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关于手动进样的重现性问题,我一直存在疑惑。 本来在气相版已经发过了,为了更加广泛的调查,在这边也发一个。版主别砍我啊。对于填充柱和大口径毛细管不分流,重现性一般3%以内,这个基本上是没有太大疑问的。对于毛细管柱分流进样模式,手动进样的重现性众说纷纭。有的说偏差很大,最大能插一倍,有的说偏差百分之一二十,有的说熟练的话也能到3%以内,更有甚者,说练习一个月之后达到了0.5%,比自动进样器还要好。虽然手动进样确实与操作熟练程度关系很大,而且仪器性能、色谱条件、样品性质的差异也都会影响重现性,但是从普遍意义上讲,总应该有个比较正常的范围吧,或者说应该有个类似于中位数、平均值之类的特征值吧。所以希望用过手动几样的朋友们畅所欲言,把自己的情况说一下,样本量大了,应该是具有统计意义的。 .首先说我自己的情况用过山东瑞虹7820和杭州科晓1690的分流进样,RSD一般很难到10%以内,如果做3~5针,有时候能碰巧比较接近,但是如果连续做很多针,经常能碰到超过平均值百分之二三十的数据,总体平均下来一般10%以上或者接近10%。安捷伦6890的SPL进样也经常用,重现性略为好一些,但是要完全随机连续做,不挑数据的话,也只能到10%左右或者5~10%。只有在样品最适宜、进样口维护完美、操作十分熟练的的情况下才能做到3%以下
关于手动进样的重现性问题,我一直存在疑惑。对于填充柱和大口径毛细管不分流,重现性一般3%以内,这个基本上是没有太大疑问的。对于毛细管柱分流进样模式,手动进样的重现性众说纷纭。有的说偏差很大,最大能插一倍,有的说偏差百分之一二十,有的说熟练的话也能到3%以内,更有甚者,说练习一个月之后达到了0.5%,比自动进样器还要好。虽然手动进样确实与操作熟练程度关系很大,而且仪器性能、色谱条件、样品性质的差异也都会影响重现性,但是从普遍意义上讲,总应该有个比较正常的范围吧,或者说应该有个类似于中位数、平均值之类的特征值吧。所以希望用过手动几样的朋友们畅所欲言,把自己的情况说一下,样本量大了,应该是具有统计意义的。.首先说我自己的情况用过山东瑞虹7820和杭州科晓1690的分流进样,RSD一般很难到10%以内,如果做3~5针,有时候能碰巧比较接近,但是如果连续做很多针,经常能碰到超过平均值百分之二三十的数据,总体平均下来一般10%以上或者接近10%。安捷伦6890的SPL进样也经常用,重现性略为好一些,但是要完全随机连续做,不挑数据的话,也只能到10%左右或者5~10%。只有在样品最适宜、进样口维护完美、操作十分熟练的的情况下才能做到3%以下
目前,毛细管电泳的分离模式有以下几种。 (1)毛细管区带电泳,用以分析带电溶质。为了降低电渗流和吸附现象,可将毛细管内壁涂层。 (2)毛细管凝胶电泳,在毛细管中装入单体,引发聚合形成凝胶,主要用于测定蛋白质、DNA等大分子化合物。另有将聚合物溶液等具有筛分作用的物质,如葡聚糖、聚环氧乙烷,装人毛细管中进行分析,称毛细管无胶筛分电泳,故有时将此种模式总称为毛细管筛分电泳,下分为凝胶和无胶筛分两类。 (3)胶束电动毛细管色谱,在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷基硫酸钠,形成胶束,被分离物质在水相和胶束相(准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移,达到分离。本模式能用于中性物质的分离。 (4)亲和毛细管电泳,在毛细管内壁涂布或在凝胶中加入亲和配基,以亲和力的不同达到分离目的。 (5)毛细管电色谱,是将HPLC的固定相填充到毛细管中或在毛细管内壁涂布固定相,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程,此模式兼具电泳和液相色谱的分离机制。(6)毛细管等电聚焦电泳,是通过内壁涂层使电渗流减到最小,再将样品和两性电解质混合进样,两个电极槽中分别为酸和碱,加高电压后,在毛细管内建立了pH梯度,溶质在毛细管中迁移至各自的等电点,形成明显区带,聚焦后用压力或改变检测器末端电极槽储液的pH值使溶质通过检测器。 (7)毛细管等速电泳,采用先导电解质和后继电解质,使溶质按其电泳倘度不同得以分离。 以上各模式以(1)、(2)、(3)种应用较多。 电极槽和毛细管内的溶液为缓冲液,可以加入有机溶剂作为改性剂,以及加入表面活性剂,称作运行缓冲液。运行缓冲液使用前应脱气。电泳谱中各成分的出峰时间称迁移时间。胶束电动毛细管色谱中的胶束相当于液相色谱的固定相,但它在毛细管内随电渗流迁移,故容量因子为无穷大的成分最终也随胶束流出。其他各种参数都与液相色谱所用的相同。