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http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gifBioComp密度梯度制备与收集系统在生物大分子分离中的应用讲座时间:2014年08月20日 10:00 主讲人:孙福鼎 五洲东方分子生物学产品线应用工程师,负责分子成像设备以及密度梯度制备与收集产品的应用及技术支持,对密度梯度超速离心以及核糖体分离(Ribosome profiling)有着丰富的经验,目前主要致力于密度梯度超速离心在病毒分离、核糖体及叶绿体等亚细胞器分离以及其他生物学大分子分离的应用。http://img3.17img.cn/bbs/upfile/images/20100518/201005181701392921.gif【简介】1、生物学大分子分离方法2、密度梯度方法介绍及应用案例 产品应用领域应用于线性密度梯度溶液的快速制备,便于后续超速离心分离生物学样品。 产品主要特点快速高效,最快1min 内制备完成6 个离心管样品的均一线性梯度制备。程序控制,不同梯度介质及梯度范围所需程序均已内置,自动运行。适用广泛,可用于多种介质的梯度制备,包括Sucrose、Glycerol、Optiprep、Nycodenz、Ficoll、Percoll、Nacl、CsCl 等梯度介质。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间:2014年08月20日 9:304、报名参会:http://simg.instrument.com.cn/meeting/images/20100414/baoming.jpg
自从1977 年推出以来,二氧化硅胶体PercollTM已经成为全世界数以千计的研究人员对密度梯度介质的选择。其近乎完美的物理特征方便它在细胞、细胞器、病毒和其他亚细胞颗粒分离中的使用。Percoll做为第一步在进行更高分辨率分离或核酸抽提前富集细胞是非常有用的。人们会认识到在进行其他的这些方法前使用Percoll 做为第一步可以节省大量的时间和资源。对于生物学颗粒,理想的梯度培养基被描述为具有以下特征: 涵盖了足够的对于所有感兴趣的生物颗粒的恒定密度(图1) 带范围 拥有生理离子强度和pH 在全部梯度中是等渗的 低粘度 无毒性 不会渗透生物膜 无菌且可以重复灭菌 在适度的离心力下将自动形成梯度 和生物材料相容 很容易从被纯化的材料中去除 不影响分析程序 不会猝灭放射性分析 http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131225996878281.jpg Percoll在现有的介质中是非常特殊的,它符合上述所有的标准,并且提供以下附加的优点: 它能形成连续梯度和不连续的两种梯度。 梯度的稳定性意味着梯度可以预制以提供可重复性的结果。 使用带颜色的Density Marker Beads进行梯度分析十分简单(GE Healthcare提供)。 Percoll 不影响被分离的材料进一步的研究。 数以千计的研究人员的成功已经记录在Percoll Reference List 中。 密度梯度离心原理当颗粒悬浮液被离心时,颗粒的沉降速率和应用的离心力是成比例的。溶液的物理性质也会影响沉降速率。在一个固定的离心力和液体粘度下,沉降速率和颗粒大小以及它自身密度与周围介质密度之间的差别成比例。在一个离心范围中一个球体的沉降方程为:http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131226013987183.png这里v = 沉降速率d = 颗粒直径(流体力学等效球体) pp= 颗粒密度p1 = 液体密度 h= 介质粘度g = 离心力从这个方程中,可以观察到下列关系: 颗粒沉降速率和它的大小成比例。 沉降速率和它自身密度与周围介质密度之间的差别成比例。 当颗粒密度等于周围培养基密度时,沉降速率为0。 沉降速率随着介质粘度的增加而降低。 沉降速率随着离心力的增加而增加。 通过密度分离(等密度离心法)在这个技术中,梯度介质的密度范围包含了样品颗粒的所有密度。每种颗粒将沉降到梯度中的平衡位置,在这个位置梯度密度等于颗粒密度(等密度位置)。因此,在此类分离中,颗粒基于不同的密度而被单独分离,与颗粒大小无关。 http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131226021809484.png图1显示两种类型的梯度分离(见下面的速率区带离心法)。当使用Percoll时,普遍是等密度分离颗粒而不是根据颗粒的大小差别(仅见31 页的图19,两种技术都使用)。注释: 当考虑生物学颗粒时,切记介质的渗透压能够明显地改变膜结合颗粒的大小和表观浮力密度。一个高的渗透压能够导致膜结合颗粒收缩而培养基低的渗透压将导致结合颗粒的膨胀。 http://www.biomart.cn//upload/userfiles/image/131226032040485.png图2 显示在生理条件下( 280 到320mOsm/kg H2O) 使用Percoll梯度离心的颗粒比用蔗糖或甲泛葡胺离心的颗粒有低得多的表观浮力密度 通过大小分离(速率区带离心法)在这类技术中,颗粒之间的大小差别与颗粒的密度一起影响分离。正如上述的方程所示,大颗在整个梯度中比小颗粒移动更快,因此选择密度范围以便在整个分离期间的所有的位置上的颗粒密度大于介质密度(图1)。被分离的区带到达管底部(或者它们的平衡位置) 之前运行被终止。
差速离心法是根据颗粒大小和密度的不同存在的沉降速度差别,分级增加离心力,从试样中依次分离出不同组分的方法,差速离心法是交替使用低速和高速离心,用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。密度梯度离心法是在密度梯度介质中进行的依密度而分离的离心法。各组分会依其密度分布在与其自身密度相同的液层中。密度梯度可以离心前预先制备或在离心中自然形成。可用于分析型或制备型的离心分离。 密度梯度离心中单一样品组份的分离是借助于混合样品穿过密度梯度层的沉降或上浮来达到的?差速离心法是用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离。?密度梯度离心只用一个离心转速,而差速离心用两个甚至更多的转速。密度梯度离心的物质是密度有一定差异的,而差速离心是适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分。