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高通量孔实时荧光定量仪

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高通量孔实时荧光定量仪相关的论坛

  • 药物高通量筛选技术

    简单介绍一下关于药物高通量筛选技术的知识一.概念高通量筛选(High throughput screening,HTS)技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础,以微板形式作为实验工具载体,以自动化操作系统执行试验过程,以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据,以计算机对实验数据进行分析处理,同一时间对数以千万样品检测,并以相应的数据库支持整个体系运转的技术体系。二. 高通量筛选技术体系的组成1. 化合物样品库化合物样品主要有人工合成和从天然产物中分离纯化两个来源。其中,人工合成又可分为常规化学合成和组合化学合成两种方法。2.自动化的操作系统自动化操作系统利用计算机通过操作软件控制整个实验过程。操作软件采用实物图像代表实验用具,简洁明了的图示代表机器的动作。自动化操作系统的工作能力取决于系统的组分,根据需要可配置加样、冲洗、温解、离心等设备以进行相应的工作。3.高灵敏度的检测系统检测系统一般采用液闪计数器、化学发光检测计数器、宽谱带分光光度仪、荧光光度仪等。4.数据库管理系统数据库管理系统承担4个方面的功能: 样品库的管理功能;生物活性信息的管理功能; 对高通量药物筛选的服务功能; 药物设计与药物发现功能。三. 高通量筛选模型常用的筛选模型都在分子水平和细胞水平,观察的是药物与分子靶点的相互作用,能够直接认识药物的基本作用机制。1. 分子水平的药物筛选模型:受体筛选模型;酶筛选模型;离子通道筛选模型1.1受体筛选模型:指受体与放射性配体结合模型。以受体为作用靶的筛选方法,包括检测功能反应、第二信使生成和标记配体与受体相互作用等不同类型。1.2酶筛选模型:观察药物对酶活性的影响。根据酶的特点,酶的反应底物,产物都可以作为检测指标,并由此确定反应速度。典型的酶筛选包括1) 适当缓冲液中孵化;(2)控制反应速度,如:温度,缓冲液的pH值和酶的浓度等;(3)单时间点数器, 需测量产物的增加和底物的减少。1.3离子通道筛选模型: (1)贝类动物毒素的高通量筛选,其作用靶为Na+通道上的蛤蚌毒素结合位点,用放射性配体进行竞争性结合试验考察受试样品。(2)用酵母双杂交的方法高通量筛选干扰N型钙通道β3亚单位与α1β亚单位相互作用的小分子,寻找新型钙通道拮抗剂。2.细胞水平药物筛选模型观察被筛样品对细胞的作用,但不能反映药物作用的具体途径和靶标,仅反映药物对细胞生长等过程的综合作用。包括: 内皮细胞激活; 细胞凋亡; 抗肿瘤活性; 转录调控检测; 信号转导通路; 细菌蛋白分泌; 细菌生长。四.问题及展望高通量筛选技术与传统的药物筛选方法相比有以下几个优点:反应体积小;自动化;灵敏快速检测;高度特异性。但是,高通量筛选作为药物筛选的一种方法,并不是一种万能的手段,特别是在中药研究方面,其局限性也是十分明显的。首先,高通量筛选所采用的主要是分子、细胞水平的体外实验模型,因此任何模型都不可能充分反映药物的全面药理作用;其次,用于高通量筛选的模型是有限的和不断发展的,要建立反映机体全部生理机能或药物对整个机体作用的理想模型,也是不现实的。但我们应该相信,随着对高通量筛选研究的不断深入,随着对筛选模型的评价标准、新的药物作用靶点的发现以及筛选模型的新颖性和实用性的统一,高通量筛选技术必将在未来的药物研究中发挥越来越重要的作用。

  • 高通量微波消解仪的功能特点和技能要求

    高通量微波消解仪是具备化学反应过程控制的微波加速反应系统,控制, 显示和操作系统一体化集成, 具有可靠的整机防腐设计, 节省空间, 同时仪器一机多能, 可用于分析化学的样品消解, 萃取, 蛋白水解, 浓缩, 干燥,实验化学的有机/无机合成, 以及化学工艺模拟数据条件中试等各种微波化学应用。高通量微波消解仪功能特点:仪器采用微波非脉冲连续自动变频控制,延长了仪器的使用寿命和电磁波的均匀性,腔体采用66L大容积316L不锈钢腔体材料特制而成,自锁式缓冲防爆炉门,当反应异常时,缓冲结构确保操作人员人身安全和炉门结构完整无损,炉门和腔体结合紧密,微波泄漏符合国家标准。仪器采用温、压双控系统对消解实验的压力和温度进行控制,实时显示。360°往返连续旋转,微波均匀,保证各个样品微波环境相同,提高实验结果的一致性。当罐内的压力超过设定的保护值时,微波会自动停止加热。安全防爆膜具有双保险功能,当罐内的压力超过防爆膜所能承受的压力时,防爆膜先行破裂,气体泻出,防止罐体受损和对人体的伤害。技能要求质检员熟悉仪器的各部件功能及检测原理质检员了解仪器的环境要求并实时维护要求环境技术负责人熟练掌握易损部件的维护和维修工作

  • 【求助】荧光定量PCR与全自动微生物鉴定仪的不同

    请问不同点在哪里?高通量实时荧光定量PCR系统:瑞士,Roche,型号是Ligtcler 480全自动荧光法微生物鉴定药敏分析系统:英国,SENSITITRE,型号是ARIS是不是前者可用于致病菌,微生物的定性定量检测,而后者只能是定性的筛选快速检测啊?并且想具体问下PCR如何用于致病菌、转基因食品的检测?大概原理,因为我本身不是读这个专业的,单位决定买这两台仪器,但是单位派我去开个什么购买仪器专家听证会之类的,所以想问问,因为资料上我看得不是很明白

  • 高通量组织研磨仪液氮冷冻研磨实验

    高通量组织研磨仪液氮冷冻研磨实验

    TJ2011高通量组织研磨仪对植物叶片的液氮冷冻研磨实验处理材料:植物叶片 (水稻、玉米、小麦、草、蔬菜叶等)1 装物料:将植物叶片截成所需的小段,用镊子夹住,放入1.5/2ml的离心管管底,对离心管进行编号。现以24空离心管适配器为例;2 装研磨珠:每个离心管内装上1个5mm碳化钨(或氧化锆)研磨珠,或3mm碳化钨(或氧化锆)研磨珠5个;3 冷冻保存:将铝合金夹具夹住24孔,固定好,放到专业液氮盒中,加液氮冷冻,3-5分钟,充分冷冻夹具及管内样品。4 溶剂加入:如有需要,在每个离心管中,小心加入裂解液或其他溶剂;4 主机运转:设定转速与时间例如1500转/分钟 3min,点击Start5 研磨过程:在典型研磨时间(2~3min)内,研磨结束。可同时得到2*24=48个通量的样品;6 取下夹具,进行下一步实验。注意事项:在上夹具时,要注意一是要带上厚一点的手套,防止被液氮冻伤;一是要迅速,且要保证螺栓拧紧,卡上保险扣。然后,启动研磨。TJ2011高通量组织研磨仪同时适用动物组织(骨骼、肌肉、内脏、毛发等)的研磨,高通量提取DNA/RNA。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/02/201202141110_349211_1812435_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/02/201202141110_349212_1812435_3.jpg

  • 多功能高通量农药残留检测仪可以检测哪些项目

    多功能高通量农药残留检测仪主要用于检测农产品中的农药残留,具体可以检测的项目包括:  农药类别检测:农药残留检测仪器可以检测各种农药的残留,特别是有机磷农药、氨基甲酸酯类农药等。这些农药在农业生产中广泛使用,但其残留会对人体健康造成危害,因此需要进行检测。  农产品检测:农药残留检测仪器可用于蔬菜、水果、谷物、坚果、豆类、茶叶等农产品的检测。  农药残留量定量:检测仪器可以测量农产品中农药残留的含量,并给出相应的定量结果,以判断残留量是否符合法规标准。  多残留物检测:农药残留检测仪器可以同时检测多个农药残留物,以提高检测效率和准确性。  此外,多功能高通量农药残留检测仪通常配备有不同的检测方法,以适应不同农药的检测需求。同时,该仪器还可以对农产品样品进行样品制备、提取、净化和分析,以获得准确的残留物分析结果。  总的来说,多功能高通量农药残留检测仪是一种非常重要的设备,用于确保农产品的安全性和质量,保护消费者的健康。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405161517234991_1509_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 何谓“高通量”,你真正了解这个仪器行业词汇吗

    发现现在很多仪器设备都用“高通量”这个词汇,比如:高效液相色谱仪高通量自动进样器高通量密闭微波消解系统高通量组织冷冻研磨仪 高通量平行色谱分离系统何谓“高通量”,你真正了解这个仪器行业词汇吗?

  • 上海新仪丘比特高通量微波消解、萃取工作站创新点讨论

    上海新仪丘比特高通量微波消解、萃取工作站创新点讨论

    采用高效的非脉冲微波功率自动变频控制技术,不但实现了微波功率对温度压力的精确闭环控制,而且提高了磁控管的微波发射效率,节能高效。12罐/批次的高通量消解能力,极大地提升了实验室样品前处理效率。创新点:可达12罐/批次的高通量处理能力;独家专利多功能爆裂块设计,无需防爆膜等耗材;宇航纤维外罐等最高等级安全防护措施;大屏彩色软件界面,操作直观明了,炫彩灵动、智能便捷;电脑链接控制,安全远程操作,无限方案存储数据库;小体积VS大炉腔,先进工业设计、完美操作体验;http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/12/201312311440_486002_1636300_3.jpg

  • 义翘神州:高通量重组抗体生产的优势及常见问题解答

    [font=宋体][font=宋体]在生物医药领域,抗体的质量和生产效率对于科研和临床应用至关重要。义翘神州作为一家领先的生物技术公司,其高通量重组抗体生产技术备受瞩目。通过该技术,抗体生产周期最快仅需[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天,极大地提升了抗体研发的效率和速度。下面将详细介绍义翘神州的高通量抗体表达服务内容,并解答常见问题([/font][font=Calibri]FAQ[/font][font=宋体])。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、高通量抗体表达服务内容介绍:[/font][/font][font=宋体]①基因合成及密码子优化(可选)[/font][font=宋体]客户可提供抗体序列或质粒作为起始材料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②载体构建[/font][font=宋体]克隆至表达载体[/font][font=宋体]质粒测序[/font][font=宋体]质粒制备[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③高通量表达及纯化[/font][font=宋体][font=宋体]瞬时转染[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞[/font][/font][font=宋体]纯化抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]QC[/font][font=宋体]分析[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]UV[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SEC-HPLC ([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]内毒素分析(可选)[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤交付内容[/font][font=宋体]纯化抗体[/font][font=宋体][font=宋体]质量检验报告[/font] [font=Calibri](CoA)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]克隆于商业表达载体质粒[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=宋体]细胞培养液上清[/font] [font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、为什么选择义翘神州的高通量重组抗体表达服务?[/font][/font][font=宋体]义翘神州提供的高通量抗体表达服务具有以下优势:[/font][font=宋体]? 我们拥有北京和泰州双生产中心,近地化服务,更便捷,满足您生产的要求。[/font][font=宋体][font=宋体]? 速度快,从基因序列到纯化抗体最快[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天完成。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 高通量适用范围广,可适用于常规[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]型抗体的表达以及单链抗体的表达,[/font][font=Calibri]1000[/font][font=宋体]抗体[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]项目生产能力。[/font][/font][font=宋体]? 自动化水平高,配备自动化构建平台,更准确高效。[/font][font=宋体]? 义翘神州成熟且先进的哺乳动物细胞表达平台,适用于各种类型抗体的表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、高通量抗体生产一般使用什么培养体系和纯化方法?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州的高通量抗体的培养主要以摇瓶为主,利用[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞培养实现抗体的高通量表达。原因有以下两点:该培养体系对比孔板,体积更大,获得抗体的收率较高;摇瓶培养体系获得的产品信息对后期放大更有相关性。通常使用[/font][font=Calibri]protein A/G[/font][font=宋体]纯化方式获取纯度相对较高的抗体,同时也会根据不同复杂抗体的类型应用离子交换、分子筛等方法进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、义翘神州的高通量抗体表达服务可以生产哪些抗体类型,具体流程是什么样的?[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可生产全长、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]、嵌合抗体多种形式,我们可以根据客户的具体要求最快[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天时间实现定制化从基因到抗体的高通量生产,满足您的生产需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘的重组抗体[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量表达纯化服务[/b][/url]结合了专业的高通量基因合成、载体构建和优化的瞬时抗体表达技术,充分利用义翘优势[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/mammalian-cell-expression][b]哺乳动物细胞表达平台[/b][/url],能够提供在[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞中快速生产重组抗体服务。详情关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service[/font][/font]

  • 实时定量PCR应用中的问题及优化方案

    聚合酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展,定量PCR技术取得了突飞猛进的发展,不仅建立了一系列的方法,而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术便是一种具有革命性意义的定量PCR技术,所谓实时定量PCR是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量。目前它作为一个极有效的实验方法,已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域,仅2000-2001年,收录在Medline上的以real-time PCR为关键词的文章就达一千多篇。实时PCR技术较之与以前的以终点法进行定量的PCR技术具有无与伦比的优势。首先,它不仅操作简便、快速高效,而且具有很高的敏感性和特异性。其次,由于是在封闭的体系中完成扩增并进行实时测定,大大降低了污染的可能性并且无须在扩增后进行操作。另外,它还可以通过不同的引物设计在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增,即多重扩增。本文将对实时定量PCR目前的应用状况、仪器应用、新材料进展以及实验条件的优化作一综述。实时定量PCR的应用现状实时定量PCR技术自1996年诞生以来,由于它显著的优越性,不仅广泛的应用于分子生物学的各个研究领域,而且也开始作为一种诊断手段应用于临床。其应用涉及到的范围包括DNA、mRNA和病毒荷载量的定量,核酸多态性分析,基因突变分析等多个领域。Giulietti 等人对用实时定量PCR测定细胞因子基因的表达作了详细的描述。细胞因子是一种调节蛋白,它对免疫反应、炎症反应具有重要的调节作用,其量的改变常常与一些疾病,如炎症反应、自身免疫性疾病、移植排斥有密切的关系。由于所得到组织样本常常因为太小而不能满足在蛋白质水平的检测,另外,通常用的蛋白质检测方法(如ELISA)的灵敏度也难以完成对极微量的蛋白产物的检测,所以应用PCR定量进行基因诊断就显得十分有意义。众所周知,cDNA微排列和差异表达PCR技术是对基因表达变化分析的两种关键技术,但是这两种技术只能对基因表达变化进行定性分析,而不能进行定量分析。Rajeevan等人利用实时定量PCR技术却成功地将基因表达的变化进行了量化,不仅有效地证明了上述两种方法的有效性,而且提供了一种具有高通量的对基因表达变化进行检测的新技术。实时定量PCR技术的出现不仅增强了有关对基因量变化的研究方法,而且也增强了对基因质所发生变化方面的研究。例如Laird和他的同事们建立了一种被称作Methylight的实时定量PCR方法,它能通过特异的引物和/或Taqman探针检测基因CpG岛的胞嘧啶是否发生了甲基化。由于实时PCR的敏感性和特异性,使得这种方法对胞嘧啶的过度甲基化常常具有极高的灵敏度。最近有研究表明这种方法可以从食管癌病人的食管粘膜中检出含有发生了过度甲基化基因的细胞。又如Sevall等人证明可以用实时定量PCR方法区分含有突变的等位基因。这是利用两种不同的荧光报告基团标记Taqman探针,该探针既可同野生型基因又可同突变型基因发生杂交,由于探针的杂交效率及随后的切割是由杂交决定的,所以如果出现一种信号强于另一种信号则表明两条基因具有同源性,若两种信号都增强则表明为异源性。目前实时定量PCR在临床诊断方面的应用主要体现在对感染组织或细胞负载病毒的定量测定上,这一技术对DNA和RNA病毒都可以检测,目前已有标准的操作手册供人们使用,但是必须明确,国际上既没有统一的病毒荷载的标准,也存在着对其标准曲线和定量准确性的各种争论。这里值得一提的是一种称为NASBA(nucleic acid sequence-based amplification)的技术,它是一种利用电化学以光的等温PCR反应,在反应过程中能产生一种与靶RNA反极性的RNA扩增子,分子beacon常用于这种技术 ,这种方法常常用于对逆转录病毒的定量测定。常用的热循环仪对PCR产物进行实时定量的测定之所以能成为现实,并且应用如此广泛,其中一个重要的原因就是新的热循环仪的研制与推广。目前,国内外常用的热循环仪主要有以下几种:一、PE公司生产的Applied Biosystem系列1、 ABI Prism 7700 Sequence Detection System (SDS)是第一种作为商业用途的实时PCR测定仪,它由激光激发荧光,并且可在500-660nm范围内调节波长,可以用于基于水解探针、双链DNA结合染料、分子beacon原理的分析。一次可以测定96个样本,并且速度较快,一批样本的完成只耍要2小时。但是它不能实时对扩增结果进行分析,而只能在全部扩增结束后才进行数据分析。2、Gene Amp 5700 SDS: 它的基本工作原理和操作与ABI Prism 7700 SDS相同,但是它是利用卤素灯为激发光源,而且只设计了一个检测波长。3、ABI Prism 7900 SDS: 这是一种为实现高通量检测而设计的仪器,其基本构成与ABI Prism 7700 SDS相同,但程序设计完全实现自动化要求,而且有两种样品盘可供选择(96孔和384孔)。如果加上一个装载辅件,可以在24h之内完成84个384孔板的样本测定。二、Roche 公司生产的Lightcycler热循环仪,它以能装载20-25ul的毛细硅管作为反应管进行扩增,光源选用冷光源系统,可以减少光源对样本的影响。由二极管发射蓝光激发荧光,并提供三个滤光片,可利用荧光分光测定的原理,同时对一个反应体系的多种荧光进行检测,所以它完全可以进行多重PCR.由于Lightcycler使用了其独特毛细管反应体系和空气快速热循环系统,使样本能在非常短的时间内有效地实现温度变化,从而能在20-30min内快速完成30-40循环,达到样本扩增的目的。Lightcycler通常使用的实验材料主要是SYBRI Green I荧光染料和Taqman荧光探针和杂交探针。虽然Lightcycler有相当多的优点,但是这也有一些不足之处,由于它只提供一个32孔的样品盘,这使得不能在一次进行较多的样本测定。三、Bio-rad 公司生产的iCycler iQ:这种仪器提供连续的检测波长调节,程序满足实时数据处理,可以同时在一个反应体系中检测四种荧光信号,由于一批能完成96个样本的测定,所以能提供相对较快的扩增反应。四、Strategene公司的MX4000 Multiplex: 这种仪器的检测波长可在350-750nm范围内进行调节,以卤素灯作为激发光源,常选用的实验材料包括Taqman探针、杂交探针和分子信标(molecular beacon),其样品盘的规格有多处可供选择,包括96孔盘、8联管或单管,其程序也提供实时数据分析。五、Cepheid公司的Smart Cycler System: 这种仪器正如其名一样具有强大的功能,它有16种反应模式可供选择,而且每种模式都有各自的程序,任一模式不仅能同时检测四种荧光信号,而且不同的使用者可对同一批样品同时运行不同的模式进行检测。Smart Cycler System的这种设计虽然有其优点,但是其缺点也是显而易见的,由于其将样品盘分得过细,所以不利于同时进行较多样品的分析。六、Corbert Research 公司的Rotor-Gene: 这种仪器与Lightcycler相比,属于中心型热循环仪,即从反应体系内部进行热变化;其具有双光源系统,蓝光在470nm处激发荧光,绿光在530nm波长激发荧光;具有两种样品盘(32孔和72孔)供选择;可以对多种荧光材料进行测定

  • 睿科MPE高通量真空平行浓缩仪的使用操作

    平行蒸发浓缩仪已成为有机前处理浓缩过程中不可缺少的设备具备,此类设备操作便捷,使用方便,具备批量处理样品的能力,浓缩过程中化合物不易损失,大大降低样品浓缩时间,已经成为当下实验室分析人员的得力帮手。本文主要介绍睿科MPE高通量真空平行浓缩仪的一般操作。

  • 高通量农药残留检测仪检测结果准确吗

    [font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=16px]高通量农药残留检测仪检测结果准确吗,高通量农药残留检测仪的检测结果通常是准确的。这种仪器利用先进的检测技术,对农产品中的农药残留进行快速、准确的检测和分析。它具有高灵敏度、高准确性、多种农药检测、高通量等特点,可以检测多种不同类型的农药,包括有机磷、有机氯、有机氮、杀菌剂等,适用于不同类型的食品样品。同时,仪器还具备自动化功能,可以降低人为误差,提高检测的一致性和可重复性。然而,检测结果的准确性也受到多种因素的影响,如样品处理、仪器精度和校准、实验操作等。因此,在使用高通量农药残留检测仪时,需要遵循正确的操作步骤和注意事项,确保检测结果的准确性。总之,高通量农药残留检测仪在农药残留检测领域具有广泛的应用前景,能够提供准确、可靠的检测结果,有助于确保食品的质量和安全性。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405161007024160_155_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size][/color][/font]

  • TJ-2011高通量混合研磨仪适用于水质中叶绿素a的测定

    根据《中华人民共和做国家环境保护标准》对水质中叶绿色a的测定,采用高通量研磨机进行研磨,可达到最精细的研磨。研磨特点:[b][color=red]直接用离心管研磨,少一次样品转移,少一次损失。[/color][color=red][b][color=red]实验步骤:[/color][/b]1. 将滤膜放置在连有真空泵的玻璃抽滤器上,根据水体营养状态,准确量取定量体积的混匀水样进行抽滤,在水样刚刚完全通过过滤模时进行抽滤,用镊子将滤膜取出,将有样品的一面对折,用滤纸吸干滤膜水分。2. 将抽滤后的样品滤膜放置于高通量适配器中的离心管内,加入0.01g~0.02g碳酸镁及丙酮溶液,充分研磨至糊状,补加3~4ml丙酮溶液继续研磨,并重复1~2次,保证研磨时间5-10min。[/color][color=red]3. 将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后,放置于4[color=#333333]℃[/color]暗处浸泡提取2h以上,不超过24h。在浸泡过程中要颠倒摇匀2~3次。4. 将离心管放入离心机中,以相对离心力1000*g离心10min(转速3000-4000r/min)。取上清液用0.45um有机相针式滤器过滤,收集滤液待测。[/color][color=red][b]设备介绍 分体式仪器优点:[/b]机械部分与电子控制部分分开,航空插头设计,延长电子元器件寿命,减少损坏;简单,实用。[b]——[/b]这也是一体机致命缺点。[b]一体式仪器优点:[/b]结构紧凑,美观简洁,占地小,噪音低[b]原理:[/b]高通量混合研磨仪具有对称的一对高速大振幅的摇臂,通过玛瑙小球或不锈钢小珠等在样品管内来回不规则撞击及摩擦,在几秒到几分钟内轻松实现样品的研磨、粉碎、混合及细胞破壁。精细的研磨,可以达到5微米。[b]5. 配置:[/b]材质:PTFE、1010尼龙规格:6孔10ml、12孔5ml用途:将4.1中滤膜吸干水的样品粉碎。[b]总结:[/b]高通量混合研磨仪用于***标准实验时,研磨2min和3min,均可成功将物料打成浆糊状,达到测定水中叶绿素的研磨标准。其粉碎粒径测定如下(所用仪器为丹东百特公司(BT-9300S,BT-800):[/color][color=red][color=#B10D14]TJ-2011[/color][color=#B10D14]高通量混合研磨仪技术指标[/color][/color][color=red][color=#B10D14]应用:粉碎、混合、均相化以及细胞破碎、冷冻研磨[/color][/color][color=red][color=#B10D14]应用领域:农业、生物、化学、塑料、建筑材料、电子、环境、食物、玻璃、陶瓷、医药、矿物冶金[/color][/color][color=red][color=#B10D14]样品特征:硬的、中硬性、软性的、脆性的、弹性的、含纤维的[/color][/color][color=red][color=#B10D14]粉碎原理:撞击力、摩擦力[/color][/color][color=red][color=#B10D14]最大进样尺寸:≤8mm[/color][/color][color=red][color=#B10D14]最终出料粒度:~3μm(不同材料研磨细度有差异)[/color][/color][color=red][color=#B10D14]振动频率设置:10-1500次/分钟[/color][/color][color=red][color=#B10D14]典型粉碎时间:2min[/color][/color][color=red][color=#B10D14]干磨:是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]湿磨:是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]低温研磨:是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]带自动中心定位的紧固装置:是[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨平台数:2[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨罐种类:旋盖型研磨罐[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨套件材料:硬质钢、特氟龙尼龙 0.5/1.5mL/2mL/5ml/10ml(离心管/PCR管)[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨适配器:24孔板×2 96孔板×2[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨套件尺寸:25mL/50mL(研磨罐)[/color][/color][color=red][color=#B10D14]研磨球材质:玛瑙、不锈钢、氧化锆、碳化钨、陶瓷[/color][/color][color=red][color=#B10D14]粉碎时间设定:数字显示 1秒-99分59秒[/color][/color][color=red][color=#B10D14]驱动:无刷电机[/color][/color][color=red][color=#B10D14]功率:150W[/color][/color][color=red][color=#B10D14]机体尺寸(宽*高*纵深):300*180*420[/color][/color][/b]

  • 人血清中多种农兽药及其代谢物的高分辨、高通量检测技术与方法学研究

    [align=center][size=16px]人血清中[/size][size=16px]多[/size][size=16px]种农兽药及其代谢物的高分辨、高通量检测技术与方法学研究[/size][/align][size=16px]通过制备具有[/size][size=16px]多功能化超大比表面积[/size][size=16px]的[/size][size=16px]CMPs[/size][size=16px]和桥连硅烷化试剂修饰磁性纳米富集净化材料,并将其制备成萃取分离装置,构建集样品富集浓缩、高效净化的集成化前处理平台。进一步利用[/size][size=16px]LC-QTOF-MS[/size][size=16px]和[/size][size=16px]LC-Q Exactive Orbitrap-MS/MS[/size][size=16px]高分辨质谱,建立[/size][size=16px]300[/size][size=16px]种以上农兽药及其主要代谢物的标准质谱匹配信息库和保留时间数据库,并初步用于京津冀地区人血清样本中农兽药及代谢物的全面筛查,构建不同检测技术下农兽药化学污染物在人体内蓄积水平数据库,实现农兽药残留数据获取、污染等级判定、多维度表达及分析的自动化,为后续规模化样品分析和农兽药残留与疾病的关联性分析提供技术支撑。[/size][size=16px]2.1 [/size][size=16px]研究内容[/size][size=16px]([/size][size=16px]1[/size][size=16px])人血清中农兽药及代谢物高效净化技术研究[/size][size=16px]针对[/size][size=16px]人血清中农兽药及代谢物[/size][size=16px]残留水平低、结构特性多样等特征[/size][size=16px],以多粒径磁性纳米粒子为基质,制备具有超大比表面积的[/size][size=16px]桥连硅烷化试剂修饰材料和[/size][size=16px]共轭微孔聚合物材料,提高农兽药及[/size][size=16px]其代谢物的富集效率;通过修饰引入多羟基、磺酸基、卤代烃等多功能化基团,实现[/size][size=16px]不同结构特征[/size][size=16px]农兽药及其代谢物的高通量富集;将研制的富集净化材料进一步制备成萃取分离装置,构建集样品富集浓缩、高效净化的集成化前处理平台,实现人血清中农兽药及代谢物的高通量靶向[/size][size=16px]/[/size][size=16px]非靶向富集净化。[/size][size=16px]([/size][size=16px]2[/size][size=16px])人[/size][size=16px]血清中农兽药及代谢物的高通量筛查与定量分析方法研究[/size][size=16px]针对人血清中农兽药代谢复杂、残留水平较低的特点,利用[/size][size=16px]LC-QTOF-MS[/size][size=16px]和[/size][size=16px]LC-Q Exactive Orbitrap-MS/MS[/size][size=16px]高分辨质谱,建立[/size][size=16px]300[/size][size=16px]种以上农兽药及主要代谢物的标准质谱匹配信息库和保留时间数据库;结合课题开发的高通量农兽药残留分离富集前处理技术,建立覆盖[/size][size=16px]300[/size][size=16px]种以上农兽药及代谢物的血清样品高通量非靶向高分辨质谱检测技术,实现人血清农兽药残留由靶向检测向非靶向筛查的跨跃式发展;对所建立的方法进行方法学验证评价,形成方法标准操作规程。[/size][size=16px]([/size][size=16px]3[/size][size=16px])人血清样本中农兽药及代谢物全面筛查与数据库构建[/size][size=16px]基于所研发的人血清中[/size][size=16px]300[/size][size=16px]种农兽药及代谢物高通量非靶向高分辨质谱检测技术,开展京津冀地区人血清样本中农兽药及代谢物的初步筛查,构建不同检测技术下农兽药化学污染物在人体内蓄积的数据库,实现农兽药残留数据获取、污染等级判定、多维度表达及分析的自动化[/size][size=16px],[/size][size=16px]为后续规模化样品分析和农兽药残留与疾病的关联性分析提供技术支撑。[/size][size=16px]2.2 [/size][size=16px]研究目标[/size][size=16px]([/size][size=16px]1[/size][size=16px])针对人血清基质复杂,农兽药及代谢物残留浓度低、形态多样化等特点,筛选并制备出[/size][size=16px]多功能化超大比表面积磁性纳米材料[/size][size=16px],[/size][size=16px]实现不同结构特征的农兽药及其代谢物的[/size][size=16px]高效、[/size][size=16px]高通量富集[/size][size=16px]。[/size][size=16px]([/size][size=16px]2[/size][size=16px])[/size][size=16px]建立人血清中农兽药及其代谢物的高通量非靶向高分辨质谱检测技术,实现农兽药及其代谢物的快速筛查与精准定量分析。[/size][size=16px]([/size][size=16px]3[/size][size=16px])通过结合开发的高通量非靶向检测技术,初步用于京津冀地区人血清[/size][size=16px]中[/size][size=16px]农兽药的高通量非靶向高分辨质谱检测,构建人血清中农兽药残留蓄积形态数据库,筛查出高残留的农兽药及其代谢物。[/size][size=16px]([/size][size=16px]1[/size][size=16px])[/size][size=16px]通过设计开发[/size][size=16px]多功能化超大比表面积磁性纳米材料[/size][size=16px],实现[/size][size=16px]复杂[/size][size=16px]的人[/size][size=16px]血清[/size][size=16px]样本中[/size][size=16px]结构特征[/size][size=16px]多样[/size][size=16px]的农兽药及其代谢物[/size][size=16px]高效富集和净化。[/size][size=16px]([/size][size=16px]2[/size][size=16px])针对农兽药及代谢物种类繁多、性质各异限制其高通量非靶向筛查的问题,通过建立[/size][size=16px]300[/size][size=16px]种以上农兽药及代谢物的标准质谱匹配信息库和保留时间数据库,为农兽药高通量非靶向筛查方法的研发奠定基础。[/size]

  • 3i流式重磅|清华尤政院士/斯坦福赵精晶博士等提出基于点阵光斑激发的高通量流式成像技术

    近日,清华大学精密仪器系尤政教授团队提出了基于点阵激光激发方法的高通量流式成像方法。该方法可实现低成本、高可扩展性的成像流式细胞仪,而且首次验证了全光谱成像流式技术。相关成果以“Imaging flow cytometry using linear array spot excitation”为题在期刊《Device》上发表,并被选为当期封面文章。[align=center][img=c26a7468c0a13da42a1780598874882f_640_wx_fmt=png&wxfrom=5&wx_lazy=1&wx_co=1.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/c494041c-314c-47ad-9e5d-2f92c66f26b9.jpg[/img][/align][color=#c00000][b]研究背景与成果[/b][/color]流式和显微镜是细胞检测的两个基本工具。流式技术具有高通量和丰富的分子检测信息,但缺乏细胞形态信息;相反,荧光显微镜可以提供细胞影像信息,但检测通量低,难以获取足够的样本数据进行统计分析。自流式细胞仪问世以来,其发展趋势一直在于保持高检测通量的同时增加更多信息维度,例如空间形态信息或光谱信息,以实现更准确的细胞分析或分选。成像流式技术是一种整合了流式细胞仪高检测通量和荧光显微镜空间分辨能力的仪器。然而,由于成像通量、分辨率和检测灵敏度之间的基本矛盾,现有的成像流式技术通常采用复杂的光路系统、复杂的图像重构算法,同时成像可扩展性也很有限。这使得成像流式细胞仪难以达到像传统流式细胞仪那样的高检测通道数,并且其高昂的技术成本限制了应用范围。为解决这些问题,清华大学精仪系尤政教授课题组提出了一种基于点阵激光激发的成像方法,即Linear spot array excitation(LASE)。该方法的核心思想是使用点阵结构光斑替代传统流式细胞仪中的椭圆或条状光斑,从而赋予流式细胞仪成像能力。[align=center][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/2a51cd6f-84e6-460b-8bec-791da44f9167.jpg[/img][/align][align=center]图1:点阵激光激发成像原理示意图[/align]图1展示了该成像方法的工作原理。在检测区域中,激发光斑呈一串等间隔的点阵光斑,由衍射光学器件生成,光斑间隔大于细胞大小,并且其排列直线与细胞运动直线呈一定的小角度。当细胞依次通过照明光斑时,将产生一串荧光和散射光信号。在图像重构阶段,只需通过信号的分割和重组即可重建细胞图像。该方法具有实现简单、实时重建的优势,并且与现有流式细胞仪光路结构兼容,因此具有良好的可扩展性,能够在高检测通量的基础上,同时实现多激光、多荧光通道以及无标记成像。[color=#c00000][b]技术成果展示[/b][/color][align=center][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/f7c2ba0d-80b1-411e-8e3f-9420cb746c2c.jpg[/img][/align][align=center]图2. 双激光五通道成像流式系统[/align][align=center][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/965bb49f-6bb0-4cc3-95fc-0151b53c32e8.jpg[/img][/align][align=center]图3.细胞器进行成像与细胞周期研究[/align]本研究利用基于LASE成像方法构建了一个成像系统,具备2色激光(488nm/638nm)和5个成像通道(明场、FITC、PE、PI、APC),如图2A所示。该系统经验证在30×30μm的成像视场下,具有1.3μm的空间分辨率。当细胞样本以5m/s的流速经过探测区域后,系统能够进行无标记的明场成像和荧光成像,且不会出现运动模糊,成像通量最高可达每秒5000个细胞每秒。该系统不仅能够对细胞中的细胞器结构进行成像(见图3A),而且可以在多个荧光波段下,实现对不同细胞结构的同时成像(见图3B)。在生物学应用中,图像被广泛视为金标准,因为它能够为细胞分析提供更为丰富和准确的信息,从而更细致准确地进行细胞分型。举例来说,通过图像,可以在传统流式基础上更进一步区分细胞周期M期的细胞核形态,如图3C所示。[align=center][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/bb721d89-7acb-43ad-9181-552afeb94d76.jpg[/img][/align][align=center]图4. 32通道全光谱成像流式验证[/align]得益于LASE成像方法的高度可扩展性,本论文将成像荧光信号引入一个基于棱镜色散的32通道光谱仪中,初步验证了全光谱成像流式细胞仪的可行性。该系统在保持每秒5000个细胞的检测速度通量的同时,能够同时在32个光谱通道上对细胞进行成像。借助光谱分解算法,可以有效解决多染料检测实验中染料光谱混叠效应的问题,将成像流式细胞仪的理论可检测染料数扩展至30以上的量级。这将大大提高成像流式细胞仪给单细胞分析带来的信息量。[color=#c00000][b]成果优势[/b][/color]该研究提出的点阵激光激发的成像方法,具有以下优势:1、系统简单:采用衍射器件在传统流式细胞仪基础上进行光斑整形,即可实现高通量成像功能,相较于已有成像流式技术,具备显著的成本优势。2、图像重建复杂度低:可实现实时重建,进一步可用于基于图像的实时细胞分选。3、可扩展性强:该技术可搭配多个激光和更多的检测通道,也可结合光谱检测实现全光谱成像,使成像流式细胞仪达到与传统流式细胞仪和光谱流式细胞仪相当的可检测标记数量。该技术提供的高通量和信息量将有效为细胞病理学、多组学、药物筛选、液体活检、单细胞测序等研究领域提供高质量的数据。[b]该研究的第一完成单位为清华大学精密仪器系。中国工程院院士、清华大学精密仪器系教授尤政,斯坦福大学研究科学家赵精晶(原精仪系博士生)为该论文的共同通讯作者。[/b]精仪系博士毕业生韩勇、赵精晶为该文的共同第一作者。精仪系博士毕业生晁子翕、焦泽衡,精仪系博士生张驰、姜凌奇等为该论文共同作者。该研究得到了国家自然科学基金、生物医学检测技术及仪器北京实验室的资助。论文链接:[url]https://www.cell.com/device/fulltext/S2666-9986(23)00183-7#secsectitle0070[/url][align=right](文:清华大学精密仪器系)[/align][来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

  • 镁伽科技与迅识生物达成战略合作,助推高通量测序及CRISPR检测应用

    日前,[b][color=#ea5504]镁伽科技与迅识生物达成战略合作,双方将围绕高通量测序自动化检测整体解决方案及基于CRISPR检测技术的自动化应用开展合作[/color][/b],深度挖掘基因测序及CRISPR检测自动化应用场景和用户需求,聚焦提升核心产品能力,共同推动高通量测序技术和CRISPR检测技术在疾病机理研究、早期筛查诊断和病原检测等领域的创新应用。[img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/34b1bb6c-5fbb-4275-8279-48bafe4c459f.jpg[/img][align=center]▲镁伽科技与迅识生物签署战略合作协议[/align]作为分子生物学领域的重要技术之一,高通量基因测序能够同时进行数百万个DNA序列检测,为测序技术带来了革命性的突破,在基因诊断、基因治疗、基因调控等领域发挥着重要作用。自动化技术的引入使得基因测序的实验通量得以迅速提升,并大幅降低了操作成本,有助于加速开拓多样本处理场景,带动高通量测序技术在体外诊断、生物医药、农业育种等行业的持续增长。迅识生物专注于NGS样本整体解决方案和以CRISPR为核心的即时诊断产品的开发和推广,其中NGS产品线覆盖自动化文库制备平台和配套试剂等,诊断产品线覆盖包括医疗、海关和疾控等多个领域的基因检测需求。镁伽作为专注于生命科学、临床诊断、应用化学等领域的智能及自动化专家,多款高通量基因组学、蛋白组学自动化解决方案已获得市场认可,能够满足多种规模和类型的高通量测序研究项目需求。此次合作依托迅识生物在高通量基因测序、CRISPR检测领域的先进技术和产品,结合镁伽成熟的开放性应用软件和自动化平台整合能力,双方将共同开发具备智能化、数字化、可扩展等优势的实验室整体解决方案,完善高通量测序产品组合,为生命科学领域提供更加精准、高效的核心自动化工具。[b][color=#ea5504]迅识生物创始人陈重建先生表示:[/color][/b][color=#ea5504][color=#000000]“[/color][/color]非常荣幸能和镁伽科技合作,迅识生物一直致力于实现‘触手可及的核酸检测’,无论是在NGS 样本处理全流程解决方案还是在基于 CRISPR 的检测领域,我们都践行着这个目标。迅识在这两个领域已经深耕多年,积累了很多开发和应用经验。镁伽科技在自动化和智能化领域有着非常丰富的积累和实践,希望双方加强在生命科学及相关应用领域的合作,发挥各自优势,互相赋能,携手向前!”[b][color=#ea5504]镁伽科技创始人兼首席执行官黄瑜清先生表示:[/color][/b][color=#ea5504][color=#000000]“[/color][/color]随着基因测序技术、高通量实验、AI等技术的发展,生命科学的智能化正在向着更精准、更经济、更安全的方向发展。镁伽期待与迅识生物携手并进,借助高通量测序自动化技术的优势,进一步拓展多组学自动化解决方案,构筑核心技术的护城河,丰富生命科学自动化技术和生态储备,驱动产业链上下游协同发展。”[img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/1fddf3c2-e3d0-4b93-8c7c-defa66ec45ad.jpg[/img][align=center]▲镁伽科技与迅识生物签约仪式大合影[/align][来源:仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

  • 高通量(场发射)扫描电子显微镜技术进展

    分享一篇关于高通量SEM的文献。《电子显微学报》2023年4月,第42卷第2期。本文重点阐述高通量扫描电镜概念与发展的过程,具体介绍了高通量扫描电镜拟要解决的问题和对应的设计思路,给出了综合数据通量的定义和影响因素。同时阐述了相应的实现手段,分别从重要模组角度介绍高通量扫描电镜的核心性能。通过实际案例计算,分析比较了高通量扫描电镜与标准场发射扫描电镜间的结果差异。探讨了高通量扫描电镜适合应用的领域,同时指出了目前的设计还存在的不足并展望该技术今后的发展前景。

  • PreeKem发布高通量石墨消解仪-食品领域

    PreeKem发布高通量石墨消解仪-食品领域

    刚刚结束的慕尼黑展会中,上海屹尧仪器科技发展有限公司推出了高通量石墨消解仪,最高54位,可以满足大批量样品处理的客户需求,尤其是食品检测领域。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409301140_516482_543_3.jpg

  • 高通量抗体库技术的特点及筛选步骤简要分析

    [font=宋体]高通量抗体库技术是一种创新的生物技术,能够高效快速地开发单克隆抗体。通过使用高通量抗体库技术,研究人员可以同时对多个抗原进行免疫反应,从而在短时间内产生大量的单克隆抗体。下面为大家介绍其特点和筛选步骤:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]高通量抗体库技术的特点包括:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]高通量:该技术可以同时对多个抗原进行免疫反应,从而在短时间内产生大量的单克隆抗体。[/font][font=宋体]快速:通过该技术,可以在短时间内得到针对特定抗原的单克隆抗体。[/font][font=宋体][font=宋体]高效:该技术采用合成生物学细胞重编程方法,建立了能够识别多样性未知抗原的合成免疫细胞组库,可以识别超过[/font][font=Calibri]10^6[/font][font=宋体]种抗原,大大提高了单克隆抗体的开发效率。[/font][/font][font=宋体]无偏见:该技术可以对任何抗原进行免疫反应,不受免疫原性限制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]高通量抗体库技术的筛选步骤包括:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]提取抗原:从目标组织、细胞器或全蛋白组中提取蛋白。[/font][font=宋体][font=宋体]蛋白组分拆分:将蛋白组按照分子量进行拆分,每个组分包含[/font][font=Calibri]300-500[/font][font=宋体]个蛋白,从而降低蛋白组的复杂度并保证不同分子量的蛋白均获得满意的免疫效果。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫小鼠:将拆分后的蛋白组分分别免疫小鼠,制备[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万[/font][font=Calibri]-5[/font][font=宋体]万个特异性识别目标蛋白组的单抗文库。[/font][/font][font=宋体]抗体筛选:通过抗体筛选试验,选择能够与目标抗原特异性结合的抗体。[/font][font=宋体]抗体优化:对筛选得到的抗体进行优化,以提高其亲和力和特异性。[/font][font=宋体]抗体鉴定:通过生物学实验和临床试验等方法,对优化后的抗体进行鉴定,确认其功能和特性。[/font][font=宋体]应用研究:将鉴定合格的抗体应用于研究和临床实践中,以解决实际问题。[/font][font=宋体]总之,高通量抗体库技术是一种高效、快速、无偏见的技术,可以用于开发针对任何抗原的单克隆抗体。其筛选步骤包括提取抗原、蛋白组分拆分、免疫小鼠、抗体筛选、抗体优化、抗体鉴定和应用研究等步骤。该技术的应用范围广泛,可以应用于基础研究、药物研发、诊断试剂开发等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了满足抗体药物筛选等对抗体高通量、快速表达不断增长的需求,义翘神州的重组抗体[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量表达纯化服务[/b][/url]结合了专业的高通量基因合成、载体构建和优化的瞬时抗体表达技术,充分利用义翘优势哺乳动物细胞表达平台,能够提供在[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞中快速生产重组抗体服务。详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service[/font][/font]

  • 高通量重组蛋白表达技术在大肠杆菌中的应用

    [b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在当今的生物技术领域,高通量重组蛋白表达技术在基础研究和商业应用中扮演着非常重要的角色。随着后基因组时代的到来,研究人员对大规模蛋白表达和纯化的需求日益增长,大肠杆菌因其易于遗传操作、低成本、生长迅速成为生产重组蛋白的首选微生物宿主。本文将综述大肠杆菌中高通量重组蛋白表达的现状和未来展望,探讨从目的基因获取到蛋白表达和纯化的先进技术,并讨论如何克服[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][u][font=宋体][color=#0000ff]重组蛋白表达[/color][/font][/u][/url][font=宋体]过程中的挑战。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]高通量重组蛋白表达技术[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量研究是一种能够同时检测数千个生物分子,使大规模重复成为可能的研究。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代初,第一台[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]测序仪被开发出来,人类基因组计划随之开启,高通量技术在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、蛋白质、脂质和代谢物检测的需求也急剧增加。自该技术提出以来,大肠杆菌中高通量重组蛋白表达和纯化已经得到了广泛的应用。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]1. [/font][b][font=宋体]目的基因的制备[/font][/b][font=宋体][font=宋体]获取目的基因是重组蛋白表达的第一步。传统的方法是从[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库中直接克隆基因,但这种方法存在局限性,如从库中筛选基因较为费时以及难以添加融合标签等。高通量[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术是目前获取目的基因最常用的技术,设计引物并调整好参数后,即可在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]仪中自动完成目的基因的制备。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]2. [/font][b][font=宋体]表达载体的高通量构建[/font][/b][font=宋体][font=宋体]研究人员开发了多种构建表达载体的克隆方法,包括基于限制性内切酶的克隆、重组克隆和不依赖于连接反应的克隆等。这些方法各有优势和局限性,但在近年来都有显著改进。例如,基于限制性内切酶的克隆因其简单、高效、通用和成本效益而备受关注。一个理想的大肠杆菌表达载体应具备选择标记、复制起点、转录启动子、[/font][font=Calibri]5'[/font][font=宋体]非翻译区([/font][font=Calibri]5'UTR[/font][font=宋体])和翻译起始位点。此外,融合标签的添加对于目的基因的转录和蛋白表达同样至关重要。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]3. [/font][b][font=宋体]大肠杆菌表达菌株的选择和细胞培养[/font][/b][font=宋体][font=宋体]为保证蛋白质表达成功及其表达质量,应选择合适的大肠杆菌菌株,如[/font][font=Calibri]BL21[/font][font=宋体]及其衍生菌株是较常用的重组蛋白生产菌株。培养大肠杆菌比较简单的方法是分批培养,但此方法对生长的控制比较有限。近年来,高通量培养技术使研究人员能够在一系列发酵条件下处理大量样品,大大加快了生产时间。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]4. [/font][b][font=宋体]高通量蛋白表达和纯化[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量平台可以快速克隆基因、挑选菌落、分离质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、转化细菌、表达和纯化蛋白质。这些平台虽然成本高昂,但为复杂的分子生物学实验操作提供了极大的便利。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论与展望[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌中的[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][u][font=宋体][color=#0000ff]高通量重组蛋白表达技术[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]极大的推进了重组蛋白的表达进程。尽管存在挑战,但通过不断优化和创新,研究人员正在朝着更高效可靠的蛋白质生产系统改进。未来的发展方向包括进一步优化克隆方法、开发新的融合标签、改进表达载体和菌株,以及利用高通量技术实现从[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]到大规模蛋白质生产的快速转变等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献:[/font][font=Calibri]Jia B, Jeon CO. High-throughput recombinant protein expression in Escherichia coli: current status and future perspectives. Open Biol. 2016 6(8):160196. doi:10.1098/rsob.160196[/font]

  • 两款高通量微波消解仪比拼之红方观点:美国培安(CEM) MARS 高通量微波消解

    微波消解仪器的安全以及使用让人关注,现在我们一起来讨论下两款高通量微波消解仪:美国培安和奥地利安东帕是两大著名的微波消解仪器制造商,他们的MARS 和Multiwave3000 仪器拥有广泛的群体,如果你是其中一款仪器的使用者,欢迎您来谈谈在使用过程中仪器的情况、遇到了哪些问题和这些问题又是如何解决的。也欢迎这两家仪器公司的技术人员在这里为大家介绍这两台仪器的性能和各项参数,并为大家答惑解疑。为我们能更好地了解这些仪器提供帮助。更欢迎大家就我们的讨论发表自己的看法,但是灌水或语言攻击会被删除扣分的哦!

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