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药典液相色谱方法的调整 • 根据药典附录“液相色谱法”规定,可调整适当参数 ---调整目的:满足系统适用性的要求 ---系统适用性的要求 ---HPLC方法调整的考虑因素 05版药典的系统适用性要求1、理论塔板数: ----反映整个色谱系统的状态 填料状态 管线连接 ----有不同的计算方法 主要是峰宽取值方法不同 不同计算方法计算结果有差异 ----影响因素: 被测组分的保留时间、进样量等 积分参数 系统死体积 测定色谱方法、样品与计算方法保持恒定,以便比较 05版药典的系统适用性要求 2、分离度: ---影响因素: * 影响柱效的因素 色谱柱尺寸 填料性能 进样量 * 影响分离选择性的因素 流动相组成 色谱柱品牌 柱温 * 柱外体积 ---有不同的计算方法,结果有差异 05版药典的系统适用性要求3、重复性(进样精密度): * 外标法:对照品溶液(n:5) 峰面积RSD:2.0% * 内标法:相当于80%,100%,120%的对照品溶液,加入规定量内标 溶液,分别至少进样2次,计算平均校正因子([font=Times New Roman
药典液相色谱方法的调整 • 根据药典附录“液相色谱法”规定,可调整适当参数 ---调整目的:满足系统适用性的要求 ---系统适用性的要求 ---HPLC方法调整的考虑因素 05版药典的系统适用性要求1、理论塔板数: ----反映整个色谱系统的状态 填料状态 管线连接 ----有不同的计算方法 主要是峰宽取值方法不同 不同计算方法计算结果有差异 ----影响因素: 被测组分的保留时间、进样量等 积分参数 系统死体积 测定色谱方法、样品与计算方法保持恒定,以便比较 05版药典的系统适用性要求 2、分离度: ---影响因素: * 影响柱效的因素 色谱柱尺寸 填料性能 进样量 * 影响分离选择性的因素 流动相组成 色谱柱品牌 柱温 * 柱外体积 ---有不同的计算方法,结果有差异 05版药典的系统适用性要求3、重复性(进样精密度): * 外标法:对照品溶液(n:5) 峰面积RSD:2.0% * 内标法:相当于80%,100%,120%的对照品溶液,加入规定量内标 溶液,分别至少进样2次,计算平均校正因子([font=Times New Roman
[align=center][b]浅谈药典中高效液相色谱法测定中药材含量方法学验证的方法[/b][/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]食品事业部:任阳阳[/align]药典中关于方法学验证有相应的指导原则,指导原则上写的内容较宽泛和笼统,但对于大多数检测人员来说根本不知道如何下手,本文是根据自己的理解和经验来阐述如何做好药典中高效液相色谱的方法学验证。首先要了解做好药典中高效液相色谱的方法学验证,要好好的理解两部分的内容:第一,要熟悉0512高效液相色谱法这部分的内容;第二是理解9101药品质量标准分析方法验证指导原则,结合这两部分内容,做好方法学验证。1. 确定本实验室要使用的仪器和配件能否满足本次验证的色谱提交,包括色谱柱、检测器和流动相。2. 0512方法中验证系统适用性实验首先要了解色谱的适用性实验包括5个参数:理论塔板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性。2.1理论塔板数和分离度在已调试好的色谱条件下,分析目标物质,根据分析结果计算此方法的理论塔板数和分离度。一般待测物质色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度不大于1.5。2.2 灵敏度通过一系列浓度的对照品确定信噪比,其灵敏度要求定量测定时信噪比≥10;若为定性鉴别其信噪比要求≥3。2.3拖尾因子T拖尾因子是评价色谱峰的对称性结果,以T表示,对对照品进行进样,分析色谱结果,以峰高作定量参数时,T值应在0.95~1.05之间。2.4 重复性 一般采用外标法,取对照品溶液连续进样5次,计算5次进样的峰面积的相关标准偏差,要求≤2.0%以上5点是0512方法内容中需要验证的5点内容,已对方法进行了简单的验证,但这些不够,还得结果9101的内容进行详细的进一步的验证。3. 9101验证的指标主要有准确度、精密度、专属性、检出限、定量限、线性和耐用性,其中精密度可以参考0512中已验证的重复性的检测结果;检出限和定量限也可参考0512中验证的结果。3.1准确度准确度是指该方法测定结果与真实值或参考值的接近程度,常用回收率进行验证。一般选择高、中、低三个浓度进行测定,也就是说,对照品加入量与待测供试品含量的比值为1.5:1,1:1和0.5:1进行加标实验,分析加标结果,计算回收率和回收率的相对标准偏差,结果必须满足药典要求。3.2 专属性向试样中加入杂质或辅料,与杂质和辅料的结果进行比较,确定测定结果是否受干扰。3.3 线性根据待测成分的含量大小,选择至少5份合适的浓度范围进行分析,以测得的响应信号(峰高或峰面积)对被测物的浓度作图,求出线线方程和相关系数。3.4耐用性一般经过变动流动相的比例、流动相的pH、不同类型的色谱柱。柱温以及流速来进行验证,验证测定条件发生微小变化时,测定结果不受影响的程度,从而确保方法的可靠性。综上所述,以上是高效液相色谱法测定中药材含量的方法学验证的所有指标,通过以上指标的完善和验证,才能做出一套完成的方法学验证。