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全自动特定蛋白质分析仪

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  • 【分享】采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中蛋白质

    蛋白质为复杂的含氮有机化合物,是各种氨基酸以肽键连接而成,各类食品的蛋白质含量很不均匀,蛋白质含量是评价食物营养价值的重要指标之一。在食品中蛋白质含量测定方法中最常用最基本的方法是凯氏定氮法,在GB/T5009.5-2003中也将其定为法定检测方法,凯氏定氮法有常量凯氏氮法和微量凯氏定氮法。采用经典的凯氏定氮法比较费时费力,采用模块式消化、全自动凯氏定氮仪测定食品中的蛋白质,该方法比经典法快速,且数据准确可靠。1 材料与方法1.1 仪器与试剂1.1.1主要仪器:KjeltecTM2300型全自动凯氏定氮仪,DS-20消化炉及排废装置(均为瑞典FOSSTECATOR公司生产),样品磨,电子天平(准确至0.0001克)。1.1.2主要试剂:浓硫酸;硫酸钾;硫酸铜;盐酸标准溶液0.1027mol/L;氢氧化钠溶液400g/L;1%溴甲酚绿和0.7%甲基红混合指示剂;1%硼酸吸收溶液;硫酸铵;蔗糖。所用试剂均为优质品。1.2 测定方法称取适量样品放入消化管中,加入0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及约12mL浓硫酸慢慢摇动将样品浸湿。把消化管放入已预热至42℃的加热模块中,将抽气泵打开到最大。5min后,关小抽气泵至酸雾刚好充满排废罩,在试管中形成冷凝环。约60min样品消化至透明蓝绿色液体,取出冷却至室温。将消化管放入2300型自动凯氏定氮仪,关上安全门,待仪器自动蒸馏、滴定、计算并打印结果。2 结果与讨论2.1 精密度取3种蛋白质含量不同的样品,每种样品平行测定6次,从测定结果可见,该仪器的精密度良好(见表1)。表1 仪器精密度测定样品名称 蛋 白 质 含 量(g/100g) 平均值(g/100g) 相对标准差(RSD%)纯牛奶 3.18 3.17 3.20 3.19 3.18 3.18 3.18 0.34大豆 31.25 31.46 31.38 31.53 31.62 31.39 31.44 0.41螺旋藻粉 67.54 67.78 67.58 67.64 67.69 67.82 67.68 0.16

  • 天研|牛奶蛋白质分析仪的原理是什么

    牛奶蛋白质分析仪的原理主要基于光学测量技术,特别是光谱分析法。具体地说,它采用红外光谱法来测量牛奶中乳清蛋白和酪蛋白的含量。首先,将牛奶样品制成透明薄片,然后使用近红外光电传感器和光源对其进行扫描。牛奶中的蛋白质对特定波长的红外光有特定的吸收特性,通过测量这些吸收特性,可以分析出牛奶中蛋白质的种类和含量。此外,仪器会将牛奶光谱与事先建立的标准光谱进行比较,通过复杂的算法处理,从而得出各种蛋白质形态的含量。这种比较和计算过程确保了测量结果的准确性和可靠性。总的来说,牛奶蛋白质分析仪通过光学测量和光谱分析技术,能够快速、准确地测定牛奶中蛋白质的含量和种类,为乳制品生产、质量控制和科学研究提供了有力的支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291701212298_2595_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 全自动酶标仪应用范围

    全自动酶标仪应用范围

    [size=16px]  全自动酶标仪(Automatic Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Analyzer,简称ELISA分析仪)是一种用于进行酶标法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)的实验设备,能够在自动化的环境下执行ELISA实验。ELISA是一种广泛用于检测蛋白质、肽、抗体、激素、病原体等生物分子的方法,因此全自动酶标仪在许多不同的应用领域都有用途。  以下是全自动酶标仪的应用范围示例:  医学诊断: 全自动酶标仪常用于临床诊断,检测患者体液中的生物标志物,如抗体、抗原、蛋白质等,用于早期疾病诊断、监测疾病进展以及评估治疗效果。  生物医药研究: 在药物研发过程中,全自动酶标仪可以用来筛选药物候选化合物,评估药物对特定分子的影响,以及研究药物的药代动力学。  免疫学研究: 全自动酶标仪在免疫学研究中广泛应用,用于检测抗体水平、细胞因子、细胞表面分子等。  食品安全检测: 全自动酶标仪可以用于检测食品中的有害微生物、残留农药、毒素等,以保障食品安全。  环境监测: 在环境科学领域,全自动酶标仪可用于监测环境样本中的污染物、重金属、微生物等。  生物工程和生物技术: 在生物工程领域,全自动酶标仪可用于检测重组蛋白的表达水平,优化发酵过程等。  兽医学: 全自动酶标仪也在兽医领域中用于动物健康监测、疾病诊断等。  总之,云唐全自动酶标仪的应用范围非常广泛,涵盖了医学、生物科学、食品安全、环境监测等多个领域。它通过自动化的操作,提高了实验的效率和准确性,有助于科研人员和医疗专业人员更好地进行实验和诊断工作。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308311612470083_875_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size]

  • 【天研】牛奶蛋白质分析仪在乳制品生产线上有哪些应用

    牛奶蛋白质分析仪是一种专业的检测设备,主要用于对牛奶中的蛋白质进行快速、准确地分析。该仪器在乳制品行业中发挥着重要的作用,能够帮助消费者了解牛奶的质量和营养成分,同时也能为乳制品生产企业提供科学的指导,优化生产工艺,提高产品质量。  牛奶蛋白质分析仪的工作原理主要基于光谱分析技术,通过测量牛奶中蛋白质对特定波长光线的吸收来计算蛋白质的含量。该仪器具有操作简便、快速、准确等特点,可广泛应用于各类乳制品的生产、加工、质检等领域。  具体来说,牛奶蛋白质分析仪在乳制品生产线上具有以下应用:  原料奶检测:确保原料乳的质量符合生产要求,通过快速检测原料奶中蛋白质的含量,确保生产过程中的原料质量稳定。  加工过程控制:实时监测加工过程中蛋白质的变化情况,指导生产商及时调整工艺参数,确保产品品质。  产品质量检验:质检部门和乳制品企业可以利用牛奶蛋白质分析仪对市场上的乳制品进行抽检,判断其蛋白质含量是否符合国家标准。这有助于打击假冒伪劣产品,保障消费者的合法权益。  此外,牛奶蛋白质分析仪还可以检测牛奶中的其他营养成分,如脂肪、糖等,从而全面评估牛奶的营养价值。通过使用这种仪器,乳制品企业可以及时发现并解决生产过程中的问题,提高产品的竞争力,并保障食品安全。  总之,牛奶蛋白质分析仪是乳制品行业中不可或缺的重要检测工具,其在保障产品质量和消费者健康方面发挥着重要作用。如需更多信息,可以访问牛奶蛋白质分析仪生产厂商官网或咨询乳制品行业专家。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404291700285525_1260_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 全自动酶标仪检测什么

    全自动酶标仪检测什么

    [size=16px]  全自动酶标仪是一种常用于生物化学和分子生物学实验室的设备,用于检测各种生物分子的存在和浓度,特别是蛋白质和核酸。酶标仪通过测量样本中的光信号来定量分析目标分子的含量。主要的应用包括:  蛋白质浓度测定: 酶标仪可以用于测定样本中蛋白质的浓度,这在许多生物学研究中非常重要。常见的方法包括BCA法、Lowry法、Bradford法等。  酶活性测定: 可以通过酶标仪来测定酶的活性。这可以帮助研究人员了解酶在不同条件下的活性变化,从而深入了解生物化学反应。  蛋白质相互作用研究: 酶标仪也可以用于研究蛋白质与其他分子之间的相互作用,例如蛋白质-蛋白质相互作用或蛋白质-小分子相互作用。  免疫学研究: 酶标仪可用于测定样本中特定抗体或抗原的浓度,从而进行免疫学研究,如ELISA(酶联免疫吸附实验)等。  核酸测定: 酶标仪也可以用于测定核酸(DNA、RNA)的浓度,如吸光度法测定。  细胞增殖和细胞毒性测定: 酶标仪可用于测定细胞增殖和细胞毒性相关的指标,如MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑)分析。  总之,云唐全自动酶标仪在生命科学研究中发挥着关键作用,可以用于许多不同类型的实验和应用。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308311624430975_909_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size]

  • [推荐]蛋白质谱分析方法特点及其在蛋白组学研究领域中的应用zz

    褚福亮,王福生, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室 北京市 100039项目负责人 王福生, 100039 ,北京市丰台路26号, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室. fswang@public.bta.net.cn电话:010-66933332 传真:010-63831870收稿日期 2002-08-15 接受日期 2002-09-03摘要新近广泛应用蛋白质芯片(ProteinChipâ Array)系统成功鉴定出了一些重要疾病(如肿瘤和危害性较大的传染病)新的、特异性的生物标记(biomarkers),后者不仅在生物医学的基础方面具有重要的科学价值,而且在临床疾病的诊断、治疗和预防发挥重要的指导作用,显示了良好的发展前景.本文就表面增强的激光解析电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)相关的原理、特点、在临床和基础研究中的应用新进展和未来的发展趋势做一综述.此外,我们就蛋白质谱分析技术在病毒性肝炎、肝硬化和肝癌等一系列肝病方面的应用策略和前景进行了分析.褚福亮,王福生. 蛋白质谱分析方法特点及其在蛋白组学研究领域中的应用.世界华人消化杂志 2002 10(12):1431-14350 引言人类基因组计划已经进入后基因组时代-即功能基因组时代[1],作为基因功能的直接体现者-蛋白质,及其之间的相互作用越来越引起基础和临床科学家们的关注[2-6] .因为要彻底了解生命的本质,只把基因测出来还是不够的,还必须要了解其在生物生长、发育、衰老和整个生命过程中的功能、不同蛋白质之间的相互作用以及他们与疾病发生、发展和转化的规律[7-14] .正因为如此,有关上述问题的蛋白质组学研究成了今天生命科学最重要的焦点之一[15] .为了阐明蛋白质在上述生命现象中的作用和相关机制,人们设计了许多新的方法技术,如:二维电泳、质谱分析、微距阵列、酵母双杂交和噬菌体展示等,这些方法在一些特定的情况下,虽然显示出了他们各自不同的优点,但是同样也存在着较大的局限性,难以开展大规模、超微量、高通量、全自动筛选蛋白质等方面的分析,因而设计更全面、同时研究多种蛋白质相互作用的技术,在功能基因组和蛋白组学的研究中建立一个更有效的技术平台,成为本领域中优先关注的问题[16] .近来,美国Ciphergen(赛弗吉)公司研制的ProteinChipâ Array的仪器,并建立了一种新的蛋白质飞行质谱-表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra, SELDI-TOF-MS),已取得可喜的进展,筛选出了许多与疾病相关的新型生物标志,不仅为临床疾病的诊断和治疗等提供了新的选择,而且在基础科学、新药研制和疾病预防等方面具有广泛的应用前景[16-18] .本文就SELDI-TOF-MS相关的原理、特点、在临床和基础研究中的应用新进展和未来的发展趋势做一综述.1 ProteinChipâ Array系统和SELDI-TOF-MS的特点1.1 蛋白质芯片系统的组成和原理 蛋白质芯片系统由三部分组成:蛋白质芯片、芯片阅读器和芯片软件.供研究用芯片上有6-10芯池,不同的芯片表面上的化学物质不同,芯片表面分为两大类:一类为化学类表面,包括经典的色谱分析表面,如:结合普通蛋白质的正相表面,用于反相捕获的疏水表面,阴阳离子交换表面和捕获金属结合蛋白的静态金属亲合捕获表面;另一类称为生物类,特定的蛋白质共价结合于预先活化的表面阵列,可以用来研究传统的抗体一抗原反应,DNA和蛋白质作用,受体、配体作用和其他的一些分子之间的相互作用[19] . 根据检测目的不同,可以选用不同的芯片,或者自己设计芯片.将样本和对照点到芯池上以后,经过一段时间的结合反应,用缓冲液或水洗去一些不结合的非特异分子,再加上能量吸收分子(energy absorbing molelule,EAM)溶液,使样本固定在芯片表面.当溶液干燥后,一个含有分析物和大量能量吸收分子“晶体”就形成了.能量吸收分子对于电离来说非常重要.经过以上步骤,就可经把芯片放到芯片阅读器中进行质谱分析. 在阅读器的固定激光束下,芯片上、下移动,使样本上每一个特定点都被“读”到.激光束的每一次闪光释放的能量都聚集在该区一个非常小的点上(focused laser beam,聚焦激光束).这样,每个区都含有丰富的,可寻址(addressable)的位置.蛋白质芯片处理软件精确控制激光寻读过程.当样本受到激发,就开始电离和解除吸附.不同质量的带电离子在电场中飞行的时间长短不同,计算检测到的不同时间,就可以得出质量电荷比,把他输入电脑,形成图像[19].Ball et al [20]采用一种称为人工神经网络(artifical neural network,ANN)的算法处理出现的成千上万的峰,鉴定出三个分子量为13 454、13 457和14 278的生物标记分子,使疾病预测率达到97.1 %.1.2 ProteinChipâ Array芯片和SELDI-TOF-MS的特点 新型蛋白芯片与以往的蛋白芯片不同之处:SELDI-TOF-MS,他是在MALDI(matrix-assisted laser desorption/inionation)[21,22]基础上,改进后实行表面增强的飞行质谱.SELDI-TOF-MS优于MALDI-TOF表现为他不会破坏蛋白质,或使样本与可溶的基质共结晶来产生质谱信号.对SELDI-TOF来说,可以直接将血清、尿液、组织抽取物等不需处理直接点样检测[40] 由于一部分非特异结合的分析物被洗去,因而出现的质峰非常一致,有利于后期分析[23,24] . 与二维电泳相比:二维电泳分析蛋白质的分子量在30 KDa以上时电泳图谱较清楚,对在组织抽提物中占很大比例的低丰度的蛋白质不能被检出;其次,二维电泳胶上的蛋白质斑点很大一部分包含一种以上的蛋白质;而且,二维电泳耗时长,工作量大,对象染色转移等技术要求高,不能完全实现自动化.而SELDI-TOF在200 Da-500 KDa区间都可以给出很好的质谱,对一个样本的分析在几十分钟内就可以完成[19],处理的信息量远远大于二维电泳;对于低丰度物质,即使浓度仅attomole(10-18)的分子,只要与表面探针结合,就可以检测到,这也是二维电泳所不具备的[24,25] . 对于微距阵蛋白芯片来说,需要一种不破坏折叠的蛋白质构象的固定技术,再与另外的蛋白质反应,经检测莹光来观察蛋白质之间的作用[26] .而基于SELDI-TOF-MS的ProteinChip分析蛋白质不需溶解、不需染色、廉价、针对性强. 因而蛋白质芯片仪具有以下优势:(1)可直接使用粗样本,如:血清、尿液、细胞抽提物等[27] .(2)使大规模、超微量、高通量、全自动筛选蛋白质成为可能;(3)他不仅可发现一种蛋白质或生物标记分子,而且还可以发现不同的多种方式的组合蛋白质谱,可能与某种疾病有关[28] (4)推动基因组学发展,验证基因组学方面的变化,基于蛋白质特点发现新的基因.可以推测疾病状态下,基因启动何以与正常状态下不同,受到那些因素的影响,从而跟踪基因的变化[2,14,15] . 其存在的问题:对于不同的样本,根据检测的目标采取或者设计几种芯片,理论上可以把所有的相同性质蛋白质捕获,但是实际上仍有少量的分子没与表面探针结合.使用SELDI-TOF-MS,仅能给出蛋白质的分子量,不能给出C端、N端的序列,也没法知道蛋白质的构型,因此需要将蛋白质充分纯化后,用蛋白酶消化芯片上的蛋白质,分析肽段,再用生物信息学方法鉴定蛋白质序列[18,24] .另外,在国内,该芯片费用较高,分析质谱需要大量后续工作支持.

  • 全自动酶标仪的主要用途有哪些

    全自动酶标仪的主要用途有哪些

    全自动酶标仪是一种实验室仪器,用于分析生物分子的含量或活性,特别是蛋白质和核酸。它通常用于生物化学、分子生物学、生物医学研究和临床诊断等领域。以下是全自动酶标仪的主要用途:  酶标记实验:全自动酶标仪可用于测量酶标记的生物分子的含量,例如酶标记的蛋白质或核酸。这些实验通常用于研究基因表达、蛋白质相互作用、药物筛选和分析生物样本中的特定分子。  免疫测定:酶标法是一种常用于检测抗体、抗原或荷尔蒙等生物分子的方法。全自动酶标仪可以用于 ELISA(酶联免疫吸附测定法)等免疫测定,用于检测疾病标志物、抗体水平和免疫反应。  酶活性测定:全自动酶标仪可用于测量酶的活性。这对于研究酶的功能以及药物筛选和酶抑制剂的测试非常重要。  DNA和RNA分析:全自动酶标仪也可以用于测定DNA和RNA的浓度,例如在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url](聚合酶链反应)和核酸电泳实验中。  药物筛选和生物分子定量:在药物发现和开发中,全自动酶标仪可用于评估药物对生物分子的影响,并用于高通量筛选实验。  总之,全自动酶标仪是一种多功能的实验室仪器,可用于各种生物化学和生物学实验,帮助研究人员测量、分析和定量生物分子的含量和活性。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309191044576618_1369_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 牛奶蛋白质分析仪可以用于检测乳蛋白制品嘛

    牛奶蛋白质分析仪可以用于检测乳蛋白制品。以下是详细解释和相关信息:  功能与应用:牛奶蛋白质分析仪是一种专门用于分析牛奶及其制品中蛋白质含量的仪器。它基于先进的生化分析技术,如比色法、光谱法或电化学法等,能够准确、快速地检测样品中的蛋白质含量。  乳蛋白制品的检测:乳蛋白制品,如奶粉、酸奶、奶酪等,其蛋白质含量是产品质量和营养价值的重要指标。牛奶蛋白质分析仪可以有效地检测这些乳蛋白制品中的蛋白质含量,为生产厂家提供准确的质量控制手段。  优点与特点:  准确性高:牛奶蛋白质分析仪具有高灵敏度和高准确性,能够确保测量结果的可靠性。  快速便捷:该仪器操作简单,使用方便,可以快速得出测量结果,提高检测效率。  适用范围广:除了牛奶及其制品外,还可以用于其他含蛋白质样品的检测,如豆类制品、肉制品等。  在乳品工业中的重要性:随着乳品市场的不断扩大和消费者对乳制品质量要求的提高,牛奶蛋白质分析仪在乳品工业中的重要性日益凸显。它可以帮助乳品企业提高产品质量、降低生产成本,同时为消费者提供更加安全、健康的乳制品。  综上所述,牛奶蛋白质分析仪是一种功能强大、应用广泛的检测仪器,完全可以用于检测乳蛋白制品中的蛋白质含量。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405271615421543_8284_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 氨基酸分析仪和蛋白质测序仪的区别以及价格

    大家好,氨基酸分析仪与蛋白质测序仪有主要区别在什么地方呢?目前实验室需要进行氨基酸的测序分析,究竟买一台蛋白质测序仪好呢,还是氨基酸分析仪好呢?价格大概有多少呢?这些仪器有没有国产的呢 QQ:2392795357

  • 蛋白质检测仪测量指标有哪些

    [font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=16px]  蛋白质检测仪测量指标有哪些,蛋白质检测仪的测量指标可以因不同型号、品牌和用途的仪器而有所差异。然而,一般来说,蛋白质检测仪的测量指标可以归纳为以下几个方面:  一、基本测量参数  检出下限:这是仪器能够检测到的最低蛋白质含量,通常以百分比或具体浓度值表示。例如,某些蛋白质快速检测仪器的检出下限为0.5%。  检测范围:仪器能够测量的蛋白质含量的范围,这通常是一个区间值。例如,某些仪器的检测范围为(0~50)%。  吸光度值范围:在光度法中,吸光度是衡量物质对光吸收程度的物理量,蛋白质检测仪通常会给出其吸光度值的测量范围,如0.000-4.000A。  重复性:这是衡量仪器测量结果稳定性的一个重要指标,通常以百分比或具体数值表示。例如,某仪器的重复性为±0.1%(A)。  重复性误差:与重复性相关,但更具体地描述了多次测量同一样品时结果之间的差异,如吸光度(A)≤0.003。  稳定性:指仪器在长时间运行或不同时间点测量时,结果的一致性。例如,光电漂移(A)±0.002(3分钟)可以反映仪器的稳定性。  二、特定功能指标  多通道检测:一些先进的蛋白质检测仪支持多通道检测,可以同时处理多个样品,提高检测效率。  样品类型:仪器能够检测的样品类型,如食物、饮品、血清、血浆、尿液等。  分子量范围:对于能够检测蛋白质分子量的仪器,其分子量范围是一个重要的指标,如2-440kDa。  样品处理量:一次运行能够处理的样品数量,如某些全自动蛋白质定量检测仪一次可以处理25个样本/每轮。  检测速度:完成一次检测所需的时间,这也是衡量仪器效率的一个重要指标。  三、高级功能指标  智能化程度:包括仪器的自我保护功能、数据储存方式(如支持U盘储存)、以及是否具备自动校准、自动清洗等高级功能。  检测精度和误差:除了上述的重复性和重复性误差外,还包括仪器的整体检测精度和误差控制水平。  软件支持:是否配备有用户友好的软件界面,用于数据分析和报告生成。  兼容性:仪器是否兼容不同类型的试剂盒和样品处理方法。  需要注意的是,以上指标并非所有蛋白质检测仪都具备,具体指标会根据仪器的设计、用途和性能而有所不同。在选择蛋白质检测仪时,应根据实际需求和使用场景综合考虑各项指标。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/07/202407030956049224_5772_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size][/color][/font]

  • 全自动生化分析仪主要测的指标有哪些?

    全自动生化分析仪主要测的指标有哪些?1、肝功能系列如胆红素、总蛋白、白蛋白各种氨基转氨酶等2、肾功能系列参数有尿素、肌酐、尿酸等3、糖尿病系列参数有果糖胺、葡萄糖等4、血脂系列参数有胆固醇、甘油三酯、高低密度胆固醇、脂蛋白等5、心肌酶谱系列参数有肌酸激酶、肌酸激酶同功酶、乳酸脱氢酶等6、胰腺系列参数主要有阿尔法淀粉酶

  • 蛋白质质谱分析

    PS1利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)技术来表征生物分子。样品溶于固定的底物中形成晶体,用激光脉冲使其离子化,离子被加速后通过飞行管时分离,所有离子均可被检测。系统包括三个组成部件:样品点样制备工作站(SymBiot 1)、生物质谱工作站(Voyager-DE PRO)和自动化分析软件(AutoMS-Fit)。SymBiot1 是一个自动样品处理系统,支持亚微升级微量点样,具有快速省时、重现性好的特点;Voyager-DE PRO是为蛋白质组研究专门设计的自动飞行时间质谱分析系统,配有AB公司之专利—延迟检测技术,具有高分辨率、质荷比宽等特点;AutoMS软件可以批处理方式或实时动态方式检索Protein Prospector蛋白数据库或您指定的蛋白数据库,查询参数可以任意设定,检索结果以Microsoft Access格式分类编号及储存。 PS 1技术平台建立伊始便受到了许多蛋白质课题研究组的关注。中国科学院上海生物化学研究所戚正武院士课题组从猪肝中提取某一活性蛋白组分,该组分理化性质不清楚,天然含量十分低,并无相关文献报道。用HPLC分离以后对活性组分的成分不能确定。上海基康生物技术有限公司运用PS 1系统对HPLC分离后的活性组分作了质谱分析,仅在一个工作日内就精确确定该组分由分子量极为相近的几种蛋白质构成,分子量精确度达到10 ppm。后经HPLC再次细分(洗脱梯度增加了2.5倍),证实了质谱的结论。此活性组分曾滤过1kD分子筛,基康的质谱数据纠正了研究人员过去对该活性组分分子量的误判,为研究人员明确实验方向、优化实验步骤提供了强有力的依据。 PS1除了可以进行生物大分子的精确分子量测定,还可用于蛋白的肽指纹图谱分析(peptide mass fingerprint,PMF),提供相关生物信息学服务,并且还可以利用源后衰变(Post Source Decay,PSD)技术来获得样品的MS/MS数据,以得到一级结构信息。PSD方法通常增加了激发激光的功率,使其超过产生一般肽指纹谱图所需功率的阈值,过剩的能量使前体离子在源内离子化之后发生裂解,产生一系列碎片离子,在反射器的作用下,最终可以得到一张连续的碎片离子图谱。经特定的软件分析后,即可在数据库中检索到肽段的氨基酸序列。利用PSD分析技术,还可以对磷酸化,糖基化等翻译后修饰进行定位分析,同样也可以鉴定产生翻译后修饰肽段的蛋白质。Neville et al.(1997)将这一方法成功的用于磷酸肽的序列分析。作为重要的蛋白质鉴定手段之一,PS1的精确度可以达到10 ppm,灵敏度为fmol,分子量检测范围可达到500 kDa,每天可自动分析40-100个样品,适用于大规模“蛋白质组学”研究。

  • 检测圈的伙计们!蛋白质、脂肪の独门秘籍,快来修炼!

    宣讲主题:新技术在检测食品蛋白质及脂肪中的应用  宣讲时间:2016-10-24 09:30  宣讲内容:  食品中的蛋白质和粗脂肪的测定是实验室常规的检验项目,传统的检测方法操作繁琐,消耗大量人力,新技术的出现改进了传统的检测装置,免水冷凝定氮仪和全自动索氏提取仪能更高效的完成检测过程,操作简便,节省人力,重现性好,结果更准确可靠!  宣讲人:中国广州分析测试中心李国定,主要负责研发及分析方法的开发,专攻食品检测的前处理技术和常用分析仪器。  报名入口:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2150  环境配置:只要您有电脑、外加一个耳麦就能参加。(需要进行音频交流的用户需准备麦克)

  • 全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?

    全自动血细胞分析仪——能依靠它们去计数吗?库尔特原理库尔特原理指出:悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时,在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化,产生电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。这主要是根据血细胞与稀释剂相比,血细胞是不良导体的特性而提出的。起初,原始的库尔特计数器只能计算和测量红细胞。后来,随着技术的不断发展和设备的不断改进,临床医生还可以利用它来计算和测量白细胞。到20世纪70年代,技术的进一步发展使技术人员能够分离血小板。全自动细胞计数器的演进传统意义上的血细胞计数器是通过研究外周血涂片,使用血细胞仪和白细胞分类计数而手动完成的(也称为100个细胞涂片分类,手动白细胞分类计数或手动计数器)。根据库尔特原理导致了库尔特计数器的发明,随后又开发出了技术先进的全自动血液细胞分析仪。自此,仪器的技术水平得到不断提高。由于技术的进步,一台仪器可以分析越来越多的参数,从而大大提高了血液检测的效率,减少在多台仪器上分析一个样品的情况。现代的细胞分析仪能够测量白细胞(WBC)、白细胞分类(五分类)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、平均红细胞体积(MCV)、平均血小板体积,并且可以自动计算血细胞比容(HCT)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度,血小板比积和血小板分布宽度。自动分析仪的其他重要因素包括它们运行的速度和每批次可以处理的样本数量(大处理容量可以减少周转时间)。即时检验(POCT)即时检验([/

  • 蛋白质氨基酸残基组成分析以及蛋白预测软件

    http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/09/06/A1378379551.jpg 氨基酸是蛋白质的基础组成单位,通过研究蛋白质中氨基酸的性质和组成来预测蛋白质的结构和功能,蛋白质氨基酸残基组成分析主要是通过氨基酸分析仪来完成的,本文推荐了2个基于氨基酸组成进行蛋白质预测软件。基于氨基酸组成的蛋白质预测软件根据组成蛋白质的20种氨基酸的物理和化学性质可以辨析电泳等实验中的未知蛋白质,也可以分析已知蛋白质的物化性质。ExPASy工具包包涵的程序:AACompIdent:与把氨基酸序列在SWISS-PROT库中搜索不同,AACompIdent工具利用未知蛋白的氨基酸组成去确认具有相同组成的已知蛋白。该程序分析时需提交的相关信息包括:蛋白质的氨基酸组成、等电点pI和分子量(如果知道)、正确的物种分类及特别的关键词。此外,用户还需在六种氨基酸“组合”中作出选择,这影响到分析如何进行。例如,某种“组合”会把残基Asp/Asn(D/N)和Gln/Glu(Q/E)组合成 Asx(B)和Glx(Z);或者某种残基会在分析中被完全除去。对数据库中的每一个蛋白序列,算法会对其氨基酸组成与所查询的氨基酸组成的差异打分。由电子邮件返回的结果被组织成三级列表:第一张列表中的蛋白都基于特定的物种分类而不考虑pI和分子量;第二张列表包含了不考虑物种分类、pI和分子量的全体蛋白;第三张列表中的蛋白不但基于特定物种分类,并且将 pI和分子量也考虑在内。虽然计算所得结果各不相同,但零分表明了该序列与提出的组成完全相符。AACompSim:AACompIdent的一个变种,AACompSim提供类似的分析,但与前者以实验所得的氨基酸组成为依据进行搜索不同,后者使用SWISS-PROT中的序列为依据。有报道称,氨基酸组成在物种之间是十分保守的(Cordwell等,1995),并且通过分析氨基酸的组成,研究者能从低于25%序列相似性的蛋白之间发现弱相似性(Hobohm和Sander,1995)。因此,在“传统的”数据库搜索基础上辅以组成分析,能为蛋白质之间关系提供更多见解。PROSEARCH:PROPSEARCH也提供基于氨基酸组成的蛋白质辨识功能。用144种不同的物化性质来分析蛋白质,包括分子量、巨大残基的含量、平均疏水性、平均电荷等,把查询序列的这些属性构成的“查询向量”与SWISS-PROT和PIR中预先计算好的各个已知蛋白质的属性向量进行比较。这个工具能有效的发现同一蛋白质家族的成员。可以通过Web使用这个工具,用户只需输入查询序列本身。分子量搜索(MOWSE)分子量搜索(MolecularWeightSearch,MOWSE)算法利用了通过质谱(MS)技术获得的信息。利用完整蛋白质的分子量及其被特定蛋白酶消化后产物的分子量,一种未知蛋白质能被准确无误地确认,给出由若干实验才能决定的结果。由于未知蛋白无需再全部或部分测序,这一方法显著地减少了实验时间。MOWSE的输入是一个纯文本文件,包含一张实验测定的肽段列表,分子量范围在0.7到4.0Kda之间。计算过程基于在OWL非冗余蛋白质序列库中包含的信息。打分基于在一定分子量范围内蛋白中一个片段分子量出现的次数。输出的结果是得分最佳的30个蛋白的列表,包括它们在OWL中的条目名称、相符肽段序列、和其它统计信息。模拟研究得出在使用5个或更少输入肽段分子量时,准确率为99%。该搜索服务可通过向mowse@daresburg.ac.uk发送电子邮件实现。为获得更多关于查询格式的细节信息,可以相该地址发送电子邮件,并在消息正文中写上“help”这个词。蛋白质氨基酸组成分析用盐酸在110 ℃将蛋白或多肽水解成游离的氨基酸,用氨基酸分析仪测定各氨基酸的含量。采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法,对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)通常细分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸,速度较快,基线平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。分析效果:从目前已知的氨基酸分析方法比较来看,除灵敏度(即最低检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:0.5 pmol;氨基酸分析仪:10 pmol),其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面,都优于其他分析方法。蛋白质氨基酸残基组成分析的主要步骤包括:首先是蛋白被水解为氨基酸,其次是采用离子色谱等方法进行游离的氨基酸含量和组成的分析。总之利用蛋白可以分析氨基酸,利用氨基酸也可以研究蛋白质。

  • 蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线

    基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组(proteome)。同理,不同细胞在不同生理或病理状态下所表达的蛋白质的种类也不尽相同。蛋白质是基因功能的实施者,因此对蛋白质结构,定位和蛋白质-蛋白质相互作用的研究将为阐明生命现象的本质提供直接的基础。生命科学是实验科学,因此生命科学的发展极大地依赖于实验技术的发展。以DNA序列分析技术为核心的基因组研究技术推动了基因组研究的日新月异,而以基因芯片技术为代表的基因表达研究技术为科学家了解基因表达规律立下汗马功劳。在蛋白质组研究中,二维电泳和质谱技术的黄金组合又为科学家掌握蛋白质表达规律再铸辉煌。蛋白质组学(proteomics)就是指研究蛋白质组的技术及这些研究得到的结果。蛋白质组学的研究试图比较细胞在不同生理或病理条件下蛋白质表达的异同,对相关蛋白质进行分类和鉴定。更重要的是蛋白质组学的研究要分析蛋白质间相互作用和蛋白质的功能。蛋白质组学的研究内容包括:1.蛋白质鉴定:可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术,利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。2.翻译后修饰:很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化,糖基化,酶原激活等。翻译后修饰是蛋白质调节功能的重要方式,因此对蛋白质翻译后修饰的研究对阐明蛋白质的功能具有重要作用。3.蛋白质功能确定:如分析酶活性和确定酶底物,细胞因子的生物分析/配基-受体结合分析。可以利用基因敲除和反义技术分析基因表达产物-蛋白质的功能。另外对蛋白质表达出来后在细胞内的定位研究也在一定程度上有助于蛋白质功能的了解。Clontech的荧光蛋白表达系统就是研究蛋白质在细胞内定位的一个很好的工具。4.对人类而言,蛋白质组学的研究最终要服务于人类的健康,主要指促进分子医学的发展。如寻找药物的靶分子。很多药物本身就是蛋白质,而很多药物的靶分子也是蛋白质。药物也可以干预蛋白质-蛋白质相互作用。在基础医学和疾病机理研究中,了解人不同发育、生长期和不同生理、病理条件下及不同细胞类型的基因表达的特点具有特别重要的意义。这些研究可能找到直接与特定生理或病理状态相关的分子,进一步为设计作用于特定靶分子的药物奠定基础。不同发育、生长期和不同生理、病理条件下不同的细胞类型的基因表达是不一致的,因此对蛋白质表达的研究应该精确到细胞甚至亚细胞水平。可以利用免疫组织化学技术达到这个目的,但该技术的致命缺点是通量低。LCM技术可以精确地从组织切片中取出研究者感兴趣的细胞类型,因此LCM技术实际上是一种原位技术。取出的细胞用于蛋白质样品的制备,结合抗体芯片或二维电泳-质谱的技术路线,可以对蛋白质的表达进行原位的高通量的研究。很多研究采用匀浆组织制备蛋白质样品的技术路线,其研究结论值得怀疑,因为组织匀浆后不同细胞类型的蛋白质混杂在一起,最后得到的研究数据根本无法解释蛋白质在每类细胞中的表达情况。虽然培养细胞可以得到单一类型细胞,但体外培养的细胞很难模拟体内细胞的环境,因此这样研究得出的结论也很难用于解释在体实际情况。因此在研究中首先应该将不同细胞类型分离,分离出来的不同类型细胞可以用于基因表达研究,包括mRNA和蛋白质的表达。LCM技术获得的细胞可以用于蛋白质样品的制备。可以根据需要制备总蛋白,或膜蛋白,或核蛋白等,也可以富集糖蛋白,或通过去除白蛋白来减少蛋白质类型的复杂程度。相关试剂盒均有厂商提供。蛋白质样品中的不同类型的蛋白质可以通过二维电泳进行分离。二维电泳可以将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率的分离。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离。电泳后对胶进行高灵敏度的染色如银染和荧光染色。如果是比较两种样品之间蛋白质表达的异同,可以在同样条件下分别制备二者的蛋白质样品,然后在同样条件下进行二维电泳,染色后比较两块胶。也可以将二者的蛋白质样品分别用不同的荧光染料标记,然后两种蛋白质样品在一块胶上进行二维电泳的分离,最后通过荧光扫描技术分析结果。胶染色后可以利用凝胶图象分析系统成像,然后通过分析软件对蛋白质点进行定量分析,并且对感兴趣的蛋白质点进行定位。通过专门的蛋白质点切割系统,可以将蛋白质点所在的胶区域进行精确切割。接着对胶中蛋白质进行酶切消化,酶切后的消化物经脱盐/浓缩处理后就可以通过点样系统将蛋白质点样到特定的材料的表面(MALDI-TOF)。最后这些蛋白质就可以在质谱系统中进行分析,从而得到蛋白质的定性数据;这些数据可以用于构建数据库或和已有的数据库进行比较分析。实际上像人类的血浆,尿液,脑脊液,乳腺,心脏,膀胱癌和磷状细胞癌及多种病原微生物的蛋白质样品的二维电泳数据库已经建立起来,研究者可以登录www.expasy.ch/www/tools.html等网站进行查询,并和自己的同类研究进行对比分析。Genomic Solution可以为研究者提供除质谱外的所有蛋白质组学研究工具,包括二维电泳系统,成像系统及分析软件,胶切割系统,蛋白质消化浓缩工作站,点样工作站等;同时还可以提供相关试剂和消耗品。LCM-二维电泳-质谱的技术路线是典型的一条蛋白质组学研究的技术路线,除此以外,LCM-抗体芯片也是一条重要的蛋白质组学研究的技术路线。即通过LCM技术获得感兴趣的细胞类型,制备细胞蛋白质样品,蛋白质经荧光染料标记后和抗体芯片杂交,从而可以比较两种样品蛋白质表达的异同。Clontech最近开发了一张抗体芯片,可以对378种膜蛋白和胞浆蛋白进行分析。该芯片同时配合了抗体芯片的全部操作过程的重要试剂,包括蛋白质制备试剂,蛋白质的荧光染料标记试剂,标记体系的纯化试剂,杂交试剂等。对于蛋白质相互作用的研究,酵母双杂交和噬菌体展示技术无疑是很好的研究方法。Clontech开发的酵母双杂交系统和NEB公司开发的噬菌体展示技术可供研究者选用。关于蛋白质组的研究,也可以将蛋白质组的部分或全部种类的蛋白质制作成蛋白质芯片,这样的蛋白质芯片可以用于蛋白质相互作用研究,蛋白表达研究和小分子蛋白结合研究。Science,Vol.293,Issue 5537,2101-2105,September 14,2001发表了一篇关于酵母蛋白质组芯片的论文。该文主要研究内容为:将酵母的5800个ORF表达成蛋白质并进行纯化点样制作芯片,然后用该芯片筛选钙调素和磷脂分子的相互作用分子。最后有必要指出的是,传统的蛋白质研究注重研究单一蛋白质,而蛋白质组学注重研究参与特定生理或病理状态的所有的蛋白质种类及其与周围环境(分子)的关系。因此蛋白质组学的研究通常是高通量的。适应这个要求,蛋白质组学相关研究工具通常都是高度自动化的系统,通量高而速度快,配合相应分析软件和数据库,研究者可以在最短的时间内处理最多的数据。

  • 【求助】食品中的蛋白质的测定一点问题

    想问下,在用全自动凯氏定氮仪测食品中如鱼类的蛋白质时,其中有一步是加入了氢氧化钠,应该和开始加入的硫酸铜反应出现沉淀。可是溶液却是没有出现沉淀,是怎么回事?谢谢!~

  • 超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    超高速全自动氨基酸分析仪的应用

    [align=center][font='宋体'][size=16px][color=#000000]超高速全自动氨基酸分析仪的应用[/color][/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]中广测配备了日立超高速全自动氨基酸分析仪(LA8080),该仪器采用离子交换色谱分离和茚三酮柱后衍生技术,是分析检测氨基酸的专用设备,具有操作简便、灵敏度高、分离度好、稳定性强、检出限低、数据可靠性高等优点,短时间内可实现18~23种氨基酸的分离,分离度最少可达到1.62以上,各种氨基酸达到完全基线分离,定性强、定量准,同时配备含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸)30min标准分析程序和6min高速分析程序,极大的提高了分析的速率,标配了Open LAB CDS 2控制软件,全面符合CFDA和FDA的要求。[/size][/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146272196_9721_2862401_3.jpeg[/img][/align][font='宋体'][size=16px]一、仪器信息[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.仪器名称:超高速全自动氨基酸分析仪[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.英文名称:Ultra-high speed automatic amino acid analyzer[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.生产制造商:HITACHI/日立[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.型号:LA8080[/size][/font][font='宋体'][size=16px]二、主要技术参数[/size][/font][font='宋体'][size=16px]1.基线噪声≤0.02mV;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]2.分离度≥1.62;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]3.仪器线性≥0.999;[/size][/font][font='宋体'][size=16px]4.检出限:各氨基酸最少检测浓度可达到0.002nmol。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]三、应用领域[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸分析仪的应用领域可以归结为以下几类:在农业农产品的开发研究中,用于培养农作物优良的品种、饲料研发以及各类饲料氨基酸含量的分析、研制新型农药等。在食品轻工产品研究中,氨基酸分析仪可用于各种食品、保健品、口服液、牛奶及其奶制品、肉及肉制品等产品的研制开发、成分的分析, 在生物制药方面,用于药物开发以及各种药物氨基酸含量的测定,在石油化工、生物医学检测方面,氨基酸分析仪的应用也十分广泛。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]四、服务范围[/size][/font][font='宋体'][size=16px]各类食品、保健品、农产品、饲料、医药样品中,各种氨基酸含量的测定,包括GB/T 5009.124-2016方法规定的各种水解氨基酸,GB/T 18246-2019 规定的水解氨基酸、游离氨基酸,各种含硫氨基酸以及色氨酸的测定。[/size][/font][font='宋体'][size=16px]五、应用案例[/size][/font][font='宋体'][size=16px]氨基酸作为生物体蛋白质组成的单体,在各种生物体中均有存在,氨基酸按照对生物体的需求来说,分为必需氨基酸和非必需氨基酸,非必须氨基酸不一定非要从食物直接摄取,生物体可自行合成;但必需氨基酸(指人体或其它脊椎动物)不能合成或合成速度远不能满足机体需要,必需氨基酸一定要从食物中获得,否则就不能维持机体的氮平衡并影响健康,对于成人而言,必需氨基酸有九种,即:赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、组氨酸;故准确定量食物中各种氨基酸的含量,特别必需氨基酸尤为重要,生物体可根据对各种氨基酸,特别必需氨基酸的每日需求,选择合适的食物,补充各种营养,达到营养摄入的均衡,保持身体机能的健康,故在各类食品、保健品、宠物食品、饲料中,氨基酸各组分的分析尤为的重要。[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146274484_2813_2862401_3.png[/img][/align][align=left][font='等线'][size=13px] 图1. 17种氨基酸标准图谱[/size][/font][/align][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271146277743_8653_2862401_3.png[/img][font='等线'][size=13px]图2. 肉制品17种氨基酸图谱 [/size][/font][/align]

  • 【原创大赛】凯氏定氮法测定乳制品中蛋白质含量

    【原创大赛】凯氏定氮法测定乳制品中蛋白质含量

    凯氏定氮法测定乳制品中蛋白质含量 摘要:本文主要介绍了凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理,样品中加入硫酸钾、硫酸铜、浓硫酸进行消化,消化后加碱蒸馏,用硼酸吸收直接滴定,并采用全自动凯氏定氮仪测定了市售纯牛奶和酸酸乳中的蛋白质含量,测定结果令人满意。关键词:凯氏定氮法;牛奶;蛋白质引言牛奶蛋白质是牛奶检测的重要指标,作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应进行调节代谢抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用。目前凯氏定氮法是测定蛋白质最经典,也是最常用的方法,样品在加速剂(硫酸铜(催化剂);硫酸钾(提高沸点))的参与下,加入浓硫酸进行消解时,各种含氮有机化合物,经过复杂的高温分解反应,转化为铵态氮,碱化后蒸馏出来的氨用硼酸吸收,以酸标准溶液滴定,最后计算出蛋白质的含量。1. 材料与方法1.1 仪器全自动凯氏定氮仪;石墨消解仪;分析天平;消化管;烘箱1.2 主要试剂 浓硫酸(18.4g/ml,AR);硫酸铜,AR;硫酸钾,AR;硼酸(20g/L,按混合指示剂:硼酸=1:100加入指示剂);40%氢氧化钠溶液;混合指示剂(1份0.1%甲基红与5份0.1%溴甲酚绿的乙醇溶液);蒸馏水;硫酸标准溶液。1.3 方法1.3.1 取样采用减量法准确称取1g(精确至0.0001g)牛[fon

  • 【分享】蛋白质质谱分析研究进展

    蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,存在于所有生物细胞,约占细胞干质量的50%以上, 作为生命的物质基础之一,蛋白质在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用,因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。关于蛋白质的分析研究,一直是化学家及生物学家极为关注的问题,其研究的内容主要包括分子量测定,氨基酸鉴定,蛋白质序列分析及立体化学分析等。随着生命科学的发展,仪器分析手段的更新,尤其是质谱分析技术的不断成熟,使这一领域的研究发展迅速。 自约翰.芬恩(JohnB.Fenn)和田中耕一(Koichi.Tanaka)发明了对生物大分子进行确认和结构分析的方法及发明了对生物大分子的质谱分析法以来,随着生命科学及生物技术的迅速发展,生物质谱目前已成为有机质谱中最活跃、最富生命力的前沿研究领域之一[1]。它的发展强有力地推动了人类基因组计划及其后基因组计划的提前完成和有力实施。质谱法已成为研究生物大分子特别是蛋白质研究的主要支撑技术之一,在对蛋白质结构分析的研究中占据了重要地位[2]。 1.质谱分析的特点 质谱分析用于蛋白质等生物活性分子的研究具有如下优点:很高的灵敏度能为亚微克级试样提供信息,能最有效地与色谱联用,适用于复杂体系中痕量物质的鉴定或结构测定,同时具有准确性、易操作性、快速性及很好的普适性。 2.质谱分析的方法 近年来涌现出较成功地用于生物大分子质谱分析的软电离技术主要有下列几种:1)电喷雾电离质谱;2)基质辅助激光解吸电离质谱;3)快原子轰击质谱;4)离子喷雾电离质谱;5)大气压电离质谱。在这些软电离技术中,以前面三种近年来研究得最多,应用得也最广泛[3]。 3.蛋白质的质谱分析 蛋自质是一条或多条肽链以特殊方式组合的生物大分子,复杂结构主要包括以肽链为基础的肽链线型序列[称为一级结构]及由肽链卷曲折叠而形成三维[称为二级,三级或四级]结构。目前质谱主要测定蛋自质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或二硫键数目和位置。 3.1蛋白质的质谱分析原理 以往质谱(MS)仅用于小分子挥发物质的分析,由于新的离子化技术的出现,如介质辅助的激光解析/离子化、电喷雾离子化,各种新的质谱技术开始用于生物大分子的分析。其原理是:通过电离源将蛋白质分子转化为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]离子,然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(M/Z值)的蛋白质离子分离开来,经过离子检测器收集分离的离子,确定离子的M/Z值,分析鉴定未知蛋白质。 3.2蛋白质和肽的序列分析 现代研究结果发现越来越多的小肽同蛋白质一样具有生物功能,建立具有特殊、高效的生物功能肽的肽库是现在的研究热点之一。因此需要高效率、高灵敏度的肽和蛋白质序列测定方法支持这些研究的进行。现有的肽和蛋白质测序方法包括N末端序列测定的化学方法Edman法、C末端酶解方法、C末端化学降解法等,这些方法都存在一些缺陷。例如作为肽和蛋白质序列测定标准方法的N末端氨基酸苯异硫氰酸酯(phenylisothiocyanate)PITC分析法(即Edman法,又称PTH法),测序速度较慢(50个氨基酸残基/天);样品用量较大(nmol级或几十pmol级);对样品纯度要求很高;对于修饰氨基酸残基往往会错误识别,而对N末端保护的肽链则无法测序[4]。C末端化学降解测序法则由于无法找到PITC这样理想的化学探针,其发展仍面临着很大的困难。在这种背景下,质谱由于很高的灵敏度、准确性、易操作性、快速性及很好的普适性而倍受科学家的广泛注意。在质谱测序中,灵敏度及准确性随分子量增大有明显降低,所以肽的序列分析比蛋白容易许多,许多研究也都是以肽作为分析对象进行的。近年来随着电喷雾电离质谱(electrospray ionisation,ESI)及基质辅助激光解吸质谱(matrix assisted laser desorption/ionization,MALDI)等质谱软电离技术的发展与完善,极性肽分子的分析成为可能,检测限下降到fmol级别,可测定分子量范围则高达100000Da,目前基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI TOF MS)已成为测定生物大分子尤其是蛋白质、多肽分子量和一级结构的有效工具,也是当今生命科学领域中重大课题——蛋白质组研究所必不可缺的关键技术之一 [5] 。目前在欧洲分子生物实验室(EMBL)及美国、瑞士等国的一些高校已建立了MALDI TOF MS蛋白质一级结构(序列)谱库,能为解析FAST谱图提供极大的帮助,并为确证分析结果提供可靠的依据[6]。

  • 【原创大赛】SKALAR连续流动分析仪测定乳制品中蛋白质含量

    【原创大赛】SKALAR连续流动分析仪测定乳制品中蛋白质含量

    蛋白质是生命的基础 , 人体的重要组成成分。它不仅是一种重要的供能物质 , 更主要的作用是促进生长发育和新陈代谢。但婴幼儿过量的摄入蛋白质会增加 肾脏的负担,因此蛋白质的摄入要根据营养状况、生长发育要求达到供求平衡 。乳及乳制品是婴幼儿摄取蛋白质的主要来源, 安徽阜阳 “毒奶粉 ”事件就是因为婴幼儿食用了蛋白质含量极低的劣质奶粉 ,所以对乳及乳制品中蛋白质含量的监控极为重要. 目前我国测定乳及乳制品中蛋白质的方法主要为凯氏定氮滴定法、凯氏定氮比色法, 但是这两种方法繁琐、费时。连续流动分析法测定乳及乳制品中蛋白质含量,对于批量样品,该方法具有很大的优势,不但简便快捷、而且准确度和灵敏度度也有很大的提高。1.实验部分1. 1 仪器与原理SAN+ +四通道连续流动分析仪 (荷兰SKALAR公司)蛋白质分析模块。原理:自 动测定蛋白质基于改良后的贝特勒反应即经过相互分离后对氨进行分析。消化后 的样品用酸式盐溶液稀释定容,铵盐通过与水杨酸钠反应氯化为一氯化胺, 通过氧化和氧化偶合后形成绿色配合物,反应是以硝普钠为催化剂,次氯酸钠溶液被用于提供氯, 在波长630 nm处检测。1. 2样品前处理准确吸取 液态奶 (或称取固 态奶 ), 同时准备空白样 分别置于 250 mlVELP消化管中 , 加入以1: 10混匀的 CuSO4和K2SO4混合催化剂, 再加入20 ml浓 H2SO4,于蛋白质自动消化仪中消化,最后消化至蓝绿色, 冷却至室温后用蒸馏水定容至100 ml。1.3试剂和标准的配置酸性氯化钠溶液: 称取100 g氯化钠用800 ml水溶解[

  • 全自动定氮仪和连续流动分析仪

    最近我们单位需要开展新项目,因此要采购一批仪器设备,请问大神们全自动定氮仪和连续流动分析仪是不是都能测各种氮,所以是不是两者选其一就行?

  • 【求助】蛋白质分析

    向大家请教几个问题1. 在使用MALDI-TOF的时候,为什么大分子量的蛋白质可以被有效分析,而大于80bp的DNA分析的效果不好?2. Electrospray-TOF和MALDI-TOF在分析蛋白质的时候有那些区别?3. 质谱用于蛋白质测序中的几种方法及原理?先道谢!本人对蛋白质分析实在是不熟悉。请解答的详细一些!再次致谢!

  • 上海沛欧定氮仪和消化炉检测酱油中的蛋白质含量

    摘要:采用凯氏法测酱油中的蛋白质含量是国标推荐方法。关键词:全自动定氮仪、消化炉、酱油蛋白质含量引言:酱油等调味品的质量是牵涉到千家万户的日常消费品,酱油中蛋白质含量是酱油指标中重要指标.高等级的酱油含有较高的蛋白质含量。见表二和表三。 在酱油等日常消耗品也存在用色素调制,来糊弄消费者,损害消费者的健康。为此我们使用上海沛欧全自动定氮仪SKD-2000(采用国际通用的颜色法判断、国内领先、具有多项专利技术)红外石英辐射消化炉SKD-08S2.(获得绿色仪器奖和节能仪器奖)对二款酱油进行蛋白质含量检测。 前言:按GB18186-2000 酿造酱油 范围:本标准适用于第3章所指的酿造酱油。 参考文献: 凯氏法原理:酱油样品在浓硫酸和催化剂硫酸铜、硫酸钾高温下,把有机的细胞结构破坏,把氮元素和硫酸反应产生硫酸铵,(为了使得样品消化时不产生挂壁,必须采用样品孔间温差小和带程序升温功能的消化炉,否则会产生挂壁现象,导致消化失败)消化完成后,需要将样品冷却到40℃左右,再把消化管放入定氮仪上。仪器对消化管内自动添加稀释液、碱,反应杯内自动添加硼酸和显色剂。对消化管内样品加热蒸馏,逸出氨气和水蒸气混合气体,冷却成氨水流到反应杯内生成硼酸氨,同时用标准硫酸进行滴定,直到蒸馏结束和滴定到终点。仪器自动计算酱油中蛋白质含量(蛋白质系数取5.71)。仪器设备和试剂[font='Times New

  • 全自动化学发光免疫分析仪的原理以及临床应用

    全自动化学发光免疫分析仪的原理以及了临床应用。全自动化学发光免疫分析仪采用光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。是用于检测肿瘤标志物、贫血、甲状腺、孕筛查等项目,是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术,目前应用的自动化分析仪是分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成,大大提高了工作效率及准确性。

  • 第九期草根比对-饲料中粗蛋白质测定结果出来了~~~

    第九期草根比对-饲料中粗蛋白质测定结果出来了~~~

    非常不好意思,因为我最近一个月忙于应付孩子高考和填报志愿,结果迟迟没有汇总出来,这这里给大家道歉了。所有参加比对的,请大家回复下本贴,本人给大家积分补偿吧!还有我们之前一直承诺大家保护每个实验室的信息,在这里依然再次强调,对于想互相私下交流的,希望大家通过论坛的短信方式取得联系。感谢大家一直以来对论坛草根比对活动的支持!再次感谢参加比对的所有实验室,感谢给我们提供样品的guancheng215版友。希望大家对我们这次比对活动提出积极的意见和建议,改进我们的工作,使大家能够学习更多的东西。 第九期草根比对-饲料中粗蛋白质测定结果http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/06/201206252337_374429_1618994_3.jpg结果分析:本次能力比对的依据为GB/T6432-1994饲料中粗蛋白质的测定方法。本标准中共涉及到两种检测方法,分别是仲裁法(常量法或半微量法)和推荐法(全自动或半自动凯氏定氮仪),出现上述检测结果差异的原因分析:1、各公司选用的仪器设备不同,常量法、半微量法、全自动凯氏定氮仪或半自动凯氏定氮仪等,会存在一定的误差。2、本标准中规定,粗蛋白质含量大于25%,相对偏差不大于1%。3、关于空白的测定,根据平时的实验经验,要加做空白,这也是很多实验人员忽略的地方,最终导致结果偏高。4、关于硫酸铵校准测试系统的问题,标准中规定含氮量为21.19+0.2%正常,但是含氮量在20.99%和21.39%两个极端状态下系统测定的值折合粗蛋白含量就要相差1-1.5%个蛋白。5、由于是草根比对,这些样品都是企业内部原料和产品,我们采取了均质分样进行处理,但是毕竟和标准物质还是有一定差距的,这也是误差存在的一个可能因素。6、由于此次参加的实验室偏少,也就不进行统计分析了。最后感谢大家积极参与,希望以后相互交流和学习!

  • 实时无标记全自动细胞分析仪让您的实验如鱼得水

    iCELLigence全自动细胞分析仪让您远离MTT实验不断重复还无法得到统一结果的烦恼,让您不再因只看到其中的一个点而损失了其它的细胞生物学信息而无计可施,因为它可以清楚的记录下细胞完整的一生! 一:全自动细胞分析仪仪器原理 iCELLigence实时无标记全自动细胞分析仪是一款新型的细胞分析平台,具有实时监测、高信息量、无需标记、全自动化、高灵敏度和高准确性等独特优点。该细胞分析仪通过嵌在E-plate板上孔底的微电子感应器阻抗变化去感受细胞的有无以及贴壁、黏附和生长程度的改变。在细胞毒性检测中,可实时、直观的反应细胞增殖、存活、凋亡、形态变化等细胞生物学变化。 二:全自动细胞分析仪仪器优势 iCELLigence全自动细胞分析仪的传感器阻抗技术在细胞分析中具有其独特的优势:它为整个的细胞毒性检测分析过程中提供了全程无损伤的监控,实时、连续显示的数据让您可以更加自信更加清楚的进行细胞毒性检测操作和其它的细胞分析,而不是假定细胞处于合适的处理阶段。一连串实时获取和显示的数据让您处理每一步结果都可以通过机理来预测,同时也可以结合全自动细胞分析仪实时的读数来决定传统终点细胞毒性检测分析的最佳时间点。只需几个简单的操作步骤您就可以获得高信息量的、直观的、准确的结果,就可以让您的细胞实验变得更加省时高效。 三:全自动细胞分析仪的应用领域基于iCELLigence全自动细胞分析仪的技术优势,该系统在基础生命科学领域具有广泛的应用,如细胞质量控制、细胞毒性检测、细胞粘附和细胞伸展等。

  • 豆制品蛋白质检测仪有什么用

    豆制品蛋白质检测仪,通常也被称为大豆蛋白仪或大豆蛋白分析仪,是一种高科技设备,具有多方面的用途和应用价值。以下是对其用途的详细阐述:   一、核心功能   1. 快速准确测定蛋白质含量   高效性:豆制品蛋白质检测仪能够快速测定大豆及其制品中的蛋白质含量,极大地提高了检测效率。   准确性:采用先进的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]技术或其他高精度检测方法,通过测量特定波长的光吸收特性来推断蛋白质含量,确保了检测结果的准确性。   二、应用领域   1. 食品加工企业   在豆制品生产过程中,如豆腐、豆浆、素肉等的制作中,该检测仪可帮助企业确保产品蛋白质含量符合营养标准和口感要求,提升产品质量和安全性。   通过快速检测,企业能够及时发现和解决蛋白质含量异常的问题,减少次品率,提高生产效益。   2. 食品药品监督管理部门   作为监管工具,豆制品蛋白质检测仪可用于对市场上的豆制品进行抽检,确保产品符合相关标准和法规要求,保障消费者的食品安全权益。   3. 科研机构   在农业科研中,大豆蛋白分析仪可用于研究大豆种植、品种选育、施肥管理等农业领域的问题,为农业科研提供数据支持。   在食品科学研究中,该仪器可用于研究豆制品中蛋白质的结构、功能及与其他成分的相互作用,推动食品科学领域的发展。   三、技术特点   1. 先进的检测技术   采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/1p][color=#3333ff]近红外光谱[/color][/url]技术或其他高精度检测技术,实现了非破坏性检测,确保了样品的完整性和检测结果的准确性。   2. 智能化的数据分析   配备强大的数据库和智能分析软件,能够根据不同的样品和实验条件自动进行数据校正和误差补偿,提高检测结果的可靠性和稳定性。   3. 批量处理能力   能够对大量样品进行快速、批量处理,满足大规模生产和检测的需求。   综上所述,豆制品蛋白质检测仪在食品加工、食品安全监管、农业科研等多个领域具有广泛的应用价值,是现代食品工业和科研领域中不可或缺的重要工具。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/08/202408131424338910_5357_6238082_3.jpg!w690x690.jpg[/img]

  • 【原创大赛】因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响的研究

    【原创大赛】因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响的研究

    [b]中文摘要:目的[/b] 确立因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果的影响,从而完善因子类血液制品效价检测的方法。[b]方法 [/b]选取不同蛋白质浓度梯度的稀释液对同一供试品进行稀释来确定蛋白质影响的规律。 [b]结果 [/b]建立起人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物的全自动血凝仪因子效价检测方法,根据效价检测反应体系中蛋白浓度对检测结果的影响,建立因子类血液制品效价全自动血凝仪检测的方法。[b]结论 [/b]建立的两种稀释方法均消除了样品中蛋白质含量的不同对检测结果的影响,提高了检测的准确性,不但可以适用于现在产品的效价检测,而且适用于随着生产工艺的提升生产的更高纯度、低蛋白含量的FⅧ和PCC,同时也是对中国药典标准的补充。[b]关键词[/b]:人凝血因子Ⅷ;人凝血酶原复合物;效价;蛋白含量 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物、人凝血因子Ⅸ等因子类血液制品,是以健康人血浆为原料,经分离纯化和病毒灭活制成,在临床上主要用于各种凝血因子缺乏的治疗,这些因子类血液制品的凝血因子效价是药品有效性的指标,凝血因子效价的测定也是药品质量检测中的关键检测项目。血液制品生产企业及各级检测机构一般采用全自动血凝仪并按照仪器使用说明来进行因子效价的检测,然而在不同检测方法结果比对中,发现全自动血凝仪检测结果与中国药典中一期法的检测结果在部分因子效价检测中存在检测差异,差异可能是样品稀释中使用的稀释液的蛋白含量不同引起的,故本课题主要研究因子类血液制品中蛋白质含量对效价检测结果影响。通过蛋白含量对因子效价检测影响的研究建立起的全自动血凝仪因子效价检测方法,消除了产品本身性质的影响,可以准确进行因子效价的测定,方法的建立不但可以准确控制因子类血液制品的质量,保证生产企业持续稳定生产出质量均一的药品,而且可以减少因子类产品在临床使用中的风险。[b]1 实验仪器与试剂[b]1.1 仪器[/b][/b]Stago-compact全自动血凝仪(法国Diagnostica Stago公司),漩涡振荡器(美国Thermo Scientific公司)。[b][b]1.2 试剂[/b][/b]人凝血因子Ⅷ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅸ缺乏血浆(法国Diagnostica Stago公司),APTT试剂(法国Diagnostica Stago公司),Owren-Koller(稀释液)(法国Diagnostica Stago公司),0.025 mol/L氯化钙溶液(法国Diagnostica Stago公司),Desorb U(清洗液)(法国Diagnostica Stago公司),人凝血因子Ⅷ国家标准品(批号20100101),人凝血酶原复合物国家标准品(批号20130306),生理氯化钠溶液(石家庄四药有限公司),咪唑(天津市巴斯夫化工有限公司),氯化钠(天津市巴斯夫化工有限公司),枸橼酸钠(台山新宁制药有限公司),人血白蛋白(公司自产)。[b][b]2 方法2.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备:选取全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液分别定义为稀释液1、稀释液2、稀释液3。向3种稀释液中分别加入人血白蛋白,使其中人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.2 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b] [/b]人凝血因子Ⅷ国家标准品的定标:取1支人凝血因子Ⅷ国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1ml含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅷ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅷ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅷ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅷ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅷ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血因子Ⅷ供试品效价测定:取人凝血因子Ⅷ供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅷ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅷ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅷ效价测定选项进行测定。[b][b]2.3 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 不同蛋白质浓度梯度稀释液制备同2.1。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用生理氯化钠溶液将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用含不同蛋白浓度的稀释液做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]2.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定[/b][/b] 人凝血因子Ⅸ国家标准品的定标:取1支人凝血酶原复合物国家标准品,加入1.0 ml纯化水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,将Desorb U(清洗液)、复溶后的人凝血因子Ⅸ缺乏血浆、0.025 mol/L氯化钙溶液、APTT以及每1 ml含1.00 IU的人凝血因子Ⅸ标准品溶液分别装入全自动血凝仪的试剂抽屉,将Owren-Koller(稀释液)装入全自动血凝仪的样本抽屉,按照《Stago-compact全自动血凝仪标准操作规程》选择人凝血因子Ⅸ效价测定定标程序进行定标,仪器自动将装入的人凝血因子Ⅸ标准品溶液再进行2倍、4倍、8倍稀释,建立人凝血因子Ⅸ标准品溶液效价(分别为1.00 IU/ml、0.50 IU/ml、0.25 IU/ml、0.13 IU/ml)的对数对其相应凝固时间对数的直线回归方程。 人凝血酶原复合物供试品效价测定:取人凝血酶原复合物供试品,按其标示装量加入灭菌注射用水复溶,轻轻混匀,用人凝血因子Ⅸ缺乏血浆将其稀释成每1 ml约含1.00 IU人凝血因子Ⅸ,再用Owren-Koller(稀释液)做2倍、4倍稀释,将稀释后的供试品溶液装入全自动血凝仪的样本抽屉,选择人凝血因子Ⅸ效价测定选项进行测定。[b][b]3 结果3.1 人凝血因子Ⅷ不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表1、2、3,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表1 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,590,266]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142017_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表2 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果 [/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表3 FⅧ质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果 [/align][align=center][img=,585,261]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_02_1626619_3.png[/img][/align]人凝血因子Ⅷ质控品2015ZK0801批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释效价检测结果平均值用折线图表示,如图1:[align=center]图1 FⅧ质控品不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,548,295]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142019_03_1626619_3.png[/img][/align] 选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定,人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、3%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果见表4、5,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表4 658668A批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,585,99]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142020_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表5 A3B1814批制剂FⅧ检测结果[/align][align=center][img=,577,97]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142021_01_1626619_3.png[/img][/align]FⅧ效价检测结果用折线图表示,如图2、3:[align=center][img=,563,299]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142029_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图2 658668A批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][align=center][img=,567,287]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142030_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图3 A3B1814批不同蛋白质浓度检测结果对比[/align][b][b]3.2 人凝血酶原复合物不同蛋白质浓度梯度稀释效价测定结果[/b][/b] 选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了不同蛋白质浓度梯度稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,不同浓度稀释液分别测定10次。人血白蛋白的浓度分别为0、0.5%、1%、2%、3%、4%、5%的稀释液1、稀释液2、稀释液3的效价检测结果分别见表6、7、8,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表6 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液1检测结果[/align][align=center][img=,583,269]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表7 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液2检测结果[/align][align=center][img=,586,260]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142031_02_1626619_3.png[/img][/align][align=center]表8 PCC质控品不同蛋白浓度梯度稀释液3检测结果[/align][align=center][img=,593,263]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142043_01_1626619_3.png[/img][/align]人凝血酶原复合物质控品2015ZK0901批用不同蛋白质浓度梯度的稀释液1、稀释液2、稀释液3稀释FⅨ效价检测结果平均值用折线图表示,如图4:[align=center][img=,556,300]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_01_1626619_3.png[/img][/align][align=center]图4 PCC质控品不同蛋白质浓度FⅨ检测结果对比[/align][b][b]3.3 人凝血因子Ⅷ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0801批人凝血因子Ⅷ进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定,共测定10次。效价检测结果见表9,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表9 FⅧ质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,579,74]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142032_02_1626619_3.png[/img][/align]选取2批国外产人凝血因子Ⅷ和VWF混合制剂进行了人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定。效价检测结果见表10,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表10 国外产品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,578,77]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142036_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]3.4 人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定结果[/b][/b]选取2015ZK0901批人凝血酶原复合物进行了人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价测定,共测定10次。效价检测结果见表11,效价检测结果为效价标示量的百分比。[align=center]表11 PCC质控品人凝血因子缺乏血浆稀释检测结果[/align][align=center][img=,582,89]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142047_01_1626619_3.png[/img][/align][b][b]4 讨论[/b][/b] 本实验中对人凝血因子Ⅷ和人凝血酶原复合物分别用不同蛋白浓度梯度的稀释液进行了效价测定,另外用人凝血因子缺乏血浆稀释后进行了效价测定。因子效价测定中,稀释液1、稀释液2、稀释液3中加入相同浓度的人血白蛋白后,得到的因子效价检测结果没有差异,说明全自动血凝仪的稀释液Owren-Koller、生理氯化钠溶液、取1体积的3.8%枸橼酸钠加入5体积咪唑缓冲液混合液作为稀释液时没有区别。 人凝血因子Ⅷ、人凝血酶原复合物不同蛋白浓度梯度效价测定时,随着稀释液中蛋白质含量的增高,效价检测结果也不断升高,但在人凝血因子Ⅷ效价测定中,采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别,在人凝血酶原复合物人凝血因子Ⅸ效价测定中,采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液时,效价检测结果间均无显著差别。另外,人凝血因子Ⅷ进行人凝血因子缺乏血浆稀释效价测定效价检测结果与采用蛋白质含量为1%、3%的稀释液得到的检测结果也无显著差异,人凝血酶原复合物人凝血因子缺乏血浆稀释人凝血因子Ⅸ效价检测结果与采用蛋白质含量为0、0.5%、1%的稀释液得到的检测结果也无显著差异。另外,国外生产的人凝血因子Ⅷ和VWF的混合制剂FⅧ效价的检测结果及血浆、稀释液的影响同泰邦公司产品一致。[b]参考文献[/b][align=left] 邬杨斌, 余蓉. 凝血因子Ⅸ复合物的研制 . 华西药学杂志, 2000, 15(3):177-179. Pabinger I, Brenner B, Kalina U, et al. Prothrombin complex concentrate(Beriplexw P/N)for emergency anticoagulation reversal: A prospective multinational clinical trial . J Thromb Haemost, 2008, 6(4):622-631. Kiman E, Elela AA, Ramsis N, et al. Evaluation of the coagulation factors activity of Cryosupernatant . Suez Canal Univ Med J, 2003, 6(2):247-258.Tullis JL, Melin M, Jurigian P. Clinical use of human Prothrombin complexes . N Engl J Med, 1965, 73(13):667-674.马莉, 孙盼, 李长清, 等. 去冷沉淀血浆的质量分析 . 中国生物制品学杂志, 2013, 26(1):81-83.魏舒, 时凯, 刘国荣, 等. 冻干人凝血酶原复合物的生产工艺研究 . 中国输血杂志, 2008, 21(10):282-284.Samama CM. Prothrombin complex concentrates: a brief review . Eur J Anaesthesiol, 2008, 25(10):784-789.焦丽华, 代旭兰, 刘文芳. 凝血酶原复合物的制备及其临床应用进展 .中国输血杂志, 2008, 21(9):737-741.[/align][b] [/b]

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