请问各位老师,我用岛津高效液相色谱测量氨基酸含量时,用的OPA柱前衍生化法,可是同样条件下一个样品,测量结果的保留时间,峰面积的重现性很差,峰面积明显不同,保留时间差0.5分钟左右,可是师姐用这台仪器测量藻毒素重现性就没有问题,我可以认为是OPA衍生不稳定导致的吗?会有这种可能吗?那大家一般是如何解决的呢?谢谢了,求救救孩子趴!
国标上用氨基酸测定仪来测定氨基酸含量,但我们没有这个仪器,现在想用液相色谱仪来测,好像要用柱前衍生化方法来测,苦于没有相关含测的资料,哪们同仁有的话请在这里共享.谢了.
高效液相色谱测氨基酸含量(SIGMA 混合标样的问题)/17种氨基酸出峰顺序?
[b][font=宋体]问题描述:如何采用液相色谱测定氨基酸?对仪器配置有哪些要求?有哪些注意事项?[/font][font=宋体]解答:[/font][/b][font=宋体]([/font]1[font=宋体])液相色谱通常无法直接测定氨基酸,需要对氨基酸进行衍生,衍生的方式可采用柱前衍生和柱后衍生,柱前衍生有专门的试剂包,许多分析仪器厂家有相关的应用资料;柱后衍生需要相应的衍生装置和衍生试剂。[/font][font=宋体]([/font]2[font=宋体])仪器配置方面,液相色谱仪首先需要具有梯度洗脱功能;防止温度波动导致保留时间的漂移,因此需要配备柱温箱。氨基酸衍生产物具有紫外和荧光响应,可以配置紫外检测器、二极管阵列检测器或荧光检测器进行检测。如果采用在线柱后衍生方式进行测定,还需配备柱后衍生装置。[/font][font=宋体]([/font]3[font=宋体])由于氨基酸测定种类较多(通常是[/font]18[font=宋体]种游离氨基酸),另外样品基质较为复杂,采用液相色谱测定氨基酸时,通常会出现保留时间漂移、分离度下降、杂质干扰等现象。[/font][font=宋体]([/font]4[font=宋体])液相色谱法测定食品中的氨基酸含量,可以参考:[/font]SN/T 5223-2019[font=宋体]《蜂蜜中[/font]18[font=宋体]种游离氨基酸的测定[/font][font=宋体]高效液相色谱[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]荧光检测法》、[/font]QB/T4356-2012[font=宋体]《黄酒中游离氨基酸的测定[/font][font=宋体]高效液相色谱法》。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进:[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]
[b](1)参考标准GB/T 5009.124-2003 《食品中氨基酸的测定》(2)应用背景[/b][align=left][b]我国大多数国民中有近70% 的蛋白质由粮食供给。蛋白质的营养质量主要取决于氨基酸的组成与比例,尤其是必需氨基酸的组成与比例,植物性蛋白往往相对缺少赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸,如大米和面粉蛋白质中赖氨酸含量最少。氨基酸的含量和比例是糕点营养评价的重要组成部分。[/b][/align][b](3)推荐解决方案高效液相色谱仪柱后衍生法色谱条件: 色谱柱:SMT SCX 阳离子交换柱4. 6 mm × 150 mm,5 μm; 流速:0.4mL/min; 进样体积:20μL;柱温:程序升温:初始温度34℃保持12min,以1.3℃升温至65℃保持16.1min,接着以1.3℃/min升温至70℃保持11.1min,然后以-40℃降温至34℃保持7min;检测器波长:570nm。[img]http://www.tianjinlanbo.com/uploads/allimg/151229/09535331c-3.png[/img] 柱后衍生条件:衍生剂:茚三酮;流速:0.3mL/min; 衍生温度:45℃;标准色谱图:[img]http://www.tianjinlanbo.com/uploads/allimg/151229/095353DN-4.png[/img](4)推荐配置:[/b][list][*][b]Series4000系列四元高压梯度液相色谱仪[/b][*][b]UVD紫外检测器[/b][*][b]兰博PCR柱后衍生系统[/b][*][b]AS1000自动进样器[/b][*][b]SMT C18 4. 6 mm × 150 mm,5 μm[/b][*][b]转速≥5000转/分钟的离心机[/b][/list]
反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸 氨基酸是烟草中的一类重要化学物质,在烟草调制、醇化或发酵、加工直至燃烧过程中,游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应,生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物,某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物,如苯甲醇、苯乙醇等。氨基酸含量与烟草制品的吃味有着密切的关系,氨基酸在燃烧裂解过程中一般形成具有刺激性的含氮化合物,对烟气香吃味产生不良影响,个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分。一般说来,氨基酸含量太高,烟气辛辣、味苦、刺激性强烈;含量太低时烟气则平淡无味缺少丰满度。因此对氨基酸的分析是一项很有意义的工作,二十世纪60年代以来,国内外在这方面做了大量的工作[1-5]。 植物游离氨基酸样品的制备,国内外采用的提取剂和纯化方法各不相同。据文献报道[6-7],盐酸、不同浓度的乙醇溶液均可以用来提取植物组织中的游离氨基酸;提取液纯化则有用阳离子交换树脂、5%磺基水杨酸、活性炭或乙醚等方法。本实验对不同的提取方式和不同的纯化方法进行了对比研究,确定提取烟叶中游离氨基酸的较佳提取剂和纯化方法。提取、纯化后的样品,采用OPA、FMOC联合柱前衍生反相高效液相色谱法对烟叶中的游离氨基酸进行了测定。该方法使带氨基和亚氨基基团的氨基酸能够被同时测定,且得到较好的定性定量结果。 1 实验 1.1 仪器 Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪(带可变波长紫外检测器和自动进样器),PE公司Lambda Bio40 紫外-可见分光光度计。 1.2 试剂 正缬氨酸(Norvaline,内标),OPA ,FMOC,均为色谱纯,Agilent公司提供;硼酸缓冲溶液,Agilent公司提供; 醋酸钠(NaAc),分析纯,中国医药(集团)上海化学试剂公司;三乙胺(TEA),四氢呋喃(THF),乙腈(CH3CN),甲醇(MeOH),均为色谱纯,Fisher公司试剂; 氨基酸标样包括:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、组氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、苏氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、酪氨酸(Tyr)、胱氨酸(Cys)、缬氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、脯氨酸(Pro),均为生化试剂,中国医药(集团)上海化学试剂公司; 苯乙烯阳离子交换树脂(732型),天津树脂厂。 1.3 样品处理 将烟叶在烘箱中恒温40℃烘干至恒重,粉碎,过80目筛,筛下物为实验用烟样粉末,置于广口瓶中备用。准确称取烟样粉末1.000g于干燥的洁净试管中,用一定浓度的乙醇溶液室温超声波提取半小时,过滤,相同浓度的乙醇溶液洗涤,再提取一次,合并后的滤液用阳离子交换柱洗脱,然后用95ml 4mol/L氨水淋洗阳离子交换柱,淋洗液恒温浓缩至干,最后用3ml 0.1mol/L稀盐酸溶液溶解浓缩物,将此溶液离心分离20min,0.45μm微孔滤膜过滤,加入浓度为5nmol/μ1的内标10μ1,定容至50ml,HP1100液相色谱仪进行氨基酸分析。 样品自动柱前衍生化:Agilent公司G1313A自动进样器进样。程序为:吸取5μl硼酸缓冲液,再吸取1μ1 OPA试剂,洗针一次,吸取样品2μl,原位混合6次。吸取1μl FMOC试剂,洗针一次,原位混合3次,进样。 1.4 色谱条件 色谱柱:Hypersil AA-ODS C18 2.1×200mm 流动相A:1.36±0.025g醋酸钠,加入500ml纯水溶解,加90μl三乙胺,用1%醋酸调pH=7.20±0.05,再加入1.5ml四氢呋喃,混合均匀。 流动相B:1.36±0.025g醋酸钠,加入100ml纯水溶解,用1%醋酸调pH=7.20±0.05,将此溶液加至200ml乙腈和200ml甲醇的混合物中,并混合均匀。 流速:0.45ml/min 柱温:40℃ 紫外检测波长: 0~16min, 338nm; 16~25min,262nm 淋洗梯度:见表1 表1 流动相的淋洗梯度表 Table 1 The gradient time table of mobile phase 序列 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%) 流速(ml/min) 1 0.00 100.0 0.0 0.450 2 15.50 40.0 60.0 0.450 3 18.00 0.0 100.0 0.450 4 21.00 0.0 100.0 0.800 5 23.90 0.0 100.0 0.800 6 24.00 0.0 100.0 0.450 7 25.00 100.0 0.0 0.450 1.5 氮基酸的定性 用标样色谱图、文献参照和标样加入的方法,通过对照保留时间进行定性,对氨基酸的出峰顺序加以确认。 1.6 内标法定量 准确移取浓度为10 pmol/μ1、25 pmol/μ1、50 pmol/μ1、100 pmol/μ1、250 pmol/μ1、500 pmol/μ1、1000 pmol/μ1的氨基酸混合标样100μl于带内衬管的样品瓶中,再加入250pmol/μ1内标溶液100μl,充分混合,液相色谱分析,仪器自动计算各氨基酸的标准曲线。
人凝血因子VIII中氨基酸含量测定摘要 目的: 建立用高效液相色谱法测定人凝血因子VIII中氨基酸含量。方法: 采用6 - 氨基喹啉- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 为衍生剂,与氨基酸柱前衍生后,用Agilent 1200 高效液相色谱仪,AccQ·Tag C18柱( waters 150 mm ×3. 9 mm,4 μm) ,以水Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液和乙腈进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37 ℃,进样量10μL。结果: 各氨基酸在32 min 内测定完毕,回收率为98.7% ~ 101.5%。RSD 均小于1. 5%。结论: 本法分离度好,快速、简便,可作为产品的质量控制方法。关键词: 6 - 氨基喹啉- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯; 人凝血因子VIII; 甘氨酸; 衍生物; 梯度洗脱; 高效液相色谱法;氨基酸; 含量测定人凝血因子VIII,本品对缺乏人凝血因子礓所致的凝血机能障碍具有纠正作用,主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状及这类病人的手术出血治疗。该药物制备过程中使用了氨基酸( 精氨酸、丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、盐酸赖氨酸、脯氨酸 等) 做稳定剂,为了保证药品质量和用药安全,应对其中氨基酸的含量进行控制。该法依据过量的6 - 氨基喹啉基- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 在一定条件和氨基酸形成稳定的衍生产物( 柱前衍生) ,用高效液相色谱法测定衍生产物,根据衍生产物的含量计算人凝血因子中各氨基酸的含量。1 仪器和试药1200 高效液相色谱系统( 美国Agilent 公司) ,配置低压四元梯度泵、1314B 紫外吸收检测器、自动进样器、柱温箱、Chemistations 化学工作站; Sartorius CP225D 电子微量天平( 德国Sartorius 公司) ; SartoriusPB - 21 型pH 计( 德国Sartorius 公司) ; LDZ5 -2 低速自动平衡离心机( 上海医用离心机厂) 等。各标准品均来自于中国食品药品检定研究院2 色谱条件及系统适用性试验色谱柱: Waters AccQ·Tag C18色谱柱( 3. 9 mm ×150 mm) ; 流动相: 水为溶剂D,Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液( A) - 乙腈( B) - 水( D) ,柱温:37 ℃; 检测波长: 248 nm。精密量取对照品溶液与供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图32 min。梯度洗脱条件表见表1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508311802_563771_1637386_3.png
复方氨基酸注射液 含量测定 是用液相色谱吗?哪位大侠知道怎么弄的,指导我呀。谢啦! 我13914681818 wcj.yc@163.com
最近要测试溶液中的16种氨基酸,没有氨基酸测定仪,只有岛津的高效液相色谱仪。以前没有测过这些,故求助一下。首先,我现在头疼的是AQC衍生剂去哪里买,Waters的不考虑,太贵了。请问大家有没有推荐的别的可以用的衍生剂?
应用近红外技术快速测定饲料原料氨基酸含量通常,饲料原料的氨基酸含量是通过离子交换(IEC)或高效液相色谱(HPLC)方法测定。这些方法由于费用极其昂贵,而且所需时间很长,用于饲料厂的配方调整和质量控制,不切实际。也可以通过测定饲料原料的干物质和粗蛋白含量,回归预测氨基酸含量(NRC,1998),但是,这种折中的方法推测的饲料原料的氨基酸含量与其实际值差异较大(丁丽敏等,2002),直接用于生产,会造成较大的损失。在实际生产中,饲料厂在制定饲料配方时,饲料原料中所用的氨基酸含量只好参考数据库中推荐的平均值,但推荐的平均值无法反应特定原料氨基酸含量的变异。因此,饲料研究和生产人员一直在寻找一种快速、廉价的测定饲料原料氨基酸含量的方法。 过去人们认为,近红外(Near-Infrared Reflectance Spectroscopy,简称NIRS)技术不适用于测定饲料原料氨基酸含量,因为原料中氨基酸含量过低。但是,近年来,随着近红外分析技术和仪器的发展,通过近红外技术测定的氨基酸结果与传统的测定方法具有了很好的可比性(张维军等,2000)。本文主要对笔者近期应用NIRS方法快速测定饲料原料氨基酸含量方面所取得的经验进行介绍,以使NIRS技术更好的服务于国内饲料行业。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=69522]应用近红外技术快速测定饲料原料氨基酸含量[/url]
本人在8月发表的一篇原创中提及”甘氨酸与组氨酸无法分离“的问题,在经过10多天的准备,已有不小的收获,现在分享。摘要 目的: 建立用高效液相色谱法测定人凝血因子VIII中氨基酸含量。方法: 采用6 - 氨基喹啉- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 为衍生剂,与氨基酸柱前衍生后,用Agilent 1200 高效液相色谱仪,AccQ·Tag C18柱( waters 150 mm ×3. 9 mm,4 μm) ,以水Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液和乙腈进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37 ℃,进样量10μL。结果: 各氨基酸在32 min 内测定完毕,回收率为98.7% ~ 101.5%。RSD 均小于1. 5%。结论: 本法分离度好,快速、简便,可作为产品的质量控制方法。关键词: 6 - 氨基喹啉- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯; 人凝血因子VIII; 甘氨酸; 衍生物; 梯度洗脱; 高效液相色谱法;氨基酸; 含量测定人凝血因子VIII,本品对缺乏人凝血因子礓所致的凝血机能障碍具有纠正作用,主要用于防治甲型血友病和获得性凝血因子Ⅷ缺乏而致的出血症状及这类病人的手术出血治疗。该药物制备过程中使用了氨基酸( 精氨酸、丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、盐酸赖氨酸、脯氨酸 等) 做稳定剂,为了保证药品质量和用药安全,应对其中氨基酸的含量进行控制。该法依据过量的6 - 氨基喹啉基- N - 羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯( AQC) 在一定条件和氨基酸形成稳定的衍生产物( 柱前衍生) ,用高效液相色谱法测定衍生产物,根据衍生产物的含量计算人凝血因子中各氨基酸的含量。1 仪器和试药1200 高效液相色谱系统( 美国Agilent 公司) ,配置低压四元梯度泵、1314B 紫外吸收检测器、自动进样器、柱温箱、Chemistations 化学工作站; Sartorius CP225D 电子微量天平( 德国Sartorius 公司) ; SartoriusPB - 21 型pH 计( 德国Sartorius 公司) ; LDZ5 -2 低速自动平衡离心机( 上海医用离心机厂) 等。各标准品均来自于中国食品药品检定研究院2 色谱条件及系统适用性试验色谱柱: Waters AccQ·Tag C18色谱柱( 3. 9 mm ×150 mm) ; 流动相: 水为溶剂D,Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液( A) - 乙腈( B) - 水( D) ,柱温:37 ℃; 检测波长: 248 nm。精密量取对照品溶液与供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图32 min。3 溶液制备3. 1 Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液称取三水乙酸钠190. 4 g,加注射用水1000 mL,搅拌,溶解,用稀磷酸将pH 调至5. 2,加入乙二胺四乙酸二钠溶液( 称取乙二胺四乙酸二钠100 mg,加注射用水100 mL,摇匀使其溶解) 10 mL,加入叠氮化钠0. 1 g 及三乙胺23. 7 mL( 17. 2 g) ,用稀磷酸滴定至pH 4. 95,用0. 45 μm 的滤膜过滤,于4 ℃储存,备用( 此条件下可保存6 个月) 。量取该溶液100 mL,加注射用水稀释至1000 mL,混匀,即得Eluent( 醋酸盐- 磷酸盐缓冲液) 稀释液。3. 2 对照品储备液混合对照品储备液精密称取各氨基酸对照品适量,置同一100 mL量瓶中,以注射用水溶解并定容至刻度。制成含氨基酸含量均含5. 0 mg·mL - 1 的混合对照品溶液,即得。单个对照品储备液: 精密称取各含氨基酸的各对照品适量,分别置100mL 量瓶中,用注射用水溶解并定容至刻度。制成分别含各氨基酸的单个对照品溶液,即得。3. 3 供试品储备液3. 3. 1 加样回收率试验溶液精密称取各氨基酸各0. 3200,0. 4000,0. 4800 g 和辅料适量,加人凝血因子VIII原液7. 5 mL,肝素钠适量,用1. 0 mol·L - 1 盐酸调pH 至6. 9,加0. 01 mol·L - 1枸橼酸三钠溶液溶解并定容于20 mL。分别制备成16. 0, 20. 0, 24. 0 mg·mL - 1溶液。3. 3. 2 空白溶液 按公司处方,加入辅料的混合物,用注射用水制备各空白溶液3. 4 内标溶液精密称取α - 氨基丁酸( AABA)0. 4 g,加注射用水定容至100 mL。4 氨基酸衍生方法4. 1 精密量取供试品储备液、样品及对照品储备液各1. 0 mL,加1. 5%磺基水杨酸9. 0 mL,混匀静置2 h以上, 3000 r·min - 1离心10 min,留取上清液。4. 2 精密量取“4. 1”项下上清液1. 0 mL( 其中对照品储备液对应上清液分别精密量取0. 06, 0. 4,0. 8,1. 0, 1. 2, 1. 6 mL) ,分别置10 mL 量瓶中,用注射用水定容。制备成供试品溶液、样品溶液及浓度分别为1. 5, 10. 0, 20. 0, 25. 0, 30. 0,40. 0 mg·mL - 1 的对照品溶液。4. 3 精密量取“4. 2”项下溶液各100 μL,分别加注射用水0. 4 mL 及内标溶液20 μL,混匀备用。4. 4 精密量取“4. 3”项下溶液30 μL 放入衍生管中,加硼酸缓冲液( pH 8 ~ 10) 210 μL 涡旋混合,并加入AQC 衍生剂60 μL 涡旋混合15 s,即为各供试品溶液,待用。
使用液相-紫外测定氨基酸。发现使用AQC衍生测定时AMQ峰很高,但是氨基酸的峰很低,且我的氨基酸的浓度已经很大了,100ppm,我开始以为我加的AQC浓度太大了,所以降低了AQC的量,但是发现基线很飘,所以问一下各位大神,有什么方法可以改善,或是什么细节需要特别注意的,或是使用其他衍生化试剂的效果更好,因为只有紫外检测器。。。谢谢大家啦!
用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]安捷伦1260测氨基酸,柱前衍生法。色谱条件:激发330,发射450,流动相A:甲醇和乙腈溶液67:33,流动相B:40nmol/L的磷酸二氢钾,梯度洗脱,流速为1ml/min今天测氨基酸标准品时,出峰不正常,具体如下图,有没有懂朋友能看看是什么原因,谢谢[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209231459343338_5818_5613962_3.png[/img]
[em53] 请问如何测定低含量氨基酸methyliminodiacetic acid or ethylenediamine diacetate 在高浓度盐溶液中。我想选用阴[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url],选择Na2CO3 and NaOH 配置的缓冲液作流动相不知能否有效。我以前没用过,很头疼[em06]!现谢谢了,各位高手!
通常,饲料原料的氨基酸含量是通过离子交换(IEC)或高效液相色谱(HPLC)方法测定。这些方法由于费用极其昂贵,而且所需时间很长,用于饲料厂的配方调整和质量控制,不切实际。也可以通过测定饲料原料的干物质和粗蛋白含量,回归预测氨基酸含量(NRC,1998),但是,这种折中的方法推测的饲料原料的氨基酸含量与其实际值差异较大(丁丽敏等,2002),直接用于生产,会造成较大的损失。在实际生产中,饲料厂在制定饲料配方时,饲料原料中所用的氨基酸含量只好参考数据库中推荐的平均值,但推荐的平均值无法反应特定原料氨基酸含量的变异。因此,饲料研究和生产人员一直在寻找一种快速、廉价的测定饲料原料氨基酸含量的方法。 过去人们认为,近红外(Near-Infrared Reflectance Spectroscopy,简称NIRS)技术不适用于测定饲料原料氨基酸含量,因为原料中氨基酸含量过低。但是,近年来,随着近红外分析技术和仪器的发展,通过近红外技术测定的氨基酸结果与传统的测定方法具有了很好的可比性(张维军等,2000)。本文主要对笔者近期应用NIRS 方法快速测定饲料原料氨基酸含量方面所取得的经验进行介绍,以使NIRS技术更好的服务于国内饲料行业。 1 NIRS技术测定饲料原料氨基酸含量的原理和方法 NIRS技术是依据被检测样品中某一化学成分对近红外区光谱的吸收特性而进行定量测定的一种分析方法。应用NIRS方法测定原料氨基酸含量,首先要建立定标方程。定标方程的建立,不仅需要饲料原料的NIRS光谱值,而且需要利用标准方法测定的原料的氨基酸含量。饲料原料NIRS光谱的扫描和氨基酸含量的化学分析值必须是对同一样品进行的。根据所得的光谱值和化学分析值,运用多元回归计算便可得到相应的定标方程。但仅有很少的实验室能够大量的测定这些数据,这也是NIRS在测定原料氨基酸含量方面发展较慢的原因。 每种饲料原料至少需要50个样品才能建立定标方程,而且所取样品必须具有代表性。增加建立定标方程所用的样品数量,能够提高定标方程的准确性和可靠性。德固赛(Degussa)公司拥有全球最大的饲料氨基酸分析实验室,每年分析的饲料样品超过10,000个,为建立NIRS定标方程奠定了坚实的基础,目前,已经对全球16种常用饲料原料的干物质、粗蛋白质和所有必需氨基酸含量建立了定标方程(表1)。新到货的饲料原料,可以对其取样、制样,然后利用NIRS 分析仪对其样品进行扫描获得NIRS 光谱值,并根据相应的定标方程计算,很快就可以获得饲料原料的氨基酸含量。 表1 已经建立定标方程的饲料原料 类别原料名称N 大麦233 玉米328 黑麦273 谷物及其副产品小麦281 麦麸178 高梁205 米糠181 玉米蛋白粉184 菜籽粕171 豆粕341 油籽类葵花粕107 豌豆110 羽扇豆105 鱼粉307 动物副产品羽毛粉247 肉骨粉468 注:N=建立相应饲料原料定标方程的样本数 2 NIRS与色谱法测定的饲料原料氨基酸含量的一致性 NIRS分析结果的有效性,最终还要看其与色谱法测定值的吻合程度(Fontaine等,2001)。图1~3列出了德固赛(Degussa)公司利用NIRS和色谱方法测定的豆粕、肉骨粉和小麦的蛋氨酸以及赖氨酸含量之间的拟合情况。由图以及相应的统计结果可以看出,NIRS方法对饲料原料的氨基酸含量的预测值非常准确和可靠。因此,在实际生产中,可以利用快速、低成本的NIRS 技术代替耗时、昂贵的色谱法测定饲料原料的氨基酸含量。 3 NIRS 技术在饲料生产中的作用 由于利用NIRS技术测定饲料原料氨基酸含量,不仅费用极其低廉,而且所用时间很短,因此获得饲料原料氨基酸含量测定结果的时间主要决定于对原料进行采样和制样的时间。饲料厂可以通过快速、准确的氨基酸含量测定值,评估来自不同产地和供货商的原料,实施真正的质量管理。 3.1 细分饲料原料 饲料厂可以根据氨基酸的测定值,将到厂的饲料原料进行细分。例如,以下几个因素可以作为细分时考虑的因素:品种,种植方法(例如施肥情况),产地,加工条件。将饲料原料细分,能够促使配合饲料厂更准确的优化配方。为了统计分析不同来源、品种或供应商原料的差别,所采集的样品必须具有代表性。而且,每种来源或供应商的样品至少应该有20个。如表2所示,根据粗蛋白质和氨基酸含量的测定值,饲料原料可以分为不同的质量等级。不同质量的饲料原料,应该以不同的价格购买。 表2 根据养分含量对饲料原料(以豆粕为例)的细分表 养分含量(%)所有样品低等质量中等质量高等质量 N=490N=62N=348N=80 粗蛋白(均值)44.8741.6944.8147.58 变异系数4.70 4.632.723.51 赖氨酸(均值)2.7632.5612.7552.961 变异系数4.643.482.511.69 蛋+胱(均值)1.2771.1891.2761.353 变异系数4.693.952.662.89 苏氨酸(均值)1.7321.6081.7291.840 变异系数6.15 4.35 2.89 3.26 注:N=样品数量 如果配合饲料厂以相同的价格购买所有质量级别的饲料原料,那么饲料厂将会为氨基酸含量较低的饲料原料支付过高的价格。因此,当供应商提供的饲料原料氨基酸含量较低时,饲料厂应该调低支付价格或拒绝接货。 3.2 提高配合饲料质量 NIRS技术还能充分保证配合饲料的质量。如果不能及时检测到的饲料原料的养分变异,即使机械设备和混和技术达到最佳,也会严重影响配合饲料的质量。原料氨基酸含量较大的变异,不可避免的需要增加配合饲料的安全系数,从而增加生产成本。在养殖业中,饲料养分的变异,会导致动物生产性能的降低和畜产品质量变异的增加,尤其是像胸肉率和瘦肉率这些敏感指标。畜产品质量的降低或不整齐,会导致其价格的降低。如果饲料原料到货时以及随后能经常性的检测其氨基酸含量,饲料厂则可以根据检测的结果,对配方进行及时调整,从而保证配合饲料的氨基酸含量。 4 NIRS技术推广中存在的问题与对策 NIRS 技术能够降低饲料生产成本,提高饲料产品质量,但是许多饲料厂没有购买NIRS 分析仪器,有些饲料厂虽然拥有自己的NIRS分析仪器,却没有能力建立可靠的氨基酸定标方程,在一定程度上限制了NIRS 技术的推广。针对以上情况,可以采用一些更为灵活的方法,使饲料厂能够在几乎不增加成本的基础上,获得NIRS技术服务。没有购买NIRS分析仪器的饲料厂,可以将采集的饲料原料样品邮寄到相应单位进行测定。而已经购买了NIRS分析仪器却没有能力建立定标方程的饲料厂则可以与建立了NIRS 饲料原料氨基酸含量定标方程的单位合作,获得定标方程的转移和人员的培训服务。定标方程转移的前提条件是软硬件之间的兼容性。另外,这些饲料厂也可以利用自己的NIRS分析仪对饲料原料进行扫描,然后将获得的NIRS光谱值,通过电子邮件传到拥有NIRS定标方程的单位,进行相应的数据处理,便可以获得饲料原料的氨基酸含量值。通过这些方法,饲料厂可以在几乎不增加成本的基础上,利用NIRS技术,在线检测饲料原料的氨基酸含量。通过在线检测饲料原料氨基酸含量,饲料厂可以更有效的监控原料质量和调整配方,生产出优质、低价的配合饲料产品。 综上所述,NIRS技术测定饲料原料氨基酸含量,具有快速、准确、成本低的特点。因此,饲料厂可以利用NIRS技术对主要的饲料原料氨基酸含量进行在线监测,调整配方和采购策略,降低生产成本,提高产品质量。
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647481_2507958_3.gif日立氨基酸分析仪和液相色谱在氨基酸分析中的解决方案时间:2014年9月12日 10:00讲师:牟晓丽 目前负责日立氨基酸分析仪和液相色谱的技术支持及市场工作讲座内容: 蛋白质是生命的物质基础,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者,没有蛋白质就没有生命。而蛋白质又是由氨基酸组成的,由此可见氨基酸对人体的重要性。人体可以通过进食粮食、水果、动物制品补充氨基酸,也可通过摄取含氨基酸的功能食品补充氨基酸。 在制药行业,以氨基酸药物为重要组成的生物制药也越来越得到大家的关注。所以,对氨基酸进行分析是非常有必要的。氨基酸的分析方法有柱前衍生法和柱后衍生法,分析仪器既有专门的氨基酸分析仪又有液相色谱仪。 在此,我们跟大家介绍使用日立氨基酸分析仪L-8900和液相色谱仪,通过柱前和柱后衍生法对氨基酸进行分析。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间:2014年9月12日 9:304、报名参会:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408011630_508801_2507958_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647481_2507958_3.gif
用液相色谱仪测氨基酸需要浓缩 但是没有浓缩仪 请问还有什么仪器可以进行浓缩 最好有具体细节
有没有分析3-氨基丙腈的液相色谱分析方法我想用液相色谱分析有机盐中的3-氨基丙腈的含量,但由于3-氨基丙腈在紫外和示差液相中响应值不是很大,满足不了微量杂质的分析。大家有没有好的建议。比如有没有合适的检测器、或则有合适的衍生法。(由于样品中含有氨基丙酸,所以氨基的衍生手段好像无法使用)
通过高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生方法(Kaiser & Benner, 2005)测定海水中的氨基酸,如下图所示,峰非常低,有的低到积不出来,而且本来在26min以后该出的峰根本分不出来,不仅尝试了海水还尝试了湖水,依旧是峰很低,低到几乎没有,但同时测相同地方沉积物里的氨基酸就出峰正常,这到底是为什么。具体采用的方法为:荧光检测器检测,激发波长为330nm,发射波长为450nm。色谱柱为Echipse AAA分析柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)。分离过程中使用梯度洗脱,流动相A为甲醇和乙腈的混合溶液,体积比为67:33,流动相B为40 nmol/L磷酸二氢钾溶液,(pH=7.20)。[img=,690,91]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208161124242316_6632_5033091_3.png!w690x91.jpg[/img]
哪 位朋友有氨基酸注射液含量的液相检测方法,传过来学习一下。谢谢!
有报道一种HPLC测定生物样品中含硫化合物、氨基酸和生物胺的方法,该方法是采用磺酰氯对上述目标物进行柱前衍生,而后通过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱分离,在460nm下进行监测。该方法的新颖之处是采用了磺酰氯进行衍生,与OPA相比,磺酰氯不仅能衍生伯胺,还能与仲胺反应,由于其活性较高,还能与羟基、苯酚、巯基等反应,用途较广。[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#333333][back=#fcfcfc]该方法允许同时分析脑标本、尿液、血浆和细胞裂解物中的生物胺、氨基酸和磺氨基化合物,包括肌肽、多巴胺、肾上腺素、谷胱甘肽、半胱氨酸、牛磺酸、兰硫氨酸和胱硫硫氨酸。此外,该方法适用于研究牛磺酸和谷胱甘肽的生理和非生理衍生物,例如次牛磺酸,高牛磺酸,同型半胱氨酸和S-乙酰谷胱甘肽。详见DOI [url=https://doi.org/10.1007/978-94-024-1079-2_42]10.1007/978-94-024-1079-2_42[/url] [/back][/color][/font]
我们现在想买一台液相色谱仪,暂时只对氨基酸进行检验,敬请各位老师指点该选购什么样的色谱仪,谢谢了!
我们想用高效液相色谱仪分析饲料中的氨基酸(呵呵,我们也只有一台waters的e2695型液相色谱仪,没有氨基酸分析仪),请问大家都用什么方法啊,我们买了郑州牧专的氨基酸分析包,可是作出来结果老是不准,就是结果偏低。另外之前负责氨基酸分析的女孩突然辞职了,可我只见过她前处理的大致步骤,不知道里面有啥关键点要必须掌握,所以我想问问大家你们有用氨基酸分析包的没啊,请指教一下吧,谢谢了
我们想做胶原蛋白粉中游离氨基酸的测定,用液相色谱可以做出来吗
打算用HPLC测定游离氨基酸,看到一篇文献其样品前处理步骤如下:称取5g 左右(精确到0.001g),加入去离子水20ml,在冰浴中用ULTRA TURRAX(IKAT18 basic, German)组织捣碎3次(22000r/min,每次10s,间隔10s),然后加入10% 磺基水杨酸20ml 混合均匀,于4℃下放置17h,中速滤纸过滤后,用4mol/LNaOH调整滤液pH 值至6.0,并定容至50ml,经10kDa 超滤膜超滤除去大分子。超滤液用AccQ•Fluor Reagent Kit进行衍生处理后,用外标法测定样品中的游离氨基酸含量。想请教一下这里“用4mol/L NaOH调整滤液pH 值至6.0”的作用是什么呢,谢谢!
小弟用液相色谱测氨基酸时,用2,4-二硝基甲苯衍生以后放入棕色容量瓶中,之后放入冰箱里面保存。可是过了4天以后再走样时候发现单标里面出来几个小峰,标品峰也变小了,而且峰型就像是2个峰没分开似的,想咨询一下大侠们这是不是衍生物发生了降解呀,谢谢!
问题: 液相做氨基酸有合适的方法吗?回复: Agilent有氨基酸分析包, 有专用色谱柱,氨基酸标准品和衍生试剂
【作者】 袁祥慧; 杨惠莲(重庆市药品检验所)【摘要】 目的建立测定五苓片中肉桂酸含量的高效液相色谱法。方法色谱柱采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(30∶70)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长285 nm。结果肉桂酸进样量在0.009 608~0.288 24μg范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 9(n=6);平均回收率为96.39%,RSD为0.44%(n=6)。结论高效液相色谱法专属性强、操作简便、结果准确、重现性好,可用于测定五苓片中肉桂酸的含量。 【谱图】 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208211746_385115_1609970_3.jpg
目的: 测定虫草中16 种氨基酸的含量。方法: 样品以6 mol/L 盐酸于150 ℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯( PITC) 为衍生化试剂衍生后进行HPLC 分析。采用Agielent C18( 250 mm × 4. 6 mm,5 μm) 色谱柱,柱温为43 ℃; 流动相A 为0. 1mol/L 醋酸钠缓冲液( 以醋酸调pH 6. 5) -乙腈( 93∶ 7) ,流动相B 为乙腈-水( 4:1) ,梯度洗脱,流速为1. 0 mL/min ; 检测波长为254 nm。结果: 16 种氨基酸浓度在1. 16 ~ 47. 32 μg·mL - 1范围内呈良好的线性关系( r = 0. 9998 --1. 000) ; 平均回收率在95. 3% ~ 105. 2%之间; RSD 均小于3. 0%。结论: 本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于虫草中氨基酸的检测。关键词: 中药; 虫草; 衍生化; 氨基酸; 异硫氰酸苯酯; 高效液相色谱冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps.sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。天然虫草具有相似的化学成分,如虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、蛋白质及多种氨基酸等。现行氨基酸测定一般都用氨基酸自动分析仪测定。但是氨基酸自动分析仪器昂贵,分析时间长,且只能用于分析氨基酸,限制了氨基酸分析技术的广泛应用。近年出现的柱前衍生化RP -HPLC 分析法具有高灵敏度、低检测限和简便可靠等特点,使该方法广为使用。在氨基酸的柱前衍生化试剂中,异硫氰酸苯酯( PITC) 与一级氨基酸和二级氨基酸均能反应,所得产物苯基硫酸盐( PTC) -氨基酸的稳定性好,该方法为目前氨基酸分析中具有吸引力的分析方法之一。本文参照文献,研究建立了虫草中16 种氨基酸的PITC柱前衍生化RP -HPLC 测定方法,以期替代柱后衍生化的氨基酸自动分析仪测定法。1 仪器与试药Waters 2695 高效液相色谱仪; Waters 2998 PDA检测器; Waters Empower Pro 数据处理软件系统;DH-101 型电热恒温鼓风干燥箱( 天津市中环实验电炉有限公司)。[font=E-BZ+ZKLB
请大家帮推荐一款能检测氨基酸的液相色谱仪?