液相色谱紫外双波长检测

请教大家，如何确认液相色谱仪紫外检测器的波长示值误差及重复性

[color=#444444]新和成了一种物质，想要液相色谱分析一下纯度，但不知道最大吸收波长，用紫外分光光度计做波长扫描，在330nm有最大吸收，可以在这个波长下用液相色谱分析吗?我也不知道这样做对不对[/color]

由于HPLC应用最多的检测器是紫外检测器，用于检测有紫外吸收的样品。紫外检测器灵敏度高，不破坏样品，能与其他检测器有串联，可用于制备；对温度及流动相流速波动不敏感，可用于梯度洗脱。但只能检测具有π-π或p-π共轭结构的化合物。 使用紫外检测器时应考虑溶剂的截止波长。例如，当检测波长为220nm时，只能选用小于此截止波长的溶剂，如正戊烷、水、甲醇、乙腈等溶剂，而不能用截止波长小于220nm的溶剂，如二氯甲烷、氯仿等。 紫外截止波长定义为：“以空气作为参考物，在1cm吸收池内溶剂测得与参照物相等吸收的吸收波长”。 当某溶剂在流动相中占较小比例时则应根据具体情况决定。如浓度为10%（体积分数）或更低的溶液在截止波长附近检测仅会有一个0.1AU（吸收单位）的背景吸收。除了随之产生的噪声水平增加，线性工作范围减小和稳定性变差外，多数情况是可以接受的。 应该值得重视的是不同液相色谱厂家不同批号溶剂的光谱特性可能存在明显的差异。由于杂质种类和含量的区别，紫外截止波长及吸收系数都会有差异。空气中氧气溶解量的区别会明显产生不同的基线噪声。因此，除了尽可能使用符合色谱标准的溶剂外，溶剂使用前应该仔细过滤，用超声脱气，甚至用吹氦气的方法处理，以尽量去除杂质以及可挥发的溶解气体。

液相色谱如果使用紫外检测器测定荧光物质，比如多环芳烃类，怎么确定波长呢？因为通常荧光物质都是有激发和发射两个波长啊？谢谢

液相色谱中使用紫外可见检测器：波长254nm和220nm有什么区别？

高效液相色谱用检测波长测定时一般都选择在对样品有最大吸收的波长下进行，以获得最大的灵敏度和抗干扰能力。但应特别注意在选择测定波长时，必须考虑到所使用的流动相的紫外吸收性质。也就是说，使用紫外-可见光检测器时，溶剂不应吸收测定波长的紫外光，样品测定波长应当在溶剂紫外吸收波长上限以上。噪声降至10-4~10-5AU，才能保证检测的灵敏度，才能用于梯度洗脱。液相色谱仪使用溶剂吸收波长的上限，就是透过波长的下限。波长的下限规定为溶剂在以空气为参比，样品池厚度为1厘米的条件下，恰好产生1.0吸光度时相对应的波长值，即溶剂透过率为10%时的波长。溶剂中如果含有吸收紫外光的杂质，同样会使检测背景提高，灵敏度降低，且用作梯度洗脱时会引起严重漂移。因此，鲁创分析认为液相色谱仪系统对溶剂纯度要求较高，一般应使用分光纯或分析纯溶剂，在有条件时，色谱纯溶剂为首选。应注意不能使用化学纯及纯度更低的溶剂。有时需要对溶剂进行专门纯化处理。

用维生素B2标准溶液在紫外分光光度仪上测其最大波长，和文献上紫外测定结果有点差异，再用高效液相色谱仪测定时的检测波长是用文献上紫外最大波长，还是用我自己紫外测定的波长

偶尔看见版面有人发帖询问，紫外检测器可以做全波长扫描吗？事实上有很多单波长或者双波长的检测器都可以实现这个功能，只是操作起来很不方便，我们就一起来聊聊这个功能吧。1、再购买液相色谱的时候，你考虑过用紫外检测器来做物质的全波长扫描吗？2、你有用紫外检测器这么做过全波长扫描吗？都是如何来操作的呢？效果又如何呢？

所测物质的最大吸收波长为215请问可以用液相紫外检测器吗？一般检测波长要比溶剂的截止波长大多少溶剂才不干扰检测？

我看文献上液相色谱用的是荧光检测器，激发波长380nm，发射波长470nm，但我们学院液相色谱是紫外检测器，那波长该怎么弄啊，请高手帮忙啊

[color=#444444]安捷伦1200液相色谱[/color][color=#444444]由于不同物质的吸收波长不一样，检测时需要在不同时间变化紫外检测器的波长，就是波长会有梯度，如The detection wavelengths were programmed as the following: 3.35-4.48 min,200 nm 4.99-5.33 min, 200 nm 5.63-6.09 min, 245 nm 6.10-6.96 min, 200 nm 9.91-12.50 min, 200 nm 17.16-17.94 min,[/color][color=#444444]200 nm other times, 360 nm.改怎么设置呀？谢谢各位帮忙！[/color]

[color=#444444]1.我在紫外跟光光度计上扫得全谱，确定了我测定物质的最大吸收峰。请问我测得的这个吸收峰能够应用在高效液相色谱紫外检测上吗？[/color][color=#444444]如果不能，请问用安捷伦1200s的液相色谱仪器怎么测定最大吸收波长？能扫全谱吗？[/color][color=#444444]2.我今天用这个波长在液相色谱机器上检测，完全没有吸收峰，重新配溶液也是，用的波长是买标准品的检测报告上的.[/color][color=#444444]后来我用甲苯和苯测柱子柱效是正常的，刚买的新柱子，柱子应该没有问题 ，这可能是什么原因呀？[/color]

问题: 各路大神一般打液相紫外，但是样品紫外吸收比较弱，用什么波长？[悠闲]回复: 扫DAD找到特征吸收波长，问题: 安捷伦1260紫外检测器可以走2个波长么回复: 可以中间切换，不能同时设置

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中的紫外检测器(型号为SPD-20A)只能用一个检测波长吗。问题：样品中有几种待测物质，但是他们的最大检测波长不一样。如果想要同时检测这几种物质并根据标准品溶液定性，可以设置多检测波长吗。听朋友说过DAD检测器可以同时设置几个检测波长并在这几个检测波长下分别出色谱图。哪个大神可以帮忙解答一下。

请问专家,我在用高效液相色谱做空气中的马来酸酐时,按照国标的方法,发现国标中紫外检测器的波长是254nm但是我做时没有出峰,后改用210nm,虽然出峰了但峰的响应很低,而且峰很宽,请问我该如何解决?谢谢

液相色谱用的是面积归一法和UV检测器，为了排除不同柱子对不同的物质的吸附程度会有一些不一样，在inertisl ods-3 4.6*250mm 5um柱子用240波长和254波长做同一个样，各峰出峰时间稳定一致，但出峰含量却看不出什么规律（即不知道这些峰为什么大又为什么小）在240波长下的看起来差不多的2个样在254波长下有很大的不同（其它条件都一下的情况下）。

液相色谱在检测某种物质时，怎样选择波长？

在看液相色谱容易出问题的部件------紫外检测器故障：样品池受污表现：样品池和参比池能量相差较大检查方法：设定250nm波长，通甲醇或水，查看SMPL EN和 REF EN，如两者相差较大，则样品池受污。有几个问题：甲醇和水在250nm波长处有吸收么？SMPL EN和 REF EN 指的是什么？

[color=#444444]液相色谱检测同一种物质时，紫外检测器和二极管阵列的波长是一样的吗[/color]

我最近对一种物质进行检测，发现用紫外光谱仪和液相色谱的紫外检测器扫描出来的最大吸收波长不一致，相差2～3nm，这样的话哪个数据更准确些呢？而且峰形也有点不同，紫外检测器扫描的是单峰，而紫外光谱仪扫描出来的是有重叠的双峰。

1 引 言紫外检测器是高效液相色谱中最常用的检测器，目前市场上生产厂家及型号很多，厂家通常采用检测器的噪音，基线漂移等技术参数作为产品的灵敏度性能评价指标。考虑到样品的紫外吸收响应值主要与样品有关，与仪器的关系不大，一般认为这可以基本反映仪器在灵敏度方面的性能。本文在实验的基础上证明对同一样品各检测器的响应值实际上也存在不同程序的差异，说明仅使用噪音和基线漂移的指标不能准确显示仪器在灵敏度方面的性能差异，因此，提出用信噪比来评价仪器的灵敏度性能。2 灵敏度评价指标设置的目的和依据高效液相色谱及其紫外检测器主要用于化学样品的分析测试。其评价指标必然与其用途相关联。一个分析方法对检测器的要求主要在灵敏度、选择性、精确度和准确性方面。在色谱分析中灵敏度是非常重要的指标。对于灵敏度，在分析测试方法研究中主要使用信噪比、最低检测限，或最低定量限来评价。其中信噪比是评价的核心，因为最低检测限和最低定量限通常用信噪比在2~3和10的量来定义。但目前厂家通常采用检测器的噪音，基线漂移等技术参数作为产品的灵敏度性能评价指标。这实际上是基于样品的紫外吸收响应值主要与样品有关，与仪器关系不大的假设。根据朗伯比尔定律，对于同样长度的检测池，同样浓度的样品溶液应该具有相同的吸光度。这样，对同样浓度的样品溶液，检测器的响应值应该是相同的，所以上述噪音，基线漂移的参数应该可以用来评价检测器的灵敏度性能。但是，实验中发现，同一样品溶液在不同检测器中响应实际上存在明显差异，表1显示对于同一种样品溶液，不同厂家和型号检测器的响应值可能相差3倍以上。这时，由于色谱分析主要使用相对比较的间接测定方法，其使用实际上并没有受到多少影响。难以简单认定仪器存在问题。但因为信噪比发生了变化，上述噪音、基线漂移的参数就不能用来评价检测器的灵敏度性能了。此时，直接使用信噪比来评价检测器的灵敏度性能才是可靠和准确的方法。3 信噪比指标评价方法评价信噪比需要测定响应值，需要选定样品，推荐萘和L-苯丙氨酸等在254nm附近有吸收的样品，前者常用于色谱柱性能评价;后者无毒，且对仪器可能存在的偏振现象敏感。当然，即使使用不同的评价样品，只要固定浓度和溶剂，也可以用分光光度计来校正和比较。根据现有信噪比测定方法，在选定特定浓度的样品后，先在选定波长平衡检测器(此时检测器中的溶液为溶解评价样品的溶剂)，待基线稳定后，将配制好的样品溶液直接灌注到仪器的流路并充满其中，注意不要灌入气泡，信号稳定后再用溶剂将样品溶液冲出来。测定基线上下波动的幅度为噪音值(N)，测定基线中值与样品信号中值的差为信号值(S)。则信噪比为两者的比值(SN)。4 结 论使用信噪比(SN)指标评价检测器，可以更准确全面地评价各种检测器的灵敏度性能。评价时可以参考现有的信噪比测定方法，建议用254nm作为检测波长，选择简单易得的样品，浓度值的选定应使信噪比SN的值在10以内，以方便测量。配制特定浓度的评价溶液后，以灌注法测定此时相对溶剂的响应值S，测定和计算出信噪比SN的值，作为该检测器对特定评价样品溶液的信噪比评价指标的值。

前几天，有个销售朋友提了一个问题，让我很无语，但是仔细想想，可能也有其道理，所以觉得想和大家聊聊。问题是这样的：朋友：液相色谱的宣传资料上有的家写的200-400nm，有的加写的190-400nm，还有的写190-360nm；写200nm的，是不是技术有问题，做不到190nm，仪器不如190nm的？我：。。。。。。不说，是因为觉得这个问题很无语，太低级。但是想想，可能是不是很多人都这么认为呢？个人理解如下：1、从硬件角度考虑a、氘灯其实液相的紫外检测器，主要是氘灯或者氘灯+钨灯构成；氘灯本身的能量，或者说光强，是有一定范围的，主要的光强度，集中在200-360nm这个范围，低于或者高于这个范围，不是说不能检测，而是能量/光强度弱了，检测效果不好。b、信号接收 氘灯穿过样品，出来的光会进过信号接收的装置或者说硬件，转变成数据；而这个信号接收，大部分也有个范围，不过大多数厂家都是可以做大的，对于波长范围影响不大；关键的问题是如果是二极管阵列的，大多要考虑氘灯在点亮过程中产生的臭氧，对二极管上镀膜的伤害，也可以说是氧化。时间长了，容易造成氧化，而影响光信号的接受强度。但是该问题主要是使用后期，不影响前期。2、软件 其实软件构不成影响，做软件的采集，是可以随便设置的，嘻嘻~~~~3、使用 从使用的角度而言，200nm以下很多溶剂是无法使用的，会有吸收，造成漂移，从而影响检测。大家可以查下溶剂的吸收波长就知道了，像低波长下，甲醇都是不可用的，水里面也是很多酸、碱、盐都是不能加的~乙腈供应厂家足够好的话，可以用；很多小厂家的乙腈，低波长下也有吸收物质，没法用~所以如果是该物质确实是200nm以下吸收波长的，作分析，考虑换个检测器吧，比如蒸发光检测器（ELSD）、示差检测器（RI）等总结：也就是说，无论厂家写的190-400nm、还是200-400nm、或者是190-360nm，本质上没啥区别~今天要下班回家赶公交，明天再接着聊钨灯方面的。。。。。————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————嘻嘻，最近比较懒也比较忙，所以迟了很久才和大家说钨灯，没让大家等的不耐烦吧？？咱们来说说钨灯吧，也就是200-800nm。上面说了，很多厂家其实氘灯+钨灯，波长范围也标示的不一样的，好些是到800nm，有些是到700nm，都不一样。有什么区别呢，下面我们来看看~其实这就是一个光谱范围的问题，检测器本身没有区别的：在760~800之间，因为多级滤光片的问题，性能不是很好，加上下面要说的二级衍射，所以从本质上而言，无论厂家写的700nm、760nm还是800nm，都没有太大关系的；从应用角度而言，700nm以上也基本不用，就像紫外200nm以下不用是一个意思。另外从使用的角度上讲，一般液相都是单波长，所以没有这个问题，制备液相而言，有双波长或者更多，不知道大家有没有注意，所谓的双波长，也是有范围的：这么说吧，比如厂家说的双波长，告诉你200-800nm双波长，是这个意思：200-400范围内可以设置任意两个波长，400-800nm范围内可以设置任意两个波长，但是不能是200-400nm设置一个波长，400-800nm设置另一个波长，为什么呢？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/emyc1010.gif原因1：因为200~800nm的时候用的是氘+钨灯，氘灯在656.1nm的时候有特征波长，能量比较高，要是不经过处理的话，加上钨灯的能量，检测器能量马上就饱和了。所以要么用紫外用氘灯，可见用钨灯，不能同时用。原因2：用光栅分光的时候，800nm的时候有400nm的二级衍射，以此类推，600nm的时候有300nm的二级衍射

液相色谱开发时，对物质进行用紫外扫描确定最大吸收波长，溶剂是要用流动相还是什么都行？

使用紫外检测器时应该考虑溶剂的截止波长 紫外截止波长的定义为“以空气作为参照物，在1cm吸收池内溶剂测得与参照物相等吸收的吸收波长”。一般定义只要到达检测器时的透射光强度被削弱到10%的入射光强时，对应的波长就是紫外截止波长。当检测波长为220nm时，只能选用小于此截止波长的溶剂，如正戊烷、水、甲醇乙腈等溶剂，而不能选用截止波长大于220nm的溶剂，如二氯甲烷、氯仿等。今天80%以上的液相色谱分离分析都用到反相色谱。我认为反相色谱优于正相色谱有两个方面的优势。第一、正相色谱所用的氯仿等溶剂属于剧毒溶剂，就安全性而言不如甲醇乙腈。第二，甲醇、乙腈等的截止波长较低，能够覆盖200到400nm紫外区域，属于广谱的溶剂。

最近公司的产品需要在紫外检测器下跑双波长，由于好奇心驱使，心中不免有个小小的疑问：双波长模式的原理是什么呢，哪位老师能详细讲解一下呢，在此先谢过各位老师了http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

[color=#444444]我现在在建立一个复杂组分的液相色谱条件，做了紫外吸收波长扫描，显示只在235nm处有个波峰，试着用含0.5%冰醋酸的水溶液-甲醇（9:1）作为流动相，PDA检测器。结果显示在235处相应的确最大，但是峰分离不好，在其他波长下，比如264，峰分离的稍微好些。请问，我该怎么确定波长呢？要综合考虑哪些方面？是我必须先找到合适的条件，先把峰分开，再考虑确定波长吗？[/color]

氘灯发出几乎连续的光谱，它主要依靠等离子体放电（是指始终让氘灯处于一个稳定的氘元素（D2或者重氢）电弧状态下产生紫外波长范围（190-400 nm）直到可见光谱范围（400-800 nm）因此，氘灯是高精度吸收测量的理想光源，比如紫外线可见光谱分光计和高压液体色谱分析仪（HPLC）。 氘灯的技术性能指标通常包括氘灯能量、噪音、漂移这三个重要的指标，对于咱们这样的分析用户来说，在工作站上最直观的判断都集中在氘灯能量上了，下面结合等能量和氘灯寿命简单总结一下氘灯的一些特性和日常注意事项。氘灯的使用寿命是有一定时间的，就是指其在提供足够光强的状态下的所使用的小时数。氘灯为易耗件，氘灯的寿命通常以下述两种情况下任一种现象出现时所定义。它的辐射强度跌落到初始值的50%时；氘灯使用是一个很缓慢的减弱过程，可以用以下的指数函数来表示：It = Io x e-ct 式中：It 表示在t时刻的光强值；Io 表示初始光强；C表示一个常数； t表示时间。 氘灯的光强减少的3个因素： 1.此氘灯的内部金属部件以及涂料的蒸发（同时可能导致灯的能否点亮）；2.此氘灯的灯丝涂料的材料与石英套发生反应（主要是阻碍穿透）； 3.日晒光照会导致石英套吸收200—250nm波长的光。帖子汇总：更换氘灯原创：1、1260换灯记2、【原创】记一次难忘的岛津换灯！3、【分享】关于Agilent 1200LC换灯（图解）4、【第二届网络原创作品大赛】Agilent1100 FLD氙闪灯更换和VWD的氚灯5、【原创】液相色谱更换氘灯记6、【原创】第一次更换日立L-2400紫外检测器氘灯的经历7、闪烁聪明智慧，Waters 486氘灯计时器解析氘灯相关帖子：【讨论液相潜力】仪器篇之检测器灯检测器的灯何时关？WATERS荧光检测器里面的灯寿命有多长?【求助】关于灯测试的问题?液相不开灯，噪声为什么那么大？安捷伦1100DAD检测器灯点不亮。。已用5000+小时，是否已到寿命？紫外灯与氘灯，你知道多少？更换的新氘灯能量低？氘灯何时更换安捷伦DAD检测器新氘灯能量测试未通过说说你经历过的氘灯无法点亮原因