质谱检测蛋白磷酸化位点方法

人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗原、生物素化的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

从上述结果可以得出，LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite检测结果可靠性高，系统稳定性高，质谱质量轴稳定性高，在短时间内可以鉴定到大量高可信的磷酸化修饰肽段以及磷酸化位点，可以很好的应用于磷酸化蛋白质组学研究，同时本次实验还说明对样本使用TiO2进行多次重复富集可以显著提高样本中磷酸化肽段的比例，提高磷酸化肽段与位点的鉴定数目。

在这部分工作中，我们采用了高 pH 反相色谱结合二氧化钛富集以及二氧化钛富集结合强阳离子交换分级两条技术路线来对实现对 Hela 细胞的磷酸化蛋白质组的深度覆盖。最终我们的实验一共鉴定到了 8,696 个蛋白质上的近 40,000 个磷酸化位点。 在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。

PTM位点鉴定错误的概率较高，将位点错误的鉴定结果作为谱图库，会导致DIA解析结果的不可靠。实验使用Thermo ScientificTM Orbitrap Fusion三合一质谱仪，基于ptmRS/phosphoRS建立可靠的翻译后修饰DIA流程，突破了PTM DIA解析的瓶颈。使用phosphoRS/ptmRS筛选PTM定位准确的谱图，作为谱图库用于DIA，结果显示，具有精确PTM定位的谱图库中98.4%的磷酸化肽都获得了可靠的DIA解析(Q0.01)，峰面积CV值20%的肽段占86.9%，实现了准确可靠的大规模PTM DIA定量。

在这篇工作中，我们采用内标掺入 SILAC 的定量方法对大鼠胰岛进行了蛋白质组以及磷酸化蛋白质组的定量研究。通过对 SILAC 培养基的成分比例调整，我们优化了 INS-1E 细胞的标记方法。胰岛内包含多种细胞类型，如α 细胞，β 细胞，δ 细胞等，我们发现采用 INS-1E 细胞系（一种β 细胞系）已经可以较好的覆盖胰岛的全蛋白质组和磷酸化蛋白质组。若关心胰岛中的α 细胞的话，则可以标记α 细胞系来作为内标掺入胰岛。此外，我们还可以采用多种细胞系作为内标，这种称为“Super SILAC”的方法来完成对复杂组织蛋白质的全覆盖。 在磷酸化蛋白质组学流程中，我们采用了自制的基于StageTip 的TiO2萃取小柱来灵活的实现小量样品的磷酸化肽段富集。样品量始终是磷酸化以及其他一些翻译后修饰研究绕不过去的话题，一般来说只有增加样品量，并采取适当的预分级手段才能更深度的去覆盖这些翻译后修饰蛋白质组。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。

在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。

为了克服Adnectin存在的问题，本文设计了一种新型的Adnectin C，将其融合到含有Pro/Ala/Ser（PAS）重复残基的可生物降解多肽中。用标准方法比较大肠杆菌表达的重组融合蛋白和未融合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性。使用Linseis STA PT1600热分析仪器进行DSC和TG实验。动态光散射（DLS）分析表明，磷酸化Adnectin C的粒径增加了约2倍，净电荷略有变化。此外，PAS序列的融合提高了其抗热诱导聚集形式生长的稳定性。酶联免疫吸附试验（ELISA）和表面等离子体共振实验分别证实了酶联蛋白C的高受体结合和改进的结合动力学参数。药代动力学研究显示，单次静脉注射给雌性BALB/C小鼠后，Adnectin C-PAS#1（200）的最终半衰期显著增加了4.57倍。结果表明，磷酸化可以作为开发Adnectin衍生药物的一种更好的给药策略，提高患者的依从性。

人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗原、生物素化的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶M(PYGM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

针对 HUPO 磷酸肽挑战赛，使用 AgilentAssayMAP Bravo 平台和 LC/Q-TOF 系统进行自动化磷酸肽富集以实现定性和定量分析。执行 CID 肽鉴定实验，在“磷酸肽”样品中鉴定出 437 种特有肽段，其中包括94 种磷酸肽。鉴定出 HUPO 序列表中的所有 89 种非磷酸肽。ECD 实验基于 89个非磷酸肽序列确定了 96 种磷酸肽的磷酸化位点。还将序列表中未列出的其余肽返回给 HUPO。在富集的“磷酸肽-酵母”样品中，鉴定出 287 中特有肽段，其中包括 264 种特有磷酸肽。富集的总体选择性约为 92.0%。此外，从富集的“磷酸肽-酵母”样品中仍鉴定出加入酵母中 96 种磷酸肽中的95 种。与开展本研究中的其他实验室相比，安捷伦从富集样品中回收的磷酸肽数量最多。

试验研究磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉物理性质的影响。比较三聚磷酸钠浓度、超声功率、超声时间、温度4个影响因素对淀粉的交联度、透明度、凝胶强度、糊化特性的影响。试验结果表明：磷酸化协同超声波处理可有效改玉米淀粉交联度、透明度，凝胶强度和淀粉糊化特性。磷酸化协同超声波可以有效对玉米淀粉进行改性。

人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗原、生物素化的人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

MD公司开发了一款非常强力的筛选平台—ImageXpress系统。该系统拥有完整的图像获取及分析模块，可以快速生成想要的数据。本文列举了如何通过对磷酸化的组蛋白H2AX和DNA进行免疫荧光双色分析方法来检测DNA损伤。组蛋白H2AX在丝氨酸139位点的磷酸化被认为是药物或辐射造成的DNA损伤的敏感标记。文中也阐明了我们利用RNAi对双色标定DNA损伤分析是一个敏感和快速的自动化过程，而且这种方法被证明可以有效发现新的目标。

G蛋白偶联受体(GPCRs)是重要的跨膜蛋白，能将胞外信号传导入胞内，引起信号逐级放大的级联反应，导致胞内某些蛋白活性或表达的改变[1]。3’, 5’-单磷酸化环腺苷(cAMP)作为第二信使参与GPCR活化后的下游反应。当胞外配体作用于GPCR时，GPCR构象发生改变，激活胞内连接的G蛋白。接下来的信号传导路径与被激的G蛋白类型有关。其中当Gs蛋白被激活时，会导致腺苷酸环化酶活化引起的胞内cAMP浓度上调，进一步激活蛋白激酶A，最终促进一些目标蛋白的磷酸化，这些目标蛋白可能参与了例如多巴胺神经信号传导、葡萄糖再生反应、血管扩张、细胞有丝分裂、卵子成熟等重要生理生化过程[2-6]。

加压毛细管电色谱（pCEC）是综合了高效液相色谱（HPLC）与毛细管电泳（CE）的优势而发展起来的一种高效微型分离技术，在继承了液相色谱的高选择性以及毛细管电泳的高效率特性的基础上，克服了毛细管电泳难以分离中性物质的缺陷，同时解决了微小颗粒固定相由于输液泵的耐压能力在常规HPLC中的应用限制。 本文是加压毛细管电色谱－质谱联用技术在多肽和蛋白质领域的应用技术文章。

缬更昔洛韦口服后在肠黏膜细胞酯酶和肝酯酶的作用下迅速水解成更昔洛韦，更昔洛韦在病毒内和细胞内酶磷酸化作用下生成三磷酸更昔洛韦，后者与三磷酸脱氧鸟苷(dGTP)竞争作为病毒DNA多聚酶的底物，抑制病毒DNA的合成，从而产生抗巨细胞病毒(CMV)活性。临床适用于治疗获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者的巨细胞病毒（CMV）视网膜炎及预防高危实体器官移植患者的CMV感染。在进行LC-MS/MS检测时，血浆样品中缬更昔洛韦、更昔洛韦基质干扰严重；采用甲醇、乙腈、0.1%三氟乙酸-乙腈直接沉淀，无法显著降低基质干扰，且存在较强溶剂效应；碱化血浆后经乙酸乙酯/甲醇=1:1（v:v）液液萃取，更昔洛韦回收率仅为30%左右，且处理过程繁琐。使用超高灵敏度的LCMS-8060系统，血浆样品直接沉淀后，取上清液用纯水适当稀释进样，可以消除基质干扰；同时，此方法简化了血浆样品的前处理过程，在提高分析效率的同时，显著降低成本。

唑来膦酸（zoledronic acid）是新型的双磷酸类药物,为一种特异性的作用于骨的二磷酸化合物。该结构与骨质中的羟膦灰石呈高亲和力,并能与钙(铁等金属离子结合,形成可溶性或不可溶性复合物)。唑来膦酸能抑制因破骨活性增加而导致的骨吸收,降低血清钙和尿液中的钙排泄量。唑来膦酸的无机类杂质与药品临床使用的安全性密切相关,如果药品中存在的杂质未能通过有效的方法加以检出(控制,将给临床安全造成直接或潜在的危害。因此,制订合理(有效的药品杂质检测方法,控制药品中的杂质是一项非常重要的工作。研究中选取磷酸(亚磷酸两种在唑来膦酸药物生产过程中容易产生的杂质为研究对象。虽然有报道可以用高效液相色谱法在线火焰分光光度法(折光率法(质谱法(电感耦合等离子体法等检测技术分析唑来膦酸药物,但这些直接的检测技术也只是应用于少数特殊双膦酸类药物的含量测定,由于双膦酸类药物大多没有可直接应用紫外检测器检测的生色团,因此往往都需要进行衍生反应才能分析检测,过程繁琐,并且无法对其有关物质&磷酸(亚磷酸'进行研究。利用离子对色谱分离配以电导检测器,既解决了双膦酸类药物的保留问题,又解决了其检测问题,为该类药物提供了有效可靠的分析手段。

肽谱分析是表征生物治疗性蛋白质的一种常用分析技术。首先用一种或两种蛋白酶将蛋白质酶解成小分子肽。肽混合物通常采用反相色谱法分离，然后通过紫外或质谱检测器进行检测。质谱可以提供肽的质量数据，从而大大扩充肽谱分析的信息含量。由于增加了质量分离模式，可以轻松鉴定出共流出的多肽，同时也可以大幅缩短梯度时长。此外，串联质谱可以将肽碎裂为更小的片段，并为肽的氨基酸序列以及糖基化、磷酸化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰(PTM) 提供证据。本应用简报介绍了如何使用新型表面多孔肽谱分析色谱柱配合 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对一种 IgG (1) 治疗性单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分析。结合 MS/MS 分析，肽谱分析色谱柱独特的分离能力可以最大限度提高分离度和效率，可确保实现可靠灵敏的肽鉴定，而且只需 15 分钟的运行即可实现高序列覆盖。6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度，而 MS/MS 功能则有助于更可靠地确定被修饰肽的鉴定结果。此外，本文还探讨了通过 IgG (1) 肽谱分析梯度和 LC/MS/MS 参数的优化，实现稳定、快速、可靠的 mAb 肽谱分析。

目的：测定乳粉中非蛋白氮含量，比较4种蛋白质沉淀剂分离蛋白质和非蛋白含氮物质的效果。 方法：样品加水溶解后分别用15%三氯乙酸溶液、丙酮、20%乙酸铅溶液+3%草酸钾+7%磷酸氢二钠溶液、乙酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液沉淀蛋白质，过滤后取滤液进行消化定氮，同时在样品中加标三聚氰胺，检测计算回收率。结果：三氯乙酸沉淀法的非蛋白氮含量为0.2036±0.0002%，丙酮沉淀法的非蛋白氮含量为0.0981%±0.0050%，乙酸铅沉淀法的非蛋白氮含量为0.1372%±0.0012%，乙酸锌沉淀法的非蛋白氮含量为0.3466%±0.0100%。当 10 g 样品中加标量高于2 mg 低于20 mg 三聚氰胺时，三氯乙酸沉淀法的加标回收率最好。结论：三氯乙酸沉淀法结果准确度和稳定性较其他3种方法更好，但受到加标量的影响，当10 g 样品加标79.2 mg时，三氯乙酸沉淀法加标回收率低且相对标准偏差较大，此时乙酸铅沉淀法的加标回收率优于三氯乙酸沉淀法。

引起过敏的物质称为过敏原,一般为蛋白质类物质。 随着食物过敏患者的增多,以及可能导致过敏性休克甚至死亡等严重后果,已建立了一系列针对过敏原的法规及检测方法,包括核酸法(PCR)和酶联免疫法(ELISA)等。 新兴的质谱法(MS)灵敏度高、假阳性概率低,并具有方法开发快速、运行成本低等优势。葡萄酒酿造过程中需要加入澄清剂去除沉淀物质,使酒液获得长期稳定性。 酪蛋白是常用的澄清剂之一。 酪蛋白是一种来源于牛乳的过敏原,残留在葡萄酒中会对过敏人群产生危害。 但是葡萄酒,特别是红葡萄酒含有大量单宁等鞣质,单宁与蛋白质之间存在多点疏水键和氢键的作用,有很强的蛋白结合能力。 单宁常用作酶抑制剂使酶失活。 单宁极大地抑制了葡萄酒蛋白的提取与酶解,传统蛋白提取方法(超滤、透析、有机溶剂沉淀等)用于葡萄酒时回收率只有 20% ~30%。 因此,关于葡萄酒过敏原质谱分析的报道很少,研究对象也集中在单宁含量很低的白葡萄酒,对于含有大量单宁的红葡萄酒的前处理和质谱分析仍无成熟的策略。已报道的方法如十二烷基硫酸钾(KDS)法、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)法等,提取后蛋白仍需要电泳去除单宁和两性电解质,工作量大,分析通量低,蛋白质的回收率很低。交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)是 PVP 交联后形成的颗粒(约 110 μ m),具有很强的吸附能力。PVPP 竞争性地与单宁结合,释放蛋白,可以有效去除单宁等多酚类物质。本研究利用 PVPP 建立了快速、高效的红葡萄酒蛋白提取与酶解方法,使前处理时间缩短到 2 h 之内,回收率达到 80% 以上。 将本方法与三重四极杆液相色谱鄄串联质谱联用(LC-MS/ MS)结合,分析了红酒中 3 种亚型的酪蛋白,检出限达到 10 μ g/ L,比目前报道的方法提高了至少一个数量级。

一种快速、简便的微流控毛细管电泳—质谱联用方法，英文简称ZipChip CE-MS，用于直接检测从细胞培养上清液中获得的单克隆抗体蛋白的品质特性。同时，利用单一的微流控芯片ZipChip并采用相同的方法监测蛋白表达和产品品质，消耗的样品体积仅为10-15微升的细胞培养上清液，每个样品的分析时间在3分钟内即可完成。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统与ESI离子源质谱联用，系统的研究了电解质浓度和pH对ESI-MS信号强度的影响，施加电压和有机改性剂对肽分离的影响。比较了cHPLC 和eHPLC分离肽混合物的能力。为了评价本系统的可行性和可靠性，采用eHPLC-ESI-MS对细胞色素C胰蛋白酶酶解液和修饰蛋白的进行了分析。实验结果表明，基于eHPLC-ESI-MS系统，在梯度条件下实现肽的基线分离。并可完成修饰蛋白和细胞色素c胰蛋白酶解液的检测。

抗燃油由磷酸酯组成，外观透明、均匀，新油略呈淡黄色或桔红色，无沉淀物，挥发性低，抗磨性好，安定性好，物理性稳定，发电厂电液控制系统所用抗燃油是一种抗燃的纯磷酸酯液体，难燃性是磷酸酯最突出特性之一，在极高温度下也能燃烧，但它不传播火焰，或着火后能很快自灭，磷酸酯具有高的热氧化稳定性。按照标准DLT571-2007电厂用磷酸酯抗燃油运行与维护导则，抗燃油磷酸酯的闪点：≥235℃。按GB/T 3536方法进行试验。运行磷酸酯抗燃油的闪点降低，说明油中混入了易挥发可燃性组分或发生了分解变质，应同时检测自燃点、黏度等项目，分析闪点降低的原因。全自动开口闪点仪SH106B严格按照GB/T3536这个标准设计制作的，全自动触摸屏操作，自动电子点火，自动判定，自动出结果，自动打印。

采用TriSep ® -3000高效微流电动液相色谱系统，配备ESI-MS检测器，通微 EP-100-20/30-3- C18色谱柱，通过在线富集，可以实现对低浓度蛋白质的检测。蛋白质标准品的检出限可提高20-100倍，此方法已成功应用于浓度为20 mg / mL的蛋白质的分析。结果表明我们提出的方法可能在蛋白质组学研究中发挥重要作用。

微囊藻毒素（Microcystin，MC）是一类具有生物活性的，自然环境中广泛分布的肝毒素。它对人体蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用，与肿瘤促进作用有直接关系。中国生活饮用水卫生标准（GB/T 5749-2006），将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1.0μ g/L，该标准的实施对水源水的质量提出了更高的要求[1]。实验中，采用1升水样通过47mm的Empore™ C18固相萃取膜片（货号：98-0604-0217-3）处理，并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱。然后通过HPLC对提取物进行定量[2]。

随着“一小时酵母蛋白质组”的实现, 短梯度下实现蛋白质组深度覆盖成为可能.本文利用全新 Q-OT-qIT 三合一质谱系统进行“一小时蛋白质组”分析与优化. 50 min 有效梯度, 单次实验分别从1 μ g和50 ngHeLa全蛋白中鉴定到20860和14100条肽段, 对应到3865和 2877 个非冗余蛋白, 而目前的文献报道至少需要 2~3 h. 同时, 本文考察了 Q-OT-qIT 碎裂模式、检测方法、最大注入时间和自动增益控制等参数对蛋白质组快速分析的影响, 证明了不同采集方法间的互补性, 阐述了不同扫描参数对鉴定结果的影响. 此外, 还讨论了Q-OT-qIT 的并列运行原理和扫描组合模式, 为不同实验目的和样本类型的蛋白质组快速分析奠定了基础.