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化学发光微孔板酶标检测仪

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化学发光微孔板酶标检测仪相关的论坛

  • MPI-M型微流控芯片化学发光检测仪

    技术参数 1.MPI-M型电致化学发光检测仪—多功能化学发光检测仪: * 测量动态范围:大于5个数量级 * 测量精度优于0.05% 2.MPI-A/B型多功能化学发光检测器: * 波长范围:300—650nm * 灵敏度:SP1000A/Lm 3.MPI-M型微流控芯片化学发光检测仪—数控多路高压电源: * 输出路数:4路(BF型) * 输出电压:0—2000V/路 * 输出电流:0—2mA/路 * 高压接出方式:输出、断开、接地 * 输出电流保护控制:0—2mA * 设置程序步:10步 技术文章 此仪器没有任何技术文章 主要特点 应用领域: * 微流控芯片化学发光分析。 仪器介绍 微流控洗片发光检测是近几年发展迅速的一种新型检测方法,它将微流控芯片进样与化学发光检测相结合,可用于微流控芯片化学发光等科学试验。 MPI-M型微流控芯片化学发光检测仪系结合微流控芯片进样与化学发光检测于一体的多测试界面、多分析参数、多控制部件系统集成仪器。它可同时对被测样品实现微流控芯片进样控制与化学发光实时检测,并同步显示化学发光信号、微流控芯片进样状态并对其进行详细分析。

  • 化学发光免疫分析仪与酶标仪的区别

    虽然酶标仪价格低廉、仪器简单、方便操作,但在越来越多的项目检测中,化学发光免疫分析仪逐渐取代酶标仪的使用。 化学发光的优点到底在哪里呢?从原理上说,酶标仪是通过对酶标板中液体的吸光值检测,获得一个OD值后进行定性或半定量的分析,达到检测的目的。化学发光免疫分析仪是化学发光反应(酶促发光或直接发光)产生的光信号通过光电倍增管进行信号转换后等到相应的信号值,用RLU(相对光单位)表示,以达到定量或定性的检测目的,其更加灵敏,线性范围更宽,而且可以做定量检测,可进行全自动操作,而酶标仪无论检测还是线性范围都不如发光仪,且只能做定性检测,但是目前国内酶标仪较为成熟,化学发光尚处于成长期。

  • MPI-E型电致化学发光检测仪

    技术参数 1.MPI-E型电致化学发光检测仪—多功能化学发光检测仪: * 测量动态范围:大于5个数量级 * 测量精度优于0.05% 2.MPI-A/B型多功能化学发光检测器: * 波长范围:300—650nm * 灵敏度:SP1000A/Lm 3.MPI-E型电致化学发光检测仪—电化学分析仪: * 电位范围:-10V—10V * 电流范围:±250 mA * 参比电极输入阻抗:10E12Ω * 灵敏度:1x10E-12—0.1A 共16个量程 * 输入偏置电流:50pA * 电位增量:1mV * 扫描速率:0.0001—200V/S * 测试方法:循环伏安法(CV),线性扫描伏安法(LSV),计时电流法(CA)计时电量法(CC),控制电位电解库伦法(BE),开路电压—时间曲线(OCPT) 技术文章 此仪器没有任何技术文章 主要特点 应用领域: * 药物、氨基酸、多肽、蛋白质及核酸检测分析 * 蛋白质与药物、核酸相互作用研究。 仪器介绍 电化学发光检测是近几年发展迅速的一种新型检测方法,它将电化学分析与化学发光检测相结合,可用于临床检验分析及医药、病毒、免疫等科学试验。 MPI-E型电致化学发光检测仪系结合电化学分析与化学发光检测于一体的多测试界面、多分析参数、多控制部件系统集成仪器。它可同时对被测样品实现电致化学发光实时检测,并同步显示化学发光信号、电化学分析信号并对其进行详细分析。

  • 【求助】关于化学发光成像分析 vs 化学发光检测仪

    刚学习化学发光,请专家指点化学发光检测仪采用液相(态)检测方法比化学发光固相(态)检测(成像系统)灵敏多少个数量级? 3~5个?对于化学发光检测,是不是PMT单光子检测做的工作,化学发光成像系统一定不可以做? 例如?

  • 仪器介绍 III:冷光仪(原子摩尔光度计、生化发光检测仪、化学发光仪) LuminMax-C

    仪器介绍 III:冷光仪(原子摩尔光度计、生化发光检测仪、化学发光仪) LuminMax-C

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/06/201206061012_370645_1699466_3.jpgLuminMax-C(冷光仪,又称:化学发光光度计、化合光以及生物发光检测仪、化学发光仪、BL/CL分析仪)技术简介引 言生物发光和化学发光是自然界中一种常见现象。发光主要物质是由酵素(如:虫荧光素酶)、受质(如:荧光素)及其辅助ATP等所组成。如未涉及细胞,ATP是不需要的。所以二种重要的化学物质是酵素和受质:若将这二者放在一起就会产生化学冷光。光强度与酵素浓度成线形关系,所以检测光度就可定量浓度。化学发光指化学反应过程中发射出来的光,又称冷光;生物发光是化学发光的一种,专指由酶催化的化学反应过程中发射出的光。化学和生物发光经常被用于测定样品中未知成分的量,并且在过去的十年里在基因表达和基因调控的研究中发挥着非常重要的作用。通过发射光的比率可以推出未知成分的浓度,因此测定化学反应过程中的发射光是非常有用的。反应过程中产生的光与发射光的量产率是直接相关的,相应的,与发光物质的浓度成比例。因此,反应过程中的光可以相对反映出目标样品中发光物质的量。近年来,生物发光和化学发光的研究及使用与日俱增。从测试细胞活性的ATP-荧光素酶检验,到当今的DNA、基因及蛋白质分析的应用日益扩大。与荧光发光不同,它不需要外部光源。冷光是从化学反应所产生的。利用光子计数检测器,通过对反应中所产生的光子计数,冷光检验已成为最灵敏的光学检测方法之一。美国Maxwell Sensors公司的LuminMax-C研究级化学发光仪(冷光仪)为广大用户提供了一款具有超高灵敏度和重复精度、易使用、结构紧凑及经济实用的仪器。该仪器可测量96孔微孔板(黑或白)中的发光强度。微孔板底部很清洁,因此,从孔的底部产生的发光即可被检测。用 途化学发光仪经常被用于:·ATP(三磷酸腺甙)检验、荧光素酶检验·免疫及proteomics·核酸,DNA及基因组·病毒研究(比如:SARS、禽流感病毒研究)·临床诊断研究·染色体分析·毒性试验·细胞活力试验·餐馆卫生检测·环境检测·工业、农林业、畜牧业、养殖业等其它用途最广泛用途是对利用报告基因检测目标基因的表达以及检测细胞内 ATP 水平。1. 报告基因实验:分子生物学家和细胞生物学家利用报告基因研究基因的表达和调控。将报告基因引入细胞 DNA 使之与某一特定分子事件相关,可以为这一分子事件带来可测性。通常检测的分子事件是基因功能,具有可测性的是发光。目前,市场上有许多发光报告基因出售。包括:萤火虫荧光素酶( firefly luciferase ),β-半乳糖苷酶( B -galactosidase ),β-葡萄糖苷酸酶(B -glucuronidase , GUS ),碱性磷酸酶( alkaline phosphatase ),和人生长激素( human growth hormone , hGH )。 高灵敏度,低成本,快速以及使用简单使得发光检测仪成为理想的基因表达研究工具。2. ATP 水平测定:所有活细胞都含有 ATP 。 ATP 可以从细胞中提取出来,用萤火虫荧光素酶检测。在这个发光反应中,ATP 是限制性反应物。因此,到达发光检测仪光电倍增管的光与样品中 ATP 的含量成比例,相应的与提取 ATP 所用的细胞数成比例。ATP发光检测方法已经使用了几十年。ATP的测量被应用于:• 水,食物,药品,化妆品中的微生物污染检测:ATP的发光检测方法可以检测样品中的所有微生物,因而被用于检测水中的大肠杆菌含量,包括饮用水和用于oil field injection , cooling system 以及纸加工过程的工业用水。ATP的发光检测方法还可以用于药品,化妆品,牛奶以及其它食品的微生物控制。• 生物数量评估: 微生物学家通过检测 ATP 的含量测定土壤和沉积物中的全部活生物含量。相关研究还包括污染物对淡水和海水微生物的影响。• 临床研究: 临床研究应用包括:评价抗生素对微生物生长的影响,了解不同药物对哺乳动物细胞的影响等。应用场所:· 高等院校生命科学及生物化学实验室;生物化学技术研究院所实验室· 医院研究实验室;生物制药实验室· 政府药检、商检、疾控中心实验室· 环境试验室;法医试验室· 食品等工业质量控制和检测试验室主要特点:优 点• 化学发光定量检测法相对于其它分析技术有许多优点:非常灵敏;动力学范围广;仪器设备便宜;这一新的发光实验方法的出现使得这一技术的应用非常广泛。LuminMax-C使用了超级光电倍增管作为检测器,它具有极高的灵敏度。检测灵敏度可达10-18 摩尔(HRP)以上。它具有检测从反应中产生光子数的能力,这意味着它可以检测样品中被分析物极小的份量(浓度)。• 优秀的灵敏度和低背景使发光检测仪从其它分析方法中脱颖而出。发光检测仪比吸收光谱仪灵敏 100,000 倍,比荧光仪至少灵敏 1,000 倍。• 在发光反应中,有两种成分的光能够到达检测仪。第一种与化学发光反应中的有限的反应物的浓度成比例。第二种也就是背景光,是基本不变的,与反应物中的塑料、杂质发出的磷光等有关。相对于分光光度计和荧光仪等其它检测技术,化学发光检测仪的背景光非常低。• 广泛的动力学范围和低仪器成本也是化学发光检测仪的优势。不需稀释样品或对样品细胞进行修饰,测量范围可以达到7个数量级以上的浓度。• 使用简单方便:具有用户友好界面的软件在随机奉送的光盘里,它非常容易安装。LuminMax-C不但体积小巧,而且通过简单的插入式连接(USB或者串口)与计算机相连,便于携带。当按下“GO”键,系统自动并快速地扫描所有选中的微孔,并且显示结果。计算结果以电子表格的形式显示。数据以光子数或相对光单元(RUL)作为报告被显示。技术参数:盘形式: 微光度测定盘(96孔板)光辐射探测: 生物或化合光灵敏度: 光电计数器,1attomole HRP(10-18 摩尔HRP)波长:300-680nm操作: 自动扫描所有的孔可调节integration时间 (0.01-10.0 秒)可调节扫描次数接线: 显示所有的microwell数据容易校准数据输出: Excel格式连接PC的以太网接口软件: 用户易使用的软件尺寸: 30.5 X 28 X 14 (+2.5) CM

  • MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪

    技术参数 1.MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪—多功能化学发光检测仪: * 测量动态范围:大于5个数量级 * 测量精度优于0.05% 2.MPI-A/B型多功能化学发光检测器: * 波长范围:300—650nm * 灵敏度:SP1000A/Lm 3.MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪—电化学分析仪: * 电位范围:-10V—10V * 电流范围:±250 mA * 参比电极输入阻抗:10E12Ω * 灵敏度:1x10E-12—0.1A 共16个量程 * 输入偏置电流:50pA * 电位增量:1mV * 扫描速率:0.0001—200V/S * 测试方法:循环伏安法(CV),线性扫描伏安法(LSV),计时电流法(CA) 计时电量法(CC),控制电位电解库伦法(BE),开路电压—时间曲线(OCPT) 4.MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪—毛细管电泳高压电源: * 输出电压:0—20KV * 输出电流:0—300uA 技术文章 1.毛细管电泳电化学发光检测技术及其在生命科学中的应用2.Analytical applications of the electrochemiluminescence of tris(2,2''-bipyridyl) ruthenium and its derivatives 主要特点 1.用于药物、氨基酸、多肽、蛋白质及核酸检测分析 2.用于蛋白质与药物、核酸相互作用研究。 仪器介绍 电化学发光检测是近几年发展迅速的毛细管电泳分析中的一种新型检测方法,它将毛细管的分离技术与电化学发光检测相结合,可在临床分析及医药、病毒、免疫等科学试验中大大简化分析的技术难度,提高分析结果的准确性。   MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪系结合毛细管电泳分离和电化学发光检测于一体的多测试界面、多分析参数、多控制部件系统集成仪器。它可同时对被测样品实现毛细管电泳在线分离、电化学发光实时检测,并同步显示化学发光信号、电化学电位扫描信号、电化学电极电流信号及毛细管电泳电流信号并对其进行详细分析。

  • 化学发光检测的能量

    化学反应过程中的能量以光的形式释放出来,成为化学发光,有些生物体在能量代谢的过程中通过消耗ATP也可发光,为生物发光。化学发光 常用物质包括二氧乙烷衍生物、鲁米诺及衍生物、和丫啶酯。这些试剂可用于各种标本分析、HPLC检测和流动注射分析系统。二氧乙烷衍生物在碱性磷酸酶的作用下水解,形成一种高能量的中间体,这种中间体进一步分解后释放出光子,此类有代表性的物质是AMPPD和CSPD。此方法最为广泛的应用是基于碱性磷酸酶和β半乳糖苷酶的分析系统。碱性磷酸酶(AP)的测定 检测AP,β-葡糖苷酸酶活性的方法是使用一种有商品供应的稳定的1,2-二氧乙烷衍生物,这种发光底物的发光时间为数分钟至数小时。发光强度直接与酶的浓度相关。这种底物可用于1) 微孔板的免疫分析,DNA 探针捕获法和报告基因分析法, 2) 用于蛋白质和核酸分析的96-孔斑点膜。鲁米诺 是一种最古老的和最常用的试剂,在碱性条件下可被过氧化物氧化,同时发光,鲁米诺和过氧化物之间的氧化还原反应需要催化剂,这种催化剂一般为多价金属离子、过氧化物酶如铁、辣根过氧化物酶等,此种方法常用于检测过氧化物、重金属、过氧化物酶的含量,以及由此衍生的检测自由基、进行毒物分析和基于过氧化物酶和葡萄糖氧化酶的分析方法。丫啶酯及衍生物 在碱性条件下可产生瞬时发光,将其作为标记物,已广泛用于免疫分析和分子杂交。

  • RFL-1A/B型超微弱化学发光/生物发光检测仪

    技术参数 1.负高压 * 输出电压: -100~1000V * 稳定度: 0.05% * 输出电流:: ≥5mA 2.放大器系统 * 增益:1×,5×,10×,50× * 滤波器频率:10Hz,20Hz,50Hz,100Hz * 输出漂移: ≤0.5mV * 信号噪声: ≤0.5mV(P-P值,1X) * 输入阻抗: ≥10MΩ 3.积分放大器: * 积分时间: 0.001-10S 4. 信号处理系统: * 系统自动调零 * 增益自动控制 * 采样速率:1-1000次/S 5.系统软件 * 文件管理:文件建立,保存,读取,通讯口选择 * 测量参数管理:测量时间,倍增管高压,增益选择,滤波器频率选择,采样速率选择 * 谱图处理:峰值测量(手动),面积测量(手动),谱图粘贴,谱图打印,数据列表(文本格式) 5.化学发光单元:IFIS-A型多功能化学发光检测器: * 波长范围:300—650nm * 灵敏度:SP1000A/Lm 6.样品分析:Luminol-H2O2-Cr(Ⅲ)体系 * 线性范围:1×10E-11~1×10E-5(g/mL) * 检出限:1.5×10-12g/mL * RSD3%(痕量分析的要求是RSD5% RSD=S/x的平均值) 技术文章 此仪器没有任何技术文章 主要特点 仪器介绍 RFL-1A/B型超微弱化学发光/生物发光检测仪是专用于测量微弱发光信号的测量仪器,仪器带有能量测试和电荷积分测试等两种测量方式,具有非常宽的动态测试范围,适用于各种具有配有光电检测器(如光电倍增管、光电管、光电二极管等)的分析装置,如化学发光分析、荧光分析、火焰分子(原子)发射光谱分析等。本仪器具有两种型号:  RFL-1A型:内置高精度负高压电源和高精度信号放大及信号处理系统及VFD数字显示器。 其中负高压电源为光电倍增管专用,而信号放大器则用于对光电转换后的信号进行放大、滤波,信号处理系统则对被测信号进行相关处理及传递给系统计算机进行分析,VFD显示器则用于显示各种测量参数及信号值。  RFL-1B型:配备有IFIS-A型多功能化学发光检测器,构成超微弱化学发光/生物发光仪。

  • 多孔探测化学发光仪该怎么做?

    各位大侠,我是刚刚接触化学发光仪方面的,想请问一下如何完成多微孔同时探测的功能,是不是需要每个孔一个光电倍增管?光子计数器需要每个倍增管一个么?这种多孔探测的管哪家公司可以做么?谢谢大家了

  • 化学发光检测原理概述(转贴)

    化学发光检测原理概述化学发光作为一种分析工具的吸引之处就在于检测的简单性。化学发光的实质是自身发光,这意味着化学发光的分析测试仪器只需要提供一种可以检测光信号和纪录结果的方法就可以了。自发光检测仪需要一个闭光的样品室和光检测器。最简单的便是相片纸或x-光片,甚至视觉检测器都可以。化学发光检测方法的简单性使得它的应用很简单并且完全可以自动化。但是它的灵敏度又是怎么样的呢?化学发光有如下两个内在的优势:1.绝大多数的样品没有“背景”信号,如它们自身不发光。2.化学发光的检测不是一个比例测试,这是与荧光和吸收或比色测试不同的。在荧光测试中,具有小的Stokes Shift的荧光基团非常难检测。荧光很难从激发波长中分辨出来。另外一个问题是,特别在样品是浑浊的情况下有一部分杂光会进入到检测器。在吸收光测试上,其灵敏度受到限制的根本因素是需要在两个相对较强的信号之间去区分一个较小的差别。需要注意的是检测器对光谱的敏感性近可能接近化学发光的光谱,以得到最大化的灵敏度。一般在自发光仪中的光电倍增管对蓝光有最佳的反应,对红光的末端光谱不太敏感。固态检测器对红光有较好的反应。X-光片广泛用于记录在尼龙膜、纤维素膜或PVDF膜上的化学发光印迹分析。但是我们需要牢记在心的是x-光片仅能够用于检测紫外到蓝光光谱范围内的光信号,虽然有一些特殊的光片对增强的绿光有敏感性。

  • 检测化学发光仪器研发

    我需要一台便携式化学发光检测仪器,构件主要2块,一为动力(泵)系统,一为检测系统,最小体积能做到多大,费用多少,有高手帮忙吗?mail:ylbio@yahoo.com.cn,多谢!

  • 【原创】电化学发光检测

    电化学发光(ECL)是在电极上施加一定的电压使电极反应产物之间或电极反应产物与溶液中某组分进行化学反应而产生的一种光辐射现象。电化学发光与普通化学发光相同之处是二者的发光均由进行能量电子转移反应的组分所产生,而不同之处是电化学发光由电极上施加的电压所引发和控制,普通化学发光是由试剂的混合所引发和控制的。电化学发光与毛细管电泳结合,涉及ECL试剂的加入方式,电泳高压电场的隔离以及ECL的发光效率问题。因为是在电极上发生电化学反应的,所以电泳高压电场会对电化学检测产生较大影响,高压电场不隔离的话容易损坏电化学分析仪。另外,检测部分设计上是毛细管出口必须对准电极表面。电化学发光检测基本包括两大部分。电化学部分和化学发光采集部分。电化学部分一般采用电化学分析仪(国内用上海辰华的较多),化学发光采集大多用中科院生物物理所的BPCL超微弱化学发光分析仪。几年前,国内中科院长春应化所和西安瑞迈仪器公司就已共同研制出了商品化的CE-ECL分析仪。先写这么多吧,开始实验了,另外一个问题:怎么今天不能插入图片?

  • 【资料】化学发光的瓶颈分析

    [size=4]化学发光法的灵敏度很高,超过一般的检测方法。其不足支出在于选择性较差,因此常与分离工具结合(HPLC, CE),能发挥很好的作用,但是联用技术的兼容性问题有很多需要考虑的地方,限制了该方法在实际中的应用。以下内容是拷自我以前的论文,主要讨论HPLC-CL联用技术需要注意的地方,供参考。要获得好的分离和灵敏的检测,往往需要综合考虑各方面的因素:(1)流动相的选择应与化学发光检侧系统相兼容,选择的溶剂既不应增加背景,也不应熄灭化学发光信号;此外,还要考虑发光试剂在其中的溶解度,以避免生成沉淀。(2)缓冲溶液及其pH值的选择。由于pH值对化学发光反应的发光强度ICL和寿命影响很大,选择合适的pH值十分重要,加缓冲溶液使流动相和反应试液均得到缓冲的方法,可控制一定的pH值;为适应不同的pH值范围,应选用合适的化学发光试剂。(3)选择适宜的流速,以保证分离完全并能检测到强的发光信号。(4)发光试剂浓度的选择应有利于提高信噪比(S/N)。一般,浓度大时可获得较大的发光强度,但浓度大,有时会形成沉淀,且增加干扰(背景噪声)。(5)所用试剂应纯化,以减小化学发光的背景。(6)输液泵的脉动会引起试液浓度的局部变化,提高背景噪声,故要保证尽可能均匀、恒定、无脉动流速输液。使用注射泵,但其容量有限,实际上多用往复泵,后接阻尼器以减小脉动。(7)化学发光检测器的设计应能检测到最大的ICL,死体积要小,且价格便宜、仪器简单、易于操作,分析速度快。为此,应使用短的混合反应管和高效光收集装置(如高质量光电倍增管及光子计数器的使用),并使流动池F尽量靠近光电倍增管。目前,微孔柱HPLC的应用日益广泛。在微孔柱的HPLC-CL分析中,流动相的流速相对于化学发光试剂的加入速度低很多,使流动相对反应池中最终的化学发光反应的影响很小,从而可使化学发光检测和HPLC分离有可能在各自的最佳条件下进行。这一点对梯度洗脱过程中的化学发光检测尤为重要。在使用化学发光检测时,可以选用反应速度快的发光体系,使柱后流出的分析物在没有明显扩散之前就完成了化学发光反应,避免了大体积池对色谱峰的展宽。微孔柱HPLC与快速灵敏的化学发光反应结合,为分离检测提供了一个完美的统一。为简化反应系统,可将反应试剂固定在固相担体上,装入短柱内,样品液流过短柱时发生反应。如将TCPO固体和固定化荧光试剂填装在短柱中,并与化学发光流动检测池相联,当流动相带着样品流过固相化学发光反应器及流动池时,即可测得化学发光信号。这种液固反应体系的优点是简单、稳定、不需附加输液泵等装置;缺点是柱寿命有限。将这种固相化学发光反应器与高效、高选择性的固定化酶反应器或光化学反应器相结合,特别适合于生化物质的测定。[/size]

  • 化学发光免疫分析

    化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度,但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来,许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中,在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法,由于这种方法具有灵敏度高,特异性强,精密度好,线性范围宽,仪器设备简单,试剂价格低廉,方法稳定、快速等优点,已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。  化学发光免疫分析包括三大类型:即标记化学发光物质的化学发光免疫分析;标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。  (一) 原理  尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光,但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合,建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里,酶的活性是基于下列发光反应进行检测的:  HRP         luminol+H2O2───→产物+hν                 产 物                  ↑       Eosin+H2O2 ──────┘               HRP 二) 操作步骤  1. 包被抗体 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚,再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体,同时设空白对照,置4℃过夜。  2. 洗涤 用抽滤针头吸干管内液体,加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次,每次加2ml,放置3~5min,用抽滤针头吸干管内液体。  3. 加待检血清和阳性标准品 用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。  4. 洗涤 同2。  5. 加酶标抗体  用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体,每管加入300μl,空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。  6. 洗涤 同2。  7. 化学发光测定 给每管加入300μl底物溶液,置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中,并置于测量位置,加入300μl 5.0×10-4M luminol。记录仪记录化学发光强度。  8. 同时用ELISA方法进行对照,结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。  结果判定(1) 定性 按下列公式判别阴、阳性:          L样品-L空白     ┌≥2.1 为阳性   S/N = ──────── = 商│       L阴性对照-L空白    └<2.1 为阴性   (2) 定量 以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标,不同稀释倍数为横坐标,作出剂量反应曲线(标准曲线),犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。

  • 【求助】化学发光检测技术在兽药残留检测方面发展情况如何

    各位前辈 我是一个刚入门的新手最近搜集了一些化学发光检测仪发现基本都是应用于人医领域的哪位前辈对化学发光检测技术在兽药残留检测方面了解的比较多(如:牛奶 猪肉 鸡肉 水产 饲料等)有没有一些可以用于兽药残留检测的化学发光检测仪器先谢谢诸位前辈了

  • 【转帖】与国际主流免疫诊断技术接轨的磁微粒化学发光技术

    我国检验医学技术的发展长期落后于世界先进水平,这极大地阻碍了我国临床检验和诊断产品的产业化。随着国家的改革开放,引进外资、引进技术,加快了诊断试剂产业化进程,提高了临床应用及诊断水平。但引进的往往是较落后的非主流技术和产品,而关键技术依然被少数发达国家垄断着。在上世纪90年代初期,国内诊断试剂的厂家虽然众多,可是产品品种单一,造成市场竞争白热化,产品质量参差不齐。由于低水平的产品重复研发,国内诊断产品企业在基础技术方面投入较少,具有自己的专利和自主知识产权的企业凤毛麟角,因此国内诊断试剂产品在与进口产品的竞争中远远处于劣势。 在20世纪90年代开始推广的磁微粒分离酶联定量检测分析克服了普通微孔板酶联免疫分析(ELISA)的缺点,成为全球广泛应用在磁微粒化学发光免疫分析的基础技术。1999年我国引进了磁微粒分离酶联定量检测分析的先进生产技术,通过引进、消化吸收,在此基础上自行研制、开发出磁微粒分离化学发光免疫分析试剂。项目被列为了国家“十一五”国家“863”计划重点项目,得到国家的全方位的支持。使得我国免疫试剂产品的再创新和自主创新能力进一步提高,形成了拥有自主知识产权的体外免疫诊断试剂,在方法学上的先进程度和产品质量均接近国际先进水平。它克服了放射免疫分析的高污染、有效期短和普通微孔板酶联免疫分析精密度差、灵敏度差的缺点,使用碱性磷酸酶——APS-5化学发光系统、磁微粒分离系统、独特的蛋白质保护技术,使得本项目方法的灵敏度、精密度、稳定性、有效期、安全性、环保性能大大提高。 化学发光免疫分析技术是继放射免疫技术、酶免技术、荧光免疫技术和时间分辨荧光免疫技术之后发展的一项新兴免疫分析测定技术。化学发光具有荧光的灵敏性,同时不需要激发光,避免了荧光分析中激发光、杂散光等背景荧光的影响,有很高的灵敏度,避免了放射免疫分析给操作者带来的健康隐患和对环境的污染。此项技术在体外免疫诊断试剂上的应用是先进的、科学的,可以说是非常理想的检测方法,也是国际主流技术之一。目前,国家已将使用该技术的部分产品列入行业标准中并推广使用。 化学发光免疫分析技术拥有众多的优点和特性,是其他方法不可代替的。目前在市场上的认可度也明显提高,已经逐步占据主导地位。我国掌握的磁微粒化学发光分析技术与国际主流的技术相当,但在临床诊断和应用上与国外进口产品还有较大的差距,如产品数量少,自动化程度低等。因此,重视产业化进程,提倡拥有自主知识产权,加强配套全自动化仪器的研发,加快与国际主流诊断技术接轨,已成为国内体外免疫诊断产品行业发展的迫切需求,具有重要的战略意义。(转自:http://www.fswenxiu.com/)

  • 荧光和化学发光检测仪

    技术参数 酶标板类型 1、6、12、24、48、96和384孔酶标板(包括Terasaki板) 也可以为特定的板型编程 。最大尺寸:90mm×134mm×25mm 检测速率 96孔酶标板作动力学研究需最低时间为15秒 摇床 轨迹摇床,转速60-1200rpm,直径1-50mm 进样器 1-3个加样器 处理体积 5-1000ul ,5ul增量 进样速度 25秒/板(96孔板,5ul/孔) 孵育温度范围 室温+3℃—45℃ 光学系统 光源 石英卤素灯 检测器 PMT 激发波长 320nm—700nm 发射波长 360nm—800nm 滤器 高质量杂波滤器 激发光滤器 320nm,355nm,390nm,444nm,485nm,530nm,544nm,584nm 发射光滤器 405nm,460nm,485nm,510nm,527nm,538nm,555nm,590nm,612nm,620nm (其它过滤器可定制) 理论灵敏度 0.01 pmol Flurescein/孔,黑色96孔Comiplate 动力学范围 5 数量级(5 decades) -------------------------------------------------------------------------------- 技术文章此仪器没有任何技术文章 -------------------------------------------------------------------------------- 主要特点用户友好,操作简易的软件界面 市场上占领先地位的自动进样系统利于快速动力学检测 读取从1孔到384孔多种板型的酶标板 从板上、下两个方向读取荧光数据 内置温育功能,便于细胞和酶动力学研究 内置可调速轨迹摇床混匀样品 可与自动机械臂联用,处理高通量样品 高性能的光学系统 Floskan Ascent系列荧光分析的光学系统通过反射镜和棱镜系统,能产生高度会聚的光束,消除交叉影响。两种可选光束系统用于读取1-96孔板和384孔板。一般光束直径为3mm,狭窄光束直径为1.5mm.系统可以采取从板上下两方向读取数据。对细胞生物学应用,从板底部读取数据能更贴近细胞,提供更高的精度。从上部读取数据能减少交叉影响,降低背景信号,提高信噪比。 独特的进样系统 对Ca2+检测、酶动力学 分析和其它对时间要求严格的研究,系统可以配置多至3个自动进样器。自动进样器能精确加入试剂,可调范围为5-1000ul。 易与自动机械臂联用 Floskan Ascent系列荧光分析仪能多种自动机械臂联用。可选配酶标板托架便于与自动机械臂联用。Ascent软件具有与自动和HIS/LIMS系统联用的功能。预先设定的分析过程可以远距离控制,Ascent软件能够实现数据自动输入/输出。 功能强大的软件 Ascent软件为荧光应用专门设计,它能够根据研究的需要设定运行程序,也可以更改内设的固定程序。例如以下两个典型的实验: 检测细胞内Ca2+浓度 为满足Ca2+浓度检测对时间优化的严格要求,以在独特的进样器,系统能够加样和检测同时进行。Ascent软件便于灵活的分析设置,允许在加入活性物质和读取实际数据前检测荧光基线(每孔一次)。每块板均能获得对于最大和最小钙信号,所有的数据均放在同一个工作表内以进行数据分析和报告。 细胞增殖和细胞毒性分析 Floskan Ascent系列荧光分析仪能够检测置于多种型号的培养板中的细胞培养物—从板的上方或下方读取数据。每个读取点可以方便地选定或删除。为获得最佳的结果而不影响细胞,信号读取速率可以根据板的类型和溶液的粘度进行调整。在细胞毒性测试中,系统计算Survival Index以获得每个病人的灵敏度分布图。 Floroskan Ascent系列荧光分析仪应用领域: 细胞内Ca2+检测(Intracellular Ca2+) 细胞增殖 (Cell proliferation) 细胞毒性 (Cytotoxicity) 多药物耐药性 (Multi-drug resisent) 细胞粘附 (Cell adhesion) DNA定量(DNA quantitatilon) 报告基因分析(Reporter gene assay) 杂交分析(Hybridization assay) 免疫分析(Immunoassays) 酶活性分析(Enzyme activity) 细菌定量(Bacterial quantitation) 细胞溶解作用(Phagocytosis)

  • 【分享】电化学发光免疫检测原理动态展示

    电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290841_24973_1636364_3.gif[/img]

  • 化学发光联用技术-流动注射化学发光

    FIA-CL检测系统 流动注射分析是Ruzicka和Hansen于1975年首先提出的一种创新技术,这种新技术的发展摆脱了溶液化学分析平衡理论的束缚,可在物理和化学不平衡状态下进行测定。它适应性广泛,分析效率高,试样和试剂消耗量少,检测精密度高,设备简单。该技术发展非常迅速,已被广泛应用于很多分析领域。流动注射分析技术能使样品和试剂以高度重现的方式混合,从混合到检测的时间间隔可以严格控制。同时,由于计算机控制和大规模集成电路的出现,FIA可以实现自动化分析。而一般的化学发光是快速反应,在溶液混合的瞬间就产生发光信号,并且在几秒内发光强度达到峰值。要达到精度较好的测量结果,就必须严格保持测量过程中的物理性质和化学性质能很好地重现。在这方面,流动注射为化学发光分析提供了一个很好的手段。在流动过程中,所有的试验参数如试剂体积、保留时间、温度、试剂的混合时间和方式等都能严格控制并重复操作。因此,这种方法克服了化学发光分析法重现性差、操作费时、不便于实现自动化等缺点。流动注射和化学发光分析的结合,使之成为一种快速、有效的痕量分析技术,被广泛应用于水质检测、土壤样品分析、农业和环境监测、科研与教学、发酵过程监测、药物研究、禁药检测、血液分析、食品和饮料、分光光度分析、火焰光度分析、质谱分析、原子光谱分析、荧光分析、生物化学分析等等。 流动注射化学发光系统一般包括两个部分。一部分是流动体系部分,它控制发光试剂的流速及其混合方式;另外一部分是化学发光检测部分,它将检测到的发光反应发出的光转变成电信号,并由记录仪记录下其发光响应值。常见的流动注射化学发光检测器的装置示意图如图1-1a所示: 图1-1 FIA-CL 联用装置示意图Fig. 1-1 Schematic diagram of FIA-CL detectionP:蠕动泵;V:进样阀;C:流动池;D:检测器;R:记录仪; W:废液 一般优化的流路有三通路、四通路和多通路等形式,各发光试剂以某一恒定流速经蠕动泵驱动,通过进样阀将待测组分与发光试剂混合, 在流动池里面发生化学发光反应, 流通池亦即反应池内的光信号由光电倍增管转换并放大,最后由记录仪记录。由于该检测法不需要光源,消除了光源不稳定的杂散光的干扰, 另外直接检测发光强度,因此灵敏度很高。流动池中的反应可以是不完全反应,只要其中的试剂分散和反应程度可以高度重现就符合试验要求。试样和试剂的分散是所有FIA方法的核心问题,通常用分散系数D来描述试样的分散状态。D定义为:决定分析读数的流体微元组分在扩散过程发生前(C0)与发生后(Cmax)的浓度比值,即D=C0/Cmax 。FIA体系中的分散过程是许多不同因素 (包括流速、管道长度、管径、试样体积与检测方式等)的复杂函数。主要影响有:①试样的进样体积越大,D越小;②反应器管长度越大,D越大;③管路集合形状越复杂,试样在其中流动方向改变越多,D越大;如:直管反应器的D最小,盘管与编织管反应器的D较大。④流速对D的影响与反应器的管径大小有关,关系较复杂。在此装置中,流动池的设计是个关键。由于直管反应器的分散系数较小,试剂分散度不够,所得的发光强度值较弱。因此,在实际中,一般采用如图1-1b所示的盘管式反应器。一般来说,反应器的体积应尽可能大,其发光截面尽可能大,且同光电倍增管尽可能靠近。根据实际分析情况,还可以将萃取渗析、交换柱及填充柱引入FIA系统,使FIA-CL应用更加广泛。

  • 免疫化学发光原理

    一)原理  化学发光免疫测定属于标记抗体技术的一种,它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原,当标记抗体或标记抗原与相应抗原或抗体结合后,发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用,发生氧化还原反应,反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光,最后用发光光度计进行检测。    (二)标记物  1.发光剂直接标记 常用鲁米诺及其衍生物等,它们属环肼类化合物,能与很多氧化物如氧、次氯酸、磺、过氧化物等反应而发光。因此可直接将鲁米诺或其衍生物标记抗体或抗原进行CLIA。这类方法特异性强,但往往会因交联影响发光物特性,降低敏感性。  2.发光催化酶标记 常用辣根过氧化物酶、丙酮酸激酶、葡萄糖氧化酶等标记抗体或抗原。与酶标抗体测定基本相同,差别在于CLIA是用发光性底物指示反应,有人称为发光酶免疫测定。  3. 标记物产物参与反应 标记物不直接催化发光反应,而其反应产物能使反应系统发光。如用草酸类标记抗体或标记抗原,在有H2O2作用下,生成二噁二酮,后者可使红荧稀(Rubrene)激化发光。  (三)应用  CLIA特异性强、敏感性高,可检测到10-5mol/L的抗原量。快速,一般几十分钟或1-3小时内完成。操作简便,可进行固相和均相分析。试验重复性好,试剂易标准化和商品化。目前已用于多种药物、激素、病原微生物及其代谢产物、抗体及其他生物活性物质的测定。

  • 大家有知道化学发光免疫分析仪的么?

    化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。简介化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。   化学发光免疫分析仪器中核心探测器件为光电倍增管(PMT),由单光子检测并传输至放大器,并加高压电流放大,放大器将模拟电流转化为数字电流,数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算,得出临床结果。 分类化学发光标记免疫分析法  化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物 , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 发光酶免疫分析法  从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) ,它们有各自的发光底物。 发光试剂  HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。   早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) ,但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH2H2O 2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。Kodak Am erliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。 增强发光酶  增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA )在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号,并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性。在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂,混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。Am erliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20m in, 试剂盒有甲状腺功能检测的   促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。   ALP标记的CLEIA所用底物为环1, 22二氧乙烷衍生物, 这是一类很有前途的发光底物 ,用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的基团——金刚烷基, 其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团,在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。最常使用的底物是AM PPD , 中文名为: 32(2’2螺金刚烷) 242甲氧基242(3’2 磷酰氧基) 2苯基21, 22环二氧乙烷)。在碱性磷酸酶(AL P) 作用下,磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基, 得到一个中等稳定的中间体AM PD (半寿期为2~ 30m in) ,此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子, 当其回到基态时产生470nm 的光,可持续几十分钟。AM PPD 为磷酸酯酶的直接化学发光底物,可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物。可检测到碱性磷酸酯酶的浓度为10- 15mol/L 。

  • 【分享】微流控芯片上的电化学发光

    长春应化所电分析重点实验室主任 杨秀荣研究员做的,有关于微流控芯片电泳以及电化学和电化学发光检测手段的实现,很不错的![img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=25658]微流控芯片上的电化学发光.rar[/url]

  • 生物试验中化学发光的标记

    吖啶酯以及相关化合物通过简单的加入氢氧化钠以及过氧化氢就可以使吖啶酯标记的抗原或抗体发光,这种抗原或抗体采用一种活性标记物[2',6'-dimethyl-4'-(N-succinimidyloxycarbonyl) phenyl 10-methylacridinium-9-carboxylate]来获得。发光过程非常短暂,只是快速的一闪,持续时间小于5s。这么短暂的发光过程给反应的起始与测量带来了一定的限制(Weeks et al.1983,Law et al.1989)。通常是将试剂直接注入放在光度计暗仓内光探测器前面的试管内来检测发光。吖啶酯以及氨甲酰吖啶类似物[acridinium-9-(N-sulronyl) carboxamide](Kinkel et al.1989,Mattingly 1991)是用于免疫分析的主要化学发光标记物(可从Assay Designs lnc,Athens,GA;Behringwerke AG,Marburg,Germany;Ciba Coming Diagnostics,Medfield,MA以及Molecular Light Technology Research Ltd,Cardiff,UK等处获得)。这类标记的检测的最小量为~0.5attomol(0.5X10-18mol)。基于杂交保护的非分离DNA探针分析(nonseparation DNA probe assay)方法已被设计出来(Arnold et al.1989)。这种类型的分析无需将结合与未结合的标记物分开,因而分析可方便的一步完成。这种杂交保护分析利用已与互补DNA杂交的吖啶酯标记探针与溶液中游离探针之间水解速率相差百万倍的特性,在pH7.6的硼酸缓冲液中破坏游离探针的化学发光特性,从而使水解后的化学发光仅仅来源于已杂交的标记探针(可从Gen-Probe,San Diego,CA获得)。 鲁米诺及其类似物鲁米诺(Luminol)是第一个用于免疫学分析标记的化学发光化合物(Schroeder et al.1978)。在合适的催化剂(辣根过氧化物酶、微过氧化物酶(microperoxidase)、铁氰化物)存在的情况下,通过加入氧化剂(如:过氧化氢)可导致发光。然而,通过鲁米诺的5-氨基进行标记会使发光量减少10倍。异鲁米诺,一种鲁米诺6氨基异构体,其发光效率较鲁米诺低(量子产额0.1%),但当通过第6位进行标记时可使发光量增加10倍。因而,这种化合物以及其氨基取代类似物,比如ABEI(N-(4-aminobutyl)-N-ethylisoluminol),已在免疫分析应用中成为最受欢迎的标记物(Kohen et al.1979;Pazzagli et al.1982)。吡啶哒嗪(Pyridopyridazines)代表另一类化学发光化合物。早期的数据显示这些化合物,尤其是8-氨基-5-氯-7-苯基和8-羟基-7苯基衍生物,可作为检测过氧化物酶标记的标记和协同底物(co-substrates)。与鲁米诺相比,这类化合物具有很强的化学发光特性(约为50倍)(Masuya et al.1992)。 碱性磷酸酶磷酸金刚烷基1,2-二氧杂环丁烷(如:AMPPD;disodium 3-(4-methoxyspiro[1,2-dioxetane-3,2'-tricyclo[3.3.13,7]decan]-4-yl)-phenylphosphate)以及5-位取代类似物(如:5-choro:CSPD;可从Tropix Inc获得)已成为碱性磷酸酶标记的最为广泛使用的化学发光底物(Bronstein et al.1989,1990,1991;Schaap et al.1989)。这种酶的检测极限是1 zeptomole(10-21摩尔)并且其发光持续时间超长(1h),因而特别适合与基于膜的分析。这个反应的发光强度可被尼龙膜表面以及特定的多聚物增强,如:聚氯苄(苄基二甲基铵)乙烯(polyvinylbenzyl(benzyldimethylammonium)chloride)。对尼龙膜来说,这种增强作用是用于其疏水性基团对去磷酸化的反应中间体的螯合作用;从而稳定和减少中间体的非发光性降解。碱性磷酸酶标记的化学发光分析目前被广泛地用于印迹试验以及DNA序列测定(Beck and Koster 1990,Tizard et al.1990)。 beta-半乳糖苷酶AMPGD(Adamantyl 1,2-dioxetane aryl galactoside)做为这种酶的底物现已越来越流行。这种酶从芳香环的第3位裂解半乳糖苷基团产生一种苯氧化物中间体,这种中间体的降解可导致发光。对这种酶采用这种分析方法的检测极限为30zeptomol。 辣根过氧化物酶鲁米诺以及其他环状二酰基酰肼(cyclic diacylhydrazides)化合物是辣根过氧化物酶的化学发光协同底物。采用鲁米诺、过氧化氢,以及一种增效剂(如:4-碘苯酚或4-羟基肉桂酸),辣根过氧化物酶的碱性同工酶可被检测出的最小量96h)。 葡萄糖氧化酶目前已经发展了几种用于葡萄糖氧化酶的法学发光分析。异鲁米诺或鲁米诺在微过氧化物酶催化剂存在的情况下可用于分析葡萄糖氧化酶与葡萄糖反应所产生的过氧化物(Sekiya et al.1991);另一种方法是采用化学发光荧光基团致敏的bis(2,4,6-trichlorophenyl)oxalate反应来检测(Arakawa et al.1982)。 商业试剂、试剂盒及光度计对于可获得的化学发光试剂和试剂盒以及用于发光测定的光度计的全面的评述已有发表(请参见Stanley 1992,1993)。一系列关于化学发光在基础及应用领域的当前进展的资料汇编也同样可以得到(请参见Kricka and Stanley 1992,Kricka et al.1993,Wilkinson 1998)。化学发光可采用一系列的检测设备来进行检测,包括光电倍增管(采用光子计数或灵敏度较低的光子流模式(photon current mode))、硅光电二级管、CCD照相(Wick 1989)摄影或胶片摄影(Kricka and Thorpe 1986)。CCD照相由于是检测二维光源(如膜以及96孔微板)的方便且灵敏的方法而被广泛使用。除此以外,它还能容易的监测发光动力学、可通过图像增强以及背景减影来改善结果质量。

  • 国际主流化学发光免疫分析仪的原理技术及特点

    化学发光放大技术同样利用抗原一抗体反应原理,将酶或其他非放射性标记物标记于抗原或抗体,然后与已知抗原或抗体反应,标记的酶使反应底物进行发光,经光电倍增管测量后可得到被测样本的每秒钟发光计数CPS,再根据内置的标准曲线将CPS转换为样本的浓度值"由于这项技术的应用,使抗原一抗体的反应时间缩短,特异性程度和灵敏度得到提高,同时辅以单克隆技术的应用,使整个反应的全自动化实现成为可能,并一改过去依赖于手工加样,再交由仪器测量的半自动化技术的局面,也是近十年来免疫检验技术的一个飞跃。 化学发光免疫分析系统由以下子系统构成:反应杯传送系统,测试包被珠装载系统,样本装载系统,条码读取系统,试剂装载系统,加样系统,温育系统,离心清洗系统,发光计数测量系统,计算机控制系统组成。1.微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA) 下面以双抗体夹心法为例介绍微粒子捕捉酶免疫分析技术:已包被了抗体的塑料微珠试剂中,加入待测标本后,经温育,再加入碱性磷酸酶标记的抗体!形成抗体一抗原一酶标记抗体复合物"然后将其转移到玻璃纤维柱上,用缓冲液洗涤,没有结合的抗原!酶标抗体被洗掉,结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方"这时再加入底物,4一甲基伞型酣磷酸盐,酶标抗体上的碱性磷酸酶将4一甲基型酣磷酸盐分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣,在365nm激发光的照射下,发出448nm的荧光,经过荧光读数仪的记录、放大,计算出所测物质的含量"。2.荧光偏振免疫分析技术(FPIA) 这是一种均相荧光免疫分析法,主要用于测定小分子量物质,如药物浓度测定"原理是:标记在小分子抗原上的荧光素经485nm的激发偏振光照射后,吸收光能,越入激发状态,激发状态的荧光素不稳定,很快以发出光子的形式释放能量而还原"发射出的光子经过偏振仪形成525~55Onm的偏振光,这一偏振光的强度与荧光素受激发时分子转动的速度呈反比,游离的荧光素标记抗原,分子小,转动速度快,激发后发射的光子散向四面八方,因此通向偏振仪的光信号很弱,而与抗体大分子结合的荧光素标记抗原,因分子大,分子的转动慢,激发后产生的荧光比较集中,因此偏振光信号比未结合时强得多",在测定过程中待测抗原小分子!荧光标记抗原小分子和特异性抗体大分子同时加入到一反应杯中,经过温育,待测抗原和荧光标记抗原竞争性地与抗体结合,待测抗原越少,与抗体竞争结合的量越少,而荧光标记抗原与抗体结合量就越多,当激发光照射时,荧光偏振的程度与荧光标记物分子转动的速度成反比,而荧光标记的小分子抗原与大分子抗体结合后,其分子的转动速度减慢,因此荧光偏振信号强"结果是待测抗原的浓度低,可以通过计算获得其含量。3.利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合此方法以叮咤酶为发光的标记物,固相载体为极细小的磁性颗粒"其测定原理与放射免疫和酶联免疫中的双抗体夹心法和竞争结合法相似。4.采用酶联免疫技术!生物素亲和素技术和增强化学发光技术此方法是用辣根过氧化物酶(日RP)标记抗原或抗体!以子弹头型塑料小孔管为固相载体,鲁米诺为化学发光剂,并加入化学发光增强剂,可使化学发光强度增强,时间延长而且稳定。 在链霉亲和素包被的子弹头型塑料小孔管中,加入生物素标记的特异性抗体和待测标本,经过37e温育,链霉亲和素与生物素结合,特异性抗体与标本中的抗原结合,形成链霉亲和素一生物素一抗体一抗原复合物,经过洗涤,将多余的标本和生物素标记抗体除去,加入辣根过氧化物酶标记抗体,经37e温育,形成链霉亲和素一生物素一抗体一抗原一酶标抗体复合物,并固定在小孔管壁上,加入氧化剂日202,增强化学发光剂和鲁米诺,这时结合在固相载体上的辣根过氧化物酶在强氧化剂的作用下将增强化学发光剂亚铁原吟琳激活,接着它催化并激活鲁米诺发光,这种化学发光强渡比单独鲁米诺发光强,持续时间长,而且稳定,易于测定。鲁米诺发光强度经光量子记录系统记录,经计算从标准曲线上得出待测抗原含量。

  • 重发化学发光与生物发光(转载)

    化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象,可以分为直接发光和间接发光。直接发光是最简单的化学发光反应,有两个关键步骤组成:即激发和辐射。如A、B两种物质发生化学反应生成C物质,反应释放的能量被C物质的分子吸收并跃迁至激发态C*,处于激发的C*在回到基态的过程中产生光辐射。这里C*是发光体,此过程中由于C直接参与反应,故称直接化学发光。间接发光又称能量转移化学发光,它主要由三个步骤组成:首先反应物A和B反应生成激发态中间体C*(能量给予体);当C*分解时释放出能量转移给F(能量接受体),使F被激发而跃迁至激发态F*;最后,当F*跃迁回基态时,产生发光。 一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足以下条件: 第一是该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光 第二是要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态 第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。 化学发光分析测定的物质可以分为三类:第一类物质是化学发光反应中的反应物;第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂;第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式用来测定其他物质,进一步扩大化学发光分析的应用范围。 化学发光反应的发光类型通常分为闪光型(flash type)和辉光型(glow type)两种。闪光型发光时间很短,只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型,发光时间从几分钟到几十分钟,或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量,必须配以全自动化的加样及测量仪器。辉光型样品的测量可以使用通用型仪器,也可以配有全自动化仪器。本产品针对辉光型化学发光反应进行检测。 生物发光(Bioluminescence)是化学发光中的一类,特指在生物体内通过化学反应产生的发光现象,主要由酶来催化产生的。如萤火虫产生的。现在我们实验中经常用到的荧光素酶报告基因系统,这些皆为生物发光。 生物发光和化学发光是自然界中一种普遍现象。至今人们已知能发光的生物,种类繁多,从低等的细菌到高等的发光鱼类,从植物幼苗、植物枝叶到人体表面经络穴位、脑、肝、血清等,其发光的主要物质几乎都是由莹光素酶、莹光素及其辅助回子所组成。随着对生物发光机制的深入研究,一些生物体的发光体系已经初步搞清并用这些体系去分析生物体和化学中的一写微量物质。生物发光分析法渐渐地被引入医学领域,诸如通过莹火虫莹光素酶发光体系测量细菌中的AT已用以确定尿路感染中的细菌数,以发光细菌的发光强度为指标去定量抗菌素的效价,标定环境的污染状况等。因此,对这一领域的研究有着重大的经济和社会效益。 工业方面:发酵工业中测量主物量,控制发酵条件;油脂、食品工业中测量油脂、食品的氧化变质程度;橡胶、塑料工业,测量产品的老化程度,检测掺入抗氧化原料的效果,医药工业,检测抗菌的效价。 农业方面:根据植物幼苗的发光强度,判断植物的抗寒性、抗热性。抗盐性及农作物营养发育生长状况等,为农业育种和栽培技术提供依据。 药学方面:测量吞噬细胞的吞噬作用相伴随的化学发光强度和使用发光免疫分析法,检查肌体的免疫功能,了解体内微量激素、微量元素、维生素及药物的含量。测量体液中的AT已判断肌体的能量代谢状况,尿路感染的程度,测量血清(血浆)的化学发光强度。间接地判断疾病的发生、发展和程度,鉴别诊断某些病思。测量自由基的反应,为抗衰老、抗肿瘤、抗辐射筛选有效的自由基药物。 环保方面:用细菌、动物、植物及化学发光体系的发光指标监测环境污染。由于发光测量具有灵敏度高、特异性强、稳定性好,反应速度快、使用方便等优点。发光分析技术的研究和应用必将在免疫学、微生物学、生物化学、临床检验、毒理学及医学、农业、工业。环保科学等领域得到广泛应用,为了促进发光分析技术的发展,我厂为社会提供高灵敏、高稳定度、线性范围宽、应用面广、有计算机控制及自动作图、自动数据处理、自动打印结果的8HO一C型全自动生物化学发光测量仪。为生物、化学发光及超微弱发光的检测提供了有效的手段,对发光分析技术的研究和应用,将作出一定的贡献。

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