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活力仪

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活力仪相关的论坛

  • 童心象征着一种充满活力的生命境界

    童心无关乎年龄大小,更多象征着一种充满活力的生命境界。若带着灰色眼镜看世界,生活索然无味,双目无神,死气沉沉;拥有一颗童心,天性乐观、积极,即使闭上了眼睛,也能想象出一片烂漫春光。回归纯真,对世界保持热爱和好奇,思维神采飞扬,怎能不洋溢着青春的活力。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311190228274497_728_1642069_3.png[/img]

  • 植酸酶活力测试

    请问有哪位大侠做植酸酶活力测试的吗?小弟按照国标GBT 18634-2009方法做的,吸光度值刚开始比较低,到后来越来越高,到10次后才稳定下来!请问大家碰到过这样的问题吗?

  • 【求助】测定酱油大曲酶活力过程 发现问题了。

    请教关于酶活力测定过程中加福林试剂后出现沉淀问题在用福林法测定酱油大曲酶活力过程中,在最后一步加入福林试剂后出现白色沉淀,这白色沉淀能自动慢慢沉淀下来。那位高手能指点一下这是那方面出现问题?

  • 【原创大赛】酶活力测定

    【原创大赛】酶活力测定

    酶活力的测定方法(1)葡萄糖标准曲线的绘制取8只洗净烘干的20 mL具塞刻度试管,编号后分别吸取0.0 mL ~ 1.4 mL葡萄糖标液用蒸馏水定容至2 mL,配置成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后,向各试管中加入1.5 mLDNS溶液,摇匀后沸水浴5 min,取出冷却后用蒸馏水定容至20 mL,充分混匀。在540 nm波长下,以1号试管溶液作为空白对照,调零点,测定其它各管溶液的吸光度值并记录结果。以葡萄糖含量为横坐标,以对应的吸光度值为纵坐标,绘制出葡萄糖标准曲线。(2)滤纸酶活力的测定取4支洗净烘干的20 mL具塞刻度试管,编号后各加入0.5 mL酶液和1.5 mL 0.05 mol/L pH 4.5的柠檬酸缓冲液,向1号试管中加入1.5 mL DNS溶液以钝化酶活性,作为空白对照,比色时调零用。将4支试管同时在50℃水浴中预热5 min ~ 10 min,再各加入滤纸条50 mg(定量滤纸,约1 cm × 6 cm),50℃水浴中保温1 h后取出立即向2、3、4号试管中各加入1.5 mL DNS溶液以终止酶反应,充分摇匀后沸水浴5 min,取出冷却后用蒸馏水定容至20 mL,充分混匀。以1号试管溶液为空白对照调零点,在540 nm波长下测定2、3、4号试管液的吸光度值并记录结果。根据3个重复吸光度的平均值,在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量,按下式计算出滤纸酶活力(U/g)。在上述条件下,每小时由底物生成1 μmol葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位(U)。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410171615_518835_2770543_3.jpg 式中:U—滤纸酶活力(U/g); M—葡萄糖含量(mg);V1—酶液定容总体积(mL); K—5.56[font=宋体

  • 【求助】这老原子吸收仪器还能焕发活力吗?

    我是一名兼职的仪器维修人员,有一客户请我去看他们服役二十一年的原子吸收,是贵公司八八年出厂的WFX—1D型,看能不能让它焕发活力。该仪器主要问题是样品吸光值极低,现场检查,发现雾化器多处腐烂,雾化效果很差,光路中光栅反射镜有一层雾状物,电子电路 各开关基本良好。想请教一下,现在还有这样的雾化器吗?光栅反射镜上的雾状物有什么方法可以去除吗?

  • [转载]工作三力:活力、执行力、竞争力

    活力、执行力、竞争力是纵横职场不可缺少的三件法宝。活力让自己找到工作的乐趣;执行力是工作落实到位保证,没有执行力就没有竞争力;竞争力是提升自己价值的保证。 马群为何总是给人以充满活力的感觉?因为马蝇对它的叮咬时刻都不放松。在任何一个马群里,都可以发现这个充满哲理的现象:马蝇会不时地在马匹身上叮上一口。马被其叮咬后,疼痒难忍,便用尾巴不停地驱赶;若拂之不去,就会发足狂奔,企图将其甩掉。结果被叮咬的马不仅没有血尽身亡,反而由于不停运动,生命力更加旺盛。 与此有着异曲同工之处的是我们熟知的“鲶鱼效应”也称“鲇鱼效应”,当鲶鱼放进鱼槽后,由于环境陌生,自然会四处流动到处挑起摩擦。而大量的沙丁鱼发现多了一个“异已分子”,自然也会紧张起来,加速游动。这样一来,沙丁鱼就一条条活蹦乱跳地回到渔港。这两个管理的效应法则都强调的是管理者如何在企业团队或组织中引进活力元素。 事实上也是这样的。随着管理科学的发展,越来越多的企业开始重视激励员工的重要性,不遗余力地用薪资福利、培训、授权等方式激发员工。可是,一些员工还是似乎失去了发展动力,做事情没精打采。原因到底出在哪里? 企业当然希望拥有积极、充满活力的员工,可要实现员工始终保持工作的活力,不是企业一方努力就能够达到的,更需要员工有自我调整、自我激励的意识。当员工对工作不再感到新鲜,缺乏创新,甚至开始有了厌倦情绪时,一个不可忽视的原因就可能出在员工的职业心理状态上。这种缺乏活力的职业心理状态被称之为职业倦怠感。 我的朋友玛丽是一家房地产公司的总经理秘书,在这个职位上已经工作一年多了,她很希望能在工作中有所建树,但老板交给她的都是事务性的琐碎工作,她感觉工作缺乏挑战,学不到东西,又没有发展前途,再加上公司成立不久,管理中还存在不少不规范的地方,玛丽于是产生了严重的职业倦怠感,对工作提不起兴趣,工作起来自然也就是无精打采。她很想转行从事销售行业,可又怕自己做不好,为此苦恼不已。 通过研究我发现:所有忠诚、积极、高效的员工身上都有一个重要的共同点——积极健康的职业心理。他们对未来的职业目标有清晰的定位,对自己的优缺点有比较清醒的认识,在出现问题时能有意识地调整自己的心理状态,把自己的目标和企业的目标统一起来,积极愉快地投入工作。这种自我激励、自我调整的良好心态是员工充满活力的内因。 所以,我对玛丽的建议是,工作不可能总是充满刺激的,有很多平常的小事和琐事,这些都是工作不可分割的一部分,而你又不可能舍弃它们,因此,你必须学会调节自己的心理状态,让自己始终对工作保持热情,才能克服倦怠的心理。为此,需要从以下几个方面入手: 1清醒地认识自己。感觉到自己的状态出了问题,先不要归咎于企业或上司、同事,更不要用跳槽、花钱充电等方法来解决问题,这样做收效甚微。你应该先从自己入手,分析当前的职业和你的人生目标是否统一,是不是有其他的生活问题带到工作中去了等等。如果他们不意识到自己的根本问题,并加以调整,换多少份工作都无济于事。 2如果自己无法准确地找到问题的症结,不妨请教一些这方面的专家。因为如果问题得不到及时的解决,只会越来越向不好的方向发展,千万不要抱“说不定过一段时间就会好了”的侥幸心理。 在工作中充满活力是取得优异工作成果的保证,充满活力地工作表明你热爱工作,你愿意将自己的努力全部贡献给工作,刻苦钻研的结果是创意不断涌现。而且,你的活力也会感染周围的同事,赢得好的人际交往,得到他们的帮助。 对工作充满活力也就意味着拥有很强的执行力。 执行力,简单的说,就是对上司指令的贯彻和落实程度。我用这样一个形象的语言故事来说明一下: 耶稣带着他的门徒彼得远行,途中发现一块破烂的马蹄铁,耶稣希望彼得捡起来,不料彼得懒得弯腰,假装没听见。耶稣自己弯腰捡起马蹄铁,用它在铁匠那儿换来3文钱,并用这些钱买了十几颗樱桃。出了城,两人继续前进,经过的是茫茫荒野,耶稣猜到彼得渴得厉害,就让藏在袖子里的樱桃悄悄地掉出一颗,彼得一见,赶紧捡起来吃。耶稣边走边丢,彼得也就狼狈地弯了十七八次腰。于是耶稣笑着对他说:“要是按我想的做,你最开始弯一次腰,我也就不用一次又一次重复地扔樱桃,你也就不会在后来没完没了地弯腰。” 这个寓言很有意思,它反映出这样一个问题:在企业中领导所想的和员工所想的,往往不能得到有效地统一,这也就是导致执行力缺失得原因。而执行力的缺失,使得领导者的所有工作都会变成一纸空文或一场空谈。 对于员工来说,执行力直接决定着工作的结果。一个团队,或者是一名员工,要完成上级交付的任务就必须具有强有力的执行力。因为,你接受了任务就意味着作出了承诺,而完成不了自己的承诺是不应该找任何借口的。可以说,没有任何借口是执行力的表现,这是一种很重要的思想,体现了一个人对自己的职责和使命的态度。思想影响态度,态度影响行动,一个不找任何借口的员工,肯定是一个执行力很强的员工。可以说,工作就是不找任何借口地去执行。 在这一点上,我非常赞赏西点军校的文化,他们就是提倡没有任何借口地去执行,这才是强有力的执行的保证。同样的道理,一个员工对于上司的指令,也应该具有这样的精神,因为这是工作得以顺利完成的保证。一个团队、一名员工,如果没有超强的执行力,就算有再多的创造力也可能没有什么好的成绩。员工所要培养的正是那种克服一切困难完成任务的决心,哪个老板会不喜欢这样员工呢? 巴顿将军在他的战争回忆录《我所知道的战争》中曾写到这样一个细节: “我要提拔人时常常把所有的候选人排到一起,给他们提一个我想要他们解决的问题。我说:‘伙计们,我要在仓库后面挖一条战壕,8英尺长,3英尺宽,6英寸深。’我就告诉他们那么多。我有一个有窗户或有大节孔的仓库。候选人正在检查工具时,我走进仓库,通过窗户或节孔观察他们。我看到伙计们把锹和镐都放到仓库后面的地上。他们休息几分钟后开始议论我为什么要他们挖这么浅的战壕。他们有的说6英寸深还不够当火炮掩体。其他人争论说,这样的战壕太热或太冷。如果伙计们是军官,他们会抱怨他们不该干挖战壕这么普通的体力劳动。最后,有个伙计对别人下命令:‘让我们把战壕挖好后离开这里吧。那个老畜牲想用战壕干什么都没关系。’”最后,巴顿写到:“那个伙计得到了提拔。我必须挑选那些不找任何借口地完成任务的人。” 无论什么工作,都需要这种不找任何借口去执行的人。对我们而言,无论做什么事情,都要记住自己的责任,无论在什么样的工作岗位上,都要对自己的工作负责。不要用任何借口来为自己开脱或搪塞,完美的执行是不需要任何借口的。 没有执行力就没有竞争力。当然,竞争力失一个宽泛的概念,它包括职业态度、职业精神等等。竞争力是脱颖而出的保证。企业要想在同行业中占据领先优势地位,就必须增强自身的竞争力,企业的竞争力来自员工;而一个员工要想从众人中脱颖而出,就必须增强自身的竞争力,员工的竞争力来自不断的学习。学习是增强竞争力的最好方法。 我注意到这样一个现象:当今名列世界500强的绝大部分企业都对其人员的内部培训给予了前所未有的重视,企业为培养人才所花的费用已达到了企业总销售额的10%,为培训所花费的人力成本也已占到了企业总人力投入的10%。例如,美国惠普公司几万名员工,每周至少要有20个小时用于学习业务知识。这是为什么?因为这些企业的管理者都懂得,培训是企业持续竞争力的“发动机”。 而对于员工来说,也应该不断地进行学习来增强自身的竞争力,提高自己的知识水平和职业技能,有效地减少工作压力并增加工作的乐趣,提高自身的整体素质,加强自己与职业的契合度,成为企业不可或缺的人才。

  • 【求助】酶活力单位FBG/g

    1、 怎么进行酶活力单位FBG/g 和U/g 之间的换算 2、怎么测定酶活力,像果胶酶、纤维素酶、B-葡萄糖苷酶等

  • 【分享】酸乳中乳酸菌活力的测定

    1 目的要求(1)初步掌握乳酸菌活力测定的一般方法。(2)了解乳酸菌在乳发酵过程中所起的作用。2 基本原理乳酸菌的细胞形态为杆状或球状,一般没有运动性,革兰氏染色阳性,微需氧、厌氧或兼性厌氧,具有独特的营养需求和代谢方式,都能发酵糖类产酸,一般在固体培养基上与氧接触也能生长。酸乳风味的形成与乳酸菌发酵过程代谢的多种物质有关,而这些物质的产生与发酵速度等活力指标有密切关系。乳酸菌的活力可由多种参数确定,如细胞生长情况,细胞干重和光密度(OD值)等。由于乳液不透明,不能直接测OD值,可用NaOH和EDTA处理使其澄清后再测。较简便的活力测定包括凝乳时间,产酸和活菌数量等指标的检测。3 实验材料3.1样品 市售酸奶或乳酸菌饮料。3.2 培养基 MRS固体和液体培养基,复原脱脂乳培养基。3.3 实验用仪器设备 超净工作、恒温培养箱、鼓风干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、冰箱、油镜显微镜、碱式滴定仪、天平、培养皿、移液管、试管、烧杯、量筒、温度计、酒精灯、接种针、载玻片等。4 实验方法与步骤4.1 菌种的分离(1)编号 取五支无菌水试管,分别用记号笔标明10-1、10-2~10-5。(2)稀释 将酸奶样品搅拌均匀,用无菌移液管吸取样品25mL,移入含有225mL无菌水的三角瓶中,在漩涡混合器上充分振摇,使样品分散均匀,获得10-1的样品稀释液,然后根据对样品含菌量的估计,将样品稀释至适当稀释度。(3)倒平板 选用2~3个适宜浓度的稀释液,分别吸取1mL注入平皿内,然后倒入事先溶化并冷却至45℃左右的MRS固体培养基,迅速转动平皿使之混合均匀,待冷却凝固后倒置,于40℃培养48h。(4)分离 无菌操作,从培养好的固体平皿中分别挑取5个单菌落接种于液体MRS培养基中,置40℃培养箱中培养。(5)镜检 通过镜检,确定所分离的乳酸菌是乳杆菌还是链球菌。保加利亚乳杆菌呈杆状,单杆、双杆或长丝状;嗜热链球菌呈球状,成对、短链或长链状。4.2 接种按1%的接种量,将MRS液体培养物接种于已灭菌的复原脱脂乳中,另分别接种具有较高活力的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌作为对照。培养温度为保加利亚乳杆菌40℃, 嗜热链球菌45℃。4.3 观察与测定(1)观察: 观察并记录各试管的凝乳时间。(2)酸度测定:用NaOH滴定法,测定发酵乳液的滴定酸度。(3)计数:采用倾注平板法,测定活菌数量。

  • 中国科学仪器市场“仪器创新活力指数”TOP30企业排行榜公布

    [color=#2d374b] “仪器创新活力指数” TOP30企业排行榜出炉,赛默飞、安捷伦科技、岛津、聚光科技、瑞士万通、珀金埃尔默、安东帕、德国耶拿、马尔文帕纳科、沃特世等位列榜单前十。[/color] 科技是国家强盛之基,创新是民族进步之魂。在科学仪器行业,创新更是企业赖以生存的源泉和持续发展的不竭动力,而新产品则历来都是用户关注的焦点之一。 响应业内呼声,仪器信息网“新品首发”栏目特编制、发布“仪器创新活力指数” TOP30企业排行榜。 “仪器创新活力指数”排行榜汇总了2008年以来1162家企业所发布的6585台仪器新产品统计记录,并结合仪器信息网中国科学仪器行业年度“优秀新产品”和“绿色仪器”评选结果,编制而成。排行榜综合反映中国科学仪器市场上市新产品的创新度,并从一个侧面反映各企业对中国科学仪器市场的重视程度及企业创新能力。[color=#2d374b] 点击“[/color][url=https://www.instrument.com.cn/news/20190410/483293.shtml][color=#3366ff]中国科学仪器市场“仪器创新活力指数”TOP30企业排行榜[/color][/url][color=#2d374b]”,了解完整榜单和各仪器名企创新活力详情。[/color][color=#2d374b][/color]

  • 怎样判断酶制剂的酶活力是虚标?

    想买一点酶制剂,但是看了1688上的厂商的酶活力的数字,不知哪个是虚标的。因为最近格力的董总揭漏了某克斯空调就是虚标,于是猜想酶制剂行业是否也有虚标?还有,作为消费者如何判断酶制剂的质量好坏?本人没有太多的专业知识。是不是外国的酶制剂比较质量可靠些?但是好像比国产贵很多。谢谢。

  • 【求助】谁有细胞活力分析仪Beckman VI-CELL卡驱动?

    各位大虾,请问有谁在用Beckman的细胞活力分析仪的,型号是VI-CELL?我司现有一台,由于太久没用,现在要装到电脑上的数据采据卡驱动已不见,上网又找不到(由于太旧了02年的),现正着急等用啊,也已求助了代理商,但还没消息,如有哪位大侠公司也有用此设备的请麻烦帮找一下,小弟在此万分感谢!

  • 【讨论】吸光度法测定酪氨酸酶活力

    酪氨酸酶活力的测定,文献中报道的方法如下:[color=#DC143C]测定波长475nm的吸光值随时间增长直线,从直线斜率求得酶活力,消光系数按E=3700mol-1L.cm-1计算。[/color]但是我不明白通过吸光值对时间的直线斜率怎么求得酶活力?还有为什么要指定消光系数?计算过程中有什么作用?希望得到高人的指点阿问题补充:我测定时酪氨酸酶用的是mushroom tyrosinase,以酪氨酸为底物,475nm处测定吸光度是基于生成的dopachrome量。

  • 几种酶的酶活力检测方法及结果分析

    几种酶的酶活力检测方法及结果分析

    [align=center]几种酶的酶活力检测方法及结果分析[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心:王涛[/align]大蒜属百合科葱属植物蒜的鳞茎,其风味独特,营养丰富,用途十分广泛。在生产上,大蒜不能通过杂交制种,只能采用其鳞茎繁殖,由于长时间的营养繁殖造成植株体内病毒积累,使得蒜头变小,品种退化,产量降低,大大降低了大蒜的商品价值。大蒜在长期的生长过程中,由于受到病原菌的植物的附着与侵入,会产生自身的抗性机制,其中的保护性反应是复杂的新陈代谢的结果,其生理反应是通过酶催化活动来实现的。这些酶包括抗病性酶超氧岐化酶SOD,多酚氧化酶PPO和过氧化物酶POD等,以及感病性酶纤维素酶和果胶酶。本文主要描述了大蒜苗中的SOD,PPO,POD,纤维素酶和果胶酶的酶活力检测方法,并从酶活的角度分析,大蒜茎尖脱毒技术可以有效提高SOD,PPO,POD等与植物抗病性有关的酶的活性,而与植物感病性有关的酶的活性如纤维素酶和果胶酶的活性有所降低,其中脱毒苗中的SOD,PPO和POD的活性分别比未脱毒苗相应地高出93.37 U/g,19.48 U/gmin和382.55 U/gmin,纤维素酶和果胶酶的活性则分别低出18.29 U/gmin和38.08 U/gmin。这就从植物生理的角度上验证了脱毒大蒜苗抗病和高产的原因。[b]1实验药品及仪器1.1缓冲液的配置[/b]1.1.1磷酸缓冲液的配置首先分别配置母液A、B,再根据质量分数分别取对应的母液,调pH即可。母液A:0.2 mol/L Na[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]溶液:称量71.63 g Na[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]12H[sub]2[/sub]O,定容至1 L。母液B:0.2 mol/L NaH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]溶液:称量31.21 g NaH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]2H[sub]2[/sub]O,定容至1 L。0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH7.8,内含1%PVP):22.875 mL A +2.125 mL l B+1 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP),稀释至100 mL。0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0):3.075 mL A + 21.925 mL B,稀释至100 mL。0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0):12.3 mL A + 87.7 mL B,稀释至200 mL。1.1.2醋酸缓冲液的配置同磷酸缓冲液一样,先配置母液。母液A:0.2 mol/L HAc溶液:吸取11.5 mL 醋酸溶液,定容至1 L。母液B:0.2 mol/L NaAc溶液:称量27.2 g 三水合乙酸钠,定容至1 L。0.2 mol/L (pH4.6) 醋酸缓冲液:51 mL A + 49 mL B混合均匀即可。0.2 mol/L(pH4.8)醋酸缓冲液:40 mL A + 60 mL B混合均匀即可。1.1.3其他试剂的配置100 umol/L EDTA-Na[sub]2[/sub]溶液:称取0.03721 g EDTA-Na[sub]2[/sub],用磷酸缓冲液定容至1 L。20 umol/L核黄素:称取0.00753 g核黄素定容至1 L。130 mmol/L甲硫氨酸(Met):称取1.9399 gMet,用磷酸缓冲液定容至100mL。750 umol/L氮蓝四唑(NBT):称取0.06133 g NBT,用磷酸缓冲液定容至100 mL。0.1 mol/L邻苯二酚:称取1.1011 g邻苯二酚定容至100 mL。20%三氯乙酸(TCA):称取20 g TCA定容至100 mL。二氧甲基酚即愈创木酚30%H[sub]2[/sub]O[sub]2 [/sub]3,5-二硝基水杨酸显色剂(DNS显色剂):称取2.5 g DNS溶于水中,加入2.5 g氢氧化钠、50 g酒石酸钾钠和100 mL水,加热溶解后再加入0.5 g苯酚和0.125 g无水亚硫酸钠,待全部溶解后冷却,定容至500 mL,贮于棕色瓶中,放置一周后使用,用之前过滤[sup][/sup]。葡萄糖标准液:称取0.54 g葡萄糖定容至500 mL。纤维素底物(CMC):称取0.625 g羧甲基纤维素钠溶于0.2 mol/L (pH 4.6) 醋酸缓冲液中,定容至100 mL。果胶底物:称取0.5 g果胶溶于0.2 mol/L (pH 4.8) 醋酸缓冲液中,定容至100 mL,放置冰箱内冷藏。D-半乳糖醛酸标准液:称取0.1 g D-半乳糖醛酸溶于0.2 mol/L (pH 4.8) 醋酸缓冲液中,定容至100 mL。[b]1.2主要实验仪器[/b]紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司可见光分光光度计 上海第三分析仪器厂TCL-16C型台式离心机 上海安亭科学仪器厂超净工作台 上海博迅实业有限公司医疗设备厂电热恒温水浴锅 上海跃进医疗器材厂灭菌器 上海申安医疗器械厂海尔冰箱 青岛海尔集团电子分析天平 北京赛多莉斯天平有限公司数显pH计;恒温光照培养箱;制冰机;计时器;[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url];试剂瓶;容量瓶。[b]2实验方法2.1材料[/b]大蒜脱毒试管苗:采用大蒜茎尖组织脱毒技术,经过3次继代培养所获得的生长健壮脱毒苗。大蒜苗植株:将市售山东金乡大蒜,分瓣去皮后,栽种于花盆中,日光照射,生长两个月之后所得植株。[b]2.2方法[/b]共测两组植株(第一组为大蒜脱毒苗,第二组为大蒜苗植株即未脱毒苗)的五种酶的酶活,这五种酶分别是超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、纤维素酶和果胶酶,最后将两组酶活数据分别做对应比较。同一植株做三次平行实验,取平均值。[b]3酶活测定3.1超氧物歧化酶(SOD)活力的测定[/b]本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基,这种自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙。后者在560 nm处有最大吸收,而SOD可清除超氧阴离子自由基,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。3.1.1粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入1 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.8,内含1%PVP)在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心10 min,取上清液,冷藏待用。3.1.2显色反应取7只5 mL透明度好的试管,用记号笔编号,1为空白管,2~4为测定管,5~7为对照管。各管按照表3-1依次添加试剂溶液,混匀后,将空白管置于暗处,其它各管置于4000 lx日光灯下反应20 min。[align=center]表1 测定SOD活性试剂添加量[/align][align=center]Table 1 The add content of reagent to SOD[/align][table][tr][td][align=center]试剂[/align][/td][td][align=center]用量/ mL[/align][/td][td][align=center]备注[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.05 mol/L磷酸缓冲液[/align][/td][td][align=center]1.5[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]130 mmol/L Met[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]750 umol/L NBT[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td=1,2][align=center]总体积为3.0 ml,对照管与空白管加入缓冲液代替酶液[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]100 umol/L EDTA-Na[sub]2[/sub][/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]20 umol/L 核黄素[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]酶液[/align][/td][td][align=center]0.05[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]蒸馏水[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][/table]3.1.3活力测定与计算以暗处管为空白,分别测定其它各管在560 nm波长下的吸光度(OD)。以抑制NBT光化还原的50%作为一个酶活性单位(U)表示。按下式计算SOD的总活性:SOD总活性(U/g)=(A[sub]o[/sub]-A[sub]s[/sub])*V[sub]t[/sub]/ A[sub]o[/sub]*0.5*W*V[sub]1 [/sub](公式3-1)式中:SOD总活性以每克鲜质量的酶单位表示(U/g);A[sub]o[/sub]-照光对照管的吸光度;A[sub]s[/sub]-样品管的吸光度;V[sub]t[/sub]-样品液总体积(mL);V[sub]1[/sub]-测定时样品液用量(mL);W-样品鲜质量(g)。[b]3.2多酚氧化酶(PPO)活力的测定[/b]多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化生成醌,其活性可以用比色法测量产物的形成,邻苯二酚是其常用的底物。3.2.1粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入2 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0),在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心15 min,取上清液,冷藏待用。3.2.2活力测定与计算取2支试管,一支为空白对照管,对照管中加入1 mL酶液+3 mL 0.05 mol/L(pH 6.0)磷酸缓冲液;另一支为测定管,测定管中加入1 mL酶液+1 mL 0.1 mol/L邻苯二酚+2 mL 0.05 mol/L(pH 6.0)磷酸缓冲液。然后在37 ℃水浴保温10 min,立即冰浴,冷却下来之后,各管加入2 mL 20% TCA终止反应。立即在410 nm波长下测定吸光度,每min测一次,共测3 min。以每min内吸光度变化0.01为酶活性单位(U)。PPO活性(U/gmin)=ΔA*V[sub]0[/sub]/0.01W*V[sub]1[/sub]*t [sub] [/sub](公式3-2)式中:ΔA = A[sub]s[/sub]-A[sub]o[/sub];A[sub]o[/sub]-对照管的吸光度;A[sub]s[/sub]-测定管的吸光度;V[sub]0[/sub]-酶液提取总量(mL);V[sub]1[/sub]-测定时酶液用量(mL);W-样品鲜重(g);t-反应时间(min)。[b]3.3过氧化物酶(POD)活力的测定[/b]选用愈创木酚法,即在过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,可用分光光度计测量生成物的含量。3.3.1反应混合液的制备量取50 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0),加入28 uL二氧甲基酚,加热搅拌至溶解,冷却后再加入19 uL 30% H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub],混合均匀保存于冰箱中。3.3.2粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入5 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0),在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心15 min,取上清液,冷藏待用。3.3.3活力测定与计算取2只比色杯,一只加入2 mL反应混合液和1 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0),作为校零对照;另一只加入2 mL反应混合液和1 mL酶液,立即开启秒表计时器,在470 nm波长下测定吸光度,每隔1 min读数一次。以每min吸光度变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(U)。POD活性=△A*Vt /0.01W* V[sub]1[/sub]*t (公式3-3)式中:△A-反应时间内吸光度的变化量;V[sub]t[/sub]-酶液总体积(mL);V[sub]1[/sub]-测定时酶液用量(mL);W-样品鲜重(g);t-反应时间(min)。[b]3.4纤维素酶活力的测定[/b]选用DNS法测定纤维素酶活力。DNS法测定的是纤维素酶对羧甲基纤维素钠(CMC)的糖化能力,其水解产物如纤维二糖和葡萄糖是还原糖,可以将DNS还原成棕红色的氨基化合物,在一定浓度范围内,还原糖的量与该物质溶液颜色的深浅成比例,因此可以用分光光度计进行测定,该方法可表示纤维素酶的总活力。3.4.1绘制葡萄糖标准曲线取5支试管,用记号笔编号后,按表3-2量取试剂,每管分别加入1 mL 2 mol/L氢氧化钠和2 mL DNS显色液,摇匀后置于沸水浴中加热5 min,流水冷却,用蒸馏水定容至10 mL,静置20 min后以1号管为对照于490 nm波长处测吸光度,绘制标准曲线。[align=center]表2葡萄糖标准曲线制作表[/align][align=center]Table 2 Standard curve of Glucose[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td]标准葡萄糖溶液(mL)[/td][td]0.2 mol.L[sup]-1[/sup],pH4.6醋酸钠缓冲溶液(mL)[/td][td][align=center]试管中葡萄糖量(umol)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]4.6[/align][/td][td][align=center]2.4[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]4.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]4.2[/align][/td][td][align=center]4.8[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]6.0[/align][/td][/tr][/table]3.4.2粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入2 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.6),在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心15 min,取上清液,装入离心管中再离心10 min,定容至10 mL,冷藏待用。3.4.3活力测定与计算取3支试管,一支作为空白对照,另2支作为平行样品。样品管中加入50℃预热的酶液1 mL,底物溶液(CMC)4 mL;空白对照管加4 mL底物溶液(CMC)。3支试管放入50℃水浴中,5 min后取出,立即加入1 mL 2mol/L NaOH溶液和2 mL DNS显色剂。摇匀后,空白对照管中加入1 mL酶液,立即将3支试管放入沸水浴中,反应5 min后取出,流水冷却,定容至10 mL,在490 nm波长处测吸光度。用测得的OD值在标准曲线上差得相应的葡萄糖的量,代入下面公式计算活力。以每min催化纤维素水解成1 umol葡萄糖的酶量表示酶活大小(U)。纤维素酶活性(U/gmin)=葡萄糖量/5*E* W (公式3-4)式中:5为反应时间(min);Ew为1 mL酶液中含有的酶量(g);W-样品鲜重(g)。[b]3.5果胶酶活力的测定[/b]选用DNS法测定果胶酶活力。该方法是利用果胶酶在一定温度,时间和条件下水解果胶,释放出还原性D-半乳糖醛酸,与3,5-二硝基水杨酸共热产生棕红色的氨基化合物,即发生显色反应。在一定范围内,水解生成D-半乳糖醛酸的量与吸光度成正比,与果胶酶活力成正比,通过分光光度计测定吸光度,可以计算出果胶酶的活力。3.5.1绘制D-半乳糖醛酸标准曲线取6支试管,编号后依次按照表3-3加入试剂,摇匀后置于沸水浴中反应5 min后,冷却,用蒸馏水定容至10 mL,静置20 min后以1号管为对照于540 nm波长处测吸光度,绘制标准曲线。[align=center]表3[b] [/b]D-半乳糖醛酸标准曲线的绘制[/align][align=center]Table 3 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td]D-半乳糖醛酸标准液(mL)[/td][td]0.2 mol.L[sup]-1[/sup],pH4.8醋酸缓冲液(mL)[/td][td][align=center]DNS显色液(mL)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]0.2[/align][/td][td][align=center]3.8[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]3.4[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]3.2[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]3.0[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][/table]3.5.2粗酶液的提取与提取纤维素酶的方法相同。3.5.3活力测定与计算取5支试管,用记号笔编号。1、2号管为样品管,分别加入1 mL果胶底物,在48℃水浴中预热5 min,再分别加入4 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8),之后,1号管中加入1 mL酶液,立即摇匀,在48℃水浴中反应30 min;2号管中加入1 mL酶液,立即放入沸水浴中反应5 min,冷却。分别取1、2管中容液各2 mL于3、4管中,并加2 mL水,2.5 mL DNS显色剂,混匀,沸水浴反应5 min,流水冷却。5号管加入4 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8),2.5 mL DNS显色剂,静置20 min后以5号管为对照校零,在540 nm波长处测3、4管的吸光度;用测得的(OD[sub]3[/sub]-OD[sub]4[/sub])值在标准曲线上查得相应的D-半乳糖醛酸的量,代入下面公式计算活力。以每min酶作用生成的D-半乳糖醛酸的量为一个酶活单位(U)。果胶酶活性(U/ gmin)=Y*3*N/t* W [sub] [/sub](公式3-5)式中:Y-酶作用生成的D-半乳糖醛酸的量;3-测酶活取了反应液的1/3;N-样品稀释倍数;W-样品鲜重(g);t-反应时间(min)[b]4标准曲线的绘制4.1葡萄糖标准曲线[/b]依照3.4.1步骤,最后测得各个试管中的吸光度依次为0,0.432,0.672,0.865,1.073。按照表4,以葡萄糖浓度为横坐标,490 nm处的OD值为纵坐标,绘制葡萄糖标准曲线(如图1)。[align=center]表4葡萄糖标准曲线[/align][align=center]Table 4 Standard curve of Glucose[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]葡萄糖浓度umol[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]2.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]4.8[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]490 nm OD[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.432[/align][/td][td][align=center]0.672[/align][/td][td][align=center]0.865[/align][/td][td][align=center]1.073[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,580,219]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010439441511_1108_2904018_3.png!w580x219.jpg[/img] [/align][align=center]图1葡萄糖标准曲线[/align][align=center]Figure 1 Standard curve of Glucose[/align][b]4.2 D-半乳糖醛酸标准曲线[/b]依照3.5.1步骤,最后测得各个试管中的吸光度依次为0,0.211,0.384,0.561,0.743,0.965。按照表5,以D-半乳糖醛酸的量为横坐标,540 nm处的OD值为纵坐标,绘制D-半乳糖醛酸标准曲线(如图2)。[align=center]表5 D-半乳糖醛酸标准曲线[/align][align=center]Table 5 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]D-半乳糖醛酸的量mL[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.2[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]540 nm OD[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.211[/align][/td][td][align=center]0.384[/align][/td][td][align=center]0.561[/align][/td][td][align=center]0.743[/align][/td][td][align=center]0.965[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,579,188]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010440011153_826_2904018_3.png!w579x188.jpg[/img] [/align][align=center]图2 D-半乳糖醛酸标准曲线[/align][align=center]Figure 2 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][b]5结果与分析[/b]将所测得的OD值,根据各个公式计算出SOD,PPO,POD,纤维素酶和果胶酶的酶活力,结果如表6所示。再将大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果做成柱状图进行比较,如图3所示。可以看出,脱毒试管苗中的SOD,PPO,POD的活性均高于未脱毒试管苗的对应酶的活性,而这三种酶都与植物的抗病性有关,说明在抗病性上脱毒试管苗强于未脱毒试管苗;纤维素酶和果胶酶的活性则是未脱毒苗比脱毒试管苗高。此外,作为植物抗氧化系统第一道防线的SOD,其活性大小在脱毒试管苗与未脱毒苗中相差93.37 U/g,前者比后者高出约1.5倍,说明经脱毒的试管苗抵御活性氧侵害的能力更高。PPO能催化木质素及其他酚类氧化物的形成,从而构成保护性屏蔽,抵抗抗病菌的入侵,也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。脱毒试管苗的PPO活性比未脱毒苗的PPO活性高出19.48 U/gmin,约2.45倍。说明脱毒苗在抵抗抗病菌的入侵方面,能力更强。在植物对病原菌侵染的防卫反应中,POD和SOD都有着极其重要的作用,SOD能有效的清除机体内的超氧自由基,它可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢,而POD可以将过氧化氢分解为完全无害的水,在脱毒试管苗与未脱毒苗中POD的活性均比较大,两者相差382.55 U/gmin,约1.7倍,说明经脱毒的试管苗可以更有效的抵御过氧化氢的毒害。而纤维素酶和果胶酶均与植物的感病性有关,其活性则是未脱毒苗比脱毒试管苗高,分别高出18.29 U/gmin和38.08 U/gmin,约2.4倍和1.2倍,说明脱毒苗的感病几率有所降低。POD不仅可以将过氧化氢分解为完全无害的水,而且还具有多种生理功能,如从叶绿体和细胞质中去除过氧化氢、氧化有毒化合物、合成细胞壁、对各种胁迫的应急、吲哚-3-乙酸的调控、乙烯的生物合成等,还参与了植物酚类的聚合和氧化以及木质素和植保素的合成。因此POD是植物体中活性较高的一种酶,从图3中也可以看出,POD的活性在五种酶中最高。[align=center]表6 大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果[/align][align=center]Table 6 Enzyme activity assay results between virus-free garlic in vitro and not virus-free plantlets[/align][table][tr][td][align=center]酶总活性[/align][/td][td][align=center]SOD[/align][align=center](U/g)[/align][/td][td][align=center]PPO[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]POD[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]纤维素酶[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]果胶酶[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]脱毒苗[/align][/td][td][align=center]157.46[/align][/td][td][align=center]27.43[/align][/td][td][align=center]610.95[/align][/td][td][align=center]7.77[/align][/td][td][align=center]31.97[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]未脱毒苗[/align][/td][td][align=center]64.09[/align][/td][td][align=center]7.95[/align][/td][td][align=center]228.40[/align][/td][td][align=center]26.06[/align][/td][td][align=center]70.05[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,564,289]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010440223303_2970_2904018_3.png!w564x289.jpg[/img] [/align][align=center]图3大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果比较[/align][align=center]Table 3 Comparison of enzyme activity assay results between virus-free garlic in vitro and not virus-free plantlets[/align]

  • 打通计量改革“最后一公里”增活力!

    [align=center][b][size=16px]打通计量改革“最后一公里”增活力![/size][/b][/align][size=15px][color=var(--weui-FG-2)][/color][/size][size=15px]来源:市说新语[/size][size=15px][color=rgba(0, 0, 0, 0)][/color][/size][size=15px] 6个营商环境创新试点城市推出计量改革创新举措,取消264家企业、1634项内部使用的最高计量标准器具考核发证及强制检定……近年来,市场监管总局深入贯彻落实党中央、国务院关于优化营商环境的决策部署和《关于开展营商环境创新试点工作的意见》精神,指导营商环境创新试点城市持续深化计量改革,有效提升企业和群众获得感、满意度。[/size][size=15px][/size] 2021年11月,国务院印发《关于开展营商环境创新试点工作的意见》(以下简称《意见》),在计量改革方面提出在北京、上海、重庆、杭州、广州、深圳等6个营商环境创新试点城市取消企业内部使用的最高计量标准器具考核发证及强制检定。 《意见》出台后,市场监管总局第一时间印发通知,协调指导营商环境创新试点城市落实相关工作,推动企业内部使用的最高计量标准器具管理模式改革,确保《意见》落地实施。试点城市市场监管部门因地制宜,细化方案,持续推进工作落实。北京市市场监管局通过完善“北京市12345热线”政策简明问答库,积极宣传创新试点内容,解决企业疑点。上海市市场监管局及时优化调整计量标准器具核准行政许可业务流程,修订完善工作规则和“一网通办”办事指南,建立与试点要求相适应的管理制度。目前通过取消考核发证及强制检定,优化了企业最高计量标准器具申报、审查以及审批环节,实现企业办理流程“零成本”、办事时间“零消耗”,大幅提升经营主体办事的便利度和可预期性,扩大了经营主体自主权。 为了确保企业自主管理的最高计量标准器具满足计量溯源性要求和计量标准准确,6个试点城市市场监管部门强化“放管结合”,以“双随机、一公开”监管和专项监督检查为发力点,创新监管方式,强化监管手段,事中事后监管得到加强。同时,为落实企业主体责任,强化企业自主管理,部分营商环境试点城市还大力推动企业自我承诺。广州市市场监管局出台举措,对企业自主管理的最高计量标准器具,由企业自行在广州市计量行业协会企业服务公共平台公开自我承诺。深圳市市场监管局建立企业内部使用的最高计量标准器具自愿声明平台,提升了企业自觉性、自主权。 6个试点城市市场监管部门加大指导和帮扶力度,当好为企业服务的“店小二”,打通计量改革“最后一公里”,为经营主体营造良好营商环境。重庆市市场监管局整合全市计量专家力量,通过指导企业健全计量管理制度、建立计量标准和在用计量器具台账,为企业自主管理计量标准器具提供技术指导。杭州市市场监管局鼓励相关企业参加计量比对活动,对出现的问题给予针对性技术指导和帮扶培训,不断增强企业自身计量能力。

  • “激发消费活力”成为2024年全国消协组织消费维权年主题

    [align=center][img=消协.jpg]https://img1.17img.cn/17img/images/202402/wycimg/fd2f00d7-9abb-432a-9e7a-3d9785f870ea.jpg[/img][/align]2024年是新中国成立75周年,是实现“十四五”规划目标任务的关键一年。为全面贯彻党的二十大精神,落实中央经济工作会议部署,切实保护消费者权益,更好满足人民群众美好生活需要,充分发挥消费对经济发展的基础性作用,助推高质量发展迈出坚实步伐,在广泛征集消费者和社会各界意见的基础上,中国消费者协会确定2024年全国消协组织消费维权年主题为“激发消费活力”。[align=center][img=主题.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202402/wycimg/ea4dcb69-2740-44b4-a7ed-8606335e4889.jpg[/img][/align][size=18px]一、年主题涵义[/size]  “激发消费活力”年主题的涵义是,各级消协组织要有力有效履行保护消费者合法权益法定职责,优化消费环境,让消费者敢消费、愿消费、乐享高品质消费,推动消费从疫后恢复转向持续扩大。具体如下:  [color=#ff0000]一是提升消协组织维权能力,帮消费者解决后顾之忧,让消费者敢消费。[/color]党的二十大报告提出,“必须坚持人民至上”,“要实现好、维护好、发展好最广大人民根本利益,紧紧抓住人民最关心最直接最现实的利益问题”。保护消费者合法权益是《中华人民共和国消费者权益保护法》赋予消协组织的法定职责,消协组织依法履职是对“人民至上”理念的生动践行。消费涉及日常生活、关系千家万户,保障消费者合法权益不受侵犯,是人民群众在消费领域最关心最直接最现实的利益问题。新时代消费升级日益加速,消费领域新场景、新业态、新科技不断涌现,与之相伴的是,侵权手段花样翻新,令人防不胜防。消协组织要立足自身职责,创新维权方式,提升维权效能,以更便捷高效的投诉处理、更深入有力的消费监督、更坚决大胆的揭露批评、更有益有效的提示警示,切实保护消费者合法权益,助力消除消费痛点堵点难点,遏制不法经营行为,增强消费者购买信心,激发消费活力,释放消费潜能。  [color=#ff0000]二是协同共治优化消费环境,助消费者增强获得感,让消费者愿消费。[/color]《中华人民共和国消费者权益保护法》规定,“保护消费者的合法权益是全社会的共同责任”。党的二十大报告强调,要“健全共建共治共享的社会治理制度”,“建设人人有责、人人尽责、人人享有的社会治理共同体”。中央经济工作会议要求,“优化消费环境”,“着力推动高质量发展”。当前,消费领域还存在预付费商家“跑路”、大数据算法“杀熟”等现象,消费维权政策法律相对滞后,经营者与消费者信息不对称、力量不平衡,“一老一小”消费权益保护仍需加强。消费环境与消费者的消费意愿不相符,与高质量发展的要求不匹配。消协组织要发挥社会共治平台作用,汇聚社会各方面力量,促进完善消费者保护体制机制,建立健全涵盖立法、行政、司法、社会保护以及消费者自我保护的消费维权治理格局,从政策、制度、法律、标准、舆论等多层次、多领域、全方位加强消费者权益保护,推动维权共建,强化保护共责,实现成果共享,构建消费者友好型消费环境,提升消费者获得感,促进消费活力迸发,为高质量发展筑牢基础。  [color=#ff0000]三是释放消费升级潜能,助力高质量发展,让消费者乐享高品质消费。[/color]高质量发展是全面建设社会主义现代化国家的首要任务,人民幸福安康是推动高质量发展的最终目的。中央经济工作会议指出,要激发有潜能的消费,培育壮大新型消费,大力发展数字消费、绿色消费、健康消费。消协组织要在推动实现经济质的有效提升上下功夫,促进高质量的供需对接,提升消费品质。要大力倡导绿色低碳消费,帮助消费者树立绿色消费观念,推动经营者对标高质量发展要求,提供更多绿色环保的产品和服务。要针对消费领域新场景、新业态、新模式,找准痛点堵点卡点,联合相关部门推动问题解决,加强引导规范,促进新型消费健康发展。要积极向有关部门建言献策,不断优化消费者权益保护法律政策环境,着力构建有助于产品服务提质升级的标准体系。要主动向生产经营者反映消费者需求,助力行业企业优化消费体验,提升消费供给对消费需求的适配性,以高质量供给满足消费者日益升级的美好生活需求,不断增强人民群众的获得感、幸福感、安全感。  [size=18px]二、年主题目标[/size]  一是凝聚社会力量,加强协同共治。发挥消协社会共治平台作用,汇聚各方面消费维权力量,促进建立政府部门、社会组织、新闻媒体、广大消费者、企业主体等共同参与的消费维权共建共治共享新格局,努力开创消费维权新局面。通过各类大众传播媒介,加大正面宣传引导和消费侵权行为监督曝光力度,凝聚社会共识,增强消费信心,唱响中国经济光明论。  二是加强理论研究,推动制度完善。围绕消费领域热点难点问题,特别是消费新业态、新模式发展中暴露出的消费维权新问题,加强理论研究和分析研判,形成维权观点,积极建言献策,辅助政府决策,推动相关法律法规和标准完善,不断优化消费环境。  三是突出问题导向,提升维权效能。面对消费领域问题点多面广的现实状况,聚焦消费者反映集中、诉求迫切、危害性大、影响面广的消费维权问题,从典型案例入手,综合运用点评约谈、调查调解、警示批评、支持诉讼、公益诉讼等维权方式,揭露、批评生产销售假冒伪劣产品和不诚信经营的违法行为。紧盯消费者急难愁盼问题,深入开展消费监督,深挖问题根源,标本兼治推动问题有效解决。  四是强化消费教育,加强消费引导。围绕消费维权领域热点难点问题,加强系统化消费教育引导,丰富教育形式和载体,帮助消费者掌握消费维权知识,增强依法维权意识,提升科学维权能力。开展比较试验,帮助消费者全面准确掌握产品信息,做到科学理性消费,督促生产者、经营者不断提高产品和服务质量,满足消费者更高需求。  [size=18px]三、消协组织年主题重点工作安排[/size]  围绕“激发消费活力”年主题,中消协和全国消协组织计划开展以下工作:一是深入开展消费维权年主题宣传,结合各地实际,组织多种形式的主题活动,大力营造全社会关心和支持消费者权益保护工作的良好氛围。二是高质量完成全国消协组织投诉与咨询信息系统优化升级并正式上线运行,提升全国消协组织投诉工作网络化、智能化、便利化水平。[color=#ff0000]三是深入开展百城消费者满意度测评,做好测评结果的应用,促进地方党委和政府更加重视消费环境建设。[/color]四是联动地方消协组织开展“315金秋购物节”公益活动,以“诚信好、质量好、性价比好、购物体验好、售后服务好、投诉处理好”为特色,倡导经营者推出高于平时、让消费者有明显获得感的放心暖心举措,积极营造放心暖心消费环境。五是探索打造《消协有话说》工作品牌,以揭露批评、消费辟谣、警示提示为特色,紧扣消费热点,提出消协意见,更好履行社会监督法定职责。六是聚焦消费热点问题和消费领域重大事件,积极开展消费维权理论与实务研究,提出高质量的立法或监管建议。七是组织开展重点领域消费监督,关注消费维权弱势群体、薄弱环节以及消费新业态、新模式,开展“霸王条款”、[color=#ff0000]预付式消费[/color]、[color=#ff0000]平台交易行为[/color]等监督调查,敦促企业积极承担消费维权主体责任。八是加强对全国消协组织比较试验工作的统筹指导,鼓励引导各地消协组织进行工作联动,及时更新比较试验数据库信息,组织开展老年用品、儿童用品等比较试验。[color=#ff0000]九是做好重要消费节点消费舆情监测,跟踪分析消费舆情热点,表明消协组织观点,提出消协组织意见。[/color]十是以中消协成立40周年为主题开展系列活动,深入探讨和交流消费者权益保护工作,宣传展示40年来中消协及各地消协组织在消费者权益保护方面取得的成果,营造全社会参与消费维权浓厚氛围。[size=14px][color=#707d8a][ 来源:中国消费者协会官网 ][/color][/size][size=14px][color=#707d8a][i]编辑:涂润林[/i][/color][/size]

  • 氮蓝四唑(NBT)法测定超氧物歧化酶(SOD)活力

    一、原理 超氧物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)普遍存在于动、植物体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2,可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙,后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料;水稻或小麦叶片 (二)仪器设备:1.高速台式离心机;2.分光光度计;3.微量进样器;4.荧光灯(反应试管处照度为4000Lx);5.试管或指形管数支。 (三)试剂 1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液(pH7.8);2. 130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液:称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml;3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液:称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml,避光保存;4. 100μmol/L EDTA-Na2溶液:称取0.03721gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml;5. 20μmol/L 核黄素溶液:称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。三、实验步骤 1. 酶液提取 取一定部位的植物叶片(视需要定,去叶脉)0.5g于预冷的研钵中,1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆,加缓冲液使终体积为5ml。取1.5~2ml于1000rpm下离心20min,上清液即为SOD粗提液。2. 显色反应 取5ml指形管(要求透明度好)4支,2支为测定管,另2支为对照管,按下列加入各溶液:试剂(酶)用量(ml)终浓度(比色时)0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA-Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处,其它各管于4000Lx日光下反应20min(要求各管受光情况一致,温度高时间缩短,低时延长)。 3. SOD活性测定与计算 至反应结束后,以不照光的对照管做空白,分别测定其它各管的吸光度。四、结果计算 已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示,按下式计算SOD活性。SOD总活性=(Ack-AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 上式中,SOD比活力=SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示;比活力单位以酶单位/mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积(ml)Vt测定时样品用量(ml)W样鲜重(g)蛋白质含量单位为:mg蛋白/g鲜重。

  • 【原创大赛】几种酶的酶活力检测方法及结果分析

    [align=center]几种酶的酶活力检测方法及结果分析[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心:王涛[/align]大蒜属百合科葱属植物蒜的鳞茎,其风味独特,营养丰富,用途十分广泛。在生产上,大蒜不能通过杂交制种,只能采用其鳞茎繁殖,由于长时间的营养繁殖造成植株体内病毒积累,使得蒜头变小,品种退化,产量降低,大大降低了大蒜的商品价值。大蒜在长期的生长过程中,由于受到病原菌的植物的附着与侵入,会产生自身的抗性机制,其中的保护性反应是复杂的新陈代谢的结果,其生理反应是通过酶催化活动来实现的。这些酶包括抗病性酶超氧岐化酶SOD,多酚氧化酶PPO和过氧化物酶POD等,以及感病性酶纤维素酶和果胶酶。本文主要描述了大蒜苗中的SOD,PPO,POD,纤维素酶和果胶酶的酶活力检测方法,并从酶活的角度分析,大蒜茎尖脱毒技术可以有效提高SOD,PPO,POD等与植物抗病性有关的酶的活性,而与植物感病性有关的酶的活性如纤维素酶和果胶酶的活性有所降低,其中脱毒苗中的SOD,PPO和POD的活性分别比未脱毒苗相应地高出93.37 U/g,19.48 U/gmin和382.55 U/gmin,纤维素酶和果胶酶的活性则分别低出18.29 U/gmin和38.08 U/gmin。这就从植物生理的角度上验证了脱毒大蒜苗抗病和高产的原因。[b]1实验药品及仪器1.1缓冲液的配置[/b]1.1.1磷酸缓冲液的配置首先分别配置母液A、B,再根据质量分数分别取对应的母液,调pH即可。母液A:0.2 mol/L Na[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]溶液:称量71.63 g Na[sub]2[/sub]HPO[sub]4[/sub]12H[sub]2[/sub]O,定容至1 L。母液B:0.2 mol/L NaH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]溶液:称量31.21 g NaH[sub]2[/sub]PO[sub]4[/sub]2H[sub]2[/sub]O,定容至1 L。0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH7.8,内含1%PVP):22.875 mL A +2.125 mL l B+1 g聚乙烯吡咯烷酮(PVP),稀释至100 mL。0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0):3.075 mL A + 21.925 mL B,稀释至100 mL。0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0):12.3 mL A + 87.7 mL B,稀释至200 mL。1.1.2醋酸缓冲液的配置同磷酸缓冲液一样,先配置母液。母液A:0.2 mol/L HAc溶液:吸取11.5 mL 醋酸溶液,定容至1 L。母液B:0.2 mol/L NaAc溶液:称量27.2 g 三水合乙酸钠,定容至1 L。0.2 mol/L (pH4.6) 醋酸缓冲液:51 mL A + 49 mL B混合均匀即可。0.2 mol/L(pH4.8)醋酸缓冲液:40 mL A + 60 mL B混合均匀即可。1.1.3其他试剂的配置100 umol/L EDTA-Na[sub]2[/sub]溶液:称取0.03721 g EDTA-Na[sub]2[/sub],用磷酸缓冲液定容至1 L。20 umol/L核黄素:称取0.00753 g核黄素定容至1 L。130 mmol/L甲硫氨酸(Met):称取1.9399 gMet,用磷酸缓冲液定容至100mL。750 umol/L氮蓝四唑(NBT):称取0.06133 g NBT,用磷酸缓冲液定容至100 mL。0.1 mol/L邻苯二酚:称取1.1011 g邻苯二酚定容至100 mL。20%三氯乙酸(TCA):称取20 g TCA定容至100 mL。二氧甲基酚即愈创木酚30%H[sub]2[/sub]O[sub]2 [/sub]3,5-二硝基水杨酸显色剂(DNS显色剂):称取2.5 g DNS溶于水中,加入2.5 g氢氧化钠、50 g酒石酸钾钠和100 mL水,加热溶解后再加入0.5 g苯酚和0.125 g无水亚硫酸钠,待全部溶解后冷却,定容至500 mL,贮于棕色瓶中,放置一周后使用,用之前过滤[sup][/sup]。葡萄糖标准液:称取0.54 g葡萄糖定容至500 mL。纤维素底物(CMC):称取0.625 g羧甲基纤维素钠溶于0.2 mol/L (pH 4.6) 醋酸缓冲液中,定容至100 mL。果胶底物:称取0.5 g果胶溶于0.2 mol/L (pH 4.8) 醋酸缓冲液中,定容至100 mL,放置冰箱内冷藏。D-半乳糖醛酸标准液:称取0.1 g D-半乳糖醛酸溶于0.2 mol/L (pH 4.8) 醋酸缓冲液中,定容至100 mL。[b]1.2主要实验仪器[/b]紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司可见光分光光度计 上海第三分析仪器厂TCL-16C型台式离心机 上海安亭科学仪器厂超净工作台 上海博迅实业有限公司医疗设备厂电热恒温水浴锅 上海跃进医疗器材厂灭菌器 上海申安医疗器械厂海尔冰箱 青岛海尔集团电子分析天平 北京赛多莉斯天平有限公司数显pH计;恒温光照培养箱;制冰机;计时器;[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url];试剂瓶;容量瓶。[b]2实验方法2.1材料[/b]大蒜脱毒试管苗:采用大蒜茎尖组织脱毒技术,经过3次继代培养所获得的生长健壮脱毒苗。大蒜苗植株:将市售山东金乡大蒜,分瓣去皮后,栽种于花盆中,日光照射,生长两个月之后所得植株。[b]2.2方法[/b]共测两组植株(第一组为大蒜脱毒苗,第二组为大蒜苗植株即未脱毒苗)的五种酶的酶活,这五种酶分别是超氧化物歧化酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、纤维素酶和果胶酶,最后将两组酶活数据分别做对应比较。同一植株做三次平行实验,取平均值。[b]3酶活测定3.1超氧物歧化酶(SOD)活力的测定[/b]本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生超氧阴离子自由基,这种自由基可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙。后者在560 nm处有最大吸收,而SOD可清除超氧阴离子自由基,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶活性愈低,反之酶活性愈高。3.1.1粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入1 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.8,内含1%PVP)在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心10 min,取上清液,冷藏待用。3.1.2显色反应取7只5 mL透明度好的试管,用记号笔编号,1为空白管,2~4为测定管,5~7为对照管。各管按照表3-1依次添加试剂溶液,混匀后,将空白管置于暗处,其它各管置于4000 lx日光灯下反应20 min。[align=center]表1 测定SOD活性试剂添加量[/align][align=center]Table 1 The add content of reagent to SOD[/align][table][tr][td][align=center]试剂[/align][/td][td][align=center]用量/ mL[/align][/td][td][align=center]备注[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.05 mol/L磷酸缓冲液[/align][/td][td][align=center]1.5[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]130 mmol/L Met[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]750 umol/L NBT[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td=1,2][align=center]总体积为3.0 ml,对照管与空白管加入缓冲液代替酶液[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]100 umol/L EDTA-Na[sub]2[/sub][/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]20 umol/L 核黄素[/align][/td][td][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]酶液[/align][/td][td][align=center]0.05[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][tr][td][align=center]蒸馏水[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][td][align=center] [/align][/td][/tr][/table]3.1.3活力测定与计算以暗处管为空白,分别测定其它各管在560 nm波长下的吸光度(OD)。以抑制NBT光化还原的50%作为一个酶活性单位(U)表示。按下式计算SOD的总活性:SOD总活性(U/g)=(A[sub]o[/sub]-A[sub]s[/sub])*V[sub]t[/sub]/ A[sub]o[/sub]*0.5*W*V[sub]1 [/sub](公式3-1)式中:SOD总活性以每克鲜质量的酶单位表示(U/g);A[sub]o[/sub]-照光对照管的吸光度;A[sub]s[/sub]-样品管的吸光度;V[sub]t[/sub]-样品液总体积(mL);V[sub]1[/sub]-测定时样品液用量(mL);W-样品鲜质量(g)。[b]3.2多酚氧化酶(PPO)活力的测定[/b]多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化生成醌,其活性可以用比色法测量产物的形成,邻苯二酚是其常用的底物。3.2.1粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入2 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0),在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心15 min,取上清液,冷藏待用。3.2.2活力测定与计算取2支试管,一支为空白对照管,对照管中加入1 mL酶液+3 mL 0.05 mol/L(pH 6.0)磷酸缓冲液;另一支为测定管,测定管中加入1 mL酶液+1 mL 0.1 mol/L邻苯二酚+2 mL 0.05 mol/L(pH 6.0)磷酸缓冲液。然后在37 ℃水浴保温10 min,立即冰浴,冷却下来之后,各管加入2 mL 20% TCA终止反应。立即在410 nm波长下测定吸光度,每min测一次,共测3 min。以每min内吸光度变化0.01为酶活性单位(U)。PPO活性(U/gmin)=ΔA*V[sub]0[/sub]/0.01W*V[sub]1[/sub]*t [sub] [/sub](公式3-2)式中:ΔA = A[sub]s[/sub]-A[sub]o[/sub];A[sub]o[/sub]-对照管的吸光度;A[sub]s[/sub]-测定管的吸光度;V[sub]0[/sub]-酶液提取总量(mL);V[sub]1[/sub]-测定时酶液用量(mL);W-样品鲜重(g);t-反应时间(min)。[b]3.3过氧化物酶(POD)活力的测定[/b]选用愈创木酚法,即在过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,可用分光光度计测量生成物的含量。3.3.1反应混合液的制备量取50 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH6.0),加入28 uL二氧甲基酚,加热搅拌至溶解,冷却后再加入19 uL 30% H[sub]2[/sub]O[sub]2[/sub],混合均匀保存于冰箱中。3.3.2粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入5 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0),在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心15 min,取上清液,冷藏待用。3.3.3活力测定与计算取2只比色杯,一只加入2 mL反应混合液和1 mL 0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 6.0),作为校零对照;另一只加入2 mL反应混合液和1 mL酶液,立即开启秒表计时器,在470 nm波长下测定吸光度,每隔1 min读数一次。以每min吸光度变化0.01为1个过氧化物酶活性单位(U)。POD活性=△A*Vt /0.01W* V[sub]1[/sub]*t (公式3-3)式中:△A-反应时间内吸光度的变化量;V[sub]t[/sub]-酶液总体积(mL);V[sub]1[/sub]-测定时酶液用量(mL);W-样品鲜重(g);t-反应时间(min)。[b]3.4纤维素酶活力的测定[/b]选用DNS法测定纤维素酶活力。DNS法测定的是纤维素酶对羧甲基纤维素钠(CMC)的糖化能力,其水解产物如纤维二糖和葡萄糖是还原糖,可以将DNS还原成棕红色的氨基化合物,在一定浓度范围内,还原糖的量与该物质溶液颜色的深浅成比例,因此可以用分光光度计进行测定,该方法可表示纤维素酶的总活力。3.4.1绘制葡萄糖标准曲线取5支试管,用记号笔编号后,按表3-2量取试剂,每管分别加入1 mL 2 mol/L氢氧化钠和2 mL DNS显色液,摇匀后置于沸水浴中加热5 min,流水冷却,用蒸馏水定容至10 mL,静置20 min后以1号管为对照于490 nm波长处测吸光度,绘制标准曲线。[align=center]表2葡萄糖标准曲线制作表[/align][align=center]Table 2 Standard curve of Glucose[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td]标准葡萄糖溶液(mL)[/td][td]0.2 mol.L[sup]-1[/sup],pH4.6醋酸钠缓冲溶液(mL)[/td][td][align=center]试管中葡萄糖量(umol)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]5.0[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]4.6[/align][/td][td][align=center]2.4[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]4.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]4.2[/align][/td][td][align=center]4.8[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]6.0[/align][/td][/tr][/table]3.4.2粗酶液的提取取叶片于预冷的研钵中,加入2 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.6),在冰浴下研磨匀浆,匀浆液装入2 mL离心管中,在4000 r/min下离心15 min,取上清液,装入离心管中再离心10 min,定容至10 mL,冷藏待用。3.4.3活力测定与计算取3支试管,一支作为空白对照,另2支作为平行样品。样品管中加入50℃预热的酶液1 mL,底物溶液(CMC)4 mL;空白对照管加4 mL底物溶液(CMC)。3支试管放入50℃水浴中,5 min后取出,立即加入1 mL 2mol/L NaOH溶液和2 mL DNS显色剂。摇匀后,空白对照管中加入1 mL酶液,立即将3支试管放入沸水浴中,反应5 min后取出,流水冷却,定容至10 mL,在490 nm波长处测吸光度。用测得的OD值在标准曲线上差得相应的葡萄糖的量,代入下面公式计算活力。以每min催化纤维素水解成1 umol葡萄糖的酶量表示酶活大小(U)。纤维素酶活性(U/gmin)=葡萄糖量/5*E* W (公式3-4)式中:5为反应时间(min);Ew为1 mL酶液中含有的酶量(g);W-样品鲜重(g)。[b]3.5果胶酶活力的测定[/b]选用DNS法测定果胶酶活力。该方法是利用果胶酶在一定温度,时间和条件下水解果胶,释放出还原性D-半乳糖醛酸,与3,5-二硝基水杨酸共热产生棕红色的氨基化合物,即发生显色反应。在一定范围内,水解生成D-半乳糖醛酸的量与吸光度成正比,与果胶酶活力成正比,通过分光光度计测定吸光度,可以计算出果胶酶的活力。3.5.1绘制D-半乳糖醛酸标准曲线取6支试管,编号后依次按照表3-3加入试剂,摇匀后置于沸水浴中反应5 min后,冷却,用蒸馏水定容至10 mL,静置20 min后以1号管为对照于540 nm波长处测吸光度,绘制标准曲线。[align=center]表3[b] [/b]D-半乳糖醛酸标准曲线的绘制[/align][align=center]Table 3 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td]D-半乳糖醛酸标准液(mL)[/td][td]0.2 mol.L[sup]-1[/sup],pH4.8醋酸缓冲液(mL)[/td][td][align=center]DNS显色液(mL)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]4.0[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]0.2[/align][/td][td][align=center]3.8[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]3.4[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]3.2[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]6[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][td][align=center]3.0[/align][/td][td][align=center]2.5[/align][/td][/tr][/table]3.5.2粗酶液的提取与提取纤维素酶的方法相同。3.5.3活力测定与计算取5支试管,用记号笔编号。1、2号管为样品管,分别加入1 mL果胶底物,在48℃水浴中预热5 min,再分别加入4 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8),之后,1号管中加入1 mL酶液,立即摇匀,在48℃水浴中反应30 min;2号管中加入1 mL酶液,立即放入沸水浴中反应5 min,冷却。分别取1、2管中容液各2 mL于3、4管中,并加2 mL水,2.5 mL DNS显色剂,混匀,沸水浴反应5 min,流水冷却。5号管加入4 mL 0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH 4.8),2.5 mL DNS显色剂,静置20 min后以5号管为对照校零,在540 nm波长处测3、4管的吸光度;用测得的(OD[sub]3[/sub]-OD[sub]4[/sub])值在标准曲线上查得相应的D-半乳糖醛酸的量,代入下面公式计算活力。以每min酶作用生成的D-半乳糖醛酸的量为一个酶活单位(U)。果胶酶活性(U/ gmin)=Y*3*N/t* W [sub] [/sub](公式3-5)式中:Y-酶作用生成的D-半乳糖醛酸的量;3-测酶活取了反应液的1/3;N-样品稀释倍数;W-样品鲜重(g);t-反应时间(min)[b]4标准曲线的绘制4.1葡萄糖标准曲线[/b]依照3.4.1步骤,最后测得各个试管中的吸光度依次为0,0.432,0.672,0.865,1.073。按照表4,以葡萄糖浓度为横坐标,490 nm处的OD值为纵坐标,绘制葡萄糖标准曲线(如图1)。[align=center]表4葡萄糖标准曲线[/align][align=center]Table 4 Standard curve of Glucose[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]葡萄糖浓度umol[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]2.4[/align][/td][td][align=center]3.6[/align][/td][td][align=center]4.8[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]490 nm OD[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.432[/align][/td][td][align=center]0.672[/align][/td][td][align=center]0.865[/align][/td][td][align=center]1.073[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,580,219]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010439441511_1108_2904018_3.png!w580x219.jpg[/img] [/align][align=center]图1葡萄糖标准曲线[/align][align=center]Figure 1 Standard curve of Glucose[/align][b]4.2 D-半乳糖醛酸标准曲线[/b]依照3.5.1步骤,最后测得各个试管中的吸光度依次为0,0.211,0.384,0.561,0.743,0.965。按照表5,以D-半乳糖醛酸的量为横坐标,540 nm处的OD值为纵坐标,绘制D-半乳糖醛酸标准曲线(如图2)。[align=center]表5 D-半乳糖醛酸标准曲线[/align][align=center]Table 5 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][table][tr][td][align=center]试管号[/align][/td][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]5[/align][/td][td][align=center]6[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]D-半乳糖醛酸的量mL[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.2[/align][/td][td][align=center]0.4[/align][/td][td][align=center]0.6[/align][/td][td][align=center]0.8[/align][/td][td][align=center]1.0[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]540 nm OD[/align][/td][td][align=center]0[/align][/td][td][align=center]0.211[/align][/td][td][align=center]0.384[/align][/td][td][align=center]0.561[/align][/td][td][align=center]0.743[/align][/td][td][align=center]0.965[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,579,188]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010440011153_826_2904018_3.png!w579x188.jpg[/img] [/align][align=center]图2 D-半乳糖醛酸标准曲线[/align][align=center]Figure 2 Standard curve of D-Galacturonic acid[/align][b]5结果与分析[/b]将所测得的OD值,根据各个公式计算出SOD,PPO,POD,纤维素酶和果胶酶的酶活力,结果如表6所示。再将大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果做成柱状图进行比较,如图3所示。可以看出,脱毒试管苗中的SOD,PPO,POD的活性均高于未脱毒试管苗的对应酶的活性,而这三种酶都与植物的抗病性有关,说明在抗病性上脱毒试管苗强于未脱毒试管苗;纤维素酶和果胶酶的活性则是未脱毒苗比脱毒试管苗高。此外,作为植物抗氧化系统第一道防线的SOD,其活性大小在脱毒试管苗与未脱毒苗中相差93.37 U/g,前者比后者高出约1.5倍,说明经脱毒的试管苗抵御活性氧侵害的能力更高。PPO能催化木质素及其他酚类氧化物的形成,从而构成保护性屏蔽,抵抗抗病菌的入侵,也可以通过形成醌类物质直接发挥抗病作用。脱毒试管苗的PPO活性比未脱毒苗的PPO活性高出19.48 U/gmin,约2.45倍。说明脱毒苗在抵抗抗病菌的入侵方面,能力更强。在植物对病原菌侵染的防卫反应中,POD和SOD都有着极其重要的作用,SOD能有效的清除机体内的超氧自由基,它可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢,而POD可以将过氧化氢分解为完全无害的水,在脱毒试管苗与未脱毒苗中POD的活性均比较大,两者相差382.55 U/gmin,约1.7倍,说明经脱毒的试管苗可以更有效的抵御过氧化氢的毒害。而纤维素酶和果胶酶均与植物的感病性有关,其活性则是未脱毒苗比脱毒试管苗高,分别高出18.29 U/gmin和38.08 U/gmin,约2.4倍和1.2倍,说明脱毒苗的感病几率有所降低。POD不仅可以将过氧化氢分解为完全无害的水,而且还具有多种生理功能,如从叶绿体和细胞质中去除过氧化氢、氧化有毒化合物、合成细胞壁、对各种胁迫的应急、吲哚-3-乙酸的调控、乙烯的生物合成等,还参与了植物酚类的聚合和氧化以及木质素和植保素的合成。因此POD是植物体中活性较高的一种酶,从图3中也可以看出,POD的活性在五种酶中最高。[align=center]表6 大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果[/align][align=center]Table 6 Enzyme activity assay results between virus-free garlic in vitro and not virus-free plantlets[/align][table][tr][td][align=center]酶总活性[/align][/td][td][align=center]SOD[/align][align=center](U/g)[/align][/td][td][align=center]PPO[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]POD[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]纤维素酶[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][td][align=center]果胶酶[/align][align=center](U/gmin)[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]脱毒苗[/align][/td][td][align=center]157.46[/align][/td][td][align=center]27.43[/align][/td][td][align=center]610.95[/align][/td][td][align=center]7.77[/align][/td][td][align=center]31.97[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]未脱毒苗[/align][/td][td][align=center]64.09[/align][/td][td][align=center]7.95[/align][/td][td][align=center]228.40[/align][/td][td][align=center]26.06[/align][/td][td][align=center]70.05[/align][/td][/tr][/table][align=center][img=,564,289]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807010440223303_2970_2904018_3.png!w564x289.jpg[/img] [/align][align=center]图3大蒜脱毒试管苗与未脱毒苗酶活测定结果比较[/align][align=center]Table 3 Comparison of enzyme activity assay results between virus-free garlic in vitro and not virus-free plantlets[/align]

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