内部校准 如果你使用了如示波器这样的仪器，那时你已经完成了内部校准。事实上，当你改变垂直范围设置的时候，大部分示波器已完成了内部校准。基本上仪器将高精确度和板上电压源进行数字化，并将其读数与己知值相比较，然后将校准因子保存在仪器自身携带的电可擦除只读存储器中，这个自身携带的板上电压源也被校准为如NIST之类的大家所知的标准，进行内部校准的主要目的是补偿工作坏境的变化、内部校准温度的变化和可能影响测量的其它因素。 同传统的测量仪器一样，基于计算机的测量仪器应当支持内部校准。基于计算机的测量仪器的内部校准由调用校准测量电路的软件功能来启动。由于测量可立刻进行，并且无须等待这个内部校准无论何时调整垂直范围，因而由软件控制的内部校准技术可节省测试时间。 基于计算机的测量仪器被安装在桌面计算机、PXI/CompactPCI机箱，或VXI/VME 机箱这样的环境中，因为基于计算机测量仪器被安装于多种不同的计算机环境当中，设计人员应当记住基于计算机的测量仪器会受到电磁干扰和电源电压的变化的影响，还要在宽的温度范围下工作。传统的测量仪器由于同个人电脑的集成日益紧密，也面临类似的挑战。 消除电磁干扰的最基本的方案包括：将数字和模拟信号的地平面分开、对电源信号的进行局部过滤、对敏感元件进行屏蔽。为了补偿电压源的变化，可以采用DC-DC转换器提升电源电压，采用电压调节器控制板上电源的电压，采用大电容消除板上电源的谐波。可以采用板上温度传感器和内部校准来完成在操作环境下不同温度的校准。关于上述设计技术的资料，可查询NI网站上一篇题为“以基于PC的数据采集硬件来进行精确测量”的白皮书。

荧光定量PCR仪在国内市场推广从98年开始已经经历了6年，从开拓者PE（ABI）到ROCHE,再到后来鱼龙混杂，各种荧光定量PCR仪纷纷登陆我国市场，使得中国市场成为世界上最为繁荣的荧光定量PCR技术应用市场，笔者由于从一开始就从事该项技术再中国的推广，就亲身经历的几种仪器来谈谈他们的优缺点，抛砖引玉使大家在应用这项技术的过程中提供一定的帮助。荧光定量PCR仪的鼻祖是PE7700（ABI公司推出）。而后从其进入我国市场的时间顺序上分别产生了PE5700、ROCHE的lightcycler、biorad的icycler、澳洲的ROTOR GENE3000等，还有就是在01、02年之后任何一台荧光PCR仪都在中国赚得盆满钵满之后许多荧光pcr仪纷纷进入中国，枫岭、MJ等等许许多多，不一而足。每种仪器在市场推广过程中都会“制造”许多与其他产品不同得优势以获得相对得比较优势，但从笔者多年得使用经历和比较中得出一个结论，那就是无论厂商如何宣传，判断一台荧光PCR仪的好坏的依据不是PCR反应时间（它不是百米赛跑），不是PCR体系大小（它不是蔬菜），不是PCR仪器大小（它不是彩电），而是PCR扩增水平（非仅仅升降温速度）、荧光检测水平和荧光数据分析水平（软件）这三方面。这里笔者先谈谈PCR扩增水平。PCR扩增水平是荧光pcr仪的基础，扩增水平的高低将直接影响整个仪器PCR过程的定量水平。荧光PCR仪与一般PCR仪对PCR扩增水平的要求并不一致。荧光PCR仪除了一般PCR仪对扩增的要求之外，更对不同管的PCR均一性有非常高的要求，管间差是衡量荧光定量PCR仪在扩增方面最主要的技术指标。就以管间差而言，国内目前这些荧光定量PCR仪中，以PE（ABI）和ROCHE的仪器管间差最小。PE公司的仪器无一不是以PE9600为基础，而所有使用过9600的人都不会否认其在扩增方面卓越的品质，特别是在扩增的均一性方面使得PE出品的扩增仪的管间差都非常小，PE7700所达到的水平是其他仪器都很难达到的。也正因为此，PE公司才能够在推出7700标准型之后，在中国推出5700的7700型简化版仪器（全球仅在中国市场销售）。即使5700与7700比较在软件、光路检测系统等等诸多方面十分简陋，5700在实际使用过程中仍能得到较好的结果。可以说，如果没有PE公司在扩增水平上的超强优势，PE公司根本不会生产5700这种简化版垃圾仪器，即便如5700这样简陋的仪器，在当时国内市场中仍没有多少竞争对手。在大家无法承受7700高昂价格的无奈情况下，5700也不韪是一个较为折中的选择，这种局面一直维持到ROCHE的Lightcycler的出现才被打破。ROCHE的Lightcycler为大家除了忍受PE公司的蛮横高价之外提供了第二种选择的机会。笔者认为ROCHE的Lightcycler是除7700之外唯一具有创造力和想象力的产品。ROCHE的Lightcycler原为德国宝灵曼公司自主研制开发的，后因宝灵曼整体被ROCHE兼并才成为ROCHE的品牌产品。所以我们看到ROCHE拥有的PCR和Taqman专利而Lightcycler却与Taqman有很大的差别这样非常奇怪的现象。这只是因为PE最早向ROCHE购买了Taqman和PCR的专有使用权逼得宝灵曼只能另辟蹊径的想出空气加热和毛细管反应系统。也正因为此，让我们通过ROCHE的Lightcycler真正领略了德国人在机械制造方面的创造力和想象力以及高超的机械制造水平。均匀的空气加热解决了半导体加热不一致的问题，毛细管体系用加大接触面积解决了空气作为热源其热效不高的问题。一环扣一环，其技术涵养可见一斑。然而毕竟与我们常规PCR有着巨大的不同，使得我们在使用时无法与常规系统（离心管）进行比较。在常规PCR摸好的条件在ROCHE的Lightcycler上可能得重头来过。并且最突出的问题是毛细管使用不方便和价格昂贵。至于其他仪器，我们或多或少都可以看到其在某些方面对PE7700和ROCHE的Lightcycler的模仿。至于模仿水平的高低，我们以后再说。

化学计量仪器分类 化学计量仪器是指检测物质的组成、结构和某些物理特性的仪器，目前已在工业、农业、国防、科研、食品、制药、环境监测、医疗卫生及资源勘探等领域广泛应用。根据化学检测理论和制造原理，大致可分为以下几类: 1.电化学仪器 它根据被测试样溶液的电化学性质及其变化，测量溶液的电位、电导、电量、电流等电化学参量与被测物质含量之间的定量关系。根据所测电化学参数的不同，常用电化学仪器有酸度计、离子计、电导率仪、电解仪、电位滴定仪、库仑仪、极谱仪等。 2.分子光谱仪器 它根据物质的最小微粒分子与辐射能发生相互作用后，分子吸收不同辐射频率的能量而发生不同能级跃迁，产生吸收或散射光的波长或强度信号来检测物质含量或确立复杂化合物结构。这类仪器种类、型号及规格很多，且国内外经典的仪器也很多，如可见分光光度计、单光束、双光束、紫外可见分光光度计、光栅分光光度计、双光束近红外分光光度计、傅立叶红外光谱仪、荧光分光光度计、磷光光谱仪等。 3.原子光谱仪器 它是依据组成物质分子的原子吸收能量以后，由基态跃迁到激发态，引起辐射光强度改变，而特殊光谱的强度又与发光物质的含量存在定量关系的原理设计制造的。这一类仪器又可分为原子发射光谱仪(如看谱仪、摄谱仪、光电直续光谱仪、电感耦合等离子体发射光谱仪等)、原子吸收光谱仪(如多种型号的原子吸收分光光度计、原子荧光光谱仪、X-射线荧光光谱仪等)。 4.波谱类仪器 它是依据物质在外界磁场作用下，呈现出一定磁特性的原理制造的，如核磁共振波谱仪、电子顺磁共振波谱仪等。磁式仪器通过测定原子核在频率逐渐变化的磁场中的强度就可测定不同原子核吸收的频率，从而获得有关化合物分子结构、化学位移等相关信息。 5.色谱仪 它是依据物质在固定相和流动相之间分配性质的差异，使混合物中的多种成分相互分离、分析和制备的仪器。色谱仪国内外的型号和规格繁多，且自动化程度高。如国内的SP、GC、SQ等系列气相色谱仪，LC、SY等系列液相色谱仪，IC系列离子色谱仪等。 6.质谱仪器 它是通过将待测物质分子离子化，然后按质荷比(m/z)对这些离子进行分离和检测的一种仪器，如质谱仪、ICP质谱仪、气相色谱-质谱联用仪等。 7.气体分析仪器 这类仪器种类繁多，其原理各不相同。它是依据气体试样与光、电、磁、热相互作用后，气体分子发生物理化学特性变化的原理而设计制造的。这一类仪器在石油、化工、环境监测、安全防护等方面广泛应用，如光干涉型甲烷测定仪，汽车排放气体测试仪，一氧化碳、二氧化碳红外线气体分析器，硫化氢气体分析仪等。 8.物理特性仪器 这类仪器制造原理与检测参数各异。如各种类型的黏度计、热量计、熔点仪、浊度仪、露点仪、温度仪、水分仪等。

荧光定量PCR仪选择要点及误区 荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品，您又该如何选择呢？ 首先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区：

目前荧光主要计算还是靠采集峰面积来定量的，所以峰面积的好坏对实验的数据可以说是至关重要的。影响峰面积的好坏原因也是很多的，如读数时间和延时时间的设定决定对峰面积的采集是否完整。载气的流量和屏蔽器的大小也影响着峰面积的好坏，仪器的进样系统和氢化物发生也会影响峰型。还有就是试剂的配比也影响峰型的好坏，大家都来讨论一下峰型的重要性 和影响因素。

机床是制造业的母机，数控机床是机床产品的先进技术体现，特别是高档数控技术是装备制造业现代化的核心技术，是国家工业发展水平、综合国力的直接体现，此次展会汇集了当今世界机床发展和先进制造技术的最新成果，全面展示了我国数控机床产业近几年来高速发展的最新产品和技术。作为数控技术的重要环节——测量设备，在这次展会上展出了一批新技术、新产品，体现了当今测试计量技术发展动向和特点。 测量精度高　　随着现代科技向高精度方向发展，机床作为装备工业的基础发展更应超前，而测量设备更由传统的微米、亚微米精度向着纳米量级精度方向发展。随着超精密加工技术的需要，数控精度愈来愈高，对测量设备的精度要求更高，这次展会展示了一批纳米量级的测量设备，除各种激光干涉仪外，光栅测量技术也达到纳米量级。如海德汉的LIP382超高精度直线光栅尺，其测量步距可以达到1nm。基于测量技术的发展，纳米量级的机床成为现实，如上海机床厂展出的纳米级精密微型数控磨床成为展会的一个亮点。测量速度高　　现代制造业进行的是大规模、大批量、专业化生产，需要多参数、实时在线测量，故要求测试仪器的测量速度高、设备轻便、操作界面直观。如激光干涉测量技术作为精密测量的一种重要方法，各种激光干涉测量系统向着轻巧、便携、高测速的方向发展。雷尼绍XL-80干涉仪款型小巧，可提供4m/s最大的测量速度和50kHz记录速率，可实现1nm的分辨率；激光跟踪仪可实现快速数据采集与处理，有利于测量精度的提高。各种影像测量设备利用触摸屏可以方便直观地实现特征尺寸的测量。三维测量多样化　　三维测量技术向着高精度、轻型化、现场化的方向发展。传统基于直角坐标的三坐标测量机经过50年的发展，其技术愈加成熟，测量更加快捷，功能更加强大。这次参展的国内外数十家坐标测量机生产厂商，各具特色，特别是国内很多厂家推出实用廉价的各种三坐标测量机，说明三坐标测量技术在我国已经走向全面实用化、特色化发展的道路。除直角坐标测量系统外，极坐标测量仪器体现出自身独特的优势，如FARO、ROMER等厂家生产的激光跟踪仪对大尺寸结构的装备现场具有方便灵活的特点。对于小尺寸测量，FARO、ROMER等生产的关节臂测量机因其低廉的成本、较高的精度、现场方便的操作等优势，在汽车等行业展现出广阔的应用前景。测量智能化　　测量设备借助于计算机技术向着智能化、虚拟化的方向进一步发展。测量仪器的虚拟化、接口的标准化以及测量软件的模块化，加速了测量技术的发展，使测量仪器的应用更加方便、直观、智能。根据测量需求以及测量对象的不同，可基于同一软件平台使用不同的仪器协同工作，采用不同的测量软件模块，实现了广普测量仪器的网络化、协同化，提高了测量的自动化水平。在这次展会上，国内一些独立的测量软件公司进行了参展，对于测量设备的智能化、网络化具有推动作用。　　这次展会展示了当今工业测量设备的新技术、新产品。但也同时看到，我国在测量仪器制造特别是高精度仪器制造方面缺乏自主创新的成果，一些高精度测量仪器在国内还没有相关单位能够生产。通过这次展会，对推动我国几何量测量设备的发展具有实际意义。

农残分析基本概念 （1）检出限 检出限（limitofdetection）衡量仪器或方法灵敏度（检出目的物）的指标。要求低于测定目的物的MRL值（最好低一个数量级）。在色谱图上可清楚确认的分析目的物色谱峰的下限。通常为噪音3倍（S/N=3）。 （2）仪器检出限 无样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种分析仪器能够检出分析目的物的最小量或最低浓度。方法检出限有样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种方法能够检出分析目的物的最小量或最低浓度。 （3）定量限 定量限（limitofquantitation）衡量仪器或方法灵敏度（定量目的物）的指标。在色谱图上可准确定量分析目的物色谱峰值的下限。通常为噪音10倍（S/N=10）。 （4）仪器定量限 无样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种分析仪器能够准确定量分析目的物的最小量或最低浓度。方法定量限有样品基质存在，在与样品测定完全相同的条件下，某种方法能够准确定量分析目的物的最小量或最低浓度。 老标准多采用检出限，新标准都开始采用定量限，定量限每种基质略有差别，像121,113方法大多数定量限都差不多。方法验证没有基质做定量限是很大的一个工程量

本想在附件中发上来但总是要让我去等验证，只好这样发了[em29]美国应用生物系统公司ABI Prism 7000型荧光定量PCR仪操作手册快速入门指南美国应用生物系统中国公司 技术服务部2003年ABI Prism 7000中文操作手册目录一. 开机............................................3二. 实时定量的软件运行..............................31. 新建文件.....................................32. 探针设置.....................................43. 填样品表.....................................44. 参比荧光.....................................55. 循环参数.....................................56. 启动扩增61. 数据分析.....................................62. 基线设定......................................63. 线性图谱......................................64. 原始数据......................................75. 标准曲线.......................................76. 实验报告.......................................7四. 终点读板的软件运行.............................71. 新建文件.......................................82. 探针(DETECTOR)设置..............................83. 位点(MARKER)设置................................84. 填样品表........................................85. 参比荧光.......................................86. 终点读。。。。。。。。。。9五. 终点读板的数据分析...............................91. 数据分析...........................................92. 信号分布...........................................93. 基因分型...........................................94. 保存结果...........................................9六. 日常维护..........................................101. 荧光污染的检查与处理...............................102. 检测器光源的更换流程...............................102ABI Prism 7000中文操作手册ABI Prism 7000型荧光定量PCR仪快速入门指南一. 开机1. 确认电脑与主机的数据通讯线(灰色USB连线)连接正确。2. 确认电脑处于外接电源供电状态。3. 启动电脑，以Administrator用户名登录，进入Windows2000操作系统。4. 待桌面图标出现后，打开7000主机的电源。5. 待主机的电源指示灯点亮后，启动7000 SDS应用软件。在进行实验之前，请先检查样品加热模块以确定它没有受到荧光污染，具体方法请按照第6节的“荧光污染的检查与处理”流程进行。

[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403070915305401_3453_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]　　ATP测量仪是一种用于测量环境中ATP(三磷酸腺苷)浓度的仪器。ATP是生物体内能量转换的重要分子，广泛存在于各种生物体内，包括细菌、病毒、真菌等微生物。因此，ATP测量仪通常被用于环境监测、食品安全、医疗卫生等领域，以检测微生物的存在和数量。　　ATP测量仪的工作原理是基于荧光素酶和荧光素的反应。荧光素酶能够催化ATP与荧光素发生反应，产生荧光信号。荧光信号的强度与ATP的浓度成正比，因此可以通过测量荧光信号的强度来推算ATP的浓度。　　ATP测量仪具有快速、简便、灵敏度高、可重复性好等优点，因此在环境监测、食品安全、医疗卫生等领域得到了广泛应用。在环境监测方面，ATP测量仪可以用于检测水、土壤、空气等环境中的微生物污染情况，为环境保护提供科学依据。在食品安全方面，ATP测量仪可以用于检测食品中的微生物污染情况，保障食品的安全性和卫生质量。在医疗卫生方面，ATP测量仪可以用于检测医疗器械、手术室、病房等环境中的微生物污染情况，为医疗卫生提供有效的监测手段。　　除了以上应用领域，ATP测量仪还可以用于其他领域，如生物研究、制药工业等。在生物研究方面，ATP测量仪可以用于研究细胞代谢、微生物生长等方面的问题。在制药工业方面，ATP测量仪可以用于检测药品生产过程中的微生物污染情况，确保药品的质量和安全性。　　总之，ATP测量仪是一种重要的环境监测仪器，具有广泛的应用前景。随着科学技术的不断发展，ATP测量仪的性能和应用范围也将不断提高和扩大，为环境保护、食品安全、医疗卫生等领域的发展提供有力的支持。

[font=宋体][size=14.0pt]荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]实验失败原因分析 ——荧光信号检测出了问题[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]近日某实验室来电，反映其荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]仪在成功检测了一次病毒核酸后，连续几次检测均失败，表现为阳性对照也无[/size][/font][size=14.0pt]Ct[/size][font=宋体][size=14.0pt]值，请求给予技术支持。[/size][/font][size=14.0pt]1[/size][font=宋体][size=14.0pt]背景[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]该实验室荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]仪系进口品牌，今年[/size][/font][size=14.0pt]4[/size][font=宋体][size=14.0pt]月份安装调试，当时检测结果较理想。[/size][/font][size=14.0pt]5[/size][font=宋体][size=14.0pt]月份该实验室进行了一次病毒核酸检测，提取采用柱式[/size][/font][size=14.0pt]DNA[/size][font=宋体][size=14.0pt]提取试剂盒，未设阴性对照和阳性对照；扩增采用配套的核酸扩增试剂，设置了阴性对照和阳性对照，检测结果较理想。但在后续的检测工作中，却连续多次实验失败，表现为整个扩增过程荧光信号均为一条几乎无起伏的直线。[/size][/font][size=14.0pt]2[/size][font=宋体][size=14.0pt]思路[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]影响荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]检测结果的因素可分为三个阶段，一是核酸提取，二是核酸扩增，三是荧光信号检测。为了分析是哪个阶段出了问题，我们设计了以下方案：[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第一步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]该实验室的扩增试剂，看有无检测结果。如有则说明核酸提取环节存在问题，如无则说明可能是核酸扩增环节或荧光信号检测存在问题，继续进行第二步分析；[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第二步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]经验证可以得到结果的扩增试剂（本实验室在用的扩增试剂及引物探针），看有无检测结果。如有则说明核酸提取环节存在问题，如无则说明可能是荧光信号检测存在问题。[/size][/font][size=14.0pt]3[/size][font=宋体][size=14.0pt]分析验证[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]方案确定后，带上本实验室已知结果的核酸（包括[/size][/font][size=14.0pt]Ct[/size][font=宋体][size=14.0pt]值[/size][/font][size=14.0pt]25[/size][font=宋体][size=14.0pt]、[/size][/font][size=14.0pt]28[/size][font=宋体][size=14.0pt]、[/size][/font][size=14.0pt]31[/size][font=宋体][size=14.0pt]、[/size][/font][size=14.0pt]34[/size][font=宋体][size=14.0pt]及阴性），以及本实验室在用的扩增试剂及引物探针，到该实验室开展分析验证。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第一步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]该实验室的扩增试剂上机检测，结果荧光信号仍为一条几乎无起伏的直线。说明可能是核酸扩增环节或荧光信号检测存在问题。为明确究竟是何原因造成实验失败，继续开展第二步分析验证。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]第二步：利用已知结果的核酸[/size][/font][size=14.0pt]+[/size][font=宋体][size=14.0pt]经验证可以得到结果的扩增试剂上机检测，结果荧光信号还为一条几乎无起伏的直线。因本次使用的扩增试剂和引物探针是本实验室一直在用的，已知可以得到正确的扩增结果，所以初步判断可能是荧光信号检测存在问题。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]到此，分析验证告一段落，实验失败极有可能是荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]仪出现故障，最大可能是荧光信号检测存在问题。目前，该实验室已电告设备厂家，要求派工程师上门维修。[/size][/font][size=14.0pt]4[/size][font=宋体][size=14.0pt]思考[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]荧光定量[/size][/font][size=14.0pt]PCR[/size][font=宋体][size=14.0pt]实验失败看似非常头痛，实则不然。只要理清思路，逐一分析验证核酸提取、核酸扩增、荧光信号检测各个环节，即可快速判断问题所在。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]另外还有一点不吐不快的感受，作为一个世界著名品牌产品，实验室选择它的出发点就是该设备的准确性和稳定性，但这台设备只进行过一次检测就出现故障，实属不该。[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt][font=&]5[/font]续[/size][/font][font=宋体][size=14.0pt]最新消息，据该实验室反馈，厂方工程师上门检修，发现是作为荧光光源的灯泡坏了。更换灯泡后，该实验室已能检测出正确结果。[/size][/font]

布鲁克的ARTAX 400 X射线荧光光谱仪，有无标样的定量软件或者方法吗，本人咨询过工程师，都对这个型号的不了解。大家可以讨论下，有没有经验型的方法可以自己去半定量，除过标样法

明克斯便携式表面粗糙度测量仪T1000A型是高精度的便携式仪器，主要用于机械加工企业和计量部门在生产现场对工件表面质量进行检测。可测量平面、圆柱母线、内孔、曲面等表面的粗糙度。 测量仪T1000A的测量原理为触针法，差动电感传感器，测量范围是触针最大位移：±50μm；Rt≤80μm；Ra≤8μm ，示值精度≤±10%，打印垂直放大比：自动/500/2000/10000倍，打印水平放大比10/40/100倍，驱动箱滑行速度：0.15，0.5，1mm/s，传感器测针：金刚石圆锥，锥角90°，针尖半径5μm ，工作温度：5℃-40℃，电源采用了内置可充电电池组，外接专用充电器。

由于测量仪器在不同的频段，即使功能相似的仪器，其工作原理与结构常有很大的不同。而对于不同使用目的，也常使用不同准确度的仪器。例如，作为计量工作标准的计量仪器常具有最高的精度，实验室中一般使用较精密测量仪器进行定量测量，而生产和维修场合，则常使用简易测试仪器进行测量。实际上在选择一台电子仪器时，要考虑的远不止这些，通常选择仪器要考虑的问题一般包括：（1）量程。即被测量的最大值和最小值各为多少？选择何种仪器更合适？（2）准确度。即被测量允许的最大误差是多少？仪器的误差及分辨率是否满足要求？（3）频响特性。即被测量的频率范围是多少？在此范围内仪器频响是否平直？（4）仪器的输入阻抗在所有量程内是否满足要求？如果输入阻抗不是常数，其数值变化是否在允许的范围内？（5）稳定性。两次校准之间容许的最大时间范围是多少？能否在长期无人管理下工作？（6）环境。仪器使用环境是否满足技术条件要求？供电电源是否合适？（7）隔离和屏蔽。仪器的接地方式是否合适？工作环境的电磁场是否影响仪器的正常工作？（8）可靠性。仪器的规定使用寿命有多长？维护方便否？　　当然，实际选择仪器时，不一定要考虑上述全部项目。例如，测量音频放大器的幅频特性，主要考虑测量仪器的频率范围和量程是否合适？测量误差是否在允许的范围内？我们可以根据实验室现有仪器仪表，挑选电子电压表（毫伏表）或示波器作为测量仪器。使用时，注意给仪器预热、调零和校准。为保证等精度测量，实验时应尽可能用同一组仪器。

从1996年ABI公司推出了全球第一款荧光定量PCR以来，经过10几年的发展，由于荧光定量PCR仪的在科研、检测和诊断领域的广泛应用，市场规模也不断扩大。已有多家国内外生产厂商涉足研发生产,就连Eppendorf公司也于2006年底推出了自己的荧光定量PCR仪。这些产品良莠不齐，令研究人员选择是不免挑花了眼。于是很多资金充足的实验室为了保险起见都选择购买了几家最有名气公司的产品，如ABI的7500和7900，罗氏Lightcycler2.0，Lightcycler480，Eppendorf mastercycler等产品。但是这些名牌产品因为品牌溢价所以价格都高高在上，另很多经费不是很充足的实验室望而却步。这些产品的性能有大量文章做过比较，在这里就不做过多描述。但是品牌不是唯一，科研工作者更不应该迷信品牌，依靠自己真实的实验体会做的选择才是最准确的。下面综合大量的科研人员的实验体会着重向广大科研工作者介绍一些现在市场上高性价比的几款荧光定量PCR仪。 进口篇1.Bio-rad伯乐在国际上属于中端品牌，在中国最初由于电泳系统被广大科研用户所熟知。伯乐的PCR产品线也比较丰富，收购MJ Rearch之后进一步丰富的PCR的产品线。目前伯乐的IQ5荧光定量PCR仪是一款性价比较高的产品，采用96孔Peltier半导体加热，5通道，12bit CCD检测，而且还带有梯度功能。售价也是远远低于ABI7500，所以这两年来用户较多。但有用户反应说这款仪器的检测灵敏度不太好，另外维修率比较高。实际情况大家还可以通过多咨询老用户进一步了解2.BIONEER国内的用户可能听说过这个品牌的不多，只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家，引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域，目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较，很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM 96，产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热，5通道，16bit CCD检测，也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样，而且检测的CCD像素还要高于IQ5, 理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些，号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少，了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系他们的子公司柏业贸易（上海）有限公司进行试用，新公司都注重是售后服务，大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。3.StratageneStratagene现在为安捷伦公司的子公司，也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多，处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热，5通道，PMT检测器，但是没有梯度功能，用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙，噪音比较大，而且边缘的孔做实验的效果不太好，但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在，但是Stratagene的价格要实惠很多。国产篇　　现在国内的生命科学研究市场基本上是被国外的跨国公司所垄断，国内的厂商只能靠底价来占领一小部分市场，平心而论国内的厂商在技术和工艺上面确实和国外厂商有一定的差距。但这也是由于我国的基础研究水平和制造工艺起步都比较晚的客观原因造成的，再加上国内厂商的经营和财力等问题，所能提供的员工待遇与跨国公司也有一定的差距，所能吸引的人才也受到限制。有国内生产仪器公司的老总就直言不讳的提出，他们暂时还没有能力请国际一流的设计师和改进生产工艺的能力，只能是靠低价来占领一部分市场待原始积累达到一定程度之后再改进产品争取进入更高一个级别的市场中。当然我们也看到国内的厂商也是在不断的进步之中，随着越来越多的一流人才加入到生物技术领域中，相信生物技术市场也会像当年的家电市场一样慢慢的将国外厂商的垄断局面打破并夺回大部分的市场。下面就介绍几款国内厂商生产的荧光定量PCR仪1.杭州博日（Bioer）提到国产PCR仪就不得不提到杭州博日公司，和Takara一样属于日本在华投资较早的生物技术企业。博日公司一度在低端PCR仪领域占领了很大的市场，虽然近年来随着其他国产品牌的冲击，市场占有率已经严重下降，但是总体上还是处于领先的水平。该公司的荧光定量PCR仪产品FQD-48A是4通道，48孔Peltier半导体加热。相对于前面介绍的几款进口产品相比较样品通量和检测光路均较低，但也可以满足实验样本不是很大的用户使用。而且博日产品的价格比前面介绍的几款进口产品的价格也要更低一些。2.西安天隆西安天隆的荧光定量PCR产品TL988是一款真正的依靠国内自主研发而成多通道荧光定量PCR仪，TL988设计比较灵活，可选36孔与96孔加热模块，但通道和多通道几种组合模式。最多可达5通道，但不足之处是还是使用单激发虑光片，激发光特异性不好，导致检测灵敏度较低。据了解在国内的医疗系统还是一些用户，科研系统的用户比较少。3.上海宏石上海宏石生产的SLAN®实时荧光定量PCR是一款在国内市场反应不错的仪器，在国产荧光定量PCR仪的性能比较中是属于检测灵敏度和重复性最受认可的仪器。不足之处是光路通道和样品孔数量比较小。最大只有三通道和48个样品孔的机型，不能满足较大样品量的客户需求。目前在医院临床检验科中是国产荧光定量PCR仪销量最高的仪器，在科研系统用户比较少。小节：目前大部分的市场份额还是被国外厂商所占领，尤其是在科研, CDC和血站等系统，国外厂商更是处于垄断地位。但是目前国内的厂商也在医院临床检验系统占有一席之地。科研人员和医疗工作者还是要根据自己的实际需求和亲身体会做出选择，“选对的，不选贵的”这句名言用于购买荧光定量PCR仪也同样适用。

2012年1月10日，2011年北京光谱年会在北京国家图书馆召开。在原子光谱分析技术及仪器方面的发展指出了：原子荧光仪器小型化、专用型，拓展分析元素能力，是国产AFS分析技术发展的趋势。http://www.instrument.com.cn/news/20120112/073066.shtml 原子荧光一直是国产原子光谱仪器的强项。BCEIA 2011上，各仪器公司纷纷推出专用化的原子荧光重金属检测仪以适应国内分析需要。设计专用小型化仪器，拓宽原子荧光分析元素的能力是仪器发展的趋势，突破局限的氢化物发生方式，采用更高温度原子化手段必将成为发展的重点。 原子荧光光谱仪(AFS)的基本原理是，基态原子的外层电子吸收特征辐射能量被激发到高能级，受激发原子的外层电子从激发态(高能级)回基态(低能级)时会发射一定波长的辐射(原子荧光)，因荧光的强弱与样品中待测元素的含量成线性关系，因此可对样品中待测元素进行定量。它是有阴极灯、检测系统、原子化器、蒸汽发生系统、泵等构成。砷、铅、镉、锑、铋、锗、硒、碲等元素的氢化物具有挥发性，通常为气态，利用硼氢化钾或硼氢化钠作为还原剂，将样品溶剂中的待分析元素的原子还原为挥发性共价气态氢化物(或原子蒸汽)，然后借助载气将其导入原子化器，在火焰中原子化而形成基态原子。原子荧光光谱仪(AFS)在20世纪60年代提出，具有中国特色，是优良的痕量分析技术，广泛应用于农业环境、食品、生物医药等领域，如测定土壤、植物、化肥中的Hg、As、Pb、Se、Cd、Ge、Bi、Sn、Sb、Te，测定饮料、水、蔬菜、粮食、肉制品中的Hg、As、Pb、Se、Cd、Ge、Bi、Sn，测定中药、制剂、生物组织中的Hg、As、Pb、Se、Cd、Ge、Bi、Sn、Sb、Te等。 来自清华大学分析中心的张四纯博士介绍了“食品安全领域的砷形态分析”。砷形态分析测定方法有银盐法、砷斑法、气象色谱法、冷阱氢化物分离法、电化学法、气相化学发光法。最好的方法是HPLC和ICP-MS联用，但是检测的成本很高。张博士所在的课题组研究了一种基于介质阻挡放电的原子荧光原子化器，有效地降低了放电产生的背景，并利于实现小型化。并于吉天仪器公司合作开发生产了HPLC和原子荧光联用仪器。新型原子荧光光谱仪的相关创新点(1) 集成化设计的高性能顺序注射进样系统；(2) 高精度(0.001MPa)数字化压力监测系统；(3) 吹扫式压力平衡四通混合模块，微死体积PEEK单向阀，获得最小的剪流和紊流，使得信号峰形具有无与伦比的平滑度和重现度；(4) 全新的终身免维护喷流型三级气液分离器，自动排出废液；(5) 高效新型全陶瓷红外加热，精确控温石英炉原子化器；(6) 无需屏蔽气的单层炉管设计,可大大节省氩气消耗；(7) 智能化漏液、气路压力和原子化室避光实时报警，保证仪器的正常工作状态；

刀具测量仪器具有水平及垂直两种光学测量系统，可以在一台仪器上实现刀具的全部测量，是测量复杂刀具的理想工具。刀具测量仪是由花岗石台面作为底座和立柱、精密滚珠丝杆传动、精密线性导轨导向等部件组成，采用独立的工程学设计工作台，配有完整的配电箱，可有效降低温度变化对测量仪器的影响。 刀具测量仪具有使用简捷，高度精确的优点，整个对刀过程不需要在CNC机床上进行，有效避免对工件的损坏以及机订对刀的困难和危险，仪器采用稳定的整体式花岗岩制造，气浮导轨，坚实、抗振动的花岗岩结构和集成的温度补偿器使测量结果能保持可靠的长期稳定性。刀具测量仪采用高分辨率CCD B/W相机，能够用于对刀具边缘进行无接触表面光及透射光测量，和对刀头几何图形进行表面光测量，采用CNC导轨控制以及4个控制轴。确保了仪器完整的精度，确保了刀具测件能够快速、准确的定位。 刀具测量仪主要适用于测量数控机床、加工中心和柔性制造单元上所使用的镗铣类刀具切削刃的精确坐标位置，并能检查刀尖的角度，圆角及刃口精况。刀具测量仪还可用于钻孔、铣削刀具或是极度复杂的切削刀具以及切削钢的制造或精磨。