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质谱血清中维生素定量检测

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质谱血清中维生素定量检测相关的论坛

  • 血清中维生素的检测?

    [color=#444444]有检测血清中维生素的吗[/color][color=#444444]?[/color][color=#444444]讨论讨论[/color][color=#444444]![/color][color=#444444]你们都用什么方法[/color][color=#444444]?[/color]

  • 求助测血清样品中脂溶性维生素的各位大神

    [color=#444444]想咨询一下各位大神：有测血清样品中脂溶性维生素（维生素A,D,E,K）浓度的嘛？从质谱扫分子量开始，就步步是坎坷，100ng/ml的对照品溶液扫不出来母离子，是样品不稳定还是什么原因呢，急求各位大神的指导。。。拜托拜托[/color]

  • 液相色谱-串联质谱法检测食品中维生素D的含量

    液相色谱-串联质谱法检测食品中维生素D含量 如何用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）检测食品中的维生素D含量。这项技术可是现代食品分析中的佼佼者，能够帮助我们精准地掌握食品中的营养信息。 样品前处理 提取：首先，我们需要从食品样品中提取维生素D。这一步很关键，因为提取效率直接影响最终的检测结果。通常，我们会使用有机溶剂，比如乙腈或甲醇，来提取维生素D。 净化：提取后的样品往往含有很多杂质，这些杂质会影响检测结果。因此，我们需要对提取液进行净化处理。常用的净化方法有固相萃取（SPE）和液液萃取（LLE）。 浓缩：净化后的样品溶液需要进行浓缩，以提高维生素D的浓度。常用的浓缩方法有氮气吹干和旋转蒸发。 仪器操作 流动相选择：选择合适的流动相对分离效果至关重要。通常，我们会使用水和有机溶剂（如甲醇或乙腈）的混合物作为流动相，并根据需要添加少量酸或缓冲液。 色谱柱选择：选择适合的色谱柱也很关键。C18反相色谱柱是常用的选择，因为它对维生素D有很好的保留效果。 质谱条件：设置合适的质谱条件，包括离子源温度、喷雾电压、碰撞能量等。这些参数的优化可以大大提高检测灵敏度和特异性。 故障排除 峰形不好：如果发现峰形不好，可能是由于流动相比例不合适或色谱柱污染。尝试调整流动相比例或清洗色谱柱。 灵敏度低：如果灵敏度不够，可能是由于样品提取效率低或仪器参数设置不当。检查提取方法并优化仪器参数。 杂峰干扰：如果出现杂峰干扰，可能是由于样品净化不彻底或流动相选择不当。尝试改进净化方法或更换流动相。 仪器故障：遇到仪器故障时，首先要保持冷静，然后根据仪器的报错信息查找原因。必要时，可以联系仪器厂家进行维修。 总之，液相色谱-串联质谱法检测食品中维生素D含量是一项复杂但非常重要的技术。通过掌握这些操作要点和故障排除方法，我们可以更加准确、高效地完成检测任务。

  • 【求助】气质来测血清中的维生素A，为什么标准品也做不出来？

    我用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质[/color][/url]来测血清中的维生素A，怎么用标准品来做竟然做不出来呢，TIC除了溶剂峰，就没有峰了，而且质谱图中也没有我要的离子峰，做了好几次，都是这样，配的标准品浓度增大，也还是没有，问题会出在哪些方面呢，肯请大虾们指点一二。我才接触这个，好多都不懂，只知道照着文献上的方法来做。

  • 液质联用检测 小分子 维生素B检测

    液质联用检测 小分子 维生素B检测

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/01/201301140944_420285_2109415_3.jpg上图为应用LC-MSMS液质联用检测维生素B族。VB1 、VB2 、VB3、 VB5、 VB6、 VB7血液中可以定量。标准品可以达到10ng/ml。目前已经应用到临床部分科室。前处理方法：100ul血浆+300ul甲醇，混匀，13200r/min离心5min。取上清液检测（VB1 、VB2 、VB3、 VB5、 VB6）（VB7响应太低，信噪比达不到定量要求）100ul血浆+300ul甲醇，混匀，13200r/min离心5min。取上清液氮气吹干（40 ºC），50ul水复溶，质谱检测（VB7）B12检测信号较低

  • 【讨论】乳粉中维生素D的检测

    大家依据GB5413.9-2010做乳粉中维生素D的检测的时，维生素D待测液净化的时候用的什么设备？是制备色谱仪？还是进化萃取小柱？大家是否能提供点信息？万分感谢！制备色谱仪或是萃取小柱用的什么牌子？

  • 【原创】蔬果中维生素C含量的检测方法

    维生素C又叫抗坏血酸(Ascorbicid)，广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜中含量较多。是一种水溶性小分子生物活性物质，也是人体需要量最大的一种维生素。维生素C具有还原性(其结构式如图1)，可以与许多氧化剂发生氧化还原反应，因此可以利用其还原性测定维生素C的含量。目前食品中测定维生素C含量的方法主要有碘量法，是利用维生素C的氧化还原性为基础的一种氧化还原方法。冈其酸度不易把握，碘需要标定且易挥发，而Vc不易稳定保存，使测定结果易出现偏差，且这种方法不适合微量分析；国标GB/T6195-1986是采用2,6一二氯靛酚滴定法。利用样品溶液由蓝色转变为粉红色来辨别其滴定终点的到达。但是多数水果、蔬菜样品其提取液都具有一定的色泽而导致滴定终点不明显，使测定准确度降低。另外还有荧光光谱分析法 J、紫外一可见分光度法、色谱法、电化学法等，这些方法都存在着一定的局限性，如操作过程复杂，所用试剂不稳定，速度慢、背景¨干扰大。近年来，建立的测定Vc的其他方法还有催化动力学和光度法相结合的方法，及VC传感器测定方法，固定pH滴定法等。 该论文将对蔬菜、水果常用的维生素C含量的检测方法进行综述、比较。 图1 维生素C的结构式1原子吸收分光光度法利用原子吸收分光光度法问接测定维生素C的含量，是利用维生素C可以与一些金属离子发生氧化还原反应，通过测定反应掉的金属离子的量，进而间接计算出维生素c的含量。1.1以银离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法以银离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法，是利用维生素C分子中的有二烯醇基具强还原性，可被硝酸银氧化为去氢维生素C，同时产生黑色银沉淀(反应式如图2)。 图2维生素C与银离子反应的反应式 沉淀经离心分离后，将分离得到的沉淀用硝酸溶解后，再利用原子吸收分光光度计测定银离子的含量，从而接测得维生素C含量，具体测定方法如下： 配制一系列浓度的维生素C标准溶液，依次吸取一定量的维生素C标准溶液置于10mL离心管中，分别加入2mL(1mg/mL) Ag+标准溶液，然后加水使总体积为4mL，摇匀，在室温下避光放置35min离心分离弃去上清液，用2mL超纯水洗涤沉淀3次，然后用l:1的浓硝酸3mL溶解沉淀，移入50mL的容量瓶中，加水稀释至刻度。喷入空气-乙炔火焰分别测定其吸光度，以维生素C标准溶液的浓度为横坐标，以测得的吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。最后将处理过的待测样按上述方法测定其维生素C含量。 上述方法巾维生素C标准溶液及样品的配制都是利用2％的柠檬酸作为溶剂，并在棕色瓶中保存，原因是维生素C在溶液中不稳定，遇氧气、光、热、碱性物质易受破坏，而在适当的酸性条件下比较稳定，用2％的柠檬酸溶液来配制维生素C标准溶液，减缓了维生素C被氧化的速度，同时消除了一定外界因素的十扰，使得测定结果比较稳定。1.2 以铜离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法文献中报道了以铜离子作为氧化剂的间接原子吸收分光光度法。该方法也是利用维生素C在酸性介质中维生素C可将Cu2+定量的还原为Cu+，然后Cu+与SCN-反应生成CuSCN沉淀，在高速离心机下有效地分离出CuSCN沉淀，洗涤后再经浓硝酸溶解，用原子吸收法测定沉淀中的含铜量，即可推知样品中维生素C的含量。具体测定方法如下： 分别吸取1mL配制的含一定量维生素C的标准溶液(随配随用)(分别含维生素C 50、100、200、300、400、500 µg)和样品提取液，依次放置于已编号的15mL离心管中，各加入1mLCuSO4饱和溶液、1mL浓度为2％硫氰酸铵溶液、0.5mL盐酸-醋酸钠缓冲液和0.5 mL饱和NaCl溶液充分混和，稍后离心分离，弃去上层清液，小心地用少量水洗涤沉淀2～3次(注意每次用水不能超过1 mL)，加入0.5mL硝酸溶解后，转移至lO0mL的容量瓶中加水定容至刻度线，摇匀。分别用原子吸收分光光度计测定其含铜量，由所得的维生素C含量的标准曲线，可以得到相应样品的试验结果。 该方法所得的试验结果相对标准偏差RSD在5％以内加标回收率在96.56％～100.67％，其精密度和准确度均达到痕量分析要求。此方法的线性相关系数R=O 9989，表明相关性很好。2紫外可见分光光度法利用紫外分光光度法测定维生素C的含量是基于维生素c在紫外光区有特征吸收，但是因为维生素C结构中具有不饱和键，具有还原性，不易稳定存在，直接测定误差较大。所以在利用紫外分光光度法测定时，维生素标准溶液和待测样的配制条件非常重要。曾国富，黄玉英研究发现，维生索C在CTAB-C5H11OH-H2O微乳液体系中非常稳定，它存在于微乳液滴膜的内侧，与渗透进入液滴膜外侧的溶液氧接触的机会极少，该体系能极大地提高维生素C的稳定性。 郑京平等利用维生素C具有对紫外产生吸收和对碱稳定的特性，建立了紫外分光光度快速测定水果、蔬菜维生素c的新方法。根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于波长243nm处测定样品溶液与碱处理样品两者吸光度之差，通过查校准曲线，即可计算样品巾维生素C的含量。此法操作简单、快速准确、重现性好，结果令人满意。特别适合含深色样品的测定。实验结果表明该方法简单易行，结果准确、灵敏度高，检出限低，可快速测定水果、蔬菜中维生素C，值得推广应用。 张立科等介绍了在0～450µg／mL线性范围内，以cu2+作催化剂，以溶解氧将还原型维生素C氧化为在246.0 nm处无吸收的氧化型Vc，实现了样品各紫外干扰成分的本底校正，建立了种测定果蔬Vc的新方法。该方法中维生素C破坏条件的选择尤为重要，确定条件为：Cu用量为30 g，反应温度为70℃，反应时间为20min，加热条件下，反应速度快，无需加掩蔽剂。方法简便、快速、准确，测定了香蕉、西红柿等果蔬中的VC含量，结果令人满意。经多次实验得出该方法RsD在0.32％～0.89％之间，实际测定了香蕉、西红柿等样品中的VC的含量，检出限为0.2791g／mL，加标回收率在97.16％～100.18%之间 。3高效液相色谱法前面介绍的方法由于在使用中有一定的限制，操作复杂、前处理较麻烦。因此在使用中有较大的局限性，目的已逐渐被高效液相色谱法所取代。HPLC法具有检测速度快、操作简单、实验结果可靠等特点。 王艳颖，姜国斌等采用HYPERSIL-C8fz谱柱、浓度0.1％的草酸作流动相的高效液相色谱法，分析了草莓中的维生素c含量，取得了理想的效果。HPLC检测条件如下： 流动相0.1％草酸溶液，流速1.0 mL/min；检测波长254 nm，进样量5µL，柱箱温度3O℃。该方法分析中受样品中其他杂质的影响较小。测定草莓中维生素C的含量，回收率为97.4％～102.1％，说明该方法具有所需试剂少、稳定、操作简便等特点。精密度实验的相对标准偏差小于3％，说明该方法重复性和再现性都是比较高的。 陈昌云等采用0.05 mol／L磷酸二氢钾缓冲液：甲醇=80:20(v／v)作流动相。流速为1.0 mL／min，二极管阵列检测器，检测波长为254 nm。测定蜜柚中维生素C含量在质量浓度为20～100mg／L范围内有良好的线性关系，方法回收率为92.4％～107.5％,相对标准偏差小于2％。4 结语测定维生素C含量方法很多，各种方法各有优缺点，因为维生素C自身的不稳定，导致了很多方法测定结果误差较大，所以对维生素C稳定存在条件的探索非常重要。高效液相色谱法因为测定较准确、灵敏度高、选择性好，有较好的发展前景，是目前发展较快的一种方法。

  • 【原创大赛】蜂蜜中维生素B2检测

    【原创大赛】蜂蜜中维生素B2检测

    蜂蜜的化学成分丰富、复杂，除了65%-80%的糖以外，还含有多种氨基酸、维生素和酚酸黄酮等活性成分。蜂蜜的标准中并没有关于维生素检测的方法，文献资料中也未查到。试验前处理：称取蜂蜜样品约15克于锥形瓶中，加入30mL 0.1mol/L盐酸，充分摇匀，盖上瓶塞，直接放入高压灭菌锅内，在121℃下保持30min，冷却后取出，用乙酸钠调节pH至4.0左右，加入2mL混合酶（蛋白酶+淀粉酶+酸性磷酸酶），放置到37℃的恒温培养箱中过夜。将酶解后的样液转移到50mL容量瓶中，用纯水定容。定容后的样液转移到离心管中，3500r/min离心8min，取上清液用0.45um滤头过滤，滤液待上机。标准曲线：称取一定量维生素B2的标准品，用纯水配置标准系列工作标液。色谱条件：液相：Waters 2695，配荧光检测器 2475色谱柱：Waters XBridge C18柱（5um,250mm×4.6mm）流动相：甲醇：酸水（pH=4.5）=35:65酸水用氨水、乙酸、三乙胺调节到pH为4.5流速：0.75ml/min (柱压高)进样量：20uL检测波长：激发波长462nm，发射波长522nm 维生素B2的标准曲线：标准曲线相关系数达到三个9http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412291323_529830_1694946_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412291323_529831_1694946_3.jpg标准品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412291324_529832_1694946_3.jpg样品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412291324_529833_1694946_3.jpg注意事项：在整个样品前处理过程中，都需要避光操作。

  • HPLC检测鱼肝油中维生素A、D用色谱耗材推荐方案

    1. 前言“3·15”晚会曝光了部分企业未经保健食品许可，使用普通食品许可证违法生产经营儿童鱼肝油。此类产品被消费者购作儿童食品，极可能对我们的儿童造成严重影响和不良后果。鱼肝油中的维生素A和维生素D，作为其质量衡量的标准，我国药典和国家标准已有严格的方法检测。默克密理博致力于标准分析方法的重现和稳定性保证，为广大用户提供相应的分析试剂、色谱柱耗材。2. HPLC方法和试剂CHP2010 维生素A、D测定法：色谱柱：Purospher STAR Si 5um 250*4.6mm（货号：1.50357.0001,高纯硅胶,高柱效）流动相：99.7% 正己烷（HPLC级别，货号：1.04391.4008） 3.0% 异丙醇（HPLC级别，货号：1.01040.4008）流速：1.0 mL/min 柱温：25℃检测：UV325nm 进样量：10μLGB 54139-2010 维生素A的测定:色谱柱：Purospher STAR LP C18 5um 250*4.6mm（货号：1.56200.0008,高纯硅胶,高柱效）流动相：甲醇（HPLC级别，货号：1.06007.4008）流速：1.0 mL/min 柱温：35℃±1℃检测：UV325nm 进样量：20μLGB 54139-2010 维生素D待测液的净化:色谱柱：Purospher STAR Si 5um 150*4.6mm（货号：1.50356.0001,高纯硅胶,高柱效）流动相：50% 环己烷（HPLC级别，货号：1.02827.2500） 50% 正己烷（HPLC级别，货号：1.04391.4008） 0.8%异丙醇（HPLC级别，货号：1.01040.4008）流速：1.0 mL/min 柱温：35℃±1℃检测：UV264nm 进样量：500μLGB 54139-2010 维生素D测定液的测定:色谱柱：Purospher STAR C18 5um 250*4.6mm（货号：1.51456.0001,高纯硅胶,高柱效）流动相：甲醇（HPLC级别，货号：1.06007.4008）流速：1.0 mL/min 柱温：35℃±1℃检测：UV264nm 进样量：100μL参考标准：1. CHP2010维生素A、D测定法；2.《GB 54139-2010 婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E 的测定》

  • 【分享】保健食品中维生素检测方法现状及展望

    一、保健食品中脂溶性维生素分析方法概况 保健食品中添加有维生素A、维生素D、维生素E、维生素K和b－胡萝卜素，一般情况下后两者使用相对较少 。鉴于脂溶性维生素的特点和样品基质情况，样品一般需要在皂化后经有机溶剂提取后测定。 1．维生素A 一般添加视黄醇醋酸酯和视黄醇棕榈酸酯两者之一或两种均添加。通常情况下成分复杂的样品需采用皂化反应后测定其中的视黄醇。成分相对简单的片剂和胶囊样品可采用溶剂提取直接测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。奶粉等产品可以使用胰酶或蛋白酶处理，溶剂提取后测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。 2．维生素E 一般情况下添加的是a－维生素E。成分相对简单的样品可采用溶剂提取直接测定。多数样品需要在皂化反应后测定其中的维生素E。 同时分析维生素E 4种结构并包括内标物，可使用如下正相柱： （1）Nucleosil-NH2 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二恶烷=85：15，295nm （2）Zorbax SIL 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二恶烷：异丙醇=985：10：5，295nm （3） Lichrosorb-NH2 4.0×250mm，5μm，正己烷：异丙醇=99：1，295nm （4） YMC－Pac A－600 （NH2），3μm，正己烷：异丙醇=98：2 Ex：290nm Em：325nm 3.维生素D 一般情况下添加的是维生素D2和维生素D3中之一。目前维生素D的分析尚不如维生素A和维生素E成熟，主要原因为含量低，前处理过程损失多，与维生素E较难分离。现在采取的方法是采用乙腈＋甲醇＋水＝25+75+4作为流动相，根据样品中维生素D的情况，选择维生素D2和维生素D3互为内标。维生素D的分析对于色谱柱的要求较高，一般来讲250mm长度的Zobax SB-C18 比较适合分析要求。 4.b－胡萝卜素 b－胡萝卜素一般出现在植物性保健食品中，分析方法相对成熟。目前我们将维生素E、番茄红素和b－胡萝卜素通过采用不同的波长达到一次性分析的目的。样品采用二氯甲烷进行提取，分析过程需要加入抗氧化剂BHT对组分进行保护。 流动相为甲醇：乙腈＝50：50 色谱柱：Supelcosil RP C18 5.α－胡萝卜素 α－胡萝卜素目前也出现在保健食品中已有应用，初步将其与b－胡萝卜素一同分析。样品采用丙酮进行提取。 流动相为甲醇：甲基叔丁基醚：水＝310：76：14 色谱柱：Symmetry C18 检测波长：450nm 二．保健食品中水溶性维生素分析方法概况 目前建立并推广了一套的系统分析方法，通过选用多波长离子对高效液相色谱分析可以解决维生素B1、维生素B6、烟酸、烟酰胺、维生素C的分析。生物素、泛酸、叶酸需采用单独的高效液相色谱分析条件。维生素B2采用荧光分光光度法分析。 1．维生素B1（盐酸硫胺、硝酸硫胺） 分析维生素B1可采用盐酸苯海拉明作为内标。样品采用甲醇+水+磷酸提取。 流动相为硫酸月桂酯钠溶液（5g/530mL）：乙腈：磷酸＝530：470：0.4 色谱柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18 检测波长：260nm 2.维生素B1（呋喃硫胺） 有报道，呋喃硫胺是维生素B1的活性结构，在韩国、日本等产品中使用呋喃硫胺与盐酸硫胺、硝酸硫胺的色谱行为有较大区别。 流动相为甲醇：水：乙酸：PigB6＝450：530：20：20 色谱柱：m-Bondapak C18 检测波长：280nm 3.维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺 分析维生素B6、烟酸、烟酰胺可采用愈创木酚甘油醚作为内标。样品采用甲醇+水+磷酸提取。 流动相为1－癸烷磺酸钠溶液（1.22g/850mL）：乙腈：磷酸＝850：150：0.4 色谱柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18 在维生素类保健食品中烟酸应用极少，基本上添加的均为烟酰胺。 检测波长：280nm 功能性饮料中添加的咖啡因和苯甲酸也可以同时检测。根据大量实验认为液体类样品应使用TSK Gel-C18，固体样品两者皆可。 4.维生素C 除颜色较深、含量较低、天然植物干制品外，一般样品中的维生素C均可以采用碘溶液滴定法进行测定。利用高效液相色谱法测定维生素C可利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流动相体系，因维生素C色谱保留时间较短，可以将降低其中乙腈的比例至5%。提取溶剂尽可能使用水，以避免在前面出现倒峰影响定量结果的准确。 检测波长：254nm 5.维生素B2 有关维生素B2的色谱分析方法有报道，但在实际样品分析过程中因保留时间较短且与其它峰难以较好分离，故采用将其转化为光黄素后进行荧光分光光度法分析。 6.泛酸（维生素B3） 泛酸采用液相色谱分析法进行检测，样品用水提取即可。 流动相：0.02M磷酸二氢钾溶液：乙腈=95：5，pH=3.0 色谱柱： m- Bondapak C18 300mm 检测波长：200nm 7.生物素 生物素的分析正在初步摸索阶段，目前采用pH=3.5 0.25M磷酸盐缓冲溶液：甲醇=77：23的流动相，检测波长200nm。 目前的需要解决的问题是保留时间较长，大约在30min左右；此外灵敏度较低。 8.叶酸 叶酸一般使用弱碱性水溶液提取，为保证提取效果可以在50℃水浴中加热10min。 流动相：磷酸二氢钾缓冲溶液：甲醇=460:40，pH=6.0 色谱柱： m- Bondapak C18 300mm 检测波长：280nm 叶酸的研究方向：通过大量实际样品检测研究，发现在虫草等天然产物中存在与叶酸色谱保留时间完全一致的物质；不少样品中叶酸含量较低，拟采用固相萃取等技术作为前处理手段。 9.维生素B12 维生素B12的化学分析目前还是一个难题，对于含量较高，组成简单的原料和添加剂进行高效液相色笱单的原料和添加剂进行高效液相色失杂的多种维生素样品的分析方法正在摸索之中。 维生素B12的研究进展：虽然维生素B12有3个特征波长，但样品在不经处理的情况下也很难分析；在溶液中钴胺素很容易出现氰钴胺素、甲钴胺素、羟钴胺素等几种形式共存的现象。为避免出现上述问题，更好地去除样品中的干扰杂质并对样品中的维生素B12进行富集，目前采用加入表面活性物质、盐析、有机溶剂萃取等方法去除杂质，再通过固相萃取法进行富集的手段。 三、类维生素分析方法概况 1.肉碱（维生素BT） 肉碱若采用分光光度法检测比较繁杂，高效液相色谱法测定相对简单。利用高效液相色谱法测定肉碱同样利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流动相体系，因肉碱色谱保留时间虽比维生素C长但相对仍较短，因此流动相可以同维生素C一样。提取溶剂尽可能使用水或pH=5~6的水，以避免在前面出现倒峰影响定量结果的准确。 检测波长：210nm 2.辅酶Q10 对于维生素类样品中辅酶Q10的检测采用液相色谱分析法。样品中辅酶Q10使用正己烷作为提取溶剂。 色谱柱：TSK Gel-C18 流动相：乙腈+四氢呋喃+水=55+40+5 检测波长：280nm 3.肌醇 对于维生素类样品中肌醇的检测建立了一套衍生化-气相色谱分析法。样品中肌醇经过提取，彻底去除水分后进行衍生化，正己烷提取后进行气相色谱分析。 衍生化试剂：三甲基氯硅烷：六甲基二硅氨烷：二甲基甲酰胺=1：2：8 色谱柱：BP-5弹性石英毛细管柱, 25m×0.32mm 色谱条件：载气 50mL/min 尾吹气 50 mL/min 氢气 40 mL/min 空气 500 mL/min 分流比 1：50 四、需要解决的问题及展望 1．解决样品前处理技术 （1）不少油性胶囊样品中加入了水溶性维生素，如何应用前处理手段解决提取、净化问题。 （2）对于含量较低的样品如何应用固相萃取等手段。 （3）对于目前原料微囊化制作技术如何应对。 2．解决色谱多组分分析技术 在目前现有的多组分分析技术的基础上，如何能将维生素B1并入维生素B6系列之中或创建新的流动相体系，再囊括维生素B2和叶酸等是今后研究的重要方面。 3. 解决分析过程快速化 在目前大量样品检测的基础上应归纳总结出样品前处理方法指南，确定样品组成和前处理方法之间的关系。

  • 正反相液相色谱检测维生素的区别

    正反相液相色谱检测维生素的区别 咱们来聊聊正反相液相色谱检测维生素的那些事儿。别看这题目挺专业，其实讲的都是咱们平时吃的水果蔬菜里的维生素咋测出来的事儿。 先说说正相液相色谱。这种方法呢，就像是个喜欢“抓”极性分子的“小能手”。啥是极性分子？简单来说，就是那些爱跟水玩在一起的小分子，比如维生素C这种水溶性的维生素。正相液相色谱用的固定相就像是个“磁铁”，专门吸引这些极性分子，把它们牢牢留在柱子里。这样一来，咱们就能慢慢分析出样品里有多少维生素了。 再来看看反相液相色谱。这家伙正好跟正相相反，它更喜欢非极性分子。比如说维生素E这种油溶性的维生素，就容易被反相液相色谱给“抓住”。反相液相色谱用的流动相通常是一些有机溶剂，就像是个“护送队”，把非极性分子一路护送到检测器，让咱们能精确地知道样品里有多少维生素E。 简单总结一下，正相液相色谱和反相液相色谱的区别，就像是“磁铁”和“护送队”的区别。一个喜欢“抓”水溶性的维生素，一个喜欢“护送”油溶性的维生素。 那么问题来了，为啥要用这两种不同的方法呢？其实啊，就像咱们做饭要用不同的锅一样，不同的维生素性质不同，就得用不同的方法来测。正相液相色谱适合测水溶性的维生素，比如维生素C、B族维生素；反相液相色谱则适合测油溶性的维生素，比如维生素A、D、E、K。 这下明白了吧？正反相液相色谱检测维生素，就像是个“量身定制”的过程，不同的维生素用不同的方法，才能测得更准。

  • 如何检测 大米中的维生素 B1？？、、

    请教各位前辈 有没有人做过GB5413.11 婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定》， 最近检测大米中的维生素B1 按照这个标准做，回收率很低，还不到10%？ 有没有做过这方面项目的高手 指点一二？

  • 维生素检测

    发现现在制定国标的似乎都是一帮猪，那么简单的维生素检测，用液相色谱简单得不得了，却偏偏要用微生物法来做，用微生物法也罢，明明ISO的标准很成熟，他妈的搬过来的时候却偏偏要改一下，他妈的改的却偏偏是关键，改得就乱七八糟做不出来，再说现在这实验室检测维生素有谁会有美国时间花个N天去检测啊，报的是微生物法检测恐怕用的都是色谱法吧

  • 【原创大赛】乳粉中维生素C的检测

    【原创大赛】乳粉中维生素C的检测

    乳粉中维生素C的检测：维生素C:又名抗坏血酸，是一种水溶性维生素。检测依据：GB5413.18-2010检测原理：维生素C在活性炭存在下氧化成脱氢抗坏血酸，它与邻苯二铵反应生成荧光物质，于发射波长350nm，激发波长430nm用荧光光度计测定其荧光强度，其荧光强度与维生素C浓度成正比，外标法定量。所需要的试剂：1.实验用水均为去离子水2.偏磷酸—乙酸溶液：称取15g偏磷酸和40ml 36%乙酸于100ml水中，溶解后稀释至500ml备用。2.偏磷酸—乙酸溶液：称取15g偏磷酸和40ml 36%乙酸于100ml水中，溶解后稀释至500ml备用。3.酸性活性炭：80—120目，称取粉状活性炭约200g，加入1L 10%盐酸，加热至沸腾，真空过滤，取下结块于一个大烧杯中，用清水洗至滤液中无铁离子为止，在110℃~120℃烘箱中干燥约10小时后使用。检验铁离子的方法：普鲁士蓝反应，将20g/L亚铁氰化钾与1%盐酸等量混合，将上述滤液滴入，如有铁离子则产生蓝色沉淀。4.乙酸钠溶液：500g三水乙酸钠，并稀释至1L。5.硼酸—乙酸钠：3g硼酸，用乙酸钠溶液（药品4）溶解并稀释至100ml，临用前配置。6.邻苯二铵：40mg邻苯二铵，用睡溶解并稀释至100ml，临用前配制。7.维生素C标准溶液（100ug/ml）：称取0.05g维生素C标准品，用偏磷酸—乙酸溶液溶解并定容至50ml，临用前配制。样品处理：1.称取5g乳粉试样，用偏磷酸—乙酸溶液溶解定容至100ml，定容至100ml准确吸取10ml维生素C标准溶液用偏磷酸—乙酸溶液稀释并定容至100ml2.将上述试样转至放有2g酸性活性炭的250ml三角烧瓶中，剧烈振荡过滤（弃去约5ml最初滤液），即为试样和标准溶液的滤液。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112181747_339215_2366837_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112181744_339210_2366837_3.jpg3.[font='宋体'

  • 食品中维生素D检测新标准来了，您准备好了吗？

    [font=&][img=,802,537]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/2033baa4-f3d0-4fd9-b8ea-e773968b8946.jpg[/img][/font][font=&]脂溶性维生素A、D、E是人体维持正常代谢和机能所必需的营养素。准确测定食品中维生素含量对于科学营养膳食并保证食品安全，具有重要意义。[/font][font=&]GB5009.82-2016是现行的关于食品中维生素A、D、E测定的标准方法，覆盖了婴幼儿食品、乳品等多种食品，实现了维生素A、D、E的含量测定。其中，维生素D在食品中[/font][b][font=&][color=#4874cb]含量低，样品基质复杂，检测相对困难[/color][/font][/b][font=&]，在国家现行标准法中采用液-质联用或半制备正相净化的方式对其进行检测。但液-质联用维护[/font][b][font=&][color=#4874cb]成本高[/color][/font][/b][font=&]，半制备正相处理过程[/font][b][font=&][color=#4874cb]非常繁琐[/color][/font][/b][font=&]，大大影响样品分离效率。[/font][align=center][img=图片,782,454]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/d41b6c62-027b-4271-be98-328461dc1a34.jpg[/img][/align][font=&][size=10px][color=#888888]《GB 5009.82-2016 食品安全国家标准 《食品中维生素A、D、E的测定》[/color][/size][/font]现有检测难点：01[font=&][/font]维生素A、D、E分开检测：[size=15px]▲多种方法来回切换，仪器稳定时间长[/size][size=15px]▲使用质谱成本高[/size]02样品处理前处理繁琐：[size=15px]▲需要多次前处理，步骤多，时间长[/size][size=15px]▲结果稳定性差，人员要求高[/size]03维生素E异构体的分离：▲在限定的条件下难以分离维生素E的四种异构体[font=&]今年9月已新发布GB5009.296-2023，将于2024年3月6日正式实施，旧标准中关于维生素D的测定[/font][font=&]，只有第三法“[/font][font=&][size=16px][color=#4874cb][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法[/b][/color][/size][/font][font=&]”和第四法“[/font][font=&][size=16px][color=#4874cb][b]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法[/b][/color][/size][/font][font=&]”，新标准在以上2个方法的基础上，新增了“[/font][font=&][size=16px][color=#4874cb][b]在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法[/b][/color][/size][/font][font=&]”，适用于食品中维生素D?和D?的测定。[/font][font=&]新增的这一方法引入了在线柱切换[/font][font=&]-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，[/font][font=&][size=16px][color=#4874cb][b]大大提高[/b][/color][/size][/font][font=&]了维生素[/font][font=&]D的检测效率。[/font][align=center][img=图片,720,409]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/96674466-91ec-4ced-bd8b-1b4d879cac89.jpg[/img][/align][align=center][font=&][size=10px][color=#888888]GB 5009.296-2023 食品安全国家标准《食品中维生素 D 的测定》[/color][/size][/font][/align][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]珂睿科技最新[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]技术分析脂溶性维生素A、D、E[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]检测方案，[/color][/size][/font][b][font=&][size=16px][color=#4874cb]满足国标要求[/color][/size][/font][/b][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]，[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]轻松解决[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]原有检测中的[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]问题，实现维生素 A、D、E 的良好分离！[/color][/size][/font][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/aadfed27-4c9e-4801-91f4-4b7e76719e93.jpg[/img][size=17px]效率更高[/size][font=&][size=16px]同一个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]条件可同时检测维生素[/size][/font][font=&][size=16px]A、D、E，无需来回切换方法，提高检测效率[/size][/font][img=图片,677,228]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/4bf4353c-8e86-4bf1-970a-b4ee970d3691.jpg[/img][size=17px]速度更快[/size][font=&]一个样品只需要[/font][font=&]15min左右完成多种维生素的分析[/font][img=图片,664,301]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/02438b94-47ce-48fc-a4ff-0a98bad6f51e.jpg[/img][align=center][font=&][size=10px][color=#888888]维生素A、D、E整体图[/color][/size][/font][/align][size=17px]更低的检测限[/size][font=&]同一个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]条件可同时检测维生素[/font][font=&]A、D、E，无需来回切换方法，提高检测效率[/font][font=&][size=16px][color=#4874cb]LOD[/color][/size][/font][img=图片,670,188]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/912072c1-e373-4004-bde5-f8fcdd8e630e.jpg[/img][font=&][size=10px][color=#888888]按照GB要求进样，浓度为0.5μg/L的维生素D和0.05μg/mL的维生素A、0.2μg/mL的维生素E-异构体溶液在该仪器条件下，检出限的信噪比均能达到3倍以上，满足检测需求[/color][/size][/font][font=&][size=16px][color=#4874cb]LOQ[/color][/size][/font][align=center][img=图片,662,176]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/da888fbb-40be-4bae-9757-7b19b5989666.jpg[/img][/align][align=center][/align][font=&][size=10px][color=#888888]按照GB要求进样，浓度为2μg/L的维生素D和0.15μg/mL的维生素A、0.6μg/mL的维生素E-异构体溶液在该仪器条件下，能稳定重现，检出限的信噪比均能达到10倍以上，满足检测需求[/color][/size][/font][font=&][size=10px][color=#7f7f7f][/color][/size][/font][size=17px]有效分离维生素D?、D?[/size][font=&]有效分离维生素[/font][font=&]D?与D?，不受基质杂质干扰[/font][align=center][img=图片,660,297]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/85d66e81-9d85-46bb-b083-bb98f22c50be.jpg[/img][/align][align=center][font=&][size=10px][color=#888888]维生素D定量下限放大图[/color][/size][/font][/align][font=&][size=10px][color=#7f7f7f][/color][/size][/font][size=17px]稳定的重现性[/size][font=&][size=16px]稳定的检测条件，出峰时间和峰面积重现性好，确保结果的准确性[/size][/font][font=&][size=16px][color=#4874cb]重现性[/color][/size][/font][align=center][img=图片,658,180]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/215bb865-f2d2-4865-b1ab-800e45801a67.jpg[/img][/align][font=&][size=10px][color=#888888]在该仪器条件下，进样维生素A、D、E溶液，出峰时间和峰面积均可以稳定的重现，确保切阀转移的准确性，出峰时间RSD＜0.3%，峰面积RSD＜1%[/color][/size][/font][align=center][/align][align=center][img=图片,582,192]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/db5b8f24-086e-4a93-951b-d7f57917178b.jpg[/img][/align][align=center][img=图片,612,383]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/dd65fde3-81b2-4e31-9555-d18ec21fef8f.jpg[/img][/align][align=center][/align][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/c48f5bcc-ab04-4ec1-899a-c0a888cfacd4.jpg[/img][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/7aae0480-12cc-4fa5-82b5-302eb24f8a1d.jpg[/img][b][size=17px]关于珂睿[/size][/b][size=14px][color=rgba(38, 38, 38, 0.8)]珂睿科技成立于2016年，是一家专注于色谱、质谱产品研发的国家级高新技术企业、四川省专精特新企业，公司立足于色谱、质谱及配套自动化产品的国产化自主研发。[/color][/size][size=14px][color=rgba(38, 38, 38, 0.8)][/color][/size][size=14px][color=rgba(38, 38, 38, 0.8)]产品线涵盖超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-三重四级杆质谱联用仪、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]单四级杆及三重串联四极杆质谱联用仪、配套色谱柱，以及自动化前处理平台，并有包括TDM血药浓度检测系统，双鱼Pisce-I污水毒/品含量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]检测系统，Orion猎户系列GPC凝胶渗透色谱系统等，为众多行业的特殊应用提供专业解决方案。[/color][/size][size=14px][color=rgba(38, 38, 38, 0.8)][/color][/size][size=14px][color=rgba(38, 38, 38, 0.8)]珂睿科技依靠自身研发助力国产超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]快速发展的步伐也不会停止，我们将继续秉持“专业，严谨，不走捷径，做难而正确的事情”的专业精神，再接再厉，为您提供完整而专业的应用分析。[/color][/size][img=图片]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/97000185-ae0e-4df4-8879-649962a33a41.jpg[/img][img=图片,51,51]https://img1.17img.cn/17img/images/202312/uepic/e9b5a123-c468-4a85-8a08-02586f9390b4.jpg[/img][来源：成都珂睿科技有限公司][align=right][/align]

  • 固相萃取检测维生素A的操作要点及故障排除

    固相萃取检测维生素A的操作要点及故障排除 一、操作要点 样品制备：首先需要对样品进行皂化处理，以破坏样品中的蛋白质和脂肪，使维生素A充分释放。对于含淀粉的样品，需先进行酶解处理。 固相萃取柱的选择：选择对维生素A有良好保留能力的固相萃取柱，如C18或PLRP-S柱。 上样：将处理后的样品溶液通过固相萃取柱，控制适当的流速，一般为1-5 mL/min。 淋洗和洗脱：选择合适的淋洗液和洗脱液。淋洗液用于去除杂质，洗脱液用于洗脱维生素A。常用的淋洗液为水或含一定比例有机溶剂的水溶液，洗脱液为甲醇或乙腈。 检测：使用高效液相色谱法（HPLC）或液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）对洗脱液中的维生素A进行检测。 二、故障情况及排除 流速缓慢：可能原因是样品粘度高、填料过多或溶剂极性不匹配。应对方法包括充分稀释样品、减少填料使用量或选择合适的过渡溶剂。 净化效果不理想：可能是由于淋洗液或洗脱液选择不当，或固相萃取柱选择不合适。应对方法包括优化淋洗液和洗脱液的配方，或选择更合适的固相萃取柱。 重现性差：可能原因是固相萃取柱质量不稳定、流速控制不严格或操作不规范。应对方法包括选择质量可靠的固相萃取柱、严格控制系统流速并规范操作过程。 对于这些故障情况的排除只列举了几个常会发生的状况，还有其他状况发生以及如何排除，大家也可以一起讨论讨论，共勉。

  • 液相色谱检测维生素A

    检测维生素A时总是出现标品的出峰时间比样品的出峰时间晚2分钟左右，样品最后出来的图谱分析中只有一个最大峰的分析值，其他小峰都没有分析结果，是哪里什么问题？

  • 【求助】正己烷和环己烷在维生素ADE检测中作用

    我马上要做奶粉中维生素ADE了，想请大家帮个忙。为什么在检测中维生素D中用的是硅胶柱，而且流动相是环己烷和正己烷，我要是换成反相色谱柱，用甲醇做流动相可以吗？前处理还有简单的方法看见吗？谢谢各位了！非常着急！

  • 有关维生素的检测问题

    我们现在做维生素的检测，遇到以下几个问题，希望高手门能给于解答。1.标液出峰的问题：我们现在配的是混标（VA、VD两种、VE三种）维生素A是完全没有问题，但是VD,VE这5个峰有点分离效果不太好，浓度低时这5个峰是完全可以分开的，但是一旦样品中这5种物质一高就会有部份重叠了。2.加标准回收的问题，现在只是用空白做加标皂化后回收率都只有20%，请问一下是哪里出了问题？3.做这些维生素的有没有什么地方要特别的注意的

  • HPLC与TLC检测维生素A的比较

    各位科研朋友们，今天咱们来聊聊在维生素分析中，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法（HPLC）和薄层色谱法（TLC）这两种常见方法的优缺点，看看它们各自适合啥样的分析场景。 先说高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法，这位“大哥”可是分析领域的佼佼者。它最大的优点就是分离效率高，灵敏度也高得惊人，能检测到微量的维生素，简直就是“火眼金睛”。而且操作自动化，省心省力，分析速度也快，几分钟到几十分钟就能搞定。此外，它的应用范围广，不管是药品还是食品中的维生素，都能分析得头头是道。 但是，HPLC也有它的缺点。首先就是设备成本高，仪器价格和维护费用都不便宜，分析成本也相对较高。其次，分析时间虽然比[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]短，但还是要比一些其他方法长一些。 接下来，咱们说说薄层色谱法。这位“小兄弟”操作简单，样品用量少，成本也低，非常适合初学者和研究学生使用。而且，它分析速度快，几分钟就能出结果，非常适合快速筛查。 但是，TLC的分离效率和灵敏度就没HPLC那么高了，而且结果容易受到设备和操作的影响，缺乏标准化的参照。所以，它在精确分析和定量分析方面就稍逊一筹了。 总的来说，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法适合精确、定量分析维生素，尤其是在需要高灵敏度和高分离效率的场景下。而薄层色谱法则适合快速筛查和定性分析，特别是在实验室条件有限或需要快速得到结果的场景下。 根据自己的实验需求，选择合适的分析方法，才能事半功倍哦！

  • 咨询维生素C钙液相检测方法相关问题

    最近研究维生素C钙的有关物质，液相检测方法摸索很久都不能确定，目前查阅到的仅仅为EP药典中维生素C的液相检测方法，采用的是氨基柱，磷酸盐缓冲液与乙腈（25:75）。采用该色谱条件，柱子不耐用氨基柱容易坏，而且样品检测重复性差。本人的疑惑是维生素C钠在EP标准中有关物质检查的色谱条件与维生素C是一样的，而维生素C钙有关物质这项是缺项。是不是说明维生素C钙与维生素C钠和维生素C不一样？不能参考它们的液相条件检测？是因为钙离子比较特殊不能像钠离子一样进入色谱系统？

  • 【原创大赛】超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中维生素A、D的含量

    【原创大赛】超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中维生素A、D的含量

    超高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中维生素A、D的含量[align=left][font=宋体]摘要：采用超高效液相色谱[/font]-[font=宋体]串联质谱法建立了检测奶粉中维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[font=宋体]含量的分析方法。试样经氢氧化钾[/font]-[font=宋体]乙醇皂化反应后，正己烷提取，氮气吹干后用甲醇定容，维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[font=宋体]在[/font]C[sub]18[/sub][font=宋体]色谱柱上以[/font]0.1%[font=宋体]甲酸水溶液和甲醇为流动相，进行液相色谱分离；质谱检测采用电喷雾正离子化模式和多反应监测模式（[/font]MRM[font=宋体]）。结果表明，维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[font=宋体]在各自浓度范围内线性关系良好，相关系数（[/font]r[font=宋体]）大于[/font]0.999[font=宋体]，定量下限（[/font]LOQ[font=宋体]）分别为[/font]10[font=宋体]、[/font]5 [color=black]u[/color]g/kg[font=宋体]，加标回收率为[/font]87.2%~110%[font=宋体]，相对标准偏差（[/font]RSD[font=宋体]）为[/font]2.3%~5.2%[font=宋体]（[/font]n=6[font=宋体]）。本方法简便、灵敏、准确，适用于奶粉中维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[font=宋体]含量检测[/font][font=宋体]。[/font][/align][align=left][font=宋体]关键词：超高效液相色谱[/font]-[font=宋体]串联质谱；奶粉；维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[/align][align=left][font=宋体]维生素在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用，是人类为维持正常的生理功能而必须从食物中获得的一类微量有机物质。根据溶解性质不同，分为水溶性维生素（如[/font]B[font=宋体]族维生素、维生素[/font]C[font=宋体]等）和脂溶性维生素（如维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[font=宋体]、[/font]E[font=宋体]、[/font]K[font=宋体]等）。[/font][font=宋体][color=#333333][back=white]维生素[/back][/color][/font][font='Arial','sans-serif'][color=#333333][back=white]A[/back][/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]、[/back][/color][/font][font='Arial','sans-serif'][color=#333333][back=white]D[/back][/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]对人体视觉能力、免疫力、骨骼生长发育等方面都有重要的生理功能，但这类物质在人体内不能合成或合成量不足，必须经常由食物供给，因此维生素[/back][/color][/font][font='Arial','sans-serif'][color=#333333][back=white]A[/back][/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]、[/back][/color][/font][font='Arial','sans-serif'][color=#333333][back=white]D[/back][/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]被广泛添加在作为人类获取营养物质食物来源之一的奶粉中（特别是婴幼儿配方奶粉），但研究也表明若过量摄入，也会对人体造成危害，所以准确检测奶粉中维生素[/back][/color][/font][font='Arial','sans-serif'][color=#333333][back=white]A[/back][/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]、[/back][/color][/font][font='Arial','sans-serif'][color=#333333][back=white]D[/back][/color][/font][font=宋体][color=#333333][back=white]含量十分重要。[/back][/color][/font][/align][align=left][font=宋体]目前，食品安全国家标准《[/font]GB 5009.82-2016 [font=宋体]食品中维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[font=宋体]、[/font]E[font=宋体]的测定》中规定的维生素[/font]A[font=宋体]测定是液相色谱法，维生素[/font]D[font=宋体]包括[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]法和制备[/font]-[font=宋体]液相色谱法。用该标准检测维生素[/font]A[font=宋体]和维生素[/font]D[font=宋体]时，需要把样品分开进行两种前处理，费时费力费试剂，而且由于奶粉中蛋白脂肪含量较高，用液相色谱法检测维生素[/font]A[font=宋体]时基质干扰较大，可能造成定量不够准确[/font][font=宋体]。而不少研究表明，维生素[/font]A[font=宋体]在[/font][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[font=宋体]上响应很好，同时[/font]MRM[font=宋体]模式能有效去除杂质干扰，定量更加准确可靠。本文借鉴[/font]GB 5009.82-2016[font=宋体]的造化过程，通过后续优化提取步骤，最终选用正己烷作为造化后溶液中维生素[/font]A[font=宋体]和[/font]D[font=宋体]的共同提取试剂，实现了利用[/font][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[font=宋体]法一个前处理可以同时测定维生素[/font]A[font=宋体]和[/font]D[font=宋体]。[/font][font=宋体][color=black]该方法前处理过程简便、分析时间短、灵敏度高、抗干扰能力强，适用于大批量奶粉样品中维生素[/color][/font][color=black]A[/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[/color][font=宋体]含量的检测。[/font][/align][align=left][b][size=12.0pt]1 [/size][font=宋体][size=12.0pt]实验部分[/size][/font][/b][/align][align=left]1.1 [font=宋体]材料与试剂[/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]维生素[/color][/font][color=black]A[/color][font=宋体][color=black]、维生素[/color][/font][color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、维生素[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub][/color][font=宋体][color=black]标准品（纯度[/color][/font][font=宋体][color=black]≥[/color][/font][color=black]99%[/color][font=宋体][color=black]，[/color][/font][color=black]Sigma[/color][font=宋体][color=black]公司）；婴儿配方乳粉定量分析质控样品（[/color][/font][color=black]QC-IP-704[/color][font=宋体][color=black]，中国检验检疫科学研究院）；正己烷、甲醇、乙酸乙酯、甲酸（色谱纯，[/color][/font][color=black]Fisher[/color][font=宋体][color=black]公司）；无水乙醇、氢氧化钾、抗坏血酸（优级纯，科密欧公司）；硅胶固相萃取柱（[/color][/font][color=black]500 mg[/color][font=宋体][color=black]，[/color][/font][color=black]6 mL[/color][font=宋体][color=black]，[/color][/font][font=宋体]Waters[/font][font=宋体][color=black]公司）；实验用水为[/color][/font][color=black]Millipore[/color][font=宋体][color=black]纯水仪制备。[/color][/font][/align]1.2 [font=宋体]仪器与设备[/font][font=宋体]UPLC XEVO TQ-S[/font][font=宋体]超高效液相色谱串联质谱仪（Waters公司）；水浴振荡器；涡旋混合器；氮吹仪。[/font]1.3 [font=宋体][color=black]维生素[/color][/font][color=black]A[/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub][/color][font=宋体]标准储备液的配置[/font][font=宋体]分别称取一定量的[/font][font=宋体][color=black]维生素[/color][/font][color=black]A[/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub][/color][font=宋体]标准[/font][font=宋体][color=black]标准品[/color][/font][font=宋体]，用无水乙醇配置成质量浓度为[/font]100 ug/mL[font=宋体]标准储备液，于[/font]-20[font=宋体]℃冰箱保存（有效期[/font]1[font=宋体]个月），待用；临用前将溶液回温至室温，并按照[/font]GB5009.82-2016[font=宋体]附录[/font]B[font=宋体]表格进行浓度校正，然后用甲醇逐级稀释成所需浓度的标准工作液。[/font]1.4 [font=宋体]样品前处理[/font][font=宋体]准确称取[/font]2.00 g([font=宋体]精确到[/font]0.01 g)[font=宋体]奶粉试样于[/font]150 mL[font=宋体]三角瓶中，加入[/font]100 uL 1 ug/mL[font=宋体]维生素[/font][color=black]D[sub]2[/sub]-d[sub]3[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub]-d[sub]3[/sub][/color][font=宋体][color=black]混合内标混匀，静置[/color][/font][color=black]30 min[/color][font=宋体][color=black]，然后[/color][/font][font=宋体]依次加入[/font]0.5 g[font=宋体]抗坏血酸、[/font]40[font=宋体]℃[/font][font=宋体]温水[/font]10 mL[font=宋体]，涡旋混匀；加入[/font]20 mL[font=宋体]无水乙醇混匀，再加入[/font]10 mL 50%[font=宋体]氢氧化钾溶液涡旋混匀，放入恒温振荡器中[/font]55[font=宋体]℃避光水浴震荡皂化60 min，皂化后立即用冷水冷却至室温[/font][font=宋体]。[/font][font=宋体]将皂化液转入[/font]250 mL[font=宋体]分液漏斗中，加入[/font]20 mL[font=宋体]正己烷，轻轻摇动震荡萃取[/font]5 min[font=宋体]后静置分层，将下层溶液转移至另一分液漏斗中按上述方法再次提取，合并有机相，水洗至中性，将洗涤后的正己烷层通过无水硫酸钠过滤脱水，收集滤液待用。[/font]a[font=宋体]）维生素[/font]A[font=宋体]测定：准确吸取[/font]2 mL[font=宋体]上述滤液于试管中，氮气吹干后加入[/font]1 mL[font=宋体]甲醇定容，涡旋混匀后过[/font]0.22[font=宋体]ｕ[/font]m[font=宋体]有机系微孔滤膜后供[/font]UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[font=宋体]分析测定；[/font]b[font=宋体]）维生素[/font]D[font=宋体]测定：将硅胶固相萃取柱依次用[/font]8 mL[font=宋体]乙酸乙酯活化、[/font]8 mL[font=宋体]正己烷平衡，准确吸取[/font]20 mL[font=宋体]上述滤液全部过柱，再用[/font]6 mL[font=宋体]乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]正己烷（[/font]5+95[font=宋体]）淋洗，用[/font]6 mL[font=宋体]乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]正己烷（[/font]15+85[font=宋体]）洗脱收集。洗脱液用氮气吹干后加入[/font]1 mL[font=宋体]甲醇定容，涡旋混匀后过[/font]0.22[font=宋体]ｕ[/font]m[font=宋体]有机系微孔滤膜后供[/font]UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[font=宋体]分析测定。[/font][font=宋体][size=9.0pt]注意：因维生素容易受到光照影响，在整个前处理操作过程中注意避光，前处理完成后尽快上机测定。[/size][/font]1.5 [font=宋体]液相色谱及质谱条件[/font][font=宋体]液相色谱：色谱柱:Waters [/font]BEH C[sub]18[/sub][font=宋体]（[/font]1.7 μm[font=宋体]，[/font]50mm×2.1mm[font=宋体]）；柱温：[/font]30[font=宋体]℃[/font][font=宋体]；流速：[/font]0.4 [font=宋体]mL/min[/font][font=宋体]；进样量：[/font]2μL[font=宋体]；流动相[/font]A[font=宋体]：甲醇；流动相[/font]B[font=宋体]：[/font]0.1%[font=宋体]的甲酸水溶液。梯度洗脱程序：[/font]0~0.5min[font=宋体]，[/font]90% A[font=宋体]；[/font]0.5~2. 0 min[font=宋体]，[/font]90%~100% A[font=宋体]；[/font]2. 0 ~4. 0 min[font=宋体]，[/font]100%A[font=宋体]，[/font]4 ~4.1min[font=宋体]，[/font]100% A~90% A[font=宋体]，[/font]4.1 ~5.0min 90% A[font=宋体]。[/font][font=宋体]质谱：离子源：电喷雾离子源[/font]( ESI [sup]+[/sup] ) [font=宋体]；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测[/font]( MRM)[font=宋体]；毛细管电压：[/font]3.2 kv[font=宋体]；离子源温度：[/font]150[font=宋体]℃；去溶剂气温度：[/font]500[font=宋体]℃；去溶剂气流量：[/font]1000 L /h[font=宋体]；定性、定量离子对及碰撞能量见表[/font]1[font=宋体]。[/font][align=center][img=,385,230]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007201340233582_537_3299836_3.png!w385x230.jpg[/img][/align][align=center][font=宋体][size=9.0pt]﹡为定量离子[/size][/font][/align][align=left][b][size=12.0pt]2 [/size][font=宋体][size=12.0pt]结果与讨论[/size][/font][/b][/align]2.1 [font=宋体]色谱质谱条件及前处理过程的优化[/font][font=宋体]流动相的选择：对比了酸性体系（[/font]0.1%[font=宋体]甲酸水溶液）与甲醇、乙腈的流动相体系组合，结果发现目标物在乙腈体系中容易造成出峰时间较长导致峰宽变大，而在甲醇体系中响应值比乙腈高很多，且峰型得到明显改善，故本研究采用[/font]0.1%[font=宋体]甲酸水溶液[/font]+[font=宋体]甲醇流动相体系。[/font][align=left][font=宋体]质谱参数优化：[/font][font=宋体]用甲醇配置[/font]1.0 mg/L [font=宋体]维生素[/font]A[font=宋体]、[/font][color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub][/color][font=宋体]标准溶液直接注射到质谱中，在正离子模式下进行母离子全扫描，发现目标物各自对应的准分子离子峰[/font][M+H][sup]+[/sup][font=宋体]具有很好的响应，然后在分别进行子离子全扫描，各得到两对丰度高、干扰小的子离子对进行[/font]MRM[font=宋体]监测，最终确定的质谱条件见表[/font]1[font=宋体]，相应的色谱质谱图见图[/font]1[font=宋体]、图[/font]2[font=宋体]。[/font][/align][align=left][font=宋体]前处理过程优化：通过实验发现，将皂化液用正己烷提取后直接氮气吹干定容上机，维生素[/font][color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub][/color][font=宋体][color=black]图谱有很大干扰，容易影响定量准确性；而正己烷提取液经硅胶固相萃取柱净化[/color][/font][font=宋体]，用乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]正己烷（[/font]5+95[font=宋体]）淋洗，然后再用乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]正己烷（[/font]15+85[font=宋体]）洗脱收集氮吹后测定能有效去除杂质干扰，使[/font]VD[font=宋体]定量更加准确。同时在使用[/font][font=宋体][color=black]硅胶固相萃取柱测定[/color][/font][color=black]VA[/color][font=宋体][color=black]柱效时[/color][/font][font=宋体]发现，[/font][font=宋体]使用[/font][font=宋体]乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]正己烷（[/font]5+95[font=宋体]）淋洗液会使一部分[/font]VA[font=宋体]从柱子洗脱下来造成损失，可能是由于[/font]VA[font=宋体]极性相对[/font]VD[font=宋体]要强一些，更容易被乙酸乙酯洗脱，但不加乙酸乙酯不能有效去除杂质对[/font]VD[font=宋体]的干扰，考虑到[/font]VA[font=宋体]质谱响应比[/font]VD[font=宋体]高很多，且在[/font]1.5[font=宋体]液相条件下[/font]VA[font=宋体]保留时间相对靠前，基线干扰较少，故本实验最终采用了[/font]1.4[font=宋体]的前处理方法。[/font][/align][align=center][img=,690,492]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007201343054976_3145_3299836_3.png!w690x492.jpg[/img][/align][align=center][img=,690,502]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007201343223289_9830_3299836_3.png!w690x502.jpg[/img][/align][align=left][color=black]2.2 [/color][font=宋体][color=black]线性范围和定量限[/color][/font][font=宋体][color=black]吸取不同体积的维生素[/color][/font][color=black]A[/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]D[sub]3[/sub][/color][font=宋体][color=black]标准储备液（[/color][/font][color=black]1.3[/color][font=宋体][color=black]），用[/color][/font][font=宋体]甲醇[color=black]分别配置不同浓度的[/color]上机标准溶液，以各自定量离子的峰面积（或与内标峰面积比值）为[/font]Y[font=宋体]对应质量浓度[/font]X[font=宋体]（[/font][color=black]m[/color]g/L[font=宋体]）做标准曲线，得到的线性方程和相关系数见表[/font]2[font=宋体]；以[/font]10[font=宋体]倍信噪比（[/font]S/N[font=宋体]）计算得到各维生素的定量下限，结果见表[/font]2[font=宋体]。[/font][/align] [align=center][img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007201344110532_6564_3299836_3.png!w690x214.jpg[/img][/align][align=left][color=black]2.4[/color][font=宋体][color=black]回收率和精密度[/color][/font][font=宋体][color=black]脂溶性维生素在奶粉中天然存在[/color][/font][font=宋体]，查阅相关资料发现脱脂奶粉中[/font]VA[font=宋体]、[/font]VD[font=宋体]含量较低，故本方法准确度实验采用脱脂奶粉作为空白样品进行加标。具体添加水平为：[/font]VA[font=宋体]为[/font]10[font=宋体]，[/font]100[font=宋体]，[/font]500 [size=9.0pt]ug/kg[/size][font=宋体][size=9.0pt]；[/size][/font]V[color=black]D[sub]2[/sub][/color][font=宋体][color=black]、[/color][/font][color=black]VD[sub]3[/sub][/color][font=宋体][color=black]为[/color][/font][color=black]5[/color][font=宋体][color=black]，[/color][/font][color=black]50[/color][font=宋体][color=black]，[/color][/font][color=black]200[/color][size=9.0pt] ug/kg[/size][font=宋体][size=9.0pt]。[/size][/font][font=宋体][color=black]每个[/color][/font][font=宋体]水平重复[/font]6[font=宋体]次，[color=black]同时做该脱脂奶粉的空白本底实验。[/color]按照[/font]1.4[font=宋体]前处理方法处理后上机检测，回收率计算结果（扣除空白后）见表[/font]3[font=宋体]。结果表明，该方法维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[sub]2[/sub][font=宋体]、[/font]D[sub]3[/sub][font=宋体]的平均回收率为[/font]87.2%~110%[font=宋体]，相对标准偏差（[/font]RSD[font=宋体]，[/font]n=6[font=宋体]）为[/font]2.3%~5.2%[font=宋体]，均满足实验要求。[/font][/align][align=center][font=宋体][img=,690,433]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007201345292998_9572_3299836_3.png!w690x433.jpg[/img][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]2.5[/color][font=宋体][color=black]实际样品分析[/color][/font][font=宋体][color=black]为进一步验证该方法的准确性，采用本方法测定中国检科院的奶粉质控样品[/color][/font][color=black]QC-IP-704[/color][font=宋体][color=black]，结果见表[/color][/font][color=black]4[/color][font=宋体][color=black]；采用本方法对市场上不同品牌的婴幼儿配方奶粉进行检测，结果显示均未检出[/color][/font][font=宋体]维生素[/font]D[sub]2[/sub][font=宋体]，维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[sub]3[/sub][font=宋体]含量均符合《[/font]GB 10765-2010 [font=宋体]食品安全国家标准[/font][font=宋体]婴儿配方食品》的规定。[/font][/font][/align][align=center][font=宋体][font=宋体][img=,690,181]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007201346372756_5303_3299836_3.png!w690x181.jpg[/img][/font][/font][/align][align=left][font=宋体][font=宋体][b][size=12.0pt]3 [/size][font=宋体]结语[/font][/b][font=宋体]本文建立了超高效液相色谱[/font]-[font=宋体]串联质谱法（[/font]UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[font=宋体]）同时测定奶粉中维生素[/font]A[font=宋体]、[/font]D[sub]2[/sub][font=宋体]、[/font]D[sub]3[/sub][font=宋体]含量的分析方法。该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度，前处理步骤简单，分析速度快，特别适合大批量样品的检测。[/font][font=宋体]参考文献：[/font][size=9.0pt][1][/size][size=9.0pt]GB 5009.82-2016 [/size][font=宋体]食品中维生素[/font][size=9.0pt]A[/size][font=宋体]、[/font][size=9.0pt]D[/size][font=宋体]、[/font][size=9.0pt]E[/size][font=宋体]的测定[/font][size=9.0pt].[/size][size=9.0pt][2] GB 10765-2010 [/size][font=宋体]食品安全国家标准[/font][font=宋体]婴儿配方食品[/font][size=9.0pt].[/size][size=9.0pt][3][/size][font=宋体]严丽娟[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]李文斌[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]洪煜琛[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]等[/font][size=9.0pt]. [/size][font=宋体]液相色谱[/font][size=9.0pt]-[/size][font=宋体]大气压化学电离串联质谱法测定婴幼儿配方奶粉中的维生素[/font][size=9.0pt]D [J]. [/size][font=宋体]色谱[/font][size=9.0pt], 2017 , 04 :427-431.[/size][size=9.0pt][4][/size][font=宋体]黄百芬[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]柯星[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]郑菲菲[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]等[/font][size=9.0pt]. [/size][font=宋体]固相萃取[/font][size=9.0pt]-[/size][font=宋体]超高效液相色谱串联质谱法同时测定婴幼儿配方食品中维生素[/font][size=9.0pt]D[sub]2[/sub][/size][font=宋体]和[/font][size=9.0pt]D[sub]3[/sub] [J]. [/size][font=宋体]中国卫生检验杂志[/font][size=9.0pt], 2014 , 22 :3203-3207.[/size][size=9.0pt][5][/size][font=宋体]赵孔祥[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]娄婷婷[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]何佳[/font][size=9.0pt],[/size][font=宋体]等[/font][size=9.0pt]. [/size][font=宋体]同位素稀释[/font][size=9.0pt]/[/size][font=宋体]液相色谱[/font][size=9.0pt]-[/size][font=宋体]串联质谱法测定婴幼儿配方奶粉中脂溶性维生素[/font][size=9.0pt][J]. [/size][font=宋体]分析测试学报[/font][size=9.0pt], 2015 , 12 :1372-1376.[/size][/font][/font][/align]

  • 维生素A, 维生素D3， 维生素E的高效液相色谱检测

    维生素A, 维生素D3， 维生素E的高效液相色谱检测

    仪器： LC-100高效液相色谱仪色谱柱： SHOEDEX C18-120-5， 4.6*250mm， 5um流动相： 甲醇 流速： 1mL/min检测波长：326nm；7.5min后264nm，10.5min后285nm进样量： 10uL柱温： 28℃ http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/06/201506110949_549816_1635904_3.png 按照出峰顺序依次为 VA, VD3， VE注意事项：维生素A乙酸酯需保存在棕色瓶中，溶液配好后尽快检测 VA，1微克/毫升；VD3，5微克/毫升；VE，0.1微克/毫升

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