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自动蛋白质印迹定量分析仪

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自动蛋白质印迹定量分析仪相关的资讯

  • 蛋白质印迹实验具体操作步骤
    蛋白质印迹实验具体操作步骤 蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后,在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上,经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合,经洗涤后,再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合,进一步洗涤后,通过放射自显影或原位酶反应来确定抗原-抗体-抗抗体复合物在滤膜上的位置和丰度。 【蛋白质印迹实验所需试剂】 1.IgG 标准品 2.羊抗人辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG 抗体 3.转移buffer:Tris 3.03g,Gly14.4g,甲醇200ml,加三蒸水至 1000ml充分溶解,4℃冰箱贮存。 4.Tris buffer(TBS):Tris 2.42g,NaCl 29.2g,溶于600ml三蒸水,再用1N HCl调至pH7.5,然后补加三蒸水至1000ml. 5.漂洗液(TTBS):TBS液500ml,加 Tween20 250ul. 6.封闭液:5%脱脂奶粉。 7.抗体buffer:1.5g BSA溶于50ml TTBS. 8.显色液DAB(3.3-diaminobenzidine,3.3-二氨基联苯胺)配制:5mg DAB溶于10ml 柠檬酸buffer(0.01mol/L 柠檬酸2.6ml,0.02 mol/L Na2HPO4 17.39ml),加30% H2O2 10 &mu l(临用时现配)。 9.脱色液:甲醇250ml,冰醋酸100ml,加蒸馏 水至1000ml. 10.氨基黑染色液(0.1%氨基黑 -10B):0.2g 氨基黑-10B 溶于200ml 脱色液中,充分搅拌溶解,滤纸 过滤。 【蛋白质印迹实验操作步骤】 一、样品的SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 按实验四操作步骤进行。加样时,注意在同一块胶上按顺序做一份重复点样,以备电泳结束时,一份用于免疫鉴定,一份用于蛋白染色显带,以利相互对比,分析实验结果。 二、转移印迹 1.转移前准备:将滤纸,硝酸纤维素膜(NC)剪成与胶同样大小,NC膜浸入蒸馏 水中 10-20min 后浸入转移buffer中平衡30min . 2.凝胶平衡:将电泳后的SDS -PAGE胶板置于转移buffer 中平衡 30-60min. 3.按图操作:逐层铺平,各层之间勿留有气泡和皱折。 4.开始转移,连接正负极,盖好盖子,接上电源,恒流 0.8mA/cm,室温下转移1h,转移后的凝胶再用氨基黑10B染色液染色20min ,然后脱色检测转移效果。 三、免疫染色 1.转移后的NC膜于5%脱脂奶粉中封闭,4℃过夜。 2.TBS洗膜1-2次,10min/次。 3.加HRP标记的抗体,室温1h . 4.TBS 洗3次,10min/次。 5.NC膜再转入DAB显色液中,置暗处反应,待显色反应达到最佳程度时,立即用三蒸水洗涤终止反应。
  • 大化所高通量多重蛋白质组定量分析方法研究获进展
    近日,中科院大连化学物理研究所王方军博士、邹汉法研究员等人在高通量多重蛋白质组定量分析方法研究方面取得新进展,发展了一级质谱(MS1)谱图中六种不同蛋白质样品同时规模化定量分析的同位素标记方法,并将该方法应用于细胞蛋白质合成-降解周转更新分析,分析通量是常规同位素标记方法的三倍,研究成果发表在自然出版社新创立的综合性刊物《科学报告》(Scientific Reports, 2013, 3, 1827. doi: 10.1038/srep01827)上。   基于一级质谱(MS1)的蛋白质组学定量分析由于定量精度高,是现今蛋白质组学定量分析中应用最为广泛的分析技术。由于同位素标记的限制,现有的方法最多可以在一次液相色谱-质谱联用分析中定量三种不同的蛋白质样品,极大限制了蛋白质组学定量分析的通量。王方军博士、邹汉法研究员等人将体内氨基酸同位素标记方法与体外二甲基化同位素标记方法进行有机组合,实现了六种不同蛋白质样品的差异标记并在单次实验中实现了相对定量分析。该六重同位素标记策略还可以应用于细胞中蛋白质的合成及降解速率的高通量分析,成功测定了HeLa细胞中1365个蛋白质的合成-降解周转更新时间。此外,该工作中使用的基于MS1六重蛋白质组学定量及蛋白质周转分析软件系统也由我所自主开发,是国际上首个可以同时定量六个不同蛋白质样品的软件系统。 Quant-ArMone 六重蛋白质组学定量及蛋白质周转分析软件示意图 HeLa细胞内蛋白质降解动态拟合曲线示例
  • 安捷伦与AFG合作开发蛋白质定量分析方法
    6月25日,安捷伦科技公司和Anderson Forschung Group LLC (AFG)表示,将合作开发多肽定量分析方法,旨在加快蛋白质生物标志物的开发和验证速度。   在合作中,AFG将利用其稳定同位素标准和用抗肽抗体提取(SISCAPA)技术,与安捷伦的1200系列HPLC-芯片和6400系列三重串联四极杆质谱仪(MS)相结合。用这种组合开发测定复杂样品(如,血浆)酶解产物中多种多肽含量的方法。其成果将使双方受益,财务细节尚未披露。AFG首席执行官Leigh Anderson表示:候选生物标志物的SISCAPA分析可以大大受益于安捷伦平台的重现性和灵敏度,我们期待着对这一组合进行优化。   据了解,Agilent 1200系列HPLC-Chip/MS系统是一个在聚合物芯片上集成了液相色谱柱、连接毛细管和纳流喷雾喷射器的微流控平台,即使样品载入量很小,也可以提供无与伦比的色谱性能。信用卡大小的装置插入安捷伦的HPLC-Chip Cube中,与质谱连接。芯片载入、溶剂和样品输送、液流的高压切换,以及在质谱离子源中芯片的定位,全部实现了自动化。 Agilent 6400系列三重串联四极杆LC/MS系统可以在宽质量范围提供飞克级灵敏度。该仪器以其对复杂基质中痕量有机化合物的可靠定量而享有盛誉,包括,测定药物代谢物、食品中农药残留和地下水中的污染物等。SISCAPA方法是利用抗体包被的磁珠和一个旋转的磁珠捕集装置,捕获目标多肽,然后用纳流LC-MS/MS系统进行测定。目的是对样品酶解液中极少量多肽的量进行测定,创建一种对高级诊断有潜在用途的研究工具。   安捷伦科技有限公司是分析仪器系统的领导供应商,其产品正在化学、环保、食品、医药和生命科学领域中广泛使用。安捷伦具有世界最先进的化学分析仪器,丰富的法规适应性和专业技术经验,以及优良的支持服务系统,这些都能够帮助您的实验室超前应对分析的挑战。
  • 安捷伦与ISB合作开发人类蛋白质定量分析方法
    2009年11月30日,北京——系统生物学研究所(ISB)和安捷伦科技公司(NYSE: A)今天宣布,合作开发人类多反应监测(MRM)Atlas,一种让科学家对所有人类蛋白质进行定量分析的综合方法。该项目将有望使生物标志物的发现与验证,以及基于蛋白水平的诊断检验、个性化医疗、人类健康监测等工作获得重要进展。   该项目获得“美国复兴与再投资法案——投资机会”项下国立卫生研究院国家人类基因组研究所提供的460万美元资助,由ISB的Robert Moritz 和 Leroy Hood开发“全人类多肽和MRM Atlas ”。苏黎世联邦理工学院的Ruedi Aebersold 也将携欧洲科研理事会提供的经费加入该项合作研究。   该研究将历时2年,分别在西雅图的ISB和苏黎世ETH进行,将使用安捷伦三重串联四极杆和四极杆飞行时间液相色谱/质谱(LC/MS)系统和纳流液相色谱-芯片/质谱系统。   “我们相信这将是蛋白质分析领域一个革命性的进展,”ISB成员兼蛋白质组学负责人Rob Moritz说,“这将促进蛋白质定量的常规应用,在人类疾病的机理研究、早期诊断和监测中发挥重要作用。”   “安捷伦很高兴共同担纲开发人类MRM Atlas,并且基于MRM方法,支持蛋白定量研究,”安捷伦LC/MS营销负责人Ken Miller说,“我们的三重串联四极杆质谱系统、蛋白质分析专用软件工具、以及独特的液相色谱-芯片/质谱技术,构成了分析这些大量样品稳定而灵敏的平台。”   MRM Atlas旨在让科学家们能够对人类组织、细胞系和血浆中大约20,000种蛋白质进行定量处理,从而对关乎人类健康的众多领域产生影响。该计划对每个人类蛋白编码基因,可生成多达四种多肽的数据库,经过快速精确的质谱MRM方法分析验证,实现对人类蛋白质组中几乎所有蛋白的明确鉴定与定量,从而将对普通生物学研究和大规模蛋白质组研究产生积极推动作用。
  • 148万!Protein Simple中标上海交通大学全自动多功能蛋白质表达定量分析系统国际招标采购项目
    一、项目编号:0705-2340JDBXTXDK/04/学校编号:招设2023A00021(招标文件编号:0705-2340JDBXTXDK/04)二、项目名称:上海交通大学全自动多功能蛋白质表达定量分析系统国际招标三、中标(成交)信息供应商名称:香港福萊得科技有限公司供应商地址:香港干诺道中137-139号三台大厦12楼全层中标(成交)金额:148.8366000(万元)四、主要标的信息序号 供应商名称 货物名称 货物品牌 货物型号 货物数量 货物单价(元) 1 香港福萊得科技有限公司 全自动多功能蛋白质表达定量分析系统 ProteinSimple Jess 1 USD 220000
  • 310万!全自动蛋白质表征分析系统等采购项目
    项目编号:OITC-G220290791项目名称:ZYCGR22011901仪器平台(第二批)科研设备采购项目预算金额:310.0000000 万元(人民币)最高限价(如有):280.0000000 万元(人民币)采购需求:包号货物名称数量是否允许采购进口产品预算金额(万元)最高限价(万元)1全自动蛋白质表征分析系统1套是1801652毛细管电泳仪1台是130115合同履行期限:详见项目需求。本项目( 不接受 )联合体投标。
  • 沃特世推出新型质谱采集模式,推动蛋白质组学和脂类组学研究发展
    沃特世质谱技术研究人员Bob Bateman和John Hoyes荣获HUPO科学技术奖 沃特世公司(纽约证券交易所代码:WAT)近日于国际人类蛋白质组研究组织(HUPO)第15届国际大会上推出全新的数据采集模式SONAR™ ,该模式专为Xevo® G2-XS四极杆飞行时间(QTof)质谱仪(MS)而开发,提供全新的非数据依赖型采集(DIA)方案获取MS/MS数据。这项技术能够帮助分析科学家们提升实验室工作效率,同时让他们对生成的结果更有信心。借助SONAR数据采集模式,科学家们只需执行一次进样即可完成复杂样品中脂质、代谢物和蛋白质的定量和鉴定,免去了采用MS/MS方法分析时通常需要额外进行方法开发的麻烦。 沃特世在HUPO国际大会期间隆重介绍了这一新型MS采集模式。会议同时表彰了沃特世公司的高级质谱技术专家Bob Bateman和John Hoyes为推动质谱技术发展所作的杰出贡献。在现代蛋白质组学实验中,基于DIA的质谱技术是分析人员获取包含大量数据的样品谱图时常用的一项技术。随着蛋白质组学和脂类组学研究的不断发展,科学家们越来越追求针对性更强的实验,来定量分析特定的肽和蛋白质,这就需要进行额外的方法开发和重复分析。面对越来越复杂的样品,沃特世新推出的SONAR数据采集模式能够提供更丰富的信息,同时提升数据的清晰度。 沃特世公司的组学业务开发高级经理David Heywood表示:“如今的蛋白质组学研究已十分成熟,科学家们已经能够收集到蛋白质的大部分相关信息。现在,他们希望实现的目标是先针对某种蛋白质或特定的肽提出假设,然后采用靶向MS/MS定量方法就这种假设观点展开研究,而无需额外开发新的方法或实验。现在,借助SONAR数据采集模式,科学家们可以完成一站式分析并具有更高的选择性。这种模式可兼容高速UPLC分离,工作流程更加高效,通过一次进样即可完成更准确的定性和定量分析。” 沃特世科学家荣获HUPO国际大会表彰此次HUPO国际大会还向沃特世公司的技术研究顾问Bob Bateman和质谱技术总监兼首席科学家John Hoyes颁发了HUPO科学技术奖,以表彰他们为推动蛋白质组学研究技术发展与开发QTof质谱仪所作出的杰出贡献。 HUPO执行委员会在颁奖辞中表示:“QTof串联质谱仪在其问世初期对蛋白质组学的发展产生了巨大影响,这类质谱仪与纳升级液相色谱(LC)联用后,能够在蛋白质组分析中表现出无与伦比的性能。”Waters® (Micromass® )Q-Tof™ 质谱仪自1996年进入市场以来不断进行技术创新,继上一次集成离子淌度分离技术之后,此次又增添了全新的SONAR MS数据采集模式。 SONAR为MS数据采集模式带来有效的性能提升SONAR在选择性方面实现的提升主要得益于质谱仪四极杆的运行方式。在SONAR模式下,四极杆并不会始终保持打开状态传输所有离子,而是扫描指定的质量范围,每次扫描可捕获200张谱图。这种四极杆运行方式让SONAR能够兼容快速的超高效液相色谱(UltraPerformance Liquid Chromatography® ,UPLC® )分离,从而提高实验室分析通量。过去可能会发生色谱共洗脱的化合物现在可以通过四极杆实现分离并单独记录下来,数据库的搜索效率将随之得到提高。SONAR通过一次进样即可同时采集定量和定性数据。 HUPO国际大会于9月18日至22日在台北国际会议中心召开,期间将举办多场以SONAR技术为主题的研讨会。 SONAR数据可整合至Waters Progenesis® 和Symphony™ 软件分析工作流程,还可兼容Skyline等第三方软件包。由MassLynx® 软件控制的Waters Xevo G2-XS QTof质谱仪现已整合SONAR模式。 关于沃特世公司(www.waters.com)沃特世公司(纽约证券交易所代码:WAT)专注于为实验室相关机构开发和生产先进的分析和材料科学技术。50多年来,公司开发出一系列分离科学、实验室信息管理、质谱分析和热分析技术。
  • 干血斑分析技术进展与应用——基于干血斑的蛋白质分析技术
    干血斑(Dried Blood Spot, DBS)是一种微量血液采集、干燥和储存的生物采样技术。该技术由Robert Guthrie于1963年首次应用于新生儿苯丙酮尿症(PKU)筛查[1]。相比于临床检验中常用的液态血液基质,干血斑技术具有采血量少、操作简便、一般不需冷冻或冷藏、储存和运输成本低等优点,已应用于新生儿疾病筛查、流行病学样本分析、药物研发等领域。将干血斑应用于蛋白质研究,拓宽了蛋白质分析研究的生物样本采集形式,具有很好的临床研究和实际应用价值。本文重点讨论两种常见干血斑蛋白质分析技术及应用。1. 基于干血斑的蛋白分析技术1.1 酶联免疫吸附分析法原理:酶联免疫吸附分析法(ELISA)是指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合,进行免疫反应的定性和定量分析,具有灵敏、特异、及易于自动化操作等特点。根据免疫识别和信号输出方式的不同,ELISA可以分为双抗体夹心法、直接免疫竞争法和非直接免疫竞争法等。实验材料及分析仪器:研究人员可通过购买固相载体、抗体或抗原进行包被制备ELISA试剂盒或购买市售试剂盒。酶联免疫吸附测定试剂盒已成为实验中不可缺少的工具,目前国内外Elisa试剂盒生产厂家很多,如上海酶联生物、Abcam、BioVision等,科研人员可根据研究需求选择高质量的试剂盒品牌,以提升分析效率及结果有效性。干血斑处理:以干血斑HIV分析为例:用HIV阴性混合血液样本对阳性混合血液样本进行梯度稀释后,以固定体积点样至干血斑收集卡,室温下干燥。采用干血斑打孔设备获得一定直径的干血斑样片,用300 μL PBST(0.05% Tween20)室温静置洗脱,洗脱液经酶标仪测定样本吸光度值(OD值)。分析和结果处理:以标准曲线样品的浓度为横坐标,以测得的OD值为纵坐标,根据不同类型ELISA本身的特点拟合标准曲线(如竞争法和夹心法可以采用四参数拟合回归方程),选择R值大于0.99的拟合方式,并根据标准曲线计算样品浓度。分析仪器:酶标仪(MicroplateReader)即酶联免疫检测仪,是对酶联免疫检测(EIA)实验结果进行读取和分析的专业仪器。酶标仪可分为普通酶标仪和多功能酶标仪,普通酶标仪的主要功能一是充当分光光度计的角色,二是基于免疫反应的ELISA分析,价格相对较低;多功能酶标仪可实现吸光度、荧光强度、时间分辨荧光、荧光偏振和化学发光等多种检测模式拓展,满足生化分析、免疫检测、细胞研究、药物筛选和机制探索等众多领域检测需要。目前酶标仪市场常用的仪器品牌进口的有:伯腾、帝肯、美谷分子、珀金埃尔默和赛默飞等;国产的有:安图生物、奥盛和闪谱等。1.2 基于质谱技术的蛋白质分析技术基于质谱(Mass Spectrometry, MS)技术的蛋白质分析方法具有高通量、自动化程度高、分离能力强等特点,已逐渐成为蛋白质分析和鉴定的重要技术。原理:蛋白酶将样本中的蛋白质消化成肽段混合物,可采用鸟枪法(Shotgun)对蛋白组进行全谱分析,在最小限度分离蛋白质的同时实现复杂混合物中成千上万种蛋白质的鉴定和定量;或用液相色谱法(Liquid Chromatography, LC)对酶解肽段进行分离,经基质辅助激光电离(MALDI)或电喷雾电离(ESI)等软电离技术将其离子化,带电蛋白质离子通过质量分析器将具有特定质荷比的肽段离子分离,然后经检测器分析。质谱技术与干血斑技术的结合为蛋白质组学研究和蛋白生物标志物筛选提供了强有力手段。图1 基于质谱技术的蛋白质组学分析流程[2]样本处理:采用干血斑打孔设备获得一定直径的干血斑样片,转移至EP管中,加入少量水后用组织研磨器或匀浆机快速、彻底破碎干血斑样片,剧烈摇晃试管。后续处理与常规样本的蛋白提取相似:加入蛋白裂解液(如SDS、SDC、RIPA等),冰上裂解约半小时(辅以震荡),低温、高转速离心后取上清,得干血斑蛋白提取物。分析和结果处理:蛋白质组学数据分析和结果处理包括:①应用数据库搜库对蛋白进行鉴定并相对定量分析,借助如主成分分析、相关性分析、聚类分析等方法掌握数据的整体情况;②对蛋白的生物学功能进行注释,例如GO功能注释、KEGG注释等;③通过蛋白的生物学功能或参与的信号通路可以进一步筛选与研究目标相关的蛋白进行后续的分析。分析仪器:蛋白质组学分析主要使用高分辨液质联用系统进行。可进行蛋白质组学分析的液质联用系统目前以进口为主,常见仪器主要有布鲁克、赛默飞、沃特世和SCIEX的Q-TOF、Q-Orbitrap、Q-Trap质谱仪等。2. 干血斑蛋白分析应用实例分享2.1 采用ELISA法分析干血斑中HIV抗体1996年美国食品药品监督管理局(FDA)批准了以干血斑为载体的样本邮寄传递检测模式,并证明其可作为传统检测模式的良好补充,极大地推动了干血斑技术在传染性疾病分析中的应用。在我国,全国艾滋病检测技术规范(2020年修订版)第二章第4部分“常规HIV抗体或HIV抗体抗原联合检测方法”中指出:ELISA试验可使用血液(包含血清、血浆和干血斑)或尿液样本检测HIV抗体,也可联合检测HIV抗体抗原,说明干血斑在基于ELISA技术的HIV抗体检测中是可代替血浆、血清的生物样本基质,具有广阔的应用前景。近年来,相关专家多推荐受检者使用HIV自主采样包,根据说明采集干血斑样本,匿名寄至专业实验室,通过电话等方式获取结果。图2 RDA Spot公司的干血斑自主采样包(包含一次性采血针,消毒湿巾,样本采集卡,使用说明书及用于运输的特殊包装)图片来源:https://www.rdaspot.com/2.2 基于质谱技术的干血斑蛋白质组学分析研究人员建立了应用Thermo UltiMate 3000 RSLCnano纳升液相色谱联合Q Exactive HF-X质谱技术的干血斑蛋白质组学分析方法,并于2020年在Journal of Proteome Research中报道了该项工作[3]。由于全血中含有较多可溶性蛋白(如血红蛋白、白蛋白、纤维蛋白原等),研究人员为克服干扰、提高分析灵敏度,采用碳酸钠沉淀法(SCP)成功去除干血斑中可溶性蛋白并富集目标分析物疏水性蛋白。采用基于数据非依赖采集模式(DIA)的蛋白质组学分析方法,进行EMBL-EBI(针对人类蛋白GO功能分析的综合注释数据库)蛋白组学搜库分析,通过限定质谱扫描范围和延长离子累积时间等提高了分析方法的检测灵敏度。该研究最终在健康受试者干血斑样本中鉴定到1977种蛋白质,其中包含585种疾病相关蛋白。3. 小结与展望干血斑是一种先进的血液采集及保存技术,具有操作简单、对人体损伤小、便于运输和储存等优势,在临床快检中受到关注。干血斑技术与蛋白质研究的结合将有效推动蛋白质研究成果临床转化。随着分析技术的发展和相关研究的不断深入,前处理自动化仪器、高通量分析仪器和成熟的蛋白分析流程将成为干血斑蛋白质分析的有力工具,干血斑蛋白质分析定将在蛋白质分析中发挥重要作用,为高通量诊断、差异蛋白分析和疾病生物标志物挖掘等拓展新的技术平台。参考文献:[1] R. Guthrie, & Susi, A., A Simple phenylalanine method for detecting phenylketonuria in large populations of newborn infants., Pediatrics, 32 (1963) 338–343.[2] B. Kuster, M. Schirle, P. Mallick, R. Aebersold, Scoring proteomes with proteotypic peptide probes, Nature Reviews Molecular Cell Biology, 6 (2005) 577-583.[3] D. Nakajima, Y. Kawashima, H. Shibata, T. Yasumi, M. Isa, K. Izawa, R. Nishikomori, T. Heike, O. Ohara, Simple and sensitive analysis for dried blood spot proteins by sodium carbonate precipitation for clinical proteomics, Journal of proteome research, 19 (2020) 2821-2827.
  • ProteinSimple 专注简洁——将蛋白分析化繁为简的伙伴
    仪器信息网讯 旧金山时间2014年3月13日,在湾区明媚的阳光下,我们乘坐舒适的豪华轿车lemo来到ProteinSimple公司进行参观,这也是我们此次美国工厂行的最后一站。 仪器信息网出访人员与ProteinSimple公司市场部总监John.Proctor博士合影 来到ProteinSimple公司给我们的第一感觉就如同公司的名称一般:简洁。公司内的陈列风格和明快的颜色搭配令人感到简单而充满活力。ProteinSimple公司总部位于美国加州硅谷,工厂设立在美国和加拿大,在北美、欧洲和亚洲市场都采用直销的方式经营,这次我们有幸来到公司美国总部并参观了应用实验室。接待我们的市场部总监John.Proctor博士,他介绍到在蛋白质分子中通常使用质谱和Western blot两种方法,ProteinSimple公司聚焦于蛋白分析领域,分别为:凝胶成像,蛋白纯化,蛋白聚合,信号转导及自动化5个方面,公司产品主要分为:化学发光凝胶成像、制药领域药物分析和simple western三条主线产品。化学发光凝胶成像产品是在2009年收购了知名的Alpha Innotech公司,成为该领域的领导者之一。制药领域产品最新产品为iCE3和MFI两款,大大简化了制药行业对药品纯度分析的操作步骤,其中iCE3全柱成像毛细管等点聚焦电泳成为抗体药物电荷不均一性表征的最佳选择,MFI是全球第一款全自动蛋白药物聚集颗粒分析的仪器。而Simple Western的推出将Western blot的实验步骤全部自动化,无需制胶跑胶、无需转膜、全自动完成蛋白上样、分离、免疫印迹、洗涤,以及检测和数据的定量。让WB分析更加标准化,更加安全,同时也将研究人员从繁重的劳动中解放出来。 2014年在Simple Western基础上再次推出一系列的新产品,包括:全新的定量Western Blot仪器 Wes,可以在3小时内分析多达25个样品。高通量的Sally Sue让用户能在一次实验中进行96个Simple Western,而Peggy Sue不仅可分析96个样品,且按照电荷或者大小自动分离蛋白。 有趣的是ProteinSimple为公司每一款产品都起一个名字,让仪器成为研究人员的实验伙伴一同完成WB实验操作。Wes选择使用新型的分析耗材代替传统的凝胶,分析试剂盒带有一种预装了必需试剂的微孔板,研究人员只需向微孔板中加入样品和一抗,然后将微孔板和一次性的毛细管卡盒插入仪器中即可。经过约30分钟样品制备和准备时间,在3小时内一次性分析25个样品,实验过程中所产生的废液会储存在耗材中,所以不需要任何后续清洗工作。 Wes产品中替代传统凝胶介质的微孔板 众所周知传统的Western blot结果的重复性一直是挑战,繁琐的操作步骤增加了实验的不确定性,也难以获得准确高质量的定量数据。 Wes不仅仅提高了WB的实验效率,同时显著提高了性能。相比第一代Simple Western仪器在保证准确度的前提下,它的灵敏度至少是第一代的10倍。 全自动蛋白质印迹定量分析系统Wes Sally Sue和Peggy Sue相比上一代的Simple Western仪器,在灵敏度提高的基础上,减少了80%所需样品数量,Peggy Sue只需0.05&mu g/&mu L蛋白样品量即可上机检测。两套系统均能够根据蛋白质分子大小自动进行分离,而Peggy Sue还可以根据蛋白质电荷自动进行分离。研究人员同一时间能够轻松运行最多96个样品。只需按下按钮即可离开,不到一天的时间,就能得到全面分析、定量的数据。 全自动蛋白分析仪Peggy ProteinSimple公司独特的产品让我们体会到简化繁琐的实验过程是多么振奋和快乐,在这里引用ProteinSimple产品宣传册上引用Steve Jobs的一句话, &ldquo Simple can be harder than complex: You have to work hard to get your thinking clean to make it simple. But it&rsquo s worth it in the end because once you get there, you can move mountains.&rdquo "简单比复杂更难:你必须付出巨大艰辛,化繁为简。但这一切到最后都是值得的,因为一旦你做到了,你便能创造奇迹。&rdquo Western blot 作为经典的检测方法被一代代生物研究人员使用,但是它的重现性差,不稳定的缺点也困扰着研究人员,在结束短暂的走访回程的路上,望着身边美丽的加州风景,作为同样一名蛋白分析专业背景人员,非常期待今后看到越来越多更安全,更便捷,更加准确的实验设备,让我们工作的实验环境也如同身边的风景一般令人快乐! 了解更多关于美国ProteinSimple公司请访问: http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102472/
  • Milo 单细胞蛋白质定量分析系统同时获得MIT Technology Review 和 The Scientist杂志年度创新奖
    细胞异质性存在于生命医学研究的各个领域,包括肿瘤学,干细胞分化发育,免疫学,细胞治疗等。重大生命医学问题的解决,必须首先解决细胞异质性的问题。通过单细胞检测技术,对异质性细胞进行分类,是细胞异质性分析的主要手段。单细胞测序技术实在基因层面的单细胞分析,但是所有生物学效应,包括生理学效应,病理学效应,药物反应等,最后都是通过特定蛋白质来发生和调控的。Milo单细胞蛋白质表达定量分析系统,技术来源自美国著名大学加州大学伯克利分校Amy E. Herr教授实验室,该实验2014年原创性技术发表在Nature Method,题目Single cell western blot。ProteinSimple借助强大的软件及硬件研发实力,将其开发为单细胞蛋白质表达定量检测系统,用于细胞异质性及稀缺细胞样本(比如循环肿瘤细胞等)研究。 因为Milo对单细胞蛋白质表达定量分析的独特优势,在2016年7月份上市之后,连续获得了MIT Technology Review 年度创新奖,美国著名杂志 The Scientist 年度创新产品第一名
  • 初代timsTOF Pro单个细胞蛋白质定量突破3000大关
    近期,浙江大学化学系方群教授团队在国际权威期刊《Nature Communications》上发表了题为“Pick-up single-cell proteomic analysis for quantifying up to 3000 proteins in a Mammalian cell”的研究成果,创新性地提出了PiSPA(Pick-up Single-cell Proteomic Analysis)技术用于单细胞蛋白组分析。该工作流程利用纳升级微流控液滴操控机器人,可以实现单细胞精准捕获、样本前处理以及自动进样,利用布鲁克tims TOF Pro质谱仪在单个哺乳动物细胞内实现了超过3000种蛋白的定量深度。作者通过此项技术对三种不同的哺乳动物细胞(HeLa、A549和U2OS细胞)进行单细胞蛋白质组学研究,以及研究了HeLa细胞在迁移过程中的细胞异质性,均展现了超高的定量分析深度。PiSPA平台的单细胞捕获过程是基于SODA(Sequential Operation Droplet Array)技术开发的微流控液体处理系统,可在“点取式”操作模式下实现自动化纳升级单细胞分选,并且能够基于细胞的明场形态特征或是标记的荧光信号灵活地选择单细胞,具有很高的捕获成功率和指向性。此外,研究人员将商品化的锥形底部内插管改造成阵列化的纳升级微反应器,兼容后续的液相色谱自动进样,可大大提高整个工作流程的可操作性、可靠性和成功率。PiSPA平台可自动完成单细胞捕获、样品前处理、色谱分离、质谱检测等一系列操作,最大程度降低样品的损失。研究人员利用PiSPA工作流程,对多种哺乳动物单细胞实现了深度覆盖的定量分析。采用优化的胰蛋白酶/蛋白比例和色谱梯度,分别通过DDA和DIA扫描模式对A549、HeLa和U2OS三种细胞进行单细胞蛋白组分析,所有质谱数据均使用布鲁克4D蛋白质组学平台——timsTOF Pro进行采集。布鲁克独特的捕集离子淌度技术(TIMS)带了额外一维离子淌度信息,可大大降低样品分析复杂度,极大提高峰容量和分析物鉴定可靠性,最新一代平行累积连续碎裂技术(PASEF® )可以实现极高的二级扫描速度和灵敏度,只需要很少量样本就可以达到组学鉴定新深度。在本研究中,timsTOF Pro更是展示了探索单细胞蛋白质组学的能力,在DIA扫描模式下,利用DIA-NN(MBR算法)进行library-free数据检索,可在A549、HeLa和U2OS三种细胞的单细胞样本中,分别平均定量到3008、2926和2259种蛋白质,展现了PiSPA平台在单细胞蛋白组定量分析中的覆盖深度;此外,有2869、2772和1889种蛋白质在至少80%的A549、HeLa和U2OS单细胞样本中被重复定量到,说明了PiSPA平台有很高的重复性和可靠性。为了证明PiSPA平台的实际应用价值,研究人员分析了迁移过程中HeLa单细胞的蛋白质组表达情况。通过细胞划痕实验,选取有明显迁移(n=46)和未发生迁移(n=43)的HeLa单细胞进行定量分析。采用DIA扫描模式,分别平均鉴定到了2544和2893种蛋白质,后续生物信息学分析发现Cdc42、Rac1和RhoA等蛋白在发生迁移的HeLa细胞中发生显著上调,揭示了迁移过程中的焦点粘附和肌动蛋白骨架调节通路发生激活,说明了PiSPA可以作为细胞迁移研究和抗癌药物靶点研究的有效工具。PiSPA工作流程包含了高精度的液体操控、单细胞的精确前处理,结合布鲁克先进的液相色谱-捕集离子淌度谱-四极杆飞行时间质谱仪(LC-TIMS-QTOF MS)进行蛋白质组分析,突破了传统质谱分析在单细胞蛋白组研究领域的技术瓶颈,实现在单个哺乳动物细胞中定量超过3000种蛋白,重新定义了单细胞蛋白质组学分析。这项成果也再次向我们证明了单细胞蛋白质组学在疾病诊断和预防、药物开发、癌症基因组学等精准医学研究中的应用潜力。参考文献:1. Wang Y, Guan ZY, Shi SW, et al. Pick-up single-cell proteomic analysis for quantifying up to 3000 proteins in a Mammaliancell. Nat Commun. 2024 15(1):1279.2. Meier F, Brunner AD, Koch S, et al. Online Parallel Accumulation-Serial Fragmentation (PASEF) with a Novel Trapped Ion Mobility Mass Spectrometer. Mol Cell Proteomics. 2018 17(12):2534-2545.3. Meier F, Brunner AD, Frank M, et al. diaPASEF: parallel accumulation-serial fragmentation combined with data-independent acquisition. Nat Methods. 2020 17(12):1229-1236.
  • 中科院大化所张丽华:捕捉蛋白质变化的蛛丝马迹
    张丽华  申请发明专利50余项,其中30余项获得授权,7项获得实施转化,主持或参加的科研项目共20余项。作为国家重大科学研究计划的首席科学家,中国科学院大连化学物理研究所研究员张丽华是名副其实的高产“大户”。  她带领课题组深耕“蛋白质定性和定量新方法和相关技术研究”,为发现与生命活动密切相关的重要蛋白质提供了关键技术支撑,并将发展的新材料、新方法应用于肝癌等重大疾病的研究。  从蛋白质入手  在如今这个“谈癌色变”的年代,每年中国有300万新增癌症患者,有220万人因癌症而死亡。国际癌症研究机构预计,至2030年中国每年癌症患者将达到500万人,因此而死亡的人数达到350万人。  当前,癌症患者求医时大多处于中晚期,病人的存活率也十分堪忧。相比之下,很多早期癌症患者的治愈率在80%以上,“早发现、早治疗”是最行之有效的方法。  然而,想要在癌症扩散前就作出准确诊断绝非易事。张丽华带领团队从蛋白质下手,捕捉着肿瘤高低转移细胞株中发生变化的蛋白质。作为生命活动的主要执行体,蛋白质承载着重要的信息,其种类繁多、无处不在——催化反应的酶、提供免疫的抗体、跨膜运输的载体统统都是蛋白质。  “以肝癌高低转移细胞株为例,我们利用自己发展的规模化蛋白质定量分析技术,发现高转移细胞株与低转移细胞株之间有100多个蛋白质存在差异表达,其中就有促进和抑制肝癌转移的重要蛋白质。”张丽华说,“只要能调控这些蛋白质的表达,就有希望降低肿瘤细胞的侵润和转移能力,提高患者的生存力。我们将对其中一些重要的蛋白质进行大量临床样本的验证,期待能推出精准的检测试剂盒,有助于医生评估癌症的转移风险。”  但看似简单的检测分析过程背后却充满了挑战,要想将这些与疾病发生发展密切相关的蛋白质从海量的蛋白质中筛选出来,定量的准确度和分析速度的快慢至关重要。  建立分析新方法  酶解是蛋白质组样品预处理中不可或缺的环节。传统在自由溶液中的酶解方法通常需要消耗十几个小时 不仅严重制约分析速度,而且离线的操作会影响定量结果的准确度。张丽华团队提出了扬长避短的解决之道——固定化酶 通过提高单位面积上酶的浓度,既能加快蛋白质的酶解,又能降低酶的自降解几率。  固定化技术必须既让酶“死心塌地”,又不能让蛋白质“恋恋不舍”。为此,过去10年间,张丽华带领的团队没少在固载材料上花心思。“球形的、颗粒的、整体的̷̷各种各样的固载材料和修饰方式都进行了优化和选择。”她介绍道,从十几小时缩短到几秒,就像魔术师对酶施了魔力一样。这项技术通用性极强,不仅提高了蛋白质样品预处理的速度,还解决了国内外众多研究蛋白质的同行的“痛点”——实现与分离鉴定系统的在线联用,显著提高了蛋白质组样品的酶解效率和分析通量。  此外,她带领的团队还取得了一批成果:研制出了新型蛋白质印迹材料、固定化金属亲和色谱材料等,将鉴定灵敏度提高了2~3个数量级 建立了基于质量亏损的准等重标记技术,以及集成化定量分析平台,将蛋白质组相对定量的偏差由40%~50%缩小为10%以内,提高了定量的准确度、精确度和通量。  恩师的引领  如今,张丽华谈起蛋白质来头头是道,谁又能想到她其实并没有生命科学的相关教育背景。张丽华读博士期间主攻环境小分子,是在导师张玉奎院士的建议下转向潜力巨大的生物分析领域的。“作为一种生物大分子,蛋白质的分离分析更具有挑战性。”她说。  从儿时对科学懵懂的梦想,到真正走上科研的道路,张丽华遇到的每一位导师都将严谨的态度和创新的精神传授给她。在张丽华读博士期间,由于她所在的团队重新组建,在急需用人的情况下,导师张玉奎义无反顾地把她送到了国外,在德国DAAD资助下开展博士生联合培养研究,并随后让她继续在日本从事博士后研究。  导师的胸怀,对学生的无私奉献,让张丽华深深感动。回国后,在对学生的培养过程中,她也希望能够秉承恩师的这种精神,给学生创造更好的机会,让他们具有更好的发展空间。  中国科学院大连化学物理研究所、德国国家环境健康研究中心生态化学所、日本德岛大学药学院̷̷一路走来,有恩师们的指引和帮助,有团队成员和学生们的辛勤工作,有研究所创造的优异的科研环境,张丽华坦言自己是幸运的,只希望能在这条路上走得更扎实、更久更远。  “现在我最大的业余爱好就是陪儿子。”张丽华笑称。她会在下班后尽早回家,陪儿子阅读和游戏。她希望在兼顾事业的同时,也能陪伴孩子一同成长。
  • 校准蛋白质分析仪的重要性及步骤
    蛋白质分析仪是生物化学和分子生物学实验室中重要的设备,它用于定量分析蛋白质样品,支持从基础研究到药物开发的广泛应用。为了确保蛋白质分析的数据准确性和重复性,定期进行仪器的校准是至关重要的。本文将讨论校准仪器的重要性,并概述有效的校准步骤。   蛋白质分析仪校准的重要性首先体现在保障数据质量上。精确的蛋白质测量对于了解生物样本中的蛋白质表达水平、检测疾病标志物、验证药物作用靶点等都至关重要。未经校准的仪器可能导致错误的结果,影响研究结论和治疗决策。   校准仪器有助于满足监管要求。在制药和临床领域,蛋白质分析必须符合严格的法规标准。定期校准的仪器能够产生符合这些标准的数据,帮助企业和医疗机构遵守法规,减少合规风险。   可以提高实验室之间的数据一致性。不同实验室使用的不同仪器,即使型号相同,也可能因为使用环境和操作习惯的差异而产生不同的测量结果。通过实施标准化的校准程序,可以确保不同实验室之间的测量结果具有可比性,这对于多中心研究和数据分析尤为重要。   蛋白质分析仪的校准步骤通常包括以下几个关键环节:   选择适当的标准物质:使用已经由认证机构校准过的标准蛋白质溶液作为参考。这些标准物质应当覆盖仪器的工作范围,并且具有已知的浓度和特性。   控制环境条件:在进行校准之前,确保实验室的环境条件(如温度和湿度)符合仪器的使用要求。环境因素对蛋白质测量有显著影响,因此控制这些条件对于获取准确结果至关重要。   操作人员培训:确保操作仪器的人员具有足够的知识和技能,以正确执行校准程序。这包括了解仪器的工作原理、操作规程以及校准的具体步骤。   执行校准程序:按照制造商提供的说明书或行业标准进行校准。这可能包括预热仪器、执行零点调整、检查和调整测量系统等步骤。   记录和验证:记录校准结果,并根据需要进行调整。完成校准后,使用标准物质验证仪器是否达到了预期的准确度。   定期复校:根据仪器的使用频率和制造商的建议,定期重复校准流程。这有助于及时发现和修正任何潜在的问题,保持仪器的较佳性能。   综上所述,校准蛋白质分析仪对于确保数据的准确可靠、满足法规要求、提高实验室间数据的一致性至关重要。通过遵循正确的校准步骤,用户可以确保他们的仪器始终处于较佳工作状态,从而获得高质量的测量结果。
  • 威斯康星大学李灵军自然通讯最新成果:胰腺蛋白质组的质谱定量分析揭示癌症相关特征
    仪器信息网讯 胰腺是人体最重要的器官之一。它产生胰岛素来调节血糖和帮助消化食物。如果胰腺失控,糖尿病、癌症或其他疾病就会威胁生命。然而,关于胰腺如何使人们保持健康以及器官如何衰竭,还有很多未知之处。数以万计的蛋白质控制着胰腺的工作方式:它如何生长和发育,如何产生消化酶以及如何分泌胰岛素。因此,科学家需要进一步了解蛋白质结构如何随时间变化,以帮助开发针对糖尿病或癌症的治疗方法。  基于此,威斯康星大学麦迪逊分校药学院与化学系的李灵军课题组与医学和公共卫生移植外科医生Jon S Odorico合作开展了追踪从出生前到成年后期胰腺蛋白质组(整套蛋白质)变化的相关研究。研究团队还开展了细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的研究和分析,该物质能够指导细胞分化、迁移、形态和功能,对于在实验室细胞培养和器官移植过程中生长和支持胰腺细胞至关重要。但在人类胰腺研究中,目前尚未系统研究过不同发育阶段的ECM蛋白质组。该研究中,科学家们应用了基于质谱的定量蛋白质组学策略,并描述了四个年龄组的全蛋白质组和ECM特异性变化:胎儿(妊娠18-20周),青少年(5- 16岁),青年(21-29岁)和老年(50-61岁)。研究团队鉴定了3523种蛋白质,其中包括185种ECM蛋白质,并对其中的117种进行了定量。课题组检测了胰腺发育和成熟过程中以前位置的蛋白质组和基质组的特征。他们还使用免疫荧光染色观察特异性CEM蛋白质,并研究CEM在胰岛和腺泡间的定位变化。该研究全面的蛋白质组学分析有助于深入了解CEM在人类胰腺发育和成熟过程中所起的关键作用。  成果表明,胰腺在人类整个童年时期都会显著重塑其蛋白质,最终在成年阶段稳定。值得一提的是,与癌症相关的蛋白质之间存在明显的年龄特异性变化,这一发现有助于研究人员加深对胰腺癌的了解。  该成果于2月15日发表在《自然通讯》杂志上,论文题目为“Proteome-wide and matrisome-specific alterations during human pancreas development and maturation”。论文链接:https://www.nature.com/articles/s41467-021-21261-w关于研究团队:威斯康星大学麦迪逊分校 李灵军教授    李灵军教授在神经肽和功能性肽组学研究领域取得了开拓性的成果。她所带领的课题组针对神经生物学中的关键性课题,开发了一系列的基于质谱和微分离技术的研究平台,对由分子、细胞水平认识神经肽的功能以及神经退行性疾病生物标志物的发现作出了突出的贡献。据仪器信息网跟踪报道,李灵军教授曾荣获美国质谱学会颁发的Biemann奖章,是世界质谱领域的最高荣誉之一,授予那些长期在质谱学研究领域做出突出贡献的学者。此外,2016年英国分析科学家网站公布了全球50位最具影响力女性分析科学家名单,李灵军教授也荣誉获选。  在以往的采访中,李教授也曾表示:”我最热衷于开发新型分析工具和策略来解决具有挑战性的生物问题。我们很高兴开发一套用于发现神经肽功能的多功能质谱工具,并使用这些技术来提高我们对大脑工作原理的理解。最近,我们正致力于开发用于定量MS分析和系统生物学中高通量测量的新型化学标签。我也热爱培训和指导研究生和博士后,并帮助他们过渡到成功的职业生涯的这个过程。”课题组官网: https://www.lilabs.org/  团队合照
  • 定量蛋白质组学揭示内质网应激作用下蛋白质的构象变化
    大家好,本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章Quantitative Structural Proteomics Unveils the Conformational Changes of Proteins under the Endoplasmic Reticulum Stress1,文章的通讯作者是来自美国佐治亚理工学院的Ronghu Wu助理教授。在真核细胞中,内质网(endoplasmic reticulum,ER)负责蛋白质组中40%蛋白质的合成和成熟。蛋白质合成或折叠过程中的变化都将影响内质网的稳态,进而导致未折叠蛋白的积累和蛋白分泌效率的降低。在过去几十年的研究中,内质网应激反应被广泛研究,但是内质网应激反应后蛋白质折叠状态的变化却没有被深入研究。基于丰度的蛋白质组学方法不能直接用于分析蛋白质状态的变化,在这篇文章中,作者整合了半胱氨酸(cysteine,Cys)共价标记、选择性富集和定量蛋白质组学,称为半胱氨酸靶向共价蛋白绘制(cysteine targeted covalent protein painting,Cys-CPP),用于研究蛋白质组范围内的蛋白质结构和变化(图1A)。  使用CPP分析蛋白质结构,需要一种具有高反应活性的探针。作者设计了一种针对半胱氨酸的探针,其中包含半胱氨酸反应基团、用于富集的生物素部分和用于生成半胱氨酸特异性识别位点标签的可裂解连接部分(图1B)。以变性处理后的蛋白样品作为蛋白质展开形式的参考,计算肽段在原始样本和变性样本中的比例从而获得宝贵的蛋白质结构信息。  图1.利用半胱氨酸反应探针定量分析人细胞蛋白质组中半胱氨酸暴露率的原理。(A)Cys-CPP的一般工作流程。(B)半胱氨酸残基与探针之间的反应。富集后,进行紫外裂解,在修饰的半胱氨酸上留下一个小标记,用质谱进行位点特异性分析。  半胱氨酸暴露率Rexpo通过每条肽段在原始样本和变性样本中的比值进行计算。结果显示:(1)半胱氨酸的暴露率和溶剂可及性呈现正相关(图2C) (2)在丝氨酸和苏氨酸等极性氨基酸残基旁边的半胱氨酸具有相对较高的暴露率,这与人们普遍认为亲水残基更有可能暴露在蛋白质表面的观点一致 (3)甘氨酸和脯氨酸附近的半胱氨酸具有更高的暴露率,这是因为这两种氨基酸通常出现在蛋白质的转角和环结构中,对半胱氨酸的空间位阻较小 (4)半胱氨酸暴露率与其有/无序区(图2D)或所处二级结构(图2E)的相关性分析均表明,较低的暴露率与更稳定和结构化的局部环境有很好的相关性。这些数据结果共同证明目前的方法可以准确地测得半胱氨酸暴露率,并为蛋白质结构提供有价值的信息。  图2.HEK293T细胞中半胱氨酸暴露率的分析。(A) VAHALAEGLGVIAC#IGEK(#代表标记位点)的串联质谱样本。报告离子的强度使我们可以准确定量一个半胱氨酸的暴露率(左框为报告离子强度的放大视图)。(B)蛋白CCT3中被定量半胱氨酸的定位和暴露率演示(PDB代码:6qb8)。(C−E)比较不同的溶剂可及性(C)、预测无序区(D)和二级结构(E)的半胱氨酸暴露率。  衣霉素(Tunicamycin,Tm)可抑制 N-糖基化并阻断 GlcNAc 磷酸转移酶 (GPT)。由于蛋白质的N-糖基化经常发生在共翻译过程中,在蛋白质折叠的调节中起着至关重要的作用,所以衣霉素会引起细胞内质网中未折叠蛋白的积累并诱导内质网应激。基于此,作者用衣霉素对细胞进行处理,计算并对比了衣霉素处理样本和正常样本中的半胱氨酸暴露率。正如预期的那样,Tm处理样本中许多半胱氨酸的暴露率升高,且Tm对于蛋白质不稳定区域的作用尤为显著。根据Tm处理样本和正常样本之间半胱氨酸暴露率的差值,作者将所有位点划分为5个部分,在Tm处理下,近三分之一的半胱氨酸定位区域没有明显的结构变化(差值在-0.05~0.05之间),而28%的位点则高度暴露(差值0.15)(图3B)。对这两种蛋白质进行基因本体(GeneOntology,GO)功能富集分析(图3C),结果显示:差值在-0.05~0.05之间的蛋白通常是糖异生或折叠过后具有良好结构区域的蛋白,而差值0.15的蛋白则是与囊泡转运相关的蛋白。这表明抑制N-糖基化主要影响经典分泌途径中的蛋白质,与预期相符。  图3.利用Tm抑制蛋白质N-糖基化对蛋白质折叠影响的系统研究。(A)Tm处理和对照样品之间半胱氨酸暴露率的比较。(B) 不同暴露率变化范围内的蛋白质数量。(C)在具有高度展开或稳定区域半胱氨酸的蛋白之间进行GO功能富集分析。  由于Tm对于预先存在的、折叠良好的蛋白质所产生的影响可能远小于对新合成蛋白的影响,分别研究Tm对这两种蛋白的影响是必要的。作者通过将目前的方法Cys-CPP与细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记(pSILAC)结合(图4A),探究了细胞中已存在蛋白和新合成蛋白在内质网应激作用下的不同变化。结果显示:(1)抑制N-糖基化对新合成蛋白的去折叠影响比对已存在蛋白的影响更显著(图4C) (2)N-糖基化除了调节蛋白质的二级结构外,在蛋白质三级或四级结构的形成中起着更重要的作用(图4D)。  图4. 抑制N-糖基化对新合成蛋白和已存在蛋白折叠状态影响的研究。(A)量化新合成蛋白和已存在蛋白折叠状态变化的实验设置。(B) 经Tm处理和未经处理的细胞中新合成和已存在蛋白质的重叠。括号内为每组蛋白质数。(C)不同蛋白质组中暴露率的分布。(D) 在有或没有Tm处理的细胞中、在不同的二级结构下,新合成和已存在蛋白之间半胱氨酸暴露率的差值分布。  本文通过设计一种半胱氨酸靶向探针,定量半胱氨酸残基的暴露率,系统地研究了蛋白质的结构以及结构的变化。结果表明,半胱氨酸暴露率与蛋白质局部结构的相关性非常好。利用该方法,作者研究了Tm引起的内质网应激反应下细胞中蛋白质的结构变化。此外,通过将Cys-CPP与pSILAC结合,研究了在内质网应激反应下原有蛋白和新合成蛋白的结构变化差异,并详细分析了内质网应激对蛋白质去折叠的影响,深入和准确地了解内质网应激下的蛋白质结构变化,有助于深入了解蛋白质的功能和细胞活性。  参考文献:[1] Yin K, Tong M, Sun F, et al. Quantitative Structural Proteomics Unveil the Conformational Changes of Proteins under the Endoplasmic Reticulum Stress[J]. Analytical Chemistry, 2022,
  • 多肽药物质控丨当混合多肽遇见蛋白质测序仪
    在多肽类药物的生产质控中,氨基酸序列的测定是必不可少的检测项目。对于常规组成单一的合成多肽药物来说,氨基酸序列的分析较为简单,可通过Edman降解法或质谱法进行测定,其中Edman降解法被认为更加直接可靠。但对于组成复杂的混合多肽药物来说,比如,醋酸格拉替雷(Glatiramer acetate,简写为GA),由于多肽组成形式复杂多变,可能具有超过一万亿个不同序列的独特多肽,如果对每种多肽成分的氨基酸序列进行精确测定,似乎既不可能,其实也无必要,我们需要考虑新的方法对混合多肽进行整体表征。 n 快速了解醋酸格拉替雷醋酸格拉替雷是一种人工合成的多肽类制剂,由Glu(谷氨酸)、Ala(丙氨酸)、Tyr(酪氨酸)和Lys(赖氨酸)四种氨基酸随机聚合而成,原研药由以色列药厂TEVA研发制造(商品名Copaxone),于1996年获美国FDA核准用于治疗多发性硬化症(MS),其2020年全球销售额达到13.37亿美元,2021年7月,TEVA的“醋酸格拉替雷注射液”在中国的上市申请获得受理。多发性硬化症是一种常见的以中枢神经系统炎性脱髓鞘为主要特征的自身免疫性疾病,临床表现包括视物模糊,感觉、运动异常,智能、情感等高级功能障碍,在中青年人群中多发,且有较高致残率。醋酸格拉替雷被认为是通过改变造成MS发病机制的免疫过程而起作用的,其疗效与耐受性在临床上获得了十足的肯定。 醋酸格拉替雷是一种由Tyr、Lys、Glu、Ala随机聚合而成的多肽混合物(CAS号:147245-92-9) 醋酸格拉替雷的第一个仿制药Glatopa (由Sandoz 公司和 Momenta公司共同开发)于2015年上市,由于原研药的专利到期,未来将有更多的仿制药上市。 n 醋酸格拉替雷的合成与质量评估在醋酸格拉替雷的生产过程中,通过聚合及解聚反应,可以将其分子量控制在一个较窄的范围(平均分子量4700~11000 Da)。生产工艺的改变以及所用试剂的变化都有可能使药物的组分比例发生变化。利用Edman降解法,通过监测N端每一个循环的4种氨基酸的组成比例以及变化趋势,可以对药品质量进行评估。 岛津解决方案 l 蛋白质测序仪对醋酸格拉替雷进行质量评价的原理Edman降解法是进行N端氨基酸序列分析的经典方法,岛津以其为原理设计的全自动蛋白质测序仪(以下简称PPSQ),由液相系统和可执行自动化Edman降解反应的主机组成,将氨基酸从多肽链的N端依次切割下来,通过色谱的保留时间判定氨基酸种类,结果直接可靠。PPSQ除了对N端氨基酸序列进行定性分析外,利用液相色谱稳定的定量能力,还可以对多肽特定循环氨基酸的摩尔生成量及组成比例进行定量分析。 岛津在售蛋白质测序仪PPSQ-51/53A Edman降解反应图解 l 样品前处理取适量稀释后的样品加入经聚凝胺处理的玻璃纤维膜上,干燥后安装到PPSQ反应器上进行分析。实验仅作示例,共测试了3个批次的原研药Copaxone以及4个批次的某在研仿制药,每个批次测试N端前6个循环。 反应器构造图 l 实验结果 1)N端氨基酸组成定性分析醋酸格拉替雷原研药每个循环均检测到Glu、Ala、Tyr、Lys等4种氨基酸,这与药品由Glu、Ala、Tyr、Lys等4种氨基酸随机聚合而来,结果一致。 醋酸格拉替雷原研药Copaxone与某在研仿制药N端氨基酸分析色谱图示例(1-6循环)(黑色:原研药Copaxone;红色:某在研仿制药;DTT、DMPTU、DPTU为试剂峰) 2)各循环中每种氨基酸的相对摩尔含量的分析根据仪器自动生成的氨基酸生成量,计算每种氨基酸的摩尔含量,例如,Glu的相对摩尔含量为: 根据氨基酸的相对摩尔含量,绘制各循环中各氨基酸生成量的趋势图,如下。 醋酸格拉替雷Copaxone 与某在研仿制药N端前6个循环相对氨基酸水平分析(纵坐标:相对摩尔含量;横坐标:循环数) 3)原研药与某在研仿制药的比较从趋势图来看,仿制药各循环氨基酸生成量趋势,与原研药整体相似,但GA仿制药-批次1的Glu的相对含量略低,GA仿制药-批次4的各循环Tyr的相对含量略高,批次1中Glu的偏低与批次4中Tyr的偏高是否正常,需要对原研药进行多批次实验,以判断是否超出正常范围。GA仿制药-批次2及GA仿制药-批次3的Tyr生成量趋势与其他样品有明显不同,提示仿制药生产工艺可能存在与原研不同的地方。 结 语通过醋酸格拉替雷N端各氨基酸生成量的趋势变化的分析比较,可为仿制药的开发及生产质控提供参考,醋酸格拉替雷N端相对氨基酸水平分析亦可作为醋酸格拉替雷仿制药与原研药一致性评价的依据。这也为我们今后分析类似混合蛋白或多肽药物提供了参考思路。 参考文献:J. Andersona, C. Bell, et al., Demonstration of equivalence of a generic glatiramer acetate (Glatopa™ ), Journal of the Neurological Sciences 359 (2015) 24–34 撰稿人:顿俊玲 *本文内容非商业广告,仅供专业人士参考。
  • 华中农业大学262.00万元采购生物安全柜,离心机,细胞破碎仪,液相色谱仪,荧光显微镜,培养箱,凝胶...
    html, body { -webkit-user-select: text } * { padding: 0 margin: 0 } .web-box { width: 100% text-align: center } .wenshang { margin: 0 auto width: 80% text-align: center padding: 20px 10px 0 10px } .wenshang h2 { display: block color: #900 text-align: center padding-bottom: 10px border-bottom: 1px dashed #ccc font-size: 16px } .site a { text-decoration: none } .content-box { text-align: left margin: 0 auto width: 80% margin-top: 25px text-indent: 2em font-size: 14px line-height: 25px } .biaoge { margin: 0 auto /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 25px } .table_content { border-top: 1px solid #e0e0e0 border-left: 1px solid #e0e0e0 font-family: Arial /* width: 643px */ width: 100% margin-top: 10px margin-left: 15px } .table_content tr td { line-height: 29px } .table_content .bg { background-color: #f6f6f6 } .table_content tr td { border-right: 1px solid #e0e0e0 border-bottom: 1px solid #e0e0e0 } .table-left { text-align: left padding-left: 20px } 详细信息 华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目公开招标公告 湖北省-武汉市-洪山区 状态:公告 更新时间: 2023-11-10 华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目公开招标公告 项目概况 华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目 招标项目的潜在投标人应在阳光招采电子招标投标交易平台(网址:https://www.yangguangzhaocai.com/)获取招标文件,并于2023年12月01日 09点30分(北京时间)前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目编号:ZB0101-202311-ZCHW1503 项目名称:华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目 预算金额:262.000000 万元(人民币) 最高限价(如有):262.000000 万元(人民币) 采购需求: 投标人报价不得超过各产品单价限价及总价限价。 序号 名称 数量 单价限价 (万元) 是否接受进口 核心产品 1 高速台式冷冻离心机 3台 4 否 / 2 二氧化碳培养箱I 4台 4.5 是 / 二氧化碳培养箱II 2台 4.5 否 / 3 PCR仪(三槽基因扩增仪) 2套 13.5 是 / 4 倒置荧光显微镜 1套 35 是 / 5 全自动蛋白质印迹定量分析系统 双层全温振荡器 1套 5 否 / 6 全自动发酵系统 3套 16 否 / 7 落地高速冷冻离心机 1套 12.2 否 / 8 高压细胞破碎机 1套 12 否 / 9 膜分离系统 1套 4.5 否 / 10 液相色谱 1套 47.5 是 是 11 台式冷冻离心机 2台 5 是 / 12 生物安全柜 2套 5.9 否 / 13 蛋白凝胶成像系统 1套 10 否 / 合同履行期限:交货期:合同签订后120天内提交产品,货物抵达采购人所在地后7个工作日内中标人的工程师到现场与采购人共同开箱验货,并在30个工作日内完成安装调试工作。质保期:自产品验收合格之日起2年。交货地点:华中农业大学指定地点。 本项目( 不接受 )联合体投标。 二、申请人的资格要求: 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定; 2.落实政府采购政策需满足的资格要求: 本政府采购项目非专门面向中小企业,即小微企业参与本项目可享受政府采购中小企业扶持政策,本项目企业划分标准所属行业为“工业”(如投标人提供的货物全部由符合政策要求的小微企业制造,则需提供相应中小企业声明函)。 3.本项目的特定资格要求:3.1单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人,不得参加本项目同一合同项下的政府采购活动。为本采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的,不得再参加本项目的其他招标采购活动;3.2投标人未被列入“信用中国”网站(www.creditchina.gov.cn)失信被执行人、重大税收违法失信主体、政府采购严重违法失信行为记录名单和“中国政府采购”网站(www.ccgp.gov.cn)政府采购严重违法失信行为记录名单(以评审现场查询结果为准);3.3 若投标人提供的产品为进口产品,且不是投标人生产或拥有的,则必须取得制造商提供的正式授权书。 三、获取招标文件 时间:2023年11月10日 至 2023年11月17日,每天上午8:00至12:00,下午12:00至17:00。(北京时间,法定节假日除外) 地点:阳光招采电子招标投标交易平台(网址:https://www.yangguangzhaocai.com/) 方式:3.1拟参加本项目的投标人须在阳光招采电子招标投标交易平台https://www.yangguangzhaocai.com/。点击 “新用户注册”免费注册(具体操作详见---帮助中心---投标人注册、投标人线上支付下载文件); 3.2完成注册后,通过互联网访问电子交易平台,点击“投标人”登录,在“公告信息—采购公告”菜单付费下载拟投标段招标文件(拟投多标段的,应按标段分别下载),400元,售后不退。 3.3本项目不是全流程电子标,投标人无需办理CA数字证书; 3.4使用电子交易平台时遇到的各类操作问题(登录、企业注册认证、报名购标等问题),可拨打咨询电话010-21362559(工作日:08:00-18:00;节假日:09:00-12:00,14:00-18:00); 3.5注册企业信息将在工作日2小时左右审核,审核进度问题咨询电话:027-87272708;对本项目的具体业务问题,请向采购代理机构项目经理进行咨询。 售价:¥400.0 元,本公告包含的招标文件售价总和 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 提交投标文件截止时间:2023年12月01日 09点30分(北京时间) 开标时间:2023年12月01日 09点30分(北京时间) 地点:投标人应在响应截止时间前到开标现场递交密封的投标文件。接收投标文件地址:湖北国华项目管理咨询有限公司(武昌区中北路109号中铁1818中心10楼) 2 号会议室。五、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜 1.信息发布媒体 1.1中国政府采购网(http://www.ccgp.gov.cn/) 1.2湖北国华项目管理咨询有限公司网(http://www.hbghzb.com/) 1.3阳光招采电子招标投标交易平台(https://www.yangguangzhaocai.com/) 2.质疑:投标人认为招标文件、招标过程和中标结果使自己的权益受到损害的,可以在知道或者应知其权益受到损害之日起7个工作日内,针对同一环节一次性向采购人、采购代理机构提出质疑。质疑时请提交书面质疑函一份(法定代表人或其授权代表签名、加盖单位公章),并附相关证据材料。 3.政府采购相关政策执行:落实政府采购强制、优先采购节能产品政策;政府采购优先采购环保产品政策;政府采购促进中小企业发展(监狱企业、残疾人福利性单位视同小微企业)等政策。 七、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称:华中农业大学 地址:武汉市洪山区狮子山街一号 联系方式:许老师027-87282631 2.采购代理机构信息 名 称:湖北国华项目管理咨询有限公司 地 址:武汉市武昌区中北路109号中铁1818中心10楼 联系方式:周梦伊、宋黎明、王刚、汪树新、余轶菲027-87272718 3.项目联系方式 项目联系人:周梦伊、宋黎明、王刚、汪树新、余轶菲 电 话: 027-87272718 × 扫码打开掌上仪信通App 查看联系方式 $('.clickModel').click(function () { $('.modelDiv').show() }) $('.closeModel').click(function () { $('.modelDiv').hide() }) 基本信息 关键内容:生物安全柜,离心机,细胞破碎仪,液相色谱仪,荧光显微镜,培养箱,凝胶成像系统,PCR 开标时间:2023-12-01 09:30 预算金额:262.00万元 采购单位:华中农业大学 采购联系人:点击查看 采购联系方式:点击查看 招标代理机构:湖北国华项目管理咨询有限公司 代理联系人:点击查看 代理联系方式:点击查看 详细信息 华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目公开招标公告 湖北省-武汉市-洪山区 状态:公告 更新时间: 2023-11-10 华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目公开招标公告 项目概况 华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目 招标项目的潜在投标人应在阳光招采电子招标投标交易平台(网址:https://www.yangguangzhaocai.com/)获取招标文件,并于2023年12月01日 09点30分(北京时间)前递交投标文件。 一、项目基本情况 项目编号:ZB0101-202311-ZCHW1503 项目名称:华中农业大学产教融合创新平台设备购置项目第十六批全自动蛋白质印迹定量分析系统等设备采购项目 预算金额:262.000000 万元(人民币) 最高限价(如有):262.000000 万元(人民币) 采购需求: 投标人报价不得超过各产品单价限价及总价限价。 序号 名称 数量 单价限价 (万元) 是否接受进口 核心产品 1 高速台式冷冻离心机 3台 4 否 / 2 二氧化碳培养箱I 4台 4.5 是 / 二氧化碳培养箱II 2台 4.5 否 / 3 PCR仪(三槽基因扩增仪) 2套 13.5 是 / 4 倒置荧光显微镜 1套 35 是 / 5 全自动蛋白质印迹定量分析系统 双层全温振荡器 1套 5 否 / 6 全自动发酵系统 3套 16 否 / 7 落地高速冷冻离心机 1套 12.2 否 / 8 高压细胞破碎机 1套 12 否 / 9 膜分离系统 1套 4.5 否 / 10 液相色谱 1套 47.5 是 是 11 台式冷冻离心机 2台 5 是 / 12 生物安全柜 2套 5.9 否 / 13 蛋白凝胶成像系统 1套 10 否 / 合同履行期限:交货期:合同签订后120天内提交产品,货物抵达采购人所在地后7个工作日内中标人的工程师到现场与采购人共同开箱验货,并在30个工作日内完成安装调试工作。质保期:自产品验收合格之日起2年。交货地点:华中农业大学指定地点。 本项目( 不接受 )联合体投标。 二、申请人的资格要求: 1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定; 2.落实政府采购政策需满足的资格要求: 本政府采购项目非专门面向中小企业,即小微企业参与本项目可享受政府采购中小企业扶持政策,本项目企业划分标准所属行业为“工业”(如投标人提供的货物全部由符合政策要求的小微企业制造,则需提供相应中小企业声明函)。 3.本项目的特定资格要求:3.1单位负责人为同一人或者存在直接控股、管理关系的不同投标人,不得参加本项目同一合同项下的政府采购活动。为本采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的,不得再参加本项目的其他招标采购活动;3.2投标人未被列入“信用中国”网站(www.creditchina.gov.cn)失信被执行人、重大税收违法失信主体、政府采购严重违法失信行为记录名单和“中国政府采购”网站(www.ccgp.gov.cn)政府采购严重违法失信行为记录名单(以评审现场查询结果为准);3.3 若投标人提供的产品为进口产品,且不是投标人生产或拥有的,则必须取得制造商提供的正式授权书。 三、获取招标文件 时间:2023年11月10日 至 2023年11月17日,每天上午8:00至12:00,下午12:00至17:00。(北京时间,法定节假日除外) 地点:阳光招采电子招标投标交易平台(网址:https://www.yangguangzhaocai.com/) 方式:3.1拟参加本项目的投标人须在阳光招采电子招标投标交易平台https://www.yangguangzhaocai.com/。点击 “新用户注册”免费注册(具体操作详见---帮助中心---投标人注册、投标人线上支付下载文件); 3.2完成注册后,通过互联网访问电子交易平台,点击“投标人”登录,在“公告信息—采购公告”菜单付费下载拟投标段招标文件(拟投多标段的,应按标段分别下载),400元,售后不退。 3.3本项目不是全流程电子标,投标人无需办理CA数字证书; 3.4使用电子交易平台时遇到的各类操作问题(登录、企业注册认证、报名购标等问题),可拨打咨询电话010-21362559(工作日:08:00-18:00;节假日:09:00-12:00,14:00-18:00);3.5注册企业信息将在工作日2小时左右审核,审核进度问题咨询电话:027-87272708;对本项目的具体业务问题,请向采购代理机构项目经理进行咨询。 售价:¥400.0 元,本公告包含的招标文件售价总和 四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点 提交投标文件截止时间:2023年12月01日 09点30分(北京时间) 开标时间:2023年12月01日 09点30分(北京时间) 地点:投标人应在响应截止时间前到开标现场递交密封的投标文件。接收投标文件地址:湖北国华项目管理咨询有限公司(武昌区中北路109号中铁1818中心10楼) 2 号会议室。 五、公告期限 自本公告发布之日起5个工作日。 六、其他补充事宜 1.信息发布媒体 1.1中国政府采购网(http://www.ccgp.gov.cn/) 1.2湖北国华项目管理咨询有限公司网(http://www.hbghzb.com/) 1.3阳光招采电子招标投标交易平台(https://www.yangguangzhaocai.com/) 2.质疑:投标人认为招标文件、招标过程和中标结果使自己的权益受到损害的,可以在知道或者应知其权益受到损害之日起7个工作日内,针对同一环节一次性向采购人、采购代理机构提出质疑。质疑时请提交书面质疑函一份(法定代表人或其授权代表签名、加盖单位公章),并附相关证据材料。 3.政府采购相关政策执行:落实政府采购强制、优先采购节能产品政策;政府采购优先采购环保产品政策;政府采购促进中小企业发展(监狱企业、残疾人福利性单位视同小微企业)等政策。 七、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。 1.采购人信息 名 称:华中农业大学 地址:武汉市洪山区狮子山街一号 联系方式:许老师027-87282631 2.采购代理机构信息 名 称:湖北国华项目管理咨询有限公司 地 址:武汉市武昌区中北路109号中铁1818中心10楼 联系方式:周梦伊、宋黎明、王刚、汪树新、余轶菲027-87272718 3.项目联系方式 项目联系人:周梦伊、宋黎明、王刚、汪树新、余轶菲 电 话: 027-87272718
  • 大会报告:蛋白质组学技术的最新研究进展
    仪器信息网讯,2010年5月15日,蛋白质组数据处理暨全国生物质谱学术交流会”在云南省丽江市召开。会议为期两天,主要讨论了蛋白质组学技术和应用、数据挖掘和生物质谱等方面的现状及其进展。在所有的大会报告中,除一些关于蛋白质组学技术最新研究进展的大会特邀报告外,第一天的专家报告集中讨论了糖蛋白组的最新分析技术与研究进展,第二天的报告集中讨论了蛋白质数据处理技术,包括蛋白质组生物数据库及分析平台的构建、数据统计分析方法的研究等方面。   近年来蛋白质组学发展迅速,其相应的方法学研究也取得了巨大的进步,一系列新技术融入了的蛋白质组学技术当中,极大的促进了这门学科的发展。在本届大会上,中国科学院北京基因组研究所的刘斯奇研究员、复旦大学的张祥民教授、中国科学院大连化学物理研究所张丽华研究员等专家的报告介绍了许多应用到蛋白质组学之中的新技术、新方法,本文作简要概述:   报告题目:基于质谱的线粒体GST蛋白质组定性和定量分析   报告人:中国科学院北京基因组研究所的刘斯奇研究员 刘斯奇研究员   刘斯奇研究员在报告中首次提出了“线粒体GSTs蛋白质组”的概念,系统地研究了属肝线粒体中的GSTs。可采用亲和色谱法及SDS-PAGE富集GST蛋白,使用MALDI Tof/Tof MS 和LC tandem MS/MS鉴别蛋白。研究结果表明,属肝线粒体中存在5种GSTs,分别为GSTA3, GSTM1, GSTP1, GSTK1 以及GSTZ1。   为了对线粒体GSTs的相对丰度进行定量分析,其采用了质谱结合免疫印迹的综合分析方法:利用质谱对GSTs进行定性分析时,根据质谱谱图的多反应监测(MRM)推断GSTs结构 使用重组的GST蛋白作为标准物,建立了蛋白浓缩物的线性回归方程和胰蛋白酶GST多肽的MS/MS强度,同时,通过校准估算出了鼠肝线粒体中的GSTs含量。通过对特定GSTs抗体的强度识别,使用免疫印迹对GSTs进行了定量分析 获得了GST重组蛋白的5种单克隆抗体,将其用于GST浓度校准和免疫印迹强度分析 通过免疫印迹分析获得的定性分析结果基本与MRM数据获得的结果一致。   报告题目:蛋白质水平的色谱分离与生物质谱鉴定新方法研究   报告人:复旦大学张祥民教授 张祥民教授   张祥民教授在报告中表示,蛋白质的分离鉴定有更多困难。一方面,蛋白质分子量大,结构与构型上的变化导致分离效率下降,对色谱填料的孔径、分布与非特异性吸附等因素有更高要求 另一方面,蛋白质鉴定需要先进行酶解以得到质谱鉴定信息。   在报告中,他给出了较好的解决方法,通过对液相色谱分离系统的优化,在实际蛋白质样品考察优化了系统的分离性能,构建了液相色谱分离蛋白质鉴定方法与平台。研制了蛋白水平富集预柱,并将其应用于蛋白质捕集。在离子交换色谱柱和反向色谱优化选择上,实现了蛋白质分析所需的高分辨分离。色谱分离组分点样至靶板上,利用发展的快速酶解技术完成蛋白质酶解,再通过MALDI-TOFTOFMS或LC-LTQMS进行蛋白质鉴定。该方法使得蛋白质的理论分离能力达到5000个以上,蛋白质组分能够得到浓度信息,质谱鉴定可以同时利用肽指纹图谱PMFs信息和串级序列信息,使得蛋白质鉴定的可靠性大为提高。   报告题目:基于离子液体的新型膜蛋白质组预处理及分离鉴定技术   报告人:中国科学院大连化学物理研究所张丽华研究员 张丽华研究员   膜蛋白质存在于细胞内环境、细胞与细胞外环境的界面,对执行细胞内外物质交换、信息转换、细胞识别、代谢调节、免疫应答等功能起着重要作用。深入开展膜蛋白质组学研究对于揭示细胞功能、寻找药物靶点以及研制癌症治疗药物等具有重要意义。然而,由于膜蛋白质具有疏水性强、溶解性差、易沉淀、难酶解、含量低等特点,因此在采用通常用于可溶性蛋白质组分离鉴定的方法对膜蛋白质组进行研究时遇到了很大的挑战。   张丽华研究员在报告中指出,要提高膜蛋白质组的分析能力,必须发展可显著改善膜蛋白质组溶解性,又不影响后续分离鉴定的新方法。她在近期研究工作中,采用离子液体作为膜蛋白质组的增溶剂,并结合纳升二维液相色谱-质谱联用系统,对鼠脑和人肝内质网提取的膜蛋白质进行了分析。结果表明,离子液体不仅可以提高膜蛋白的溶解性,而且不用影响后续酶解过程中酶的活性。此外,在样品进入质谱鉴定前,易于在除盐步骤去除,不会影响质谱鉴定。与其他膜蛋白质组研究中常用的增溶剂相比,离子液体在膜蛋白质组样品预处理中表现出明显的优势。
  • 赛默飞将携多款新品亮相第八届中国蛋白质组学大会
    2013年9月5日,中国上海&mdash &mdash 科学服务领域的世界领导者赛默飞世尔科技(以下简称:赛默飞)宣布将参加于2013年9月7日至10日在重庆举办的第八届中国蛋白质组学大会,并成为铂金级赞助商,这代表了赛默飞对该领域不断提升的重视程度。赛默飞将携几款最新产品出席本届大会,并着重展示在蛋白质组学研究领域的完整解决方案和领先技术。基于在分析测试领域的丰富经验和雄厚实力,赛默飞将始终致力于推动蛋白质组学研究的发展,促进人类健康事业蓬勃发展。 随着人类基因组计划的完成和功能基因组时代的到来,蛋白质结构与功能研究变得日趋重要。本届大会以&ldquo 人类蛋白质组计划:让人类更健康&rdquo 为主题,计划为生物化学与分子生物学、蛋白质组学等研究领域相关的仪器、设备、试剂和新技术提供绝佳的展示平台。 作为分析检测领域的领军者,赛默飞始终密切关注蛋白质组学、生物信息学等相关学科的动态与发展,并积极为蛋白质组学研究提供全球领先的整体解决方案,包括化学试剂、高效分离产品、色谱质谱技术、以及蛋白质组学数据处理软件产品等。借助此次蛋白质组学大会契机,赛默飞将展示Orbitrap Fusion Tribrid 液相色谱质谱仪、TSQ Quantiva三重四极杆质谱仪和TSQ Endura三重四极杆质谱仪等明星产品,旨在帮助该领域的研究人员大幅提高研究效率,助力应对蛋白质组学研究面临的挑战。 Orbitrap Fusion Tribrid 液相色谱质谱仪集成三种质量分析器:四极杆、Orbitrap和线性离子阱,为复杂生物样品提供无可比拟的分析深度。四极杆用于母离子选择,分辨率最高达0.4 amu,具有出色的灵敏度和选择性。超高场Orbitrap拥有超过450,000的分辨率和15 Hz的扫描速率,以及无法逾越的分析选择性和速度。而多极杆离子回旋通道及双压线性离子阱则提供 MSn HCD、CID和ETD裂解,同步的母离子选择增强仪器信噪比。 TSQ Quantiva三重四极杆质谱仪利用主动离子管控技术(Active Ion Management) 优化离子生成及从离子源至检测器的传输,最终获得极限灵敏度。与市场上最高端的三重四级杆质谱相比,灵敏度的提高改善了诸如肽段定量、复杂生物样本分析等应用领域的结果。 TSQ Endura三重四极杆质谱仪拥有TSQ Quantiva MS的多项先进技术,与同类其他竞争仪器相比具有更长运行时间。其设计用于痕量水平定量,如食品检验、环境分析和DMPK等应用领域。 Pierce G2 Fast Blotter 转印系统将高性能与高速度相结合,能实现分子量为10-300 kDa 的蛋白质从凝胶到印迹膜的快速、高效转移。 仅需5至10 分钟,且转印前无需对凝胶进行平衡处理。可兼容不同品牌的预制 SDS-PAGE 凝胶和常规自制凝胶。 MYECL Imager 成像系统只需轻轻一点便可完成化学发光、凝胶成像。同时还兼具强大的文件管理系统,令人惊叹的高灵敏度,简单、快捷、直观、轻便、小巧。 F1-ClipTip移液系统采用舒适的人体工效学设计,移液器重量显著减轻,120° 可旋转舒适靠指,拥有专利设计超强吹出以及轻触吸头推杆,量程锁定设计。 更多关于赛默飞参加第八届中国蛋白质组学大会的信息,请点击:活动专题网页 http://www.thermo.com.cn/CNHUPO2013 关于中国蛋白质组学大会 中国蛋白质组学大会由中国生物化学与分子生物学会蛋白质组学专业委员会(CNHUPO)主办,军事医学科学院放射与辐射医学研究所、重庆医科大学、蛋白质组学国家重点实验室、北京蛋白质组研究中心共同承办,旨在积极促进蛋白质组学的研究与发展,增进国际间合作与交流。大会至今已经成功举办了七届,邀请众多国际蛋白质组领域杰出科学家出席,汇聚国内蛋白质组和功能基因组学研究领域的著名科学家和研究团队。 关于赛默飞世尔科技 赛默飞世尔科技(纽约证交所代码: TMO)是科学服务领域的世界领导者。我们的使命是帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。公司年销售额130亿美元,员工约39,000人。主要客户类型包括:医药和生物技术公司、医院和临床诊断实验室、大学、科研院所和政府机构,以及环境与过程控制行业。借助于Thermo Scientific、Fisher Scientific和Unity&trade Lab Services三个首要品牌,我们将创新技术、便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合,为客户、股东和员工创造价值。我们的产品和服务帮助客户解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战,促进医疗诊断发展、提高实验室生产力。欲了解更多信息,请浏览公司网站:www.thermofisher.com 关于赛默飞世尔科技中国 赛默飞世尔科技进入中国发展已有30多年,在中国的总部设于上海,并在北京、广州、香港、台湾、成都、沈阳、西安、南京、武汉等地设立了分公司,员工人数超过2400名。我们的产品主要包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等,提供实验室综合解决方案,为各行各业的客户服务。为了满足中国市场的需求,现有5家工厂分别在上海、北京和苏州运营。我们在北京和上海共设立了5个应用开发中心,将世界级的前沿技术和产品带给国内客户,并提供应用开发与培训等多项服务;位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术,研发适合中国的技术和产品;我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队,在全国有超过400 名经过培训认证的、具有专业资格的工程师提供售后服务。我们致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。欲了解更多信息,请登录网站:www.thermofisher.cn
  • 赛默飞将携多款新品亮相第八届中国蛋白质组学大会
    2013年9月5日,中国上海 &mdash &mdash 科学服务领域的世界领导者赛默飞世尔科技(以下简称:赛默飞)宣布将参加于2013年9月7日至10日在重庆举办的第八届中国蛋白质组学大会,并成为铂金级赞助商,这代表了赛默飞对该领域不断提升的重视程度。赛默飞将携几款最新产品出席本届大会,并着重展示在蛋白质组学研究领域的完整解决方案和领先技术。基于在分析测试领域的丰富经验和雄厚实力,赛默飞将始终致力于推动蛋白质组学研究的发展,促进人类健康事业蓬勃发展。   随着人类基因组计划的完成和功能基因组时代的到来,蛋白质结构与功能研究变得日趋重要。本届大会以&ldquo 人类蛋白质组计划:让人类更健康&rdquo 为主题,计划为生物化学与分子生物学、蛋白质组学等研究领域相关的仪器、设备、试剂和新技术提供绝佳的展示平台。   作为分析检测领域的领军者,赛默飞始终密切关注蛋白质组学、生物信息学等相关学科的动态与发展,并积极为蛋白质组学研究提供全球领先的整体解决方案,包括化学试剂、高效分离产品、色谱质谱技术、以及蛋白质组学数据处理软件产品等。借助此次蛋白质组学大会契机,赛默飞将展示Orbitrap Fusion Tribrid 液相色谱质谱仪、TSQ Quantiva三重四极杆质谱仪和TSQ Endura三重四极杆质谱仪等明星产品,旨在帮助该领域的研究人员大幅提高研究效率,助力应对蛋白质组学研究面临的挑战。   Orbitrap Fusion Tribrid 液相色谱质谱仪集成三种质量分析器:四极杆、Orbitrap和线性离子阱,为复杂生物样品提供无可比拟的分析深度。四极杆用于母离子选择,分辨率最高达0.4 amu,具有出色的灵敏度和选择性。超高场Orbitrap拥有超过450,000的分辨率和15 Hz的扫描速率,以及无法逾越的分析选择性和速度。而多极杆离子回旋通道及双压线性离子阱则提供 MSn HCD、CID和ETD裂解,同步的母离子选择增强仪器信噪比。   TSQ Quantiva三重四极杆质谱仪利用主动离子管控技术(Active Ion Management) 优化离子生成及从离子源至检测器的传输,最终获得极限灵敏度。与市场上最高端的三重四级杆质谱相比,灵敏度的提高改善了诸如肽段定量、复杂生物样本分析等应用领域的结果。   TSQ Endura三重四极杆质谱仪拥有TSQ Quantiva MS的多项先进技术,与同类其他竞争仪器相比具有更长运行时间。其设计用于痕量水平定量,如食品检验、环境分析和DMPK等应用领域。   Pierce G2 Fast Blotter 转印系统将高性能与高速度相结合,能实现分子量为10-300 kDa 的蛋白质从凝胶到印迹膜的快速、高效转移。 仅需5至10 分钟,且转印前无需对凝胶进行平衡处理。可兼容不同品牌的预制 SDS-PAGE 凝胶和常规自制凝胶。   MYECL Imager 成像系统只需轻轻一点便可完成化学发光、凝胶成像。同时还兼具强大的文件管理系统,令人惊叹的高灵敏度,简单、快捷、直观、轻便、小巧。   F1-ClipTip移液系统采用舒适的人体工效学设计,移液器重量显著减轻,120° 可旋转舒适靠指,拥有专利设计超强吹出以及轻触吸头推杆,量程锁定设计。   更多关于赛默飞参加第八届中国蛋白质组学大会的信息,请点击:活动专题网页http://www.thermo.com.cn/CNHUPO2013   关于中国蛋白质组学大会   中国蛋白质组学大会由中国生物化学与分子生物学会蛋白质组学专业委员会(CNHUPO)主办,军事医学科学院放射与辐射医学研究所、重庆医科大学、蛋白质组学国家重点实验室、北京蛋白质组研究中心共同承办,旨在积极促进蛋白质组学的研究与发展,增进国际间合作与交流。大会至今已经成功举办了七届,邀请众多国际蛋白质组领域杰出科学家出席,汇聚国内蛋白质组和功能基因组学研究领域的著名科学家和研究团队。   关于赛默飞世尔科技   赛默飞世尔科技(纽约证交所代码: TMO)是科学服务领域的世界领导者。我们的使命是帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。公司年销售额130亿美元,员工约39,000人。主要客户类型包括:医药和生物技术公司、医院和临床诊断实验室、大学、科研院所和政府机构,以及环境与过程控制行业。借助于Thermo Scientific、Fisher Scientific和Unity&trade Lab Services三个首要品牌,我们将创新技术、便捷采购方案和实验室运营管理的整体解决方案相结合,为客户、股东和员工创造价值。我们的产品和服务帮助客户解决在分析领域所遇到的复杂问题与挑战,促进医疗诊断发展、提高实验室生产力。欲了解更多信息,请浏览公司网站:www.thermofisher.com   关于赛默飞世尔科技中国   赛默飞世尔科技进入中国发展已有30多年,在中国的总部设于上海,并在北京、广州、香港、台湾、成都、沈阳、西安、南京、武汉等地设立了分公司,员工人数超过2400名。我们的产品主要包括分析仪器、实验室设备、试剂、耗材和软件等,提供实验室综合解决方案,为各行各业的客户服务。为了满足中国市场的需求,现有5家工厂分别在上海、北京和苏州运营。我们在北京和上海共设立了5个应用开发中心,将世界级的前沿技术和产品带给国内客户,并提供应用开发与培训等多项服务 位于上海的中国创新中心结合国内市场的需求和国外先进技术,研发适合中国的技术和产品 我们拥有遍布全国的维修服务网点和特别成立的中国技术培训团队,在全国有超过400 名经过培训认证的、具有专业资格的工程师提供售后服务。我们致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。欲了解更多信息,请登录网站www.thermofisher.cn
  • 赛默飞:蛋白质组学研究追求定量准确、深度分析及高通量
    p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(31, 73, 125) " 蛋白质是生理功能的执行者,是生命现象的直接体现者,对蛋白质结构和功能的研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。蛋白质组的研究不仅能为生命活动规律提供物质基础,也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。因此,蛋白质组学研究不仅是探索生命奥秘的必须工作,也能为人类健康事业带来巨大的利益。 /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(31, 73, 125) " 蛋白质组学研究需用到二维电泳和质谱技术等多种关键技术,此外,随着蛋白质组学研究的发展,高通量和高精度的蛋白质相互作用检测、蛋白质芯片的发展等更多新技术也逐步发展起来。 /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(31, 73, 125) " 为帮助从事相关研究的用户梳理蛋白质组学研究技术及方法,仪器信息网特别策划了 a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/dbzxyj" target=" _blank" span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(192, 0, 0) " strong span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai font-size: 18px " “蛋白质组学新技术、新方法” /span /strong /span /a 专题,并邀请赛默飞技术专家唐家澍分享了他的观点。 /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong 蛋白组学体现出三大应用倾向& nbsp /strong /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 蛋白质组学的研究对象非常广泛,从细胞系到模式动物乃至人群样品,都是典型的蛋白质组学研究对象。蛋白质组学可以为生物学和医学研究提供表达差异的变化,信号级联的传递以及蛋白质相互作用的时序以及空间调控等种种信息。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 近些年,蛋白质组学体现了几个重要的应用倾向, strong 一是作为常规手段越来越多的运用到生物学功能研究中,二是针对人群队列样本的多组学整合研究从而在大数据的指导下由相关性推导出新的诊断或是治疗靶点, 三是更加精细化的着眼于单细胞的研究,从而在肿瘤异质性以及抗体筛选等前沿领域发挥作用。 /strong /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 蛋白质和核酸以及小分子的最大不同在于以下几点:& nbsp /strong /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " (1)蛋白质含量动态范围大,且蛋白质不能像DNA一样进行扩增 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " (2)蛋白质存在广泛的翻译后修饰和选择性剪切; /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " (3)蛋白质之间存在非常复杂的相互作用网络来执行生理功能。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" color: rgb(0, 112, 192) " strong 因此可见目前蛋白质组学面临的主要挑战在于:& nbsp /strong /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " (1)足够的分析速度以应对越来越大规模的队列研究 & nbsp /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " (2)足够的分析深度以实现对全蛋白质组乃至修饰组的更深度覆盖 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " (3)定量分析的质量以提供更加准确的表达差异的信息。& nbsp /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 所以, strong 当定量准确、深度分析和更高通量得以同时实现,那么无疑就是占领了蛋白质组学研究的制高点。 /strong /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " span style=" color: rgb(192, 0, 0) " strong 从质谱采集到数据分析& nbsp 赛默飞方案覆盖蛋白质组学分析全流程 /strong /span /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " ThermoFisher作为蛋白质组学的研究的领先企业,可为蛋白质组学研究提供丰富的解决方案。在定量蛋白质组学领域,ThermoFisher提供了丰富的工作模式,包括基于体外化学标记的TMT技术,用于大队列研究的DIA模式以及兼具灵敏度和高通量的SureQuant靶向定量流程以应对不同的应用场景。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 在更新兴的结构生物学领域,ThermoFisher提供了更为丰富的武器,例如化学交联质谱技术用于研究蛋白质相互作用和为蛋白质结构解析提供辅证,氢氘交换质谱用于研究蛋白质二维构象,非变性质谱用于研究蛋白质及复合物的高维结构,更有UHMR质谱使得直接分析MDa级分子量的完整病毒颗粒成为可能。 /p p style=" text-align: center" a href=" https://www.instrument.com.cn/netshow/SH100244/C242497.htm" target=" _blank" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 332px height: 340px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/52b82a64-fb40-43f2-89b4-ebcd2fa541d7.jpg" title=" 图片1.png" alt=" 图片1.png" width=" 332" height=" 340" / /a /p p style=" margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em text-indent: 0em text-align: center " a href=" https://www.instrument.com.cn/netshow/SH100244/C242497.htm" target=" _blank" 赛默飞EASY-nLC 1200纳升级UHPLC /a /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 为了使客户能够更加系统和深入的理解复杂的蛋白质组学,ThermoFisher也提供了业内最为专业和全面的培训服务体系。从样品前处理,质谱采集,数据分析到生物信息学和实验室质控流程建立,ThermoFisher一直致力于帮助客户顺利的克服研究过程所遇到的技术问题。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " Orbitrap质谱+TMT技术& nbsp 实现深度和高通量研究 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " ThermoFisher的Oribitrap系列质谱一直是蛋白质组学研究的金标准。其具有的高分辨,高灵敏度和高可靠性使得绝大多数发表于CNS等顶刊的蛋白质组学研究工作都不约而同的选择该系列仪器。Orbitrap系列质谱仪将蛋白质的定性和定量实现了完美的统一。2019年ASMS上发布的全新平台的Orbitrap Exploris 480更是将仪器的性能推向了一个全新的高度。 span style=" text-align: center text-indent: 0em " & nbsp /span /p p style=" text-align: center" a href=" https://www.instrument.com.cn/netshow/sh100244/C333158.htm" target=" _blank" img style=" max-width: 100% max-height: 100% width: 316px height: 316px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/cd501f99-31ee-43df-8c20-d4cfae91ec73.jpg" title=" 图片2.png" alt=" 图片2.png" width=" 316" height=" 316" border=" 0" vspace=" 0" / /a /p p style=" margin: 10px 0px padding: 0px text-align: center background: rgb(255, 255, 255) text-indent: 2em line-height: 1.5em " a href=" https://www.instrument.com.cn/netshow/sh100244/C333158.htm" target=" _blank" 赛默飞Orbitrap Exploris 480 高分辨质谱仪 /a /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 回到我们上面所提到的定量准确,分析深度和通量的问题上,Orbitrap质谱结合多标TMT技术一直被广泛应用于定量蛋白质组学研究中。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " TMT标记试剂采用了巧妙的化学结构使得其可以在一针采集中同时分析多达11个样本。而TMT技术带来的不仅仅是分析通量的提高,将11个样本标记后同时分析实际上是提供了一个封闭的定量环境,以完全消除在前处理过程和质谱分析时可能产生的定量误差。传统基于非标记定量的策略则在定量准确性方面存在先天的劣势。除此之外,在TMT标记实验中为了得到更深的蛋白质组覆盖以及对修饰组的研究,研究者们通常还可以结合肽段分级或是修饰肽段富集等策略,以满足丰富多样的研究需求。 /p p style=" text-indent: 2em margin-top: 10px margin-bottom: 10px line-height: 1.5em " 在2020年ThermoFisher发布了TMTpro 16通道标记技术, 将TMT标记技术推向了新的高度,该技术已于今年3月份在Nature methods上发表。该技术刚发布便在实际的科研工作中体现了无与伦比的价值。中国西湖大学的科学家利用Orbitrap结合TMT标记技术,并结合代谢组学的数据,发现了COVID-19的病人血清中的潜在靶点,有望为预测轻症患者向重症发展提供导向。相信在往后的科研工作,尤其是基于大队列的精准医学研究中,Orbitrap结合TMTpro标记技术将会极大程度的助力广大科研人员取得更多等显著的成果。 /p
  • 赛默飞世尔科技的视频文章展示蛋白质定量的创新方法 —NanoDrop 2000c
    WILMINGTON, Del. (2010年5月4日) &mdash 全球科学服务领域的领导者赛默飞世尔科技今天宣布,NanoDrop 2000c UV-Vis分光光度计显著改进了蛋白质定量分析过程。蛋白质定量是任何实验室工作流程中不可或缺的一部分,该流程还包括了蛋白质的提取、纯化、标记和分析。 NanoDrop&trade 被确认为《蛋白质科学研究方法》(John Wiley & Sons)中微量蛋白质定量方法的一部分。《蛋白质科学研究方法》是蛋白质研究者公认的优秀参考资料。基于这些方法所创建的全新视频文章证实了如何利用Thermo Scientific NanoDrop 2000c在5秒内准确测量2µ L蛋白质样品。若要观看此视频文章,请访问www.jove.com/index/Details.stp?ID=1610 科学家们往往选择分光光度计作为测量蛋白质浓度的方法。有多种方法可以用于确定蛋白质浓度,包括A280吸光度读数和BCA比色测定(BCA蛋白定量试剂盒)。方法的选择取决于所需准确度和蛋白质样品量与纯度。 传统分光光度计要求将样品放入比色皿,由此带来额外的稀释步骤,也可能引入潜在的误差。NanoDrop 2000c分光光度计利用创新样品保持系统,可将微量蛋白质样品保持在两个测量表面之间,无需稀释即可定量分析2µ L蛋白质样品。比色皿的淘汰允许光程的实时变化,可减少测量时间并增加可测蛋白质浓度的动态范围。 赛默飞世尔的全新视频文章介绍了一种可替代传统蛋白质定量方法(A280吸光度读数和BCA比色测定)的创新方法。该视频详细描述了每个方法的详细步骤,并展示了如何利用NanoDrop 2000c快速而轻松的进行蛋白质定量分析。 关于Thermo Fisher Scientific(赛默飞世尔科技) 赛默飞世尔科技 (Thermo Fisher Scientific)(纽约证交所代码:TMO)是全球科学服务领域的领导者,致力于帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全。公司年销售额超过100亿美元,拥有员工约3万5千人,在全球范围内服务超过35万家客户。主要客户类型包括:医药和生物公司,医院和临床诊断实验室,大学、科研院所和政府机构,以及环境与工业过程控制装备制造商等。公司借助于Thermo Scientific和Fisher Scientific这两个主要的品牌,帮助客户解决在分析化学领域所遇到的从常规测试到复杂研发的各种挑战。Thermo Scientific能够为客户提供一整套包括高端分析仪器、实验室装备、软件、服务、耗材和试剂在内的实验室综合解决方案。Fisher Scientific为卫生保健、科学研究、安全和教育领域的客户提供一系列实验室装备、化学药品及其他用品和服务。赛默飞世尔科技将努力为客户提供最为便捷的采购方案,为科学研究的飞速发展不断改进工艺技术,提升客户价值,帮助股东提高收益,为员工创造良好的发展空间。更多信息,请浏览公司网站:www.thermofisher.com(英文) 或www.thermo.com.cn(中文)。
  • 新品上市——iBind蛋白印迹处理仪
    您是不是整天都在忙着做western blot? 你是不是感觉就像照顾婴儿一样小心翼翼的处理你的blot?步骤太多,你是不是经常忘记做了哪一步了?尽管如此,却还是经常得不到理想的实验结果。 如今,western blotting革命再次开启新的篇章。iBind蛋白印迹处理系统采用独特的SLF(sequential lateral flow)技术,打破传统手动方法的各种障碍,帮助您获得更佳的实验结果。 性能更优&mdash &mdash 相比手动方法,Western灵敏度更高,背景更低,大大节省抗体用量 自动化操作&mdash &mdash 加入试剂后就可以走开,自动化完成包括封闭、一抗孵育、二抗孵育和清洗等步骤 速度更快&mdash &mdash 将冗长的十几小时的操作流程缩短至2.5小时,无需过夜 无需电源或电池&mdash &mdash 小巧轻便,节省空间 了解更多,请登录 http://www.lifetechnologies.com/ibind 订购信息: 产品 规格 货号 iBind&trade 蛋白质印迹设备 1 device SLF1000 iBind&trade 卡片 10 cards SLF1010 iBind&trade 溶液试剂盒 1 Kit SLF1020 Novex® AP小鼠化学发光检测试剂盒 1 Kit SLF1021 Novex® AP兔化学发光检测试剂盒 1 Kit SLF1022 iBind&trade 蛋白质印迹起始套装 1 套 SLF1000S iBind&trade 蛋白质印迹设备4台 4 devices SLF10004PK Novex® ECL化学发光底物试剂盒 1 Kit WP20005 Novex® 山羊抗兔 (H+L),交叉吸附,HRP* 1 mg A16072 Novex® 山羊抗小鼠 (H+L),交叉吸附,HRP* 1 mg A16104 观看视频,请点击 http://v.youku.com/v_show/id_XNjA1MjY4MDEy.html
  • 基于离子淌度质谱对完整蛋白质形态进行非标记定量
    大家好,本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章,Improved Label-Free Quantification of Intact Proteoforms Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry [1],文章的通讯作者是美国俄克拉荷马大学的Luca Fornelli教授。完整proteoforms的非标记高通量定量方法的应用对象通常为从整个细胞或组织裂解物中提取的0 - 30 kDa质量范围内蛋白质。然而当前,即使通过高效液相色谱或毛细管电泳实现了proteoforms的高分辨率分离,可鉴定和定量的proteoforms的数量也不可避免地受到固有的样品复杂性的限制。近年来,随着质谱技术的发展,自上而下蛋白质组学质谱(top-down proteomics)研究中蛋白质的鉴定数量大大提升,生成了包含数万种proteoforms的数据集,但在proteoforms的量化能力方面并没有得到相应的性能提升。为克服这一问题,本文中作者通过应用场不对称离子迁移谱法(Field asymmetric ion mobility spectrometry, FAIMS)对大肠杆菌中的proteoforms进行了非标记定量。由此产生的改进允许在单次LC-MS实验中采用多个FAIMS补偿电压(Compensation voltages, C.V.),而不会增加整个数据采集周期。与传统的非标记定量实验相比,FAIMS的应用在不影响定量准确性的情况下,大大增加了鉴定和定量的proteoforms数量。首先,作者优化了质谱stepped-C.V.数据采集方法对Orbitrap Eclipse性能的影响,并从中筛选出了最优条件(−40、−20、0 V组合)。所有最新的基于Orbitrap的质谱仪(包括Exploris platform和Orbitrap Ascend)都可以采用single time-domain transients(即单次微扫描)在top down FTMS实验中生成高质量的质谱图。作者认为这对于在单次LC - MS2运行期间应用多个C.V.值的采集策略特别有益。接下来,作者应用该方法对大肠杆菌中的蛋白质进行了检测,并与传统的LC - MS2 DDA采集方法进行了比较(图1)。如图所示,每个C.V.值下的总离子流图都不同,且这一额外的分离导致在LB(Luria broth)和M9(醋酸钠处理)样品中鉴定到的proteoforms的数量显著提升。  图1. 样本制备方法和proteoforms鉴定结果总结虽然在LC-FAIMS和LC-only数据集中,大多数鉴定到的proteoforms质量都小于15 kDa,但其中约20%的质量大于18 kDa甚至高达33.3 kDa(图2)。对已鉴定的proteoforms列表的深入分析表明,达到鉴定低丰度proteoforms的关键参数之一是在串联质谱(MS2)中有足够的时间注入离子。  图2. A. FAIMS和非FAIMS鉴定到的proteoforms的质量分布。B. 鉴定到的proteoforms与注射时间之间的关系。最后,作者采用ProSight PD v 4.2 (Proteineous, Inc)进行了基于MS1的非标定量,结果显示基于FAIMS的数据集在LB样品(蓝色)和M9样品中检测到的差异表达的proteoforms均有所增加(图3)。作者评估了两个数据集之间的差异(使用和不使用FAIMS采集数据),以验证FAIMS的应用是否会对量化准确性产生不利影响,结果只有1个proteoform显示相互矛盾的丰度趋势。这种差异是由于该蛋白和一个共流出蛋白之间质谱峰几乎完全重叠造成的。它们具有非常接近的单同位素质量,这样高水平的信号干扰可以很容易地干扰基于MS1的量化。启用FAIMS可以使MS1谱图简化,因为两种proteoforms可以富集在两种不同的C.V. 值下。  图3. 大肠杆菌proteoforms无标记定量结果分析。作者将LC - FAIMS - MS2数据集与通过BUP在类似样品上获得的非标定量结果进行比较,得出两个主要的结论:1. BUP仍然对蛋白质组提供了更深层次的定量表征 2. BUP提供了与单个基因相关的所有产物的整体丰度水平信息 而TDP方法表明,给定的UniProt accession可以由多个差异表达的proteoforms组成,可能具有不同的行为(即在给定条件下,一些被上调,另一些被下调)。这一额外的信息可能具有潜在的生物学意义,但在基于BUP的定量分析中可能会被遗漏。本文描述的基于FAIMS的定量数据采集方法与PEPPI(Passively eluting proteins from polyacrylamide gels as intact species)蛋白分离技术完全兼容,产生0 - 30 kDa的组分,并且可以方便地根据待分析蛋白的平均质量调整质谱参数(C.V.值),未来在更大的蛋白质定量方面具有广阔的应用前景。  撰稿:张颖  编辑:李惠琳  原文:Kline JT, Belford MW, Huang J, Greer JB, Bergen D, Fellers RT, Greer SM, Horn DM, Zabrouskov V, Huguet R, Boeser CL, Durbin KR, Fornelli L. Improved Label-Free Quantification of Intact Proteoforms Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry. Anal Chem. 2023 Jun 13 95(23):9090-9096.  李惠琳课题组网址www.x-mol.com/groups/li_huilin  参考文献  1.Kline JT, Belford MW, Huang J, Greer JB, Bergen D, Fellers RT, Greer SM, Horn DM, Zabrouskov V, Huguet R, Boeser CL, Durbin KR, Fornelli L. Improved Label-Free Quantification of Intact Proteoforms Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry. Anal Chem. 2023 Jun 13 95(23):9090-9096.
  • 安捷伦科技公司就促进定量蛋白质组学解决方案与 MRM Proteomics 签订共同营销协议
    安捷伦科技公司就促进定量蛋白质组学解决方案与 MRM Proteomics 签订共同营销协议 2014 年 7 月 24 日,北京 — 安捷伦科技公司(纽约证交所:A)今日宣布延长与 MRM Proteomics Inc. 的共同营销协议。MRM Proteomics Inc. 是先进的蛋白质定量分析、生物标记物和蛋白质组学服务的领先供应商。这一协议将扩展双方于 2012 年建立的合作,并将支持双方共同开发的蛋白质组学解决方案,包括试剂盒、硬件和软件。 “MRM Proteomics 是开发基于质谱的蛋白质定量分析方法的先驱,同时也是制药和生物技术行业的领先技术供应商”,安捷伦生命科学研究团队营销总监 Steve Fischer说。“这一合作进一步印证了我们为新兴产业创建完整定量蛋白质组学解决方案的承诺。” 蛋白质组学的任务是研究蛋白质的结构和功能,以及它们在复杂的生物系统中如何发生相互作用。安捷伦的完整蛋白质组学工作流程采用了业界前所未有的“即插即用”式灵活设计,可提供业界最好的分析性能。可切换式工作流程能简化设置,让研究人员在不同的技术之间快速切换。Agilent 6495 三重四极杆 MS/MS 拥有业界最高的灵敏度和最高通量的定量分析性能,可使目标 MRM 多肽的定量分析达到埃摩尔的检测水平。 质谱领域正在不断扩展,满足基础蛋白质组学研究、生物标记物发现/验证及药物开发不断增长的需求。MRM Proteomics 专业从事于提供分析服务与试剂盒,利用同位素标记的内标通过 MRM-MS 系统进行复杂生物样品(如血液、脑脊髓液和尿液)中的蛋白质高度多重绝对定量分析。 “MRM Proteomics 非常高兴能扩展与安捷伦的互补合作伙伴关系,”MRM Proteomics 的首席科学官 Christoph Borchers 说。“安捷伦拥有高灵敏度的尖端质谱技术,是非常理想的合作伙伴。他们将和我们共同努力为靶向定量蛋白质组学提供完整的一站式解决方案。” 关于 MRM Proteomics MRM Proteomics 是面向制药、生物技术和诊断行业提供先进的蛋白质定量分析和蛋白质组学服务及试剂盒耗材的领导者。该公司通过 MRM-MS 进行靶向定量蛋白质组学分析的关键技术非常适合用于生物标记物发现/验证、临床研究、诊断和毒理学研究。要了解 MRM Proteomics 的信息,请访问 www.mrmproteomics.com。 关于安捷伦科技公司 安捷伦科技公司(纽约证交所:A) 是全球领先的测试测量公司,同时也是化学分析、生命科学、诊断、电子和通信领域的技术领导者。公司拥有 20600 名员工,遍及全球 100 多个国家,为客户提供卓越服务。在 2013 财年,安捷伦的净收入达到 68 亿美元。如欲了解关于安捷伦的详细信息,请访问:www.agilent.com.cn。 2013 年 9 月 19 日,安捷伦宣布将通过对旗下电子测量公司进行免税剥离,分拆为两家上市公司的计划。分拆后的电子测量公司命名为是德科技 (Keysight Technologies, Inc.),此次分拆预计将于 2014 年 11 月初完成。 编者注:更多有关安捷伦科技公司的技术、企业社会责任和行政新闻,请访问安捷伦新闻网站:www.agilent.com.cn/go/news。
  • 蛋白质分析仪的检测精度与影响因素
    蛋白质分析仪一种用于定量测定蛋白质含量的仪器,广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。检测精度是衡量蛋白质分析仪性能的重要指标,影响检测精度的因素有很多,本文将详细探讨这些因素及其对检测精度的影响。  一、检测精度的基本概念  检测精度是指仪器在测量过程中,测量值与真实值的一致程度。精度越高,说明测量结果越接近真实值。检测精度通常用相对误差、误差和标准偏差等指标来衡量。  二、影响检测精度的主要因素  1.仪器性能  -蛋白质分析仪的性能直接影响其检测精度。仪器的分辨率、灵敏度、线性范围和稳定性等参数对其精度有重要影响。高质量的仪器通常具有更高的检测精度。  2.操作规范  -操作规范与否对检测精度有很大影响。操作人员需严格按照仪器的操作规程进行操作,确保每一个步骤都符合要求,避免因操作不当引起的误差。  3.样品准备  -样品的准备工作,如样品的采集、处理和储存等,对检测精度也有重要影响。样品的代表性、纯净度和稳定性等因素都会影响较终的检测结果。  4.环境条件  -环境条件,如温度、湿度、气压和振动等,对检测精度有显著影响。仪器在不同的环境条件下可能表现出不同的性能,因此需要在适宜的环境下使用仪器,以确保检测精度。  5.校准与标定  -定期校准与标定是确保仪器检测精度的重要措施。通过校准,可以消除仪器在使用过程中由于漂移、老化等因素引起的误差,确保测量结果的准确性。  6.仪器维护  -仪器的日常维护与保养对检测精度也有重要影响。定期清洁、检查和更换仪器的易损部件,可以延长仪器的使用寿命,保持其良好的工作状态,从而提高检测精度。   三、提高检测精度的方法  1.选择高性能的仪器  -根据具体的检测需求,选择性能优良、精度高的仪器,以确保检测结果的准确性。  2.严格遵循操作规程  -操作人员需经过专业培训,掌握仪器的操作要领,严格按照操作规程进行操作,避免因操作不当引起的误差。  3.规范样品准备  -样品的采集、处理和储存需按照相关标准和规范进行,确保样品的代表性和稳定性,避免因样品问题引起的误差。  4.控制环境条件  -在使用仪器时,尽量选择适宜的环境条件,避免在异常环境下使用仪器,以确保检测精度。  5.定期校准与标定  -定期对仪器进行校准与标定,消除仪器漂移、老化等因素引起的误差,确保仪器的测量精度。  6.加强仪器维护  -定期对仪器进行清洁、检查和维护,确保仪器处于良好的工作状态,延长其使用寿命,提高检测精度。  总之,蛋白质分析仪的检测精度受多种因素的影响,通过科学合理的管理和操作,可以显著提高其检测精度和应用效果。在实际应用中,应根据具体情况,采取有效的措施,确保仪器的较佳性能和应用效果。
  • ​PACTS辅助热蛋白质分析用于肽-蛋白质相互作用研究
    大家好,本周为大家分享一篇发表在Analytical Chemistry上的文章,PACTS-Assisted Thermal Proteome Profiling for Use in Identifying Peptide-Interacting Proteins。该文章的通讯作者是来自北京蛋白质组学研究中心的贾辰熙和Chen Yali研究员。生物活性肽是一类重要的生物分子,通过与蛋白受体相互作用,参与调控多种生物学进程。研究肽-蛋白相互作用对于理解这些功能分子的调节机制至关重要。目前已开发多种方法用于表征肽-蛋白的相互作用,例如通过引入荧光探针在多肽上来监测蛋白-多肽的相互作用,或者将多肽固定在磁珠或其他载体材料上进行进一步的亲和沉淀。然而以上方法都需要对多肽进行修饰,导致多肽的结构发生改变,进一步影响多肽-蛋白相互作用,产生假阳性结果。细胞热转移变分析(CETSA)和热蛋白质组分析(TPP)作为一种无修饰/无标签技术已被广泛用蛋白-配体相互作用研究。当配体与蛋白结合后,蛋白的热稳定性发生了改变,导致熔解曲线(Melting cure)发生位移。通过监测熔解温度的变化(∆Tm),实现对蛋白-配体相互作用的检测。CETSA以及TPP允许在天然环境下研究分子互作,从而保留了内源性蛋白表达水平、翻译后修饰、局部微环境等生物物理特性。除了改变蛋白质的热稳定性,肽配体与蛋白质受体相互作用还会导致蛋白构象、疏水性和溶剂可及性的改变,一些配体甚至起到生物助溶的作用。所有这些特性的改变会导致研究体系中靶蛋白丰度的变化。这种由肽段配体结合诱导蛋白的丰度改变现象称之为PACTS。而PACTS也可以被合理的利用用于识别与肽段配体结合的靶蛋白。基于此,本文将PACTS与TPP技术相结合用于肽-蛋白质相互作用研究,PACTS可以辅助TPP分析,特别是在TPP分析过程中,由于配体-靶蛋白结合导致靶蛋白丰度降低至质谱检测限以下,无法绘制熔解曲线的情况下,PACTS可以作为另一个重要的监测手段。如图1所示,PACTS辅助TPP分析的实验流程大致如下:将蛋白提取液分成2份,分别与缓冲液(对照组)、肽配体(实验组)孵育,再将孵育后的每组样本等分成10份,在10个不同的温度下加热3 min。加热完成后,离心,收集上清液。利用SDS-PAGE将肽段与蛋白分离并进行胶内酶切。酶切后的肽段随即用TMT 10-plex标记,最后通过LC-MS/LS进行定量分析。将37 °C下对照组、实验组中同一蛋白的丰度变化作为PACTS的衡量指标(蓝框)。将在不同温度下蛋白的相对丰度变化转化为熔解曲线(黑框),实验组相较于对照组,同一蛋白熔解曲线的位移(∆Tm)作为TPP的衡量指标。综合两种方法识别出的靶标蛋白,作为最终的筛选结果。图1. PACTS辅助TPP分析的实验流程图作者首先用标准肽段-蛋白互作对验证了PACTS辅助TPP分析的可行性。如图2所示,右侧为对照组/实验组中靶蛋白在不同温度下丰度变化(Western blot),中间及左侧则是基于Western blot数据生成PACTs以及熔解曲线。对于JIP1-JNK1互作对,PACTS显示没有明显的丰度变化,而熔解曲线则显示发生了位移(图2A)。与之相反的,对于HOXB-AS3-hnRNP A1互作对,PACTS显示出明显的丰度变化,而熔解曲线则由于靶蛋白丰度降至检测限以下而无法绘制(图2B)。以上两个例子都说很好地说明,PACTS和TPP是两种互补的检测手段,使用两种方法同时检测有利用提高结果的准确性。作者还考察了不同细胞环境对蛋白-配体互作的影响(图CD及图EF)。来源于293T细胞的OPRN1与Enkephalin配体互作产生的熔解温度变化为∆Tm= 0.5 °C(图E),而来源于Hippocampus的OPRN1与Enkephalin配体互作产生的熔解温度变化为∆Tm= -14.4 °C(图F)。这个差异可能是由于孵育时不同的微环境造成的。图2. PACTS辅助TPP分析标准肽段-蛋白互作对。随后,作者将PACTS辅助TPP分析应用到组学层面。Aβ肽是淀粉样斑的主要成分,而淀粉样斑块主要存在于阿尔茨海默症(AD)患者的大脑中。在Aβ肽中,Aβ1-42在介导神经毒性和氧化应激中起关键作用。THP-1细胞类似于小胶质细胞,小胶质细胞功能障碍加速了与年龄相关的神经退行性疾病的进展,如AD。作者利用了PACTS辅助TPP分析研究了THP-1细胞中与Aβ1-42肽段相互作用的蛋白。如图3所示,图3A为PACTS结果,共发现37个蛋白在37 °C下有丰度变化。而TPP结果(图3B)则显示66个蛋白熔解曲线发生了位移。PACTS与TPP的结果具有较小的重合,说明两种方法具有互补性。GO分析表明(图3C),大多数与Aβ1-42相互作用的蛋白存在于细胞外泌体、胞质溶胶和细胞膜中。外泌体在AD中充当双刃剑,一方面,外泌体传播有毒的Aβ肽和过度磷酸化的tau遍及整个大脑,并诱导神经元凋亡。另一方面,它们消除大脑中的Aβ肽并促进其降解。了解Aβ肽与外泌体蛋白之间的相互作用有利于更好的开发AD治疗治疗药物。此外,作者用Western blot的方法进一步确认识别出的靶标蛋白(图D-E)。最后,作者用免疫共沉淀的方法进一步证明靶蛋白与Aβ1-42存在相互作用。图3. PACTS辅助TPP分析与Aβ1-42相互作用的蛋白总之,本文开发一种PACTS辅助TPP的分析方法,可用于大规模组学层面肽段-蛋白质相互作用研究。该方法具有无标记、无修饰的优势,无需额外实验,即可在TPP分析的同时获得PACTS信息。该方法也有助于理解多肽-蛋白质复合物相关的分子调控机制,进一步开发新型治疗药物。撰稿:刘蕊洁编辑:李惠琳原文:PACTS-Assisted Thermal Proteome Profiling for Use in Identifying Peptide-Interacting Proteins 参考文献1.Zhao T, Tian J, Wang X, et al. PACTS-Assisted Thermal Proteome Profiling for Use in Identifying Peptide-Interacting Proteins. Anal Chem. 2022 94(18): 6809-6818. doi:10.1021/acs.analchem.2c00581
  • 布鲁克在ASMS 2016推出蛋白质结构分析解决方案—HDX Solution
    布鲁克在第64届美国质谱年会(ASMS 2016)宣布推出布鲁克HDX Solution —氢氘交换解决方案。BHDX解决方案将LEAP H/D-X PAL自动样品处理系统与布鲁克maXis II ETD UHR-QTOF质谱系统以及HDExaminer软件相结合,提供了一套自动可靠的HDX-MS工作流。Bruker HDX解决方案通过H/D比值获得单一同位素精确定量分析结果,为深入了解生物分子结构提供可靠依据。  这些年来,生物制药表征分析需要对生物蛋白的空间构象有更加深入的了解,还要了解多种因素如pH值、温度和压力等对蛋白的影响。对于这一挑战,HDX-MS已经成为了一种有价值的分析技术。生物制药分析方法需要运用强大的分析统计工具,自动化的提供高质量数据。HDX-MS已成为生物制药领域的常规而可靠的分析方法。  关键结构的鉴定、药物/蛋白的解析以及蛋白之间相互作用、蛋白质构象变化等是目前生物治疗发展过程中面临的关键问题。Bruker HDX解决方案使得液相分离和MS/MS检测自动化,简化数据分析和解析工作,并能获得可靠的蛋白结构解析结果。  布鲁克道尔顿生物制药副总裁Bob Galvin博士评论说:“最新Bruker HDX解决方案的推出,进一步加强了布鲁克生物表征产品系列,使得生物制药领域的研究者能够更快、更准确的深入了解到蛋白质构象和相互作用。”关于HDX解决方案  Bruker HDX解决方案提供了完整的工作流程,将LEAP H / DX PAL自动进样器应用于预定标记实验,并结合了UHPLC系统与高分辨质谱系统。maXis II ETD UHR-QTOF质谱系统的质量准确度达到ppm级以下,高灵敏度与同位素保真度提高了系统获取准确H/D比值的能力。再加上HDX-MS解析软件Sierra Analytics HDExaminer的应用,创造了更大的应用空间与简便的应用环境。LEAP H / DX PAL自动进样器与maXis II ETD UHR-QTOF质谱系统  在市场处于领先的超高质量分辨率QTOF质谱与ETD(电子转移解离)能力结合,开创了布鲁克maXis II系统HDX-MS实验的新纪元。比起在肽段水平的研究,在更微量水平的探索能更容易的提供特异性识别位点。LEAP H/D-X PAL自动进样设备将稳健可靠的样品处理整合到布鲁克HDX 解决方案。革新的时间安排软件能够自动安排样品处理步骤,包括贴标签、培养、消化和灭活等,提高LC的效率与整个实验室效率。  用HDExaminer软件获得的信息可用于研究在干扰状态下蛋白质的构象变化。通过数据输出,有关这些变化的数据信息可被容易的可视化,也可通过导入如PyMol的晶体结构可视化程序更深入的了解这些变化。  海德堡大学分子生物学中心的Matthias P. Mayer教授表示:“通过布鲁克HDX解决方案,我们能够以高精度、高重复性和最小的动手时间测量氢交换反应动力学。系统的自动安排软件帮助我们充分利用仪器使用时间,从而提高我们的实验室效率”编译:郭浩楠
  • 安捷伦公司大力支持亚太地区蛋白质学会(APPA)第三次学术会议及中英蛋白质学术会
    安捷伦公司大力支持亚太地区蛋白质学会(APPA)第三次学术会议及中英蛋白质学术会议 2011年5月6-9日,亚太地区蛋白质学会(APPA)第三次学术会议及中英蛋白质学术会议在世博之城上海隆重召开。本届会议由&ldquo 亚太地区蛋白质科学联合会(Asia Pacific Protein Association, APPA)和国际蛋白质学会(The Protein Society)主办、中国生化学会蛋白质专业委员会(The Chinese Protein Society)承办。本次会议以&ldquo Proteins and Beyond&rdquo 为主题,诚邀国内外蛋白质组学领域众多顶尖专家学者,围绕业内热点问题成功举行了一次高端学术盛宴,会议议题主要围绕蛋白合成/质控、蛋白翻译后修饰、蛋白相互作用、蛋白工程、蛋白定量、疾病蛋白质组学与药物发现、生物制药等热门领域。 安捷伦公司作为会议的主赞助商以及蛋白质组学领域的重要方案供应商,在本届会议上再次为广大用户呈现其蛋白质组学全面、完备、专业的解决方案。针对蛋白定量这一行业热点课题,安捷伦公司凭借其最新超高灵敏度6490三重四极杆质谱技术、灵活强大的软件功能以及高通量全自动样品前处理技术在这一应用上具有突出及独特的优势。 在5月8日下午的大会学术报告专场,来自安捷伦公司的蛋白质组学应用工程师陶定银博士为在场听众进行了题为《安捷伦6490三重串联四级杆质谱仪在超痕量蛋白定量分析中的应用》的精彩报告:全新一代安捷伦6490三重串联四级杆质谱仪集多种高精技术于一体,与不同流速范围的液相色谱仪&ldquo 无缝&rdquo 匹配,在纳流、微流及常规流速范围内均可提供高灵敏、高重现的超痕量蛋白定量分析结果。配合安捷伦的全自动样品前处理机器人,使用户彻底摆脱繁冗的手工处理,获得重现性优异的分析结果。 Agilent 6490创新型串联质谱简介 1.概况 2010年5月24日 安捷伦科技公司在美国犹他州盐湖城举行的第58届美国质谱年会上推出了基于iFunnel技术的6490三重四极杆液质联用系统。 iFunnel是一种革命性的大气压离子进样技术,可以在大多数应用上极大提高灵敏度。与旧型号相比,6490系统减少了25%的占地面积,但灵敏度却提高了10倍以上。革新产品6490展示了其尖端应用能力,即检测灵敏度可达到10-21mol(Zeptomol)及ppq级别,这种水平的灵敏度过去只能在昂贵的加速器质谱系统上实现。 2.应用价值与意义 6490的尖端性能为富于高灵敏度挑战的分析工作带来的新的成功可能。比如环境领域通常要求灵敏度在ppt级别;制药/生物医药等领域,有时需要做到微小剂量、吸入药物检测和干血斑点分析等等。常规分析中这种高灵敏度也为临床、食品安全和蛋白质/肽定量分析带来了新机遇,而且全面提高了耐受性和样品制备效率。 有关安捷伦6490三重四极杆质谱更多信息,请参考: http://www.chem.agilent.com/en-US/Products/Instruments/ms/Pages/6490.aspx 有关安捷伦蛋白质组学方案更多信息,请参考: http://www.chem.agilent.com/zh-cn/solutions/proteomics/pages/default.aspx 关于安捷伦科技 安捷伦科技(NYSE: A)是全球领先的测试测量公司,是化学分析、生命科学、电子和通信领域的技术领导者。公司18,500名员工为世界上100多个国家的客户提供服务。安捷伦2010财政年度的业务净收入为54亿美元。了解有关安捷伦科技的详细信息,请访问:www.agilent.com.cn 。
  • 安捷伦科技与MRM Proteomics就深入推进定量蛋白质组学解决方案签署合作
    安捷伦科技公司与 MRM Proteomics 就深入推进定量蛋白质组学解决方案签署合作营销协议 2012 年 9 月 13 日,加利福尼亚州圣克拉拉市和英属哥伦比亚温哥华 &mdash 安捷伦科技公司(纽约证交所:A)今日宣布与 MRM Proteomics 公司达成合作营销协议。MRM Proteomics 公司是面向制药、生物技术和诊断行业提供先进的蛋白质定量分析、生物标记物和蛋白质组学服务的领先供应商。该项协议将使得双方能够为蛋白质组学领域提供更加完善的解决方案,包括试剂盒、硬件和软件。 蛋白质组学的任务是研究蛋白质的结构和功能,以及它们在复杂的生物系统中如何相互作用。安捷伦的整合蛋白质组学工作流程提供最高的分析性能和前所未有的&ldquo 即插即用&rdquo 灵活性。可切换式工作流程能简化设置,让研究人员在不同的方法之间快速切换。Agilent 6490 三重四极杆 MS/MS 系统拥有业界最高的灵敏度和最高通量的定量分析性能,可使目标 MRM 多肽的定量分析达到阿摩尔(attomole,10-18 mol)的检测水平。 &ldquo MRM Proteomics 在开发以质谱为基础的、采用多反应监测模式的蛋白质定量方法领域是公认的先驱和领导者,&rdquo 安捷伦代谢组学和蛋白组学部门市场经理 Steve Fischer 说道,&ldquo 该协议进一步反映了安捷伦在定量蛋白质组学领域的持续布局和投资。&rdquo MRM Proteomics 专业从事于利用同位素标记的内标通过 MRM-MS对复杂生物样品(如血液、脑脊液和尿液)中的蛋白质进行高度并行的绝对定量分析。MRM Proteomics 的工作流程仅使用极少的样品量(20 &mu l)便可实现无与伦比的特异性和灵敏度,并且无需去除样品中的高丰度蛋白质。 &ldquo MRM Proteomics 非常高兴与安捷伦科技公司达成这项合作营销协议;在靶向定量蛋白质组学领域,我们两家公司所提供的技术具有非常好的互补性,&rdquo MRM Proteomics 首席执行官 Andrew Munk 说道,&ldquo 质谱是一个推动基础蛋白质组学研究、生物标记物发现和药物开发的快速增长的平台。安捷伦以其质谱领域创新者的地位,以及广泛的全球网络,成为了 MRM Proteomics 的理想合作伙伴。&rdquo 关于 MRM Proteomics MRM Proteomics 是面向制药、生物技术和诊断行业在生物标记物发现/验证、临床研究、诊断和毒理学等关键领域提供先进的蛋白质定量分析和蛋白质组学服务的行业领导者。有关 MRM Proteomics 的详细信息,请访问 www.mrmproteomics.com。 关于安捷伦科技 安捷伦科技公司(纽约证交所:A)是全球领先的测量公司,同时也是化学分析、生命科学、诊断、电子和通信领域的技术领导者。公司的 20,000 名员工为 100 多个国家/地区的客户提供服务。在 2011 财政年度,安捷伦的业务净收入为 66 亿美元。要了解安捷伦科技的信息,请访问:www.agilent.com。
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