高灵敏度化学发光成像系统

[b][size=4]利用双(2, 4, 6)三氯苯基过氧化草酸酯( TCPO) 2过氧化氢(H2O2 ) 2咪唑2荧光探针的化学发光体系,研究了荧光探针化学发光成像,对几种常用的荧光探针(丁基罗丹明、罗丹明B、罗丹明6G、荧光素及异硫氰酸荧光素等)进行了定量分析。本方法具有高灵敏度、成像分析高通量等优点,线性范围宽,检出限达10 - 11mol/L。对四甲基异硫氰酸罗丹明(TR ITC)标记的单克隆羊抗人IgG的化学发光成像分析,比相同条件下荧光成像的检出限低一个数量级。[/size][/b]

刚学习化学发光,请专家指点化学发光检测仪采用液相(态)检测方法比化学发光固相(态)检测(成像系统)灵敏多少个数量级? 3~5个?对于化学发光检测,是不是PMT单光子检测做的工作,化学发光成像系统一定不可以做? 例如?

请推荐高灵敏度的NOx分析仪,谢谢！浓度范围0-50ppmNOx；NO，NO2分别读数；灵敏度高，原理化学发光法，最好能读到ppb级。谢谢

液相色谱化学发光分析 化学发光分析法以其仪器简单、操作方便、分析快速、灵敏度高、线性范围宽等显著的优点备受人们青睐，是一种有效的微量和痕量分析技术。然而，化学发光反应固有的选择性差的缺点使得这种分析方法受到了极大的限制。如何将高灵敏度的化学发光法和高选择性的分离技术结合，是分析化学发展的一个前沿方向。 高效液相色谱是近三十年发展的一种分离技术。它具有分离效率高、分析速度快、自动化强等特点，是石油、化工、环保、医药、生化等部门科研和生产中分离检测的一个重要工具。 高灵敏度的化学发光检测手段与高分辨力的高效液相色谱法(HPLC)耦合于一体，将成为一种理想的分离分析方法—液相色谱化学发光检测法(LC-CL)，即通过液相色谱分离系统分离混合物中的各组分，利用化学发光检测系统对各组分进行测定.1974年，Hartkopf等首次报道了液相色谱化学发光检测法，20多年来，这种技术得到了飞速的发展，已广泛用于冶金、化工、环保、生物、医学、药学和临床等方面复杂、低含量组分的分析。McGown等在关于分子发光光谱的评述中，专节介绍了各种色谱法中发光检测技术的进展。其他学者也对其基本理论及应用进行过讨论.于LC-CL的综述还有：LC和流动注射发光检测法的分析应用[基于各种液相CL反应的LC-CL检测法；高效液相色谱一化学发光检测法的生物医学应用；CL检测中所用固定化技术及固态试剂；CL衍生反应及所用衍生试剂,于糖类、类酯类氢过氧化物等物质的CL检测等。高效液相色谱化学发光检测系统 液相色谱化学发光检测系统包括了色谱分离和发光检测两个部分，该仪器包括输液泵、色谱柱、混合器、阻尼器和化学发光检测器(流通池、光电倍增管和记录仪)等5个主要组成部分。待测组分经色谱柱分离后与发光试剂和过氧化氢溶液混合，产生化学发光反应，流通池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大，最后由记录仪记录。由于该检测法不需要光源，消除了光源不稳定和杂散光的干扰，另外直接检测发光强度，故灵敏度一般比荧光检测法高两个数量级。化学发光和色谱联用，解决了化学发光选择性差的问题，在各个方面有较为广阔的应用前景。由于其具有的高灵敏度和分辨率，今后必将成为非常有效的痕量及超痕量分析的有效手段。但某些化学发光反应体系与色谱体系耦合的条件还需要进一步研究和优化。拓宽分析物的范围、化学衍生、标记及固定化酶技术的深入研究是此类分析方法的重要发展方向。

简介：PIERCE的化学发光技术居于世界领先地位。由于采用了持有专利的Luminol/增强剂技术，因此灵敏度高、发光持续时间长。正是由于性能卓越，许多知名的化学发光试剂盒厂商都是采用PIERCE提供的底物系统作为生产原料。目前，PIERCE的化学发光技术已经广泛用于Western/Northern/Southern印迹、ELISA、EMSA等实验中，使用范围越来越广。SuperSignal® Western化学发光底物系统是PIERCE的旗舰产品。原理：在HRP催化作用下，过氧化物与Luminol/增强剂反应发强光，可见光信号可以用压片法检测。Western实验中，HRP标记在二抗上，与一抗－靶蛋白复合物结合，再用SuperSignal®底物进行发光检测。具有方便、灵敏、信号持久的特点。SuperSignal®系列化学发光底物的性能：West Pico化学发光底物 West Dura持久性化学发光底物 West Femto最高灵敏度化学发光底物 最低检测极限 10-12克 10-14克 10-15克 建议抗体稀释度 一抗：1/1000-1/5000 一抗：1/1000-1/50000 一抗：1/5000-1/100000 二抗：1/20000-1/100000 二抗：1/20000-1/250000 二抗：1/100000-1/500000 信号持续时间 6-8小时 24小时 8小时 工作溶液稳定性 室温24小时 室温24小时 室温8小时 贮藏液存放时间 室温1年 室温1年 室温6个月或4°C一年 推荐印迹膜 NC膜 NC或PVDF膜 NC或PVDF膜 特点/优点：1.强发光；相同条件下，SuperSignal® West Pico底物产生的光强度是ECL底物的2倍（如图示：SuperSignal® West Pico与ECLTM系统的发光强度的比较）。 uperSignal? West Pico底物，曝光1m ECLTM系统，曝光1m SuperSignal? West Pico底物，曝光5mECLTM系统，曝光1m 2.卓越的灵敏度，抗体稀释倍数高（如图示：SuperSignal® West Pico的检测灵敏度）用1/5000 的一抗和1/400000的二抗标记IL-2的杂交膜，用SuperSignal® West Pico底物可以检测低至61飞克的IL-23.稳定的信号持续，信号持续时间长（如图示：SuperSignal® West Pico与ECLTM系统发光动力学比较） 二抗标记的膜用两种底物系统孵育6h后相对发光强度比较具体资料可见：http://www.ebiotrade.com/custom/hyclone/SuperSignal.htm回复:参见下面的帖子！建议多在论坛里搜索！http://www.bbioo.com/bbs/thread/741011http://www.bbioo.com/bbs/thread/759135http://www.bbioo.com/bbs/thread/684487www.xianjichina.com

电致化学发光(Electrochemi-lumiescence, or Electrogenerated Chemilumine- scence, 缩写为ECL)是一种利用电化学手段产生的化学发光。通常在电极表面由电解生成阴阳自由基离子，这两种离子迅速发生湮灭反应生成激发态而发光， 这种体系结合了电化学和光化学分析的特点，作为一种高灵敏度和高选择性的检测方法得到人们广泛关注。近年来，已有大量的相关综述文献出现 [79-85]。ECL分析在分析化学中的应用日益广泛，其中联吡啶钌电致化学发光研究有很多报道。1990年Uchikura等利用联吡啶钌与草酸的ECL反应,使用Sep-Pak C18分离柱测定了人尿中草酸的含量，方法的检测限为0.3 pmol。同年Danielson等 报道了Ru(bpy) 32+与21种氨基酸的ECL, 检测限从脯氨酸的20 pmol到天冬胺酰的50 nmol，并利用C18分离柱测定了合成骨胶原中的脯氨酸和羟基脯氨酸。1992年Brune等人利用预电解方法将Ru(bpy) 32+氧化为Ru(bpy) 33+, 成功地测定了脯氨酸等15种常见氨基酸, 并用Whatman Particil10 SCX分离柱分离测定了短杆菌肽D水解产物中的甘氨酸、丙氨酸、白氨酸、色氨酸和缬氨酸。Sato等人利用二丁烯砜与一级氨基酸的衍生反应,将一级氨基酸转变为三级，从而提高了方法的灵敏度, 并利用C18分离柱分离9种衍生后的产物。Nieman等利用丹磺酰氯的衍生反应使一级氨基酸的测定灵敏度提高了10倍，二级氨基酸的灵敏度提高了20倍。随着电位控制技术和薄层电解池的开发和完善，ECL的应用研究将会得到更进一步发展。

[size=4]化学发光免疫分析　　[/size][url=http://baike.baidu.com/view/1401709.htm][size=4]化学发光免疫分析[/size][/url][size=4](chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。[/size]

化学发光分析及其临床应用居军 甘肃省人民医院(兰州730000) 内容提要：化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射强度确定物质含量的一种痕量分析方法，可与电化学分析、免疫分析、固定化试剂技术、传感器技术等分析技术联用，具有灵敏度高、线性范围宽、不需要外来光源、分析速度快、仪器设备相对简单、便宜等优点。常用的化学发光技术有电化学发光、化学发光免疫分析、微粒子化学发光等。化学发光分析在临床实验室中主要应用于激素、肿瘤标志物、传染病监测、血药浓度检测等。关键词：化学发光 临床激素 肿瘤标志物 传染病 近年来，化学发光分析技术发展很快，特别是化学发光免疫分析技术，在临床医学应用中发挥着越来越重要的作用。1化学发光 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射的强度确定物质含量的一种痕量分析方法。一些物质在进行化学反应时，吸收化学反应过程中所产生的化学能，使分子处于激发态，当其回到基态时以光子的形式释放能量。反应必须提供足够的化学能，通常只有焓变在170—300KJ/mol之间的放能反应才能产生可见光范围内的化学发光现象。化学发光分析具有灵敏度高、线性范围宽、不需要外来光源、分析速度快、仪器设备相对简单、便宜等优点。化学发光分析灵敏度可达到10-18mol/L，而通常酶联免疫技术的分析灵敏度只能达到l0-13mol/L，新型的微珠包被酶放大免疫技术的分析灵敏度可达到10-14mol/L，荧光免疫及采用沉降法的普通放免技术分析灵敏度可达到10-ls mol/L，固相放免技术分析灵敏度可达到10-16 mol/L。化学发光反应体系有鲁米诺、光泽精、过氧草酸盐（或酯）一荧光物质-H202、Ru(bipy)，2+/Ru(Phen)，2+等电致发光、Ce(IV)、高锰酸钾一还原性有机物等。化学发光分析测定的物质可以分为3类：第1类物质是化学发光反应中的反应物；第2类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂；第3类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。化学发光分析测定物质的方式可分为直接法和间接法。化学发光分析反应类型可分为酶促反应和非酶促反应两类。此外化学发光分析法可以与其他分析技术联用，如流动注射分析、电化学分析、免疫分析、固定化试剂技术、传感器技术等分析技术相结合。2常用的化学发光技术 电化学发光是通过对电极施加一定的电压进行电化学反应而发光，通过测量化学发光光谱和强度来测定物质含量的一种痕量分析方法。它将电分析化学手段和化学发光方法相结合，具有独特的优点，如重现性和灵敏度进一步提高，在多种组份同时存在时，可施加不同波形、不同电压的信号进行选择性测量等，是潜在的分析手段之一。 化学发光免疫分析是以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法，具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单、操作方便、分析速度快和容易实现自动化等优点。鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶是目前化学发光免疫分析中使用最多的标记物。 微粒子化学发光是化学发光免疫分析的特殊形式，是以化学发光剂为底物的酶免疫技术，同时应用了磁性微珠做固相载体，增加了吸附面积，使抗原抗体最大限度的结合。以3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧环乙烷(AMPPD)为发光底物在碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不稳定的中介体AMPPD-，进而产生激发态产物，当其跃迁回到基态时产生光子。微粒子化学发光技术所需标本量极少，孵育时间大大缩减，同时因其选择性吸附抗原，从而提高了特异性、灵敏性，使测定结果准确、可靠，并减少污染。 化学发光生物传感器是通过非创伤或非损伤性的办法，连续、实时、动态地检测生物体内的某一种或几种物质浓度的技术。该技术以化学发光作为换能器，不但继承了化学发光高灵敏度的优点，而且大大提高了化学发光的选择性。按照所固定化的生物组分的种类，可以将化学发光生物传感器分为酶传感器、免疫传感器、组织传感器、核酸传感器及微生物传感器等。特别是化学发光免疫传感器是将具有分子识别作用的抗原或抗体以适当的方式固定化而制成，它结合了化学发光高灵敏度和抗原抗体特异性结合的高度专一性以及无污染等特点，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重视。 化学发光核酸探针已用于检查病毒、细菌和原虫的DNA。以鲁米诺增强化学发光检测体系的核酸探针主要有两种形式，一种是用生物素标记探针，杂交后经过分离，再以过氧化物酶标记的亲和素与生物素结合，加入鲁米诺和增强剂后测发光。另一种是以过氧化物酶直接标记探针，用增强的鲁米诺检测发光。核酸探针亦可用吖啶酯或AP来标记，吖啶类发光体系发出的是瞬时光，而AP以AMPPD作为发光底物，其发光体系具有发光持续稳定的特点，发光时间可长达几天，既可用发光仪也能用简单的感光胶片检测。另外，AP-AMPPD发光体系具有非常高的灵敏度，无论是固相还是液相检测，对标记物碱性磷酸酶的检测限可达10-21(1000 AP分子)，是目前最灵敏的核酸测定方法之一，已用于检测B19微小病毒DNA、人乳头瘤病毒DNA(HPV)．巨细胞病毒DNA(CMV)，并在DNA测序中有很好的应用。3化学发光分析在临床实验室中的应用 激素是由内分泌腺或内分泌细胞分泌的高效生物活性物质，在体内作为信使传递信息，对机体生理过程起调节作用，通过调节各种组织细胞的代谢活动来影响人体的生理活动。通过调节蛋白质、糖和脂肪等三大营养物质和水、盐等代谢，为生命活动供给能量，维持代谢的动态平衡，促进细胞的增殖与分化，影响细胞的衰老，确保各组织、各器官的正常生长、发育以及细胞的更新与衰老。影响中枢神经系统和植物性神经系统的发育及其活动，是生命中的重要物质。激素在血液中的浓度很低，一般蛋白质激素的浓度为10-10～10-12mol/L，其他激素在l0-6～10-9mol/L。目前临床上用化学发光可测定大部分激素，如E2、E3、T3、T4、fl'4、TSH、HCG、p-HCG、甲状腺球蛋白(TG)、抗甲状腺球蛋白(ATG)、甲状腺结合球蛋白(TBG)、抗甲状腺过氧化物酶(ATPO)等。 肿瘤标志物是癌细胞生长过程中产生的一种或几种正常情况下没有的或含量很低的“特异性”物质，或是宿主细胞因癌细胞入侵而过量产生的正常细胞组分。肿瘤标志物存在于组织、细胞、血液或体液中，肿瘤标志物的检测对肿瘤高危人群的筛选、肿瘤的诊断和鉴别诊断、肿瘤分期、肿瘤定位、肿瘤治疗等都具有一定的意义。尤其在肿瘤治疗过程中，肿瘤标志物浓度的升高和降低与疾病的预后密切相关，肿瘤标志物测定对恶性肿瘤的预后具有监测价值。同时应当注意，现今所知的肿瘤标志物中，绝大多数不但存在于恶性肿瘤中，而且也存在于良性肿瘤、胚胎组织，甚至正常组织中。因此，这些肿瘤标志物并非恶性肿瘤的特异性产物，但在恶性肿瘤患者中明显增多。因此肿瘤标志物也称为肿瘤相关抗原。肿瘤标志物的检测仅仅是配合临床医生对肿瘤诊断、治疗、监测的辅助手段。检测出的结果要根据其它临床检测结果综合判断。肿瘤标志物的检测方法历经了血球凝集法，电泳法、放免法、荧光免疫法，酶联免疫吸附法，微粒子法等，特别是电化学发光法、化学发光法新技术逐渐地应用到全自动免疫分析系统中，使肿瘤标志物的检测更敏感、更准确。目前常用的肿瘤标志物有：甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖原125(CA-125)、糖原153(CA-153)、糖原199(CA-199)、糖原724(CA-724)、糖原211(CA-211)、糖原242(CA-242)、铁蛋白(Fer)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、前列腺特异性抗原(PSA)、组织多肽抗原(TPA)等。 传染病的疗效监测，特别是病毒性肝炎的防治，已列为我国重大传染病专项课题。用化学发光分析技术对病毒标志物进行定量检测，与ELISA方法相比，大大提高了检测灵敏度，是临床治疗的重要依据。已成为临床应用的常规手段。 血药浓度检测是合理、安全用药，评估药效的重要手段，而化学发光分析的优点恰好满足药物分析对分析方法提出的要求，使得它在药物分析领域也有较为广泛的应用。利用该技术可对抗菌素、中枢神经系统药物、循环系统药物、维生素、代谢产物及生命相关物质进行分析，对临床药理和药物治疗的研究都起到重要的推动作用。

毛细管电泳（Capillary Electrophoresis, CE）技术是70~80年代发展起来的一种新型的分离技术，具有分离效率高、分析速度快、进样量小、应用范围广等特点。CE在生物、化学、医药、环保、食品等领域有很好的应用前景。特别是其微进样技术（通常在nL级），使其成为理想的生物微环境分析技术，广泛应用于肽和蛋白质、DNA序列分析和单细胞检测。同时，由于其进样体积小、管径细微和代测样品中的组分含量低，导致了该技术的灵敏度不够理想，限制了它的应用。目前，研究CE高灵敏检测技术是CE发展的重要课题。常用的检测器有紫外可见、荧光、质谱、电化学检测器等。一个理想的CE检测器应该具有一下几个特点：1. 设计简单，组装费用低；2. 高分辨率和高灵敏度；3. 对多数分析物通用； 4. 不需要其他化学反应；5. 检测不受CE分离高压的影响。化学发光具有高的灵敏度，且线性范围宽，仪器设备简单；同时，由于CL 反应速度快，允许在相对大体积的流动池中快速检测，减小了因为体积扩散而带来的影响，使它接近于理想的CE检测器。将CE与CL结合，这项技术就具有了CE高分辨率和CL高灵敏度的优点，可直接用于复杂样品中微量组分的分离和测定。近年来CE-CL联用技术得到较快发展，已有学者对它进行过综述由于CL法不需要光源，CE-CL法的仪器组装相对简单。然而，CE的CL反应需要在线引进一种或者两种发光试剂到反应体系中，这样在CE-CL的接口设计中，分析物和CL 试剂的混合方式和检测池的体积大小是取得良好分离效果和灵敏度的关键。同时，CE的分离的pH条件与CL反应的pH之间的兼容性也是一个需要考虑的因素。目前，CE和CL联用主要有如下三种接口模式（1）：柱后套管式。该接口主要的缺点是分析物和试剂混合时，会产生涡流扩散，降低柱效；混合不均匀，影响重现性；（2）柱端液池式。该接口简便易行，缺点是检测区域较大和发光反应速度慢会引起峰增宽。（3）电致发光式。该装置的优点是无需引入发光试剂，避免了引入发光试剂带来的峰增宽；缺点是受高压分离影响基线噪声较大。目前，微控流芯片得到迅速发展，在CE-CL中的应用日益强大。通过光刻蚀和软刻蚀技术，把简单的试剂注入、CE分离、柱后检测和样品、试剂、废液贮池集成到一微小的芯片上。此接口避免了因复杂接口引起的相当大的死体积，其最大的优点是检测器结构简单，容易实现微型化，其缺点是重现性易受到影响。电泳化学发光检测系统包括了电泳分离和发光检测两个部分该联用仪器一般包括缓冲液储蓄池、泵、毛细管、teflon管、高压电源和化学发光检测器(检测池、光电倍增管和记录仪)等5个主要组成部分。待测组分经毛细管分离后与发光试剂混合，产生化学发光反应，检测池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大，最后由记录仪记录。毛细管电泳化学发光检测技术，以其装置简单、灵敏度高、线性范围宽等优点，越来越受到重视，分析对象已涉及到金属离子、小分子和蛋白质等多种物质。然而，现有的接口只适用于快速动力学的发光反应，对慢速动力学的反应不能检测； 仪器多为自组装，自动化程度低，性能不能满足方法的需要，成为了制约该技术发展的一个瓶颈。

为什么要开展化学发光 ――化学发光的优势 ---一、 化学发光免疫分析简介 化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法中最为重要的技术之一。 化学发光 免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、 性激素、甲状腺功能 等方面的体外诊断实验中。 化学发光是一种特异的化学反应，有机分子吸收化学能后发生能级跃迁，产生一种高能级的电子激发态不稳定的中间体，当其返回到基态而发出光子，即为化学发光。将化学发光与抗原抗体相结合而形成的免疫分析技术，即为化学发光免疫分析。 化学发光的发光类型通常分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型，发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量，必须配以全自动化的加样及测量仪。测量辉光型的样品可以使用通用型仪器，也可以配全自动化仪器。 泰格科信的化学发光免疫分析诊断试剂 发光类型 为 辉光型 。 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫分析的首位 ，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。 二、 化学发光免疫分析的 优势 ： 1、 灵敏度高 灵敏度高 是 化学发光免疫分析 关键的优越性，其灵敏度可达 10 -16 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。 化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。 2、 宽的线性动力学范围 发光强度在 4 ～ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。 3、 光信号持续时间长 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。 4、 分析方法简便快速 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂 （ 或复合试剂）的一步模式。 5、 结果稳定、误差小 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。 6、 安全性好及使用期长 免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一年。 三、市场前景 化学发光免疫分析法作为非放射性的免疫分析法，具有灵敏度 高、所需时间短、无污染、检测范围宽等特点，随着各种自动发光分析仪器面市，以及不同类型的化学发光免疫分析试剂盒的不断推出，使得检测项目更多，检测速度提高，这些势必推动化学发光免疫分析的迅速发展， 成为时间分辨、放射免疫和酶联免疫分析的取代者，将成为检验的主流。 使实验室更好、更快地为临床服务。

化学发光凝胶成像仪 　　http://cls.bnu.edu.cn/Portals/1/yqysb/images/凝胶成像/化学发光成像.jpghttp://cls.bnu.edu.cn/Portals/1/yqysb/images/凝胶成像/化学发光成像面板.jpg操作流程：1． 打开电脑；2． 打开成像仪器电源（左后侧）和CCD 电源（黑色），将样品放入工作台；3． 双击桌面上图标，打开Quantity One 软件，或从开始-程序-The Discovery Series/Quantity One进入；4． 从File 下拉菜单栏中选择ChemiDoc XRS…，打开图像采集窗口；5． Select Application 选择相关应用；aUV Transillumination 透射UV：针对DNA EB 胶或其他荧光，打开仪器面板上UV 按钮；bWhite Transillumination 透射白光：针对透光样品如蛋白凝胶,x-光片，把白光灯箱 放在UV工作台上，打开仪器面板上Trans-White；cWhite Epillumination 侧面白光：针对不透光样品或蛋白凝胶，打开仪器面板上Epi-White6． 单击Live/Focus 按钮，激活实时调节功能，此功能有三个上下键按钮：IRIS（光圈），ZOOM（缩放），FOCUS（聚焦），您可在软件上直接调节或在仪器面板上手工调节，调节步骤：a调节IRIS 至合适大小b点ZOOM,将胶适当放大c调节FOCUS，至图像最清晰7． 如果是DNA EB 胶或其他荧光或蛋白凝胶，单击Auto Expose,系统将自动选择曝光时间成像，如不满意，单击Manual Expose，并输入曝光时间（秒），图像满意后保存；8． 如是化学发光，在Select Application 下选择Chemiluminescence 或Chemi Hi Sensitivity(如样品强度较弱)，先打开Epi-White 侧面白光，同第5 步调节清楚膜的聚焦状态（如膜上没有可对焦的标记，可用记号笔做个小记号）。然后关闭光源，不打开任何光源，将滤光片位置换到o 位（仪器上方右侧），将光圈Iris 开到最大，选择Auto Expose 自动曝光，或输入ManualExpose 时间，可对化学发光的弱信号进行长时间积累如30min，或单击Live Acquire 进行多桢图象实时采集，在对话框内定义曝光时间长短，采集几桢图象，在采集的多桢图象中选取满意的保存。 化学发光是特别弱的发光，所以曝光可以很长，记得做完化学发光后，把滤光片位置换到原先的位置（I 位）。

免疫学检测是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质，激素等微量生物活性物质，我国免疫学检测基本经历了放射免疫检测（兴起于20世纪70年代，现仍普遍使用于县级以上医院）；酶联免疫检测（兴起于20世纪80年代，各临床机构普遍使用）；以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术（20世纪90年代开始推广使用，产品步入成长期）三个阶段。　　增敏化学发光免疫分析（Enhanced Chemiluminescence Immunoassay, ECLIA）是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。检测原理是以发光物质作为信号放大系统并籍助其发光强度直接测定免疫结合。由于具有超过放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便，快速的特点，且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，标记物稳定性好，检测范围宽等优点，已成为放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫学检测重要的发展方向。目前已有若干国际知名公司的化学发光免疫分析仪器及配套试剂进入我国，并陆续在国内大型医院得到应用，但高昂的购机费用及试剂成本，抑制了该先进技术在国内医院的普及。基于这种现状，中国医疗技术公司率先推出了MPC—1普及型增敏化学发光免疫分析系统，此举必将加速化学发光免疫分析这一先进技术在国内各医疗机构的普及应用。

电化学发光分析技术特点最先进的分析原理专利的电化学发光分析技术（ECL）。ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应。包括了两个过程。发光底物二价的三联吡啶钌及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原成激发态的二价钌，随即释放光子恢复为基态的发光底物。最好的发光标记物-三联吡啶钌分子量小，结构简单。可以标记于抗原，抗体，核酸等各种分子量，分子结构的物质。从而具有最齐全的检测菜单。三联吡啶钌为水溶性，且高度稳定的小分子物质。保证电化学发光反应的高效和稳定，而且避免了本底噪声干扰。最先进的包被技术采用罗氏公司专利的链霉亲和素-生物素包被技术。链霉亲和素-生物素是最牢固和特异的结合。保证了牢固的包被效果和特异的检测结果。特殊的磁性微粒子载体以及磁性分离技术由聚苯乙烯包被的磁性微粒子为载体，直径仅为2.8um。同类型产品最小；提供类均相的反应环境，增加反应面积，提高反应速度；保证最终检测结果的高灵敏度；利用磁性分离技术，实现全自动化分析；与其它几种标记免疫测定技术相比，电化学发光具有以下的优点：1. 高灵敏度，检测下限达1pmol；2. 线形范围宽，达7个数量级；3. 快速，出第一个结果的时间仅需数分钟；4. 应用范围广，可以同样的灵敏度和线性范围检测各种物质，包括DNA；5. 试剂稳定，无污染和衰变问题；6. 自动化程度高。

技术参数 1．MPI-B型多参数化学发光分析测试系统—多功能化学发光检测仪： * 测量动态范围:大于5个数量级 * 测量精度优于0.05% 2．MPI-A/B型多功能化学发光检测器： * 波长范围：300—650nm * 灵敏度： SP1000A/Lm 上述两项构成了基本化学发光分析系统 3．MPI-B型多参数化学发光分析测试系统—电化学分析仪： * 电位范围：-10V—10V * 电流范围：±250 mA * 参比电极输入阻抗：10E12Ω * 灵敏度：1x10E-12—0.1A 共16个量程 * 输入偏置电流：50pA * 电位增量：1mV * 扫描速率：0.0001—200V/S * 测试方法：循环伏安法(CV)，线性扫描伏安法（LSV），计时电流法(CA)，计时电量法（CC），控制电位电解库伦法（BE），开路电压—时间曲线（OCPT） 4．MPI-BH/BU型多参数化学发光分析测试系统—毛细管电泳高压电源: * 输出电压：0—20KV * 输出电流：0—300uA 5．MPI-BF/BE型多参数化学发光分析测试系统—微流控芯片多路高压电源： * 输出路数：4路（BF型），8路（BE型） * 输出电压：0—2000V/路 * 输出电流：0—2mA/路 * 高压接出方式：输出、断开、接地 * 输出电流保护控制：0—2mA * 设置程序步：10步 6．MPI-B型多参数化学发光分析测试系统—数控流动注射进样器： * 高精度蠕动泵宽范围数字调速系统：调速范围 0—99 转/分。 * 可实现多达12路管道进样(6道/泵)。 * 两独立16通道自动/手动阀，换向时间≤0.3S 技术文章 此仪器没有任何技术文章 主要特点 1.用于化学发光机理与方法研究。 2.用于化学发光应用研究。 仪器介绍 MPI-B型多参数化学发光测试系统是西安瑞迈分析仪器有限公司最新研制开发的，基于WINDOWS 系统操作平台的高性能分析测试装置。依托于系统所拥有的多通道化学分析数据采集与分析测试部件及多功能化学发光检测器（基本系统）和众多的专用分析控制部件，本仪器可应用于各种化学发光分析，如静态注射化学发光、流动注射化学发光、电化学发光、毛细管电泳化学发光、微流控芯片化学发光及多方法连用化学发光分析等。本系统采用的组合式结构，允许用户采用不同的部件组合构成各种化学发光测试系统。

[font=新宋体][size=2]化学发光反应所以能用于分析测定，是因为化学发光强度（ICL）与化学反应速度（dc/dt）相关联，而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：A+B → C*, C* → C+hv 化学发光的反应既包括一个发光过程也包括了一个化学发光反应的过程，因此该发光反应的化学发光强度取决于化学反应的速率dc/dt和反应的化学发光量子效率（ ΦCL ） ICL= ΦCLdc/dt.b6u4X!d(P5@-_ 式中ΦCL可表示为：ΦCL=ΦrΦf； Φr：生成激发态产物的量子产率，也就是每一个参加反应的分子产生的激发态； Φf ：激发态产物分子的发光量子产率，也就是每一个激发态产生的光子数，对于一定的化学发光反应， 为一定值。 由于化学发光测定易受化学反应条件，如pH值、离子强度、溶液组成、温度等的影响，影响反应速率或任意一个量子效率的因素都会改变发光强度。因此，在一定的化学反应条件下，通过测定化学发光强度就可以测定反应体系中某种物质的浓度。 化学发光分析测定的物质对象可分为三类：第一类物质是化学发光反应中的的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂，增敏剂或抑制剂 第三类是偶合反应中反应物，催化剂，增敏剂等。这里所说的偶合反应其实就相当于前面提到的间接化学发光反应，它将一个化学发光反应与另一个或一系列反应进行偶合，只要这一个或一系列反应中的任何一种反应物或产物或催化剂（包括酶）能参与化学发光反应，就可以根据所产生的化学发光信号强度获得该反应中某一组分的量。通过标记方式利用这三类物质还可以来测定人们感兴区的其他物质。进一步扩大了化学发光分析的应用范围 化学发光分析最初是以分立式进样化学发光仪作为研究手段，由于化学发光现象一般比较短暂且随时间变化较大，使用间歇式手工操作是较难取得良好的重现性，因此人们将流动注射技术引入到化学发光分析中。流动注射技术是hansen于1975年建立的，把一定体积的试样注入到流动试剂（载流）中，可以保证混合过程与反应时间的高度重现性，特别是在非平衡状态下高效率的完成试样的在线处理与测定。 在化学发光分析中，化学反应器可以正面放置在接近光检测器的部位，因此检测器的仪接受较大分量的发射光子，从而提高了灵敏度，其灵敏度可达10-21mol，甚至可检测至单分子水平。化学发光分析的检测线并不受仪器的检测极限的限制，多数是受试剂的杂质污染以及由于浓度极低而带来的其他一些问题的限制。另外，由于化学激发作用具有电子激发态的均一性特点，通常其现行范围所展示的浓度区间较宽，可高达3~6个数量级。 对于化学发光分析来说，由于激发能来源于化学反应，无须专门的激发光源以及相应的单色器和聚焦透镜等，所以仪器设备简单、廉价、易微型化。分析化学,论由于化学发光现象一般比较短暂，因此化学发光分析所要求的时间也较短，但其最大的缺点是选择性差。因为化学发光分析的测定大多是在相同条件下，沿用同一个化学发光反应进行的，因而选择性较差。如典型的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，就能被10多种无机离子和30多种有机物催化或者增敏，且均在pH8~11的碱性条件下完成。近年来，化学发光检测与色谱以及毛细管电泳等分离技术的联用，在很大程度上解决了化学发光分析选择性差的问题，扩大了化学发光分析的应用范围。 为了提高化学发光分析法的选择性，将高灵敏度的化学发光检测技术与高效能、高分辨力的高效液相色谱或毛细管电泳以适当的方式相结合，集合2种技术的优势，为人们展示了一个分离效能高、检测先低、分析速度快的方法。%I/_8e* 液相色谱化学发光检测仪主要包括分离柱、泵系统、混合器和化学发光检测器。柱后的反应和化学发光检测是这一联用方法成功的关键。需要注意的是，化学发光的最佳条件往往并不是分离的最佳条件，比如色谱分离金属离子对常用酸性的流动相，而金属离子与鲁米诺的化学发光反应多在pH10时才有最强的发光强度，因此实际分析中要综合考虑各个方面的因素，选择合适的条件，使其既有利于分离又能保证灵敏、稳定的检测。|分析化学|化学分析|仪器分析|分析测试|色 发光在生物学领域也有着很多应用，主要简介如下： 1 血浆和血清的化学发光 亚铁离子催化的化学发光自由基启动的脂质过氧化 (L PO) 是一个链式反应过程。反应过程中产生脂自由基 (R － ) 、烷氧自由基 (RO － ) 、共轭二烯和脂过氧化自由基 (ROO － ) 等中间产物。 ROO － 自反应会产生激发的烷氧自由基 (RO 3 ) 和单线态氧 (O 2 ) ，其回到基态时产生发光。因此，把 Fe 2 + 盐加入含有脂肪的系统中，如细胞膜、线粒体、微粒体、血浆、组织匀浆、尿液等，可产生化学发光。许多实验研究对加入 Fe 2 + 盐的不同疾病患者血浆和血清的化学发光进行的测量表明，与正常健康人相比，腹腔器官局部缺血、肢端闭合性局部缺血、血氧含量下降以及出血、手术性休克病人血浆和血清的发光强度降低。 与此相反，风湿性关节炎、阑尾炎、胆囊炎、胰腺炎等炎性疾病患者血浆和血清的发光强度升高。 降低和升高的幅度与疾病的严重程度有关。 可以看出，利用此方法有可能对非典型的心肌梗塞和腹腔器官炎性疾病做出区别诊断。 2血浆脂蛋白的化学发光 有研究提出，以分离的血浆脂蛋白悬液作为系统模型可以研究不同物质对系统过氧化的调节机制。在分离的血浆脂蛋白悬液中加入胆固醇，温育一定时间后在加入 Fe 2 + 盐，测量化学发光，发现胆固醇能使系统的发光强度降低。分析认为，这可能是由于类固醇的存在抑制了系统的过氧化。对实验性胆固醇过多血症家兔和动脉粥样硬化早期病人进行的测量发现，载脂蛋白 APO – B 。在 Fe 2 + 存在条件下的发光强度出现了增长。同样的现象在肝硬化和慢性肝炎患者身上也被发现。 3尿液的化学发光 利用尿液的化学发光可以研究肾脏功能的变化。将 Fe 2 + 盐加入尿液中，测量其化学发光，发现肾功能不足者尿液的发光强度降低。与正常健康人相比，阑尾炎患者尿液的发光强度则有不同程度的提高。利用这一方法可以评估肾脏的排泄及收缩功能。 4物质抗氧化活性的测定 利用发光测量技术可以评价某些生物组织和体液的抗氧化活性。以某一稳定的发光系统为模型，如脂肪体、线粒体、卵黄脂蛋白等，将待测的抗氧化物质加入该系统，然后加入 Fe 2 + 盐，测量其化学发光。 根据系统化学发光被抑制的程度可以评价物质的抗氧化活性。 利用这一方法进行的研究证明，不同疾病患者血浆和血清的抗氧化活性是不同的。 化学发光研究的热点方向 直接化学发光反应是当前化学发光分析研究的一个重要方向，人们通常通过大量试验筛选氧化反应及反应介质来证明某种有机药物、农药是否具有化学发光特性。 以化学发光试剂标记核酸，运用化学发光分析进行核酸分子杂交分析是化学发光分析的前沿，其发展将为基因工程、基因诊断和治疗提供有效的检测手段。分析通常进行化学发光分析都是在现有化学发光试剂的基础上开展研究，而新型化学发光试剂的开发性研究较少，此领域还有研究空间。 金属配合物，特别是钌等过渡金属配合物在化学发光分析中的作用正逐渐受到人们的重视。比如钌（Ⅱ）-联吡啶常用作电致化学发光试剂[/size][/font]

[size=2][font=新宋体]化学发光反应所以能用于分析测定，是因为化学发光强度（ICL）与化学反应速度（dc/dt）相关联，而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据。化学发光反应一般可表示为：A+B → C*, C* → C+hv化学发光的反应既包括一个发光过程也包括了一个化学发光反应的过程，因此该发光反应的化学发光强度取决于化学反应的速率dc/dt和反应的化学发光量子效率（ ΦCL ） ICL= ΦCLdc/dt.b6u4X!d(P5@-_式中ΦCL可表示为：ΦCL=ΦrΦf；Φr：生成激发态产物的量子产率，也就是每一个参加反应的分子产生的激发态； Φf ：激发态产物分子的发光量子产率，也就是每一个激发态产生的光子数，对于一定的化学发光反应， 为一定值。由于化学发光测定易受化学反应条件，如pH值、离子强度、溶液组成、温度等的影响，影响反应速率或任意一个量子效率的因素都会改变发光强度。因此，在一定的化学反应条件下，通过测定化学发光强度就可以测定反应体系中某种物质的浓度。化学发光分析测定的物质对象可分为三类：第一类物质是化学发光反应中的的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催化剂，增敏剂或抑制剂 第三类是偶合反应中反应物，催化剂，增敏剂等。这里所说的偶合反应其实就相当于前面提到的间接化学发光反应，它将一个化学发光反应与另一个或一系列反应进行偶合，只要这一个或一系列反应中的任何一种反应物或产物或催化剂（包括酶）能参与化学发光反应，就可以根据所产生的化学发光信号强度获得该反应中某一组分的量。通过标记方式利用这三类物质还可以来测定人们感兴区的其他物质。进一步扩大了化学发光分析的应用范围化学发光分析最初是以分立式进样化学发光仪作为研究手段，由于化学发光现象一般比较短暂且随时间变化较大，使用间歇式手工操作是较难取得良好的重现性，因此人们将流动注射技术引入到化学发光分析中。流动注射技术是hansen于1975年建立的，把一定体积的试样注入到流动试剂（载流）中，可以保证混合过程与反应时间的高度重现性，特别是在非平衡状态下高效率的完成试样的在线处理与测定。在化学发光分析中，化学反应器可以正面放置在接近光检测器的部位，因此检测器的仪接受较大分量的发射光子，从而提高了灵敏度，其灵敏度可达10-21mol，甚至可检测至单分子水平。化学发光分析的检测线并不受仪器的检测极限的限制，多数是受试剂的杂质污染以及由于浓度极低而带来的其他一些问题的限制。另外，由于化学激发作用具有电子激发态的均一性特点，通常其现行范围所展示的浓度区间较宽，可高达3~6个数量级。对于化学发光分析来说，由于激发能来源于化学反应，无须专门的激发光源以及相应的单色器和聚焦透镜等，所以仪器设备简单、廉价、易微型化。分析化学,论由于化学发光现象一般比较短暂，因此化学发光分析所要求的时间也较短，但其最大的缺点是选择性差。因为化学发光分析的测定大多是在相同条件下，沿用同一个化学发光反应进行的，因而选择性较差。如典型的鲁米诺-过氧化氢化学发光体系，就能被10多种无机离子和30多种有机物催化或者增敏，且均在pH8~11的碱性条件下完成。近年来，化学发光检测与色谱以及毛细管电泳等分离技术的联用，在很大程度上解决了化学发光分析选择性差的问题，扩大了化学发光分析的应用范围。为了提高化学发光分析法的选择性，将高灵敏度的化学发光检测技术与高效能、高分辨力的高效液相色谱或毛细管电泳以适当的方式相结合，集合2种技术的优势，为人们展示了一个分离效能高、检测先低、分析速度快的方法。%I/_8e*液相色谱化学发光检测仪主要包括分离柱、泵系统、混合器和化学发光检测器。柱后的反应和化学发光检测是这一联用方法成功的关键。需要注意的是，化学发光的最佳条件往往并不是分离的最佳条件，比如色谱分离金属离子对常用酸性的流动相，而金属离子与鲁米诺的化学发光反应多在pH10时才有最强的发光强度，因此实际分析中要综合考虑各个方面的因素，选择合适的条件，使其既有利于分离又能保证灵敏、稳定的检测。|分析化学|化学分析|仪器分析|分析测试|色 发光在生物学领域也有着很多应用，主要简介如下：1 血浆和血清的化学发光 亚铁离子催化的化学发光自由基启动的脂质过氧化 (L PO) 是一个链式反应过程。反应过程中产生脂自由基 (R － ) 、烷氧自由基 (RO － ) 、共轭二烯和脂过氧化自由基 (ROO － ) 等中间产物。 ROO － 自反应会产生激发的烷氧自由基 (RO 3 ) 和单线态氧 (O 2 ) ，其回到基态时产生发光。因此，把 Fe 2 + 盐加入含有脂肪的系统中，如细胞膜、线粒体、微粒体、血浆、组织匀浆、尿液等，可产生化学发光。许多实验研究对加入 Fe 2 + 盐的不同疾病患者血浆和血清的化学发光进行的测量表明，与正常健康人相比，腹腔器官局部缺血、肢端闭合性局部缺血、血氧含量下降以及出血、手术性休克病人血浆和血清的发光强度降低。 与此相反，风湿性关节炎、阑尾炎、胆囊炎、胰腺炎等炎性疾病患者血浆和血清的发光强度升高。 降低和升高的幅度与疾病的严重程度有关。 可以看出，利用此方法有可能对非典型的心肌梗塞和腹腔器官炎性疾病做出区别诊断。 2血浆脂蛋白的化学发光 有研究提出，以分离的血浆脂蛋白悬液作为系统模型可以研究不同物质对系统过氧化的调节机制。在分离的血浆脂蛋白悬液中加入胆固醇，温育一定时间后在加入 Fe 2 + 盐，测量化学发光，发现胆固醇能使系统的发光强度降低。分析认为，这可能是由于类固醇的存在抑制了系统的过氧化。对实验性胆固醇过多血症家兔和动脉粥样硬化早期病人进行的测量发现，载脂蛋白 APO – B 。在 Fe 2 + 存在条件下的发光强度出现了增长。同样的现象在肝硬化和慢性肝炎患者身上也被发现。 3尿液的化学发光 利用尿液的化学发光可以研究肾脏功能的变化。将 Fe 2 + 盐加入尿液中，测量其化学发光，发现肾功能不足者尿液的发光强度降低。与正常健康人相比，阑尾炎患者尿液的发光强度则有不同程度的提高。利用这一方法可以评估肾脏的排泄及收缩功能。 4物质抗氧化活性的测定 利用发光测量技术可以评价某些生物组织和体液的抗氧化活性。以某一稳定的发光系统为模型，如脂肪体、线粒体、卵黄脂蛋白等，将待测的抗氧化物质加入该系统，然后加入 Fe 2 + 盐，测量其化学发光。 根据系统化学发光被抑制的程度可以评价物质的抗氧化活性。 利用这一方法进行的研究证明，不同疾病患者血浆和血清的抗氧化活性是不同的。 [/font][/size]化学发光研究的热点方向直接化学发光反应是当前化学发光分析研究的一个重要方向，人们通常通过大量试验筛选氧化反应及反应介质来证明某种有机药物、农药是否具有化学发光特性。以化学发光试剂标记核酸，运用化学发光分析进行核酸分子杂交分析是化学发光分析的前沿，其发展将为基因工程、基因诊断和治疗提供有效的检测手段。分析通常进行化学发光分析都是在现有化学发光试剂的基础上开展研究，而新型化学发光试剂的开发性研究较少，此领域还有研究空间。金属配合物，特别是钌等过渡金属配合物在化学发光分析中的作用正逐渐受到人们的重视。比如钌（Ⅱ）-联吡啶常用作电致化学发光试剂

由于吸收化学能，使分子产生电子激发而发光的现象。化学反应放出的热量（即化学能）可转化为反应产物分子的电子激发能，当这种产物分子产生辐射跃迁或将能量转移给其他会发光的分子使该分子再发生辐射跃迁时，便产生发光现象。但是多数的反应所发出的光则是很微弱的，而且多在红外线范围，不容易被观测。 化学发光条件 产生化学发光的反应通常应满足以下条件：必须是放热反应，所放出的化学能足够使反应产物分子变成激发态分子；具备使化学能转变为电子激发能的合适化学机制，这是化学发光最关键的一步；处于电子激发态的产物分子本身会发光或者将能量传递给其他会发光的分子。 化学发光类型 化学发光反应主要有以下3种类型： ①氧化反应。例如，鲁米诺的氧化反应： ②电子转移反应。例如，蒽自由基阴离子和芳香胺阳离子的反应： ③过氧化物碎裂反应： 化学发光分析 利用化学发光进行化学分析的方法。 化学发光分析所用仪器为化学发光光度计。这种仪器不需要光源和单色仪，仅由反应池、检测器和读数装置3部分组成。待测物和试剂在反应池中发生的化学发光照射到检测器上，经光电转换后将信号传送到读数装置。 化学发光分析的灵敏度高，在环境监测、临床分析、生物化学等领域里，例如污染物测定、酶分析、免疫分析法和痕量金属分析等方面得到广泛的应用。

仪器介绍　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　IFFM-E型流动注射化学发光分析仪是国内最早推出的全自动化学发光检测分析系统。仪器集成有高精度双蠕动泵数控宽调速流动注射进样系统，多功能超微弱化学发光检测器及功能强大的化学发光检测与数据采集及化学分析动力学谱图分析软件，可进行静态注射化学发光分析、流动注射化学发光等分析。根据用户需要，所提供的辅助接口还可与各种分光光度计连接，使其成为流动注射分光光度测试仪，软件功能可由用户直接选择强度/吸光度/透光度测量。 主要特点应用领域：* 静态、流动注射化学发光研究* 化学发光在线测试分析 技术参数1.高精度蠕动泵宽范围数字调速系统* 高精度蠕动泵宽范围数字调速系统：调速范围 0—99 转/分。* 可实现多达12路管道进样(6道/泵)。* 16通道自动/手动阀，换向时间≤0.3S2.多功能化学发光检测器。* 多功能化学发光检测系统可进行流动注射/静态注射/毛细管电泳发光等多种化学发光分析，内置高灵敏度端窗式光电倍增管。* 可程控高精度负高压电源和高精度前置放大器。* 负高压范围：-100～-1100V；稳定度优于0.05%。3.高精度数据采集系统,由主计算机控制可进行：* 自动/手动调零* 增益控制: 1×、2×、4×、8×、16×* 滤波器截止频率调整:10～100 Hz* 采样速率设定: 1～100 次/S* 外部信号输入接口，可接收其它仪器的模拟信号，输入范围内0～5V。4．样品测定：Luminol－H2O2－Cr（Ⅲ）体系* 浓度测定范围：1×10E-11～1×10E-5（g/mL）* 检出限：1.5×10E-12g/mL* RSD3%（痕量分析的要求是RSD5% RSD=S/x的平均值）5．REMEX全汉化数据分析系统 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=184605]高锰酸钾-甲醛流动注射化学发光法测定左羟丙哌嗪.pdf[/url]

[size=3]做电泳已有两年时间了，主要开展毛细管电泳电化学发光的应用研究，在此和大家一起分享下个人的小经验吧。[/size][size=3]毛细管电泳具有高分离效率、短的分析时间、少的样品和试剂消耗等诸多优点；电化学发光是由电化学反应引起的化学发光，其不需要外加激发光源，背景信号低和线性范围宽等优点，已成为一种常用的高灵敏度检测方法。毛细管电泳分离与电化学发光检测的结合联用充分展示了其高分离效率和高灵敏度的特点。但是，因为在毛细管窄内径下进行电驱动分离，这是一个大的挑战，虽然提高样品进样体积可以提高检测的灵敏度，但是简单的增加样品体积也可能导致分离度的下度。另一方面，电化学发光检测是由电化学引发的，这样毛细管电泳的高压电场对其也会造成一定的影响，而对于采用较大内径的毛细管影响尤为突出。以下通过毛细管电泳分离和电化学发光检测两方面来聊聊个人心得。[/size][b][size=3]一、毛细管电泳分离[/size][/b][size=3]为使多种混合样品试剂得到良好分离，需要考虑较多因素；如样品溶剂的选择、进样时间和进样电压、温度、电泳高压、电泳缓冲液类型、[/size][size=3]电泳缓冲液浓度及[/size][size=3]PH、是否需要添加剂以及添加剂的选择等等吧。以下从各个方面稍作介绍：[/size][size=3][b]样品溶剂的选择[/b]；通过实验发现，不同样品溶剂对分离和灵敏检测都有一定的影响，水和电泳缓冲液作样品溶剂占多数，我们实验一般用水作溶剂，有时候也用有机溶剂。实验结果偏差较大。下面图[b]Ⅰ[/b]是我实验中考察样品溶剂对实验结果的影响，选择了A和B两种样品溶剂进行实验，发现B溶剂对分离效率和检测灵敏度都有明显改善作用。图Ⅱ是我的一个师兄以前做的实验关于样品溶剂的影响考察，他选择了5种样品溶剂，结果发E溶剂效果最佳。[/size][table=100%][tr][td][b][size=3]Ⅰ[/size][/b][/td][/tr][/table][table=100%][tr][td][b][size=3]Ⅱ[/size][/b][/td][/tr][/table][size=3]对原因的分析我们认为可能是由于背景电解质溶剂的粘度改变导致进样体积的改变，另外，分析物在不同样品溶剂中的溶解度不同应该也是一个因素吧。[/size][size=3][b]进样时间和进样电压；[/b]它们对样品的进样量有直接影响，上面我已经粗略聊过毛细管进样量的大小对分离效率的影响，进样量太大，峰可能脱尾加宽，这样分离效率不高应是必然了，进样量太少的话的检测灵敏度方面又会造成影响的。[/size][size=3][b]温度；[/b]这个因素我不加具体实验方面的讨论了，因为我们用的仪器根本就没有带温控装置；温度对毛细管电泳的影响也只是书上的理论知识，抱歉了！自己实验中根据气温变化一般开空调控制到室温啦，呵呵。[/size][size=3][b]电压高压；[/b]这一点我想做毛细管电压的同志基本都知道其影响了，也是实验中必要优化的条件之一吧。[/size][size=3][b]电压缓冲液类型；[/b]它的选择也确是一个因素，不管对分离还是检测。影响也比较明显。大家看一下我的这个关于缓冲液类型考察的图吧。[/size][b][size=3][/size][/b][size=3]四种不同种类的缓冲液，得到的分离效果图。很明显啊，D缓冲液为我所需！[/size][size=3][b]电泳缓冲液浓度及PH；[/b]这个因素对分离和检测也是有影响的，一般对这个条件优化时，通过考察电泳缓冲液浓度对检测灵敏度的影响，而其PH不仅考察对检测灵敏度的影响，还有一个分离效率，即分离度。[/size][size=3][b]添加剂；[/b]添加剂包括的种类繁多，可根据不同需要选择不同的添加剂，比如做蛋白质分离检测时，可能需要找一些对防止蛋白质吸附效果较好的添加剂，文献报道比较多，我实验中曾经使用过聚乙烯吡咯烷酮（PVP），效果还不错，不过实验中得注意一个细节，每次实验结束后（欲关闭仪器停止实验一段时间的话），最好用水冲洗一下毛细管。要不然毛细管容易被堵死，因为PVP感觉粘粘的，时间长了好像会凝固。呵呵！另外，为了提高分离效率，也可选择一些像离子液体，表面活性剂等添加剂的，我一个师兄用过离子液体，效果不错。[/size][b][size=3]二、电化学发光检测[/size][/b][size=3]电化学发光与毛细管电泳目前一般采用柱后检测的，以Ru(bpy) [sub]3[/sub][sup]2+[/sup]的电化学发光行为为主，为提高检测灵敏度，需要考察电化学系统的工作电极类型及处理情况、工作电极与毛细管出口端的距离、检测恒电位、柱后液的PH及浓度等等因素。[/size][size=3][b]工作电极类型；[/b]Ru(bpy) [sub]3[/sub][sup]2+[/sup]的电化学发光通常采用铂电极和金电极作工作电极，我实验中采用铂电极；实验前，为得到良好效果，电极需要进行抛光处理并超声清洗表面。这方面如果是做电化学的同志应该都很清楚了。[/size][size=3][b]电极与毛细管出口端的距离；[/b]距离太近，在电极表面附近的柱后液被电泳缓冲液冲淡而影响灵敏度，距离太远的话，电泳分离的样品到达电极表面的发生电化学反应的程度可能不高，进而也影响灵敏度。[/size][size=3][b]检测电位；[/b]它对Ru(bpy) [sub]3[/sub][sup]2+[/sup]在电极表面的氧化速率有很大影响。[/size][size=3][b]柱后液PH及浓度；[/b]它们对电化学发光也有很大影响，选择合适的PH和浓度也有实验中需要考察的一个因素。[/size][size=3]以上是关于毛细管电泳分离电化学发光检测方面个人的一些粗浅认识，与大家分享，有不当之处请各位见谅，并提出宝贵意见。谢谢！（来源于[b][color=#3b85d6][font=Verdana]plf0717[/font][/color][/b]）[/size]

化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度，但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来，许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中，在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法，由于这种方法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，线性范围宽，仪器设备简单，试剂价格低廉，方法稳定、快速等优点，已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。　　化学发光免疫分析包括三大类型：即标记化学发光物质的化学发光免疫分析；标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。　　(一)　原理　　尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H２O２反应体系产生化学发光，但由于该体系的检测灵敏度不够高，不能满足酶联免疫测定的要求。因此，为了提高体系的检测灵敏度，可将HRP催化H２O２氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H２O２的化学发光反应相偶合，建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里，酶的活性是基于下列发光反应进行检测的:　 HRP　　　　　　　　　luminol＋H２O２───→产物＋hν　　　　　　　　　　　　　　　　　产　物　　　　　　　　　　　　　　　　　　↑　　　　　 　Eosin＋H２O２ ──────┘　　　　　　　　　　　　　　　HRP　二)　操作步骤　　1.　包被抗体　在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚，再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体，同时设空白对照，置4℃过夜。　　2.　洗涤　用抽滤针头吸干管内液体，加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次，每次加2ml，放置3～5min，用抽滤针头吸干管内液体。　　3.　加待检血清和阳性标准品　用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。　　4.　洗涤　同2。　　5.　加酶标抗体　 用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体，每管加入300μl，空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。　　6.　洗涤　同2。　　7.　化学发光测定　给每管加入300μl底物溶液，置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中，并置于测量位置，加入300μl 5.0×10－４M luminol。记录仪记录化学发光强度。　　8.　同时用ELISA方法进行对照，结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。　　结果判定(1)　定性　按下列公式判别阴、阳性:　　 　　　　　　　L样品－L空白　　　　 ┌≥2.1　为阳性　　　S／N ＝ ────────　＝　商│　　　　　　　L阴性对照－L空白　　　 └＜2.1　为阴性　　　(2)　定量　以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标，不同稀释倍数为横坐标，作出剂量反应曲线(标准曲线)，犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。

第三部分　化学发光的应用• 无机化合物化学发光分析 1.1 金属离子分析 痕量金属离子对化学发光反应具有很好的催化作用，因而化学发光测定金属离子得到广泛的应用 ( 见表 1) 。但是，由于不同金属离子催化氧化发光试剂时，发光光谱相同，致使金属离子催化化学发光反应的选择性较差。为提高分析的选择性，可采用以下方法 : (1) 利用待测金属离子与干扰离子配合物稳定性不同进行选择性分析，如加入掩蔽剂 EDTA 或水杨酸掩蔽干扰离子 (2) 优化实验条件以减少其它离子的干扰 (3) 稀释样品溶液 (4) 加入敏化剂。但是，当样品中待测物相对于干扰物浓度很小时，上述方法也无济于事，只得进行前处理，常用的分离方法有色谱、溶剂萃取等。 色谱分离的高选择性与化学发光检测的高灵敏度相结合，是一种很有前途的联用技术。关键是流动相的选择，流动相选择得好，不仅可以提高选择性，还可以进行多个离子的同时测定。如用离子交换分离法同时测定 Cr (à ) 和 Cr (? ) 。溶剂萃取也是提高化学发光测定金属离子选择性的一个有效方法。这种方法的主要问题是费时，因为进行化学发光检测前必须将无机物从有机溶剂中反萃取出来，或是将有机溶剂蒸发除去。较好的方法是自动在线溶剂萃取选择性检测待测物。 1.2 其它无机化合物的分析　 化学发光反应中，过氧化氢是最常用的一种氧化剂，因此有关 H 2 O 2 化学发光分析的报道较多 ( 见表 2) ，涉及到鲁米诺、过氧草酸酯及光泽精等化学发光反应。根据鲁米诺化学发光反应制成的 H2O 2 光纤传感器与流动注射法联用，可检测 10nmo l ／ L ～ 1 mmo ／ L 的 H 2 O 2 ，用模拟酶代替辣根过氧化物酶催化鲁米诺发光，检测限可达 5 . 5×10 － 9 mo l ／ L 。根据 ClO - 对鲁米诺的氧化作用，可用于测定 ClO - ，其它物质如 Cl 2 的干扰，可用流动注射法消除。利用停流技术测定水中 ClO - 不必进行前处理。含氮的无机化合物如 NH3 ／ NH +4 ，可将其衍生后用 TCPO 化学发光法检测，线性范围为 2 。 9ug ／ L ～ 6 m g ／ L 。 CN － 能抑制鲁米诺 H 2 O 2 － Cu (II ) 的化学发光，据此可分析测定 CN — 。在低温条件下化学发光分析测定 CN － ，当进样量为 100uL 时，线性范围为 10 － 9 － 10 -7 g ／ mL ，当进样量 20 uL 时，线性范围为 10 － 8 ～ 5×10 -7 g ／ mL 。 • 有机化合物的化学发光分析 2.1 有机酸 有机化合物的同系物结构和性质相似，使单一组分的测定遇到困难，因此有机化合物同系物的分析常与 HPLC 相结合。有机酸的化学发光分析 ( 见表 3) ，一般是先将其衍生成荧光物质经色谱分离后进行化学发光检测。但衍生法有如下的缺点 : (1) 衍生反应不完全 (2) 衍生物稳定性差，要求及时检测 (3) 限制了分离方法和条件的选择。由于衍生产物的性质与待测物不同，导致分离效率和分辨率下降，同时增加分析的时间和劳动强度。在临床医学上，草酸是一个重要的检测项目，可以直接用氧化化学发光反应测定尿液和草酸二乙酯中的草酸盐及游离的草酸。另外还可以测定苯酮尿症病人的尿液的苯丙酮酸的含量，方法是先在碱性条件下将苯丙酮酸氧化成 1 ， 22 二氧杂环丁烷类化合物，然后裂解产生化学发光。另外可以将 Fe （ III ）草酸配合物光解得到 Fe (II ) ，催化鲁米诺－过氧化氢化学发光反应，此法线性范围为 0 . 1 ～ 100uM 。此外酶联偶合反应也可以用于某些有机酸的化学发光分析。 2.2 有机碱　 胺类化合物第一离子化电势呈如下规律 : 伯胺 仲胺 叔胺，并随碳链增长，离子化电势逐渐下降，因此叔胺化合物的检测限较低，达 0 . 28 pM 。胺类化合物的分析 ( 见表 4) ，较多的是经柱前衍生生成荧光衍生物，分离后用过氧草酸盐化学发光体系检测，也可将其生成希夫碱或其它产物氧化而发光。有些碱如肾上腺素等可直接氧化而发光。通常有一个经验规则，假如一物质具有荧光或其反应产物有荧光，该物质一般可发生化学发光反应，但也有例外。嘌呤碱是核酸的基础物质，因此对嘌呤碱的分析测定将推动 DNA 分析方法的发展。在酸性醇液中腺嘌呤与苯甲醛反应，然后用过氧化氢氧化反应产生化学发光，此法具有很好的选择性，线性范围为 1 . 5×10 － 7 ～ 5 . 0×10 － 7 M ，用此法测定鸟嘌呤灵敏度比荧光法高 20 倍。 2.3 　氨基酸　 氨基酸分析方法的改进有利于推动生物技术、基因工程、 DNA 重组和基因克隆等的发展。由于绝大多数氨基酸没有内源荧光特性，因此用过氧草酸盐体系测定氨基酸需将其衍生成荧光物质，但此法避免不了衍生法所固有的缺点。此外亦可通过测定氨基酸与氨基酸氧化酶反应产生的过氧化氢来测定氨基酸的含量，如 L 2 氨基酸经反相色谱柱分离后流经 L 2 氨基酸氧化酶反应器产生过氧化氢，然后用过氧草酸盐体系检测。氨基酸与 Ru (b ipy) 3+3 反应，用流动注射化学发光法检测，相对于脯氨酸和天冬酰胺检测限可分别达到 20 pmo l 和 50 pmo l 。一般来说，仲胺反应产生的的发光强度比伯胺大。对氨基酸上取代基性质研究表明，给电子基有利于增强化学发光强度。 2.4 糖类　 光泽精体系可用于测定一些还原性物质，如乳糖、葡萄糖，用于抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的分析测定有很高的灵敏度。但此法用于复杂样品分析却因干扰多而受到限制。用草酰胺化学发光照相法测定了葡萄糖。在微量滴定板上将草酰胺发光剂、荧光增感剂及 50 uL 试样混合，于 5 m in 内用照相荧光剂测定液斑的发光强度，可检出 100 pmo l 的萄萄糖。 糖类物质测定的另一个重要方法是测定酶反应产生的 H 2 O 2 ，由此对酶底物 —— 葡萄糖、乳糖等进行测定。而酶的固定化技术为此法的发展注入了新的活力。采用物理包埋法将葡萄糖氧化酶固定在聚丙烯酰胺凝胶中并制成酶柱，再将酶柱接入流动注射系统中，用流动注射化学发光法测定由酶促反应产生的 H 2 O 2 ，从而测定人体血液中的葡萄糖，检出限可达 0.1 m g ／ L 。 2.5 类固醇与类酯　 一些特异性酶如类固醇脱氢酶和其它荧光素酶与合适底物反应产生 H 2 O 2 ，通过测定 H 2 O 2 达到分析测定底物的目的。 2.6 药物　 根据药物的不同类型选择不同的化学发光分析方法。目前较常用的方法是直接氧化化学发光。在碱性溶液中用 N －溴代丁二酰亚铵氧化含有酰胺基的药物产生化学发光，如利福霉素等检测限在 1 . 23 m g ／ L ～ 0 . 5 g ／ L 之间。氧化四环素类药物检出限在 0 . 02 － 0 . 04 m g ／ L 之间。

1. 《化学发光基础理论与应用》，林金明，化学工业出版社， 2004年07月 简介：化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便等特点，广泛地应用于环境化学、临床检验、药物分析和工业分析等领域。本书共有11章，侧重于总结化学发光的理论研究，内容包括：总论；鲁米诺、过氧化草酸酯、高锰酸钾和四价铈等四种最常用化学发光试剂的化学发光研究与应用概况；活性氧的化学发光研究；微观非均相化学发光反应；液相色谱柱后化学发光检测技术；毛细管电泳?化学发光联用技术；微流控芯片的化学发光检测系统；中国化学发光研究概况等。2. 《流动注射分析法》，方肇伦 等著，科学出版社， 1999年8月 简介：流动注射分析是70年代中期诞生并迅速发展起来的溶液自动在线处理及测定的现代分析技术。本书全面地阐述了流动注射分析理论和技术的发展，系统介绍了流动注射分光光度法、流动注射原子光谱法、流动注射电化学分析法、流动注射酶分析法、流动注射荧光及化学发光洁、流动注射免疫分析法、流动注射在线分离浓集、在线消解等操作方法和技术关键．全书理论、概念论述清晰，重点突出介绍各种技术和方法，充分体现“流动注射分析法”的含义。3. 《电化学发光》，李云辉 王春燕　等编著，化学工业出版社， 2008年01月 简介：电化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、操作方便、易于实现自动化等特点，广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。在21世纪中必将继续为解决人类面临的各种重大问题发挥更加显著的作用。 　本书介绍了电化学发光的研究进展及电化学发光分析的特点；电化学发光基本原理；电化学发光的基本类型；电化学发光检测技术；电化学发光的应用；毛细管电泳电化学发光应用实例等。4. 《化学发光免疫分析》，林金明 赵利霞 王栩 主编，化学工业出版社， 2008年03月 简介：本书主要分两大部分，第一部分1～9章介绍化学发光免疫分析的新方法和基础理论研究；第二部分10～18章侧重于化学发光免疫分析的应用，主要针对临床检测、环境分析以及食品安全三大应用领域。第19章简要介绍分析过程的质量管理与控制。附录收集了常用的化学发光免疫试剂盒和相关用语的中英文对照。书中每个章节既有独立性又有相互参考性，尽最大可能地收集与每一章节有关的参考文献。 本书可供从事临床分析、食品检测、环境监测等科研人员和分析工作者参考，也可作为大专院校和科研院所相关专业师生的教学参考书。

化学发光检测原理概述化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光，这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或x-光片，甚至视觉检测器都可以。化学发光检测方法的简单性使得它的应用很简单并且完全可以自动化。但是它的灵敏度又是怎么样的呢？化学发光有如下两个内在的优势：1．绝大多数的样品没有“背景”信号，如它们自身不发光。2．化学发光的检测不是一个比例测试，这是与荧光和吸收或比色测试不同的。在荧光测试中，具有小的Stokes Shift的荧光基团非常难检测。荧光很难从激发波长中分辨出来。另外一个问题是，特别在样品是浑浊的情况下有一部分杂光会进入到检测器。在吸收光测试上，其灵敏度受到限制的根本因素是需要在两个相对较强的信号之间去区分一个较小的差别。需要注意的是检测器对光谱的敏感性近可能接近化学发光的光谱，以得到最大化的灵敏度。一般在自发光仪中的光电倍增管对蓝光有最佳的反应，对红光的末端光谱不太敏感。固态检测器对红光有较好的反应。X-光片广泛用于记录在尼龙膜、纤维素膜或PVDF膜上的化学发光印迹分析。但是我们需要牢记在心的是x-光片仅能够用于检测紫外到蓝光光谱范围内的光信号，虽然有一些特殊的光片对增强的绿光有敏感性。

电化学发光法测定铁 关键词: 电力 化学 　　铁是人体中不可缺少的微量元素,是活细胞的一种组分,是多种酶的活化部位,对人体新陈代谢非常重要。测定痕量铁的方法很多,主要有分光光度法、荧光光度法和化学发光法等。其中化学发光法具有简便快速和灵敏度高等优点,但该方法的选择性不高。　　电化学发光分析法是近年来发展较快的一种发光分析方法,已广泛用于许多无机物和有机物的分析测定,然而,至今为止,很少有电化学发光方法涉及铁离子的分析测定。本文发现,铁(Ⅲ)和邻菲口罗啉形成的配合物(Ｆｅ(ｏＰｈｅｎ)33 )对碱性介质中鲁米诺在印刷电极上的电还原发光信号有强的增敏作用,据此,首次建立了一种新的测定铁(Ⅲ)的电化学发光方法。该方法与已经报道的化学发光分析方法相比具有较好的选择性。

化学发光(Chemiluminescence)是指某些化学反应中发出可见光的现象. 其发光机理是：反应体系中的某种物质(反应物、产物、中间体或荧光物质)的分子吸收了反应所释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光. 其过程可以表示为：　　A+B→C*+D, C*→C+hν或A+B→C*+D,C*+F→F*+C,F*→F+hν.将化学发光反应应用于分析化学，根据某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定体系的相应组分含量的分析方法叫化学发光分析法. 最早发现的化学发光现象发生在生物体内，即荧火虫，现在称之为生物发光(Bioluminescence). 到了十九世纪后期人们发现简单的非生物有机化合物也能产生化学发光. 1877年，Radziszewski［1］发现洛汾碱(2，4，5-三苯基咪唑)在碱性介质中被过氧化氢等试剂氧化时发出绿色的光. 1928年，Albrecht［2］观察到鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼)在碱性介质中的化学发光行为. 1935年，Gleu和Petsch［3］第一个报告了光泽精(N,N-二甲基二吖啶硝酸盐)与过氧化氢反应产生化学发光. 由于大多数化学发光非常微弱，且稍纵即逝，并由于检测器的限制，使得化学发光反应被用于分析化学，建立化学发光分析法，则是到了本世纪六十年代. 国外化学发光分析方面的研究在六、七十年代得到迅速发展，现在，化学发光分析的研究和应用仍然是当前痕量分析领域的一个十分重要的研究方向. 国内化学发光分析方面的研究起步于八十年初，自章竹君及其研究小组在鲁米诺的合成、发光仪的研制方面取得突破性的进展以来，短短十多年时间，国内化学发光分析的研究有了很大的发展. 他们对鲁米诺化学发光反应的研究、偶合化学发光反应的研究都比较深入细致，有关高效液相色谱化学发光检测的分析方法、化学发光免疫分析法和生物的超微弱发光在生命科学、临床医学中的应用都已成为研究的热点. 　　由于化学发光分析不使用任何光源，避免了背景光和杂散光的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比，因而，化学发光分析法一般都有很高的灵敏度，通常可测定纳克级或皮克级的化学成分.　　产生化学发光的反应必须具备两个条件，一是该反应能释放出一定的能量，且释放出的能量可以被某种反应产物或中间体所吸收，使之处于激发态；二是这种激发态产物应具有一定的化学发光量子产率，或者可以将其能量有效地转移给某种荧光物质，产生光辐射. 基于此，并不是任何化学反应都能产生化学发光反应，因此，如果测量条件适当，化学发光分析会有足够的选择性. 　　测量化学发光强度，多采用光电转换装置，用函数记录仪或数显装置，记录化学发光的相对强度. 以最大发光强度(曲线的峰高)定量被测组分的浓度. 　　由于流动注射分析(FIA)技术的发展，流动注射化学发光仪也广泛使用. 配备微机系统，自动进样，储存记录，打印结果，使化学发光分析的速度更快.　　研究和应用最早的化学发光体系，以有机物作为发光剂的情况较多，如目前研究较为成熟的有鲁米诺、光泽精、洛汾碱、过氧草酸酯等，它们的发光效率较高，现已广泛用于多种金属和非金属无机离子及有机物的分析，近几年，一些新的发光剂及发光体系的研究成功，使化学发光分析呈现出新的局面.

全自动化学发光免疫分析仪的原理以及了临床应用。全自动化学发光免疫分析仪采用光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。是用于检测肿瘤标志物、贫血、甲状腺、孕筛查等项目，是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术，目前应用的自动化分析仪是分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成，大大提高了工作效率及准确性。

FIA-CL检测系统 流动注射分析是Ruzicka和Hansen于1975年首先提出的一种创新技术，这种新技术的发展摆脱了溶液化学分析平衡理论的束缚，可在物理和化学不平衡状态下进行测定。它适应性广泛，分析效率高，试样和试剂消耗量少，检测精密度高，设备简单。该技术发展非常迅速，已被广泛应用于很多分析领域。流动注射分析技术能使样品和试剂以高度重现的方式混合，从混合到检测的时间间隔可以严格控制。同时，由于计算机控制和大规模集成电路的出现，FIA可以实现自动化分析。而一般的化学发光是快速反应，在溶液混合的瞬间就产生发光信号，并且在几秒内发光强度达到峰值。要达到精度较好的测量结果，就必须严格保持测量过程中的物理性质和化学性质能很好地重现。在这方面，流动注射为化学发光分析提供了一个很好的手段。在流动过程中，所有的试验参数如试剂体积、保留时间、温度、试剂的混合时间和方式等都能严格控制并重复操作。因此，这种方法克服了化学发光分析法重现性差、操作费时、不便于实现自动化等缺点。流动注射和化学发光分析的结合，使之成为一种快速、有效的痕量分析技术，被广泛应用于水质检测、土壤样品分析、农业和环境监测、科研与教学、发酵过程监测、药物研究、禁药检测、血液分析、食品和饮料、分光光度分析、火焰光度分析、质谱分析、原子光谱分析、荧光分析、生物化学分析等等。 流动注射化学发光系统一般包括两个部分。一部分是流动体系部分，它控制发光试剂的流速及其混合方式；另外一部分是化学发光检测部分，它将检测到的发光反应发出的光转变成电信号，并由记录仪记录下其发光响应值。常见的流动注射化学发光检测器的装置示意图如图1-1a所示： 图1-1 FIA-CL 联用装置示意图Fig. 1-1 Schematic diagram of FIA-CL detectionP：蠕动泵；V：进样阀；C：流动池；D：检测器；R：记录仪； W：废液 一般优化的流路有三通路、四通路和多通路等形式，各发光试剂以某一恒定流速经蠕动泵驱动，通过进样阀将待测组分与发光试剂混合, 在流动池里面发生化学发光反应, 流通池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大,最后由记录仪记录。由于该检测法不需要光源,消除了光源不稳定的杂散光的干扰, 另外直接检测发光强度,因此灵敏度很高。流动池中的反应可以是不完全反应，只要其中的试剂分散和反应程度可以高度重现就符合试验要求。试样和试剂的分散是所有FIA方法的核心问题，通常用分散系数D来描述试样的分散状态。D定义为：决定分析读数的流体微元组分在扩散过程发生前(C0)与发生后(Cmax)的浓度比值,即D=C0/Cmax 。FIA体系中的分散过程是许多不同因素 (包括流速、管道长度、管径、试样体积与检测方式等)的复杂函数。主要影响有：①试样的进样体积越大，D越小；②反应器管长度越大，D越大；③管路集合形状越复杂，试样在其中流动方向改变越多，D越大；如：直管反应器的D最小，盘管与编织管反应器的D较大。④流速对D的影响与反应器的管径大小有关，关系较复杂。在此装置中，流动池的设计是个关键。由于直管反应器的分散系数较小，试剂分散度不够，所得的发光强度值较弱。因此，在实际中，一般采用如图1-1b所示的盘管式反应器。一般来说，反应器的体积应尽可能大，其发光截面尽可能大，且同光电倍增管尽可能靠近。根据实际分析情况，还可以将萃取渗析、交换柱及填充柱引入FIA系统，使FIA-CL应用更加广泛。

[size=4]化学发光法的灵敏度很高，超过一般的检测方法。其不足支出在于选择性较差，因此常与分离工具结合（HPLC, CE），能发挥很好的作用，但是联用技术的兼容性问题有很多需要考虑的地方，限制了该方法在实际中的应用。以下内容是拷自我以前的论文，主要讨论HPLC-CL联用技术需要注意的地方，供参考。要获得好的分离和灵敏的检测，往往需要综合考虑各方面的因素:(1)流动相的选择应与化学发光检侧系统相兼容，选择的溶剂既不应增加背景，也不应熄灭化学发光信号；此外，还要考虑发光试剂在其中的溶解度，以避免生成沉淀。(2)缓冲溶液及其pH值的选择。由于pH值对化学发光反应的发光强度ICL和寿命影响很大，选择合适的pH值十分重要，加缓冲溶液使流动相和反应试液均得到缓冲的方法，可控制一定的pH值；为适应不同的pH值范围，应选用合适的化学发光试剂。(3)选择适宜的流速，以保证分离完全并能检测到强的发光信号。(4)发光试剂浓度的选择应有利于提高信噪比(S/N)。一般，浓度大时可获得较大的发光强度，但浓度大，有时会形成沉淀，且增加干扰(背景噪声)。(5)所用试剂应纯化，以减小化学发光的背景。(6)输液泵的脉动会引起试液浓度的局部变化，提高背景噪声，故要保证尽可能均匀、恒定、无脉动流速输液。使用注射泵，但其容量有限，实际上多用往复泵，后接阻尼器以减小脉动。(7)化学发光检测器的设计应能检测到最大的ICL，死体积要小，且价格便宜、仪器简单、易于操作，分析速度快。为此，应使用短的混合反应管和高效光收集装置(如高质量光电倍增管及光子计数器的使用)，并使流动池F尽量靠近光电倍增管。目前，微孔柱HPLC的应用日益广泛。在微孔柱的HPLC-CL分析中，流动相的流速相对于化学发光试剂的加入速度低很多，使流动相对反应池中最终的化学发光反应的影响很小，从而可使化学发光检测和HPLC分离有可能在各自的最佳条件下进行。这一点对梯度洗脱过程中的化学发光检测尤为重要。在使用化学发光检测时，可以选用反应速度快的发光体系，使柱后流出的分析物在没有明显扩散之前就完成了化学发光反应，避免了大体积池对色谱峰的展宽。微孔柱HPLC与快速灵敏的化学发光反应结合，为分离检测提供了一个完美的统一。为简化反应系统，可将反应试剂固定在固相担体上，装入短柱内，样品液流过短柱时发生反应。如将TCPO固体和固定化荧光试剂填装在短柱中，并与化学发光流动检测池相联，当流动相带着样品流过固相化学发光反应器及流动池时，即可测得化学发光信号。这种液固反应体系的优点是简单、稳定、不需附加输液泵等装置；缺点是柱寿命有限。将这种固相化学发光反应器与高效、高选择性的固定化酶反应器或光化学反应器相结合，特别适合于生化物质的测定。[/size]

昨天发了一些关于化学发光仪的图片，首先声明绝非灌水，也不是推销仪器。我个人认为做化学发光，就和化学发光仪不能分开，就像做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]一样，谈论仪器是一样的道理，每个做化学发光的同行都是用过发光仪，我们可以互相交流经验，比如仪器的灵敏度，软件界面是否友好，操作方法是否简单的。或者有什么需要改进等等。这些都是在仪器网上截取下来的资料。希望大家来讨论，交流经验。也可以把你用过的仪器一些技术参数登陆上去。以后在大家选择的时候也提供一些参考。