小鼠静脉可视尾注固定器

[url=http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-ar2.html][b]共[/b]振[b]大鼠头部固定器[/b]SRP-AR2[/url]是一款可用于核磁共振环境中的[b]大鼠头部固定[/b]装置，是[b]大鼠脑立体定位固定实验[/b]和大鼠[b]核磁共振实验[/b]的理想工具。磁共振[b]大鼠头部固定器[/b]SRP-AR2可连接到SR系列固定装置。这样的连接，确保头部的固定极其稳定。当拆卸仪器用于MRI测量时，仪器材料是100％塑料使拆卸过程更容易。可以把标记插入该机械 ，简单地通过对准测量点与测量对象，操作者就能操作MRI测量。一旦MRI测量完成后，该磁共振[b]大鼠头部固定器[/b]SRP-AR2可以很容易地恢复其作为固定仪器的功能，即保持动物的固定。两种型号可供选择：SRP-AR 用于大鼠, 和SRP-AM2 用于小鼠。[b]磁共振[b]大鼠头部固定器[/b]SRP-AR2规格[/b][table=529][tr][td][b]配件[/b][/td][td]六角扳手安装把手耳柱口、鼻夹[/td][/tr][tr][td][b]尺寸大小/重量[/b][/td][td]宽300 x 深120 x 高85mm, 850g[/td][/tr][/table]更多定位仪请浏览官网：[url]http://www.f-lab.cn/stereotaxis.html[/url]

大鼠静脉窦取血操作流程及固定绳操作

高效液相的柱塞固定器和泵头可以取下来用异丙醇超一下吗？“很久没有用那台泵，今天打开看，里面有很多白色结晶物附着，用浸泡过异丙醇的纱布根本檫不掉”

[url=http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-6m-ht2.html][b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b][/url]是用于核磁共振环境的[b]小鼠立体定位仪器[/b],它采用兼容MRI的材料制造，是[b]小鼠核磁共振[/b]和显微操作实验的理想选择。[b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b]头部固定器组件是由100％塑料制成，AP框架棒和基板都由金属制成,保证了稳定和精确的立体定位记录，头部固定组件能够从基板拆卸下来，使得MRI可以扫描固定在相应位置的动物，核磁共振扫描之后，相应位置固定着动物的头部固定组件，能够轻易地放回在基板的原有位置，[b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b]能够用于多种多样的应用，只需更换头部固定组件用于小鼠，结合该设备可以注入标记或造影剂，用于MRI扫描，头部固定组件可以进行立体定位，记录对准动物的MRI扫描点。[img=小鼠MRI立体定位器]http://www.f-lab.cn/Upload/srp-6m-ht2_.jpg[/img][b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2特色[/b]自从NARISHIGE的立体定位操作器根据此标准制作后，AP框架具有18.7mm的方形形状。如提供的 SM-15 立体定位显微操作器。需要带显微操作器的版本请访问SRP-6M。SRP-5M-HT2 和 SRP-6M-HT2 之间的差别在于AP框架杆的数目。 SRP-5装配有一个AP框架杆，而SRP-6装配有两个AP框架杆。用于大鼠的版本分别是SRP-5R-HT2 和 SRP-6R-HT2（SRP-5R 和 SRP-6R不带显微操作器）小鼠MRI立体定位器：[url]http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-6m-ht2.html[/url]

[center]FDA批准10年来首个新型静脉注射用抗高血压药[/center]The Medicines公司8月4日宣布，美国FDA已批准其静脉注射用制剂丁酸氯维地平（clevidipine butyrate，Cleviprex）注射用乳剂在不适用或不希望使用口服制剂的情况下用于高血压的治疗。本品是10年来美国FDA批准的首个新型静脉注射用抗高血压药。 本品作为1种新型静脉注射用抗高血压药，代表了当前高血压治疗中的一大进步，其可以在危重病护理中快速、精确地控制血压。来自急诊室、手术室和重症监护室的综合资料显示，本品将成为医生控制患者血压时的重要选择手段。 本品可迅速起效，可用于精确控制血压。与现有静脉注射用抗高血压药通过肾脏和（或）肝脏代谢不同，本品在血液和组织中代谢，不在体内产生蓄积。信息来源:中国医药123网

[em53] 俺是个新手，老板刚给定下来课题，做小鼠囊胚的免疫电镜，有没有同仁做过，小鼠囊胚这么小怎么固定，脱水，包埋。很愁人，给点建议，帮帮俺吧，谢谢！

大家好： 我想利用免疫电镜检测热应激前后小鼠囊胚中热休克蛋白70的定位情况，有两种方案：1.包埋前免疫电镜：胚胎经多聚甲醛-戊二醛混合液固定后，然后清洗，渗透，封闭，分别与一抗和二抗反应，然后再用锇酸固定，脱水，812包埋。2.包埋后的免疫电镜：胚胎经多聚甲醛-戊二醛混合液固定后，脱水，体温包埋剂渗透，包埋，聚合，超薄切片，最后进行免疫染色。 第一种方案：不知道热休克蛋白70的抗原性保存如何？另外，不知道免疫标记效果如何就进行包埋，是不是有点盲目？ 第二种方案 超微结构和抗原性都保存较好，试验重复性好。但是包埋剂比较贵，而且本试验室没有聚合用的低温冰箱和紫外灯。 请各位大虾帮帮我！

我们需要一根固定液为1.5%OV-17的5米长填充柱，现在需要报买OV17固定液和担体（岛津shimalite80-100目）自行填充，请问各位该如何报买？固定液和担体是否要分开买？各需要多少的量？没有买过，请大家指教！

[center]研究称贝伐单抗导致静脉血栓栓塞风险增加[/center]一项新的荟萃分析结果显示，一种目前正在广泛使用的新一代抗癌药物贝伐单抗（商品名Avastin），可能会导致患者腿部或肺部静脉血栓栓塞风险增加。 此项研究由美国纽约Stony Brook大学的Shobha Rani Nalluri博士及其同事完成，其结果发表在11月19日出版的《美国医学会杂志》上（JAMA，2008,300（19）：2277-2285）。 贝伐单抗是一种血管生成抑制剂类抗肿瘤药，它能阻止和延缓新生血管的生成，阻碍肿瘤的生长及转移。由于贝伐单抗具有较好的肿瘤靶向性，以及对许多类型的实体瘤，如结肠直肠癌、肾癌、乳腺癌和非小细胞肺癌（NSCLC）等均有良好的治疗效果，因此这种新一代抗癌药物在临床上得到了广泛的应用。 静脉血栓栓塞是癌症患者的一种常见并发症和致死因素，同时，越来越多的证据表明，多种抗癌药均能够明显增加癌症患者血栓形成的风险。以往的一些临床研究显示，贝伐单抗也有增加癌症患者血栓形成的倾向，但是由于这些研究涉及的病例数较少，所以一直都无法得出具有统计学意义的结论。为此，Stony Brook大学的研究人员对目前已完成的共纳入7956名不同类型晚期实体瘤患者的15项随机对照临床试验数据进行了荟萃分析，以期解开贝伐单抗是否会导致静脉血栓栓塞风险增加这一谜团。 最终，此项研究的结果显示： 1. 接受贝伐单抗治疗的患者中，有11.9%出现不同程度的静脉血栓栓塞，其中有6.3%属于严重的具有临床意义的静脉血栓栓塞。 2. 与未接受贝伐单抗治疗的患者相比，接受贝伐单抗治疗的患者出现静脉血栓栓塞的风险相对增加33%。 3. 与未接受贝伐单抗治疗的患者相比，接受贝伐单抗治疗的患者出现各种类型静脉血栓栓塞的总风险以及出现严重静脉血栓栓塞的风险均有明显增加。 4. 大剂量（5mg/kg/wk）和小剂量（2.5mg/kg/wk）贝伐单抗治疗，均可导致静脉血栓栓塞风险增加。 5. 贝伐单抗导致各类型静脉血栓栓塞的风险高低与癌症种类有关。 6. 各类癌症患者应用贝伐单抗后出现静脉血栓栓塞的风险排序为：结肠直肠癌（19.1%），NSCLC（14.9%），乳腺癌（7.3%）和肾癌（3.0%）。 研究者得出最终结论，认为贝伐单抗可使癌症患者静脉血栓栓塞风险明显增加，这种风险不仅来自于严重程度较低的静脉血栓栓塞，而且还来自于更为严重的具有临床意义的静脉血栓栓塞。研究者同时认为，此项研究将有助于临床医生和患者进一步认清贝伐单抗导致静脉血栓栓塞的危险性。虽然临床医生和患者无须因此而停止使用贝伐单抗，但在今后的使用过程中应对可能出现的血栓形成症状保持更高的警惕性。信息来源:医药经济报

本文用3H标记的方法研究加替沙星在小鼠体内的吸收、分布和排泄。小鼠静脉注射3H-加替沙星三个剂量：4mg/Kg、8mg/Kg、16mg/kg，用液体闪烁谱仪测定不同时间血药浓度，建立血药浓度-时间关系。结果显示：静脉注射3H-加替沙星在小鼠体内代谢符合二房室开放模型，分布相半衰期T1/2α分别为0.16h，0.15h和0.19h；消除相半衰期T1/2β分别为55.55h，45.75h，和52.11h；表观分布容积V分别为0.77L·Kg-1，0.62L·Kg-1和0.95L·Kg-1；曲线下面积 AUC分别为74.08?g·h·L-1，89.28?g·h·L-1和211.88?g·h·L-1。3H-加替沙星在小鼠体内分布很广，没有发现特异性组织积累。

微透析探针：普通探针；带微注射管；水泥钉；立体定位附件；附套管；引导套管；封闭螺帽；特氟隆管，50cm；连接管，50cm微量注射泵：2通道微量注射泵；流速范围≥0.1 - 20μl/分钟；注射器容积：10μl-5ml自由运动装置配置连接管50cm自由活动装置1套适合于微透析探针动物笼 1套适合于大小鼠样本冷却系统1套样本收集器收集方式PCR96孔板或500μl离心管最小采集量5μl采集速率5秒～99分钟　1秒步进脑立体定位仪固定器耳棒1对三维微操作器；标准电极固定器；定位精度：≤0.1mm操作臂调节范围≥80mm； 电极摆动范围≥90度门齿固定器调节范围≥上下20mm≥前后44.5mm微量注射泵分辨率：0.635微米(1/2步距)注射器(进口)最小注射速度0.01微升/分最大注射速度200微升/分最小可设定注射量0.001微升

微透析探针：2通道微量注射泵；自由运动装置配置；自由活动装置1套适合于微透析探针；动物笼 1套 适合于大小鼠；样本冷却系统1套；样本收集器；PCR96孔板或500μl离心管；最小采集量：5μl；采集速率：5秒～99分钟1秒步进；脑立体定位仪固定器。

双酚A(BisphenolA，BPA)是一种能够干扰人体内分泌系统的外源性化学物质，普遍存在于各类塑料制品中。静脉留置针是连续性静脉输注患者最常接触的医疗器械，其三通接头和延长管均由塑料制成，在患者的使用过程中，存在材质中残留BPA的隐藏风险，甚至通过输液过程转移至人体内，对人体造成危害。 常见的 BPA检测方法有高效液相色谱法(High-Performance Liquid Chromatography，HPLC)、气相色谱法(GasChromatography，GC)、气相色谱-质谱法(Gas Chromatography-mass Spectrometry，GC-MS)、高效液相色谱-质谱法(HighPerformance LiquidChromatography-mass Spectrometry，HPLC-MS) 法等。由于静脉留置针中BPA残留量较低，且痕量BPA样品前处理较为困难，一般通过柱前衍生方法处理样品，但方法繁琐复杂，操作难度较大。本文通过优化固相萃取小柱参数，提高痕量BPA的富集率，达到富集纯化BPA的目的，便于仪器检测。HPLC-MS/MS法采用保留时间与特征离子对已知目标物进行定性和定量分析，准确性和灵敏度远高于普通液相色谱法，且检出限低，优势明显，故样品通过固相小柱富集净化，再用HPLC-MS/MS法定量检测其中BPA含量，可以更高效率地测定静脉留置针中BPA 的含量。

如题，想了解2倍衍射角联动机构作用（书上说其作用：进行扫描时，希望相同衍射级次而不同能量的谱线经过分光晶体后，都出现在一相对固定的脉冲高度上 ）的目的～～如果没有没有2倍衍射角联动机构，能量不同导致脉冲高度不固定，这将给仪器或分析带来啥新情况？

对于组分已知的样品，如果难分离物质对已初步确定，那么选择固定液的指标就是使难分离物质对达到定量分离。1. 按相似性原则选择 按被分离组分的极性或官能团与固定液相似的原则来选择，这是因为相似相溶的缘故。这样，组分在固定液中溶解度最大，分配系数大，保留时间长，分开的可能性就大。（1）按极性相似选择①非极性化合物应首先选择非极性固定液，这时组分与固定液分子间的作用力主要是色散力，组分基本上以沸点顺序出柱，低沸点的先出柱。若样品中有极性组分，相同沸点的极性组分先出柱。②中等极性化合物首选中等极性固定液。分子间作用力为色散力和诱导力。基本上仍按沸点顺序出柱。但对沸点相同的极性与非极性组分，诱导力起主导作用，极性成分后出柱。③强极性化合物，首选极性固定液。分子间主要作用力为定向力。组分按极性顺序出柱，极性强的组分后出柱。（2）按化学官能团相似选择 当固定液与组分的化学官能团相似时，相互作用力最强，选择性最高。例如，被分离的化合物为酯可选择酯和聚酯固定液；化合物为醇可选醇类或聚乙二醇等。2. 按主要差别选择 若组分的沸点差别是主要矛盾，可选非极性固定液；若极性差别为主要矛盾，则选极性固定液。现举例说明：苯与环己烷沸点相差0.6℃（苯沸点80.1℃，环己烷沸点80.7℃），而苯为弱极性化合物，环己烷为非极性化合物，二者极性差别虽然不大，但相对而言比沸点差别大，极性差别是主要矛盾。用非极性固定液很难将苯与环己烷分开。若改用中等极性的固定液，如用邻苯二甲酸二壬酯，则苯的保留时间是环己烷的1.5倍。若再改用聚乙二醇-400，则苯的保留时间是环己烷的3.9倍。3. 按麦氏相常数选择 由于麦氏常数比较全面地描述了固定液的分离特征，因此根据麦氏常数可较快的选择适合于分离对象的固定液。例如，要分离正丁基乙基醚和正丙醇，且正丙醇是杂质，应让它先出峰，因此所选择的固定液应与正丁基乙基醚的作用力强而与正丙醇的作用力弱。Z′值越大的固定液对质子受体的作用力越强；Y′值越大的固定液对质子给体的作用力越大。醚是质子受体，醇是质子给体，因此只有选择具有高Z′/ Y′值的固定液，才能使正丙醇先于正丁基乙基醚之前流出。从下表查得QF-1的Z′/ Y′=355/233=1.52，此值较大，可选作固定液。查得OV-210的Z′/ Y′=358/238=1.50，此值略小于QF-1，但OV-210的最高使用温度为275℃，而QF-1只有250℃。若采用较高柱温，OV-210更合适。

[url=http://www.f-lab.cn/stereotaxis/sr-9m.html]微操作[b]立体定位仪[/b]SR-9M[/url]是专门为小鼠慢性实验设计的[b]小鼠定位仪器[/b]，它可以在小鼠非麻醉状态下在相同位置重复固定，使得小鼠慢性实验或急性实验可以在不造成动物损害情况下顺利地完成。微操作[b]立体定位仪[/b]SR-9M可用于视觉和听觉实验。头部固定器可以从基板移出，因此可以放置在显微镜下。提供一个AP框架槽，可以连接许多不同类型的配件比如显微SM-15 L / R。通过将室框架连接到小鼠头部，在非麻醉状态在同一位置重复定位成为了可能。一旦室框架被固定在头上，不需要麻醉，无需使用口、鼻夹或耳棒小鼠可以被立体定位固定而，使SR-9M可以用于视觉和听觉实验。 [img=微操作立体定位仪]http://www.f-lab.cn/Upload/sr-9m_.jpg[/img]微操作[b]立体定位仪[/b]SR-9M需要不带立体定位显微操作器SM-15的版本，请访问SR-9M-HT。自从NARISHIGE的立体定位操作器根据新标准制作后，AP框架具有18.7mm的方形形状。微操作[b]立体定位仪[/b]SR-9M[b]规格[/b][table=610][tr][td] [/td][td]SM-15 R/L 立体定位显微操作器EB-3B 小鼠耳柱（一对）EB-5N 小鼠辅助耳柱CF-10 室框架 x 5件.[/td][/tr][tr][td]尺寸大小，重量[/td][td]宽400 x 深300 x 高110mm, 9.2kg [/td][/tr][/table]微操作立体定位仪：[url]http://www.f-lab.cn/stereotaxis/sr-9m.html[/url]

关于动物免疫，在多抗制备一部分里有一些讲解（点击这里查看），这里只简要讲述一下单抗制备中需要注意的几个问题。在概述部份已经讨论过，用来制备单抗的动物主要有小鼠、大鼠和兔，由于小鼠易饲养、小鼠单抗技术成熟、路线简单，因此是制备单抗使用的主流动物，这里主要以小鼠单抗制备展开讲述。免疫途径和周期：单抗制备中，免疫动物的方式一般第一针采用皮下免疫，后面的加强免疫采用腹腔免疫、腘内免疫、皮下免疫或者脾内直接免疫。首次免疫和加强免疫结束后，在融合前三天一般还要进行一次冲击免疫，以增加脾脏内浆细胞的数量。下面这张表列出了常见的免疫途径和周期：http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1384840870png_small.jpg 说明：FCA，弗氏完全佐剂；FIA，弗氏不完全佐剂；Quickantibody，北京康碧泉公司研制的佐剂。上表中第四种免疫方法产生的抗体大部份都为IgM，存在亲和力弱等缺点，慎用。关于操作的问题，这里只作一下简单的介绍，具体如何进行，需要在有相关经验的实验员指导下进行，也可以在网上找到相关视频进行学习。（1）皮下注射。皮下注射的操作有点像给人接种疫苗，即挑取动物的皮肤，将混好佐剂的抗原直接注射。一般皮下注射每个注射点注射30-50ul左右混有佐剂的抗原，每只小鼠注射6-8个点为宜。（有的资料上称这种方法为皮内免疫，造成这种概念上的混淆可能是由于早期工作者们的翻译过程出了问题），皮下操作一般由两人进行，一个协助固定小鼠，另一个进行免疫操作。（2）腹腔注射。腹腔注射比较简单，只需要一人操作，操作者由左手抓住小鼠尾巴和颈部皮肤，将小鼠翻转过来，腹部向上，将抗原直接注射到腹腔。如果抗原混有弗氏佐剂，建议注射在左侧腹腔，如果采用右侧腹腔注射，则在免疫过程中，很容易导致小鼠脾脏与腹膜粘连的情况，造成后期取出脾脏麻烦。（3）尾静脉注射。个人觉得尾静脉注射是技术要求最高的一种注射方式，操作者需要固定小鼠，然后将抗原注射到小鼠尾部静脉（正中间那根血管）。小鼠尾静脉比较细小，一般新手很难操作成功，需要在其它小鼠身上多次尝试才可以进行免疫操作（站长自己尝试了十多次都未成功）。静脉注射抗原对抗原的要求更高，抗原必须不含去垢剂和其它有毒成份，否则极容易引起动物死亡，而且免疫剂量也不宜过大。（4）脾内注射。脾内注射是效果最好的免疫方式，因为这种方式使得脾细胞直接与抗原接触，所以很容易引起免疫应答反应。但是很多人都认为这种方式操作复杂，而且死亡率高，但是参考了一些文献，加上自已实践操作，站长自己总结出了一套比较好的办法，成功率基本上在百分之百。具体操作方法：先用乙醚或戊巴比妥钠进行麻醉，乙醚麻醉过程比较简单，技术含量低，对于初学者比较适用，推荐。事先准备一块棉花，将少量乙醚倒在棉花上，用一烧杯倒扣住，将小鼠也扣在烧杯下，一般在一分钟内小鼠就可以晕到，此时将小鼠取出，用胶带固定在木板或实验台上（腹部向下，背面向上。无需无菌），用手术剪刀剪开背部左侧皮肤（大至就是脾脏所在的位置，不要剪开内膜），剪开小口后，用手将剪口撕大看到腹膜内脾脏即可将用注射器刺穿腹膜，插入脾脏，直接注射抗原，抽出注射器。然后用胶水（推荐AB胶，五金店有卖的）将剪口周围的毛粘好，胶干后在伤口周围涂上抗生素即可，无需要无菌操作。由于需要用到胶水，所以手术前不要用酒精消毒。（5）小腿肌肉注射。这是康碧泉公司的Quickantibody佐剂独有的免疫方法，具体操作是：先抓紧小鼠，用无名指固定一只后腿，将小腿部分用酒精消毒，将混好佐剂的抗原（根据佐剂说明书抗原与佐剂等体积混合）直接注入到小腿肌肉，稍稍停顿后拔出注射器即可。完成首次免疫和加强免疫后，可以取出少量血清进行效价检测（参见多抗制备中的血清采集与检测），达到足够高的效价后即可进行冲击免疫，冲击免疫完成后，应在96小时内完成细胞融合，否则相应的B细胞数量会下降到未冲击前的水平。在单抗制备过程中，除了通过免疫动物得到可分泌抗体的B细胞外，还可以将未免疫的小鼠脾脏取出，在体外进行免疫，从而大大加快制备周期，其基本方法是：取出未免疫小鼠的脾脏，处理成为单个细胞，然后在完全培养基中培养，同时加入一定浓度的抗原刺激其产生抗体。需要注意的是，这种方法由于不存在完整的免疫应答路径，所以只能产生出亲和力不成熟的IgM型的抗体，大部分实验中基本不能使用这种抗体（除非是专门研究IgM抗体特性）。

黄芪静脉输液中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定摘要:建立黄芪静脉输液中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定方法。方法：用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量，用碘量法测定黄芪多糖的含量。结果：黄芪甲苷和黄芪多糖的平均回收率分别为9751％、9918％，相对标准差分别为248％、191％。结论：本文建立的方法准确可靠、灵敏度高、重现性好，可作为黄芪静脉输[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量控制的有效方法。关键词:黄芪甲苷；黄芪多糖；高效液相色谱法；碘量法； 英文摘要:ToestablishthemethodfordeterminationofastragalosideIVandastragaluspolysaccharidesinRadixAstragaliinjectionMETHODS：AstragalosidewasdeterminedbyHPLCandastragaluspolysaccharidesbyiodometryRESULTS：Therecoveriesofastragalosideandastragaluspolysaccharideswere9751％RSD=248％and9918％（RSD=191％）respectivelyCONCLUSION：Thismethodisaccurate，sensitiveandrepeatable，andcanbeusedforqualitycontrolofthepreparation英文关键词:astragaloside；astragaluspolysaccharide；HPLC；iodometry；contentdetermination黄芪为补气药，性甘温，归肺、脾经，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功效。医疗实践证明，黄芪注射液对心气虚损、血脉瘀阻、病毒性心肌炎、心功能不全、脾虚困湿之肝炎有较好的疗效，也是肿瘤、免疫功能低下等较理想的辅助治疗药物。目前临床所使用的黄芪注射液为小容量针剂，需稀释后滴注，且不含黄芪多糖，所以疗效不够理想。为此，武警四川总队乐山医院和四川省乐山市三民药物研究所共同研制了含黄芪多糖、黄酮、苷类等有效成分的黄芪静脉输液。黄芪注射液的含量检测尽管WS3－β－3335－98执行标准仅要求采用薄层色谱法，但因高效液相色谱法操作更简便，精密度更高，故笔者参照文献以蒸发光散色高效液相色谱法[1]测定黄芪静脉输液中的黄芪甲苷含量；至于黄芪多糖含量的检测则选择采用碘量法。1仪器与试药11仪器美国奥泰公司高效液相色谱仪，包括蒸发光散射（ELSD）500检测器、Alltech426主机泵；电动离心机（江苏金坛公司）；TP－150超声波清洗机（北京天鹏公司）。12试药黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0781－9908）；甲醇、乙醇、正丁醇、氢氧化钠、硫酸、葡萄糖均为分析纯；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水。2方法和结果21黄芪甲苷含量的测定211色谱条件：色谱柱为ODS柱（250mm×40mm），柱温为40℃，流动相为乙腈－水（36∶64），流速为06ml/min，进样量为20μl。212漂移管温度选择：根据ELDS检测使用手册推荐，设置气体流速为300slpm，漂移管温度为75℃，观察流动相（不进样）进入检测器的基线噪音，不断改变漂移管温度（步长为5℃），根据基线随温度的变化情况，选择95℃为试验最优温度。213载气流速选择：设定漂移管温度为95℃，取黄芪甲苷对照液恒量，得相应峰面积，不断改变气体流速（步长为025slpm）观察峰面积和基线的变化情况，最终选择270slpm为试验最优载气流速。214最低检测限试验：精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成浓度为1mg/ml的溶液作为贮备液，精密量取适量，逐步稀释测定，直到黄芪甲苷主峰信号为检测器噪声水平的3倍为止。得黄芪甲苷最低检测限为153ng。215线性试验：取“214”项黄芪甲苷对照品贮备液适量，精密量取10、20、30、40、50、60分别置于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度（约相当于黄芪甲苷01、02、03、04、05、06mg）。以对照品峰面积的常用对数值为横坐标（X），以进样量的常用对数值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=06001X—34896（r=09991），黄芪甲苷进样量在20μg～120μg范围内线性关系良好。216精密度试验：精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至浓度为025mg/ml的溶液作为对照溶液，注入液相色谱仪，连续重复进样6次，测得黄芪甲苷的相对标准差为179％，精密度符合规定。217重现性试验：精密量取黄芪注射液适量（相当于黄芪甲苷约20mg）5份，按“2110”项下方法制备，测定黄芪甲苷含量。结果黄芪注射液中黄芪甲苷为2390mg，RSD=201％，表明方法重现性良好。218稳定性试验：取“217”项下样品溶液，分别于0、1、2、3、5、8h取样测定峰面积，结果RSD=107％，表明黄芪甲苷溶液在8h内基本稳定。219回收率试验：分别精密量取黄芪注射液适量（约相当于黄芪甲苷10、12、14mg）共3份，每份各精密加入对照溶液（0404mg/ml）25、30、35ml，按“2110”项下方法制备，测定黄芪甲苷含量，结果详见表1。由表1可见，平均回收率为9751％，RSD=248％，符合规定，说明方法具有可行性。2110样品中黄芪甲苷的含量测定：精密量取黄芪注射液100ml，置于烧杯中浓缩至10ml，加无水乙醇40ml沉淀，放置20min，离心，沉淀用80％的乙醇溶液洗涤2次，每次10ml，合并离心液与洗涤液，置水浴上蒸干。残渣加1％NaOH溶液10ml溶解，用饱和的正丁醇水溶液提取3次，每次20ml，合并正丁醇的水溶液，蒸干，残渣再加1％NaOH溶液5ml溶解，通过已处理的D101大孔吸附树脂柱（Φ15×20cm，内装树脂高约10cm）吸附，以1％NaOH溶液50ml洗脱，弃去，用蒸馏水洗至中性，再用30％乙醇溶液50ml洗脱，弃去洗脱液，继续用70％乙醇液50ml洗脱，收集洗脱液并蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至10ml，得供试品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释成浓度为01、03mg/ml的溶液作为对照溶液。分别精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，并以峰面积和进样量的对数值按二点法计算，详见图1；3批样品按上述方法制备测定，结果详见表2。22黄芪多糖含量的测定[2，3]221线性试验：精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖适量，加水溶解并稀释成浓度为10mg/ml的标准溶液，分别精密量取此标准溶液100、90、80、70、60ml，置于250ml碘量瓶中，分别加水0、10、20、30、40ml，然后精密加入01mol/L碘滴定液25ml，在不断振摇的情况下缓缓滴加01mol/LNaOH40ml，密塞，在暗处放置10min，然后加入05mol/LH2SO4液6ml，摇匀，立即用01mol/LNa2S2O3滴定液滴定，近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并同时作空白试验校正。以取样量（X）与Na2S2O3的消耗量（Y）进行线性回归，得回归方程为Y=009766X—000244，（r=09999），表明葡萄糖在60mg～100mg的范围内线性关系良好。222重现性试验：精密量取黄芪注射液100ml,按“224”项下方法制备5份，测定黄芪多糖含量，结果为10423mg，RSD=099％，表明方法重现性良好。223回收率试验：分别精密量取黄芪注射液（多糖含量为10423mg/100ml）120、150、180ml，每份各加入葡萄糖标准液（25002mg/ml）50、60、70ml制成80％、100％、120％浓度的溶液。分别浓缩至10ml，加无水乙醇40ml，放置20min，离心。沉淀用80％乙醇洗涤2次，每次10ml，弃去离心液与洗涤液，沉淀加热蒸馏水10ml溶解，并转移至25ml容量瓶中，定容，摇匀。分别精密量取3种不同浓度的溶液80、70、60ml置于250ml碘量瓶中，分别精密加水2、3、4ml，按“224”项方法测定，每个浓度测定3次，共9次，计算得到回收率为9918％，RSD=191％，详见表3。224样品中黄芪多糖的含量测定：精密量取黄芪注射液100ml，浓缩至10ml，加无水乙醇40ml，放置20min，离心。沉淀用80％乙醇洗涤2次，每次10ml，加热蒸馏水3ml使沉淀溶解并定容至10ml，摇匀。移置于250ml碘量瓶中，加入1mol/LH2SO420ml，置于水浴中水解2h，取出，放冷，加入2mol/LNaOH溶液调节pH值=7，冷却至室温。精密加入碘滴定液（01mol/L）25ml，在不断振摇的情况下缓缓滴加01mol/LNaOH40ml，密塞，置暗处放置10min。然后加入05mol/LH2SO46ml，摇匀，立即用Na2S2O3滴定液（01mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并同时作空白试验校正，计算即得（每1ml上述碘滴定液相当于9008mg的C6H12O6）。3批黄芪注射液样品，按上述方法测定多糖含量均符合规定，结果详见表4。3讨论测定黄芪甲苷含量时，如将精密量取的黄芪注射液浓缩后仅采用正丁醇的水饱合液提取制得供试品溶液，则所得的样品杂质峰多，基线略有漂移，因此不宜采用。黄芪多糖主要为葡萄糖，因此，可采用以葡萄糖或葡聚糖作对照品的苯酚－浓硫酸法[4]、蒽酮－浓硫酸法[5]或水解后用碘量法等测定其含量，但一般多采用后两种方法。采用蒽酮－浓硫酸法时，由于其线性试验回归方程为C=98481A＋08314（r=09663），浓度线性范围为35～165μg/ml，线性关系不好，故不宜采用。

1．实验动物的抓取和固定小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其它粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定,如尾静脉注射架或粗的玻璃试管。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作,如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。2．实验动物的麻醉方法麻醉(anesthesia)的基本任务是消除实验过程中所至的疼痛和不适感觉，保障实验动物的安全，使动物在实验中服从操作，确保实验顺利进行。(一)常用局部麻醉剂：普鲁卡因，此药毒性小，见效快，常用于局部浸润麻醉，用时配成0.5％～1％；利多卡因，此药见效快，组织穿透性好，常用1％～2％溶液作为大动物神经干阻滞麻醉，也可用0.25％～0.5％溶液作局部浸润麻醉。(二)常用全身麻醉剂：1. 乙醚 乙醚吸入法是最常用的麻醉方法,各种动物都可应用。其麻醉量和致死量相差大,所以其安全度大。但由于乙醚局部刺激作用大,可刺激上呼吸道粘液分泌增加；通过神经反射还可扰乱呼吸、血压和心脏的活动，并且容易引起窒息，在麻醉过程中要注意。但总起来说乙醚麻醉的优点多，如麻醉深度易于掌握，比较安全，而且麻醉后恢复比较快。其缺点是需要专人负责管理麻醉，在麻醉初期出现强烈的兴奋现象，对呼吸道又有较强的刺激作用，因此，需在麻醉前给予一定量的吗啡和阿托品(基础麻醉)，通常在麻醉前20－30分钟，皮下注射盐酸或硫酸吗啡(每公斤体重5～10mg)及阿托品(每公斤体重0.1mg)。3．实验小鼠的给药方法在动物实验中，为了观察药物对机能功能、代谢及形态引起的变化，常需将药物注入动物体内。给药的途径和方法是多种多样的，可根据实验目的、实验动物种类和药物剂型等情况确定。 　（一）给药方法1．注射给药（1）皮下注射给药皮下注射给药是将药液推入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环的过程。作皮下注射常选项背或大腿内侧的皮肤。操作时，常规消毒注射部位皮肤，然后将皮肤提起，注射针头取一钝角角度刺入皮下，把针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。拔针时左手拇、食指捏住进针部位片刻，以防止药物外漏。注射量约为0.1-0.3ml/10g体重。（2）皮内注射给药是将药液注入皮肤的表皮河真皮之间，观察皮肤血管的通透性变化或皮内反应，接种、过敏实验等一般作皮内注射。先将注射部位的被毛剪掉，局部常规消毒，左手拇指和食指按住皮肤使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连接4.5针头穿刺，针头进入皮肤浅层，再向上挑起并梢刺入，将药液注入皮内。注射后皮肤出现一白色小皮丘，而皮肤上的毛孔极为明显。注射量为0.1ml/次。（3）肌肉注射给药小鼠体积小，肌肉少，很少采用肌肉注射。当给小鼠注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，采用肌肉注射。操作时1人保定小鼠，另一人用左手抓住小鼠的1条后肢，右手拿注射器。将注射器与半腱肌呈90°角迅速插入1/4,注入药液.用药量不超过0.1ml/10g体重.

操作条件对于色谱分离有很大影响。１、柱长，柱内径：一般讲，柱管增长，可改善分离能力，短则组分馏出的快些；柱内径小分离效果好，柱内径大处理量大，但柱内径过大，将导致担体不能均匀地分布在色谱柱中。分析用柱管一般内径为３－６毫米，柱长为１－４米。２、柱温：是一个重要的操作变数，直接影响分离效能和分析速度。选择柱温的根据是混合物的沸点范围，固定液的配比和鉴定器的灵敏度。提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高，柱寿命延长。一般采用等于或高于数十度于样品的平均沸点的柱温为较合适，对易挥发样用低柱温，不易挥发的样品采用高柱温。３、载气流速：载气流速是决定色谱分离的重要原因之一。一般讲流速高色谱峰狭，反之则宽些，但流速过高或过低对分离都有不利的影响。流速要求要平稳，常用的流速范围每分钟在１０－１００亳升之间。４、固定相：固定相是由固体吸附剂或涂有固定液的担体构成。（１）固体吸附剂或担体粗细：一般采用４０－６０目、６０－８０目、８０－１００目。当用同等长度的柱子，颗粒细的分离效率就要比粗的好些。（２）固定液含量：固定液含量对分离效率的影响很大，它与担体的重量比一般用１５％－２５％。比例过大有损于分离，比例过小会使色谱峰拖尾。５、进样：一般讲进样快，进样量小，进样温度高其分离效果好。对进液体样，速度要快，汽化温度要高于样品中高沸点组分的沸点值，一次汽化，保证色谱峰形不致展宽、使柱效高。当进样量在一定限度时，色谱峰的半峰宽是不变的。若进样量过多就会造成色谱柱超载。一般讲柱长增加四倍，样品的许可量增加一倍。对于常规分析，液体进样量为１－２０微升；气体进样量为０、１－５毫升。

1、 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培养箱培养。6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。8、在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流出并控制其流量；反复吹吸受精卵，使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核，直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置，不致于混搅，注射完毕后，放入5% CO2，37C0培养箱培养。9、将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g，腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管，用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵，吸取方法是先吸一段较长的M2，吸一个气泡，然后吸取受精卵，尽量紧密排列，再吸一段液体，吸一个气泡，再吸一段液体，共四段液体三个气泡。除较长的那段液体，其余的液体大致1cm左右，气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口，轻轻将移植管内的液体吹入，看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡，即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔，缝合肌肉和皮肤。10、受体每隔一个星期称体重一次，当第二次比第一次称重增加时，即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩，待仔鼠3周后，剪耳、编号，剪尾，交分子组检测。(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体，此时的小鼠卵数较多，状态较好。用pms诱导卵细胞成熟，用hcg超排。)

脑卒中是全球致伤致残致死3大原因之一，据全球疾病负担统计2019年全世界有1 220万人发病[1]，我国有394万人首发[2]；另一统计称2020年我国有340万人首发并有约220万人留下残疾[3-4]。缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）约占卒中类型的85%[4-5]。IS预后结局差，复发率高而且极有可能造成后遗症如偏瘫、后肢痉挛、震颤等。其病理机制也十分复杂，涉及细胞过度自噬、离子失衡与谷氨酸过度释放、氧化应激与自由基、炎症爆发和神经细胞凋亡[5-7]等。 目前治疗IS的主要方法为重组组织型纤溶酶原激活剂（recombinant tissue-type plasminogen activator，rt-PA）静脉溶栓、手术取栓和神经保护。手术风险高，rt-PA治疗时间窗短，且有出血风险，符合治疗条件的病人不到10%[8]，而神经保护的药物在临床上的效果不如动物实验那么有效，目前急需开发更安全可靠的治疗IS的用药。在长期的医学实践中，银杏叶提取物在治疗脑卒中和心肌梗死方面疗效显著[9]。其中，银杏内酯作为天然的血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）受体拮抗剂，因其具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和神经保护的作用[10-12]而越来越受到关注。 银杏二萜内酯葡胺注射液（Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection，DGMI）以银杏叶提取物为原料，主要组成为银杏内酯A（ginkgolide A，GA，35%）、银杏内酯B（GB，60%）、银杏内酯C（GC，2%）、银杏内酯K（GK，2%），含总银杏内酯5 mg/mL[13]，银杏二萜内酯成分达98%以上[14]。临床显示，DGMI可有效改善IS发病90 d时患者的神经缺损评分，同时改善患者认知和行动能力，并且在中老年患者中疗效优于银杏叶提取物注射液（金纳多）[15-18]，Zhao等[15]认为DGMI与rt-PA联用治疗急性卒中效果更佳。最新一项临床研究发现，单独使用DGMI对急性缺血性脑卒中治疗有效[19]。也有多项体内外实验证明DGMI具有改善脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）的作用，主要与PAF受体[20]、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）- 蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）、核因子-红细胞2相关因子2（nuclear factor-erythroid 2 related factor 2，Nrf2）[13]等通路有关。 黑质为重要的运动和感知调节中枢，是脑内合成多巴胺的主要核团，与背侧基底核、底丘脑构成基底运动环路[21]，可能通过多巴胺能神经与IS引发的震颤等运动障碍相关。为明确DGMI在黑质脑区抗CIRI的作用通路，本研究通过建立小鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，模拟急性IS时脑内局灶性缺血缺氧的状态，利用转录组测序对小鼠脑样本进行测序，并结合生信分析鉴定DGMI在黑质脑区抗脑缺血损伤的作用通路及功能效应，为深入探索其作用机制提供思路。 1 材料 1.1 动物 SPF级雄性C57BL/6小鼠，6～8周龄，体质量18～22 g，购自南京市江宁区青龙山动物养殖场公司，生产质量合格证SCXK（浙）2019-0002。动物于江苏康缘药业有限公司动物房普通清洁级环境中适应性饲养1周，温度（24±2）℃、12 h光昼交替，自由进食饮水。动物实验经江苏康缘药业有限公司动物委员会批准（批号2023110101）。 1.2 药品与试剂 DGMI（商品名为尤赛金，国药准字z20120024，批号220703）由江苏康缘药业有限公司提供；银杏叶提取物761（Ginkgo biloba extract-761，EGb-761，商品名为金纳多，3.5 mg/mL，国药准字HC20181022，批号P6001）由台湾济生医药生技股份有限公司提供；1800AA型小鼠硅胶线栓购自广州佳灵生物有限公司；舒泰50（货号BN8G4VA）购自法国维克公司；2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride，TTC，批号BCCJ6488）购自美国Sigma公司；RNA提取试剂盒（批号AM90890A）购自日本Takara公司；Qubit RNA BR Assay kit（批号2506001）、Qubit 1X dsDNA HS assay kit（批号2483579）购自美国Invitrogen公司；Illumina Poly(A) Capture（批号20733163）、Illumina RNA Prep Ligation（批号20723247）、IDT for Illumina RNA Index Anchors（批号20717954）、IDT for Illumina DNA/RNA UD Indexes（批号20739487）、NextSeqTM 2000 P3 300循环试剂盒（批号20751014）购自美国Illumina公司；RNA Screen Tape（批号02020849-192）、RNA Screen Tape缓冲液（批号0006698095）、D1000 Screen Tape（批号0202853-39）、D1000试剂（批号0006739609）购自美国Agilent公司。 1.3 仪器 DOM-1001型显微镜、RFLSI ZW型激光散斑血流成像系统（深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；PY-SM5（LCD）型LCD高精度智能温控器（余姚市品益电器有限公司）；NanoDrop分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific公司）；4150型TapeStation自动化电泳系统（美国Agilent公司）；Qubit 4.0型核酸定量仪（美国Invitrogen公司）；NextSeqTM 2000型测序仪（美国Illumina公司）。 2 方法 2.1 动物分组、造模及给药 小鼠适应性饲养5 d后，随机分为假手术组、模型组、DGMI（25 mg/kg）组及EGb-761（100 mg/kg）组，为确保各组术后存活10只小鼠，假手术组设置10只，模型组设置16只，EGb-761组和DGMI组设置14只。 小鼠ip舒泰50麻醉后，参照LONGA法[22]复制MCAO模型。用线栓阻塞小鼠大脑中动脉血流，缺血1 h时，拔出线栓恢复血流，进行再灌注，并结扎颈外动脉剪口。假手术组小鼠进行颈动脉暴露处理，但不插入栓线。手术过程室温控制在（26±1）℃，术后使用加热垫等设备维持小鼠体温保持37 ℃。线栓进入后，将小鼠俯卧位固定，纵向剪开头皮，充分暴露颅骨，置于激光散斑血流成像系统下进行血流检测，确保造模成功。采用RFLSI Analysis v2.0.29.26606软件分析数据，在缺血侧及对侧一致位置添加相同的区域，得到脑血流量统计结果。对造模小鼠进行筛选，排除造模不成功、大出血、蛛网膜出血及过早死亡的小鼠，最终纳入统计的共有40只小鼠，每组分别10只。 基于本课题组预实验结果，DGMI对小鼠MCAO模型术后24 h脑梗死面积改善程度的最佳剂量为25 mg/kg。因此，本研究采用25 mg/kg剂量开展DGMI的药效评价。DGMI组术后30 min ip药物（DGMI以生理盐水将稀释成2.5 mg/mL的溶液），EGb-761组术前1 h ip药物，假手术组和模型组ip等体积生理盐水。 2.2 神经功能评分与脑组织TTC染色 小鼠再灌注24 h后进行改良版神经功能缺损评分（modified neurological severity score，mNSS）[23]。评分后取血，迅速取脑组织，?20 ℃冰箱中冷冻15 min，随后将冷冻后的脑组织切成厚度为2 mm的冠状切片共6片，使用2% TTC染液于37 ℃恒温水浴锅中避光染色10 min，用4%多聚甲醛溶液对脑片进行固定，24 h后拍照。使用Image-Pro Plus 6.0软件计算脑梗死面积。 脑梗死面积＝白色缺血面积/总面积 2.3 脑黑质RNA提取和转录组测序 取小鼠脑黑质，每组4个样本，经高速冷冻研磨机粉碎成匀浆后，按照RNA提取试剂盒说明书提取RNA。经过RNA质量控制后，筛选3个符合条件的样品，按照Illumina文库制备体系，完成文库的构建稀释与上机测序。 2.4 转录组数据分析 2.4.1 转录组数据处理与质量分析 利用Trimmomatic[24]软件对测序数据进行滤过，获取高质量的数据信息，直接从基因组网站下载参考基因组和基因模型注释文件，使用HISAT2[25]和String Tie[26]软件将clean reads与参照基因组进行比对和拼接。 2.4.2 降维分析与模型评价 将各组数据进行降维分析，主要分为主成分分析和tSNE降维分析，比较各组离散程度。 2.4.3 差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs）筛选 采用DESeq[27]软件包对各组细胞的基因表达量进行差异分析，模型组DEGs以模型组vs假手术组筛选，给药组DEGs以给药组vs模型组筛选，筛选标准为|log2差异倍数（fold change，FC）|≥2且Padjust≤0.05。 2.4.4 基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA） GSEA通路富集分析不局限于某些目标基因集，而是从所有基因的表达丰度出发，分析在不同的通路中的基因的整体表达影响，理论上更容易囊括细微但协调性的变化对生物通路的影响。参照徐小波等[28]研究，计算药物干预后表达趋势逆转的通路数与模型组特征通路总数的比值（响应值），并评价药物抗脑缺血再损伤的能力。 2.4.5 基因本体（gene ontology，GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析 运用R语言limma[29]软件包对差异基因进行GO功能和KEGG通路富集分析，并用R语言将相关信息可视化。GO功能包括生物学过程（biological process，BP）、细胞组分（cellular component，CC）和分子功能（molecular function，MF）。使用超几何检验进行富集分析。FDR校正的P≤0.05被认为显著富集。 2.5 qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证关键基因表达 按照试剂盒说明书提取脑黑质中总RNA并合成cDNA，进行qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]分析。采用2?ΔΔCt法计算相关关键基因表达。溶质载体家族6成员A3（solute carrier family 18 member A3，Slc6a3）、钙调蛋白样4（calmodulin like 4，Calml4）、G蛋白亚基γ14（G protein subunit gamma 14，Gng14）、C-C基序趋化因子2（C-C motif chemokine ligand 2，Ccl2）、色氨酸羟化酶2（tryptophan hydroxylase 2，Tph2）、C-X-C趋化因子1（C-X-C motif chemokine ligand 1，Cxcl1）、β-actin引物序列见表1。 图片 2.6 统计学分析 实验结果使用Graghpad prism 9.0软件进行统计分析。两组间比较采用独立样本t检验，组间多重比较采用单因素方差分析（One way ANOVA）和Dunnett-t检验，数据以表示。 3 结果 3.1 脑血流成像结果 通过脑血流仪监测小鼠脑皮质血流量变化，如图1和表2所示，发现插入线栓缺血时，与假手术组比较，各组小鼠手术缺血侧脑皮质血流量均显著降低（P＜0.001），表明缺血造模成功，建立的小鼠MCAO脑缺血再灌注模型稳定可靠。 图片图片 3.2 DGMI对MCAO模型小鼠的药效评价 3.2.1 DGMI对MCAO模型小鼠mNSS的影响 脑缺血再灌注后24 h，各组小鼠mNSS结果见图2，假手术组为0分，无神经功能损伤；与假手术组比较，模型组小鼠mNSS显著升高（P＜0.001），神经功能损伤严重；与模型组比较，各给药组mNSS显著降低（P＜0.01、0.001）。表明MCAO造模可导致小鼠神经功能受到损伤，引起小鼠行为学发生变化；EGb-761和DGMI可显著改善小鼠缺血再灌注造成的神经功能损伤。 图片 3.2.2 DGMI对MCAO模型小鼠脑梗死面积的影响 如图3所示，TTC染色后，假手术组脑切片呈均匀的红色，模型组脑切片缺血侧有明显的白色梗死部位；与模型组比较，各给药组小鼠脑梗死面积 显著减小（P＜0.001）。表明DGMI和EGb-761可显著改善小鼠脑梗死面积，对小鼠脑梗死有一定治疗作用。 图片 3.3 转录组测序分析 3.3.1 转录组测序数据质量分析 在建立的测序文库中，超过Q30的比例在94%以上，对测序数据中reads进行滤过后，数据质量控制结果显示，与参考基因组的序列比对率在70%以上，表明测序结果较好。 3.3.2 降维分析与模型评价 经主成分分析发现，假手术组和模型组明显分离（图4-A）。对各组进行tSNE降维分析，发现DGMI组与模型组明显分离（图4-B）。 图片 3.3.3 DEGs分析 如图5-A～C所示，与假手术组比较，模型组共筛选得到88个差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs），其中78个基因上调，10个基因下调。与模型组比较，DGMI组有21个基因上调，108个基因下调；EGb-761组有92个基因上调，84个基因下调。分别对模型组和DGMI、EGb-761组的DEGs取交集，如图5-D所示，DGMI组与模型组共有32个差异基因重合，EGb-761组与模型组共有31个差异基因重合，三者共有10个DEGs重合。 图片 图6中展示了EGb-761组、DGMI组和模型组DEGs重叠部分的热图，共53个DEGs。可以发现，这部分DEGs在给药后有不同程度的逆转。此外，在Lv等[30]通过131个小鼠和39个大鼠样本MCAO模型筛选出的15个共同DEGs中，模型组DEGs中有活化转录因子3（activating transcription factor 3，Atf3）、组织基质金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinases 1，Timp1）、分化抗原14（cluster of differentiation 14，Cd14）、半乳糖结合凝集素3（lectin, galactoside-binding, soluble 3，Lgals3）、血红素加氧酶（heme oxygenase 1，Hmox1）、Ccl2、上皮膜蛋白1（epithelial membrane protein 1，Emp1）、热休克蛋白家族B成员1（heat shock protein family B member 1，Hspb1）、血小板反应蛋白基序1型去整合素和金属蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1，Adamts1）、波形蛋白（vimentin protein，Vim）共10个基因重合（66.7%）。Lv等[30]发现的与人类卒中易感基因联系最强的基因Adamts1、锌指蛋白（zinc finger protein 36，Zfp36）、核因子κB抑制剂zeta（nuclear factor kappa B inhibitor zeta，Nfkbiz）、Ccl2和Hmox1中，本研究模型组中也有3个重合。 图片 3.3.4 GSEA结果 如图7所示，GSEA结果显示，与假手术组比较，模型组表达相反的通路有35条，定义这些通路为模型组的特征通路；DGMI与模型组趋势相反的通路有7条，如帕金森症、色氨酸代谢、嘧啶代谢等通路，响应值为20%左右。 图片 3.3.5 DEGs的GO功能富集分析 为明确小鼠MCAO造模及药物干预后所涉及的生物学功能变化，对模型组和DGMI组小鼠脑组织DEGs进行GO功能富集分析，见图8。结果显示，模型组主要富集在细胞对白细胞介素-1和γ干扰素的反应、趋化因子互作和免疫细胞的浸润等BP，细胞外空间、细胞外区域等CC，趋化因子受体结合等MF。DGMI干预后，主要富集在分泌颗粒、神经肽激素信号通路等BP，细胞外空间与区域，多巴胺能神经突触等CC，S100蛋白结合、激素与神经肽激素等MF。 图片 3.3.6 DEGs的KEGG通路富集分析 为明确DGMI对MCAO模型小鼠KEGG通路的影响，基于获得的DEGs进行KEGG通路富集分析，见图9。结果显示，模型组前15条KEGG通路主要与炎症、凋亡和免疫反应相关，富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）信号通路、白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）信号通路、趋化因子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路等。DGMI组KEGG通路主要富集在神经活性配体-受体作用、多巴胺能神经突触等。 图片 进一步分析发现，模型组KEGG通路中出现频率较高（≥3）的关键差异基因为Ccl12、Ccl2、Cxcl1等，见表3。DGMI组KEGG通路中出现频率较高（≥3）的关键差异基因是Gng14、Slc6a3、Calml4等，见表4。 图片 Ccl12、Ccl2与免疫细胞趋化浸润脑区有关，Gng14编码的蛋白质参与G蛋白偶联受体通路，而Slc6a3、Calml4与多巴胺在脑内的转运分泌密切相关，提示DGMI治疗IS可能与多巴胺能信号通路密切相关。 3.4 qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证关键基因表达 对模型组和DGMI组部分关键基因表达进行qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证，如图10所示，与对照组比较，模型组小鼠脑组织Slc6a3、Tph2基因表达水平显著降低（P＜0.001），Calml4、Ccl2、Gng14、Cxcl1基因表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）；与模型组比较，DGMI组小鼠脑组织Slc6a3、Tph2基因表达显著升高（P＜0.01、0.001），Calml4、Ccl2、Gng14、Cxcl1基因表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。6个基因表达量的qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测结果均与转录组测序结果一致；值得注意的是，Calml4和Gng14 2个基因通过qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和转录组测序方法获得的表达量在3个受试样本间差异较大，这可能是由于2种检测方法对基因的检测区域不同产生的，因此说明qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测对RNA-seq结果验证的必要性。总之，综合qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]与转录组测序结果，DGMI可能通过影响炎症和多巴胺相关通路改善IS。 图片 4 讨论 目前，银杏叶提取物作为天然药物产物，已被证明具有抗炎、抗氧化等多种药理作用，可以有效治疗IS。DGMI是国内常用的银杏叶提取物制剂之一，目前虽然在临床前和临床研究上都获得一定成果，但是其治疗IS的作用机制尚缺乏深入的探索。在DGMI作用机制探索的初期首先面对3方面主要的问题。第一，缺乏机制研究方向的指导。面对此问题，在组学水平，例如采用转录组测序方法，获得与疾病进程和发展相关，以及药物治疗途径相关的必要信息，将对后续针对性及更深入的研究提供方向指导。第二，对于IS，临床实验样本的获取比较困难，使得目前相关研究集中在细胞和动物实验，目前关于DGMI在动物IS实验上的转录组测序还没有相关研究内容发表以作参考。第三，由于大脑功能的实行分区域进行，且十分复杂，采用全脑均质化样本进行检测难以对获得的结果进行解析，取特定的脑区进行研究可以更精准地反映疾病和药物对脑特定的功能结构造成的变化影响。 4.1 多巴胺能神经、黑质与卒中炎症 CCL2基因编码的单核细胞趋化蛋白，可以吸引单核和淋巴细胞。CCL2/CCR2趋化因子信号通路在卒中急性期中呈现促炎作用[31]，临床试验和动物实验都证明CCL2基因高表达是IS的危险因素，而且在临床上CCL2可作为多种卒中亚型急性期的标志物[32-33]。CCL2因子可由小胶质细胞促炎亚型分泌，CCL2还可能与其他趋化因子共同作用，在急性期介导CD8+ T细胞在脑中的活化和浸润[34]。不过在急性期后的慢性期，CCL2可能有利于促进血管生成和卒中恢复[35]。卒中后活化的星型胶质细胞等分泌的CXCL-1是中性粒细胞趋化因子，可以募集中性粒细胞浸润脑区。中性粒细胞会通过胞外诱捕网等方式进一步加剧卒中[36-38]。 DGMI组和模型组黑质脑区DEGs的KEGG以及GO结果显示，DGMI治疗IS可能和多巴胺能神经相关，尤其是多巴胺的转运和代谢。溶质载体蛋白（solute carrier，Slc）是一类跨膜转运蛋白，Slc18a2基因调控的囊泡单胺转运蛋白2（Vesicular monoamine transporter 2，VMAT2）依赖于质子浓度，介导多巴胺在突触前神经元中从胞质溶胶进入囊泡储存[39-41]，囊泡经突触小泡循环将多巴胺运至突触前膜附近，释放多巴胺进入突触间隙，多巴胺结合突触后膜的受体后失活，而Slc6a3调控的多巴胺转运蛋白1（dopamine transporter1，DAT1）位于突触前末梢周围，依赖于Na+/Cl?从突触间隙再摄取多巴胺至突触前末梢[42]。包括多巴胺、乙酰胆碱在内的多种神经递质的受体为G蛋白偶联受体，小鼠Gng14编码的蛋白为G蛋白γ亚基，与人类GNG14同源，Gng14可能通过调节G蛋白亚基发挥作用，而Calml4是钙调蛋白，通过与钙离子结合作用于钙离子信号通路对下游信号产生影响。TPH2是5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）合成的关键酶，同时也会影响多巴胺的浓度，涉及其转运与代谢[43]。 多巴胺能神经元控制着脑内的奖赏系统、成瘾性以及运动功能[44]，还能调控疼痛和神经炎症[45-46]。黑质-纹状体通路是主要的多巴胺能通路之一

两名美国议员（美国伊利诺伊州共和党众议员的马克・柯克（Mark Kirk）及华盛顿州民主党众议员里克・拉森（Rick Larsen））来到中国，游说中国官员，因为 一家美国大公司向中国各大医院出售的医疗设备中含有超出中国标准的有害物质，而柯克和拉森希望中国官员对此事“高抬贵手”。现在看来这两位议员的游说已经成功，美国百特公司向我国出口了不符合规定的产品，而且美国百特公司是中国大型医院使用的静脉注射产品的主要生产商。唉，人命就是贱，贱如草芥。去医院本为治病，却没想到反而引火上身。你还敢去么？同时希望大家能提供相关的标准，以及涉嫌超标的产品清单……相关信息：美国百特公司(Baxter Healthcare)使用聚氯乙烯(PVC)制造的静脉注射使用的塑料袋，其中含有DEHP，已被证实可在人体内累积，会造成儿童发育缺陷等问题。而这种增塑剂在部分国家已被禁用，欧盟今年已禁止所有家庭用品使用这种化学物质。而我国于1988年首次出台了对塑料制品中DEHP的限制标准，并在1995年和2004年予以更新。现在至少有三种规定限制这一有害物质的使用。相关法规明确规定了DEHP的安全使用标准。聚氯乙烯通常用于生产血液存储袋、输血材料等医疗产品。

我们是钢铁厂化验室，主要分析含铁物料、熔剂、合金原料，现有一天赛默飞世尔的扫描道ARL ADVANT'X现在想买一台波长色散的荧光做为备用，本人是想买一台固定道的互为补充，但工程师有建议买扫描道作为备用的，想请教各位以我们现在这种情况是买扫描道好呢还是买固定道好呢？本厂样品压片的较多，考虑到压片质量和速度领导想买上照式的，不知各位有何看法？现有布鲁克的S8 TIGER赛默飞9900、岛津的2400不知道大家对这三款仪器的使用性能有没有什么高见呀？

[size=4][B]农药残留检测生物传感器酶固定技术研究进展[/B][/size][I]罗启枚[/I]摘要：酶生物传感器在农药残留检测方面具有传统检测方法不可比拟的优势，而酶的固定技术将直接影响酶生物传感器的性能。该文就酶的不同固定方法和使用的不同载体材料，对近二十年来农药残留检测生物传感器酶的固定技术的研究进展进行综述，并就不同固定方法，不同固定方法的特点和不同载体材料对生物传感器性能的影响作了简单介绍。关键词：酶生物传感器；酶的固定；酶的固定载体材料[B]0 引言[/B]近几十年来，各种农药相继大量的生产和使用，极大促进了农业、林业的生产和发展。在目前世界范围内大量使用的农药中，大部分是毒性高、残留量大的有机磷农药，对环境和人们的身体健康构成了极大的威胁，对农林业的可持续发展也很不利。为了保护环境，保护人们的身体健康，对农林、水产品实时、快速、成本低廉的农药残留检测方法和技术一直是人类十分关注的焦点。当前，高效液相色谱法（HPLC）与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]X质谱联用方法（GCMS）是实验室常用的农药残留检测方法。虽然这些方法具有高的选择性和灵敏度，但是存在以下缺点：（1）因仪器体积庞大、结构复杂、价格昂贵；（2）农药残留检测时存在过程复杂、费时、费用高；（3）需要熟练的专业技术人员，无法做到实时连续检测。随着人们对环境、食品安全的要求越来越高，同时，世界发达国家对农药残留标准也越来越高，因此，发展新的快速、自动、价廉、方便、实时在线、大批量的检测农药残留的方法和技术，无论是在促进农业、林业的生产和发展，还是对环境和人们的身体健康都有极其重要意义。酶生物传感器自发现以来，因具有高度的选择性、结构简单、自动、价廉而备受研究者的关注。特别是微电子技术、纳米材料制备技术、生物技术的发展为扩展生物传感器的应用范围、批量生产、集成化、微型化打下了坚实的基础，极大地促进了酶生物传感器的研究与应用。农药残留检测生物传感器的原理主要是利用农药（如有机农药等）与酶（如乙酰胆碱酯酶等）结合来抑制酶的活性，农药的浓度与酶被抑制的活性成一定的数学关系，从而实现对农药残留量的检测。作为生物传感器关键组成物! 活性酶在水溶液中一般不太稳定，且酶只能和底物作用一次。因此，使用起来极不方便，最有效的途径是将酶固定制备成生物敏感膜使用。这就须采用合适的固定技术将酶固定在合适的载体上，因此酶的固定技术是制备生物传感器的关键步骤，这将直接影响传感器的稳定性、灵敏度、检测下限、响应时间和酶的活性、存活时间等。酶的固定技术主要包括酶的固定方法和固定酶的载体材料的选择，当前国内外对农药残留检测生物传感器中酶的固定技术进行了广泛的研究，并取得了许多重要进展。该文就农药残留检测生物传感器中酶的各种固定技术和研究应用进展进行了较全面系统的介绍，并对一些影响传感器性能的因素进行了分析讨论。[B]! 酶的固定方法[/B]酶在基体电极上的固定是酶生物传感器制备中的重要环节，它直接影响传感器的检测性能。酶的固定化技术是指通过某些方式将酶和载体相结合，使酶被集中或限制，使之在一定空间范围内进行催化反应。要想使酶作为生物敏感物质使用，就必须研究如何将酶固定在各种载体上。酶的固定方法主要有吸附法、共价键合法、凝胶% 溶胶法、聚合物包埋修饰法、交联法等方法。[color=#DC143C][B]全文附件在3楼[/B][/color]

[b]毛细管色谱柱固定液的涂渍方法[/b]（1）壁开管柱（wall coated open tubular, WOCT）将固定液直接涂在毛细管内壁上，这是戈雷最早提出的毛细管柱。由于管壁的表面光滑，润湿性差，对表面接触角大的固定液，直接涂渍制柱，重现性差，柱寿命短，现在的WCOT柱，其内壁通常都先经过表面处理，以增加表面的润湿性，减小表面接触角，在涂固定液。（2）多孔层开口柱（porous layer open tubular, PLOT）在管壁上涂一层多孔性吸附剂固体微利，不再涂固定液，实际上是使用开管柱的气固色谱。（3）载体涂渍开管柱（support coated open tubular, SCOT）为了增大开管柱内固定液的涂渍量，现在毛细管内壁涂上一层很细的（＜2μm）多孔颗粒，然后在多孔层上涂渍固定液，这种毛细管柱，液膜较厚，因此柱容量较WCOT柱高。（4）化学键合相毛细管柱 将固定相用化学键合的方法键合到硅胶涂敷的柱表面和径表面处理的毛细管内壁上。经过化学键合，大大提高了柱的热稳定性。（5）交联毛细管柱 由交联引发剂将固定相交联到毛细管管壁上。这类柱子具有耐高温、抗溶剂抽提、液膜稳定、柱效高、柱寿命长等特点，因此得到迅速发展。

大神们，帮忙推荐台主要针对小鼠骨髓细胞数检测的仪器，再一个就是能对小鼠血细胞的种类分类，计数。要求不高。。但是这种针对性的仪器还这难找。。